ES2256626T3 - Aparato y metodo para la preparacion de muestras y manchado directo de eluentes sobre una diana de maldi-tof. - Google Patents
Aparato y metodo para la preparacion de muestras y manchado directo de eluentes sobre una diana de maldi-tof.Info
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Abstract
Un método para la preparación, transferencia y análisis de muestras, que comprende: proporcionar al menos un pocillo (12), conteniendo dicho al menos un pocillo (12) una estructura de membrana (25) para unirse a moléculas de interés, comprendiendo dicho al menos un pocillo (12) una espita (15) que tiene una salida, introducir una muestra dentro de dicho al menos un pocillo (12) y dejar que dichas moléculas de interés se unan a dicha estructura de membrana (25) en dicho al menos un pocillo (12); colocar un sustrato (50) debajo de dicha salida de la espita; eluir dichas moléculas de interés desde dicha estructura de membrana (25) sobre dicho sustrato (50); y analizar dicha muestra sobre dicho sustrato (50) mediante espectrometría de masas MALDI TOF, caracterizado porque dicho sustrato se usa como un sustrato diana de MALDI TOF.
Description
Aparato y método para la preparación de muestras
y manchado directo de eluentes sobre una diana de
MALDI-TOF.
El análisis de desorción/ionización por láser
asistida por la matriz (MALDI) es una herramienta útil para
resolver problemas estructurales en bioquímica, inmunología,
genética y biología. Las muestras se ionizan y se usa un analizador
de tiempo de vuelo (TOF) para medir la masa de los iones. El
análisis de TOF comienza cuando se forman iones y se aceleran a una
energía cinética constante a medida que entran en una región de
arrastre. Éstos llegan a un detector siguiendo tiempos de vuelo que
son proporcionales a la raíz cuadrada de sus masas. Un espectro de
masas se origina debido a que iones de diferentes masas llegan al
detector a diferentes tiempos.
La espectrometría de masas puede ser una
herramienta particularmente poderosa en los campos de
descubrimientos y desarrollo de fármacos, desarrollo de genotipos,
e investigación de proteomas. Las tendencias comunes en la
investigación son analizar números cada vez más grandes de muestras
usando equipos de manejo automático o equipos robóticos. Las
cantidades de muestras individuales son desde niveles de
nano-moles a niveles de atto-moles.
Como consecuencia, la instrumentación está siendo cada vez más
sensible y existe la necesidad de desarrollar formatos de manejo de
muestras que estén miniaturizados, tengan una alta densidad y sean
desechables.
La preparación de las muestras antes del análisis
(tal como por MALDI TOF MS) a menudo implica desalar y concentrar
las muestras (por ejemplo, péptidos) por debajo de un volumen de
1-2 microlitros. Estos volúmenes probablemente se
disminuyen a su vez hasta volúmenes de nanolitros. A menudo es
deseable realizar simultáneamente la preparación y el análisis
múltiples muestras. Se han desarrollado placas de múltiples pocillos
para análisis simultáneos que consisten típicamente en 96, 384 ó
1536 recipientes o pocillos de reacción por placa.
Ciertos dispositivos de preparación de muestras,
tales como el dispositivo ZipTip® disponible comercialmente de
Millipore Corporation, son excelentes herramientas para la
preparación de muestras antes del análisis de MALDI. Éstos son un
único procesador de muestras que se puede usar para formar una
mancha de muestra sobre la diana de MALDI manualmente o mediante un
equipo automático. Más específicamente, las patentes de EE.UU. Nº
6.048.457 y 6.200.474 muestran la formación de estructuras de
membranas coladas para la preparación de muestras que se forman por
inversión de fases de un sistema polímero cargado de partículas en
el orificio de alojamiento. El polímero se precipita cuando el
alojamiento (que contiene la laca soluble de polímero/partículas)
se sumerge en un baño de precipitación (típicamente agua). La
introducción origina una ligera presión del líquido a través de la
laca de manera que el agua se entremete en el polímero creando una
estructura abierta similar a una esponja al precipitar. Sin
embargo, en la interfaz polímero-agua en la
estructura hay una película de membrana semipermeable que crea una
alta resistencia al flujo. Cuando esta barrera o bien se erosiona o
se corte, la estructura resultante es altamente permeable. El
dispositivo resultante se diseña para permitir el flujo bajo las
presiones diferenciales bajas generadas por un pipeteador común
portátil de 10 microlitros (por ejemplo, Wilson, Pipetman).
