ES2240687T3 - Derivados de imidazolidina, su preparacion y su uso como agente atiinflamatorio. - Google Patents
Derivados de imidazolidina, su preparacion y su uso como agente atiinflamatorio.Info
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Abstract
Un compuesto de fórmula I, **(Fórmula)** en la que A es ciclopropilmetilo o isobutilo; E es -CO-R6, -CO-H o -CH2-O-R7; Z es oxígeno o azufre; R1 es hidrógeno o metilo; R2 es fenilo, piridilo o alquilo (C1-C4), donde el resto alquilo puede estar sustituido con uno o más átomos de flúor, y el resto fenilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes iguales o diferentes del grupo que consta de alquilo(C1-C4), alcoxi (C1-C4), metilendioxi, etilendioxi, halógeno, trifluorometilo y trifluorometoxi; R3 y R4 son metilo o trifluorometilo; R5 es hidrógeno o alquilo (C1-C4), donde el resto alquilo puede estar sustituido con uno o más átomos de flúor; R6 es hidroxilo, alcoxi (C1-C10), fenil-alcoxi(C1-C8), feniloxi, alquil(C1-C8)-carboniloxi-alcoxi(C1-C6), fenilcarboniloxi-alcoxi(C1-C6), fenil-alquil(C1-C6)-carboniloxi-alcoxi(C1-C6), alcoxi(C1-C8)-carboniloxi-alcoxi(C1-C6), feniloxi-carboniloxi-alcoxi(C1-C6), fenil-alcoxi(C1-C6)-carboniloxi-alcoxi(C1-C6), amino, mono(alquil(C1-C10))-amino o di (alquil(C1-C10))-amino; R7 es hidrógeno o alquilo (C1-C4); en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas en todas las proporciones, o sus sales fisiológicamente tolerables.
Description
Derivados de imidazolidina, su preparación y su
uso como agente antiinflamatorio.
La presente invención se refiere a nuevos
derivados de imidazolidina de fórmula I,
en la que A, E, Z, R^{1},
R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} tienen los significados
indicados a continuación. Los compuestos de fórmula I son valiosos
compuestos farmacéuticos activos, que son adecuados, por ejemplo,
para tratar enfermedades inflamatorias, por ejemplo artritis
reumatoide, o enfermedades alérgicas. Los compuestos de fórmula I
son inhibidores de la adhesión y migración de leucocitos y/o
antagonistas del receptor de adhesión VLA-4
perteneciente al grupo de las integrinas. Generalmente son adecuados
para tratar enfermedades que son causadas por un grado no deseado de
adhesión de leucocitos y/o migración de leucocitos, o están
asociadas con esto, o en las que juegan un papel las interacciones
célula-célula o célula-matriz que se
basan en interacciones de receptores VLA-4 con sus
ligandos. La invención además se refiere a procedimientos para
preparar los compuestos de fórmula I, a su uso y a preparaciones
farmacéuticas que contienen compuestos de fórmula
I.
Las integrinas son un grupo de receptores de
adhesión que juegan un papel importante en los procesos de unión
célula-célula y célula-matriz
extracelular. Tienen una estructura
\alpha\beta-heterodímera y presentan una amplia
distribución celular y una alta conservación evolutiva. Entre las
integrinas se incluyen, por ejemplo, el receptor de fibrinógeno en
plaquetas, que interacciona especialmente con la secuencia RGD del
fibrinógeno, o el receptor de vitronectina en osteoclastos, que
interacciona especialmente con la secuencia RGD de la vitronectina o
de la osteopontina. Las integrinas se dividen en tres grupos
principales, la subfamilia \beta2 que contiene las
LFA-1, Mac-1 y p150/95
representativas, que son responsables en particular de las
interacciones célula-célula del sistema inmunitario,
y las subfamilias \beta1 y \beta3, cuyos representantes
principalmente median la adhesión celular a componentes de la
matriz extracelular (Ruoslahti, Annu. Rev. Biochem. 1988, 57,
375). Las integrinas de la subfamilia \beta1, llamadas también
proteínas VLA (antígeno (de activación) muy tardío), incluyen al
menos seis receptores que interaccionan específicamente con
fibronectina, colágeno y/o laminina como ligandos. Dentro de la
familia de VLA, la integrina VLA-4
(\alpha4\beta1) es atípica en cuanto que está principalmente
restringida a células linfoides y mieloides, y es responsable en
éstas de las interacciones célula-célula con un
gran número de células distintas. VLA-4 media, por
ejemplo, las interacciones de linfocitos T y B con el fragmento de
unión de la heparina II de la fibronectina (FN) del plasma humano.
La unión de VLA-4 con el fragmento de unión de la
heparina II de la fibronectina del plasma se basa especialmente en
una interacción con una secuencia LDVP. En contraste con el
receptor de fibrinógeno o vitronectina, VLA-4 no es
una integrina de unión a RGD típica (Kilger y Holzmann, J. Mol.
Meth. 1995, 73, 347).
Los leucocitos que circulan en la sangre
normalmente presentan sólo una baja afinidad por las células
endoteliales vasculares que revisten los vasos sanguíneos. Las
citoquinas que son liberadas de tejido inflamado producen la
activación de las células endoteliales y por lo tanto la expresión
de un gran número de antígenos de superficie celular. Entre estos
se incluyen, por ejemplo, las moléculas de adhesión
ELAM-1 (molécula de adhesión celular
endotelial-1; también denominada
E-selectina) que entre otros, se unen a
neutrófilos, ICAM-1 (molécula de adhesión
intercelular-1), que interacciona con
LFA-1 (antígeno asociado a la función de leucocito
1) en leucocitos, y VCAM-1 (molécula de adhesión
celular vascular-1), que se une a diferentes
leucocitos, entre otros linfocitos (Osborn et al.,
Cell 1989, 59, 1203). VCAM-1, como
ICAM-1, es un miembro de la superfamilia de los
genes inmunoglobulina. VCAM-1 (primero conocido como
INCAM-110) se identificó como una molécula de
adhesión que es inducida en células endoteliales por citoquinas
inflamatorias tales como TNF e IL-1, y
lipopolisacáridos (LPS). Elices et al. (Cell 1990, 60,
577) mostraron que VLA-4 y VCAM-1
forman una pareja receptor-ligando que media la
unión de linfocitos al endotelio activado. La unión de
VCAM-1 a VLA-4 no se produce debido
a una interacción de VLA-4 con una secuencia RGD,
VCAM-1 no contiene dicha secuencia (Bergelson et
al., Current Biology 1995, 5, 615). Sin embargo,
VLA-4 se encuentra también en otros leucocitos, y
la adhesión de leucocitos distintos de los linfocitos, también es
mediada por el mecanismo de adhesión
VCAM-1/VLA-4. Por lo tanto
VLA-4 representa un ejemplo individual de un
receptor integrina \beta-1 que, mediante los
ligandos VCAM-1 y fibronectina, juega un papel
importante tanto en interacciones célula-célula como
en interacciones célula-matriz extracelular.
Las moléculas de adhesión inducidas por
citoquinas juegan un papel importante en el reclutamiento de
leucocitos en regiones del tejido extravascular. Los leucocitos son
reclutados en las regiones del tejido inflamatorio por moléculas de
adhesión celular que son expresadas en la superficie de células
endoteliales y sirven como ligandos para las proteínas de
superficie celular del leucocito o complejos de proteína
(receptores) (los términos ligando y receptor también se pueden usar
viceversa). Los leucocitos de la sangre se deben adherir primero a
las células endoteliales antes de que puedan migrar a la sinovia.
Puesto que VCAM-1 se une a células que llevan la
integrina VLA-4 (\alpha4\beta1), tales como
eosinófilos, linfocitos T y B, monocitos o neutrófilos, ésta y el
mecanismo VCAM-1/VLA-4 tienen la
función de reclutar células de este tipo de la corriente sanguínea
en zonas de focos de infección o inflamación (Elices et al.,
Cell 1990, 60, 577; Osborn, Cell 1990, 62, 3; Issekutz
et al., J. Exp. Med. 1996, 183, 2175).
El mecanismo de adhesión
VCAM-1/VLA-4 se ha conectado con una
serie de procesos fisiológicos y patológicos. Aparte de inducida por
citoquina en el endotelio, VCAM-1 es expresada
adicionalmente, entre otros, en las siguientes células: mioblastos,
células dendríticas linfoides y macrófagos de tejidos, sinovia
reumatoide, células neurológicas estimuladas por citoquina, células
epiteliales parietales de la cápsula de Bowman, el epitelio tubular
renal, tejido inflamado durante el rechazo en el trasplante de
corazón y riñón, y por tejido intestinal en injerto frente a
enfermedades huésped. También se encuentra que
VCAM-1 es expresada en aquellas zonas de tejido del
endotelio arterial que corresponden a placas ateroscleróticas
tempranas de un modelo de conejo. Además, VCAM-1 es
expresada en células dendríticas foliculares de nódulos linfáticos
humanos y se encuentra en células del estroma de la médula ósea,
por ejemplo en el ratón. El último descubrimiento apunta a una
función de VCAM-1 en el desarrollo de células B.
Aparte de en células de origen hematopoyético, VLA-4
también se encuentra, por ejemplo, en líneas celulares de melanoma,
y el mecanismo de adhesión
VCAM-1/VLA-4 está conectado con la
metástasis de dichos tumores (Rice et al., Science
1989, 246, 1303).
La forma principal en la que
VCAM-1 se produce in vivo en células
endoteliales y que es la forma dominante in vivo, se denomina
VCAM-7D y lleva siete dominios de inmunoglobulina.
Los dominios 4, 5 y 6, son similares en sus secuencias de
aminoácidos a los dominios 1, 2 y 3. En una forma adicional que
consta de seis dominios, denominada aquí VCAM-6D, el
cuarto dominio es eliminado por corte y empalme alternativo.
VCAM-6D también se puede unir a células que expresan
VLA-4.
Se encuentran detalles adicionales relacionados
con VLA-4, VCAM-1, integrinas y
proteínas de adhesión, por ejemplo, en los artículos de Kilger y
Holzmann, J. Mol. Meth. 1995, 73, 347; Elices, Cell
Adhesion in Human Disease, Wiley, Chichester 1995, p. 79;
Kuijpers, Springer Semin. Immunopathol. 1995, 16, 379.
Debido al papel del mecanismo
VCAM-1/VLA-4 en procesos de adhesión
celular que son importantes, por ejemplo, en infecciones,
inflamación o aterosclerosis, se ha intentado controlar trastornos
mediante intervenciones en estos procesos de adhesión, en
particular, por ejemplo, inflamaciones (Osborn et al.,
Cell 1989, 59, 1203). Un método para hacer esto, es usar
anticuerpos monoclonales que son dirigidos contra
VLA-4. Se conocen anticuerpos monoclonales (ACm) de
este tipo, que como antagonistas de VLA-4 bloquean
la interacción entre VCAM-1 y VLA-4.
Así, por ejemplo, el ACm anti-VLA-4
HP2/1 y HP1/3 inhibe la unión de células Ramos que expresan
VLA-4 (células tipo células B) a células
endoteliales del cordón umbilical humano y a células COS
transfectadas con VCAM-1. Igualmente, el ACm
anti-VCAM-1 inhibe la adhesión de
células Ramos, células Jurkat (células tipo células T) y células
HL60 (células tipo granulocito) a células COS transfectadas con
construcciones genéticas que hacen que se expresen
VCAM-6D y VCAM-7D. Los datos in
vitro con anticuerpos que son dirigidos contra la subunidad
\alpha4 de VLA-4, muestran que se bloquea la
adhesión de linfocitos a las células endoteliales sinoviales, una
adhesión que juega un papel en la artritis reumatoide (van
Dinther-Janssen et al., J. Immunol.
1991, 147, 4207).
Los experimentos in vivo han mostrado que
la encefalomielitis autoinmune experimental se puede inhibir con
ACm anti-\alpha4. La migración de leucocitos a un
foco inflamatorio es bloqueada igualmente por un anticuerpo
monoclonal contra la cadena \alpha4 de VLA-4.
También se ha investigado la influencia del mecanismo de adhesión
dependiente de VLA-4 usando anticuerpos en un modelo
de asma, con el fin de investigar el papel de VLA-4
en el reclutamiento de leucocitos en tejido pulmonar inflamado
(documento WO-A-93/13798). La
administración de anticuerpos
anti-VLA-4 inhibió la reacción de
fase tardía y la hiperreacción de la vía aérea en ovejas alérgicas.
La importancia de VLA-4 como diana para tratar el
asma se discute con detalle en Metzger, Springer Semin.
Immunopthol. 1995, 16, 467.
También se investigó el mecanismo de adhesión
celular dependiente de VLA-4 en un modelo de primate
de enfermedad inflamatoria del intestino (EII). En este modelo, que
corresponde a la colitis ulcerativa en el hombre, la administración
de anticuerpos anti-\alpha4 dio como resultado una
reducción significativa de la inflamación aguda.
Además, fue posible mostrar que la adhesión
celular dependiente de VLA-4 juega un papel en los
siguientes estados clínicos, incluyendo los siguientes procesos
inflamatorios crónicos: artritis reumatoide (Cronstein and Weismann,
Arhtritis Rheum. 1993, 36, 147; Elices et al., J.
Clin. Invest. 1994, 93, 405), diabetes mellitus (Yang et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 10494), lupus
eritematoso sistémico (Takeuchi et al., J. Clin.
Invest. 1993, 92, 3008), alergias de tipo retardado (alergia de
tipo IV) (Elices et al., Clin. Exp. Rheumatol. 1993,
11, S77), esclerosis múltiple (Yednock et al., Nature
1992, 356, 63), malaria (Ockenhouse et al., J. Exp.
Med. 1992, 176, 1183), aterosclerosis (O'Brien et al.,
J. Clin. Invest. 1993, 92, 945; Shih et al., Circ.
Res. 1999, 84, 345), trasplante (Isobe et al.,
Transplatation Proceedings 1994, 26, 867), diferentes
tumores malignos, por ejemplo melanoma (Renkonen et al.,
Am. J. Pathol. 1992, 140, 763), linfoma (Freedman et
al., Blood 1992, 79, 206) y otros (Albelda et
al., J. Cell Biol. 1991, 114, 1059).
La interacción de VLA-4 con
VCAM-1 y fibronectina está conectada con algunos
procesos fisiopatológicos en enfermedades cardiovasculares. En un
sistema de célula in vitro, los neutrófilos infiltrados
inhiben la contracción celular (inotropía negativa) de
cardiomiocitos en 35%. Se pudo inhibir esta acción inotrópica
negativa de los neutrófilos con un anticuerpo
anti-\alpha4, pero no con un anticuerpo
anti-CD18 (Poon et al., Circ. Res.
1999, 84, 1245). Se mostró la importancia de VLA-4
en la patogénesis de la aterosclerosis en un modelo de ratón de
aterosclerosis. Por lo tanto, el péptido CS-1, que
se dirige contra el sitio de unión de VLA-4 de la
fibronectina, inhibe el reclutamiento de leucocitos y la acumulación
de grasa en la aorta, y por lo tanto la formación de placas
ateroscleróticas en ratones knockout receptores LDL alimentados
aterogénicamente (Shih et al., Circ. Res. 1999, 84,
345). Usando el mismo péptido CS-1, se pudo además
mostrar en un modelo de trasplante de corazón heterotópico en el
conejo, que la formación de una vasculopatía de trasplante puede
disminuir significativamente por bloqueo de la interacción de
VLA-4 y fibronectina (Molossi et al., J.
Clin. Invest. 1995, 95, 2601).
Por lo tanto, el bloqueo de VLA-4
con antagonistas adecuados ofrece posibilidades terapéuticas
eficaces para tratar, por ejemplo, en particular diferentes estados
inflamatorios incluyendo asma y EII. Como ya se ha expuesto, la
particular importancia de los antagonistas de VLA-4
para tratar la artritis reumatoide resulta aquí del hecho de que
los leucocitos de la sangre se deben adherir primero a células
endoteliales antes de que puedan migrar a la sinovia, y que el
receptor VLA-4 juega un papel en esta adhesión. El
hecho de que VCAM-1 es inducido en células
endoteliales por agentes inflamatorios (Osborn, Cell 1990,
62, 3; Stoolman, Cell 1989, 56, 907), y el reclutamiento de
diferentes leucocitos en zonas de infección y focos inflamatorios
ya se ha discutido antes. Aquí, las células T se adhieren al
endotelio activado principalmente por los mecanismos de adhesión
LFA-1/ICAM-1 y
VLA-4/VCAM-1 (Springer, Cell
1994, 76, 301). En las mayoría de las células T sinoviales, la
capacidad de unión de VLA-4 con
VCAM-1 aumenta en la artritis reumatoide (Postigo
et al., J. Clin. Invest. 1992, 89, 1445). Además, se
ha observado una mayor adhesión de las células T sinoviales a la
fibronectina (Laffon et al., J. Clin. Invest. 1991,
88, 546; Morales-Ducret et al., J.
Immunol. 1992, 149, 1424). Así, VLA-4 es
sobrerregulado tanto con respecto a su expresión como con respecto
a su función en los linfocitos T de la membrana sinovial reumatoide.
El bloqueo de la unión de VLA-4 a sus ligando
fisiológicos VCAM-1 y fibronectina hace posible una
prevención eficaz o alivio de los procesos inflamatorios
articulares. Esto también se confirma con experimentos con el
anticuerpo HP2/1 en ratas Lewis con artritis adyuvante, en las que
se observó una prevención eficaz de la enfermedad (Barbadillo et
al., Springer Semin. Immunopathol. 1995, 16, 427). Los
peptidomiméticos de CS-1 que contienen una unidad de
ácido aspártico o uno de sus derivados en la molécula, y que
inhiben la unión de VLA-4 a la secuencia
CS-1 de la proteína de matriz fibronectina, se
describen en el documento
WO-A-00/02903. Por lo tanto,
VLA-4 es una molécula diana terapéutica
importante.
