ES2259181T3 - Peptido antigenico ha-2. - Google Patents
Peptido antigenico ha-2.Info
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Abstract
LA PRESENTE INVENCION DESCUBRE LA PRIMERA SECUENCIA PEPTIDICA DE UN ANTIGENO DENOMINADO H MENOR. LOS ANTIGENOS H MENORES ESTAN ASOCIADOS CON LA ENFERMEDAD DE INJERTO CONTRA HUESPED. EL PEPTIDO Y SUS DERIVADOS ENCUENTRAN MUCHOS USOS EN EL TRANSPLANTE DE MEDULA OSEA, TRANSPLANTE DE ORGANOS Y EN EL TRATAMIENTO DE LEUCEMIA. EL PEPTIDO Y SUS DERIVADOS PUEDEN SER INCORPORADOS EN VACUNAS, EN FORMULACIONES FARMACEUTICAS Y PUEDEN SER UTILIZADOS EN KITS DE TESTS DE DIAGNOSTICO. EL PEPTIDO DERIVA DEL ANTIGENO MENOR HA ONDE X REPRESENTA UN RESIDUO DE LEUCINA O ISOLEUCINA. TANTO DONADORES COMO RECIPIENTES DE TRANSPLANTE DE MEDULA OSEA PUEDEN SER TRATADOS CON LOS PEPTIDOS, OPCIONALMENTE EN COMBINACION CON OTROS PEPTIDOS, ACOPLADOS A TRANSPORTADORES, CON EXCIPIENTES Y/O ADYUVANTES ADECUADOS.
Description
Péptido antigénico HA-2.
Esta invención se refiere al campo de la
inmunología, especialmente de la inmunología celular. De forma
particular se refiere al área del transplante de órganos, tejidos o
células (en especial médula ósea) y posibles reacciones
inmunológicas provocadas por tales transplantes.
El transplante de médula ósea (TMO) encuentra su
aplicación clínica en el tratamiento de, por ejemplo, anemia
aplásica grave, leucemia y enfermedad de inmunodeficiencia.
En los primeros intentos, muchos de estos
transplantes terminaban en rechazo del transplante o en la
enfermedad del injerto contra el huésped (EICH). Actualmente es
obvio que estos efectos son debidos en gran parte a la presencia de
antígenos H mayores que funcionan como una barrera muy importante al
transplante. En consecuencia, se reseñó un éxito mejorado en el
transplante de médula ósea cuando se tomó en cuenta la
compatibilidad de los antígenos HLA. Actualmente, se usan
principalmente hermanos con HLA idénticos o individuos no
relacionados con HLA compatible como fuente del material donante.
Aún así, a pesar de las mejoras en la compatibilidad de los HLA,
así como las mejoras en la quimioterapia y/o radioterapia previa el
transplante y el uso de potentes fármacos inmunosupresores como
profilaxis, así como de mejores antibióticos y mejores técnicas de
aislamiento del material donante, aproximadamente
20-70% (dependiendo de la edad) de los receptores
todavía padecen EICH. En la EICH los linfocitos T inmunocompetentes
reaccionan contra los tejidos del hospedador. Por lo tanto, un
tratamiento que se ha vuelto frecuente es la donación de médula de
la que se han eliminado los linfocitos T maduros. Sin embargo, esto
a menudo conlleva rechazo o fallo del injerto, así como recaídas de
la enfermedad inicial, lo que es particularmente dramático en la
leucemia.
Los problemas todavía asociados a (en
particular) el transplante humano difícilmente pueden atribuirse a
los antígenos H mayores, dado que el donante y el receptor se
seleccionan de forma rutinaria por la identidad de los HLA. Por lo
tanto la EICH puede estar provocada por la disparidad de los
productos de los denominados sistemas H menores (mHag), es decir
antígenos de histocompatibilidad distintos de los que codifica el
CHM.
Los mHag han sido descubiertos originariamente
en estudios de rechazo de tumores y piel entre cepas congénicas de
ratones. Se han definido más de 40 locus de mHag, dispersos por el
genoma, pero las estimaciones predicen la existencia de varios
cientos de locus. Uno de los antígenos H menores mejor conocidos es
el antígeno HY.
Varios artículos han demostrado la presencia de
LTC específicos contra mHag del hospedador en pacientes que padecen
EICH tras TMO con HLA de genotipos idénticos (1-7).
En nuestro laboratorio, se realizó un gran esfuerzo para
caracterizar adicionalmente un (pequeño) número de LTC específicos
contra mHag del hospedador. Para esto, se aislaron clones de LTC
específicos para mHag del hospedador en la sangre periférica de (SP)
de pacientes que padecían EICH grave (8).