Para un tratamiento de muestras de alto
rendimiento, sería deseable usar placas de múltiples pocillos para
la manipulación y preparación de muestras, tales como la retirada de
sales y sustancias bioquímicas indeseables para mejorar la
resolución la sensibilidad del espectro de masas. Sin embargo, la
evaporación del disolvente de elución puede resultar problemática.
Es necesario que las proteínas y péptidos estén en volúmenes tan
pequeños como sea posible para obtener un espectro de masas MALDI
TOF adecuado. La recogida del volumen de elución mediante
centrifugado es posible pero resulta difícil, ya que el volumen en
cada pocillo puede variar debido a la rápida evaporación durante la
transferencia de la placa de múltiples pocillos a la centrifugadora
y especialmente durante el centrifugado. También, los eluyentes
recogidos convencionalmente por métodos de vacío tienden a
evaporarse rápidamente bajo presión negativa, lo que requiere
resuspensión. Además, cada vez que se transfiere la muestra, tal
como desde una pipeta a la placa de recogida, o es resuspendida, se
pierde muestra debido a la adherencia a las interfases de estos
dispositivos. Puesto que las cantidades de las muestras están
típicamente comprendidas en el intervalo de femotmoles, las
pérdidas de muestra resultan inaceptables. Por otra parte, la
centrifugación tampoco se puede automatizar, ya que la placa se debe
colocar y retirar manualmente en la centrifugado-
ra.
ra.
Una clave para conseguir alta sensibilidad y
fuertes señales en MALDI es eluyendo los péptidos unidos a una
concentración tan alta como sea posible. Esto se puede realizar
usando un volumen de elución mínimo y reduciendo las etapas de
manipulación.
Sería muy deseable usar el formato de placa
microtituladora durante la preparación simultánea de muestras que es
fácilmente adaptable a la automatización.
Por lo tanto, es un objeto de la presente
invención proporcionar un dispositivo y un método para formar una
mancha a partir de un pequeño volumen de eluyente directamente desde
el dispositivo de preparación de muestras sobre una diana de
MALDI.
\newpage
Es un objeto adicional de la presente invención
proporcionar un dispositivo y un método para el manchado directo de
eluyente de concentraciones relativamente altas de muestra sobre una
diana de MALDI.
Estos y otros objetos resultarán evidentes de la
siguiente descripción.
Los problemas de la anterior técnica han sido
resueltos mediante la presente invención, la cual proporciona un
aparato de preparación de muestras de un único pocillo o de
múltiples pocillos y un método para desalar, concentrar y depositar
muestras antes del análisis adicional tal como mediante
espectrometría de masas con MALDI TOF. Más específicamente, el
aparato según una realización de la presente invención incluye una
pluralidad de pocillos cada uno en comunicación fluida con una
salida o apertura de descarga respectiva, que contienen
opcionalmente una estructura de membrana tridimensional que
comprende preferiblemente una pluralidad de partículas sorbentes
atrapadas en una matriz polímera porosa de manea que formen un
dispositivo capaz de realizar una extracción en fase sólida. El
aparato está diseñado para permitir el manchado directo sobre una
diana de MALDI, con lo que se elimina una etapa de
transferencia.
La presente invención está también dirigida hacia
un método de preparación, deposición y análisis de muestras usando
el aparato de la presente invención.