Los anticuerpos de VLA-4 antes
mencionados y el uso de anticuerpos como antagonistas de
VLA-4 se describe en las solicitudes de patente
WO-A-93/13798,
WO-A-93/15764,
WO-A-94/16094,
WO-A-94/17828 y
WO-A-95/19790. Las solicitudes de
patente WO-A-94/15958,
WO-A-95/15973,
WO-A-96/00581,
WO-A-96/06108 y
WO-A-96/20216 describen compuestos
peptídicos como antagonistas de VLA-4. Sin embargo,
el uso de anticuerpos y compuestos peptídicos como productos
farmacéuticos está aquejado de desventajas, por ejemplo, carece de
disponibilidad oral, fácil degradabilidad o acción inmunogénica en
administración a largo plazo, y por lo tanto son necesarios
antagonistas de VLA-4 que tengan un perfil de
propiedades favorable para usar en la terapia y profilaxis de
diferentes estados de enfermedad.
Los documentos
WO-A-95/14008,
WO-A-93/18057,
US-A-5.658.935,
US-A-5.686.421,
US-A-5.389.614,
US-A-5.397.796,
US-A-5.424.293 y
US-A-5.554.594, describen anillos de
heterociclo de 5 miembros sustituidos que tienen una función amino,
amidino o guanidino en el extremo N-terminal de la
molécula, y que muestran acciones de inhibición de agregación de
plaquetas. El documento EP-A-796855
describe otros heterociclos que son inhibidores de la resorción
ósea. Los documentos EP-A-842943,
EP-A-842945 y
EP-A-842944, describen que los
compuestos de estas series y compuestos adicionales también inhiben
sorprendentemente la adhesión de leucocitos y son antagonistas de
VLA-4.
Los documentos
EP-A-903353,
EP-A-905139,
EP-A-918059,
WO-99/23063,
WO-A-99/24398,
WO-A-99/54321 y
WO-A-99/60015, describen compuestos
adicionales que inhiben la adhesión de leucocitos y son antagonistas
de VLA-4. Sin embargo, las propiedades de estos
compuestos, todavía no son satisfactorias en diferentes sentidos, y
son necesarios compuestos que tengan un perfil de propiedades
mejorado. El documento EP-A-918.059
menciona, entre otros, derivados de imidazolidina en los que el
anillo de imidazolidina está unido por su posición 1 al átomo de
carbono de la posición 2 de una unidad
2-(cicloalquilalquil)acetilamino o una unidad
2-isobutilacetilamino. Sin embargo, no se describen
específicamente los derivados de imidazolidina de fórmula I de la
presente invención, que se distinguen por su ventajoso perfil de
propiedades y en particular por su potencia marcadamente mayor.
La presente invención se refiere a compuestos de
fórmula I,
en la
que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -CO-R^{6},
-CO-H o
-CH_{2}-O-R^{7};
Z es oxígeno o azufre;
R^{1} es hidrógeno o metilo;
R^{2} es fenilo, piridilo o alquilo
(C_{1}-C_{4}), donde el resto alquilo puede
estar sustituido con uno o más átomos de flúor, y el resto fenilo
puede estar sustituido con uno o más sustituyentes idénticos o
diferentes del grupo que consta de alquilo
(C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}), metilendioxi, etilendioxi,
halógeno, trifluorometilo y trifluorometoxi;
R^{3} y R^{4} son metilo o
trifluorometilo;
R^{5} es hidrógeno o alquilo
(C_{1}-C_{4}), donde el resto alquilo puede
estar sustituido con uno o más átomos de flúor;
R^{6} es hidroxilo, alcoxi
(C_{1}-C_{10}),
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{8}),
feniloxi,
alquil(C_{1}-C_{8})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
fenilcarboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
fenil-alquil(C_{1}-C_{6})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
alcoxi(C_{1}-C_{8})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
feniloxi-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{6})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
amino,
mono(alquil(C_{1}-C_{10}))-amino
o
di(alquil(C_{1}-C_{10}))-amino;
R^{7} es hidrógeno o alquilo
(C_{1}-C_{4});
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, y sus sales fisiológicamente
tolerables.
Los restos alquilo pueden ser de cadena lineal o
ramificada. Esto también se aplica si llevan sustituyentes o están
como sustituyentes en otros restos, por ejemplo, en restos
fluoroalquilo, restos alcoxi o restos alcoxicarbonilo. Ejemplos de
restos alquilo son metilo, etilo, n-propilo,
isopropilo (= 1-metiletilo = iC_{3}H_{7}),
n-butilo, isobutilo (=
2-metilpropilo), sec-butilo (=
1-metilpropilo), terc-butilo (=
1,1-dimetiletilo), n-pentilo,
isopentilo, terc-pentilo, neopentilo,
n-hexilo, 3-metilpentilo, isohexilo,
neohexilo, n-heptilo,
2,3,5-trimetilhexilo, n-octilo,
n-nonilo, n-decilo. Los restos
alquilo preferidos son metilo, etilo, n-propilo,
isopropilo, n-butilo, isobutilo,
sec-butilo, terc-butilo. En los
restos alquilo, uno o más, por ejemplo 1, 2, 3, 4 ó 5 átomos de
hidrógeno se pueden sustituir por átomos de flúor. Ejemplos de
estos restos fluoroalquilo son trifluorometilo,
2,2,2-trifluoroetilo, pentafluoroetilo,
heptafluoroisopropilo. Los restos alquilo sustituidos, por ejemplo
restos fenilalquilo o restos fluoroalquilo, pueden estar
sustituidos en cualesquiera posiciones deseadas.
Los restos fenilo pueden no estar sustituidos o
estar mono o polisustituidos, por ejemplo, mono- di-, tri-, tetra-
o pentasustituidos, con sustituyentes idénticos o diferentes. Si un
resto fenilo está sustituido, preferiblemente lleva uno o dos
sustituyentes iguales o diferentes. Esto también se aplica a restos
fenilo sustituidos en grupos tales como fenilalquilo,
fenilcarbonilo, etc. Restos fenilalquilo son, por ejemplo, bencilo,
1-feniletilo o 2-feniletilo, en
particular bencilo, todos los cuales también pueden estar
sustituidos.
En restos fenilo monosustituidos, el sustituyente
puede estar situado en la posición 2, la posición 3 o la posición
4. El fenilo disustituido puede estar sustituido en la posición
2,3, posición 2,4, posición 2,5, posición 2,6, posición 3,4 o
posición 3,5. En restos fenilo trisustituidos, los sustituyentes
pueden estar situados en la posición 2,3,4, posición 2,3,5,
posición 2,4,5, posición 2,4,6, posición 2,3,6 o posición 3,4,5. Si
un resto fenilo lleva sustituyentes del grupo que consta de
metilendioxi (-O-CH_{2}-O-) y
etilendioxi
(-O-CH_{2}-CH_{2}-O-),
preferiblemente lleva sólo un sustituyente de este grupo (si se
desea además de otros sustituyentes).
Ejemplos de restos fenilo sustituidos que pueden
representar R^{2} son 2-metilfenilo,
3-metilfenilo, 4-metilfenilo,
2,3-dimetilfenilo,
2,4-dimetilfenilo,
2,5-dimetilfenilo,
2,6-dimetilfenilo,
3,4-dimetilfenilo,
3,5-dimetilfenilo,
2,4,5-trimetilfenilo,
2,4,6-trimetilfenilo,
3,4,5-trimetilfenilo,
2-(n-butil)fenilo,
3-(n-butil)fenilo,
4-(n-butil)fenilo,
2-isobutilfenilo, 3-isobutilfenilo,
4-isobutilfenilo,
3-terc-butilfenilo,
4-terc-butilfenilo,
2-metoxifenilo, 3-metoxifenilo,
4-metoxifenilo, 2,3-dimetoxifenilo,
2,4-dimetoxifenilo,
2,5-dimetoxifenilo,
2,6-dimetoxifenilo,
3,4-dimetoxifenilo,
3,5-dimetoxifenilo,
2,4,5-trimetoxifenilo,
2,4,6-trimetoxifenilo,
3,4,5-trimetoxifenilo,
2-(n-butoxi)fenilo,
3-(n-butoxi)fenilo,
4-(n-butoxi)fenilo,
2-isobutoxifenilo,
3-isobutoxifenilo,
4-isobutoxifenilo,
2-terc-butoxifenilo,
3-terc-butoxifenilo,
4-terc-butoxifenilo,
2,3-metilenedioxifenilo,
3,4-metilenedioxifenilo,
2,3-etilenedioxifenilo,
3,4-etilenedioxifenilo,
2-fluorofenilo, 3-fluorofenilo,
4-fluorofenilo, 2,3-difluorofenilo,
2,4-difluorofenilo,
2,5-difluorofenilo,
2,6-difluorofenilo,
3,4-difluorofenilo,
3,5-difluorofenilo,
2,4,5-trifluorofenilo,
2,4,6-trifluorofenilo,
3,4,5-trifluorofenilo,
2,3,5,6-tetrafluorofenilo,
2,3,4,5,6-pentafluorofenilo,
2-clorofenilo, 3-clorofenilo,
4-clorofenilo, 2,3-diclorofenilo,
2,4-diclorofenilo,
2,5-diclorofenilo,
2,6-diclorofenilo,
3,4-diclorofenilo,
3,5-diclorofenilo, 2-bromofenilo,
3-bromofenilo, 4-bromofenilo,
3-yodofenilo, 4-yodofenilo,
2-trifluorometilfenilo,
3-trifluorometilfenilo,
4-trifluorometilfenilo,
3,4-bis-(trifluorometil)fenilo,
3,5-bis(trifluorometil)fenilo,
2-trifluorometoxifenilo,
3-trifluorometoxifenilo,
4-trifluorometoxifenilo, etc. Sin embargo, en restos
fenilo sustituidos, puede haber sustituyentes diferentes en
cualquier combinación deseada, tal como por ejemplo, en retos
3-metoxi-4-metilfenilo,
4-fluoro-3-metoxifenilo,
3-fluoro-4-metoxifenilo,
3,5-difluoro-4-metoxifenilo,
3-fluoro-4,5-metilendioxifenilo,
3-fluoro-4,5-etilendioxifenilo,
2-cloro-3-metilfenilo,
3-cloro-4-metilfenilo,
3-cloro-4-fluorofenilo,
etc.
Halógeno es flúor, cloro, bromo o yodo,
preferiblemente flúor o cloro.
Piridilo es 2-piridilo,
3-piridilo o 4-piridilo. En los
restos piridilo, el átomo de nitrógeno también puede estar oxidado,
y el correspondiente compuesto de fórmula I puede estar presente
como un N-óxido de piridina, que está igualmente incluido en la
presente invención.
Las sales fisiológicamente tolerables de los
compuestos de fórmula I, son en particular sales no tóxicas o
farmacéuticamente utilizables. Los compuestos de fórmula I que
contienen grupos ácido, por ejemplo un grupo ácido carboxílico que
representa el grupo E, pueden estar presentes, por ejemplo, como
sales de metal alcalino o sales de metal
alcalino-térreo, por ejemplo sales de sodio, sales
de potasio, sales de magnesio y sales de calcio, o como sales de
amonio, tal como por ejemplo, sales con iones amonio cuaternarios
fisiológicamente tolerables y sales de adición de ácido con
amoniaco y aminas orgánicas fisiológicamente tolerables, tales como
por ejemplo, metilamina, etilamina, trietilamina,
2-hidroxietilamina,
tris(2-hidroxietil)amina,
\alpha,\alpha,\alpha-tris(hidroximetil)metilamina
(trometamina) o aminoácidos, en particular aminoácidos básicos. Las
sales de un compuesto ácido de fórmula I con una amina orgánica
pueden contener los dos componentes en una relación 1:1 o
aproximadamente 1:1 o en otra relación, por ejemplo, en una relación
de aproximadamente 1:0,5 a aproximadamente 1:4 (1 molécula de
fórmula I por de 0,5 a 4 moléculas de la amina), en particular en
una relación de aproximadamente 1:0,5 a aproximadamente 1:2 (1
molécula de fórmula I por de 0,5 a 2 moléculas de la amina).
Los compuestos de fórmula I que contienen grupos
básicos, por ejemplo un grupo piridilo, pueden estar presentes como
sales de adición de ácido, por ejemplo como sales con ácidos
inorgánicos tales como por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido
sulfúrico o ácido fosfórico, o como sales con ácidos carboxílicos
orgánicos o ácidos sulfónicos, tales como por ejemplo, ácido
acético, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido maleico, ácido
fumárico, ácido tartárico, ácido metanosulfónico o ácido
p-toluensulfónico. Los compuestos que contienen
tanto grupos ácidos como grupos básicos, también pueden estar
presentes en forma de sales internas, iones híbridos o betaínas, que
están igualmente incluidos en la presente invención.
Las sales se pueden obtener de los compuestos de
fórmula I por procedimientos habituales conocidos por los expertos
en la técnica, por ejemplo, por combinación con un ácido o base
orgánico o inorgánico en un disolvente o diluyente, o a partir de
otras sales por intercambio de anión o de catión.
Los compuestos de fórmula I pueden estar
presentes en formas estereoisómeras. Con respecto a cada centro
asimétrico en los compuestos de fórmula I, independientemente de
cualquier otro centro asimétrico, pueden estar presentes con la
configuración S o la configuración R o mezclas R/S. Por lo tanto, el
átomo de carbono asimétrico al cual está unido el resto R^{2}
puede tener la configuración R o configuración S, o el compuesto de
fórmula I puede estar presente como una mezcla R/S con respecto a
este átomo de carbono. Igualmente, el átomo de carbono asimétrico al
cual están unidos el grupo A y el anillo de imidazolidina puede
tener la configuración R o configuración S, o el compuesto de
fórmula I puede estar presente como una mezcla R/S con respecto a
este átomo de carbono. Igualmente todos los demás átomos de carbono
asimétricos pueden tener la configuración R o la configuración S, o
el compuesto de fórmula I puede estar presente como una mezcla R/S
con respecto a cada uno de estos átomos de carbono. En las mezclas
R/S los estereoisómeros individuales pueden estar presentes en
cualquier proporción incluyendo una proporción 1:1.
La invención incluye todos los posibles
estereoisómeros de los compuestos de fórmula I, por ejemplo
enantiómeros puros o en buena parte puros, y diastereoisómeros
puros o en buena parte puros, y mezclas de dos o más formas
estereoisómeras, por ejemplo mezclas de enantiómeros y/o
diastereoisómeros, en todas las proporciones. Por lo tanto, la
invención se refiere a enantiómeros en forma enantiómera pura,
tanto como antípodas levorrotatorios como dextrorrotatorios, en
forma de racematos y en forma de mezclas de dos enantiómeros en
todas las proporciones. Igualmente la invención se refiere a
distereoisómeros en forma diastereoisómera pura y en forma de
mezclas en todas las relaciones. Ejemplos de estereoisómeros
individuales que están comprendidos en la invención, son los
compuestos de fórmula Ia, Ib, Ic y Id.
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La preparación de estereoisómeros individuales,
si conviene, se puede llevar a cabo usando sustancias iniciales
estereoquímicamente uniformes en la síntesis, por síntesis
estereoselectiva o por separación de una mezcla de acuerdo con los
métodos habituales, por ejemplo, por cromatografía o cristalización,
y en el caso de enantiómeros, por ejemplo, por cromatografía en
fases quirales. Si es adecuado, se puede llevar a cabo la formación
de un derivado antes de la separación de estereoisómeros. La
separación de una mezcla de estereoisómeros se puede llevar a cabo
en la etapa de los compuestos de fórmula I o en la etapa de las
sustancias iniciales o de un producto intermedio en el transcurso
de la síntesis.
Los compuestos de fórmula I de acuerdo con la
invención, pueden contener átomos de hidrógeno móviles, es decir,
pueden estar presentes en diferentes formas tautómeras. La presente
invención comprende todos los tautómeros de los compuestos de
fórmula I. La presente invención también comprende solvatos y
compuestos de adición o aductos de compuestos de fórmula I, por
ejemplo, aductos con agua, es decir hidratos, o aductos con
alcoholes o aminas. La invención además comprende derivados de
compuestos de fórmula I, por ejemplo, ésteres, amidas, profármacos y
otros derivados fisiológicamente tolerables, y metabolitos activos
de los compuestos de fórmula I. La invención, en particular también
se refiere a profármacos de los compuestos de fórmula I, que in
vitro no son necesariamente farmacológicamente activos, pero
que in vivo, en condiciones fisiológicas, se convierten en
compuestos activos de fórmula I. Los expertos en la técnica conocen
profármacos adecuados para los compuestos de fórmula I, es decir
derivados químicamente modificados de los compuestos de fórmula I
que tienen propiedades mejoradas de una forma deseada. Se encuentra
información más detallada en relación a los profármacos, por
ejemplo, en Fleisher et al., Advanced Drug Delivery
Reviews 19 (1996) 115; Design of Prodrugs, H. Bundgaard,
Ed., Elsevier, 1985; H, Bundgaard, Drugs of the Future 16
(1991) 443. Profármacos adecuados para los compuestos de fórmula I,
son especialmente profármacos éster, profármacos amida, profármacos
aldehído y profármacos alcohol de grupos ácido carboxílico, por
ejemplo de un grupo ácido carboxílico que representa el grupo E.
Por lo tanto, también los compuestos de fórmula I en los que el
grupo E es hidroximetilo, alcoximetilo o formilo, y que presentan
antagonismo de VLA-4 in vivo, son
profármacos de los compuestos de fórmula I en los que el grupo E es
hidroxicarbonilo. Ejemplos de profármacos éster y profármacos amida
que se puede mencionar son ésteres de alquilo
(C_{1}-C_{4}) tales como ésteres de metilo,
ésteres de etilo, ésteres de isopropilo, ésteres de isobutilo,
ésteres de alquilo sustituido tales como ésteres de hidroxialquilo,
ésteres de aciloxialquilo, ésteres de aminoalquilo, ésteres de
acilaminoalquilo, ésteres de dialquilaminoalquilo, amidas no
sustituidas o
N-alquil(C_{1}-C_{4})-amidas
tales como metilamidas o etilamidas.