Análisis inmunogenéticos subsiguientes revelaron
que los clones de LTC (tal como se describe anteriormente)
identificaron cinco mHag no ligados al sexo, denominados
HA-1, -2, -3, -4, -5, que se reconocen de un modo
restringido de CHM clásica (8). mHag HA-3 es
reconocido en presencia de HLA-A1 y mHag
HA-1, -2, -4 y -5 requieren la presencia de
HLA-A2. Los estudios de segregación demostraron que
cada uno de mHag HA-1 a HA-5 es el
producto de un único gen que se segrega de forma mendeliana y que
HA-1 y HA-2 no están codificados en
la región HLA (9). Los mHag difieren los unos de los otros en las
frecuencias fenotípicas; mHag HA - 2 apareció muy frecuentemente (es
decir 95%) en la población sana positiva para HLA-A2
(10).
Con respecto al mHag expresado en diferentes
tejidos, los presentes inventores observaron la distribución tisular
omnipresente comparada con la distribución tisular restringida de
los mHag analizados (11). La expresión del mHag
HA-2 está restringida a las células de la línea
celular hematopoyética, tales como timocitos, linfocitos de sangre
periférica, linfocitos B y/o monocitos. También las células
presentadoras de antígeno profesionales derivadas de la médula
ósea; las células dendríticas y las células epidérmicas de
Langerhans expresan el mHag HA-2 (11, 12). El mHag
HA-2 también se expresa en células germinales
hematopoyéticas (13), en células precursoras leucémicas clonógenas
(14), así como en células leucémicas mieloides y linfoides
recientemente aisladas (15).
Para sustanciar la importancia de los sistemas
antígenos mH humanos, los presentes inventores investigaron si los
mHag están conservados en la evolución entre los primates humanos y
no humanos. Para ello, se transfectaron células de primates no
humanos con el gen HLA-A2.1 humano. Análisis
subsiguientes con el alo HLA-A2.1 humano de los
inventores y cuatro clones de LTC restringidos con mHag
HLA-2.1 revelaron la presentación de alo de simio y
mono y péptidos mHag HY, HA-1 y HA-2
en el contexto de la molécula de HLA-A2.1 humano
transfectado por células diana de simio y mono. Además, se eluyeron
péptidos de moléculas HLA-A2.1 expresadas en las
células de simio transfectadas. Se identificó una fracción positiva
para HA-2 que mostraba el mismo comportamiento en
HPLC de fase inversa que la fracción HA-2 derivada
de EBV-LCL humano. Esto implica que el péptido
HA-2 se ha durante al menos 35 millones de años
(16).
Se realizó un estudio prospectivo para
documentar el efecto de mHag en TMO con HLA genotípicamente
idénticos sobre la aparición de EICH aguda (grado \geq 2). Los
resultados del tipado de los mHag usando los clones de LTC
específicos para cinco mHag bien definidos HA-1 a
HA-5 demostraron una correlación significativa entre
la falta de emparejamiento entre mHag HA-1, -2, -4 y
-5 y la EICH (17).
Los presentes inventores se centraron en la
caracterización bioquímica de antígenos mH humanos. Para ello,
usaron técnicas de inmunopurificación y bioquímicas aplicadas con
éxito por Rammensee y sus colegas (18, 19) para extraer péptidos mH
murinos de moléculas de CHM. De hecho, la separación por HPLC de
moléculas con Mr bajo (< kD) obtenidas a partir de una clase de
moléculas de CHM clase 1 HLA-A2.1 tratadas con ácido
pareció tener éxito. Se aislaron fracciones con actividad de
sensibilización para clones de LTC específicos del antígeno mH
HA-2 no ligados al sexo (20). Para analizar la
naturaleza peptídica del mHag HA-2, se realizaron
dos conjuntos de experimentos. Primero, la actividad de
sensibilización de las fracciones que contienen mHag, obtenidas tal
como se describe anteriormente, es susceptible al tratamiento con
proteasas; es decir la incubación de estas fracciones de HPLC que
contienen mHag con pronasa o proteinasa K suprimió la actividad de
sensibilización (21). Segundo, los productos génicos TAP1 y TAP2
codificados por CHM son necesarios para la presentación del péptido
mHag sobre la superficie celular. Los genes transportadores TAP1 y
TAP2 asociados a la presentación de antígenos son necesarios para
el transporte de péptidos desde el citosol con el retículo
endoplásmico (22). La disponibilidad de una línea celular humana
"T2", que carecía tanto de genes de transporte como de las
subunidades de proteosomas permitió a los presentes inventores
estudiar el procesamiento y presentación de antígenos mH humanos.
Los presentes inventores demostraron que los productos génicos de
transporte TAP1 y TAP2 (rata) eran necesarios para el procesamiento
y presentación de péptidos antigénicos de virus de la gripe y de la
proteína intracelular mH HA-2 (23).
Sin embargo, hasta la presente invención nadie
ha tenido éxito en la identificación de secuencias de aminoácidos de
péptidos antigénicos relevantes en el sistema mHag, ni nadie ha
tenido éxito en la identificación de las proteínas de las que pueden
derivarse. Los presentes inventores ahora, por primera vez, han
identificado un péptido que es una parte relevante de mHag
HA-2.