La Figura 1 es una vista en perspectiva de un
único pocillo de un dispositivo de múltiples pocillos, con la
estructura de material compuesto mostrada en aumento en el Detalle
A;
Las Figuras 2A, 2B, 2C y 2D muestran cuatro
etapas del proceso de elución y transferencia según la presente
invención;
La Figura 3 es una gráfica que compara el % de la
amplitud de la secuencia en diversas técnicas de elución;
La Figura 4A es un espectro de una muestra de
\beta-galactosidasa eluida en una placa
microtituladora usando vacío según la técnica anterior;
la Figura 4B es un espectro de una muestra de
\beta-galactosidasa eluida usando centrifugación
según la técnica anterior;
la Figura 4C es un espectro de una muestra de
\beta-galactosidasa eluida directamente sobre una
diana de MALDI según la presente invención; y
la Figura 5 es una vista de la sección
transversal de un pocillo colocado sobre un sustrato diana de
MALDI-TOF y acoplado a un conducto de vacío según la
presente invención.
Los materiales del sustrato adecuados para el
dispositivo de preparación de muestras de la presente invención no
están particularmente limitados, e incluyen plásticos (tales como
polietileno y polipropileno), vidrio y metal, tal como acero
inoxidable. Los materiales del sustrato no han de interferir en el
funcionamiento del dispositivo o con los productos químicos que se
van a usar en el procedimiento. Son materiales preferidos
poliolefinas y particularmente el polipropileno.
El término "membrana" según se usa en esta
memoria incluye estructuras tridimensionales permeables y
semipermeables con o sin partículas, que tienen una porosidad
adecuada para la aplicación deseada. El término "estructura de
material compuesto" se utiliza en esta memoria para incluir
membranas rellenas.
Volviendo ahora a la Figura 1, en ésta se muestra
un único pocillo 12 de un dispositivo de preparación de muestras
que tiene una pluralidad de pocillos, tales como 384. Un pocillo 12
está definido por una pared lateral 14 impermeable a fluidos que se
extiende verticalmente, y una parte de fondo 13 inclinada. Las
partes intermedia y superior del pocillo 12 tienen preferiblemente
un diámetro uniforme y tienen una sección transversal
sustancialmente cilíndrica, aunque se pueden contemplar otras
configuraciones y éstas están dentro del alcance de la presente
invención. Las parte inferior del pocillo 12 preferiblemente se
estrecha hacia abajo, en la dirección del flujo del fluido, hacia
una parte de fondo 13, la cual se inclina interiormente hacia un
centro, teniendo, de este modo, una configuración
frusto-cónica. La parte de fondo 13 tiene una espita
15 que está preferiblemente situada en el centro del pocillo. Como
se puede ver mejor en el Detalle A de la Figura 1, la espita 15 es
una perforación, preferiblemente cilíndrica y alienada axialmente
con el eje longitudinal central del pocillo 12. Las dimensiones de
la perforación determinan las dimensiones de la estructura de
membrana contenida en la misma, lo que determina, en parte, las
características de las gotitas que se forman al fluir a través de
la estructura de membrana. Diámetros de perforaciones adecuados
incluyen de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 2 mm, más
preferiblemente de aproximadamente 0,4 a aproximadamente 0,8 mm,
prefiriéndose un diámetro de 0,5 mm. Alturas de la perforación
adecuadas incluyen de aproximadamente 0,2 a aproximadamente 2 mm,
prefiriéndose 1 mm. Al menos una parte de la espita 15 incluye
preferiblemente una estructura de membrana absorbente 25.
Estructuras de membranas absorbentes adecuadas son estructuras de
membranas absorbentes cargadas de partículas unidas polímeras
colados in situ, tales como las comprendidas en lechos
cromatográficos que han sido adheridas junto con un aglutinante y
se describen en las patentes de EE.UU. Nº 6.048.457 y 6.200.474,
cuyas descripciones se incorporan en esta memoria como referencia.