Entre los ejemplos de compuestos de fórmula I de
acuerdo con la invención que se pueden mencionar, están los
siguientes compuestos de fórmulas Ie y If, que tienen la
configuración S en el átomo de carbono que lleva el grupo A, y
tienen la configuración S en el átomo de carbono que lleva el grupo
R^{2}, si R^{2} es fenilo o piridilo, y tienen la configuración
R en el átomo de carbono que lleva el grupo R^{2}, si R^{2} es
metilo. Igualmente la presente invención se refiere a sales
fisiológicamente tolerables de los compuestos de fórmulas Ie y If,
por ejemplo, sales de metales o sales con cationes de amonio
orgánicos de los compuestos de fórmulas Ie y If que contienen un
grupo ácido carboxílico, o sales de adición de ácido de los
compuestos de fórmulas Ie y If que contienen restos piridilo, por
ejemplo los hidrocloruros.
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\vskip1.000000\baselineskip
Compuestos de fórmulas Ie y If
\vskip1.000000\baselineskip
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr}
Los elementos estructurales individuales en los
compuestos de fórmula I de acuerdo con la invención, preferiblemente
tienen los siguientes significados, y pueden tener
independientemente uno u otro significado.
R^{2} preferiblemente es alquilo
(C_{1}-C_{4}) que puede estar sustituido con
uno o más átomos de flúor, o piridilo, o fenilo no sustituido, o
fenilo que está sustituido con un resto metilendioxi o un resto
etilendioxi, o fenilo que está sustituido con uno o dos grupos
alcoxi (C_{1}-C_{4}). El grupo alcoxi que
representa R^{2}, que opcionalmente puede estar sustituido con
flúor, es en particular uno de los grupos metilo, etilo,
isopropilo, trifluorometilo y 2,2,2-trifluoroetilo.
Los sustituyentes alcoxi en un grupo fenilo que representa R^{2}
son en particular grupos metoxi. Preferiblemente particularmente,
R^{2} es metilo, piridilo, fenilo no sustituido, fenilo que está
sustituido con un resto metilendioxi o un resto etilendioxi o
fenilo que está sustituido con uno o dos grupos metoxi. Muy
preferiblemente particularmente, R^{2} es metilo, fenilo no
sustituido o piridilo.
R^{3} y R^{4} pueden ser iguales o
diferentes. Preferiblemente, los dos grupos R^{3} y R^{4} son
idénticos. En una realización de la presente invención, R^{3} y
R^{4} son ambos metilo. En otra realización de la presente
invención, R^{3} y R^{4} son ambos trifluorometilo.
Un grupo alquilo que representa R^{5}, que
puede estar sustituido con uno o más átomos de flúor,
preferiblemente es un grupo metilo, un grupo etilo o un grupo
trifluorometilo. Preferiblemente, R^{5} es alquilo
(C_{1}-C_{4}), que puede estar sustituido con
uno o más átomos de flúor. Preferiblemente particularmente, R^{5}
es metilo o trifluorometilo, muy preferiblemente particularmente
metilo.
R^{6} preferiblemente es hidroxilo, alcoxi
(C_{1}-C_{6}),
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{4}),
feniloxi o amino (NH_{2}), preferiblemente particularmente
hidroxilo, alcoxi (C_{1}-C_{6}) o amino, muy
preferiblemente particularmente hidroxilo o alcoxi
(C_{1}-C_{6}), especialmente preferiblemente
hidroxilo o alcoxi (C_{1}-C_{4}), en particular
hidroxilo.
R^{7} preferiblemente es hidrógeno o alquilo
(C_{1}-C_{3}), preferiblemente particularmente
hidrógeno o metilo, muy preferiblemente particularmente
hidrógeno.
E es preferiblemente -CO-R^{6},
-CO-H, -CH_{2}-OH o
-CH_{2}-OCH_{3}, preferiblemente particularmente
-CO-R^{6}, -CH_{2}-OH o
-CH_{2}-OCH_{3}, muy preferiblemente
particularmente -CO-R^{6} o
-CH_{2}-OH, además preferiblemente
-COOH,
-COOC_{2}H_{5}, -COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH, en particular -COOH.
-COOC_{2}H_{5}, -COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH, en particular -COOH.
En una realización de la presente invención Z es
azufre, en otra realización Z es oxígeno.
En una realización de la presente invención A es
el resto isobutilo (resto 2-metilpropilo,
(CH_{3})_{2}CH-CH_{2}-), en otra
realización A es el resto ciclopropilmetilo
(ciclopropil-CH_{2}-). Además, en una realización
de la presente invención R^{1} es hidrógeno y en otra realización
R^{1} es metilo.
Los compuestos preferidos de fórmula I son los
que tienen una configuración uniforme en uno o más centros
quirales, por ejemplo en el átomo de carbono que lleva el resto
R^{2}, y/o en el átomo de carbono que lleva el resto A y el resto
imidazolidina. Es decir, se prefieren compuestos que están presentes
con una configuración uniforme o esencialmente uniforme en uno o
más centros quirales, en la configuración R o en la configuración
S, pero no como una mezcla R/S. Sin embargo, como se ha explicado,
los centros quirales individuales en estos compuestos de fórmula I
pueden tener, independientemente uno de otro, la configuración R o
la configuración S y tener configuraciones iguales o diferentes. Los
compuestos particularmente preferidos de fórmula I son los que el
átomo de carbono que lleva el resto A y el resto imidazolidina está
presente con la configuración S, es decir, con la configuración con
respecto a este estereocentro que se muestra en las fórmulas Ia y
Ib. Compuestos particularmente preferidos de fórmula I también son
los que el átomo de carbono que lleva el grupo R^{2} está
presente en la configuración mostrada en las fórmulas Ia y Ic. Si
R^{2}, por ejemplo, es fenilo, fenilo sustituido o piridilo, en
estos compuestos particularmente preferidos el átomo de carbono que
lleva el grupo R^{2} tiene la configuración S, si R^{2} es
metilo, etilo o isobutilo, tiene la configuración R. Son compuestos
de fórmula I muy preferidos particularmente aquellos en los que los
estereocentros antes mencionados están presentes con las
configuraciones mostradas en la fórmula Ia.
Los compuestos preferidos de fórmula I son los
compuestos en los que uno o más restos tienen significados
preferidos, o tienen un significado específico seleccionado de los
significados incluidos en la presente invención en relación a todas
las combinaciones de significados preferidos y/o significados
específicos de los restos. Ejemplos de compuestos preferidos son,
por ejemplo, compuestos en los que, simultáneamente, R^{1},
R^{3}, R^{4} y R^{5} son metilo, y A es isobutilo, o
compuestos en los que, simultáneamente R^{1}, R^{3}, R^{4} y
R^{5} son metilo y A es ciclopropilmetilo, o compuestos en los
que, simultáneamente R^{1} es metilo, R^{3} y R^{4} son
trifluorometilo, R^{5} es metilo y A es isobutilo, o compuestos en
los que, simultáneamente, R^{1} es metilo, R^{3} y R^{4} son
trifluorometilo, R^{5} es metilo y A es ciclopropilmetilo, o
compuestos en los que, simultáneamente R^{1} es hidrógeno,
R^{3}, R^{4} y R^{5} son metilo y A es isobutilo, o
compuestos en los que simultáneamente R^{1} es hidrógeno, R^{3},
R^{4} y R^{5} son metilo y A es ciclopropilmetilo, o compuestos
en los que, simultáneamente R^{1} es hidrógeno, R^{3} y R^{4}
son trifluorometilo, R^{5} es metilo y A es isobutilo, o
compuestos en los que, simultáneamente, R^{1} es hidrógeno,
R^{3} y R^{4} son trifluorometilo, R^{5} es metilo y A es
ciclopropilmetilo, y los otros grupos tienen los significados
generales antes indicados en los compuestos de fórmula I o tienen
significados preferidos o tienen significados específicos de sus
respectivas definiciones.
Son compuestos particularmente preferidos, por
ejemplo, compuestos de fórmula I en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -CO-R^{6},
-CH_{2}-OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es hidrógeno o metilo;
R^{2} es piridilo, fenilo no sustituido, fenilo
que está sustituido con un resto metilendioxi o un resto
etilendioxi, fenilo que está sustituido con uno o dos grupos alcoxi
(C_{1}-C_{4}), o alquilo
(C_{1}-C_{4}) que puede estar sustituido con
uno o más átomos de flúor;
R^{3} y R^{4} son metilo;
R^{5} es metilo;
R^{6} es hidroxilo, alcoxi
(C_{1}-C_{6}),
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{4}),
feniloxi, o amino;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, y sus sales fisiológicamente
tolerables.
Son compuestos particularmente muy preferidos,
por ejemplo, los compuestos de fórmula I en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -COOH, -COOC_{2}H_{5},
-COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es metilo;
R^{2} es piridilo, fenilo no sustituido, fenilo
que está sustituido con un resto metilendioxi o un resto
etilendioxi, fenilo que está sustituido con uno o dos grupos
metoxi, o alquilo (C_{1}-C_{4}) que puede estar
sustituido con uno o más átomos de flúor;
R^{3} y R^{4} son metilo;
R^{5} es metilo;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, y sus sales fisiológicamente
tolerables.
Son compuestos especialmente preferidos, por
ejemplo, los compuestos de fórmula I en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -COOH, -COOC_{2}H_{5},
-COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es metilo;
R^{2} es fenilo no sustituido, piridilo, metilo
o 2,2,2-trifluoroetilo;
R^{3} y R^{4} son metilo;
R^{5} es metilo;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, y sus sales fisiológicamente
tolerables.
Son compuestos particularmente especialmente
preferidos, por ejemplo, los compuestos de fórmula I en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -COOH, -COOC_{2}H_{5},
-COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es metilo;
R^{2} es fenilo no sustituido, piridilo o
metilo;
R^{3} y R^{4} son metilo;
R^{5} es metilo;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, y sus sales fisiológicamente
tolerables.
Todas las definiciones anteriores de subgrupos de
los compuestos de fórmula I, se aplican análogamente a compuestos
de fórmula I, en la que R^{3} y R^{4} son ambos trifluorometilo
en lugar de metilo. Así, por ejemplo, también son compuestos
particularmente especialmente preferidos los compuestos de fórmula
I, en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -COOH, -COOC_{2}H_{5},
-COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es metilo;
R^{2} es fenilo no sustituido, piridilo o
metilo;
R^{3} y R^{4} son trifluorometilo;
R^{5} es metilo;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, y sus sales fisiológicamente
tolerables.
Los compuestos de fórmula I se pueden preparar,
por ejemplo, por condensación de un compuesto de fórmula II
con un compuesto de fórmula
III,
donde en las fórmulas II y III los
grupos A, E, Z, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} se
definen como se ha indicado antes, o alternativamente en estos
grupos puede haber grupos funcionales en forma protegida o en forma
de precursores, y donde G es hidroxicarbonilo,
alcoxi(C_{1}-C_{6})-carbonilo
o derivados de ácido carboxílico activados, tales como por ejemplo,
cloruros de ácido o ésteres
activos.
En la condensación de los compuestos de fórmulas
II y III, como norma es necesario que el grupo ácido carboxílico que
está presente, pero no está implicado en la reacción de
condensación, esté protegido con un grupo protector reversible, y
por lo tanto esté presente, por ejemplo, en forma de un éster de
alquilo (C_{1}-C_{6}) adecuado tal como el
éster de terc-butilo o éster de bencilo. Cuando se
van a preparar los compuestos de fórmula I en la que el grupo E,
por ejemplo, es un grupo hidroxicarbonilo o un grupo que se prepara
a partir de un grupo hidroxicarbonilo, en los compuestos de fórmula
III, por ejemplo, el resto E puede ser primero un grupo
hidroxicarbonilo en forma protegida, y después de la condensación
de los compuestos de fórmulas II y III, el grupo hidroxicarbonilo se
puede liberar y/o se puede sintetizar el grupo final E deseado en
una o más etapas adicionales.
Los precursores de grupos funcionales son grupos
que se pueden convertir en el grupo funcional deseado de acuerdo
con los procedimientos de síntesis habituales conocidos por los
expertos en la técnica. Por ejemplo, un grupo ciano que se puede
convertir en un grupo ácido carboxílico por hidrólisis se puede
designar como un precursor para este grupo. Un grupo alcohol que se
puede oxidar a un grupo aldehído se puede designar como un
precursor para este grupo. Ya se han mencionado ejemplos de grupos
protectores que se pueden introducir antes de llevar a cabo una
reacción o una secuencia de reacciones y después se eliminan otra
vez.
Para la condensación de los compuestos de
fórmulas II y III, se usan ventajosamente los métodos de
acoplamiento de la química de péptidos que son bien conocidos por
los expertos en la técnica (véase, por ejemplo,
Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie
[Métodos de Química Orgánica], Volumen 15/1 y 15/2, Georg Thieme
Verlag, Stuttgart, 1974). Son ejemplos de posibles agentes de
condensación o reactivos de acoplamiento, por ejemplo,
carbonildiimidazol, carbodiimidas tales como
diciclohexilcarbodiimida (DCC) o diisopropilcarbodiimida,
tetrafluoroborato de
O-((ciano(etoxicarbonil)-metilen)amino)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
(TOTU) o anhídrido propilfosfónico (PPA). Las condensaciones se
pueden llevar a cabo en condiciones patrón que son bien conocidas
por los expertos en la técnica. En general, se llevan a cabo en un
disolvente o diluyente inerte, por ejemplo en un disolvente aprótico
tal como N,N-dimetiformamida (DMF), dimetisulfóxido
(DMSO),
N-metil-2-pirrolidona
(NMP), tetrahidrofurano (THF) o dimetoxietano (DME). Dependiendo de
la condensación llevada a cabo en el caso concreto, puede ser
ventajoso añadir una base tal como una amina terciaria o reactivos
auxiliares, por ejemplo un compuesto N-hidroxi tal
como 1-hidroxibenzotriazol (HOBT). El tratamiento de
la mezcla de reacción y purificación del producto se puede llevar a
cabo de acuerdo con procedimientos patrón habituales. Después de la
condensación, se eliminan los grupos protectores presentes de una
forma adecuada. Por ejemplo, los grupos bencilo en ésteres
bencílicos se pueden eliminar por hidrogenación catalítica, o los
grupos protectores del tipo terc-butilo se pueden
eliminar por tratamiento con un ácido adecuado. La preparación de
los compuestos de fórmula I, también se puede llevar a cabo, por
ejemplo, sintetizando los compuestos por etapas en una fase sólida
de acuerdo con los métodos habituales, siendo posible introducir
los elementos estructurales individuales de la molécula en
diferentes secuencias.
Los compuestos amino de fórmula III, están
disponibles en el comercio o se pueden sintetizar de acuerdo con o
de forma análoga a procedimientos patrón conocidos, a partir de
materias primas que están disponibles en el comercio, o a su vez se
pueden obtener de acuerdo con o de forma análoga a procedimientos de
la bibliografía. Por ejemplo, los ácidos
3-aminopropiónicos 3-sustituidos
ópticamente activos de fórmula III o sus ésteres, en particular
ésteres de ácido
3-fenil-3-aminopropiónico,
se pueden preparar a partir de los ácidos acrílicos
3-sustituidos correspondientes, que a su vez se
pueden obtener a partir de los aldehídos correspondientes. Los
ácidos acrílicos 3-sustituidos se convierten en los
cloruros de ácido usando cloruro de oxalilo, y éstos se convierten
en los ésteres usando un alcohol, por ejemplo, en ésteres de
terc-butilo usando terc-butanol.
Para introducir el grupo amino, los ésteres después se hacen
reaccionar con la sal de litio de una amina ópticamente activa, por
ejemplo, la sal de litio de
(R)-(+)-N-bencil-N-(1-feniletil)amina,
y después el grupo bencilo y el grupo feniletilo en el
3-(N-bencil-N-(1-feniletil)amino)propionato
de terc-butilo 3-sustituido se
eliminan por hidrogenación catalítica. Para preparar los compuestos
de fórmula III en la que E es el grupo hidroximetilo CH_{2}OH, o
un grupo hidroximetilo eterificado, se puede usar en la reacción de
condensación 3-aminopropanoles
3-sustituidos o sus éteres que se pueden obtener a
partir de ácidos 3-aminopropiónicos
3-sustituidos o sus ésteres, por reducción del
grupo ácido o el grupo éster, por ejemplo el éster de etilo o éster
de terc-butilo, usando hidruro de litio y aluminio
o hidruro de litio y aluminio/tricloruro de aluminio.
Los compuestos de fórmula II se pueden preparar,
por ejemplo, haciendo reaccionar primero compuestos de fórmula
IV
en una reacción de Bucherer, por
ejemplo con carbonato amónico y cianuro potásico, para dar
compuestos de fórmula
V
que después se hacen reaccionar con
un reactivo de alquilación de fórmula
LG-CHA-G, que introduce el resto de
fórmula -CHA-G en la molécula, para dar compuestos
de fórmula
VI,
donde A, R^{3}, R^{4} y G se
definen como se ha indicado antes. La reacción de los compuestos de
fórmula VI con un segundo reactivo de alquilación de fórmula
VII,
en la que Z, R^{1} y R^{5} son
como se han definido antes, conduce después a los correspondientes
compuestos de fórmula II. El grupo LG es un grupo lábil
nucleófilamente sustituible, por ejemplo halógeno, en particular
cloro o bromo, o sulfoniloxi tal como tosiloxi, metilsulfoniloxi o
triflurometilsulfoniloxi.
Los compuestos de fórmula II también se pueden
preparar, por ejemplo haciendo reaccionar un compuesto de fórmula
VI primero con un reactivo de fórmula
4-(PG-NH)-C_{6}H_{3}(OR^{5})-CH_{2}-LG,
en la que LG es un grupo lábil nucleófilamente sustituible como se
ha explicado antes, para dar un compuesto de fórmula VIII,
donde los significados indicados
antes se aplican para A, G, R^{3}, R^{4} y R^{5}, y PG es un
grupo protector de amino, por ejemplo
terc-butoxicarbonilo o benciloxicarbonilo, Después
de eliminar el grupo protector PG, los compuestos de fórmula II se
obtienen por reacción del grupo amino NH_{2} resultante con
isocianato de fenilo, isotiocianato de fenilo, isocianato de
2-metilfenilo o isotiocianato de
2-metilfenilo. Tal como los compuestos de fórmula
VIII, se pueden preparar y usar compuestos en la síntesis, en los
que en la fórmula VIII el grupo PG-NH- se sustituye
por un grupo que es un precursor de un grupo amino, y que después
se convierte en un grupo amino en una etapa de reacción adicional.