Así, esta invención proporciona un
(poli)péptido que comprende un epítopo de linfocito T que
puede obtenerse a partir del antígeno de histocompatibilidad menor
HA-2 que comprende la secuencia de acuerdo con la
reivindicación 1.
La forma en la que se obtienen estas secuencias
se describe en la parte experimental. Una parte importante de este
procedimiento novedoso para llegar a dichas secuencias es la
purificación y la elección del material inicial. Dicho procedimiento
novedoso también es, por lo tanto, parte del alcance de esta
invención. Sin embargo, ahora que la secuencia es conocida, por
supuesto ya no es necesario seguir ese procedimiento, porque los
péptidos pueden prepararse fácilmente sintéticamente, tal como es
notorio en la técnica. Dado que existen técnicas rutinarias
disponibles para producir péptidos sintéticos, también está dentro
de la experiencia de la técnica lograr análogos o derivados de los
péptidos descritos explícitamente, análogos y/o derivados que pueden
tener las mismas o al menos similares propiedades y/o actividad. Por
otra parte, los análogos que contrarrestan la actividad de los
péptidos descritos explícitamente también están dentro de la
experiencia de la técnica, dadas las enseñanzas de la presente
invención.
Una realización preferida de la presente
invención es el péptido con la secuencia YIGEVLVSV que induce la
lisis de la célula que lo presenta a una concentración muy baja de
péptido presente. Esto no implica que los péptidos que inducen la
lisis a concentraciones más elevadas no sean adecuados. Esto, en
gran medida, dependerá de la aplicación y de otras propiedades de
los péptidos, que no podían analizarse todas en el alcance de la
presente invención.
Los péptidos y otras moléculas de acuerdo con la
invención encuentran su utilidad en que pueden usarse para inducir
tolerancia en el sistema inmunitario del donante en donantes
negativos para HA-2, de forma que los linfocitos de
sangre periférica residuales en el órgano o la médula ósea
eventualmente transplantadas, según sea el caso, no responda a
material HA-2 del hospedador en un receptor positivo
para HA-2. De este modo, puede prevenirse la EICH.
Por otra parte, puede inducirse la tolerancia en receptores
negativos para HA-2 básicamente del mismo modo, de
forma que al recibir un órgano o médula ósea de un donante positivo
para HA-2 no se produzca rechazo en base al
material HA-2. Puede ser el caso de que el péptido
HA-2 actúe en una forma no restringida a alelos. En
ese caso, la inducción de la tolerancia no está restringida a
individuos negativos para HA-2.
Para la inducción de la tolerancia pueden
administrarse dosis muy pequeñas repetidamente, por ejemplo por vía
intravenosa, aunque muy bien pueden ser adecuadas también otras vías
de administración. Otra posibilidad es la administración oral
repetida de altas dosis de los péptidos. Los péptidos pueden
administrarse solos, o combinados con otros péptidos, o como parte
de moléculas mayores, o acoplados a materiales transportadores en
cualesquiera excipientes adecuados.
Aplicaciones adicionales del péptido o sus
derivados se localizan en la administración profiláctica a tales
individuos transplantados para prevenir la EICH. Esto puede
realizarse bien con agonistas, posiblemente combinados con un
adyuvante, o con antagonistas que pueden bloquear las células
responsables. Esto puede realizarse con o sin la administración
concomitante de citoquinas.
Además los péptidos de acuerdo con la invención
pueden usarse para preparar agentes terapéuticos capaces de eliminar
un subconjunto de células, de forma directa o indirecta, en especial
células de origen hematopoyético. Esto puede ilustrarse mediante los
siguientes ejemplos, que se refieren a agentes terapéuticos
relacionados con la leucemia.
a) Un receptor positivo para
HA-2 (en el transplante de médula ósea) puede
someterse a un tratamiento adicional de acondicionamiento previo al
transplante de médula ósea. Esto quiere decir que un agente que de
forma específica reconoce un péptido de acuerdo con la invención
(un péptido HA-2) tal como se presenta en las
células hematopoyéticas, agente que induce la eliminación de las
células que presentan dicho péptido, se administra al receptor antes
del transplante. Este agente eliminará todas las células residuales
(células leucémicas) de origen hematopoyético. Tal agente incluye,
pero sin limitación linfocitos T (preferiblemente proporcionados con
un gen suicida) y/o anticuerpos acoplados a restos tóxicos.
b) Un donante negativo para HA-2
para el transplante de médula ósea puede ser vacunado con un péptido
de acuerdo con la invención, un péptido HA-2. Tras
el transplante a un receptor positivo para HA-2, el
sistema inmunitario del donante puede eliminar cualquier célula
residual o recurrente que presente el péptido HA-2
en el receptor que, por supuesto son leucémicos.