Una de dichas estructuras preferidas en una estructura
tridimensional que comprende una pluralidad de partículas sorbentes
atrapadas en una matriz polímera porosa y que tiene una relación
entre dimensiones (diámetro medio a espesor medio) inferior a
aproximadamente 10, preferiblemente inferior a aproximadamente 5.
La estructura 25 puede estar limitada por el fondo de la espita 15,
y se prolonga hacia el interior del cuerpo de dicha espita 15,
prolongándose preferiblemente hacia sustancialmente toda la
profundidad de la espita 15.
Los dispositivos según la presente invención
pueden incorporar una pluralidad de estructuras de membrana que
tienen materiales de resina con diferentes grupos funcionales para
fraccionar analitos que varían en carga, tamaño, afinidad y/o
hidrofobicidad; alternativamente, se puede usar una pluralidad de
dispositivos que contienen diferentes membranas funcionales
individuales en combinación para conseguir un resultado similar.
Similarmente, se pueden colar una o más membranas en un alojamiento
adecuado y se puede añadir funcionalidad antes o después del
colado.
Preferiblemente la estructura de membrana 25 está
situada en el extremo alejado del orificio de descarga 15, y tiene
un volumen de aproximadamente 300 nanolitros. El orificio de
descarga preferiblemente tiene un diámetro interno pequeño, tal
como de aproximadamente 0,5 milímetros, de manera que la estructura
de membrana sea relativamente pequeña y, por lo tanto, requiera
menos volumen de elución. En la realización preferida en la que la
estructura 25 está limitada con el extremo abierto del fondo de la
espita 15, se minimiza la dilución de la muestra debido a la
reducción o ausencia de espacio muerto.
Con el fin de minimizar el volumen de elución y
depositar eficientemente la muestra (es decir, "mancha") sobre
el sustrato diana, la espita 15 se debe mantener en estrecha
proximidad a la diana. En el dispositivo se conforma un collar o
faldón 30 colado colocado fuera que circunscribe parcial o
totalmente a cada espita 15 para soportar dicho dispositivo sobre
el sustrato y mantener una separación adecuada o distancia "x"
entre la salida de la espita 15 y la superficie de la diana 50.
Preferiblemente, esta separación es inferior al diámetro de la gota
de líquido 51 que se forma cuando el eluyente se transfiere desde la
estructura de membrana 25 a la superficie de la diana 50. De este
modo, a media que se forma la gota desde la espita 15, como se
muestra en la Figura 2B, ésta toca la superficie de la diana 50
(Figura 2C) antes de descargarse desde la espita 15. Cuando esto
ocurre, hay una adhesión por tensión superficial aumentada sobre la
superficie de la diana (debido a, por ejemplo, la diferencia de
superficie específica y la hidrofobicidad relativa de la superficie
de la diana) que "arrastra" la gota hacia fuera de la espita.
El desplazamiento dimensional máximo entre la salida de la espita y
la superficie de la diana 50 depende en parte del volumen de elución
y de la naturaleza de la solución de elución. Una separación
adecuada "x" para una elución de 1 microlitro es de
aproximadamente 3,81 a aproximadamente 0,5 mm, con una separación
máxima de aproximadamente 0,89 mm. Una separación adecuada para una
elución de 2 microlitros es de aproximadamente 0,51 a 0,762 mm, con
un valor máximo de aproximadamente 1,27 mm. Las separaciones que
sobrepasan el valor máximo no permiten la transferencia específica
de eluyente en un mínimo (o una cantidad razonable) de volumen. Si
la separación es demasiado pequeña, se producirá la transferencia,
pero las manchas tienden a ser grandes e irregulares debido a que
la gota no se transfiere totalmente; se rellena la separación y se
pueden producir burbujas si fluye aire a través de la estructura. La
separación mínima es tal que una gota de elución formada se pone en
contacto con la superficie de la diana 50 y se libera desde la
salida de la espita dejando una separación, de manera que la gota
de elución no se distorsiona por el aire que fluye a través de la
espita. Una vez que se ha realizado una transferencia efectiva, las
manchas 52 sobre la superficie de la diana se secan rápidamente
bajo presión negativa, como se ilustra en la Figura 2D.