Por ejemplo, un compuesto de fórmula VI se puede hacer reaccionar
primero con un grupo nitro de la fórmula
4-O_{2}N-C_{6}H_{3}(OR^{5})-CH_{2}-LG
para dar un compuesto correspondiente al compuesto de fórmula VIII,
después el grupo nitro se puede convertir en el grupo amino, por
ejemplo, por hidrogenación catalítica, y después el grupo amino se
puede convertir en el compuesto deseado de fórmula II usando
isocianato de fenilo, isotiocianato de fenilo, isocianato de
2-metilfenilo o isotiocianato de
2-metilfenilo.
En general, las etapas individuales para preparar
los compuestos de fórmula I, se pueden llevar a cabo de acuerdo con
o de forma análoga a métodos conocidos familiares para los expertos
en la técnica. Dependiendo del caso concreto, puede ser adecuado en
cualquier etapa de la síntesis, como ya se ha explicado, bloquear
temporalmente grupos funcionales que pueden conducir a reacciones
secundarias o reacciones indeseadas, mediante una estrategia de
grupo protector adecuada al problema de síntesis específico, cuyo
procedimiento es conocido por el experto en la técnica.
Los compuestos de fórmula I también se pueden
obtener como sigue. Mediante reacción de aminoácidos
N-sustituidos o preferiblemente sus ésteres, por
ejemplo ésteres de metilo, ésteres de etilo, ésteres de
terc-butilo o ésteres de bencilo, cuyos compuestos
se pueden obtener de acuerdo con procedimientos patrón, por ejemplo
de compuestos de fórmula IX,
en la que Z, R^{1}, R^{3},
R^{4} y R^{5} se definen como se ha indicado antes, con un
isocianato de fórmula
X,
para la que se aplican las
definiciones anteriores de A, E y R^{2}, y que se puede obtener
de acuerdo con procedimientos patrón a partir del correspondiente
compuesto que en lugar del grupo isocianato contiene un grupo
NH_{2}, se obtienen derivados de urea, por ejemplo compuestos de
fórmula
XI,
para la que se aplican las
definiciones antes indicadas. Después, los compuestos de fórmula XI
se pueden ciclar calentado con ácido para dar los compuestos de
fórmula I. La ciclación de los compuestos de fórmula XI en los
compuestos de fórmula I, también se puede llevar a cabo por
tratamiento con bases en disolventes inertes, por ejemplo, por
tratamiento con hidruro sódico en un disolvente aprótico, tal como
dimetilformamida. Durante las reacciones, como se ha explicado
antes, puede haber presentes grupos funcionales en forma
protegida.
Los compuestos de fórmula I también se pueden
obtener haciendo reaccionar un compuesto de fórmula IX con un
isocianato de fórmula XII
en la que A tiene los significados
antes indicados y Q, por ejemplo, es un grupo alcoxi, por ejemplo
un grupo alcoxi (C_{1}-C_{4}) tal como metoxi,
etoxi, o terc-butoxi, o un grupo
aril(C_{6}-C_{14})-alcoxi(C_{1}-C_{4}),
por ejemplo benciloxi. En esta reacción, se obtiene un compuesto de
fórmula
XIII,
en la que A, Q, Z, R^{1},
R^{3}, R^{4} y R^{5} se definen como se ha indicado antes,
que después se cicla en presencia de un ácido o base, como se ha
descrito antes para la ciclación de los compuestos de fórmula XI,
en un compuesto de fórmula
XIV,
en la que A, Q, Z, R^{1},
R^{3}, R^{4} y R^{5} se definen como se ha indicado antes.
Después, en el compuesto de fórmula XIV se puede convertir el grupo
CO-Q en el grupo ácido carboxílico COOH, por
ejemplo, por hidrólisis. Si la ciclación del compuesto de fórmula
XIII en el compuesto de fórmula XIV se lleva a cabo usando un ácido,
la conversión del grupo CO-Q en el grupo COOH
también se puede llevar a cabo simultáneamente con la ciclación. Por
posterior acoplamiento con un compuesto de fórmula III, como se ha
descrito antes para el acoplamiento de los compuestos de fórmulas II
y III, se obtiene después un compuesto de fórmula I. En este
procedimiento de síntesis también puede haber presentes grupos
funcionales en forma protegida o en forma de
precursores.
Un método adicional para preparar compuestos de
fórmula I es, por ejemplo, hacer reaccionar compuestos de fórmula
XV,
para la que se aplican las
definiciones antes indicadas, con fosgeno o equivalentes
(análogamente a S. Goldschmidt and M. Wick, Liebigs Ann.
Chem. 575 (1952), 217, y C. Tropp, Chem. Ber. 61 (1928),
1431).
Los compuestos de fórmula I también se pueden
preparar acoplando primero un compuesto de fórmula XVI,
en la que R^{3} y R^{4} tienen
los significados antes indicados, y PG es un grupo protector de
amino, tal como por ejemplo, un grupo benciloxicarbonilo, con un
compuesto de fórmula
XVII,
en la que A tiene el significado
antes indicado, y Q' es un grupo hidroxilo de ácido carboxílico
protegido, por ejemplo, un grupo alcoxi tal como
terc-butoxi, para dar un compuesto de fórmula
XVIII
en la que A, R^{3}, R^{4}, PG y
Q' tienen los significados antes indicados. En el compuesto de
fórmula XVIII, el grupo protector PG, después se puede eliminar
selectivamente del grupo amino, por ejemplo, por hidrogenación en
el caso de un grupo benciloxicarbonilo, y por introducción de un
grupo CO se puede llevar a cabo el cierre de anillo para dar un
compuesto de fórmula
XIX,
en la que A, R^{3}, R^{4} y Q'
tienen los significados antes indicados. Para introducir el grupo
carbonilo, se puede usar, por ejemplo, fosgeno o un equivalente del
fosgeno tal como difosgeno (análogamente a la reacción de los
compuestos de fórmula XV antes explicada). Como producto intermedio
en la conversión del compuesto de fórmula XVIII en el compuesto de
fórmula XIX, se puede producir o preparar específicamente, por
ejemplo, un isocianato. La conversión del compuesto de fórmula XVIII
en el de fórmula XIX se puede llevar a cabo en una o más etapas.
Por ejemplo, se puede introducir primero el grupo carbonilo, y
después en una etapa separada, se puede llevar a cabo la ciclación
en presencia de una base tal como hidruro sódico como se ha
descrito para las ciclaciones antes mencionadas. Los compuestos de
fórmula XVIII en la que PG es el grupo benciloxicarbonilo, también
se pueden convertir directamente en compuestos de fórmula XIX, sin
usar una unidad estructural sintética tal como fosgeno para
introducir el grupo carbonilo. Si los compuestos de fórmula XVIII en
la que PG es benciloxicarbonilo, se tratan con una base tal como
hidruro sódico, se pueden obtener directamente los compuestos de
fórmula
XIX.
Después, los compuestos de fórmula XIX se pueden
alquilar, como se ha explicado antes para los compuestos de fórmula
VI, en el grupo NH usando un reactivo de fórmula VII, y después de
convertir el grupo ácido carboxílico protegido
CO-Q' en el grupo ácido carboxílico COOH, se pueden
sintetizar los compuestos deseados de fórmula I como se ha descrito
antes para los compuestos de fórmulas VI y II. En este
procedimiento de síntesis también puede haber presentes grupos
funcionales en forma protegida o en forma de precursores.
Además, los compuestos de fórmula I se pueden
preparar haciendo reaccionar primero un compuesto de fórmula XX
en la que R^{3}, R^{4} y Q'
tienen los significados antes indicados, con un isocianato de
fórmula XII para dar un compuesto de fórmula
XXI,
\vskip1.000000\baselineskip
en la que A, R^{3}, R^{4}, Q y
Q' tienen los significados antes indicados. Después, el compuesto
de fórmula XXI se cicla por tratamiento con un ácido fuerte, por
ejemplo ácido clorhídrico semiconcentrado, para dar un compuesto de
fórmula
XXII.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de fórmula XXII también se pueden
preparar, preparando primero un compuesto de fórmula XVIII en la que
A, R^{3}, R^{4} y Q' tienen los significados indicados y PG es
un grupo alcoxicarbonilo tal como
alcoxi(C_{1}-C_{4})-carbonilo,
un grupo
aril(C_{6}-C_{14})-alcoxi(C_{1}-C_{4})-carbonilo
tal como
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{4})-carbonilo,
o un grupo
ariloxi(C_{6}-C_{14})carbonilo tal
como feniloxicarbonilo, convirtiendo dicho compuesto, por
liberación del grupo ácido carboxílico protegido
CO-Q', en un compuesto de fórmula XVIII en el que
CO-Q' es el grupo ácido carboxílico libre
CO-OH, PG es
alcoxi(C_{1}-C_{4})-carbonilo,
aril(C_{6}-C_{14})-alcoxi(C_{1}-C_{4})-carbonilo
o
ariloxi(C_{6}-C_{14})-carbonilo,
y A, R^{3} y R^{4} tienen los significados indicados, y ciclando
dicho compuesto con una base, tal como por ejemplo, carbonato
sódico en el compuesto de fórmula XXII.
Los compuestos de fórmula IIa
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que A, Z, R^{1}, R^{3},
R^{4} y R^{5} tienen los significados antes indicados, se
pueden obtener después haciendo reaccionar los compuestos de fórmula
XXII en presencia de un exceso de base, por ejemplo en presencia de
un exceso de n-butil-litio, con un
reactivo de alquilación de fórmula VII, y después acidificando. El
grupo 4-(3-arilureido)bencilo o
4-(3-ariltioureido)bencilo también se puede
introducir por pasos, de forma análoga a la preparación de los
compuestos de fórmula VIII y los compuestos de fórmula II obtenidos
a partir de éstos, en los compuestos de fórmula
XXII.
Los compuestos de fórmula I en los que los restos
R^{3} y R^{4} son triflurometilo se pueden preparar
ventajosamente haciendo reaccionar un isonitrilo de fórmula XXIII
con
2-terc-butoxi-4,4-bis(trifluorometil)-1,3-oxazabuta-1,3-dieno
de fórmula XXIV para dar un compuesto de fórmula XXV,
donde A y Q tienen los significados
antes indicados. Es decir, el grupo C(=O)-Q, por
ejemplo, es un grupo éster y Q, por ejemplo, es alcoxi tal como
alcoxi (C_{1}-C_{4}) incluyendo metoxi, etoxi y
terc-butoxi o
aril(C_{6}-C_{14})-alcoxi(C_{1}-C_{4})
incluyendo benciloxi. La reacción de los compuestos de fórmulas
XXIII y XXIV para dar los compuestos de fórmula XXV se lleva a cabo
ventajosamente en un hidrocarburo o éter como disolvente, por
ejemplo en benceno o tolueno, calentando, por ejemplo a temperaturas
de aproximadamente 40ºC a aproximadamente 80ºC, por ejemplo a
aproximadamente
60ºC.
Los isonitrilos (isocianuros) de fórmula XXIII se
pueden obtener de acuerdo con los métodos patrón conocidos por los
expertos en la técnica a partir de los correspondientes ésteres de
ácido amino-carboxílico de fórmula
H_{2}N-CHA-C(=O)-Q,
en la que A y Q tienen los significados antes indicados.
Ventajosamente, el éster del ácido
amino-carboxílico de fórmula
H_{2}N-CHA-C(=O)-Q
se convierte primero, por reacción con un éster de ácido fórmico
reactivo, por ejemplo formiato de cianometilo, en el éster del
ácido N-formilamino de fórmula
HC(=O)-NH-CHA-C(=O)-Q,
que después se convierte en el isocianuro de fórmula XXIII, por
ejemplo, por reacción con fosgeno o un equivalente de fosgeno tal
como difosgeno o trifosgeno en presencia de una amina terciaria tal
como trietilamina. El
2-terc-butoxi-4,4-bis(trifluorometil)-1,3-oxazabuta-1,3-dieno
de fórmula XXIV se puede obtener, de acuerdo con el procedimiento
descrito por Steglich et al., Chemische Berichte 107
(1974), 1488, a partir de carbamato de terc-butilo
((CH_{3})_{3}C-O-CO-NH_{2})
y hexafluoroacetona anhidra y posterior tratamiento del
2-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-1,1,1,3,3,3-hexafluoropropano
inicialmente obtenido con anhídrido trifluoroacético en presencia
de una base tal como quinolina.
Después, los compuestos de fórmula XXV se pueden
alquilar, por ejemplo con compuestos de fórmula VII, en el grupo NH
para dar compuestos de fórmula XIV, que, si se desea, después de
convertir el grupo éster CO-Q en el grupo ácido
carboxílico CO-OH, por reacción con compuestos de
fórmula III, dan compuestos de fórmula I como se ha descrito antes.
En los compuestos de fórmula XXV, también se puede primero convertir
el grupo éster CO-Q de acuerdo con procedimientos
patrón en el grupo ácido carboxílico CO-OH y
convertir el compuesto de fórmula XXII obtenido como se ha descrito
antes con un reactivo de alquilación de fórmula VII en presencia de
exceso de base en un compuesto de fórmula IIa, que después da un
compuesto de fórmula I por reacción con un compuesto de fórmula
III. Análogamente a la preparación de compuestos de fórmula VIII
antes descrita y de compuestos de fórmula II o IIa obtenidos a
partir de éstos, el grupo
4-(3-arilureido)bencilo o grupo
4-(3-ariltioureido)bencilo también se puede
introducir por etapas en los compuestos de fórmula XXV. En estas
reacciones, también puede haber grupos funcionales presentes en
forma protegida o en forma de precursores.
Los compuestos de fórmula I en los que E, por
ejemplo, es hidroxicarbonilo o hidroximetilo, se pueden convertir,
de acuerdo con procedimientos patrón, en compuestos de fórmula I en
la que E tiene otros significados, o en otros profármacos o
derivados de los compuestos de fórmula I. Por lo tanto, para
preparar los ésteres, los compuestos de fórmula I en la que E es
hidroxicarbonilo, se pueden esterificar usando los alcoholes
adecuados, por ejemplo, en presencia de un reactivo de condensación
tal como DCC, o los compuestos de fórmula I en la que E es
hidroxicarbonilo, se pueden alquilar con haluros de alquilo tales
como cloruro de alquilo o bromuros de alquilo, por ejemplo con
haluros de aciloxialquilo, para dar compuestos de fórmula I en la
que E es aciloxialcoxi-CO-. Los compuestos de
fórmula I en la que E es hidroxicarbonilo, se pueden convertir en
amidas usando amoniaco o aminas orgánicas en presencia de un
reactivo de condensación. Los compuestos de fórmula I en la que E es
CO-NH_{2} también se pueden obtener
ventajosamente en fase sólida acoplando el compuesto en el que E es
COOH en presencia de un agente de condensación tal como TOTU en
resina de amida Rink, y después eliminándolo de la resina otra vez
usando ácido trifluoroacético. Los compuestos de fórmula I en la
que E es el grupo hidroximetilo CH_{2}OH, se pueden eterificar en
el grupo hidroxilo de acuerdo con procedimientos patrón. De acuerdo
con procedimientos patrón para oxidar selectivamente alcoholes a
aldehídos, por ejemplo usando hipoclorito sódico en presencia de
4-acetamido-2,2,6,6,-tetrametilpiperidin-1-oxilo
(4-acetamido-TEMPO), los compuestos
de fórmula I en la que E es CH_{2}OH se pueden convertir en
compuestos de fórmula I en la que E es el grupo aldehído
-CO-H.
Los compuestos de fórmula I en la que R^{5} es
hidrógeno también se pueden preparar llevando a cabo una
eliminación de éter en compuestos de fórmula I en la que R^{5} es
metilo. Por ejemplo, un grupo metoxi que representa R^{5}O se
puede convertir en un grupo hidroxilo por tratamiento con
tribromuro de boro.
Los compuestos de fórmula I son compuestos
farmacéuticos activos valiosos que son adecuados, por ejemplo, para
tratar enfermedades inflamatorias, enfermedades alérgicas o asma.
Los compuestos de fórmula I y sus sales y derivados
fisiológicamente tolerables se pueden administrar de acuerdo con la
invención, a animales, preferiblemente a mamíferos, y en particular
a seres humanos, como productos farmacéuticos para tratar estados de
enfermedad, entendiéndose en general el tratamiento como medio tanto
de terapia de síntomas de enfermedad aguda o crónica así como de
profilaxis o prevención de síntomas de enfermedad, es decir, por
ejemplo, la prevención de la aparición de síntomas de enfermedad
alérgica o asmática aguda o la prevención de infarto de miocardio o
de reinfarto de miocardio en pacientes apropiados. Los compuestos
de fórmula I y sus sales y derivados se pueden administrar solos,
mezclados entre sí, o en forma de preparaciones farmacéuticas que
permiten la administración entérica o parenteral, y que como
constituyente activo contienen una dosis eficaz de al menos un
compuesto de fórmula I y/o sus sales y/o derivados fisiológicamente
tolerables y un vehículo farmacéuticamente tolerable.
Por lo tanto, la presente invención también se
refiere a compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables para usar como productos farmacéuticos
(o medicamentos), al uso de compuestos de fórmula I y/o sus sales
y/o derivados fisiológicamente tolerables para preparar productos
farmacéuticos para tratar las enfermedades mencionadas antes o a
continuación, por ejemplo, para tratar enfermedades inflamatorias, y
al uso de los compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables para tratar estas enfermedades. Además,
la presente invención se refiere a preparaciones farmacéuticas (o
composiciones farmacéuticas) que contienen una dosis eficaz de al
menos un compuesto de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables y un vehículo farmacéuticamente
tolerable, que son uno o más vehículos y/o aditivos
farmacéuticamente inocuos.