c) Un receptor positivo para
HA-2 trasplantado, trasplantado con médula ósea
negativa para HA-2 (o positivo para
HA-2) y que padece enfermedad recurrente (recaída),
es decir células leucémicas positivas para HA-2,
puede ser tratado (de nuevo) con un agente que reconoce
específicamente un péptido de acuerdo con la invención (un péptido
HA-2) tal como se presenta en células
hematopoyéticas, agente que induce la eliminación de las células que
presentan dicho péptido. En el caso de que se transplante médula
ósea positiva para HA-2 al receptor positivo para
HA-2, todavía es esencial (en el caso de enfermedad
recurrente) eliminar todas las células positivas para
HA-2 aunque esto incluya el material transplantado,
porque si no se hace así, la leucemia positiva para
HA-2 matará al receptor. En éste caso, el paciente
puede volver a ser transplantado, si fuera necesario.
Las aplicaciones diagnósticas están claramente
dentro del alcance de la técnica. Incluyen, pero sin limitación,
tipado de HA-2, detección de aberraciones genéticas
y similares.
Otras aplicaciones terapéuticas del péptido
incluyen la inducción de tolerancia a proteínas HA-2
en enfermedades (auto)inmunitarias relacionadas con
HA-2, tales como posiblemente la artritis
reumatoide. Por otra parte, puede usarse en vacunas en enfermedades
(auto)inmunitarias relacionadas con HA-2.
Basándose en el péptido que se describe en el
presente documento, pueden producirse sondas genéticas que pueden
usarse para seleccionar el gen que codifica la proteína. Por otra
parte, tales sondas pueden ser útiles también en kits de detección.
Basándose en el péptido que se describe en el presente documento,
pueden producirse linfocitos B y/o linfocitos T y anticuerpos contra
idiotipos. Todas estas realizaciones han sido posibles por la
presente descripción y por lo tanto son parte de la presente
invención.
Las técnicas para producir estas realizaciones
están todas dentro de la experiencia de la técnica.
Intervalos de dosis de péptidos y anticuerpos
y/o otras moléculas de acuerdo con la invención a usar en las
aplicaciones terapéuticas tal como se describen anteriormente,
habitualmente se diseñan basándose en estudios de dosis crecientes
en clínica. Las dosis para los péptidos pueden variar entre
aproximadamente 0,1 y 1000 \mug por kg de peso corporal,
preferiblemente entre aproximadamente 1 y 10 \mug por kg de peso
corporal.
La invención se describirá en mayor detalle
explicativo en la siguiente parte experimental.
Usando clones de LTC específicos para mHag como
herramientas in vitro, se han aislado algunos mHag murinos y
humanos de moléculas de CHM mediante elución ácida y se demostró que
eran péptidos presentados por moléculas de MHC (13,14). La
caracterización adicional, es decir la secuencia exacta de los
aminoácidos de los péptidos mHag y la identificación de las
proteínas a partir de las que se originan estos mHag, hasta la fecha
no han sido reseñadas. Sólo se han caracterizado un pequeño número
de mHag murinos "definidos como no convencionales", como los
alelos de microglobulina \beta2 codificados por
H-3 (15) y el antígeno transmitido por vía materna
codificado en las mitocondrias restringido Hmt (16). En el presente
documento, los presentes inventores reseñan la identificación, por
espectrometría de masas en tándem, del epítopo mHag
HA-2 restringido a HLA-A2.1.
Para aislar el mHag HA-2, se
purificaron moléculas de HLA-A2.1 por cromatografía
de afinidad a partir de linfocitos B transformados con virus de
Epstein Bar (EBV) (EBV-BLCL) positivos para
HLA-A2.1 que expresaban HA-2. Los
péptidos unidos a HLA-A2.1 se aislaron mediante
tratamiento ácido seguido de filtración a 10 kD (14). Estas
moléculas de baja masa molecular se fraccionaron por HPLC de fase
inversa y las fracciones individuales se analizaron para determinar
la actividad de sensibilización de mHag HA-2
incubando con la línea de linfoblastocitos T2 negativa para mHag
HA.2, positiva para HLA-A2.1 en un ensayo de
liberación de ^{51}Cr. Una fracción (fracción 33) sensibilizaba T2
para la lisis por el clon de LTC específico para
HA-2 5H17 (17) (Figura 1a). Cuando esta fracción se
volvió a cromatografiar usando un gradiente menos profundo, se
observó la actividad de sensibilización de HA-2 en
las fracciones 37 y 38 (Figura 1b). Sin embargo, tal como se evaluó
usando HPLC microcapilar/ espectrometría de masas de ionización por
electrospray en tándem, las últimas fracciones todavía contenían más
de 100 péptidos que se unían a HLA-A2 (18). Para
determinar cual de los péptidos era el responsable de la actividad
de sensibilización de HA-2, se analizó la fracción
37 usando un difractor en línea (19), permitiendo la comparación de
los datos espectrométricos con los resultados del ensayo funcional.
