ES2243475T3 - Compuestos, composiciones de aminoflavona y uso de los mismos. - Google Patents
Compuestos, composiciones de aminoflavona y uso de los mismos.Info
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Abstract
Una aminoflavona que tiene la siguiente fórmula en la que cada R1 y R2 es H, COOH2-R7, en el que R7 es amino, alquilamino de cadena lineal o ramificada, o alquil o dialquilamino, o un residuo á-aminoácido, con tal que al menos de uno de R1 y R2 sea distinto de H, y en la que R3 es H, alquilo de cadena lineal o ramificada, hidroxialquilo, alcanoiloxialquilo, alcanoiloxi, alcoxi, o alcoxialquilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Description
Compuestos, composiciones de aminoflavona y uso
de los mismos.
La presente invención se refiere a compuestos de
5-aminoflavona, las composiciones, y a los
procedimientos de uso de estos compuestos como agentes
citotóxicos.
Los flavonoides, o bien naturales o sintéticos,
se han reconocido por mostrar diversas actividades biológicas. Tales
compuestos, por ejemplo, pueden inhibir la actividad de la proteína
quinasa C, aromatasa, topoisomerasa, o quinasa dependiente de
ciclina o puede mostrar actividad antimicótico. En particular, las
5,4'-diaminoflavonas muestran de la manera indicada
citotoxicidad contra, por ejemplo, la línea celular MCF - 7 de
cáncer de mama humano. Véase Akama y col., J. Med. Chem., 41,
2056 - 2067 (1998).
El mecanismo de acción y la molécula diana de los
compuestos de 5,4'-diaminoflavona permanecen en
gran medida desconocidos. Los experimentos que incorporan diversos
grupos sustituyentes en las posiciones 6, 7, 8, y 3' sobre el anillo
de flavona produjeron alguna especulación ya que la relación de la
actividad estructural de los sustituyentes, particularmente en la
posición 7 de la
5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona.
Aunque el papel real de los diversos grupos sustituyentes permanece
sin aclarar, se demostró que ciertas propiedades físicas del
compuesto de flavona precursor, tal como solubilidad, se podrían
mejorar en presencia de algunos, pero no todos, grupos sustituyentes
en la posición 7. Alguno de los compuestos sustituidos en la
posición 7 también demostraron citotoxicidad contra células
cancerosas de pulmón humano. Véase Akama y col., J. Med,
Chem., en 2061 - 62.
A pesar de la citotoxicidad de la
5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona
contra ciertas células cancerosas humanas, el compuesto posee escasa
solubilidad en disolventes orgánicos y a duras penas se solubiliza
en agua. De hecho, los datos de solubilidad de la
5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona
se encontró que era menor que 0,2 \mug/ml en agua y 1,2 mg/ml en
etanol. Véase Akama y col., J. Med. Chem., en 2067.
La solubilidad en agua proporciona una ventaja
crítica para un compuesto farmacéutico, especialmente con respecto a
la formulación del fármaco y absorción oral después de la
administración. En la mayoría de los casos, el sitio de acción del
fármaco se localiza en una región que está separada del sitio de
administración del fármaco por la membrana. Los fármacos que se
administran por vía oral, intramuscular, o subcutánea deben cruzar
las membranas que se van a adsorber y entrar en el sistema de
circulación. Incluso los fármacos administrados mediante inyección
intravenosa deben cruzar las membranas capilares con el fin de dejar
la circulación sistémica y entrar en los sitios de acción
intracelular y extracelular. Véase Human Pharmacology,
Wingard y col., eds., San Luis: Mosby - Year Book, Inc, 1991, pp. 50
- 51.
A este respecto, la mayoría de los fármacos
tienen una afinidad por el agua con el fin de ser transportados por
la sangre y otros fluidos corporales a sus sitios de acción. Una
solución para la baja solubilidad en agua de un ingrediente activo
es preparar el ingrediente activo con emulsionantes o agentes
formadores de complejos para evitar que el fármaco
precipite en el sitio de administración. Véase Human Pharmacology, pp. 50 - 51. Sin embargo, cualquier manipulación del ingrediente activo, en un intento por mejorar una propiedad física no afectaría de manera perjudicial su actividad biológica. El uso de emulsionantes y agentes formadores de complejos, aunque es un planteamiento aceptable, puede limitar los modos de administración del fármaco y/o hace que el fármaco sea más difícil de usar y almacenar.
precipite en el sitio de administración. Véase Human Pharmacology, pp. 50 - 51. Sin embargo, cualquier manipulación del ingrediente activo, en un intento por mejorar una propiedad física no afectaría de manera perjudicial su actividad biológica. El uso de emulsionantes y agentes formadores de complejos, aunque es un planteamiento aceptable, puede limitar los modos de administración del fármaco y/o hace que el fármaco sea más difícil de usar y almacenar.
Por lo tanto, permanece una necesidad, de
compuestos y composiciones novedosas de
5-aminoflavona que muestran propiedades potentes
antitumorales. También permanece una necesidad de compuestos de
5-aminoflavona que tienen solubilidad mejorada en
agua y disolventes orgánicos. La presente invención proporciona
tales compuestos, composiciones, y procedimientos. Éstas y otras
ventajas de la presente invención, así como características
adicionales de la invención, serán evidentes a partir de la
descripción de la invención proporcionada en esta invención.
La invención proporciona compuestos de
trifluoroaminoflavona que se sustituyen con grupos que contiene
aminas en al posición 5- y/o 4' sobre el anillo de flavona, y
opcionalmente sustituido con un alquilo, hidroxialquilo,
alcanoiloxialquilo, alcanoiloxi, alcoxi, o alcoxialquilo en la
posición 7 del anillo de flavona, o las sales farmacéuticamente
aceptables de los mismos. Los compuestos de la presente invención
muestran características físicas deseables, tales como solubilidad
en disolventes acuosas.
Además de sus propiedades físicas deseables, los
compuestos de aminoflavona de la presente invención también muestran
actividad antitumoral contra una diversidad de células
cancerosas.
La presente invención también proporciona una
composición farmacéutica que comprende una composición farmacéutica
que comprende un compuesto de aminoflavona como se ha definido en
general anteriormente, y un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
En otro aspecto, la presente invención
proporciona el uso de una aminoflavona de la fórmula (I) para la
preparación de un medicamento para inhibir el crecimiento de un
tumor en un huésped mediante la administración al huésped de una
cantidad de un compuesto de aminoflavona que inhibe el crecimiento
de tumores como se he definido en general anteriormente. El huésped
puede ser cualquier animal, incluyendo seres humanos.
La invención se puede entender con referencia a
los dibujos acompañantes y en la siguiente descripción detallada de
las realizaciones preferidas.
La figura 1 A ilustra la "impresión digital"
del gráfico medio basado en la IG_{50} de tribromhidrato de
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil]7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona
en la selección de la línea celular NCI 60.
La figura 1 B ilustra la "impresión digital"
del gráfico medio basado en la IG_{50} de dimetanosulfonato de
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil]7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona
en la selección de la línea celular NCI 60.
La figura 1 C ilustra la "impresión digital"
del gráfico medio basado en la IG_{50} de tribromhidrato de
5-amino-2-[4-[[2-amino-5-guanidinopentanoil]amino]-
3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona
en la selección de la línea celular NCI 60.
La figura 1 D ilustra la "impresión digital"
del gráfico medio basado en la IG_{50} de dimetanosulfonato de
5-amino-6,8-difluoro-7-metil-2-[4-(dimetilamino)acetamida-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona
en la selección de la línea celular NCI 60.
La figura 1 E ilustra la "impresión digital"
del gráfico medio basado en la IG_{50} de dimetanosulfonato de
6,8-difluoro-7-metil-5-(dimetilamino)acetamido-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona
en la retícula de la línea celular NCI 60.
La presente invención abarca una clase novedosa
de compuestos de antiflavona, las composiciones que contienen estos
compuestos, y su uso en la preparación de un medicamento para
inhibir el crecimiento de tumores. Cualquier resto que contiene
aminas se puede sustituir en cualquiera o ambos de las posiciones
R^{1} y R^{2} del compuesto I, mostrado más adelante.
Preferiblemente, cada R^{1} y R^{2} es H,
COOH_{2}-R^{7}, en la que R^{7} es amino,
alquilamino de cadena lineal o ramificada, dialquilamino o alquil- o
dialquilaminoalquilo, o un residuo
\alpha-aminoácido, con tal que al menos de uno de
R^{1} y R^{2} sea distinto de H, y R^{3} es H, alquilo de
cadena lineal o ramificada, hidroxialquilo, alcanoiloxialquilo,
alcanoiloxi, alcoxi, o alcoxialquilo. Cualquier grupo alquilo
adecuado se puede sustituir en R^{3}, incluyendo, por ejemplo, un
grupo alquilo con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20
átomos de carbono, preferiblemente entre aproximadamente 1 y
aproximadamente 15 átomos de carbono, más preferiblemente entre
aproximadamente 1 y aproximadamente 10 átomos de carbono, y los más
preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 átomos
de carbono. Como se usa en esta memoria descriptiva, el término
"alquilo" incluye grupos alquilo de cadena ramificada o lineal,
tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo,
neopentilo, hexilo, heptilo, y octilo.