Los productos farmacéuticos se pueden administrar
sistémica o localmente. Se pueden administrar, por ejemplo, vía
oral en forma de píldoras, pastillas, comprimidos revestidos con
película, comprimidos revestidos con azúcar, gránulos, cápsulas de
gelatina dura y blanda, polvos, soluciones, jarabes, emulsiones,
suspensiones o en otras formas farmacéuticas. Sin embargo, la
administración también se puede llevar a cabo vía vaginal o
rectal, por ejemplo, en forma de supositorios, o vía parenteral o
como implantes, por ejemplo en forma de soluciones para inyección o
soluciones para infusión, microcápsulas o varillas, o vía tópica o
percutánea, por ejemplo en forma de cremas, pomadas, polvos,
soluciones, emulsiones o tinturas, o de otra forma, por ejemplo en
forma de pulverizadores nasales o mezclas de aerosol. La
administración parenteral de soluciones se puede realizar, por
ejemplo, vía intravenosa, intramuscular, subcutánea,
intra-articular, intrasinovial o de otra forma.
Las preparaciones farmacéuticas de acuerdo con la
invención se preparan de una forma conocida, mezclando el compuesto
o compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables con vehículos y/o aditivos inorgánicos
y/u orgánicos farmacéuticamente inertes, y poniéndolos en una forma
de dosificación y forma de administración adecuadas. Para preparar
píldoras, comprimidos, comprimidos revestidos con azúcar y cápsulas
de gelatina dura, se puede usar, por ejemplo, lactosa, almidón de
maíz o sus derivados, talco, ácido esteárico o sus sales,
polietilenglicoles etc., para cápsulas de gelatina blanda y
supositorios, por ejemplo, grasas, ceras y polioles semisólidos y
líquidos, polietilenglicoles, aceites naturales y endurecidos etc.
Vehículos adecuados para preparar soluciones, por ejemplo soluciones
para inyección, o emulsiones o jarabes son, por ejemplo, agua,
alcoholes, glicerina, dioles, polioles, sacarosa, azúcar invertido,
glucosa, aceites vegetales etc. Vehículos adecuados para
microcápsulas, implantes o varillas son, por ejemplo, copolímeros de
ácido glicólico y ácido láctico. Las preparaciones farmacéuticas
normalmente contienen de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 90%
en peso de los compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables. La cantidad de compuesto activo de
fórmula I y/o sus sales y/o derivados fisiológicamente tolerables en
las preparaciones farmacéuticas normalmente es de aproximadamente
0,2 a aproximadamente 1000 mg, preferiblemente de aproximadamente 1
a aproximadamente 500 mg. Sin embargo, dependiendo de la naturaleza
de la preparación farmacéutica, la cantidad de compuesto activo
también puede ser mayor.
Además de los compuestos activos y vehículos, las
preparaciones farmacéuticas también pueden contener excipientes o
aditivos, por ejemplo, cargas, desintegrantes, aglutinantes,
lubricantes, agentes humectantes, estabilizantes, emulsionantes,
conservantes, edulcorantes, colorantes, agentes de sabor, aromas,
agentes espesantes, diluyentes, sustancias tampón, disolventes,
solubilizantes, agentes para lograr un efecto de depósito, sales
para cambiar la presión osmótica, agentes de revestimiento o
antioxidantes. También pueden contener dos o más compuestos de
fórmula I y/o sus sales y/o derivados fisiológicamente tolerables.
Además de al menos un compuesto de fórmula I y/o sus sales y/o
derivados fisiológicamente tolerables, también pueden contener uno
o más compuestos farmacéuticamente activos diferentes, por ejemplo
sustancias que tienen acción antiinflamatoria.
Si los compuestos de fórmula I o las
preparaciones farmacéuticas que los comprenden se administran en
forma de aerosoles, por ejemplo como aerosoles nasales o por
inhalación, esto se puede llevar a cabo, por ejemplo, usando un
pulverizador, un nebulizador, un nebulizador con bomba, un aparato
de inhalación, un inhalador con medidor o un inhalador de polvo
seco. Las formas farmacéuticas para administrar los compuestos de
fórmula I como un aerosol se pueden preparar de acuerdo con
procedimientos conocidos por el experto en la técnica. Para
prepararlos se pueden usar, por ejemplo, soluciones o dispersiones
de los compuestos de fórmula I en agua, mezclas de agua/alcohol o
soluciones salinas adecuadas, usando aditivos habituales, por
ejemplo, alcohol bencílico u otros conservantes adecuados,
potenciadores de la absorción para aumentar la biodisponibilidad,
solubilizantes, dispersantes y otros, y si es adecuado, propelentes
habituales, por ejemplo clorofluorocarbonos y/o fluorocarbonos.
Otros compuestos farmacéuticos activos que pueden
contener las preparaciones farmacéuticas de acuerdo con la
invención además de los compuestos de fórmula I, pero con los que
los compuestos de fórmula I también se pueden combinar de otras
formas en el contexto de un tratamiento de combinación, son en
particular los compuestos activos que son adecuados para el
tratamiento, es decir, la terapia o profilaxis de las enfermedades
mencionadas antes o a continuación, para cuyo tratamiento los
compuestos de fórmula I son adecuados. Ejemplos de clases de
compuestos activos de este tipo que se pueden mencionar son
esteroides, sustancias antiinflamatorias no esteroideas, derivados
de ácido acético antiinflamatorios no esteroideos, derivados de
ácido propiónico antiinflamatorios no esteroideos, antiasmáticos no
esteroideos, derivados de ácido salicílico, pirazolonas, oxicams,
antagonistas de leucotrienos, inhibidores de biosíntesis de
leucotrienos, inhibidores de ciclooxigenasa, inhibidores de
ciclooxigenasa-2 (inhibidores de
COX-2), antihistaminas, antagonistas de
histamina-H1, antihistaminas no sedantes, compuestos
de oro, agonistas \beta-2, anticolinérgicos,
antagonistas de muscarina, agentes que disminuyen los lípidos,
agentes de disminuyen el colesterol, inhibidores de reductasa
HMG-CoA, estatinas, derivados de ácido nicotínico,
inmunodepresores, ciclosporinas,
\beta-interferones, productos terapéuticos para
tumores, citostáticos, inhibidores de metástasis, antimetabolitos,
derivados de ácido 5-aminosalicílico,
antidiabéticos, insulinas, sulfonilureas, biguanidas, glitazones,
inhibidores de \alpha-glucosidasa, y otros.
Ejemplos de compuestos activos adecuados que se pueden mencionar
son ácido acetilsalicílico, benorilato, sulfasalazina,
fenilbutazona, oxifenbutazona, metamizol, mofebutazona, feprazona,
celecoxib, rofecoxib, diclofenaco, fentiazac, sulindac, zomepirac,
tolmetina, indometacina, acemetacina, ibuprofeno, naproxeno,
carprofeno, fenbufeno, indoprofeno, ketoprofeno, pirofreno, ácido
tiaprofénico, diflunisal, ácido flufenámico, ácido meclofenámico,
ácido mefenámico, ácido niflúmico, ácido tolfenámico, piroxicam,
isoxicam, tenoxicam, ácido nicotínico, prednisona, dexametosa,
hidrocortisona, metilprednisolona, betametasona, beclometasona,
budesonida, montelukast, pranlukast, zafirlukast, zileuton,
ciclosporina, ciclosporina A, rapamicina, tacrolimus, metotrexato,
6-mercaptopurina, azatioprina,
interferón-beta-1a,
interferón-beta-1b, ácido
5-aminosalicílico, leflunomida,
D-penicilamina, cloroquina, glibenclamida,
glimepirida, troglitazona, metformina, acarbosa, atorvastatina,
fluvastatina, lovastatina, simvastatina, pravastatina, colestipol,
colestiramina, probucol, clofibrato, fenofibrato, bezafibrato,
gemfibrozilo, bromuro de ipatropio, clenbuterol, fenoterol,
metaproterenol, pirbuterol, tulobuterol, salbutamol, salmeterol,
terbutalina, isoetarina, ketotiofeno, efedrina, bromuro de
oxitropio, atropina, ácido cromoglícico, teofilina, fexofenadina,
terfenadina, cetirizina, dimetindeno, difenhidramina,
difenilpiralina, feniramina, bromfeniramina, clorfeniramina,
dexclorfeniramina, alimezaina, antazolina, astemizol, azatadina,
clemastina, ciproheptadina, hidroxizina, loratidina, mepiramina,
prometazina, tripelenamina, triprolidina y otros.
Si se van a usar compuestos de fórmula I y/o sus
sales y/o derivados fisiológicamente tolerables en un tratamiento de
combinación junto con uno o más compuestos activos distintos en una
sola preparación farmacéutica, esto se puede llevar a cabo como se
ha mencionado administrando todos los compuestos activos juntos en
una sola preparación farmacéutica, por ejemplo un comprimido o
cápsula. La presente invención se refiere igualmente explícitamente
a preparaciones farmacéuticas de este tipo, para las cuales se
aplican todas las correspondientes explicaciones anteriores. La
cantidad de los compuestos activos en estas preparaciones
farmacéuticas, en general se elige de forma que haya presente una
cantidad eficaz de cada compuesto activo. Sin embargo, un
tratamiento de combinación también se puede llevar a cabo estando
presentes los compuestos activos en una o más preparaciones
farmacéuticas separadas, que pueden estar presentes en un solo
paquete o dos o más paquetes separados. La administración de los
compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados fisiológicamente
tolerables y otros compuestos activos se puede llevar a cabo junto
con o de forma separada y simultánea o sucesiva, en cualquier
orden. La administración también se puede llevar a cabo de
diferentes formas, por ejemplo, un compuesto activo se puede
administrar vía oral y otro vía inyección, inhalación o aplicación
tópica. Todos dichos tratamientos están comprendidos en la presente
invención.
Los compuestos de fórmula I, por ejemplo, tienen
capacidad de inhibir los procesos de interacción
célula-célula y procesos de interacción
célula-matriz, en los que juegan un papel las
interacciones entre VLA-4 y sus ligandos. La
actividad de los compuestos de fórmula I se puede demostrar, por
ejemplo, en un ensayo en el que se mide la unión de células que
contienen el receptor VLA-4, por ejemplo de
leucocitos, a ligandos de este receptor, por ejemplo, a
VCAM-1, que para este propósito también se puede
preparar ventajosamente por ingeniería genética. A continuación se
describen detalles de dicho ensayo. En particular, los compuestos de
fórmula I, tienen capacidad de inhibir la adhesión y migración de
leucocitos, por ejemplo, la adhesión de leucocitos a células
endoteliales, que, como se ha explicando antes, es controlada por el
mecanismo de adhesión VCAM-1/VLA-4.
Por lo tanto, a parte de como antiinflamatorios, los compuestos de
fórmula I y sus sales y derivados fisiológicamente tolerables, en
general son adecuados para el tratamiento, es decir para la terapia
y profilaxis, de enfermedades que se basan en la interacción entre
el receptor VLA-4 y sus ligandos, o pueden estar
influidas por una inhibición de esta interacción, y en particular
son adecuados para tratar enfermedades causadas al menos
parcialmente por un grado no deseado de adhesión de leucocitos y/o
migración de leucocitos, o están conectadas con esto, y para cuya
prevención, alivio o cura se debe disminuir la adhesión y/o
migración de leucocitos.
Por lo tanto, la presente invención también se
refiere a compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables, para inhibir la adhesión y/o migración
de leucocitos, o para inhibir el receptor VLA-4, y
al uso de los compuestos de fórmula I y/o sus sales y/o derivados
fisiológicamente tolerables, para preparar productos farmacéuticos,
es decir, productos farmacéuticos para tratar enfermedades en las
que la adhesión de leucocitos y/o migración de leucocitos muestra un
grado no deseado, o para tratar enfermedades en las que juegan un
papel los procesos de adhesión dependiente de
VLA-4, y al uso de los compuestos de fórmula I y/o
sus sales y/o derivados fisiológicamente tolerables para tratar
enfermedades de este tipo.
Los compuestos de fórmula I se pueden usar como
antiinflamatorios en el caso de síntomas inflamatorios de causas
muy diferentes, con el fin de prevenir, reducir o suprimir las
secuelas no deseadas o dañinas de la inflamación. Se usan, por
ejemplo, para el tratamiento, es decir, para terapia o profilaxis,
de artritis, de artritis reumatoide, de poliartritis, o de
enfermedades inflamatorias de intestino (colitis ulcerativa,
enfermedad de Crohn), de lupus eritematoso sistémico, de
enfermedades inflamatorias del sistema nervioso central tal como,
por ejemplo, esclerosis múltiple, o de asma o alergias tales como,
por ejemplo, alergias de tipo retardado (alergia de tipo IV).
Además, son adecuados para cardioprotección, para protección de
ataques de apoplejía y para la profilaxis secundaria de ataques de
apoplejía, y para el tratamiento, es decir terapia y profilaxis, de
enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, infarto de
miocardio, reinfarto de miocardio, o síndrome coronario agudo,
ataque de apoplejía, restenosis, diabetes, daño en trasplantes de
órganos, enfermedades inmunitarias, enfermedades autoinmunes,
crecimiento de tumores o metástasis de tumores en diferentes tumores
malignos, malaria, y de otras enfermedades en las que un bloqueo de
la integrina VLA-4 y/o una influencia de la
actividad del leucocito parece adecuada para prevenir, aliviar o
curar. Un uso preferido es la prevención de infarto de miocardio o
de reinfarto de miocardio.
La dosis cuando se usan los compuestos de fórmula
I puede variar dentro de límites anchos, y como es habitual y como
sabe el médico, se debe ajustar en cada caso individual a las
condiciones individuales. Depende, por ejemplo, de la naturaleza y
gravedad de la enfermedad que se va a tratar, del estado del
paciente, del compuesto usado o de si se va a tratar un estado de
enfermedad agudo o crónico, o se lleva a cabo profilaxis, o de si
además de los compuestos de fórmula I, se administran compuestos
activos adicionales. En general, en el caso de administración oral,
es adecuada una dosis diaria de aproximadamente 0,01 a
aproximadamente 100 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 0,1 a
aproximadamente 10 mg/kg (en cada caso mg por kg de peso corporal),
en el caso de administración a un adulto que pesa aproximadamente 75
kg para lograr resultados eficaces. En el caso de administración
intravenosa, la dosis diaria en general es de aproximadamente 0,01
a aproximadamente 50 mg/kg, preferiblemente de aproximadamente 0,01
a aproximadamente 10 mg/kg (en cada caso mg por kg de peso
corporal). La dosis diaria se puede dividir, en particular en el
caso de administración de cantidades relativamente grandes, en una
serie, por ejemplo 2, 3 ó 4 administraciones parciales. Si es
adecuado, dependiendo del comportamiento individual, puede ser
necesario salirse hacia arriba o hacia abajo de la dosis diaria
indicada.
A parte de como compuestos farmacéuticos activos
en medicina humana y veterinaria, los compuestos de fórmula I y sus
sales y derivados que son adecuados para el uso deseado se pueden
usar además para propósitos de diagnóstico, por ejemplo en
diagnósticos in vitro de muestras celulares o muestras de
tejidos, y como herramienta auxiliar o científica en
investigaciones bioquímicas en las que se desea un bloqueo de
VLA-4 o una influencia en las interacciones
célula-célula o célula-matriz.
Además, los compuestos de fórmula I y sus sales se pueden usar como
productos intermedios para preparar otros compuestos, en particular
otros compuestos farmacéuticos activos, que se pueden obtener a
partir de compuestos de fórmula I, por ejemplo, por modificación o
introducción de restos o grupos funcionales, por ejemplo por
esterificación, reducción, oxidación u otras transformaciones de
grupos funcionales.
Se hidrogenaron 15 g (81,8 mmoles) de alcohol
3-metoxi-4-nitrobencílico
sobre 1,3 g de paladio/carbón (al 10% de concentración, agua al
50%) en 500 ml de
metil-terc-butil-éter enfriando con
hielo. Después de completarse la absorción de hidrógeno, el
catalizador se filtró, y se añadieron al filtrado 10,14 ml (81,8
mmoles) de isocianato de 2-metilfenilo agitando en
el transcurso de 30 minutos. La mezcla de reacción se dejó reposar
toda la noche, y el sólido precipitado se filtró con succión y se
lavó con metil-terc-butil-éter.
Rendimiento: 20,5 g (88%).
Se añadieron gota a gota 7,65 ml (104,8 mmoles)
de cloruro de tionilo enfriando con hielo, a una suspensión de 15 g
(52,4 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1a en 300 ml de
diclorometano. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente
durante 3 horas, se dejó reposar toda la noche y se vertió en 1000
ml de heptano. El heptano se decantó del aceite separado, el
residuo se suspendió otra vez en heptano y el heptano se decantó.
Este procedimiento se repitió dos veces más. Después el residuo se
disolvió en diclorometano y se vertió en 800 ml de diisopropil-éter
enfriado con hielo. La mezcla se agitó durante 2 horas enfriando
con hielo, y el producto se filtró con succión, se lavó con
diisopropil-éter y se secó sobre pentóxido de fósforo. Rendimiento:
12 g (75%).
Se añadió una solución de hidróxido sódico 1N a
0ºC a una suspensión de 10 g (77,5 mmoles) de ácido
(S)-2-amino-3-ciclopropilpropiónico
en 160 ml de dioxano hasta que se alcanzó pH 8-9.
Después se añadieron 16,9 g (77,5 mmoles) de dicarbonato de
diterc-butilo, se quitó el baño de hielo y el pH se
mantuvo a 8-9 por adición posterior de solución de
hidróxido sódico 1N. Después de dejar reposar toda la noche, se
separó el dioxano a vacío, se añadió acetato de etilo a la fase de
agua, y se separaron las fases. La fase de agua se ajustó a pH 4,5
usando ácido clorhídrico 1 N y se extrajo con acetato de etilo. La
fase de acetato de etilo obtenida se secó sobre sulfato sódico, el
sulfato sódico se filtró y el filtrado se concentró a vacío. El
residuo se disolvió en 1000 ml de diclorometano y se trató con 53,4
ml de alcohol bencílico, 8,37 g de
4-dimetilaminopiridina y 18,8 g de DCC. Después de
agitar durante 6 horas y dejar reposar toda la noche, la mezcla se
filtró, el filtrado se concentró y el residuo se trató con 300 ml
de ácido trifluoroacético al 90% de concentración. Después de agitar
a temperatura ambiente durante 10 minutos, el ácido
trifluoroacético se separó a vacío y el residuo se cromatografió
dos veces sobre gel de sílice (diclorometano/metanol, 95/5).
