ES2250118T3

ES2250118T3 - Composiciones cosmeticas que contienen al menos una sustancia destinada para aumentar la funcionalidad y/o la expresion de los receptores menbranares cd44 de las celulas de la piel.

Info

Publication number: ES2250118T3
Application number: ES00915224T
Authority: ES
Inventors: Marc Dumas; Frederic Bonte
Original assignee: Parfums Christian Dior SA
Current assignee: Parfums Christian Dior SA
Priority date: 1999-03-26
Filing date: 2000-03-27
Publication date: 2006-04-16
Anticipated expiration: 2020-03-27
Also published as: WO2000057836A3; DE60023467T2; FR2791260A1; JP4708571B2; EP1165035B1; EP1165035A2; JP2002540126A; FR2791260B1; WO2000057836A2; DE60023467D1

Abstract

Utilización no terapéutica en una composición cosmética de gluconato de calcio o de una sal de ácido glucónico asociada a una sal de calcio como agente activo mejorador de la hidratación de la epidermis y/o de la dermis o mejorador de la fijación a la superficie de las células de la piel del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

Description

Composiciones cosméticas que contienen al menos una sustancia destinada para aumentar la funcionalidad y/o la expresión de los receptores membranares CD44 de las células de la piel.

La invención se relaciona con composiciones cosméticas que contienen al menos una substancia destinada a aumentar la funcionalidad y/o la expresión de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel.

El ácido hialurónico está presente en cantidad abundante en la epidermis humana, donde se encuentra localizado en los espacios intercelulares situados entre los queratinocitos.

El ácido hialurónico está también presente en cantidad abundante en la dermis humana, donde se encuentra localizado en los espacios intercelulares situados entre los fibroblastos.

La glicoproteína llamada CD44 está presente en la epidermis en la superficie de los queratinocitos y su función es permitir la unión del ácido hialurónico a la superficie de los queratinocitos.

La glicoproteína llamada CD44 está también presente en la dermis en la superficie de los fibroblastos y su función es permitir la fijación del ácido hialurónico, de los colágenos, especialmente de los colágenos I y IV, así como de la fibronectina, a la superficie de estas células.

El ácido hialurónico es el captador hídrico natural de la epidermis y de la dermis, ya que es capaz de retener hasta mil veces su volumen de agua. Se ve, pues, bien aquí la importancia para la célula de poseer receptores capaces de fijar este hidrocaptor con el fin de retener agua al contactar con ella y permitir su hidratación.

Es sabido, además, que los depósitos de ácido hialurónico coinciden con una actividad celular de renovación y de migración intensa en diferentes tejidos y órganos en desarrollo. En la epidermis, se localiza en las partes vivas profundas, a nivel basal y suprabasal, allí donde son más importantes la renovación celular y la migración. Sin embargo, en los lugares en los que la adherencia celular al constituyente de la matriz es esencial, como a nivel de la interfase entre las células basales epidérmicas y la unión dermoepidérmica, el CD44 está ausente.

Otro elemento importante para la fisiología de la epidermis y de la dermis es que, en situación inflamatoria, las regiones invadidas por las células inflamatorias, linfocitos y neutrófilos, presentan una desaparición del CD44 y del ácido hialurónico. Ahora bien, esta desaparición es necesaria para una fuerte adherencia de las células inflamatorias y para su invasión y su instalación en los tejidos (CD44 Substituted with Heparan Sulfate and Endo-\beta-galactosidase-Sensitive Oligosaccharides: A Major Proteoglycan in Adult Human Epidermis, J. Invest. Dermatol., 1997, 109, pp. 213-218).

Se sabe además que el ácido hialurónico permite establecer verdaderos puentes entre dos receptores CD44 portados por células adyacentes. Esto está apoyado por el hecho de que, cuando se trata una piel mantenida en supervivencia con hialuronidasa, que degrada el ácido hialurónico, se abren los espacios intercelulares y se provoca una acantosis, es decir, una hiperplasia epidérmica. También se observa una acantosis tal con desaparición de CD44 a nivel de los sitios epidérmicos invadidos por los leucocitos.

Todos estos datos prueban que el CD44 tiene una función importante en el desarrollo, el mantenimiento y la funcionalidad de la epidermis.