En la realización mostrada, el collar 30 es
anular y define convenientemente un volumen limitado por el fondo
del pocillo y la superficie de la diana 50 que permite que el vacío
alcance a la espita 15. En el collar 50 se conforman uno o más
conductos de ventilación 54 para este propósito. Los expertos en la
técnica apreciarán que se podrían usar otras disposiciones o
estructuras para crear la separación y asegurarse de que la espita
pueda recibir presión negativa.
Los sustratos o dianas adecuados son los usados
convencionalmente en espectrometría de masas MALDI TOF. Éstos son
sustancialmente planos, conductores, y se dimensionan para fijarse
en cámaras de ionización del instrumento MALDI. Son típicos los
materiales metálicos tales como acero inoxidable.
Desde el punto de vista del método, la presente
invención utiliza el problema de evaporación discutido anteriormente
como una solución de tratamiento, y elimina una etapa de
transferencia previamente necesaria cuando se usan métodos
convencionales. Con esta finalidad, la muestra se introduce en uno o
más pocillos de la placa de múltiples pocillos mediante cualquier
método adecuado, tal como mediante pipeteo. Las moléculas de interés
son capturadas por la estructura de membrana 25 presente en cada
pocillo. Opcionalmente, se realiza una etapa de lavado. Como se
ilustra en las Figuras 2A-2C y 5, la placa está
situada sobre un conducto de vacío 60 (cerrado herméticamente con
una junta de sellado 61) y sobre un sustrato diana de MALDI plano,
por ejemplo, colocado apropiadamente por debajo de la salida de la
espita. Para eluir las moléculas de interés desde las estructuras de
membrana, se aplica vacío a cada pocillo (preferiblemente 127 mm de
Hg), preferiblemente para producir una diferencia de presión de
aproximadamente 0,138-0,414 bar, y se introduce un
disolvente de elución (aproximadamente 1-2
microlitros) en cada pocillo. Un vacío demasiado elevado tiende a
producir burbujas o pulverización del líquido de elución ocasionado
un manchado deficiente sobre la superficie de la diana. Se puede
usar un disolvente de elución adecuado tal como una mezcla de
acetonitrilo/matriz, preferiblemente una mezcla de 50% de
acetonitrilo/0,1% de TFA, y se aplica vacío. El volumen de elución
sale de la espita 15 y se pone en contacto con la diana situada
debajo de dicha espita y se evapora rápidamente sobre la diana,
dejando los cristales de muestra listos para su análisis en una
disposición conveniente (correspondiente a la disposición de los
pocillos 12), tal como mediante MALDI. Puesto que se elimina una
etapa de transferencia, se minimizan las pérdidas y se reduce el
tiempo de tratamiento de muestra. La formación de cristales es
excelente, y se mejora la sensibilidad de la señal del MALDI.
Un método identificar una proteína desconocida es
digerir dicha proteína con cantidad suficiente de tripsina bovina
generando un conjunto de péptidos único. Las masas colectivas de
estos péptidos determinadas mediante espectrometría de masas (por
ejemplo, MALDI TOF MS) representan una huella peptídica que se puede
buscar en una base de datos. Se puede evaluar la calidad de la
correspondencia con la base de datos mediante varios sistemas de
puntuación complejos. Sin embargo, un método simple de puntuación es
la cantidad de secuencia de proteína que se puede identificar
mediante el espectro de masas. Este parámetro se denomina
típicamente, en el campo, como el % de amplitud de la secuencia o %
de amplitud. En la mayoría de los casos, con un sistema MALDI TOF
MS de alto rendimiento que sea preciso hasta 50 ppm de una unidad de
masa, es posible identificar una proteína con un porcentaje tal
bajo como aproximadamente 12% de su secuencia.