Rendimiento: 11,48 g (68%).
Se añadieron 321 mg de HOBT y 4,75 g (23,7
mmoles) de DCC a una solución de 3,82 g (23,7 mmoles) de ácido
2-metoxicarbonilamino-2-metilpropiónico
(preparado a partir de ácido
2-amino-2-metilpropiónico
y cloroformiato de metilo) y 5,2 g (23,7 mmoles) del compuesto del
Ejemplo 1c en 100 ml de THF, y la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 4 horas. Después de dejar reposar toda la noche y
filtrar, el THF se separó a vacío, el residuo se recogió en
metil-terc-butil-éter y la solución
se lavó dos veces en cada caso con solución saturada de NaHCO_{3}
y solución acuosa de KHSO_{4}/K_{2}SO_{4}. La fase orgánica
se secó sobre sulfato sódico, y después de filtrar, el disolvente
se separó a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se
hidrogenó en presencia de paladio/carbón (al 10% de concentración;
50% en agua). El catalizador se filtró, y se añadieron 500 ml de
agua y 10,1 g de carbonato sódico a la fase orgánica. Después de
extraer por agitación y separación de fase, la fase acuosa se agitó
a 100ºC durante 24 horas. Después de dejar reposar toda la noche, se
añadieron 500 ml de ácido clorhídrico 6 N, y la fase acuosa se
extrajo tres veces con
metil-terc-butil-éter. Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, y después de
filtrar se concentraron a vacío. El residuo se cristalizó usando
diisopropil-éter y el producto se filtró. Rendimiento: 2,88 g
(51%).
Se añadieron 9,44 ml de una solución de
n-butil-litio (2,5 M en hexano) a
-40ºC en atmósfera de argón, a una solución de 2,85 g (11,8 mmoles)
del compuesto del Ejemplo 1d en 60 ml de THF absoluto. Después de
agitar a -40ºC durante 30 minutos, la mezcla de reacción se
dejó calentar a 0ºC, y se añadió una solución de 3,6 g (11,8
mmoles) del compuesto del Ejemplo 1b en 20 ml de
N-metil-2-pirrolidona.
La mezcla de reacción se dejó calentar a 0ºC y después se agitó
durante 2 horas a 0ºC. Se añadieron 15 ml de ácido clorhídrico 1N y
el THF se separó a vacío. El residuo se vertió en 300 ml de
metil-terc-butil-éter. Se separaron
las fases, y la fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre
sulfato sódico, y después de filtrar se concentró a vacío. El
residuo se purificó por HPLC preparativo. Después de concentrar las
fracciones con producto y liofilizar, se obtuvieron 1,33 g (22%) del
compuesto del título.
Se añadieron sucesivamente 626 mg (1,91 mmoles)
de TOTU y 308 \mul (1,81 mmoles) de
N,N-diisopropiletilamina enfriando con hielo, a una
solución de 974 mg (1,91 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1e, y
305 mg (1,91 mmoles) de
(R)-3-amino-butanoato
de terc-butilo en 10 ml de DMF absoluta. Después de
agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, el disolvente se
separó a vacío, el residuo se disolvió en acetato de etilo y la
solución de acetato de etilo se lavó sucesivamente dos veces en
cada caso con una solución acuosa de KHSO_{4}/K_{2}SO_{4}, una
solución saturada de NaHCO_{3} y agua. Después de secar la fase
orgánica sobre sulfato sódico y filtrar, el disolvente se separó a
vacío y el residuo se cromatografió en gel de sílice usando acetato
de etilo/heptano (1/1). Después de concentrar las fracciones con
producto, se obtuvieron 880 mg (71%) del compuesto del título.
Se trataron 880 mg (1,35 mmoles) del compuesto
del Ejemplo 1f con 10 ml de ácido trifluoroacético al 90% de
concentración. Después de 15 minutos a temperatura ambiente, la
mezcla de reacción se concentró a vacío. El residuo se recogió en
diclorometano y se concentró a vacío. Este procedimiento se repitió
una segunda vez. El residuo obtenido se recogió en diclorometano, y
la fase de diclorometano se lavó tres veces con agua y se secó
sobre sulfato sódico. Después de filtrar y concentrar a vacío, el
residuo se recogió en acetonitrilo/agua y se liofilizó. Rendimiento:
730 mg (91%).
ES(+)-MS: 594,2
(M+H)^{+}
Se añadieron 1,64 ml de solución de hidróxido
sódico 0,1N en porciones con agitación a una suspensión de 100 mg
(0,168 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1 en 10 ml de agua, y la
mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de
filtrar y liofilizar el filtrado, se obtuvieron 104 mg (100%) del
compuesto del título.
ES(+)-MS: 594,3 (ácido
(R)-3-((S)-2-(4,4-dimetil-3-(4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencil)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)-2-(ciclopropilmetil)acetilamino)-3-metilpropiónico
+ H)^{+}, 616,2 (M^{+}).
Se trataron 535 mg (1,05 mmoles) del compuesto
del Ejemplo 1e en 15 ml de DMF absoluta enfriando con hielo con 140
mg (1,05 mmoles) de HOBT y 260 mg (1,26 mmoles) de DCC. La mezcla se
agitó durante 45 minutos enfriando con hielo, después se añadieron
112 mg (1,26 mmoles) de
(R)-3-amino-3-metilpropanol
y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después
de dejar reposar toda la noche, la mezcla se filtró, el filtrado se
concentró, el residuo se disolvió en acetato de etilo, y la fase de
acetato de etilo se lavó dos veces con solución acuosa de
KHSO_{4}/K_{2}SO_{4}. Después de secar sobre sulfato sódico,
filtrar y concentrar, el resto se cromatografió en gel de sílice
usando acetato de etilo. Después de concentrar las fracciones con
producto, se obtuvieron 423 mg (70%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 580,3
(M+H)^{+}
Se añadieron 5,68 g (149 mmoles) de hidruro de
litio y aluminio en porciones en atmósfera de argón a una solución
de 19,9 g (149 mmoles) de tricloruro de aluminio en 250 ml de éter
dietílico absoluto, y la mezcla se calentó a reflujo durante 30
minutos. Se añadieron lentamente gota a gota 6 g (37,7 mmoles) de
(R)-3-aminobutanoato de
terc-butilo en 50 ml de éter dietílico absoluto y la
mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 2 horas. Después se
añadieron gota a gota cuidadosamente 10,8 ml de agua y 25,3 g de
hidróxido potásico disueltos en 43 ml de agua, enfriando con hielo.
La mezcla se dejó reposar toda la noche a temperatura ambiente, la
fase de éter se decantó y el residuo se hirvió tres veces con
diclorometano. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre
sulfato sódico. Después de filtrar y separar el disolvente a vacío,
se obtuvieron 2,5 g (75%) del compuesto del título.
Se añadieron 131 mg (0,636 mmoles) de DCC a una
solución de 330 mg (0,555 mmoles) del compuesto del Ejemplo 1 y 125
mg (0,926 mmoles) de HOBT en 5 ml de DMF absoluta, la mezcla se
agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, y después se añadieron
47 \mul (0,555 mmoles) de una solución acuosa de amoniaco al 25%
de concentración. La mezcla se dejó reposar toda la noche a
temperatura ambiente, se añadieron 16 \mul adicionales de una
solución acuosa de amoniaco al 25% de concentración, y la mezcla se
agitó durante 4 horas. Después de filtrar, el filtrado se concentró
a vacío, el residuo se disolvió en acetato de etilo, y la fase de
acetato de etilo se lavó dos veces en cada caso con una solución
acuosa de KHSO_{4}/K_{2}SO_{4}, una solución saturada de
NaHCO_{3} y agua. Después de secar la fase orgánica sobre sulfato
sódico y filtrar, el disolvente se separó a vacío y el residuo se
cromatografió en gel de sílice usando acetato de etilo. Después de
concentrar las fracciones con producto y liofilizar, se obtuvieron
272 mg (82%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 593,3
Se añadieron 211 \mul de tribromuro de boro en
atmósfera de argón a una solución de 100 mg (0,169 mmoles) del
compuesto del Ejemplo 1 en 20 ml de diclorometano absoluto a -78ºC,
y la mezcla de reacción se dejó calentar a 0ºC enfriando con hielo.
Después de 30 minutos a 0ºC, se añadió agua cuidadosamente. Las
fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico.
Después de filtrar, separar el disolvente a vacío, purificar por
cromatografía por HPLC preparativo y liofilizar las fracciones con
producto, se obtuvieron 35 mg (36%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 580,2
(M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron 488 \mul de tribromuro de boro en
atmósfera de argón a una solución de 220 mg (0,39 mmoles) del
compuesto del Ejemplo 3 en 40 ml de diclorometano absoluto a -78ºC,
y la mezcla de reacción se dejó calentar a 0ºC enfriando con hielo.
Después de 30 minutos a 0ºC, se añadió agua cuidadosamente. Las
fases se separaron, y la fase orgánica se lavó cuatro veces con
agua, y se secó sobre sulfato sódico. Después de filtrar, separar
el disolvente a vacío, purificar por cromatografía por HPLC
preparativo y liofilizar las fracciones con producto, se obtuvieron
81 mg (37%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 566,3
(M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron gota a gota 7,55 ml (103,4 mmoles)
de cloruro de tionilo a una suspensión de 14,07 g (51,7 mmoles) de
alcohol
4-(3-fenilureido)-3-metoxibencílico
(preparado como se ha descrito en el Ejemplo 1, usando isocianato de
fenilo en lugar de isocianato de 2-metilfenilo) en
200 ml de diclorometano. Después la mezcla se agitó a temperatura
ambiente durante 2 horas, se dejó reposar toda la noche y se vertió
en 800 ml de heptano. El heptano se decantó del aceite separado, el
residuo se suspendió varias veces en heptano, y en cada caso se
decantó el heptano. El residuo se disolvió en 100 ml de
diclorometano y se añadió gota a gota a 800 ml de diisopropil-éter.
La mezcla se agitó durante 1 hora enfriando con hielo, y el
producto se filtró con succión, se lavó con diisopropil-éter y se
secó a vacío.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron 9,32 ml de solución de
n-butil-litio (2,5 M en hexano) a
-40ºC en atmósfera de argón, a una solución de 2,8 g (11,6 mmoles)
del compuesto del Ejemplo 1d, en 60 ml de THF absoluto. Después de
agitar a -40ºC durante 30 minutos, la mezcla de reacción se
dejó calentar a 0ºC, y se añadió una solución de 5,07 g (17,4
mmoles) del compuesto del Ejemplo 7a en 20 ml de
N-metil-2-pirrolidona.
La mezcla de reacción se dejó calentar a 0ºC, y después se agitó
durante 2 horas a 0ºC. Se añadieron 15 ml de ácido clorhídrico 1N,
se separó el THF a vacío y el residuo se vertió en 300 ml de
metil-terc-butil-éter. Se separaron
las fases, la fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato
sódico y, después de filtrar, se concentró a vacío. El residuo se
purificó por HPLC preparativo. Después de concentrar las fracciones
con producto y posterior liofilización, se obtuvieron 484 mg (8%)
del compuesto del título.
El compuesto se obtuvo de forma análoga al
Ejemplo 1, a partir de 120 mg (0,242 mmoles) del compuesto del
Ejemplo 7b y 38 mg (0,242 mmoles) de
(R)-3-aminobutanoato de
terc-butilo, por acoplamiento, purificación por
cromatografía, eliminación del éster terc-butílico y
liofilización. Rendimiento: 113 mg (81%).
ES(+)-MS: 580,2
(M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 3, a partir de 172 mg (0,348 mmoles) de compuesto del
Ejemplo 7b y 31 mg (0,417 mmoles) de
(R)-3-amino-3-metilpropanol
(véase Ejemplo 3), por acoplamiento, purificación cromatográfica
(acetato de etilo/heptano, 9/1), concentración de las fracciones con
producto y liofilización. Rendimiento: 117 mg (59%).
ES(+)-MS: 566,3
(M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron 129 mg (0,393 mmoles) de TOTU y 64
\mul (0,374 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina
enfriando con hielo, a una solución de 200 mg (0,393 mmoles) de
compuesto del Ejemplo 1d y 76,4 mg (0,393 mmoles) de
3-amino-3-(3-piridil)propionato
de etilo (para la preparación véase J.G. Rico et al., J.
Org. Chem. 58 (1993) 7948) en 5 ml de DMF absoluta. Después de
agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se separó el
disolvente a vacío y el residuo se recogió en acetato de etilo. La
solución de acetato de etilo se lavó sucesivamente dos veces en cada
caso con solución saturada de NaHCO_{3} y agua. Después de secar
la fase orgánica sobre sulfato sódico y filtrar, el disolvente se
separó a vacío y el residuo se cromatografió en gel de sílice
usando acetato de etilo. Después de concentrar las fracciones con
producto, se obtuvieron 195 mg (72%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 685,4
(M+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron 0,82 ml (0,82 mmoles) de una
solución acuosa de hidróxido de litio 1 M a una solución de 141 mg
(0,206 mmoles) del compuesto del Ejemplo 9 en 7,25 ml de metanol, y
la mezcla de reacción se dejó reposar toda la noche a temperatura
ambiente. Después el metanol se separó a vacío, el residuo se ajustó
a pH 2 usando ácido clorhídrico 1 N, y la mezcla se concentró a
vacío. El residuo se cromatografió en gel de sílice usando
diclorometano/metanol/ácido acético glacial/agua (95/5/0,5/0,5).
Después de concentrar las fracciones con producto, el residuo se
trató con 1,1 equivalentes de ácido clorhídrico 1 N y se liofilizó.
Rendimiento: 120 mg (89%).
ES(+)-MS: 657,4
(M+H)^{+}
Se añadieron 56 \mul (0,731 mmoles) de
isopropanol y 23,6 mg (0,193 mmoles) de
4-dimetilaminopiridina, a una suspensión de 80 mg
(0,122 mmoles) del compuesto del Ejemplo 11 en 3 ml de
diclorometano. Se añadieron 38 mg (0,183 mmoles) de DCC disueltos
en 1 ml de diclorometano a la solución transparente. Después de
agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la mezcla se dejó
reposar toda la noche a temperatura ambiente. Después de filtrar, el
filtrado se concentró a vacío y el residuo se cromatografió en gel
de sílice usando heptano/acetato de etilo (3/1) y acetato de
etilo/heptano (20/1). Después de concentrar las fracciones con
producto, se obtuvieron 70 mg (82%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 699,4
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 9, a partir de 200 mg (0,393 mmoles) de compuesto del
Ejemplo 1d y 76,4 mg (0,393 mmoles) de
3-amino-3-(4-piridil)propionato
de etilo (para la preparación véase J.G. Rico et al., J.
Org. Chem. 58 (1993) 7948). Rendimiento: 199 mg (74%).
ES(+)-MS: 685,4
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 10 a partir de 143 mg (0,209 mmoles) de compuesto del
ejemplo 12. Rendimiento: 126 mg (87%).
ES(+)-MS: 657,2
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 11 a partir de 83 mg (0,126 mmoles) de compuesto del Ejemplo
13. Rendimiento: 34,6 mg (39%).
ES(+)-MS: 699,4
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 9 a partir de 200 mg (0,393 mmoles) de compuesto del ejemplo
1d y 76,4 mg (0,393 mmoles) de
3-amino-3-(2-piridil)propionato
de etilo (para la preparación véase J.G. Rico et al., J.
Org. Chem. 58 (1993) 7948). Rendimiento: 226 mg (84%).
ES(+)-MS: 685,4
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 10 a partir de 170 mg (0,248 mmoles) de compuesto del
ejemplo 15, pero no se convirtió en el hidrocloruro por adición de
ácido clorhídrico. Rendimiento: 160 mg (98%).
ES(+)-MS: 657,4
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga al
Ejemplo 11 a partir de 90 mg (0,137 mmoles) de compuesto del ejemplo
16. Rendimiento: 39 mg (41%).
ES(+)-MS: 699,4
(M+H)^{+}
El compuesto se preparó de forma análoga a W.
Steglich et al., Chem. Ber. 107 (1974),
1488-1498. Para preparar hexafluoroacetona anhidra
(HFA), se añadió HFA trihidrato gota a gota en ácido sulfúrico
concentrado que se había calentado a 80ºC. El gas resultante se
lavó una vez más con ácido sulfúrico concentrado y después se pasó
al espacio de gas del matraz de reacción. Se ajustó un refrigerante
de reflujo relleno con acetona/hielo seco a la salida de gas del
matraz.
Como se ha descrito antes, se hizo reaccionar una
solución de 20 g (170 mmoles) de carbamato de
terc-butilo en 150 ml de diclorometano con HFA
gaseoso anhidro hasta que se saturó la solución de la reacción. El
disolvente se separó a vacío y el
2-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-1,1,1-3,3,3-hexafluoropropano
bruto resultante (rendimiento: 48,3 g, 100%) se usó en la siguiente
etapa de reacción.
Se añadieron gota a gota 13,6 g de anhídrido
trifluoroacético y posteriormente 5 gotas de quinolina a 0ºC, a una
solución de 50,05 g (176 mmoles) de
2-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-1,1,1,3,3,3-hexafluoropropano
en 300 ml de éter dietílico. Después de agitar a 0ºC durante 10
minutos, se añadieron gota a gota 27,2 g adicionales de anhídrido
trifluoroacético. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC (temperatura
externa) durante 30 minutos, subiendo la temperatura interna de la
mezcla a 8-10ºC. Después de enfriar a 0ºC se
añadieron 50,01 g (388 mmoles) de quinolina, empezando a cristalizar
la sal del ácido trifluoroacético de quinolina. Después de agitar
a 0ºC durante 2 horas, la mezcla se filtró. La sal residual se
separó del filtrado destilando a vacío en un recipiente colector
enfriado con acetona/hielo seco. Después el destilado se destiló
por una columna Vigreux. Se obtuvieron 36,2 g (77%) del compuesto
del título. Punto de ebullición: 126-130ºC.