Los inventores han constatado, además, una disminución de las uniones entre los receptores CD44 y el ácido hialurónico con la edad. Este fenómeno está en el origen del aumento de la deshidratación de la epidermis con la edad, así como de la disminución de la renovación de las células de la epidermis. En efecto, con la edad la epidermis se atrofia y se renueva peor.

De todos estos conocimientos, se deduce que cualquier medio que permita aumentar la funcionalidad de los receptores de transmembrana CD44 y mejorar así la fijación del ácido hialurónico a la superficie de la célula constituye un medio interesante para mejorar la hidratación a nivel celular de la epidermis y de la dermis.

Además, cualquier medio que permita intensificar la red de interconexión entre las células de la epidermis por fijación de ácido hialurónico sobre receptores CD44 de dos células adyacentes constituye un medio particularmente eficaz para limitar la migración de las células inflamatorias, tales como los linfocitos y los neutrófilos, hacia las células de la epidermis. Dicha acción tendrá como efecto prevenir o tratar los fenómenos de inflamación.

Finalmente, se deduce que todo medio que permita aumentar la expresión y/o la funcionalidad de los receptores de transmembrana CD44 y mejorar así la fijación del ácido hialurónico a la superficie de la célula constituye un medio interesante para luchar contra, o al menos enlentecer y/o retrasar, la aparición de los signos del envejecimiento cutáneo, tales como especialmente las arrugas, la deshidratación cutánea, la alteración del color y la alteración de las propiedades biomecánicas de la pie, tales como la relajación y la pérdida de tonicidad, de firmeza y de elasticidad de la piel.

Los efectos de los ácidos alfa-hidroxilados sobre el desarrollo dérmico, la síntesis de colágeno, la síntesis de ácido hialurónico, el contenido en ADN y la expresión de proteínas de la epidermis han sido descritos por D.F. Williams en ``Chemistry and Technology of The Cosmetics and Toiletries Industry (1996).

La presente invención es el resultado de la evidenciación, tras un estudio sistemático, de que ciertas substancias actúan de forma eficaz sobre la funcionalidad y sobre la expresión de los receptores CD44 de las células de la epidermis. Este descubrimiento condujo a los inventores de la presente invención a introducir las substancias cuya actividad había sido así evidenciada en composiciones cosméticas o dermatológicas, especialmente destinadas al mantenimiento o a la restauración de la hidratación a nivel celular de la epidermis y a enlentecer y/o retardar la aparición de los signos de envejecimiento cutáneo.

Así pues, la invención es el resultado, en lo esencial, del descubrimiento de que era posible actuar por medio de agentes activos cosméticos o farmacéuticos de uso tópico sobre la expresión y/o la funcionalidad de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel, lo que ha permitido contemplar la utilización de estos agentes activos en procedimientos de tratamiento cosmético o terapéutico de uso tópico de la piel.

Por "aumento de la expresión", se entiende que se produce un aumento de la cantidad de receptores CD44 fabricados por las células.

Por "aumento de la funcionalidad de los receptores CD44", se entiende, en el sentido de la invención, que se produce un mejoramiento de la fijación, en la superficie de las células implicadas, del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

La invención se relaciona, pues, con utilizaciones en el campo cosmético que aprovechan este descubrimiento. El experto en la técnica seleccionará, con toda seguridad, principios activos aceptables en el campo contemplado.

Así, la invención se relaciona con la utilización no terapéutica en una composición cosmética de gluconato de calcio o de una sal de ácido glucónico asociada a una sal de calcio como agente activo mejorador de la hidratación de la epidermis y/o de la dermis o mejorador de la fijación en la superficie de las células de la piel del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

Más concretamente, según este primer aspecto, la invención se relaciona con la utilización no terapéutica en una composición cosmética de gluconato de calcio o de una sal de ácido glucónico asociada a una sal de calcio como agente activo aumentador de la expresión de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel y/o mejorador de la fijación a la superficie de dichas células de la piel del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

Según una primera variante, la utilización de este agente activo permite mejorar la funcionalidad de los receptores de transmembrana CD44 de las células de la piel, en el sentido de que fijan a la superficie de dichas células el ácido hialurónico y/o el colágeno, en particular el colágeno I y/o el colágeno IV, y/o la fibronectina.

Se ha constatado que esta acción sobre los receptores de membrana CD44 era experimentada tanto sobre los receptores CD44 de los queratinocitos como sobre los de los fibroblastos.