Cualquier grupo mono- o dialquilamino o mono- o
dialquilaminoalquilo adecuado se puede sustituir en R^{7},
incluyendo por ejemplo, un grupo con un grupo alquilo con entre
aproximadamente 1 y aproximadamente 20 átomos de carbono,
preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 15 átomos
de carbono, más preferiblemente entre aproximadamente 1 y
aproximadamente 10 átomos de carbono, y los más preferiblemente
entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 átomos de carbono. El
término "alquilo" puede incluir, por ejemplo, cualquiera de los
grupos enumerados anteriormente.
Cualquier grupo hidroxialquilo adecuado se puede
sustituir en R^{3}, incluyendo, por ejemplo, un grupo
hidroxialquilo con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20
átomos de carbono, preferiblemente con entre aproximadamente 1 y
aproximadamente 15 átomos de carbono, más preferiblemente entre
aproximadamente 1 y aproximadamente 10 átomos de carbono, y los más
preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 átomos
de carbono. El término "alquilo" puede incluir, por ejemplo,
cualquiera de los grupos enumerados anteriormente.
Cualquier grupo alcanoiloxi o alcanoilixialquilo
adecuado se puede sustituir en R^{3}, incluyendo, por ejemplo, un
grupo con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 átomos de
carbono, preferiblemente con entre aproximadamente 1 y
aproximadamente 15 átomos de carbono, más preferiblemente entre
aproximadamente 1 y aproximadamente 10 átomos de carbono, y los más
preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 átomos
de carbono. El término "alcanoiloxi" puede incluir grupos de
cadena ramificada o lineal, tales como metanoiloxi, etanoiloxi,
propanoiloxi, butanoiloxi, pentanoiloxi, hexanoiloxi, heptanoiloxi,
y octanoiloxi. El término "alquilo" puede incluir, por ejemplo,
cualquiera de los grupos enumerados anteriormente.
Cualquier grupo alcoxi o alcoxialquilo adecuado
se puede sustituir en R^{3}, incluyendo, por ejemplo, un grupo con
entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 átomos de carbono,
preferiblemente con entre aproximadamente 1 y aproximadamente 15
átomos de carbono, más preferiblemente entre aproximadamente 1 y
aproximadamente 10 átomos de carbono, y los más preferiblemente
entre aproximadamente 1 y aproximadamente 6 átomos de carbono. El
término "alcoxi" puede incluir por ejemplo, grupos alcoxi de
cadena ramificada o lineal, tales como metoxi, etoxi, propoxi,
isopropoxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi,
terc-butoxi, pentoxi, hexoxi, heptoxi, y octoxi. El término
"alquilo" puede incluir, por ejemplo, cualquiera de los grupos
enumerados anteriormente.
Cualquier residuo
\alpha-aminoácido adecuado y derivados de los
mismos se puede sustituir en R^{7}. Los ejemplos de tales
residuos \alpha-aminoácido incluyen aminoácidos de
origen natural tales como alanina, arginina, aspaargina, ácido
aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina,
histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina,
prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina. Los grupos
sustituyente adecuados y los compuestos formados con ellos incluyen,
por ejemplo, los indicados en la tabla 1 a continuación.
Los expertos en la técnica también apreciarán que
los compuestos de la presente invención se pueden convertir en sales
farmacéuticamente aceptables mediante el uso de reacciones,
reactivos, y procedimientos fácilmente disponibles.
En los compuestos de aminoflavona de la presente
invención, cuando cada uno de R^{1} o R^{2} de estructura I es
un resto \alpha-aminoácido, la estereoquímica de
R^{1} y R^{2} es preferiblemente L. Los ejemplos de tales
compuestos incluyen
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil]7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona
y
5-amino[4-[[2-amino-5-guanidinopentanoil]amino]-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-metil-4H-benzopiran-4-ona.
La sustitución de un resto que contiene amina en
R^{1} y R^{2} imparte una alta solubilidad, en disolventes tales
como agua, al compuesto. La alta solubilidad en agua es deseable y
beneficiosa. Además de la fácil administración de los compuestos
solubles en agua, la alta solubilidad en agua también incrementa la
absorción de los compuestos después de, por ejemplo, administración
oral de los compuestos a un individuo o huésped. La alta solubilidad
en agua también en beneficiosa cuando los compuestos de la presente
invención se productos farmacéuticos como ingrediente activo en la
composición.
De manera sorprendente, además de las propiedades
potenciadoras de solubilidad, los restos que contienen amina en
R^{1} y R^{2} en los compuestos de la presente invención también
muestran alguna permanencia y no se escinden fácilmente del
compuesto. La persistencia aparente de estos grupos sustituyentes
pueden significar su contribución a la actividad biológica de los
compuestos, aunque el mecanismo preciso a través de los cuales estos
grupos influencian la actividad biológica es actualmente
desconocido.
Los compuestos de la presente invención se pueden
sintetizar usando reacciones químicas, reactivos y procedimientos
bien conocidas y fácilmente disponibles. Los expertos en al técnica
también apreciarán que los compuestos de la presente invención,
incluyendo derivados antitumorales y los profármacos de los mismos,
se pueden obtener mediante modificación (es) química (s) de
compuestos de origen sintético o natural de la presente invención,
usando reacciones, reactivos y procedimientos bien conocidos y
fácilmente disponibles.
Por ejemplo, el compuesto I se puede preparar
mediante, primero, haciendo reaccionar una
7-sustituido-5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona
con un aminoácido adecuadamente N-protegido o su
derivado reactivo en presencia de una base y/o reactivo de
condensación, tal como carbodiimida, carbonildiimidazol, y los
similares, en un disolvente inerte. Los ejemplos del derivado
reactivo del aminoácido N-protegido adecuado
incluyen un cloruro de ácido, un éster
N-succinimida y los similares. Como base, se pueden
usar las aminas terciarias tales como trietilamina,
diisopropilamina, piridina, y
4-dimetilaminopiridina. Como disolvente inerte se
pueden usar dimetilformamida, diclorometano, cloroformo, y similares
solos o en combinación uno con otro. Como el grupo
N-protector adecuado del aminoácido, se pueden usar
un grupo butoxicarbonilo, un grupo benciloxicarbonilo, un grupo
9-fluorenilmetoxicarbonilo, y similares. La reacción
se lleva acabo a una temperatura entre temperatura ambiente y el
punto deebullición del disolvente. El producto resultante, cuando
R^{1} y R^{2} respectivamente están protegidos adecuadamente, se
pueden transformar en el compuesto I mediante desprotección del
producto mediante procedimientos tales como los descritos en
Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Green, ed.,
John Wiley & Sons, Inc. (1981).
El compuesto I también se puede preparar
mediante, primero, haciendo reaccionar un compuesto de
7-sustituido-5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona
con un ácido representado por la fórmula general
HOOC-Y-X o su derivado reactivo, en
el que X representa cloro, bromo, o yodo, e Y representa un alquilo
C_{1 - 20} de cadena lineal o ramificada, de una manera similar a
la descrita anteriormente. Después el producto resultante se puede
hacer reaccionar con azida de sodio en un disolvente inerte. Como
disolvente inerte, se pueden usar dimetilformamida,
dimetilacetamida, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano,
1,2-dimetoxietano, y similares solos o en
combinación uno con otro. La reacción se lleva a cabo
preferiblemente a la temperatura entre 50 - 100ºC. El producto final
se puede obtener mediante reducción de los grupos azido a grupos
amino mediante hidrogenación catalítica o mediante el uso de
trifenilfosfina y agua en un disolvente inerte. Como catalizador se
puede usar paladio o carbono, hidróxido de paladio, oxido de platino
y similares. Como disolvente inerte, se puede usar metanol, etanol,
propanol, acetato de etilo, tetrahidrofurano,
1,2-dimetoxietano, y similares junto o en
combinación uno con otro. La reacción preferiblemente se lleva a
cabo a una temperatura entre 20 y 30ºC.
El compuesto I, en el que R^{1} es H, también
se puede preparar mediante, primero, haciendo reaccionar un
compuesto
7-sustituido-5-amino-trifluoroflavona,
en el que 4'-amino está sustituido con un grupo
aliloxicarbonilo, con un aminoácido adecuadamente
N-protegido o su derivado reactivo de una manera
similar a la descrita anteriormente. El producto final se puede
obtener mediante, primero, desprotegiendo el compuesto anterior, y
después tratando el compuesto resultante con
tetraquis(trifenilfosfina)paladio en presencia de un
agente reductor adecuado en un disolvente inerte. Como agente
reductor, se puede usar formiato de trietilamonio, pirrolidina y
similares. Como disolvente inerte, se puede usar tetrahidrofurano,
1,2-dimetoxietano y similares. La reacción
típicamente se lleva a cabo a una temperatura entre 0ºC y
temperatura ambiente. El orden de los procedimientos anteriores se
puede modificar según principios y procedimientos reconocidos en la
técnica.
Los compuestos de aminoflavona novedosos de la
presente invención (y las sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos) se pueden incluir en una composición adecuada, por ejemplo,
una composición farmacéutica. La composición se pude producir
mediante combinación de uno o más compuestos de la presente
invención con un vehículo farmacéuticamente aceptable apropiado, y
se puede formular en una preparación adecuada. Las preparaciones
adecuadas incluyen, por ejemplo, las preparaciones en formas
sólidas, semisólidas, líquidas, o gaseosas tales como comprimidos,
cápsulas, polvos, gránulos, pomadas, soluciones, supositorios,
inyecciones, inhaladores, y aerosoles, y otras formulaciones
conocidas en la técnica por sus vías respectivas de administración.