Se añadieron 3,5 g (27,1 mmoles) de
(S)-\beta-ciclopropilalanina a
temperatura ambiente a una mezcla de 50 ml de dioxano y 5 ml de
ácido sulfúrico concentrado (preparado por adición gota a gota con
precaución del ácido a dioxano a 5ºC). La solución se transfirió a
un tubo con cierre hermético en el que se habían condensando 40 ml
de isobutileno a -78ºC. El tubo con cierre hermético se agitó a
temperatura ambiente durante 24 horas en un agitador. Después de
abrir el tubo con cierre hermético (enfriando), la mezcla de
reacción se introdujo cuidadosamente en una mezcla agitada,
enfriada a 0ºC, de 30 ml de trietilamina y 50 ml de agua. Después de
separar el exceso de isobutileno, el producto se extrajo con éter (2
x 50 ml). Después de secar las fases de éter sobre sulfato
magnésico, filtrar y separar el disolvente a vacío, el producto
bruto obtenido (aceite amarillo pálido) se usó en la siguiente
reacción sin purificación adicional. Rendimiento 4,2 g (84%).
Una mezcla de 10 g (54 mmoles) de éster
terc-butílico de la
(S)-\beta-ciclopropilalanina y 4,7
g (55,2 mmoles) de formiato de cianometilo en 100 ml de
diclorometano se agitó toda la noche a temperatura ambiente. Después
de separar el disolvente a vacío, el residuo obtenido se destiló a
vacío. Rendimiento: 8,8 g (76%). Punto de ebullición 210ºC/40
Pa.
Se añadieron 2,4 g (12,1 mmoles) de difosgeno a
-30ºC a una solución de 2,5 g (11,7 mmoles) de éster
terc-butílico del ácido
(S)-N-formil-\beta-ciclopropilalanina
y 2,5 g (24,7 mmoles) de trietilamina en 100 ml de diclorometano
seco. La solución de la reacción se dejó calentar a -15ºC en el
transcurso de 1 hora, y se continuó agitando a esta temperatura
hasta completar la reacción. Después la solución de la reacción se
lavó dos veces a temperatura ambiente con solución de
hidrogeno-carbonato sódico al 7% de concentración,
y la fase orgánica se secó sobre sulfato magnésico. Después de
filtrar, el disolvente se separó a vacío y el residuo se recogió en
70 ml de benceno. Se añadieron gota a gota 3,05 g (11,5 mmoles) de
2-terc-butoxi-4,4-bis(trifluorometil)-1,3-oxazabuta-1,3-dieno
en 10 ml de benceno a esta solución a temperatura ambiente. La
solución de la reacción se calentó toda la noche a 60ºC y después se
separó el benceno a vacío. El residuo se cromatografió en gel de
sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 8/1).
Rendimiento: 3,7 g (78%). Punto de fusión: 76-77ºC.
[\alpha]^{20} = -28ºC (c = 1, CHCl_{3}).
A una solución de 7 g (17,3 mmoles) del compuesto
del Ejemplo 18d en 20 ml de diclorometano, se añadió a 10ºC una
mezcla de 30 ml ácido trifluroacético y 50 ml de diclorometano, y
la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. Después
de separar el ácido trifluoroacético y diclorometano a vacío, se
obtuvieron 5,9 g (98%) del compuesto del título.
Punto de fusión: 123-125ºC,
[\alpha]^{22} = -26º (c = 2, metanol).
Se añadieron 3,2 ml de una solución de
n-butil-litio (2,5 M en hexano) a
-40ºC en atmósfera de argón a una solución de 1,39 g (4 mmoles) del
compuesto del Ejemplo 18e en 40 ml de THF absoluto. La mezcla de
reacción se dejó calentar a 0ºC con agitación, se añadió una
solución de 2,43 g (8 mmoles) de cloruro de
4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencilo
en 20 ml de THF absoluto, y la mezcla de reacción se agitó a
temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron 20 ml de ácido
clorhídrico 1 N y se separó el THF a vacío. La fase acuosa se
extrajo dos veces con
metil-terc-butil-éter. Las fases
orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, y después de
filtrar, se concentraron a vacío. El residuo se purificó por HPLC
preparativo. Después de concentrar las fracciones de producto y
liofilizar, se obtuvieron 1,41 g (57%) del compuesto del
título.
El compuesto del título se puede obtener como se
describe en los Ejemplos 1f y 1g, a partir del compuesto del Ejemplo
18f y (R)-3-aminobutanoato de
terc-butilo por acoplamiento y posterior escisión
del éster terc-butílico.
Se añadieron 748 mg (2,28 mmoles) de TOTU
(tetrafluoroborato de
O-((ciano(etoxicarbonil)metilen)amino)-N,N,N',N'-tetrametiluronio)
y 368 \mul de
N,N-diisopropil-etilamina a 0ºC a
una solución de 1,41 g (2,28 mmoles) de compuesto del Ejemplo 18f y
442 mg (2,28 mmoles) de
(S)-3-amino-3-fenilpropionato
de etilo en 20 ml de dimetilformamida absoluta (DMF). Después de
agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, se separó la DMF a
vacío, el residuo se recogió en acetato de etilo, y la solución de
acetato de etilo se lavó sucesivamente con una solución acuosa de
KHSO_{4}/K_{2}SO_{4}, una solución saturada de NaHCO_{3} y
agua. Después de secar la fase orgánica sobre sulfato sódico y
filtrar, el disolvente se separó a vacío, y el residuo se
cromatografió en gel de sílice usando heptano/acetato de etilo
(3/2). Concentrando las fracciones con producto, se obtuvieron 1,48
g (82%) del compuesto del título.
Una solución de 1,46 g (1,84 mmoles) de compuesto
del Ejemplo 19a en 40 ml de
N-metil-2-pirrolidona
y 20 ml de ácido clorhídrico 6N se calentó a 60ºC durante 6 horas.
Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se
vertió en 300 ml de agua, y el precipitado se filtró con succión, se
lavó con agua y se secó sobre pentóxido de fósforo. El producto
bruto se cromatografió dos veces en gel de sílice (eluyente:
diclorometano/metanol/ácido acético/agua = 95/5/0,5/0,5). Después de
concentrar las fracciones con producto, el residuo se recogió en
diclorometano y la fase orgánica se lavó con agua y se secó sobre
sulfato sódico. Después de filtrar, separar el disolvente a vacío y
liofilizar, se obtuvieron 1,19 g (85%) del compuesto del
título.
ES(+)-MS: 764,2
(M+H)^{+}
La preparación se llevó a cabo de forma análoga a
W. Duczek et al., Synthesis 1996,
37-38. Se añadió una solución de 4,04 g (40 mmoles)
de trietilamina en 10 ml de diclorometano a 0ºC, a una solución de
8,94 g (40 mmoles) de hidrocloruro del éster
terc-butílico de L-leucina y 3,4 g
(40 mmoles) de formiato de cianometilo en 60 ml de diclorometano.
La solución de la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente,
se agitó toda la noche a temperatura ambiente y después se lavó dos
veces con solución saturada de NaCl. Las fases se separaron y la
fase orgánica se secó sobre sulfato magnésico. Después de filtrar y
separar el disolvente a vacío, el residuo obtenido se destiló a
vacío. Rendimiento: 7,5 g (87%). Punto de ebullición: 118ºC/2,7
Pa.
Se añadieron 2,4 g (12,1 mmoles) de difosgeno a
-30ºC a una solución de 2,5 g (11,6 mmoles) de éster
terc-butílico de la
N-formil-L-leucina y
2,5 g (24,7 mmoles) de trietilamina en 100 ml de diclorometano
seco. La solución de la reacción se dejó calentar a -10ºC en el
transcurso de 1 hora, y se continuó agitando a esta temperatura
hasta completar la reacción. Después la solución de la reacción se
lavó dos veces a temperatura ambiente con solución de
hidrógeno-carbonato sódico al 7% de concentración.
Las fases se separaron y la fase orgánica se secó sobre sulfato
magnésico. Después de filtrar el disolvente se separó a vacío y el
residuo se recogió en 70 ml de benceno. Se añadieron gota a gota a
esta solución 3 g (11,3 mmoles) de
2-terc-butoxi-4,4-bis(trifluorometil)-1,3-oxazabuta-1,3-dieno
en 10 ml de benceno, a temperatura ambiente. La solución de la
reacción se calentó a 60ºC toda la noche y después se separó el
benceno a vacío. Después de cromatografía del residuo en gel de
sílice (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo =10/1)), se
obtuvieron 3,7 g (80%) del compuesto del título. Punto de fusión:
105-106ºC- [\alpha]^{20} = -24º (c = 1,
CHCl_{3}).
Se añadió una solución de 7 g (17,2 mmoles) del
compuesto del Ejemplo 20b en 20 ml de diclorometano a 10ºC, a una
mezcla de 30 ml de ácido trifluoroacético y 50 ml de diclorometano
y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16
horas. Después de separar el ácido trifluoroacético y diclorometano
a vacío, se obtuvieron 6,0 g (99%) del compuesto del título. Punto
de fusión: 154-156ºC. [\alpha]^{22} =
-23º (c = 2, metanol).
El compuesto del título se preparó como se
describe en los Ejemplos 1f y 1g, a partir de 500 mg (0,809 mmoles)
de ácido
(S)-2-(4,4-bis(trifluorometil)-3-(4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencil)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)-2-(metilpropil)acético
de fórmula
que se había preparado a partir de
ácido
(S)-2-(4,4-bis(trifluorometil)-
2,5-dioxoimidazolidin-1-il)-2-(metilpropil)acético
y cloruro de
4-(3-(2-metil-fenil)ureido)-3-metoxibencilo
como se describe en el Ejemplo 18f, y 128 mg (0,809 mmoles) de
(R)-3-aminobutanoato de
terc-butilo. Después de acoplamiento, purificación
por cromatografía en gel de sílice (eluyente: heptano/acetato de
etilo = 3/2) y escisión del éster de terc-butilo,
se obtuvieron 299 mg (53%) del compuesto del
título.
ES(+)-MS: 704,5
(M+H)^{+}
Se añadieron 1,89 g (5,77 mmoles) de TOTU y 932
\mul de N,N-diisopropiletilamina a 0ºC a una
solución de 3,57 g (5,77 mmoles) de ácido
(S)-2-(4,4-bis(trifluorometil)-3-(4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencil)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)-2-(metilpropil)acético
(preparado a partir de ácido
(S)-2-(4,4-bis(trifluorometil)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)-2-(metilpropil)acético
y cloruro de
4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencilo
como se describe en el Ejemplo 18f), y 1,11 g (5,77 mmoles) de
(S)-3-amino3-fenilpropionato
de etilo en 30 ml de DMF absoluta. Después de agitar a temperatura
ambiente durante 1 hora, se separó la DMF a vacío, el residuo se
recogió en acetato de etilo y la solución de acetato de etilo se
lavó sucesivamente con solución acuosa de
KHSO_{4}/K_{2}SO_{4}, una solución saturada de NaHCO_{3} y
agua. Después de secar la fase orgánica sobre sulfato sódico y
filtrar, el disolvente se separó a vacío y el residuo se
cromatografió en gel de sílice usando acetato de etilo/heptano
(2/3). Después de concentrar las fracciones con producto, se
obtuvieron 3,26 g (71%) del compuesto del título.
Se añadieron 45 ml de ácido clorhídrico 6N a una
solución de 3,25 g (4,09 mmoles) del compuesto del Ejemplo 21a en 90
ml de
N-metil-2-pirrolidona,
y la mezcla se calentó a 60ºC durante 6 horas. Después de enfriar a
temperatura ambiente, la mezcla se vertió en 60 ml de agua. El
precipitado se filtró con succión, se lavó con agua y se secó sobre
pentóxido de fósforo. Después de purificar por cromatografía dos
veces el producto bruto en gel de sílice (eluyente:
diclorometano/metanol/ácido acético/agua = 95/5/0,5/0,5) y
concentrar las fracciones con producto, el residuo se recogió en
diclorometano, La fase orgánica se lavó dos veces con agua y se secó
sobre sulfato magnésico. Después de filtrar, concentrar y
liofilizar, se obtuvieron 2,7 g (86%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 766,2
(M+H)^{+}
Se añadieron 1,24 ml de solución de hidróxido
sódico 1N (diluido con 20 ml de agua) con agitación a una suspensión
de 1 g (1,3 mmoles) del compuesto del Ejemplo 21 en 100 ml de
acetonitrilo y 200 ml de agua. Después de liofilizar la solución,
se obtuvieron 1,01 g (79%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 766,2 (ácido
3-((S)-2-(4,4-bis(trifluorometil)-3-(4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencil)-2,5-dioxoimidazolidin-1-il)-2-(2-metilpropil)-acetilamino)-3-fenilpropiónico+H)^{+}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
A partir de 720 mg de compuesto del Ejemplo 19b,
de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 22, se
obtuvieron 720 mg (99%) del compuesto del título.
ES(+)-MS: 764,3 (ácido
(S)-3-((S)-2-(4,4-bis(trifluorometil)-3-(4-(3-(2-metilfenil)ureido)-3-metoxibencil)-2,5-
dioxoimidazolidin-1-il)-2-(ciclopropilmetil)-acetilamino)-3-fenilpropiónico+H)^{+}
dioxoimidazolidin-1-il)-2-(ciclopropilmetil)-acetilamino)-3-fenilpropiónico+H)^{+}
El método de ensayo usado para la actividad de
los compuestos de fórmula I en la interacción entre
VCAM-1 y VLA-4 es el ensayo descrito
a continuación, que es específico para esta interacción. Los
componentes de unión celular, es decir, las integrinas
VLA-4, son suministradas en su forma natural como
moléculas de superficie en células humanas U937 (ATCC CRL 1593),
que pertenecen al grupo de los leucocitos. Como componentes de unión
específicos, se usan proteínas de fusión recombinantes solubles
preparadas por ingeniería genética, que constan del dominio
extracitoplasmático de VCAM-1 humano y la región
constante de una inmunoglobulina humana de subclase IgG1.
Se usó una construcción genética para expresar el
dominio extracelular de VCAM-1 humano, combinado con
la secuencia genética de la cadena pesada de la inmunoglobulina
humana IgG1 (regiones bisagra, CH2 y CH3) (de Dr. Brian Seed,
Massachusetts General Hospital, Boston, USA; Damle and Aruffo,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1991, 88, 6403). La proteína de
fusión soluble
hVCAM-1(1-3)-IgG
contenía los tres dominios extracelulares de amino terminal tipo
inmunoglobulina de VCAM-1 humano (Damle and Aruffo,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1991, 88, 6403).
CD4-IgG (Zettlmeissl et al., DNA and Cell
Biology 1990, 9, 347) servía como una proteína de fusión para
testigos negativos. Las proteínas recombinantes se expresaron como
proteínas solubles después de la transfección de DNA mediada por
DEAE/dextrano en células COS (ATCC CRL 1651) de acuerdo con
procedimientos patrón (Ausubel et al., Current protocols
in molecular biology, John Wiley & Sons, Inc., 1994).
2.1 Se incubaron placas de ensayo de
microvaloración de 96 pocillos (Nunc Maxisorb) a temperatura
ambiente durante 1 hora con 100 \mul/pocillo de una solución de
anticuerpo de IgG anti-humano de cabra (10 \mug/ml
en tris 50 mM, pH 9,5). Después de separar la solución de
anticuerpo, se llevó a cabo un lavado con PBS.
2.2 Se incubaron 150 \mul/pocillo de un tampón
de bloqueo (BSA al 1% en PBS) en las placas a temperatura ambiente
durante 0,5 horas. Después de separar el tampón de bloqueo, se
llevó a cabo un lavado con PBS.
2.3 Se incubaron 100 \mul por pocillo de un
líquido sobrenadante de cultivo celular de células COS
transfectadas, en placas a temperatura ambiente durante 1,5 horas.
Las células COS se transfectaron con un plásmido que codifica los
tres dominios N-terminales tipo inmunoglobulina de
VCAM-1, acoplados a la parte Fc de la IgG_{1}
humana
(hVCAM-1(1-3)-IgG).
El contenido de
hVCAM-1(1-3)-IgG
era aproximadamente 0,5-1 \mug/ml. Después de
separar el líquido sobrenadante del cultivo, se llevó a cabo un
lavado con PBS.
2.4. Las placas se incubaron a temperatura
ambiente durante 20 minutos con 100 \mul/pocillo de tampón de
bloqueo del receptor Fc (1 mg/ml
\gamma-globulina, NaCl 100 mM, MgCl_{2} 100
\muM, MnCl_{2} 100 \muM, CaCl_{2} 100 \muM, 1 mg/ml de
BSA en HEPES 50 mM, pH 7,5). Después de separar el tampón de bloqueo
del receptor Fc, se llevó a cabo un lavado con PBS.
2.5 Se introdujeron 20 \mul de tampón de unión
(NaCl 100 mM, MgCl_{2} 100 \muM, MnCl_{2} 100 \muM,
CaCl_{2} 100 \muM, 1 mg/ml de BSA en HEPES 50 mM, pH 7,5), las
sustancias que se van a ensayar se añadieron en 10 \mul de tampón
de unión y se llevó a cabo la incubación durante 20 minutos.
Sirvieron como testigo anticuerpos frente a VCAM-1
(BBT, No. BBA6) y frente a VLA-4 (Immunotech, No.
0764).
2.6 Se incubaron células U937 durante 20 minutos
en un tampón de bloqueo de receptor Fc, y después se añadieron con
pipeta en una concentración de 1 x 10^{6}/ml y en una cantidad de
100 \mul por pocillo (volumen final 125 \mul/pocillo).
2.7 Las placas se sumergieron lentamente con un
ángulo de 45º en tampón de parada (NaCl 100 mM, MgCl_{2} 100
\muM, MnCl_{2} 100 \muM, CaCl_{2} 100 \muM en tris 25 mM,
pH 7,5) y se agitaron. Se repitió el procedimiento.
2.8 Después se incubaron 50 \mul/pocillo de
una solución colorante (16,7 \mug/ml de colorante Hoechst 33258,
formaldehído al 4%, Triton X-100 al 0,5% en PBS) en
las placas durante 15 minutos.