Así, según una primera variante, dicho agente activo aumenta la expresión de los receptores CD44 de los queratinocitos y/o de los fibroblastos y/o mejora la fijación del ácido hialurónico a la superficie de estas células.

Según otra variante, dicho agente activo aumenta la expresión de los receptores CD44 de los fibroblastos y/o mejora la fijación a la superficie de dichos fibroblastos del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

Como se ha expuesto anteriormente, la invención es el resultado de un estudio sistemático de un gran número de agentes activos. Este estudio ha permitido mostrar, en particular, que los agentes activos más eficaces sobre la expresión y/o la funcionalidad de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel demostraban ser el gluconato de calcio y las sales de ácido glucónico asociadas a una sal de calcio.

Las sales de ácido glucónico son ventajosamente seleccionadas entre las sales de sodio, de calcio, de magnesio, de zinc y de manganeso.

Finalmente, como se deduce de los ejemplos, se ve que el gluconato de calcio presentaba un interés muy particular, al igual que el ácido glucónico asociado a una sal de calcio, por ejemplo a cloruro de calcio.

Se ve también por los ejemplos que, en caso de utilizar un gluconato en presencia de calcio, la razón molar del calcio al gluconato está ventajosamente comprendida entre 2 y 6, preferiblemente del orden de 4.

Las proporciones de agentes activos en las composiciones cosméticas de la invención pueden variar entre grandes márgenes. Sin embargo, es ventajoso utilizar entre un 0,005% y un 5% en peso, preferiblemente entre un 0,05% y un 0,5% en peso, de agente activo con respecto al peso total de la composición cosmética final.

Ventajosamente, se utiliza dicho agente activo en la composición en asociación con al menos una substancia seleccionada entre el grupo constituido por las vitaminas, en particular las vitaminas del grupo A (retinol), C y D3 y sus derivados, tales como los ésteres, especialmente los palmitatos y propionatos, los tocoferoles, las xantinas, en particular la cafeína o la teofilina, los retinoides, en particular la vitamina A ácida, los extractos de Centella asiatica, los ácidos asiáticos, madecásicos y sus derivados glicosilados, tales como el asiaticósido o el madecasósido, los extractos de Siegesbeckia orientalis, los extractos de Commiphora mukul y los extractos de Eriobotrya japonica, los derivados de silicio cosméticamente aceptables, tales como polisiloxanos, silanoles y siliconas, los aminoácidos y sus sales, especialmente de magnesio o de calcio, en particular el ácido aspártico, la arginina, la citrulina y la treonina, las ceramidas, las glicoceramidas, los derivados de esfingosina, en particular las ceramidas de tipo II y III, los fosfolípidos, la forskolina y sus derivados, los extractos de Coleus, los extractos de Tephrosia, los inhibidores de la elastasa, en particular el ácido elágico, los péptidos de soja, los inhibidores de la colagenasa, en particular los péptidos y los extractos vegetales tales como los extractos de raíz de Coptidis, los extractos de raíz de Scutellaria baicalensis Georgi, los flavonoides, tales como la wogonina, la baicalina y la baicaleína, los extractos hidroetanólicos de hojas de Ginkgo biloba, de Mosla chinensis, de Salva officinalis, de Cinnamomum cassia, los extractos catéquicos de Camellia sinensis y los extractos acuosos de cáscaras de habas de Theobroma cacao, los extractos de Phellodendron amurense, los antiinflamatorios, en particular los inhibidores de la fosfolipasa A2, los espesantes, en particular los extractos de regaliz, el ácido glicirretínico, el glicirricinato de amonio, los agentes hidratantes, en particular los polioles, el propilenglicol, el butilenglicol, el glicerol, el ácido hialurónico, los agentes anti-equimosis, en particular los extractos de Castaño de Indias y la escina, los agentes protectores o mejoradores de la microcirculación, en particular los bioflavonoides de Ginkgo biloba, el isodón, los extractos de Ami visnaga, la visnadina, la ruscogenina, los anti-radicales, en particular los polifenoles, tales como los OPC (Oligómeros Procianidólicos) y sus derivados, extractos vegetales, en particular extractos de Curcuma longa, los agentes antiseborreicos, tales como un inhibidor de la 5-alfa-reductasa, en particular un extracto de Pygeum africanum, y los agentes estimulantes de la microcirculación sanguínea, tales como la cefarantina y el nicotinato de metilo, las saponinas de alfalfa, los sojasapogenoles, en particular de tipo A y de tipo B, los agentes estimulantes de la síntesis del colágeno VII, tales como los extractos de Bertholletia, el ácido elágico, la D-xilosa y complejos de oligoelementos.