En las formas de dosificación farmacéuticas, un compuesto de la
presente invención se puede usar solo a en asociación apropiada, así
como en combinación, con otros compuestos farmacéuticamente activos,
incluyendo otros agentes antitumorales o anticáncer.
Los agentes anticáncer adecuados incluyen, por
ejemplo, doxorrubicina, bleomicina, vincristina, vinblastina, VP –
16, VM - 26, cisplatina, procarbazina, y taxol. También son
adecuados agentes alquilantes, tales como BCNU, CCNU, metil - CCNU,
y DTIC. También se pueden usar antimetabolitos, tales como 5 - FU y
metotrexato en el presente procedimiento de la invención. Para
ejemplos adicionales de agentes anticancerosos adecuados véase la
tabla 1 y tabla 2 de
Boyd en: Current Therapy in Oncology, J. E. Niederhuber, ed., Philadelphia: B. C. Decker, Inc., pp. 11 - 22 (1993).
Boyd en: Current Therapy in Oncology, J. E. Niederhuber, ed., Philadelphia: B. C. Decker, Inc., pp. 11 - 22 (1993).
Se puede utilizar cualquier vehículo adecuado.
Los vehículos adecuados incluyen vehículos farmacéutica o
fisiológicamente aceptables. Los siguientes procedimientos y
vehículos son meramente ejemplares y no están de manera limitante.
En el caso de preparaciones orales, un compuesto de la presente
invención se puede administrar solo o en combinación con una
cantidad terapéuticamente eficaz de al menos otro compuesto. Las
composiciones usadas de acuerdo con la presente invención pueden
además incluir al menos un compuesto adicional distinto de un
compuesto de la presente invención, por ejemplo, un agente
anticanceroso adicional. El (los) ingrediente (s) activos (s) se
pueden combinar, si se desea, con aditivos apropiados para preparar
comprimidos, polvos, gránulos, cápsulas, o similares.
Los aditivos adecuados pueden incluir, por
ejemplo, aditivos convencionales tales como lactosa, manitol,
almidón de maíz o almidón de patata. Los aditivos adecuados también
pueden incluir aglutinantes, por ejemplo, celulosa cristalina,
derivados de celulosa, goma arábiga, almidón de maíz, o gelatinas.
Además, también se pueden incluir disgregantes, tales como almidón
de maíz, almidón de patata o carboximetilcelulosa de sodio, y
lubricantes, tales como estearato de magnesio. Si se desea también
se pueden incluir en al composición otros aditivos tales como, por
ejemplo, diluyentes, agentes de tamponación, agentes humectantes,
conservantes, y/o agentes aromatizantes, y similares.
Los compuestos de la presente invención también
se pueden formular en una preparación para inyección mediante
disolución, suspensión, o emulsión en un disolvente acuoso o no
acuoso, tal como aceite vegetal, glicéridos sintéticos o alifáticos,
ésteres de ácidos alifáticos superiores, o propilenglicol (si se
desea, con aditivos convencionales tales como solubilizantes,
agentes isotónicos, agentes de suspensión, agentes emulsionantes,
estabilizantes, y conservantes). Los compuestos de la presente
invención también se pueden preparar en una formulación en aerosol a
administrar mediante inhalación. Tales formulaciones de aerosol se
pueden colocar en propulsores presurizados adecuados tales como
diclorodifluorometano, propano, nitrógeno, y similares.
Las formas de dosificación unitaria para
administración oral tales como jarabes, elixires, y suspensiones se
pueden proporcionar en el que cada unidad de dosificación, por
ejemplo, cucharita, cuchara, o comprimidos contienen una cantidad
predeterminada de la composición que contiene el compuesto de la
presente invención. De manera similar, las formas de dosificación
unitaria para inyección o administración intravenosa puede
comprender una composición como una solución en agua estéril,
solución salina normal, u otro vehículo farmacéuticamente
aceptable.
El término "forma de dosificación unitaria"
como se usa en esta memoria descriptiva se refiere a unidades
físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para
sujetos humanos y animales, cada unidad conteniendo una cantidad
predeterminada de al menos un compuesto o compuestos de la presente
invención (solo, o si se desea, en combinación con otro agente
terapéutico). La dosificación unitaria se puede determinar mediante
procedimientos conocidos por los expertos en la técnica, por
ejemplo, calculando la cantidad de ingrediente activo suficiente
para producir el efecto deseado en asociación con un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Las especificaciones para las formas de
dosificación unitaria que se pueden usar de acuerdo con la presente
invención dependen del efecto particular que se va a lograr y la
farmacodinámica particular asociada al (a los) compuesto (s) en el
huésped individual.
Los vehículos farmacéuticamente aceptables, por
ejemplo, vehículos, adyuvantes, excipientes, o diluyentes, son
accesibles para los expertos en al técnica y están típicamente
disponibles comercialmente. Los expertos en al técnica pueden
fácilmente determinar el procedimiento apropiado de administración
para la formulación exacta de la composición que se está usando.
Cualquier ajuste necesario en la dosis lo puede fácilmente realizar
un facultativo experimentado que dirija la naturaleza o gravedad de
de la afección que se está tratando. Los ajustes en la dosis también
se pueden realizar en base de otros factores tales como, por
ejemplo, la salud física global del paciente individual, sexo, edad,
historial médico precedente, y similares.
La presente invención también proporciona el uso
de una aminoflavona de la fórmula (I) para la preparación de un
medicamento para inhibir el crecimiento de un tumor en un huésped,
incluyendo un ser humano, que comprende la administración al huésped
de una cantidad inhibidora de crecimiento de tumores de un compuesto
de aminoflavona de la presente invención. El uso de la presente
invención también incluye la administración de compuestos de
aminoflavonas de la presente invención (y las sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos) junto con un vehículo
farmacéuticamente aceptable. Además, el uso de la presente invención
incluye la administración de un compuesto de aminoflavona de la
presente invención con un vehículo farmacéuticamente aceptable y/o
al menos otro agente anticáncer. Cualquier agente anticáncer
adecuado se puede usar junto con los compuestos de la presente
invención, como se ha descrito previamente.
Los compuestos de aminoflavona de la presente
invención se pueden administrar al huésped. Deseablemente, los
compuestos de aminoflavonas administrados al huésped incluyen, por
ejemplo, los enumerados en la tabla 1. Los compuestos de
aminoflavona preferidos para administrar a un huésped son
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino)]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
5-amino-2-[4-[[2-amino-5-guanidinopentanoil]amino]-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
6,8-difluoro-7-metil-5-(dimetilamino)acetamido-2-[4-(dimetilamino)
acetamida-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona, y 5-amino-6,8-difluoro-7-metil-2-[4-(dimetilamino)acetamida-3-
fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona. Particularmente preferida es 5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino)]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona, dimetanosulfonato.
acetamida-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona, y 5-amino-6,8-difluoro-7-metil-2-[4-(dimetilamino)acetamida-3-
fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona. Particularmente preferida es 5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino)]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona, dimetanosulfonato.
Los compuestos de la presente invención se pueden
administrar mediante cualquier vía adecuada, por ejemplo,
administración oral, administración intramuscular, administración
subcutánea, administración intravenosa, o similares. Por ejemplo,
uno o más compuestos de aminoflavona de la presente invención (o una
composición de los mismos) se pueden administrar como una solución
que es adecuada para inyección o infusión intravenosa, un
comprimido, una cápsula, o similares, o cualquier composición o
formulación adecuada como se describe en esta memoria
descriptiva.
La "cantidad inhibidora de crecimiento de
tumores" es la dosis necesaria para lograr un "nivel
inhibidor" de crecimiento de tumores del compuesto activo en un
paciente individual. La cantidad inhibidora de crecimiento de
tumores se puede definir, por ejemplo, como la cantidad requerida a
administrar a un paciente individual para lograr un nivel en sangre,
nivel en tejidos, y/o nivel intracelular inhibidor de crecimiento de
tumores de un compuesto de la presente invención para efectuar el
tratamiento médico deseado.
Cuando se usa el nivel eficaz se usa como el
punto final preferido para administración de dosis, la dosis real y
programa puede variar dependiendo, por ejemplo, de las diferencias
entre individuos en farmacocinética, distribución de fármacos,
metabolismo y similares. El nivel eficaz también puede variar cuando
uno o más compuestos de la presente invención se usan en combinación
con otros agentes anticáncer. Además, el nivel eficaz puede variar
dependiendo de la enfermedad para la que se desea el
tratamiento.
A este respecto, los compuestos y composiciones
de la presente invención también se pueden usar como agentes
antibacterianos y/o agentes anti - estrógenos. Los expertos en la
técnica pueden ser medios adecuados conocidos en la técnica para
determinar la dosificación apropiada y nivel eficaz del compuesto o
composición de la presente invención basándose en la enfermedad para
la que se desea el tratamiento.
Hasta el grado en que los compuestos se usan de
acuerdo con la presente invención como agentes anticáncer, el nivel
eficaz en sangre se puede determinar por analogía basándose en el
nivel eficaz en sangre correspondiente a la actividad anticáncer. El
nivel eficaz se puede elegir, por ejemplo, como el nivel eficaz que
inhibe la proliferación de células tumorales en un ensayo de
selección. De manera similar, el nivel eficaz se puede determinar,
por ejemplo, en base al nivel en sangre o en tejido en un paciente
que corresponde a una concentración de un agente terapéutico que
inhibe eficazmente el crecimiento de cánceres humanos en un ensayo
que es clínicamente predictivo de actividad anticáncer. Además, el
nivel eficaz se puede determinar, por ejemplo, basándose en una
concentración a la que ciertos marcadores de cáncer en una sangre de
paciente están inhibidos por un compuesto particular. Como
alternativa, el nivel eficaz se puede determinar, por ejemplo,
basándose en una concentración eficaz para reducir o detener el
crecimiento de un cáncer de un paciente, produce que un cáncer de un
paciente se invierta o desaparezca, haga que un paciente se vuelva a
sintomático para un cáncer particular, o mejore un sentido subjetivo
del paciente de cáncer de afección.