La Figura 2a muestra un solo pico de actividad de sensibilización de
HA-2 en cuatro pocillos adyacentes. De los muchos
péptidos presentes en estos pocillos, el perfil de abundancia iónica
relativa de cuatro péptidos (con relaciones entre masa y carga (m/z)
de 651, 869, 979, 1000) correspondían al perfil de actividad de
actividad de los LTC específicos para de HA-2. El
análisis de disociación activada por colisión (DAC) realizado para
la especie con m/z de 979 reveló la existencia de 2 péptidos
diferentes, YXGEVXVSV y SXDFGTXQV (figura 3a y 3b). La X representa
L o I, que no pueden distinguirse por espectrometría de masas en
estas condiciones. Se prepararon mezclas de péptidos sintéticos con
una mezcla equimolar de L e I en lugar de X y se ensayó para
determinar la actividad de LTC de sensibilización específica de
HA-2. Sólo la incubación con la mezcla de péptidos
YXGEVXVSV produjo la lisis de T2 (20).
Para definir adicionalmente el péptido procesado
natural, se sintetizaron cuatro péptidos únicos con I o L en las
posiciones dos y seis y se realizaron estudios de elución conjunta
en HPLC microcapilar de estos péptidos sintéticos y de la fracción
aislada. El péptido YIGEVTVSV no eluyó conjuntamente con el péptido
natural procesado y por lo tanto puede excluirse como el epítopo
procesado natural, mientras que los otros tres péptidos, YIGEVLVSV,
YLGEVLVSV e YLGEVIVSV si eluyeron conjuntamente (21). Estos tres
péptidos todos sensibilizaron la línea celular T2 para la lisis por
el clon 5H17 (Figura 4a). El péptido YIGEVLVSV indujo una lisis del
50% a una concentración de 40 pM, mientras que estas concentraciones
fueron sustancialmente mayores para los péptidos YLGEVLVSV y
YLGEVIVSV (1,5 nM y 2,25 nM). Las tres concentraciones están dentro
del intervalo de 10 pM - 50 nM establecido para otros epítopos
procesados de forma natural (19, 22). El clon 5H13 es un LTC
derivado de forma independiente que, basándose en el análisis grupo
de pruebas analíticas, también reconoce HA-2, pero
difiere ligeramente en su especificidad fina de reconocimiento de
antígenos de 5H17 (10, 23). El clon 5H13 también reconoció todas
las variantes de los 3 péptidos (Figura 4b). Aunque la concentración
de péptidos necesaria para proporcionar la mitad de la
reconstitución máxima de los epítopos fue 5-10 veces
mayor que para 5H17, el péptido YIGEVLVSV todavía sensibilizaba a
concentraciones 100 veces menores que los otros dos. Estos
resultados establecen que, a pesar de sus diferencias de
especificidad fina (10, 23), ambos LTC específicos para
HA-2 reconocen el mismo epítopo peptídico.
Estudios de unión con estos tres péptidos
demostraron que el péptido YIGEVLVSV era el que se unía más a
HLA-A2.1. La concentración que producía una
inhibición del 50% de la unión del péptido estándar yodado a
HLA-A2.1 purificado era 5,6 nM, mientras que las de
YLGEVIVSV e YLGEVLVSV eran 9,5 y 15 nM respectivamente (Figura 5).
Estos valores colocan estos péptidos entre los péptidos procesados
naturalmente con la afinidad más alta que se han definido hasta la
fecha (24). Sin embargo, las diferencias en las afinidades de unión
para estos tres péptidos es meramente un factor de 3. El hecho de
que YIGEVLVSV sensibilice para el reconocimiento por los clones 5H17
y 5H13 a concentraciones 50 - 100 veces menores que los otros dos
péptidos indica que este péptido es reconocido con la afinidad más
alta por los RLT y así puede ser el epítopo HA-2
real.
Una búsqueda en bases de datos de secuencias de
ADN y proteínas llevó a dos secuencias humanas que ambas
correspondían en 7 de los 9 residuos al péptido YIGEVLVSV. El
péptido YYGEVCVSV se deriva de la glucoproteína
mielina de oligodendrocitos (25) y el péptido YIGSVLISV era de
miosina IC no convencional (26). Ambos péptidos humanos se
sintetizaron y analizaron para determinar la actividad de
sensibilización. Solo el péptido derivado de miosina IC
YIGSCLISV pudo sensibilizar células T2 para la lisis
por 5H17 y 5H13 con una concentración que induce el 50% de lisis de
5-50 nM (27). La miosina IC humana no convencional
pertenece a una gran familia de genes de miosina (28, 29), que
consiste en clases diferentes y que se indica que están implicados
en la locomoción celular y el transporte de organelos (28, 29).