Ventajosamente, dicho agente activo es utilizado en la composición en asociación con al menos una substancia seleccionada entre las substancias que protegen la piel de los efectos nocivos del sol, tales como los filtros solares, solos o en combinación, especialmente los filtros UV A y los filtros UV B, en particular los óxidos de titanio y los óxidos de zinc, la oxibenzona, los cinamatos, en particular el metoxicinamato de octilo (comercializado bajo la marca Parsol MCX), el butilmetoxidibenzoilmetano (comercializado bajo la marca Parsol 1789) y los filtros de origen vegetal, las substancias que limitan los daños causados al ADN, en particular las que limitan la formación de dímeros de timina, tales como el ácido ascórbico y sus derivados y/o el Photonyl, y las substancias que contribuyen a la eliminación de las manchas de envejecimiento, tales como los inhibidores de la síntesis de melanina o de tirosinasa.

Según otra de sus características esenciales, la invención se relaciona con un método de cuidado cosmético. Este método está más particularmente destinado a corregir una deficiencia de la expresión y/o de la funcionalidad de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel.

Más concretamente, el método de cuidado cosmético según la invención consiste en la aplicación sobre las zonas de la piel que han de ser tratadas de una composición cosmética que contiene, como principio activo, al menos un agente incrementador de la expresión de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel y/o mejorador de la fijación a la superficie de dichas células de la piel del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

Según el método de la invención, el principio activo está constituido por gluconato de calcio o por una sal del ácido glucónico asociada a una sal de calcio.

En este procedimiento cosmético, se aplica sobre la parte de la piel que se ha de tratar una composición cosmética que contiene uno de los agentes activos como los definidos anteriormente.

Este método de cuidado cosmético permite especialmente corregir la deficiencia de la fijación a la superficie de las células de la piel del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

Este método de cuidado cosmético permite especialmente mejorar la hidratación de la epidermis.

La invención se relaciona igualmente con un método de cuidado cosmético tal como se ha definido anteriormente destinado a corregir los efectos negativos del envejecimiento sobre la expresión y/o sobre la funcionalidad de los receptores de membrana CD44 de las células de la piel. Este punto es particularmente importante, ya que los inventores de la presente invención han demostrado que la capacidad de los queratinocitos para fijar el ácido hialurónico disminuía considerablemente en el curso del envejecimiento, traduciendo así una pérdida de la funcionalidad del CD44.

Los ejemplos siguientes son facilitados a título puramente ilustrativo de la presente invención.

Ejemplo 1 Protocolo del ensayo que permite evidenciar por fluorescencia la fijación del ácido hialurónico a la superficie de los queratinocitos I - Medida de la cantidad de ácido hialurónico fijado a la superficie de los queratinocitos

Se realizan las etapas siguientes:

1 - Siembra de las células:

Se siembran 15.000 queratinocitos humanos en pocillos de cultivo (placas de 96 pocillos) en un medio K-SFM (Gibco).

2 - Obtención de la confluencia de los cultivos:

Incubación de los cultivos durante 72 h a 37ºC bajo atmósfera saturada de humedad, con un 5% de CO_{2} y con renovación del medio de cultivo después de 48 h.

3 - Fijación de ácido hialurónico:

Incubación de las células durante 4 h a 4ºC con ácido hialurónico unido de forma covalente a un fluorocromo, la fluorescamina (HA-FA), sintetizada en el laboratorio según la técnica descrita en "Preparation and properties of fluoresceine-labelled hyaluronate; Carbohydrate Research, 1975, Vol. 44, pp. 251-257", preparado en K-SFM con un 0,2% de azida de sodio.

4 - Evaluación de la actividad de los productos estudiados:

Se añaden los productos para los cuales se quiere evaluar la acción sobre la cantidad de HA-FA fijada por los queratinocitos al medio de incubación al inicio de la incubación. Se efectúan controles en ausencia de los productos que se han de evaluar y en presencia del excipiente que sirvió para solubilizarlos.

5 - Fijación no específica de HA-FA:

Con el fin de determinar el marcaje no específico, se utilizan rigurosamente las mismas condiciones experimentales que en la etapa 3, pero añadiendo 200 veces más ácido hialurónico no marcado por un fluorocromo.