Después el nivel eficaz anticáncer se puede usar
para aproximar (por ejemplo, mediante extrapolación), o incluso para
determinar, el nivel que se requiere cínicamente para lograr un
nivel intracelular en sangre, tejido, y/o intracelular que inhibe el
crecimiento de tumores que efectúa el tratamiento médico deseado. Se
apreciará que la determinación de la cantidad terapéuticamente
eficaz clínicamente requerida para inhibir de una manera eficaz el
crecimiento de tumores requiere la consideración de otras variables
que pueden influir el nivel eficaz. Cuando se usa una cantidad
eficaz fija como un punto final preferido para administración de
dosis, la dosis real y programa de dosificación para administración
de fármacos puede variar para cada paciente dependiendo de factores
que incluyen, por ejemplo, diferencias interindividuales en
farmacocinética, disposición de fármacos, metabolismo, u otros
factores descritos en esta memoria descriptiva que logran el nivel
deseado.
Los expertos en la técnica pueden determinar
fácilmente la dosis apropiada, programa, o procedimiento de
administración de una formulación particular, con el fin de lograr
el nivel eficaz deseado en un paciente individual. Los expertos en
al técnica también pueden determinar y usar fácilmente un indicador
apropiado del nivel eficaz de los compuestos de la presente
invención. Por ejemplo, el nivel eficaz se puede determinar mediante
análisis directo (por ejemplo, química analítica) o mediante
análisis indirecto (por ejemplo, con indicadores de química clínica)
de muestras de pacientes apropiados(por ejemplo, sangre o
tejido). El nivel eficaz también se puede determinar, por ejemplo,
mediante observaciones directas o indirectas tales como acidez de
orina, cambio en densidad ósea, disminución den la presión ocular, o
mediante la reducción de un tumor en un paciente con cáncer. Existen
muchas referencias en la técnica que describen protocolos usados en
la administración de compuestos activos a un paciente en necesidad
de los mismos. Por ejemplo, los protocolos usados en la
administración de agentes anticáncer a pacientes se describen, por
ejemplo en Cancer Chemotherapy: Principles and Practice,
Chabner y Collins, eds., J. B. Lippincott, (1990) (paricularmente el
capítulo 2).
La única actividad que inhibe el crecimiento de
tumores de los compuestos de la presente invención se han demostrado
usando la selección orientada a la enfermedad tumoral humana de la
línea celular 60 del Instituto de Cáncer Nacional de los Estados
Unidos (NCI), que puede exactamente predecir la actividad anticáncer
de los compuestos químicos.
La selección de tumor humano de la línea celular
60 del NCI mide la capacidad de un compuesto que mata o inhibe
selectivamente el crecimiento de diversos cánceres humanos. En
general, en al selección de NCI, los compuestos de la presente
invención muestran actividad potente contra ciertos tipos de tumores
sólidos humanos (por ejemplo, cáncer pulmonar de células no
pequeñas, cáncer renal, y melanoma), y las variedades resistentes de
los mismos. Mediante estas observaciones, y con otros análisis
deseados de los perfiles de respuesta celular de tumores
característicos, puede mostrar que los compuestos de la presente
invención tienen un único perfil de bioactividad característico.
\newpage
Los compuestos de aminoflavona novedosas de la
presente invención, además de sus características de solubilidad
deseables, también demuestran potentes actividades inhibidoras de
crecimiento de tumores para una diversidad de cánceres humanos,
tales como los ensayados en la selección de la línea celular 60 de
NCI. Por ejemplo, los compuestos 1a - d de la tabla 1, o las sales
farmacéuticamente aceptables de los mismos, muestran todos
inhibición de crecimiento de tumores in vitro, especialmente
contra líneas celulares humanas de cáncer de pulmón, ovario, colon,
y rectal. También muestran actividad inhibidora de crecimiento de
tumores contra ciertas líneas celulares humanas de leucemia, cáncer
de pulmón de células no pequeñas, y melanoma. Véase las figuras 1 a
- e. Para ilustración adicional de la actividad inhibidora de
crecimiento de tumores de los compuestos de la presente invención,
véase el ejemplo 16.
Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente
la presente invención, pero, naturalmente, no se deben construir de
ninguna manera como limitación de su alcance. Los datos de espectros
de masas para los compuestos descritos en los siguientes ejemplos se
determinaron o bien mediante Espectrometría de Masas de Ionización
por electropulverización ("IPE _ EM") (ejemplos 1 - 5) o
mediante Espectrometría de Masas de Bombardeo de átomos rápidos
("FABMS") (ejemplos 6 - 15 y 18 - 20).
Este ejemplo muestra la preparación de
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
tribromhidrato (1 a).
A una solución en agitación de
N^{2},N^{6}-(dicarbobenciloxi)-L-lisina
(187 mg, 0,45 mmoles) en tetrahidrofurano (6,0 ml) a 3ºC en
atmósfera de argón se añadió cloruro de oxalilo (41 \mul, 0,47
mmoles) y N,N-dimetilformamida (10 \mul). Después
de 15 minutos a 3ºC, se añadió a la misma una solución fría de
5,4'-diamino-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(100 mg, 0,31 mmoles) en N,N-dimetilformamida (2,4
ml). La mezcla se agitó a 3ºC durante 15 minutos y después a
temperatura ambiente durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se
repartió entre EtOAc (75 ml) y agua (10 ml). Se separaron las fases
y la fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 ml). La
fase orgánica combinada se secó (MgSO_{4}), se filtró, después de
concentró proporcionando el producto bruto. Se llevó a cabo una
reacción por duplicado y el material bruto se combinó y se purificó
mediante columna de cromatografía sobre gel de sílice (elución por
gradiente de etapas desde 1:1 a 3:2 de EtOAc:Hexano) proporcionando
91 mg (20%) de producto purificado (es decir,
5-amino-4'-[N^{2},N^{6}-(dicarbobenciloxi)-L-lisinamido]-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona,
de aquí en adelante "producto 1"). Se realizaron reacciones
adicionales proporcionando un total de 236 mg de material
similar.
Se agitó una solución del producto 1 (90 mg, 0,13
mmoles) en bromuro de hidrógeno, solución al 30% p/p en ácido
acético (5 ml) a temperatura ambiente durante 2 horas en atmósfera
de argón. La mezcla de reacción se diluyó con Et_{2}O (40 ml)
proporcionado una suspensión, y el sólido se aisló mediante
centrifugación. El sólido se lavó con Et_{2}O (5 x 15 ml) mediante
centrifugación después se secó en argón, después a vacío a
temperatura ambiente durante 5 horas, proporcionando 80 mg (92%) de
5-amino-6,8-
digfluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
tribromhidrato. Se llevaron a cabo reacciones adicionales
proporcionando un total de 113 mg de producto similar. Calculado
para C_{22}H_{26}F_{3}N_{4}O_{3}Br_{3} \cdot 1,3
H_{2}O, C, 36,98; H, 4,03; N, 7,84; Br, 33,54. Encontrado: C,
37,06/36,97; H, 4,08/4,13; N, 7,66/7,59; Br, 32,59.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisisl)amino]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
dimetilsulfonato (1 a).
A una solución en agitación de
N^{2},N^{6}-(dicarbobenciloxi)-L-lisina
(1,94 g mg, 4,68 mmoles) en tetrahidrofurano (40 ml) a 0ºC en
atmósfera de argón se añadió cloruro de oxalilo (412 \mul, 4,72
mmoles) y N,N-dimetilformamida (76 \mul). Después
de 15 minutos a 0ºC, se añadió a la misma una solución fría de
5-amino-2-(4-amino-3-fluorofenil)-6,8-difluoro-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,0 g, 3,12 mmoles) en N,N-dimetilformamida (20
ml). La mezcla se agitó a 0ºC durante 15 minutos y después a
temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se
repartió entre EtOAc (1,0 l) y agua (1,0 l). Se separaron las fases
y la fase orgánica se secó, se filtró, después se concentró
proporcionado el producto bruto (4,8 g). Se llevaron a cabo 10 x 1 g
de desarrollos de la aminoflavona proporcionando un total de 49,4 g
de material que contiene el intermedio
5-amino-4'-[N^{2},N^{6}-(dicarbobenciloxi)-L-lisinamido]-7-
metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona.
Este material se cromatografió sobre una columna de gel de sílice (3
kg) empaquetada en EtOAc/hexano (3:2) después se eluyó con
EtOAc/hexano/DMF (60:40:1). Las fracciones que contienen producto
bruto se combinaron, después se concentraron a vacío hasta un
residuo. Este material se trituró con Et_{2}O (aproximadamente 20
ml) proporcionando 2,8 g (13%) de intermedio purificado adecuado
para transformación.