Todos los tipos de células probablemente expresan diversas miosinas
de cada clase de forma simultánea. Se ha reseñado la distribución
restringida a tejidos de algunas miosinas (26, 29). Búsquedas en
bases de datos demostraron que en diferentes miosinas de clase I de
orígenes diversos, desde Acanthamoeba castellanii a humanas,
esta secuencia peptídica mostró conservación para Y, I, G, V, y V en
las posiciones 1, 2, 3, 5 y 9. De forma notable, la secuencia
peptídica de HA-2 difiere en las posiciones de los
aminoácidos no conservadas de la secuencia peptídica de miosina IC.
La miosina IC no convencional humana es el único gen de miosina
clase I humano clonado, pero existen indicios de la presencia de al
menos otras dos miosinas de clase I en células humanas. Por lo
tanto, no es poco probable que exista en los seres humanos una
proteína de miosina de clase I todavía desconocida que contenga
YIGEVLVSV. De forma interesante, estudios en proceso demuestran la
conservación durante la evolución de diversos mHag, incluido
HA-2, entre los primates humanos y no humanos (30).
Debido a que mHag HA-2 solo es presentado por
células hematopoyéticas, esta miosina de clase I desconocida o bien
está restringida a las células hematopoyéticas o solo es presentada
por células hematopoyéticas debido a procesamiento específico de
tejido.
El polimorfismo de mHag HA-2 es
un tema intrigante. El 95% de la población positiva para
HLA-A2.1 expresa el HA-2. En
consecuencia, los LTC específicos para HA-2 fueron
generados in vivo entre una combinación de donante/receptor
de médula ósea con un mHag HA-2 dispar. El
polimorfismo de HA-2 puede explicarse bien por
mutaciones en o adyacentes al gen HA-2 o por
polimorfismo del sistema de procesamiento de los antígenos.
Hasta ahora, la información sobre mHag ha sido
extremadamente escasa. Aunque la función fisiológica de mHag todavía
es desconocida, no puede negarse su papel fundamental en el
transplante de órganos en general y en el transplante de médula ósea
en particular. Los presentes inventores en el presente documento
reseñan, a su entender por primera vez, la secuencia de aminoácido
de un mHag definido por LTC derivados de EICH. La disponibilidad de
la secuencia peptídica de mHag puede permitir la modificación in
vivo de las respuestas de los linfocitos T relacionadas con
EICH. Además, dado que mHag HA-2 se expresa en
células de líneas hematopoyéticas que incluyen las células
leucémicas, es un candidato para la inmunoterapia de la leucemia
antes del transplante de médula ósea.
Fig. 5. Unión de péptidos sintéticos a
HLA-A2.1 purificado.
Péptidos purificados por HPLC se analizaron para
determinar la capacidad de inhibir la unión del péptido antigénico
del núcleo de hepatitis B yodado FLPSDYFPSV, a moléculas de
HLA-A2.1 purificadas tal como se ha descrito
anteriormente (23). (círculos negros), YIGEVLVSV; (triángulos
negros), YLGEVLVSV; (cuadrados cerrados), YLGEVIVSV; (diamantes
cerrados), el antígeno de la proteína M1 de la gripe GILGFVFTL.
Todos los puntos de datos son la media de al menos dos experimentos
independientes.
1. Goulmy E, Gratama JW,
Blokland E, Zwaan FE, van Rood JJ (1983)
A Minor transplantation antigen detected by MHC restricted cytotoxic
T lymphocytes during
graft-versus-host-disease.
Nature 302: 159-161.
2. Tsoi M-S, Storb
R, Dobbs S, Medill I, Thomas ED (1980).
Cell mediated immunity to non-HLA antigens of the
host by donor lymphocytes in patients with chronic
graft-vs-host disease. J.
Immunol. 125: 2258-2262.
3. Tsoi M-S, Storb
R, Santos E, Thomas ED (1983)
Anti-host cytotoxic cells in patients with acute
graft-versus-host disease after HLA
identical marrow grafting. Transplant Proc. 15:
1484-1486.
4. Irle C, Beatty PG,
Mickelson E, Thomas ED, Hansen JA (1985)
Alloreactive T cell responses between HLA identical siblings.
Transplantation 40: 329-333.
5. Van Els C, Bakker A,
Zwinderman AH, Zwaan FE, van Rood JJ,
Goulmy E (1990) Effector mechanisms in GvHD in
response to minor Histocompatibility antigens. I. Absence of
correlation with CTLs. Transplantation 50:
62-66.
6. Irscheck E, Hladik T,
Niederwieser D y cols. (1992). Studies on the
mechanism of tolerance or
Graft-versus-Host Disease in
allogeneic bone marrow recipients at the level of cytotoxic T cell
precursor frequencies. Blood 79:
1622-1628.
7. Niederwieser D, Grassegger A,
Auböck J, Herold H, Nachbaur D,
Rosenmayr A, Gächter A, Nussbaumer W,
Gaggl S, Ritter M y Huber C (1993).
Correlation of minor histocompatibility antigen specific cytotoxic T
lymphocytes with Graft-versus-Host
Disease status and analyses of tissue distribution of their target
antigens. Blood, 81: 2200-2208.