6 - Cuantificación de la fluorescencia:

Después de haber retirado el medio de fijación de HA-FA, se efectúan dos aclarados con PBS, después de lo cual se mide la fluorescencia fijada sobre los queratinocitos a una longitud de onda de excitación \lambdaex = 485 nm y una longitud de onda de emisión \lambdaem = 538 nm.

7 - Expresión de los resultados:

Los resultados son expresados en unidad de fluorescencia (fluorescencia específica), restando la fluorescencia no específica (véase 5 -).

8 - Normalización:

En ciertos casos, en particular cuando se quieren comparar dos cepas de células diferentes, por ejemplo procedentes de donantes de edades diferentes, o que han recibido un tratamiento diferente, es necesario normalizar teniendo en cuenta el número de células presentes en los pocillos de cultivo. Para ello, se llevan los valores de fluorescencia medidos al contenido en ADN celular efectuado según el método del DAPI (véase III -).

II - Medida de la expresión del receptor del ácido hialurónico (CD44) en la superficie de los queratinocitos

Las etapas 1 y 2 son idénticas a las etapas 1 y 2 de I.

3 - Fijación de las células con paraformaldehído al 2% en PBS que contiene calcio y magnesio durante 5 min. a temperatura ambiente.

4 - Saturación de los sitios de unión anticuerpo-antígeno no específicos:

Después de dos aclarados con PBS, se incuban las células con medio de saturación PBS con calcio y magnesio al que se ha añadido un 5% v/v de suero de ternera y un 0,05% p/v de azida de sodio durante 1 h a temperatura ambiente.

5 - Marcaje:

Adición del anticuerpo monoclonal IgG1 anti-CD44 humano, copulado a R-ficoeritrina, diluido en el medio de saturación (véase 4-) a 1/50 durante 1 hora a temperatura ambiente y al abrigo de la luz.

6 - Se realiza un control isotípico con una IgG1 copulada a R-ficoeritrina en las mismas condiciones experimentales que para el marcaje. Los valores obtenidos son restados de los del marcaje.

7 - Cuantificación de la fluorescencia:

Después de dos aclarados con el medio de saturación, se efectúa la lectura de la fluorescencia presente en los pocillos con 50 \mul de PBS a \lambda excitación = 544 nm y \lambda emisión = 590 nm.

8 - Evaluación de los productos de ensayo:

Se añaden los productos cuya actividad sobre la expresión del receptor CD44 se quiere evaluar al medio de cultivo 24 h después de la siembra de las células. Para hacerlo, se retira el medio de siembra y se substituye por un medio idéntico que contiene la substancia de ensayo. Se continua la incubación entonces durante 48 h. Se efectúan controles en ausencia de los productos que se han de evaluar y en presencia del excipiente que ha servido para solubilizarlos. Por lo demás, todo es igual.

9 - Medición de la funcionalidad del receptor CD44:

Después de tratar los cultivos durante 48 h con las substancias que han de ser evaluadas (véase 8 -), se realiza una medición de la capacidad de las células para fijar el ácido hialurónico según el protocolo I-, añadiendo en la etapa 3 de este protocolo CaCl_{2} a una concentración de 20 mM.

10 - Normalización:

Se normalizan los valores así obtenidos teniendo en cuenta la cantidad de material celular presente en los pocillos. Para ello, se efectúa una medición del contenido en ADN celular por el método DAPI (véase el protocolo a continuación).

III. Cuantificación del ADN celular con diclorhidrato de 4',6'-diaminafenilindol (DAPI)

Se puede efectuar la cuantificación del ADN celular directamente sobre los cultivos tras cuantificación de la expresión del CD44.

1 - Etapa de permeabilización:

Se añaden a cada pocillo 30 \mul de metanol a -20ºC durante 1 min.

2 - Marcaje con DAPI:

Después de dos aclarados con PBS, se añade una solución de DAPI a 20 \mug/ml durante 15 min. a temperatura ambiente y en obscuridad.

3 - Cuantificación de la fluorescencia:

Después de dos aclarados con PBS, se efectúa la lectura de la fluorescencia presente en los pocillos con 50 \mul de PBS a \lambda excitación = 355 nm y \lambda emisión = 460 nm.