El intermedio (1,50 g, 2,09 mmoles) se disolvió
en ácido metanosulfónico (100 ml). La mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 24 horas. Durante este tiempo se
produjeron cambios de color, y finalmente se formó un sólido
finamente dividido., La mezcla de reacción se mezcló en EtOAc (500
ml). La solución resultante se clarificó a través de un papel de
fibra de vidrio después se concentró a vacío hasta un residuo. Este
material se agitó con Et_{2}O (700 ml). Después de almacenar
hasta -10ºC, el Et_{2}O se decantó de un sólido gomoso y se
desechó. El material sólido se disolvió en metanol y se desechó. El
material sólido en metanol (300 ml), se clarificó, se concentró a
vacío hasta el punto de turbidez, después se mezcló en Et_{2}O
(600 ml). El producto precipitado se recogió mediante
centrifugación. Se repitió el proceso de disolución en metanol,
precipitación en éter, recogida mediante centrifugación. Se procesó
un total de 3,25 g de intermedio de una manera similar
proporcionando 2,6 g (90%) de
5-amino-6,8-digfluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
dimetanosulfonato.
Calculado para
C_{22}H_{23}F_{3}N_{4}O_{3} \cdot 2 CH_{3}SO_{3}H
\cdot H_{2}O, C, 43,76; H, 5,05; N, 8,51; S, 9,74. Encontrado:
C, 43,45; H, 4,89; N, 8,24; Br, 9,90.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-2-[4-[[2-amino-5-guanidinopentanoil]amino]-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
tribromhidrato (1 b).
A una solución en agitación de
N\alpha,N^{G},N^{G'}-(tricarbobenciloxi)-L-arginina
(5,4 g, 9,4 mmoles) en tetrahidrofurano (60 ml) a 0ºC en atmósfera
de argón se añadió cloruro de oxalilo (875 \mul, 10,0 mmoles) y
N,N-dimetilformamida (50 \mul). Después de 15
minutos a 0ºC, se añadió a la misma una solución fría de
5,4'-diamino-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,0 g, 3,12 mmoles) en N,N-dimetilformamida (30
ml). La mezcla se agitó a 0ºC durante 15 minutos y después a
temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se
repartió entre EtOAc (200 ml) y agua (200 ml). Se separaron las
fases y la fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (5 x 100 ml).
La fase orgánica combinada se secó (MgSO_{4}), se filtró, después
de concentró proporcionando el producto bruto. El producto bruto se
purificó mediante columna de cromatografía sobre gel de sílice
(elución por gradiente de etapas desde 1:2 a 1:1 de EtOAc:Hexano)
proporcionando 93 mg (3%) de producto purificado (es decir,
5-amino-4'-[N\alpha,N^{G},N^{G'}-(tricarbobenciloxi)-L-argininamido]-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona,
de aquí en adelante "producto 2").
Se agitó una solución del producto 2 (90 mg, 0,10
mmoles) en bromuro de hidrógeno, solución al 30% p/p en ácido
acético (5 ml) a temperatura ambiente durante 24 horas en atmósfera
de argón. La mezcla de reacción se diluyó con Et_{2}O (40 ml)
proporcionado una suspensión, y el sólido se aisló mediante
centrifugación. El sólido se lavó con Et_{2}O (5 x 20 ml) mediante
centrifugación después se secó en argón, después a vacío a
temperatura ambiente durante 8 horas, proporcionando 36 mg del
producto final.
C_{22}H_{23}F_{3}N_{6}O_{3} = 476 (base
libre). Encontrado: 477,2 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
6,8-difluoro-7-metil-5-(dimetilamino)acetamido-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 d).
A una solución en agitación de
5,4'-diamino-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(500 mg, 1,56 mmoles) y
1,8-diazabicilo[5.4.0]undec-7-eno
(DBU) (254 \mul, 1,70 mmoles) en tetrahidrofurano (25 ml) en
atmósfera de argón se añadió una solución de 2,51 moles/litro de
cloruro de cloroacetilo en tetrahidrofurano (640 \mul), 1,61
mmoles). Después de 1 hora a temperatura ambiente, se añadieron
cloruro de cloroacetilo adicionales (160 \mul). Después de 30
minutos adicionales a temperatura ambiente, se añadieron más DBU (64
\mul) y 2,51 moles/l de cloruro de acetilo (160 \mul). Después
de 40 minutos a temperatura ambiente, se añadieron una alícuota
final de DBU y cloruro de cloroacetilo. Después de 15 minutos, la
TLC mostró que la reacción se había completado. La mezcla de
reacción se filtró y el residuo gomoso se lavó con tetrahidrofurano
(2 x 20 ml). El filtrado combinado y los lavados que contenían el
producto bruto
5,4'-bis(cloroacetamido)-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(de aquí en adelante "producto 3").
A una solución en agitación del producto 3 en
tetrahidrofurano (65 ml) se añadió gas dimetilamina durante cinco
minutos proporcionando una solución saturada. La mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 1 hora, después se concentró
proporcionando un sólido de color amarillo (0,7 g). El sólido se
disolvió en EtOAc caliento (300 ml) y se purificó sobre un lecho de
gel de sílice. Las fracciones produjeron un sólido amarillo que se
trituró con una mezcla de EtOAc (25 ml) y hexano (100 ml), después
se filtró por succión. El sólido se lavó con hexano (2 x 25 ml)
después se secó a vacío a 40ºC durante seis horas proporcionando 330
mg (52%) del producto final. C_{22}H_{25}F_{3}N_{4}O_{4}
= 490,2. Encontrado: 491,2 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-6,8-difluoro-7-metil-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]]-4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 c).
A una solución en agitación de
5,4'-diamino-7-metil-6,8,3'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,5 g, 4,68 mmoles) y
1,8-diazabicilo[5.4.0]undec-7-eno
(DBU) (2961 \mul, 19,8 mmoles) en tetrahidrofurano (150 ml) en
atmósfera de argón se añadió una solución de 2,51 moles/litro de
cloruro de cloroacetilo en tetrahidrofurano (7,5 ml, 18,8 mmoles).
Después de 3 horas a temperatura ambiente, se añadió DBU adicional
(1,7 ml) y 2,51 moles/l de cloruro de cloroiacetilo adicionales (4,5
ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La
mezcla de reacción se filtró y el residuo gomoso se lavó con
tetrahidrofurano (2 x 50 ml). El filtrado combinado y los lavados
que contenían el producto bruto
5-amino-4'-cloroacetamido-7-metil-6,83'-trifluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(de aquí en adelante "producto 4").
\newpage
A una solución en agitación del producto 4
(aproximadamente 2,2 g, 4,68 mmoles) en tetrahidrofurano (250 ml) se
añadió gas dimetilamina durante 10 minutos proporcionando una
solución saturada. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante
4,5 horas, después se concentró hasta sequedad. El residuo se
purificó sobre una columna de gel de sílice (180 g, 3 x 25 cm) se
eluyó con 15:1 de EtOAc:MeOH, proporcionando un sólido. El sólido se
trituró con hexano (100 ml), se filtró por succión y se secó a vacío
a 40ºC durante 6 horas proporcionando 1,09 g (47%) del producto
final.
C_{20}H_{18}F_{3}N_{3}O_{3} = 405,1.
Encontrado: 406,1 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-2-[4-(aminoacetamido)-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-(hidroxime-
til)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 e).
til)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 e).
A una solución de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-(cloroacetamido)-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,00 g, 2,20 mmoles) en dimetilformamida (50 ml) se añadió azida de
sodio (715 mg, 11 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 1 hora. Se añadió agua a la misma, y los cristales
precipitados se recogieron mediante filtración produciendo
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-(azidoacetamido)-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,01 g, 100%).
A una suspensión del anterior compuesto (1,00 g,
2,17 mmoles) en metanol (100 ml) se añadió 1 mol/l de carbonato
potásico (10 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 25 minutos. El pH se ajustó hasta 7 con 1 mol/l de HCl. Se
añadió agua, y los cristales precipitados se recogieron mediante
filtración produciendo
5-amino-2-[4-(azidoacetamido)-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-(hidroximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona
(764 mg, 84%).
A una solución del compuesto anterior (750 mg,
1,79 mmoles) en acetato de etilo (300 ml) y metanol (150 ml) se
añadió paladio sobre carbono (10%, 350 ml), y la mezcla se agitó en
flujo de hidrógeno a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Después
el hidrógeno se reemplazó con hidrógeno, la mezcla se filtró a
través de un lecho de celita. Se evaporó el disolvente a presión
reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía sobre gel
de sílice produciendo una base libre de 1 e (460 mg, 65%), que se
convirtió en un clorhidrato.
C_{18}H_{14}F_{3}N_{3}O_{4} = 393.
Encontrado: 394 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
7-(acetoximetil)-5-amino-6,8-difluoro-2-[4-(dimetilamino)acetamida-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 f).
A una solución de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-(cloroacetamido)-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(2,02 g, 4,44 mmoles) en dimetilformamida (50 ml) se añadieron
clorhidrato de dimetilamina (1,81 g, 22,2 mmoles) y
diisopropiletilamina (3,90 ml, 22,4 mmoles), y la mezcla se agitó a
temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió agua a la misma, y
los cristales precipitados se recogieron mediante filtración
produciendo el compuesto 1 f (1,97 g, 96%).
C_{22}H_{20}F_{3}N_{3}O_{5} = 463.
Encontrado: 464 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-6,8-difluoro-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-7-(hidro-
ximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 g).
ximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 g).