La Figura 3 muestra la amplitud de la secuencia
obtenida de muestras de \beta-galactosidasa
(E. Coli) (50, 100 y 200 fmol) que fueron digeridas con
tripsina bovina, transferidas a una diana de MALDI TOF MS mediante
tres medios diferentes, y analizadas. Para el método de
"indirecto con vacío", la muestra se desorbió de la placa en
15 microlitros de volumen (matriz de MALDI que contiene 50% de
acetonitrilo), por ejemplo ácido
\alpha-ciano-4-hidroxi-cinnámico)
usando un conducto de vacío (a 127 mm de Hg) en una placa
microtituladora de polipropileno de fondo en forma de V con 96
pocillos. Se requieren 15 microlitros para formar una gota lo
suficientemente grande para que caiga fuera de la espita por fuerza
gravitatoria. (Volúmenes inferiores a este valor se mantienen
típicamente en la espita por tensión superficial). Del volumen
recogido (típicamente 10 microlitros o inferior), se transfirieron
dos microlitros mediante pipeteo a una diana de MALDI TOF MS y se
dejaron secar. Este método proporciona una amplitud de secuencia
aceptable con 200 fmol de muestra. Sin embargo, el % de amplitud es
virtualmente inexistente a niveles de péptidos inferiores. Se puede
conseguir una mejora de la sensibilidad para la transferencia
"indirecta" usando menos volumen de eluyente (aproximadamente
2 microlitros). Se debe usar una fuerza centrífuga (aproximadamente
1500 Xg durante 15 segundos) para transportar de manera eficiente el
pequeño volumen a través de la membrana y luego la totalidad del
volumen recogido forma una mancha sobre la diana. Se puede conseguir
un % de amplitud aceptable en una cantidad tan bajo como 50 fmol de
proteína. Aunque el rendimiento del método es bueno, debido a la
necesidad de utilizar centrifugación, no resulta adecuado para
automatización y no sería completamente útil para análisis de alto
rendimiento.
Se prefiere la transferencia directa (o manchado)
desde el dispositivo de preparación de muestras a la diana de MALDI
TOF MS, usando vacío, debido a: 1) elimina una etapa de
manipulación, 2) requiere un volumen mínimo y 3) en totalmente
automatizable. Como se muestra en la Figura 3, este método (Directo
con Vacío) proporciona unos resultados de % de amplitud comparables
a los del método "indirecto con centrifugación".
Se digirieron con tripsina tres muestras de 50
fmol de \beta-galactosidasa (E. coli), se
unieron a la membrana dentro de la espita y se eluyeron mediante
diferentes métodos. La Figura 4A es el espectro obtenido cuando la
membrana se eluyó dentro de una placa microtituladora con 15
microlitros de matriz MALDI que contiene 50% de acetonitrilo usando
vacío (127 mm de Hg) y luego se formó una mancha (2 microlitros)
sobre una diana de MALDI TOF MS. La Figura 4B se obtuvo eluyendo la
membrana con 2 microlitros de Matriz MALDI que contiene 50% de
acetonitrilo usando centrifugación (15 segundos @ 1500 Xg) y luego
se formó una mancha (2 microlitros). La Figura 4C es un espectro de
un pocillo que se eluyó/formó una mancha (2 microlitros) mediante
vacío (127 mm de Hg) directamente sobre la diana de MALDI TOF MS
según la presente invención. La Figura 4C muestra una amplitud de
23%, comparada con el 20% usando centrifugación y sin virtualmente
amplitud con vacío indirecto.
Claims (14)
1. Un método para la preparación, transferencia y
análisis de muestras, que comprende:
proporcionar al menos un pocillo (12),
conteniendo dicho al menos un pocillo (12) una estructura de
membrana (25) para unirse a moléculas de interés, comprendiendo
dicho al menos un pocillo (12) una espita (15) que tiene una
salida,
introducir una muestra dentro de dicho al menos
un pocillo (12) y dejar que dichas moléculas de interés se unan a
dicha estructura de membrana (25) en dicho al menos un pocillo
(12);
colocar un sustrato (50) debajo de dicha salida
de la espita;
eluir dichas moléculas de interés desde dicha
estructura de membrana (25) sobre dicho sustrato (50); y
analizar dicha muestra sobre dicho sustrato (50)
mediante espectrometría de masas MALDI TOF,
caracterizado porque dicho sustrato se usa
como un sustrato diana de MALDI TOF.