Ejemplo 2 Evidenciación del efecto del envejecimiento sobre la funcionalidad del receptor CD44 en cuanto a su fijación del ácido hialurónico

Se realizó este estudio utilizando la prueba cuyo protocolo (I-) fue dado en el ejemplo 1.

Se realizó el estudio sobre cultivos de queratinocitos humanos normales procedentes de donantes de edades diferentes.

En la siguiente tabla I se dan los resultados.

TABLA I

Edades de los donantes en años	\begin{minipage}[t]{100mm}Fijación del ácido hialurónico (\lambdaem = 538 nm) en relación a la cantidad de ADN (\lambdaem = 460 nm)\end{minipage}
	Media	Tipo de desviación
18	257	13
20	505	42
33	378	52
44	75	21
50	77	2
67	48	7

Se observa una disminución muy grande de la capacidad de los queratinocitos para fijar el ácido hialurónico en el curso del envejecimiento, que se traduce en una pérdida de la funcionalidad del CD44.

Ejemplo 3 Efecto de la asociación del gluconato y del calcio sobre la fijación del ácido hialurónico sobre los queratinocitos

Se realizaron los estudios siguientes según el protocolo I- del ejemplo 1.

a) En un primer experimento, se comparó la fijación de ácido hialurónico marcado con un fluorocromo sobre queratinocitos humanos en cultivo en presencia de CaCl_{2} y de gluconato de calcio a igual molaridad.

En la siguiente tabla II se dan los resultados.

TABLA II

Concentraciones en mM	Fluorescencia medida (UF)
	CaCl_{2}	Gluconato de calcio
	Media	Tipo de	Media	Tipo de
		desviación		desviación
5	30	9	310*	30
10	370	21	2.745*	125
* Diferencias altamente significativas entre el CaCl_{2} y el gluconato de calcio.

Se observa que, en presencia de gluconato de calcio, la cantidad de fluorescencia medida es significativamente mucho mayor que para el cloruro de calcio a molaridad equivalente. Esto indica que se fijan cantidades mucho mayores de ácido hialurónico sobre los cultivos de queratinocitos en presencia de este producto que en presencia de cloruro de calcio.

b) En un segundo experimento, se comparó la acción de concentraciones crecientes de CaCl_{2} en presencia o en ausencia de gluconato de sodio a 10 mM.

En la siguiente tabla III figuran los resultados.

TABLA III

Concentraciones de CaCl_{2} en mM	Fluorescencia medida (UF)
	Sin gluconato de Na	Con gluconato de Na (10 mM)
	Media	Tipo de	Media	Tipo de
		desviación		desviación
0	6	11	6	11
2,5	8	15	27	36
5	7	16	84*	41
10	447	43	2.186*	350
* Diferencias altamente significativas entre el CaCl_{2} solo y en presencia de gluconato de sodio.

Este resultado confirma el efecto positivo del calcio sobre la fijación de ácido hialurónico. El efecto positivo del calcio se manifiesta a una concentración de 10 mM.

En presencia de gluconato en forma de gluconato de sodio, la cantidad de ácido hialurónico fijada con 10 mM de CaCl_{2} es mayor. Además, a una concentración de CaCl_{2} de 5 mM, sin efecto sobre esta fijación, la adición de gluconato de Na permite observar una fijación significativa de ácido hialurónico.

c) En un tercer experimento, se fijó la concentración de calcio a 10 mM y se hizo variar la concentración de gluconato aportado en forma de sal de sodio.

En la siguiente tabla IV se dan los resultados.

\vskip1.000000\baselineskip

TABLA IV

Concentración de gluconato	Fluorescencia medida (UF) en presencia de 10 mM de CaCl_{2}
de Na en mM
	Media	Tipo de desviación
0	447	43
2,5	5.241*	597
5	4.535*	616
10	2.186*	350
* Diferencias altamente significativas entre el CaCl_{2} solo y en presencia de gluconato de sodio.

Se ve así claramente que el gluconato aportado en forma de gluconato de sodio induce de forma dosis-dependiente una potenciación del efecto del calcio y permite así la fijación de una cantidad de ácido hialurónico mucho más importante que en presencia únicamente de calcio. Este experimento muestra que existen razones molares de Ca/Gluconato preferentes próximas a 4 (10 mM/2,5 mM).

Este último experimento es útil para ajustar la cantidad de gluconato a la del calcio para producir el máximo de acción.