A una suspensión del compuesto 1 f (1,97 g, 4,25
mmoles) en metanol (135 ml) se añadió 1 mol/l de hidróxido sódico
(15 ml), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Se añadió
agua a la misma, y los cristales precipitados se recogieron mediante
filtración. La purificación mediante cromatografía en columna sobre
gel de sílice (9:1 de cloroformo/metanol) proporcionó una base libre
de 1 g (934 mg, 47%), que se convirtió en clorhidrato.
C_{20}H_{18}F_{3}N_{3}O_{4} = 421.
Encontrado: 422 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-[[3-(dimetilamino)propionil]amino]-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 h).
A una solución de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-amino-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,51 g, 4,00 moles) en dimetilformamida (40 ml) se añadieron ácido
3-bromopropiónico (3,06 g, 20,0 mmoles) y
clorhidrato de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida
(3,83 g, 20,0 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 45 minutos. Se añadió agua a la misma, y la mezcla se
extrajo con acetato de etilo. La purificación mediante cromatografía
en columna sobre gel de sílice (6:1 de cloroformo/acetato)
proporcionó
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-[(3-bromopropionil)amino]-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(554 mg, 27%).
A una solución del compuesto anterior (500 mg,
0,975 mmoles) en dimetilformamida (15 ml) se añadieron clorhidrato
de dimetilamina (397 mg, 4,87 mmoles) y diisopropiletilamina (0,85
ml, 4,88 ml), y la mezcla se agitó a 50ºC durante 1 hora. Se añadió
agua a la misma, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La
purificación mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice
(20:1 de cloroformo/metanol) proporcionó 1 h (442 g, 95%).
C_{23}H_{22}F_{3}N_{3}O_{5} = 477.
Encontrado: 478 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-6,8-difluoro-2-[4-[[3-(dimetilamino)propionil]amino]-3-fluorofenil]-7-(hidroximetil)-
4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 h).
A una suspensión de 1 h (400 mg, 0,839 mmoles) en
metanol (36 ml) se añadió 1 mol/l de hidróxido sódico (4 ml), y la
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se
añadió agua a la misma, y los cristales precipitados se recogieron
mediante filtración. La purificación mediante cromatografía en
columna sobre gel de sílice (9:1 de cloroformo/metanol) proporcionó
una base libre de 1 i (365 mg, 100%), que se convirtió en un
clorhidrato.
C_{21}H_{20}F_{3}N_{3}O_{4} = 435.
Encontrado: 436 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
7-(acetoximetil)-5-amino-6,8-difluoro-2-[4-[[4-(dimetilamino)butiril]amino]-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona
(1 j).
A una solución de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-amino-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(500 mg, 1,32 moles) en dimetilformamida (15 ml) se añadieron
clorhidrato del ácido 4-dimetilaminobutírico (3,06
g, 16,9 mmoles) y clorhidrato de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida
(3,23 g, 16,9 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 2,5 horas. Se añadió agua a la misma, y la mezcla se
extrajo con acetato de etilo. La purificación mediante cromatografía
en columna sobre gel de sílice (9:1 de cloroformo/metanol)
proporcionó 1 j (386 mg, 60%).
C_{24}H_{24}F_{3}N_{3}O_{5} = 491.
Encontrado: 492 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-amino-6,8-difluoro-2-[4-[[4-(dimetilamino)butiril]amino]-3-fluorofenil]-7-(hidroximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 k).
A una suspensión de 1 j (363 mg, 0,739 mmoles) en
metanol (36 ml) se añadió 1 mol/l de hidróxido sódico (4 ml), y la
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se
añadió agua a la misma, y los cristales precipitados se recogieron
mediante filtración. La purificación mediante cromatografía en
columna sobre gel de sílice proporcionó una base libre de 1 k (299
mg, 69%), que se convirtió en un clorhidrato.
C_{22}H_{22}F_{3}N_{3}O_{4} = 449.
Encontrado: 450 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
5-(aminoacetamido)-2-(4-amino-3-fluorofenil)-6,8-difluoro-7-(hidroxime-
til)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 l).
til)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 l).
A una solución de
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-
(cloroacetamido)-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,16 g, 2,00 moles) en dimetilformamida (20 ml) se añadió azida
sódica (650 mg, 10,0 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 1 hora. Se añadió agua a la misma, y los cristales
precipitados se recogieron mediante filtración produciendo
7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-(azidoacetamido)-2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,01 g, 100%).
A una solución del compuesto anterior (877 mg,
1,49 mmoles) en tetrahidrofurano (30 ml) se añadieron formiato de
trietilamonio (1,2 ml, 9,1 mmoles) y
tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (172 mg, 0,15
mmoles) en atmósfera de argón, y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 50 minutos. Se añadió agua a la misma, y la mezcla
se extrajo con acetato de etilo. La purificación mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice (20:1 de
cloroformo/metanol) proporcionó
5-(azidoacetamido)-2-(4-amino-3-fluorofenil)-6,8-difluoro-7-(hidroximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona
(560 g, 90%).
A una solución del compuesto anterior (540 mg,
1,30 mmoles) en acetato de etilo (150 ml) y metanol (50 ml) se
añadió paladio sobre carbono (105, 250 ml), y la mezcla se agitó en
flujo de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2 horas. Después
el hidrógeno se reemplazó con nitrógeno, la mezcla se filtró a
través de un lecho de celita. El disolvente se evaporó a presión
reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna
sobre gel de sílice (9:1:1 de cloroformo/metanol:amoníaco)
proporcionando una base libre de 1 l (330 mg, 65%), que se convirtió
en clorhidrato.
C_{18}H_{14}F_{3}N_{3}O_{4} = 393.
Encontrado: 394 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
2-(4-amino-3-fluorofenil)-5-(dimetilamino)acetamida-6,8-difluoro-7-(hidro-
ximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 m).
ximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona, (1 m).
A una solución de
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-
(cloroacetamido)-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(2,12 g, 3,65 moles) en dimetilformamida (40 ml) se añadieron
clorhidrato de dimetilamina (1,49 g, 18,3 mmoles), y
diisopropiletilamina (3,2 ml, 18 mmoles), y la mezcla se agitó a
50ºC durante 2 horas. Se añadió agua a la misma, y la mezcla se
extrajo con acetato de etilo produciendo
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-(dimetilamino)acetamida-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(2,12 g, 99%).
A una solución del compuesto anterior (2,12 g,
3,60 mmoles) en tetrahidrofurano (50 ml) se añadieron formiato de
trietilamonio (2,4 ml, 18 mmoles) y
tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (419 mg, 0,36
mmoles) en atmósfera de argón, y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 1,5 horas. Se añadió agua a la misma, y la mezcla
se extrajo con acetato de etilo. La purificación mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice (20:1 de
cloroformo/metanol) proporcionó una base libre de 1 m (1,05 g, 69%)
que se convirtió en un clorhidrato.
C_{20}H_{18}F_{3}N_{3}O_{4} = 421.
Encontrado: 422 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
2-[4-amino-3-fluorofenil)-6,8-difluoro-5-[3-(dimetilamino)propionil]amino-7-(hidroximetil)-7-(hidroximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona,
(1 n).
A una solución de
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-
amino-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,00 g, 1,90 moles) en dimetilformamida (30 ml) se añadieron ácido
3-bromopropiónico (3,04 g, 19,9 mmoles), y
clorhidrato de
1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida
(3,80 g, 19,8 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente
durante 8 horas. Se añadió agua a la misma, y la mezcla se extrajo
con acetato de etilo produciendo
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-(3-
bromopropionil)amino]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,98 g).
A una solución del compuesto anterior (1,98 mg)
en dimetilformamida (20 ml) se añadieron clorhidrato de dimetilamina
(807 mg, 9,90 mmoles) y diisopropiletilamina (1,7 ml, 9,93 mmoles),
y la mezcla se agitó a 50ºC durante 7 horas. Se añadió agua a la
misma, y la mezcla se extrajo con acetato de etilo. La purificación
mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (20:1 de
cloroformo/metanol) proporcionó
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-[[3-(dimetilamino)propionil]amino]-6,8-
difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona.
A una solución del compuesto anterior (688 mg,
1,14 mmoles) en tetrahidrofurano (20 ml) se añadieron formiato de
trietilamonio (0,75 ml, 5,7 mmoles) y
tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0) (132 mg, 0,11
mmoles) en atmósfera de argón, y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 1,5 horas. Se añadió agua a la misma, y la mezcla
se extrajo con acetato de etilo. La purificación mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice proporcionó una base
libre de 1 n (74 mg, 15%) que se convirtió en un clorhidrato.
C_{21}H_{20}F_{3}N_{3}O_{4} = 435.
Encontrado: 436 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la actividad inhibidora de
crecimiento de tumores de los compuestos novedosos de aminoflavona
de la presente invención, específicamente la actividad demostrada
por
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
(compuesto 1 a en al tabla 1).
Como se ha indicado previamente, los compuestos
de la presente invención se ensayaron en al selección de la línea
celular 60 de NCI. La selección primaria de tumores humanos de la
línea celular 60 de NCI proporciona un medio mediante la que se
identifican fuentes naturales de compuestos. La selección de NCI se
diseño y se implementó durante 1985 - 1990 en al dirección,
escrutinio de cierre, y supervisión de varios grupos
internacionalmente comprendidos y renombrados extramurales (no NCI)
consultivos y revisados, que incluyen la división NCI de la junta de
tratamiento de cáncer de consejeros científicos, y Ad Hoc
comité de revisión de expertos de los mismos, la junta consultiva de
cáncer nacional, y el panel de cáncer de presidentes. Véase, Boyd,
en Anticancer Drug Development Guide: Preclinical Screening,
Clinical Trials, and Approval, Teicher, B. A., ed. Totowa, N.