2. El método de la reivindicación 1,
caracterizado porque comprende además someter dicho al menos
un pocillo (12) a vacío para realizar dicha elución.
3. El método de la reivindicación 1,
caracterizado porque dicha estructura de membrana comprende
una pluralidad de partículas sorbentes atrapadas en una matriz
porosa.
4. El método de la reivindicación 1,
caracterizado porque comprende además proporcionar una
pluralidad de pocillos (12).
5. El método de la reivindicación 1,
caracterizado porque dicho sustrato está colocado debajo de
dicho al menos un pocillo (12) a una distancia predeterminada para
formar una separación, carente de estructura, entre dicha salida y
dicho sustrato.
6. El método de la reivindicación 5,
caracterizado porque dicha elución produce la formación de
gotitas en dicha salida de la espita, teniendo cada una de dichas
gotitas cierto diámetro, y en el que dicha distancia predeterminada
es inferior a dicho diámetro.
7. El método de la reivindicación 5,
caracterizado porque dicha distancia predeterminada es de
aproximadamente 0,381 mm a aproximadamente 0,762 mm.
8. El método de la reivindicación 1,
caracterizado porque hay una pluralidad de pocillos (12),
dicha salida es un orificio de descarga, dicho sustrato es una
superficie de presentación de muestras, y dichas moléculas de
interés se eluyen aplicando un vacío a dichos pocillos (12).
9. El método de la reivindicación 8,
caracterizado porque dicha pluralidad de pocillos (12) están
colocados sobre dicha superficie de presentación de muestras a una
distancia predeterminada que define una separación entre dicho
orificio de descarga y dicha superficie de presentación de
muestras.
10. El método de la reivindicación 8,
caracterizado porque dicha etapa de elución produce la
formación de una gotita sobre dicho orificio de descarga, teniendo
dicha gotita cierto diámetro, y en el que dicho orificio de
descarga está colocado sobre dicha superficie de presentación de
muestras de manera que se forma una separación inferior a dicho
diámetro entre dicho orificio de descarga y dicha superficie, con lo
que dicha gotita se pone en contacto con dicha superficie y se
transfiere desde dicho orificio de descarga hasta dicha
superficie.
11. Una combinación de preparación y presentación
de muestras para preparar y presentar una muestra que tiene
moléculas de interés para análisis, que comprende:
un dispositivo de preparación de muestras que
comprende al menos un pocillo (12), conteniendo dicho al menos un
pocillo (12) una estructura de membrana (25) para unirse a dichas
moléculas de interés, comprendiendo dicho al menos un pocillo (12)
una espita (15) que tiene una salida; y
y un conducto de vacío (61) para eluir dichas
moléculas de interés unidas desde dicha estructura de membrana (25)
a un sustrato de presentación de muestras;
caracterizado porque el sustrato de
presentación de muestras (50) es un sustrato diana de MALDI TOF para
recibir dichas moléculas de interés eluidas y presentar dichas
moléculas de interés para análisis de espectrometría de masas MALDI
TOF.
12. La combinación de la reivindicación 11,
caracterizada porque dicho dispositivo de preparación de
muestras comprende una pluralidad de pocillos (12), conteniendo
cada uno una estructura de membrana para unirse a dichas moléculas
de interés.
13. La combinación de la reivindicación 12,
caracterizada porque dicha pluralidad de pocillos (12) están
colocados en cierta disposición.
14. La combinación de la reivindicación 11,
caracterizada porque dicha superficie de presentación de
muestras es sustancialmente plana.
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