Se ve que, en condiciones relativamente optimizadas, el gluconato de sodio permite al menos aumentar los efectos del calcio en un factor de 12, lo que es considerable.

Estos dos últimos elementos tienen importancia en la medida en que el gluconato de sodio puede potenciar el efecto del calcio, presente en abundancia en la epidermis, sobre la fijación del ácido hialurónico en la superficie de los queratinocitos de la epidermis.

Se ve, pues, que la invención no se limita solamente al gluconato de Ca, sino que se relaciona más en general con el gluconato en forma de sal o de complejo de calcio, de magnesio, de manganeso, de zinc o de sodio o de cualquier otro catión divalente o monovalente.

Ejemplos de formulaciones cosméticas que utilizan las propiedades de los agentes estimulantes de la fijación del ácido hialurónico sobre las células cutáneas Ejemplo 4 Emulsión hidratante y nutriente anti-envejecimiento

Gluconato de calcio	0,1 g
Palmitato de vitamina A	0,01 g
Fosfato de vitamina E	0,01 g
Fosfato de vitamina C y magnesio	0,2 g
Ceramidas de trigo	0,2 g
Proteínas de trigo	1 g
Filtro UVA-UVB	5 g
Excipiente con conservantes y perfumes \hskip2cm csp	100 g

Esta emulsión nutriente mejora la hidratación cutánea, en particular de la epidermis, la finura y la textura de la piel y atenúa las arrugas. Se aplica cotidianamente sobre la cara.

Ejemplo 5 Gel hidratante reafirmante y reestructurante

Gluconato de calcio	0,2 g
Aspartato de magnesio	0,1 g
Extracto titulado de Centella asiatica	0,1 g
Saponinas de soja	0,05 g
Fosfato de vitamina C y magnesio	0,1 g
Excipiente con conservantes y perfumes \hskip2cm csp	100 g

Este gel hidratante ejerce un efecto tensor sobre la piel y mejora su flexibilidad y su firmeza. Se aplica cotidianamente sobre la cara, el cuello y el busto.

Ejemplo 6 Loción hidratante y tonificante

Gluconato de calcio	0,1 g
Extracto de Panax ginseng	0,2 g
AMP cíclico	0,05 g
Cafeína	0,1 g
Excipiente con conservantes y perfumes \hskip2cm csp	100 g

Se utiliza esta loción hidratante en aplicación cotidiana sobre la cara, preferiblemente por la mañana, para obtener una piel más bella y más resplandeciente.

Ejemplo 7 Máscara hidratante

Gluconato de calcio	0,3 g
Ácido hialurónico	0,5 g
D-xilosa	0,3 g
Pigmentos coloreados	10 g
Ceras	30 g
Excipiente \hskip6,2cm csp	100 g

Claims

1. Utilización no terapéutica en una composición cosmética de gluconato de calcio o de una sal de ácido glucónico asociada a una sal de calcio como agente activo mejorador de la hidratación de la epidermis y/o de la dermis o mejorador de la fijación a la superficie de las células de la piel del ácido hialurónico y/o del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada por aumentar dicho agente activo la expresión de los receptores CD44 de los queratinocitos y/o de los fibroblastos y/o mejorar la fijación del ácido hialurónico a la superficie de dichas células.

3. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada por aumentar dicho agente activo la expresión de los receptores CD44 de los fibroblastos y/o mejorar la fijación a la superficie de dichos fibroblastos del colágeno, en particular del colágeno I y/o del colágeno IV, y/o de la fibronectina.

4. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada por estar dicho agente activo destinado a mejorar la hidratación de la epidermis.

5. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por estar dicho agente activo destinado a corregir los efectos negativos del envejecimiento sobre la expresión y/o la funcionalidad de los receptores CD44 de las células de la piel.

6. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por ser dicha composición una composición destinada a hidratar y reafirmar la piel.

7. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por ser dicha composición una composición destinada a hidratar y reestructurar la piel.

8. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada por ser dicho agente activo gluconato de calcio.

9. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada por ser dicho agente activo una asociación de una sal de ácido glucónico y de una sal de calcio.

10. Utilización según la reivindicación 9, caracterizada por ser dicha sal de calcio cloruro de calcio.

11. Utilización según una de las reivindicaciones 9 ó 10, caracterizada por seleccionar dicha sal de ácido glucónico entre el grupo constituido por las sales de sodio, de calcio, de magnesio, de zinc y de manganeso.