8. Goulmy E. Class-I
restricted human cytotoxic T lymphocytes directed against
transplantation antigens and their possible role in organ
transplantation (1985). Prog. in allergy, vol. 36:
44-72.
9. Schreuder GMTH., Pool J,
Blokland E, Van Els C, Bakker A, Van
Rood JJ y Goulmy E. Genetic analysis of human minor
Histocompatibility antigens demonstrates Mendelian segregation
independent from HLA (1993). Immunogenetics 38:
98-l05.
10. Van Els C, D'Amaro J,
Pool J, Bakker A, van den Elsen PJ, Van
Rood JJ y Goulmy E (1992) Immunogenetics of human
minor Histocompatibility antigens: their polymorphism and
immunodominance. Immunogenetics 35:
161-165.
11. De Bueger M, Bakker A, Van
Rood JJ, Van der Woude F y Goulmy E.
(1992). Tissue distribution of human minor Histocompatibility
antigen. Ubiquitous versus restricted tissue distribution indicates
heterogeneity among human CTLs defined non-MHC
antigens. J. Immunology 1992, 149:
1788-1794.
12. Van Lochem EG, Van de Keur M,
Mommaas M, de Gast G y Goulmy E. (1994).
Expression of cytotoxic T cell defined minor Histocompatibility
antigens on human peripheral blood dendritic cells and skin derived
Langerhans cells, manuscrito presentado para su publicación.
13. Marijt WAF, Veenhof WFJ,
Goulmy E, Willemze R, Van Rood JJ y
Falkenburg JHF (1993). Minor histocompatibility
antigen HA-1, -2, -4 and HY specific cytotoxic T
cell clones inhibit human hematopoietic progenitor cell growth by a
mechanism that is dependent on direct cell-cell
contact. Blood 82: 3778-3785.
14. Falkenburg F, Goselink H,
van der Harst D, Van Luxemburg-Heijs SAP,
Kooy-Winkelaar YMC, Faber LM, de
Kroon J, Brand A, Fibbe WE, Willemze R y
Goulmy E (1991). Growth inhibition of clonogenic
leukemic precursor cells by minor histocompatibility
antigen-specific cytotoxic T lymphocytes. J. Exp.
Med. 174:
27-33.
27-33.
15. Van der Harst D, Goulmy E,
Falkenburg JHF y cols. (1994). Recognition of minor
histocompatibility antigens on lymphocytic and myeloid leukemic
cells by cytotoxic T. cell clones. Blood 83:
1060-1066.
16. Den Haan J, Pool J,
Blokland E, Bontrop Rand Goulmy E (1994). Minor
Histocompatibility antigens are conversed between primates.
Manuscrito en preparación.
\newpage
17. Goulmy E, Schipper R,
Pool J (1994). Minor histocompatibility antigen
mismatches influence the development of GvHD after HLA genotypically
identical bone marrow transplantation. Manuscrito presentado para su
publicación.
18. Rötzschke O, Falk X,
Wallny H-J, Faath Sand Rammensee
H-G (1990). Science 249: 283.
19. Falk K, Rötzschke O y
Rammensee H-G (1990). Nature
348: 248.
20. De Bueger M, Verreck F,
Blokland E, Drijfhout J-W,
Amons R, Koning F y Goulmy E (1993).
Isolation of a HLA-A2.1 extracted human minor
histocompatibility peptide (1993). Eur. J. Immunol.
23: 614-618.
21. Den Haan JJM, Blokland E,
Koning F, Drijfhout J-W y
Goulmy E (1994). Structure analysis of human minor
histocompatibility antigens HA-1 and
HA-2. Abstract NWO retraite.
22. Powis SJ, Twonsend RM,
Deverson EV y cols. (1991) Nature 354:
528.
23. Momburg F,
Ortiz-Navarrete V, Neefjes J,
Goulmy E, v.d. Wal Y, Spits H, Powis SJ,
Butcher GW, Howard JC, Walden P y
Hammerling GJ (1992). The proteasome subunits encoded
by the major histocompatibility complex are not essential for
antigen presentation. Nature 360:
174-177.
24. H.J. Wallny y H-G
Rammensee, Nature 343, 275 (1990). O.
Rötzschke, K. Falk, B.J. Wallny, S.
Faath, H-G. Rammensee, Science
249, 283 (1990). M. Sekimata, P. Griem, K.
Egawa, H-G. Rammensee, M. Takiguchi,
Int. Immunol. 4, 301 (1992). L. Franksson, M.
Petersson, R. Kiessling, K. Karre, Eur. J.
Immunol., 23, 2606 (1993);
25. M. De Bueger y cols. Eur. J.
Immunol. 23, 614 (1993);
26. M.E. Kurtz, R.J. Graff, A.
Adelman, D. Martin-Morgan, R.E.
Click, J. Immunol. 135, 2847 (1985).
H-G Rammensee, P.J. Robinson, A.