J.: Humana Press, Inc., pp. 23 - 42 (1997). Aunque la selección de
NCI ha estado operacional solamente desde 1990, ha conducido ya al
descubrimiento, desarrollo, y uso clínico de nuevos fármacos
anticáncer significativos en pacientes de cáncer humano. Véase, por
ejemplo, Weinstein y col., Science, 275, 343 - 349 (1997);
Grever y Chabner, en: Cancer: Principles and Practice of
Oncology, edición 5ª, DeVita y col., eds., Philadelphia:
Lippincott - Raven, pp. 385 - 394 (1997).
La selección de NCI consta de un panel de 60
líneas de células tumorales humanas diferentes contra los que los
compuestos se ensayan durante un intervalo definido de
concentraciones para determinar el grado relativo de inhibición de
crecimiento o citotoxicidad contra cada línea celular. El diseño y
operación de la selección es tal que para cada compuestos ensayado,
tanto las sensibilidades absolutas y relativas de líneas celulares
individuales que comprenden la selección son suficientemente
reproducibles de manera que se genera un perfil característico o
"impresión digital" de respuesta celular. Los compuestos que
son activos en al selección de NCI muestran efectos pronunciados
inhibidores de crecimiento tumoral y/o citotoxicidad para las
diversas líneas celulares que comprenden el panel de la línea
celular 60. El grado de respuesta diferencial entre las líneas más y
menos sensibles típicamente pueden ser relativamente pequeños (por
ejemplo, 2 - 10 veces), u ocasionalmente tan grande como 3 - 4
órdenes de magnitud. Además, las líneas celulares pueden ser
ampliamente heterogéneas en respuesta proporcionando un compuesto
dado, o pueden ser comparativamente homogéneas, con solamente unas
relativamente pocas líneas que muestran sensibilidad mucho mayor o
menor que la media. Independientemente de la magnitud del
diferencial o el grado de heterogeneidad de respuesta del panel de
la línea celular, es la reproducibilidad de la "impresión
digital" de la respuesta que es importante para la información
útil contenida en ella.
La descripción detallada del ensayo de selección
se publican, por ejemplo, en Monks y col., J. Natl. Cancer
Inst.,
83 757 - 766 (1991); Skehan y col., J. Natl. Cancer. Inst., 82, 1107 - 1112 (1990); y Boyd y Paull, Drug Dev. Res., 34, 484 - 488 (1995). Las identidades, fuentes, derivación, características morfológicas, e inmunológicas, y procedimientos de mantenimiento de las líneas celulares que comprenden el panel de la línea celular 60 de NCI se han descrito en detalle, por ejemplo, en Boyd, en: Cancer: Principles and Practice of Oncology Updates, DeVita y col., eds., Philadelphia: Lippincott, pp. 1 - 12 (1989); Stinson y col., Anticancer Res., 12, 1034 - 1035 (1992).
83 757 - 766 (1991); Skehan y col., J. Natl. Cancer. Inst., 82, 1107 - 1112 (1990); y Boyd y Paull, Drug Dev. Res., 34, 484 - 488 (1995). Las identidades, fuentes, derivación, características morfológicas, e inmunológicas, y procedimientos de mantenimiento de las líneas celulares que comprenden el panel de la línea celular 60 de NCI se han descrito en detalle, por ejemplo, en Boyd, en: Cancer: Principles and Practice of Oncology Updates, DeVita y col., eds., Philadelphia: Lippincott, pp. 1 - 12 (1989); Stinson y col., Anticancer Res., 12, 1034 - 1035 (1992).
En el ensayo de selección, cada agente se ensaya
sobre un amplio intervalo de concentración contra cada línea celular
en el panel. Todas las líneas se inoculan en una serie de placas de
microvaloración de 96 pocillos el día cero, seguido de una
incubación de 24 horas en ausencia del compuesto de ensayo. Las
densidades de inoculación empleadas dependen de la línea celular
particular y sus características de crecimiento. Las densidades de
inoculación usadas son como las publicadas en Monks y col., J.
Natl. Cancer Inst., 83 757 – 766 (1991); y Boyd y Paull, Drug
Dev. Res., 34, 91 - 109 (1995). Los compuestos de ensayo se
evalúan a diluciones de cinco veces. Después de una incubación de 48
horas con el compuesto de ensayo, las células se ensayan mediante el
procedimiento de sulforhodamina B como se describe en Skehan y col.,
J. Natl. Cancer. Inst., 82, 1107 - 1112 (1990); Monks y
col., J. Natl. Cancer Inst., 83, 757 - 766 (1991); y
Rubinstein y col., J. Natl. Cancer Inst., 82, 1112 - 1118
(1990). Las densidades ópticas se miden sobre lectores de placa
automáticos, seguido de adquisición, procesamiento, almacenamiento,
y disponibilidad de datos computarizados para exposición y
análisis.
Cada ensayo exitoso de un compuesto genera 60
curvas dosis respuesta, que están impresas en el informe de datos de
selección como una serie de materiales compuestos que comprenden los
subpaneles de tipo tumoral. Los datos para cualquier línea (s)
celular (es) que no cumplen los criterios de control de calidad, o
de otra manera deficientes para cualquier línea (s) celular (es) no
ensayados exitosamente, se eliminan del análisis adicional y se
suprimen del informe de selección.
El significado y cálculo de parámetros de
respuesta, IG_{50}, TGI, y CL_{50}, y la construcción y uso de
"gráficos de la media" se resume brevemente como sigue. El
parámetro de inhibición de crecimiento del 50% (IG_{50}) es la
concentración del fármaco de ensayo en la que 100 x (T - T_{0}) /
(C - T_{0}) = 50 = PG ("porcentaje de crecimiento"). La
densidad óptica del pocillo de ensayo después de 48 horas de
exposición de fármaco es T; la densidad óptica en el momento cero es
T_{0}; y la densidad óptica control es C. La PG es un parámetro de
tipo T/C que puede tener valores entre +100 y -100. Mientras que la
IG_{50} se puede ver como un nivel inhibidor de crecimiento del
efecto, la TGI significa una inhibición de "crecimiento total"
o nivel citostático del efecto. La TGI es al concentración de
fármaco en la que 100 x (T - T_{0}) / (C - T_{0}) = 0 = PG. La
CL_{50} es la concentración letal, "muerte celular neta"
parámetro de o citotoxicidad. Es la concentración en la que 100 x
(T - T_{0}) / (C - T_{0}) = 50 = PG. La densidad óptica control
no se usa en el cálculo de CL_{50}. Para una descripción
detallada de los parámetros de respuesta y la construcción y uso de
gráficos de la media, véase Boyd y col.,, en: Citotoxic
Anticancer Drugs: Models and Concepts for Drugs Discovery and
Development, Valeriote y col., eds., Ámsterdam: Kluwer Academic
Publishers, pp. 11 – 34 (1992).
Un gráfico de la media es un patrón creado
mediante representación gráfica de los valores positivos y
negativos, denominados "deltas", generados a partir de un
conjunto de concentraciones IG_{50}, TGI, y CL_{50} obtenidos
para un compuesto dado ensayado contra cada línea celular en la NCI
en la selección in vitro. Los deltas se generan a partir de
losa datos de IG_{50}, TGI, y CL_{50} mediante un cálculo en
tres etapas. Por ejemplo, el valor de IG_{50} para cada línea
celular ensayada exitosamente contra un compuesto dado se convierte
en su valor de log_{10}G_{50}. El valor de log_{10}G_{50}
del panel de la media se obtiene promediando los valores de
log_{10}G_{50} individuales. Cada valor de log_{10}G_{50}
después se sustrae de la media del panel para crear el delta
correspondiente.
Para construir el gráfico medio, los deltas de
representan gráficamente horizontalmente en referencia a una línea
vertical que representa el valor de IG_{50} del panel de la media
calculado. Los deltas negativos se representan a la derecha de la
línea de referencia media, por lo tanto representando
proporcionalmente las líneas celulares más sensibles que la media
calculada. De manera recíproca, los deltas positivos de representan
gráficamente a la izquierda de la línea de referencia que representa
las líneas celulares menos sensibles para el agente dado. De este
modo, por ejemplo, una barra que proyecta 3 unidades a la derecha de
la línea de referencia vertical en un gráfico medio de IG_{50}
indica que la concentración de IG_{50} para la línea celular es
1000 veces menor que la concentración de IG_{50} promedio del
panel. Los gráficos de la media de TGI y CL_{50} se preparan e
interpretan de manera similar.
Se imprimen tres números adicionales en al base
de cada uno de los tres gráficos de la media respectivos. Estos
números son el MG - NID, el delta, y el intervalo. El MG - MID es la
IG_{50}, TGI y CL_{50} del panel de la media calculado. La delta
es el número de unidades del log_{10} mediante el que el delta de
la (s) línea (s) más sensible del panel difieren (difiere) del (de
los) delta (s) de la (s) línea (s) más sensible (s).