12. Utilización según una de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizada por estar comprendida la razón molar de calcio/gluconato entre 2 y 6.

13. Utilización según la reivindicación 12, caracterizada por ser dicha razón del orden de 4.

14. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada por estar comprendida la proporción de dicho agente activo en la composición entre el 0,005% y el 5% en peso, preferiblemente entre el 0,05% y el 0,5%, con respecto al peso total de la composición cosmética final.

15. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizada por utilizar dicho agente activo en la composición en asociación con al menos una substancia seleccionada entre el grupo constituido por las vitaminas, en particular las vitaminas del grupo A (retinol), C y D3 y sus derivados, tales como los ésteres, especialmente los palmitatos y propionatos, los tocoferoles, las xantinas, en particular la cafeína o la teofilina, los retinoides, en particular la vitamina A ácida, los extractos de Centella asiatica, los ácidos asiáticos, madecásicos y sus derivados glicosilados, tales como el asiaticósido o el madecasósido, los extractos de Siegesbeckia orientalis, los extractos de Commiphora mukul y los extractos de Eriobotrya japonica, los derivados de silicio cosméticamente aceptables, tales como polisiloxanos, silanoles y siliconas, los aminoácidos y sus sales, especialmente de magnesio y de calcio, en particular el ácido aspártico, la arginina, la citrulina y la treonina, las ceramidas, las glicoceramidas, los derivados de esfingosina, en particular las ceramidas de tipo II y III, los fosfolípidos, la forskolina y sus derivados, los extractos de Coleus, los extractos de Tephrosia, los inhibidores de la elastasa, en particular el ácido elágico, los péptidos de soja, los inhibidores de la colagenasa, en particular los péptidos y los extractos vegetales tales como los extractos de raíz de Coptidis, los extractos de raíz de Scutellaria baicalensis Georgi, los flavonoides, tales como la wogonina, la baicalina y la baicaleína, los extractos hidroetanólicos de hojas de Ginkgo biloba, de Mosla chinensis, de Salva officinalis, de Cinnamomum cassia, los extractos catéquicos de Camellia sinensis y los extractos acuosos de cáscaras de habas de Theobroma cacao, los extractos de Phellodendron amurense, los antiinflamatorios, en particular los inhibidores de la fosfolipasa A2, los espesantes, en particular los extractos de regaliz, el ácido glicirretínico, el glicirricinato de amonio, los agentes hidratantes, en particular los polioles, el propilenglicol, el butilenglicol, el glicerol, el ácido hialurónico, los agentes anti-equimosis, en particular los extractos de Castaño de Indias y la escina, los agentes protectores o mejoradores de la microcirculación, en particular los bioflavonoides de Ginkgo biloba, el isodón, los extractos de Ami visnaga, la visnadina, la ruscogenina, los anti-radicales, en particular los polifenoles, tales como los OPC (Oligómeros Procianidólicos) y sus derivados, extractos vegetales, en particular extractos de Curcuma longa, los agentes antiseborreicos, tales como un inhibidor de la 5-alfa-reductasa, en particular un extracto de Pygeum africanum, y los agentes estimulantes de la microcirculación sanguínea, tales como la cefarantina y el nicotinato de metilo, las saponinas de alfalfa, los sojasapogenoles, en particular de tipo A y de tipo B, los agentes estimulantes de la síntesis del colágeno VII, tales como los extractos de Bertholletia, el ácido elágico, la D-xilosa y complejos de oligoelementos.

16. Utilización según una de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizada por utilizar dicho agente activo en la composición en asociación con al menos una substancia seleccionada entre las substancias que protegen la piel de los efectos nocivos del sol, tales como los filtros solares solos o en combinación, especialmente los filtros UV A y los filtros UV B, en particular los óxidos de titanio y los óxidos de zinc, la oxibenzona, los cinamatos, en particular el metoxicinamato de octilo, el butilmetoxidibenzoilmetano y los filtros de origen vegetal, las substancias que limitan los daños causados al ADN, en particular las que limitan la formación de dímeros de timina, tales como el ácido ascórbico y sus derivados y/o el Photonyl, y las substancias que contribuyen a la eliminación de las manchas de envejecimiento, tales como los inhibidores de la síntesis de melanina o de tirosinasa.