Grisanti, M.J. Bevan, Nature 319, 502
(1986). B. Perarnau y cols., Nature 346, 751
(1990);
27. B. Loveland, C-R.
Wang, H. Yonekawa, E. Hermel, K. Fischer
Lindahl, Cell, 60, 971 (1990);
28. El clon de CTL específico para
HA-2 5H17 tiene su origen en una paciente mujer que
se sometió a trasplante de médula ósea para anemia aplásica grave.
El tratamiento de acondicionamiento previo al trasplante consistió
en irradiación linfoide total y ciclofosfamida. A la paciente se le
injertó médula ósea a la que no se le habían eliminado los
linfocitos T de su padre con HLA idéntico. La paciente padeció EICH
aguda grave en grado III seguida de EICH crónica extensa. El clon
CTL específico para HA-2 se generó a partir de SP
después del TMO de acuerdo con el protocolo que se describe
anteriormente. E. Goulmy, en Transplant, Rev. J. Morris y N.L.
Tilney, Editores. (Saunders Company 2, 29, 1988);
29. No se muestran datos;
30. A.L. Cox y cols., Science 264,
716 (1994);
31. Se analizaron mezclas de péptidos YSGEVXVSV
y SXDFGTXQV en varias concentraciones con el clon 5H17 y el clon
5H13. Además de T2, se usó un EBV-BLCL negativo para
HA-2 y positivo para HLA-A2.1 para
presentar la mezcla de péptidos;
32. No se muestran datos;
33. K. Udake, T.J. Tsomides, H.N.
Eisen, cell 69, 989 (1992). R.A. Henderson y
cols., Proc. Natl. Acad. Sci., 90, 10275 (1993). O.
Mandelboim y cols., Nature, 369, 67 (1994), A. Uenaka
y cols., J. Exp. Med., 180, 1599 (1994);
34. 5H13 y 5H17 demostraron patrones idénticos
cuando se analizaron con 100 individuos sanos positivos para
HLA-A2.1 no relacionados. Se observó un patrón de
reacción discriminatorio entre los clones cuando se analizó una
célula diana que expresaba una molécula variante de
HLA-A2 natural;
35. Y. Chen y cols., J. Immunol.,
152, 2874 (1994). J. Ruppert y cols., Cell, 74,
829 (1993);
36.
37. W.M. Bement, T. Hasson, J.A.
Wirth, R.E. Cheney, M.S. Mooseker, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 91, 6549 (1994);
38. Se analizó el péptido YYGEVCVSV en un
intervalo de concentración de 50 nM a 0,5 pM con 5H17 así como 5H13.
No se encontró actividad;
\newpage
39. M.A. Titus, Curr. Opin. Cell
Biol., 5, 77 (1993). E. Coudrier, A.
Durrbach, D. Louvard, FEBS, 307, 87 (1992);
40. M. Mooseker, Curr. Biol., 3,
245 (1993);
41. J.M.M. den Haan, J. Pool, E.
Blokland, R. Bontrop, E. Goulmy, manuscrito en
preparación.
Claims (11)
1. Un péptido que constituye un epítopo de
linfocito T que puede obtenerse a partir del antígeno de
histocompatibilidad menor HA-2 que comprende la
secuencia YIGEVLVSV, YLGEVLVSV o YLGEVIVSV.
2. Un péptido de acuerdo con la reivindicación
1, que comprende la secuencia YIGEVLVSV.
3. Un péptido de acuerdo con la reivindicación
1, que comprende la secuencia YLGEVLVSV o YLGEVIVSV.
4. Vacuna que comprende un epítopo de acuerdo
con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3.
5. Una formulación farmacéutica que comprende un
epítopo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones
1-3.
6. Péptido de acuerdo con las reivindicaciones
1-3 para usar como medicina.
7. Uso de un péptido de acuerdo con las
reivindicaciones 1-3 en la preparación de un
medicamento para la inducción de tolerancia a los transplantes para
prevenir el rechazo y/o la enfermedad de injerto contra huésped.
8. Uso de un péptido de acuerdo con una
cualquiera de las reivindicaciones 1-3 en la
preparación de un medicamento para la eliminación de un grupo de
células hematopoyéticas (neoplásicas) que presentan un péptido en el
contexto de HLA clase 1 de acuerdo con una cualquiera de las
reivindicaciones 1-3, por el que la eliminación se
induce de forma directa o indirecta por el reconocimiento específico
de dicho péptido en dicho contexto.
9. Procedimiento para la generación de
anticuerpos, receptores de linfocitos T, linfocitos B o linfocitos T
contra idiotipos, que comprende la etapa de inmunizar un mamífero no
humano con un péptido de acuerdo con la reivindicación 1.
10. Un linfocito T aislado que reconoce
específicamente la secuencia YIGEVLVSV, YLGEVLVSV o YLGEVIVSV.
11. Un anticuerpo aislado que reconoce
específicamente la secuencia YIGEVLVSV, YLGEVLVSV o YLGEVIVSV.
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