Los gráficos de la media representativos para
varios de los compuestos de la presente invención que muestran los
resultados de la selección se muestran en las figuras 1 a - e. Para
seleccionar los compuestos, las soluciones madre de los compuestos
se prepararon inicialmente en dimetilsulfóxido a 400 x las
concentraciones de ensayo más altas finales deseadas y se almacenan
a -70ºC hasta uso. Las concentraciones de de ensayo más altas
deseadas estudiadas en este ejemplo variaban entre 10^{-4} y
10^{-6} molar. En el momento de la selección, una alícuota de la
solución madre descongelada se diluyó con medio completo que
contenía 50 \mug/ml de gentamicina proporcionando una
concentración 2 x de la concentración más alta deseada. Unas
diluciones en serie cuatro, 10 veces se prepararon después
proporcionando un total de cinco concentraciones, que se extienden
sobre un intervalo de concentración de 4 - log_{10}. Alícuotas
de 100 \mul de estas diluciones intermedias se añadieron
inmediatamente a los pocillos de microvaloración apropiados, cada
uno conteniendo ya los números apropiados y tipos de células en 100
\mul de medio de cultivo, que dan como resultado las cinco
concentraciones finales deseadas.
Las 60 líneas celulares usadas, y las densidades
respectivas de inoculación, eran como se describió en Boyd y Paull,
Drug Dev. Res., 34, 91 - 109 (1995); Monks y col., J.
Natl. Cancer Inst., 83, 757 - 766 (1991). Después de las
adiciones de compuesto, las placas se incubaron durante 48 horas a
37ºC en una atmósfera de CO_{2} al 5%/aire y 100% de humedad.
Después, se fijaron in situ células adherentes (todas las
líneas excepto la leucemia) mediante adición moderada de ácido
trifluoroacético frío (50 \mul de 50% p/v) y se incubaron durante
60 minutos a 4ºC. Se desecharon los sobrenadantes, y las placas se
lavaron 5 veces con agua desionizada y se secaron al aire. Se añadió
solución de sulforhodamina B a cada placa, seguido de incubación
adicional durante 10m minutos a temperatura ambiente. El tinte no
unido en exceso se retiró después lavando 5 veces con ácido acético
al 1%, seguido de secado al aire. El tinte unido en cada pocillo se
solubilizó mediante al adición de 100 \mul de 10 mmoles/l de base
Tris no tamponado; a esto siguió una determinación de las densidades
ópticas sobre un lector de placas automáticas. Para suspensión de
cultivos celulares (las leucemias), el procedimiento era el mismo
excepto que al final del período de incubación de fármaco las
células sedimentadas se fijaron in situ en los fondos de los
pocillos de microvaloración mediante la adición cuidadosa de 50
\mul de ácido trifluoroacético al 80%. Los pocillos de control
apropiados se incluyeron en el formato de placa de ensayo para
permitir la sustracción de las densidades ópticas de fondo,
correcciones de blanco de fármaco, y una determinación de densidades
celulares en el momento 0 (el tiempo al que se añadieron los
compuestos).
Como es evidente de la figura 1 B, por ejemplo,
el compuesto 1 a demostró actividad inhibidora de crecimiento de
tumores contra varias líneas celulares de cáncer humano,
particularmente contra líneas celulares de cáncer de mama (por
ejemplo MCF7), de ovario (por ejemplo, OVCAR - 5), renal (por
ejemplo CAKI - 1), y de colon (por ejemplo, SW - 620).
Este ejemplo ilustra las características de
solubilidad deseables de loscompuestos de aminoflavona de la
presente invención. En la tabla 2 más adelante, la solubilidad en
agua de los compuestos 1 a - d de la tabla 1 se exponen a diferentes
pH con un tampón citrato o fosfato, como se ha indicado. La
solubilidad se determinó visualmente a una concentración fija de 5
mg/ml.
| Comp. | pH 3* | pH 5* | pH 7* |
| 1a | S | NFS | NFS |
| 1b | S | NFS | NFS |
| 1c | NFS | NFS | NFS |
| 1d | S | S | NFS |
| * Tampón citrato; ** tampón fosfato | |||
| S = completamente soluble; NFS = no totalmente soluble |
Los datos en al tabla 2 muestran que los
compuestos 1 a, b, y d eran totalmente solubles a pH 3. El compuesto
1 d era completamente soluble a pH 5. Aunque a niveles de superiores
de pH, la mayoría de los compuestos mostraron una solubilidad
reducida, permanecían más solubles en agua que algún otro
5,4'-diaminoflavonas, tales como
5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona.
Véase Akama y col., J. Med. Chem., 41, 2056 - 2067 (1998)
teniendo en cuanta que la solubilidad en agua de
5,4'-diamino-6,8,3'-trifluoroflavona
era menor que 0,2 \mug/ml).
Este ejemplo ilustra la preparación de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-(cloroacetamido)-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona.
A una solución de
7-(acetoximetil)-5-amino-2-[4-(amino-3-fluorofenil)-6,8-difluoro-4H-1-
benzopiran-4-ona (3,20 g) en
dimetilformamida (60 ml) se añadieron ácido monocloroacético (1,60
g) y clorhidrato de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(3,23 g), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 22
horas. Se añadió agua a la misma, y los cristales precipitados se
recogieron mediante filtración produciendo el producto final.
C_{20}H_{14}^{35}ClF_{3}N_{2}O_{5} =
454. Encontrado: 455 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-amino-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona.
A una solución de
5-amino-2-amino-2-(4-amino-3-fluorofenil)-6,8-difluoro-7-(hidroximetil)-4H-1-benzopiran-4-ona
(1,01 g) en piridina (30 ml) se añadieron cloroformiato de alilo
(3,2 ml) a 0ºC, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante
3 horas. Se añadió agua a la misma, y los cristales precipitados se
recogieron mediante filtración. La purificación mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice (cloroformo)
proporcionó el producto final.
C_{24}H_{19}F_{3}N_{2}O_{7} = 504.
Encontrado: 505 (M + H)^{+}.
Este ejemplo ilustra la preparación de
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-(cloroacetamido)-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona.
A una solución de
2-[4-(aliloxicarbonil)amino-3-fluorofenil]-7-[(aliloxicarbonil)oxi]metil-5-amino-6,8-difluoro-4H-1-benzopiran-4-ona
(2,02 g) en dimetilformamida (40 ml) se añadieron ácido
monocloroacético (1,90 ml) y clorhidrato de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
(3,84 g) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 8
horas. Se añadió agua a la misma, y los cristales precipitados se
recogieron mediante filtración. La purificación mediante
cromatografía en columna sobre gel de sílice (9:1 de
cloroformo/acetato de etilo) proporcionó el producto final.
C_{26}H_{20}^{35}ClF_{3}N_{2}O_{8} =
580. Encontrado: 581 (M + H)^{+}.
Todas las referencias citadas en esta memoria
descriptiva, incluyendo las patentes, solicitudes de patentes, y
publicaciones, se incorporan en esta memoria descriptiva como
referencia en su totalidad.
Aunque esta invención se ha descrito con énfasis
sobre las realizaciones preferidas, será obvio para los expertos en
al técnica que se pueden usar variaciones de las realizaciones
preferidas y que se propone que la invención se pueda practicar de
otra manera como se ha descrito específicamente en esta memoria
descriptiva. De acuerdo a lo anterior, esta invención incluye todas
las modificaciones abarcadas dentro del alcance de la invención como
se define mediante las siguientes reivindicaciones.
Claims (10)
1. Una aminoflavona que tiene la siguiente
fórmula
en la que cada R^{1} y R^{2}
es H, COOH_{2}-R^{7}, en el que R^{7} es
amino, alquilamino de cadena lineal o ramificada, o alquil o
dialquilamino, o un residuo \alpha-aminoácido,
con tal que al menos de uno de R^{1} y R^{2} sea distinto de
H,
y
en la que R^{3} es H, alquilo de cadena lineal
o ramificada, hidroxialquilo, alcanoiloxialquilo, alcanoiloxi,
alcoxi, o alcoxialquilo, o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo.
2. La aminoflavona de la reivindicación 1, en la
que cada uno de R^{1} y R^{2} es un residuo
\alpha-aminoácido, la estereoquímica de R^{1} y
R^{2} es L.
3. La aminoflavona de la reivindicación 1, en la
que el compuesto se selecciona entre el grupo constituido por
5-amino-6,8-difluoro-2-[3-fluoro-4-[(L-lisil)amino)]fenil]-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
5-amino-2-[4-[[2-amino-5-guanidinopentanoil]amino]-3-fluorofenil]-6,8-difluoro-7-metil-4H-1-benzopiran-4-ona,
6,8-difluoro-7-metil-5-(dime-
tilamino)acetamido-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona, y 5-amino-6,8-difluoro-7-metil-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona.
tilamino)acetamido-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona, y 5-amino-6,8-difluoro-7-metil-2-[4-(dimetilamino)acetamido-3-fluorofenil]-4H-1-benzopiran-4-ona.
4. Una composición que comprende una aminoflavona
según una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
5. La composición de la reivindicación 4, en la
que la composición además comprende al menos otro agente
anticáncer.
6. La composición según la reivindicación 4 ó 5
para inhibir el crecimiento de un tumor.
7. Uso de una aminoflavona según cualquiera de
las reivindicaciones 1 - 3 para la preparación de un medicamento
para inhibir el crecimiento de un tumor en un huésped.
8. El uso según la reivindicación 7, que
comprende además un vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. El uso según la reivindicación 7 u 8, en el
que se usa adicionalmente una cantidad inhibidora de crecimiento de
tumores de al menos otro agente anticáncer.
10. El uso según la reivindicación 7 u 8, en el
que dicho tumor se selecciona entre el grupo constituido por tumores
de mama, de ovario, y de riñón.
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