2.9 Las placas se agitaron y se sumergieron
lentamente con un ángulo de 45º en un tampón de parada (NaCl 100 mM,
MgCl_{2} 100 \muM, MnCl_{2} 100 \muM, CaCl_{2} 100 \muM
en tris 25 mM, pH 7,5). Se repitió el procedimiento. Después, con
el líquido presente (tampón de parada), se midieron las placas en un
citofluorímetro (Millipore) (sensibilidad: 5, filtro: longitud de
onda de excitación: 360 nm, longitud de onda de emisión: 460
nm).
La intensidad de la luz emitida por las células
U937 teñidas es una medida del número de células U937 adheridas a
hVCAM-1(1-3)-IgG
y que quedan en la placa, y por lo tanto una medida de la capacidad
de la sustancia de ensayo añadida para inhibir esta adhesión. A
partir de la inhibición de la adhesión a diferentes concentraciones
de la sustancia de ensayo, se calculó la CI_{50} que conduce a un
50% de inhibición de la adhesión.
Los siguientes resultados se obtuvieron en el
ensayo de adhesión celular U937/VCAM-1 (valores de
CI_{50} en nM (nanomoles/litro)).
| Compuesto de ejemplo nº | CI_{50} (nM) |
| 1 | 0,3 |
| 2 | 0,5 |
| 5 | 25,9 |
| 7 | 2,1 |
| 10 | 0,6 |
| 13 | 1,8 |
| 16 | 0,9 |
| 19 | 4,4 |
Las propiedades farmacológicas de los compuestos
de fórmula I también se pueden investigar en los siguientes
modelos.
En el modelo de adhesión de leucocitos en la
rata, se investiga la influencia de los compuestos de fórmula I en
la adhesión de leucocitos en vénulas de rata. La adhesión de
leucocitos en el endotelio de vénulas postcapilares se considera una
etapa importante en reacciones inflamatorias (J.M. Harlan,
Blood 1985, 65, 513). En el reclutamiento de leucocitos de
la sangre en zonas inflamadas, se produce una secuencia dinámica
bien coordinada de sucesos en la que las citoquinas quimiotácticas y
las moléculas de adhesión celular juegan un papel activo. Se ha
encontrado que las interacciones
VCAM-1/VLA-4 juegan un papel crucial
en la adhesión y emigración de leucocitos, y en la mayor
permeabilidad de los vasos a macromoléculas que son inducidas por
diferentes sustancias mediadoras y citoquinas (D. Seiffge, Int.
J. Microcirc. 1995, 15, 301). En el presente modelo, se produce
una inflamación generalizada o artritis reumatoide que conduce a una
adhesión de los leucocitos y a su emigración a zonas enfermas del
órgano, por inyección local o sistémica de endotoxinas, por ejemplo
zimosan, toxinas bacterianas tales como lipopolisacáridos (LPS) o
adyuvante de Freund. Se determina la mayor adhesión al endotelio de
las vénulas producida por la endo-
toxina.
toxina.
Para determinar la adhesión de leucocitos, se usa
un microscopio de cámara invertida (Zeiss) que está equipado con un
sistema de vídeo. Se inyecta zimosan o endotoxinas bacterianas en
ratas macho Sprague-Dawley (peso corporal
aproximadamente 250 g) bajo premedicación con halotano. Los animales
testigo recibieron un volumen idéntico de solución salina al 0,9% de
concentración. Después se administra a los animales la sustancia de
ensayo vía subcutánea u oral como una dosis individual o como una
dosis múltiple. Para llevar a cabo la medición, las ratas se
anestesian por inyección intramuscular de 1,25 g/kg de uretano. Se
deja que respiren espontáneamente por un tubo traqueal. La
temperatura corporal se mantiene a 37ºC mediante una pastilla
calefactora regulada. Se expone cuidadosamente el mesenterio en una
ventana con termostato de la fase del microscopio mediante una
incisión hipogástrica y se recubre con parafina líquida a 37ºC. La
zona ileocecal del mesenterio se mantiene en posición usando tres
agujas de punta roma y arcilla plástica. Después de un periodo de
30 minutos de equilibrado, durante el cual se deja que el tejido se
estabilice, se determina la adhesión de leucocitos en las vénulas
postcapilares de 20-30 \mum de diámetro y
aproximadamente 100 \mum de longitud, contando en
2-3 segmentos de las vénulas en intervalos de 10
minutos durante 1 hora. Se considera que un leucocito se adhiere al
endotelio si está fijo durante más de 30 segundos. Después del
experimento, se determina el recuento sistémico de leucocitos y el
contenido de fibrinógeno de la sangre. La inhibición de la adhesión
de leucocitos por la sustancia de ensayo se indica por la
disminución (en %) del número de leucocitos adherentes en los
animales tratados comparado con el número en los animales
testigo.
En el modelo de hipersensibilidad de tipo
retardado (DTH, por sus siglas en inglés), se investiga la acción
antialérgica o antiinflamatoria de los compuestos de fórmula I. La
DTH es una reacción inflamatoria de la piel que es inducida por
sensibilización con sustancias antígenas. Con el fin de determinar
la correspondiente reacción inflamatoria y el reclutamiento de
leucocitos en la zona inflamada in vivo, se ensayan las
sustancias en el siguiente modelo de DTH en el ratón (véase también
T.B. Issekutz, J. Immunol. 1991, 147, 4178).
Grupos de ratones BALB/c hembras (peso corporal
aproximadamente 20 g) se sensibilizan vía epicutánea en una parte
afeitada de la piel con 150 \mul de una solución al 3% de
concentración de oxazolona, que induce una fuerte reacción
inflamatoria de DTH. 6 días después, la reacción se estimula por
administración de 20 \mul de una solución de oxazolona al 1% de
concentración en la oreja derecha de los animales. Las sustancias
de ensayo se administran vía subcutánea u oral, en cada caso 44
horas antes del estímulo de la reacción, 20 horas antes del
estímulo y 4 horas después del estímulo. Directamente antes del
estímulo de la reacción y 24 horas después del estímulo, se mide en
la oreja derecha el grosor de la oreja alterada debido al
hinchamiento inflamatorio de la oreja, usando un micrómetro
Mitutoyo Engineering. Se determina la diferencia entre estas dos
medidas para cada animal del grupo. Se comparan por una parte los
valores medios de las diferencias de un grupo de animales tratado
con la sustancia de ensayo, y por otra parte de un grupo testigo no
tratado. Como medida del efecto de la sustancia, se indica el
porcentaje de inhibición de hinchamiento de la oreja.
El efecto en la función pulmonar y la acción
antiasmática de los compuestos de fórmula I se puede determinar en
un modelo de cobayo que sigue el método descrito por G. Mosacevic,
Arch. Toxicol. 1975, 34,1. Para esto, se llevan a cabo las
preparaciones técnicas para la investigación de acuerdo con los
detalles descritos por Moacevic. Se usan cobayos macho albinos con
un pero corporal de 300-500 g. Los animales se
ponen en un pletismógrafo (de FMI) y se registran tres valores
iniciales de los parámetros de velocidad respiratoria y amplitud
respiratoria. En este modelo la respiración asmática se caracteriza
por la disminución de la amplitud respiratoria (= disminución del
volumen respiratorio debido a la bronquioconstricción) y aumento de
la velocidad respiratoria (=reacción refleja). Este estado en los
pacientes de asma se conoce como disnea.
Los cobayos albinos se sensibilizan 22 días antes
de empezar el estudio con 1 ml por animal de una solución de
ovalbúmina al 0,1% de concentración en dos días sucesivos. El ataque
de asma experimental es inducido por inhalación de una solución de
ovalbúmina al 0,3% de concentración durante 1 minuto. Después de una
fase de recuperación de 40-60 minutos, los animales
inhalan la sustancia de ensayo en forma de una solución acuosa.
Inmediatamente después, se administra solución de ovalbúmina al
0,3% de concentración durante 1 minuto. En la siguiente fase de
recuperación de 30 minutos, los animales respiran aire normal. Este
procedimiento se repite dos veces. Si los ataques de asma amenazan
la vida, se administra oxígeno a los animales.
Se puede determinar el efecto antiasmático en
ovejas, por ejemplo, como describen Abraham et al., J.
Clin. Invest. 1994, 93, 776.
Los ratones de tipo salvaje de cepa C57BL/6J son
suministrados por el servicio de cría de Charles River Wiga GMbH
(Sulzfeld, FRG) y los ratones KO homozigotos de cepa
C57BL/6J-ApoE tm 1 Unc (ApoE KO) son suministrados
por The Jackson Laboratory (Maine, USA). Todos los ratones tienen
entre 10 y 12 semanas de edad al inicio del experimento y se
mantienen en habitaciones completamente climatizadas a una
temperatura de 22ºC. La fase de día/noche del programa de luz
controlado se ajusta a un periodo de 12 horas. Los ratones primero
se anestesian con 60 mg/kg de peso corporal de pentobarbital sódico
i.p. Después cada animal recibe adicionalmente 0,01 mg/10g de peso
corporal de xilazina i.m.
Los ratones se fijan en posición supina, y se
afeitan y desinfectan las superficies interiores de ambas patas
traseras. Después se abre la piel de la cara interior del muslo
izquierdo mediante una incisión longitudinal de aproximadamente 1 cm
y se aísla la arteria femoral del tejido que la rodea y de la vena
femoral y el nervio ciático. Después se corta un trozo de tubo de
polietileno de aproximadamente 2 mm de longitud (diámetro interno
0,58 mm, diámetro externo 0,965 mm, Becton Dickinson, Sparks, MD,
USA) de acuerdo con la longitud y se pone alrededor de la arteria
femoral y se fija con hilo Prolene (7/0, 0,5 métrico de Ethicon,
Norderstedt, FRG). Posteriormente se vuelve a cerrar la piel
mediante una sutura continua. La pata trasera derecha se opera de
manera análoga, pero sin poner un brazal alrededor de la arteria
femoral. Posteriormente el animal se devuelve a su jaula. A partir
de la operación, los animales se tratan diariamente con la
sustancia de ensayo.
Al final del experimento, los ratones se
anestesian otra vez con 60 mg/kg de peso corporal de pentobarbital
sódico i.p., y 0,01 mg/10 g de peso corporal de xilazina i.m. Para
fijar los vasos in situ, cada ratón recibe después una
inyección de solución de formalina al 4% de concentración en la
aorta abdominal. Después se quitan las arterias femoral derecha e
izquierda. En el lado izquierdo, se quita la parte de la arteria
que incluye la sección de aproximadamente 1 mm próxima al brazal, la
sección encerrada por el propio brazal y la sección del vaso que
dista 1 mm. En el lado derecho, esta parte corresponde a la sección
que sólo se aísla durante la operación, pero no se encierra con un
brazal.
La parte de las arterias femoral izquierda y
derecha fijada en solución de formalina al 4% de concentración se
sumerge en parafina. Se preparan una serie de secciones
transversales de tejido de la sección de arteria izquierda encerrada
por el brazal, y de la correspondiente sección de la arteria
derecha testigo, que después se tiñen con hematoxilina y eosina
para el análisis morfométrico asistido por software (LeicaQWin de
Leica Imaging Systems, Cambridge, GB).
Se evalúan para cada ratón tres secciones
transversales de tejido de la zona de la arteria femoral izquierda
encerrada por el brazal y tres secciones transversales de tejido de
la correspondiente zona de la arteria derecha testigo. Después de
marcar la lámina elástica externa, la lámina elástica interna y el
borde entre el lumen y el endotelio, se calculan las siguiente
áreas con el programa de análisis: lumen, neoíntima y media. El
tamaño de estas áreas se indica en unidades de \mum^{2}. El
efecto de un compuesto se indica por la reducción de la proporción
neoíntima/media en comparación con el grupo testigo.
En el modelo de trasplante de corazón alogénico,
se llevan a cabo transplantes entre dos cepas de ratas genéticamente
incompatibles. Para este propósito, se usan ratas
Wistar-Furth como animales donantes y ratas Lewis
como animales receptores. Los animales se obtienen del servicio de
cría de Charles River Wiga GmbH (Sulzfeld, FRG). Ratas macho Lewis
de 270-330g y de 2,5 a 3 meses de edad, y ratas
Wistar-Furth macho de 200-250 g y
de 1,5 a 2 meses de edad, se mantienen en condiciones controladas
constantemente (temperatura 19-22ºC; humedad
relativa 50-55%; la fase de día/noche del programa
de luz controlada se ajusta a un periodo de 12 horas).
Para la operación, las ratas recibieron una
combinación de 3,3 mg/kg de peso corporal de xilazina y 115 mg/kg
de peso corporal de ketamina. Después del inicio de la acción
anestésica, se abre el abdomen del receptor mediante incisión. Se
separan la aorta abdominal y la vena cava inferior entre la arteria
y la vena renal y los vasos iliolumbales. Después la aorta se cierra
cranealmente usando un clip de vasos. Se pone un hilo de seda
caudalmente alrededor de ambos vasos y se aprieta. Hay un segundo
hilo de seda sin apretar alrededor del extremo craneal de la vena
cava inferior. Después de abrir la cavidad abdominal, el animal
donante se mata cortando los vasos abdominales mayores. Este
momento señala el inicio del periodo isquémico del órgano del
donante. Después se abre el diafragma y se saca el corazón. La vena
cava superior e inferior se liga y corta en el lado de la ligadura
distal del corazón. Se lleva a cabo una ligadura de masa de las
venas pulmonares usando un hilo de seda. Después la arteria pulmonar
y aorta se sacan con fórceps y se cortan. Después se eliminan los
residuos de sangre en el sistema vascular del trasplante. Después
se levanta el corazón, se extrae junto con la ligadura de masa del
pulmón y se almacena en solución de NaCl fisiológica fría durante
de uno a dos minutos. Después se lleva a cabo una anastomosis
lateroterminal de la aorta y de la arteria pulmonar del órgano del
donante con la arteria abdominal y vena cava inferior
respectivamente del animal receptor. Después de completar la
anastomosis de vasos, se liberan sucesivamente la circulación venosa
seguida de la circulación arterial. Finalmente, se vuelve a cerrar
la cavidad abdominal, usando una sutura de peritoneo/músculo y una
sutura de piel. Después de liberar la circulación sanguínea y una
corta fase de recuperación, el corazón transplantado late con una
velocidad sinusal de aproximadamente 100 a 120 latidos/minuto. Se
administra ciclosporina A (CSA) para la inmunodepresión vía
subcutánea (s.c.) u oral con el agua de beber. Después de superar
el periodo de rechazo agudo, la dosis se puede reducir de 25 mg/kg
de peso corporal a partir del 15º día p.op. a 5 mg/kg de peso
corporal. Las inyecciones se realizan una vez al día por la mañana
en la zona del cuello de los animales.
El cambio de administrar CSA s.c. a administrar
CSA oral se produce el día 22 p.op. con el fin de haber superado de
forma segura el periodo de rechazo agudo. La sustancia que se va a
investigar se administra durante 100 días a partir de la operación.
Después de finalizar el intervalo de tiempo de observación (100
días), los animales se anestesian y se abre la cavidad abdominal.
Después se extrae el corazón protegiendo los cabos de vasos de los
vasos abdominales, se corta en láminas y se almacenan en solución de
formalina al 4%. Después de fijar las láminas de corazón, se
sumergen en parafina y se tiñe la elástica de acuerdo con la técnica
histológica de van Gieson patrón. Se lleva a cabo la clasificación
de la proliferación de neoíntima y la constricción del lumen
vascular asociado con ésta, de acuerdo con Adams et al.
(Transplantation 1993, 56, 794). Se clasifican las adhesiones
entre la lámina elástica interna y el endotelio. El colorante
especial de acuerdo con van Gieson que enfatiza selectivamente las
fibras elásticas facilita la valoración. El efecto de un compuesto
se indica por la reducción de la proliferación de neoíntima, y por
lo tanto de la aterosclerosis del trasplante en comparación con el
grupo testigo.
Los ratones KO homozigotos de la cepa
C57BL/6J-ApoE tm 1 Unc (ApoE KO) son suministrados
por The Jackson Laboratory (Maine, USA). Todos los ratones tienen
entre 10 y 12 semanas de edad al inicio del experimento, y se
mantienen en lechos patrón para animales de laboratorio (Altromin,
Lage, FRG) en habitaciones completamente climatizadas a una
temperatura de 22ºC. La fase de día/noche del programa de luz
controlado se ajusta a un periodo de 12 horas. Los animales se
tratan con la sustancia de ensayo durante 4 meses. Al final del
experimento, se anestesiaron los ratones con 60 mg/kg de peso
corporal de pentobarbital sódico i.p. y 0,01 mg/10 g de peso
corporal de xilazina i.m. Después se extraen el corazón y arco
aórtico y la aorta torácica descendente y se fijan en solución de
formalina al 4% de concentración. La aorta descendente se trata con
Aceite Rojo O para teñir lesiones con grasa. El análisis
morfométrico de las lesiones con grasa se lleva a cabo usando un
microscopio (tipo Leitz DM RBE de Leica, Bensheim), con una cámara
unida que tiene una unidad de control (tipo CF 15 MCC, Kappa
Me\betatechnik, Gelichen) y un ordenador (Leica, Bensheim). Las
mediciones se llevan a cabo con ayuda de un programa de ordenador
para análisis de imágenes (LeicaQWin de Leica Imaging Systems,
Cambridge, GB). Se cortan el corazón y el arco aórtico
longitudinalmente y se tiñen con hematoxilina y eosina para el
análisis morfométrico. En cada caso se analizan
15-20 secciones. Se estudian los macrófagos y
linfocitos T inmunohistoquímicamente en otras secciones. El efecto
de un compuesto se indica por la reducción de la formación de placa
en la aorta en comparación con el grupo testigo.
Se obtienen ratas macho Wistar del servicio de
cría Charles River Wiga GmbH (Sulzfeld, FRG) con una edad de 2,5 a 3
meses y que tienen un peso corporal de 270-330 g.
Los animales se mantienen en condiciones controladas constantemente
(temperatura 19-22ºC; humedad relativa
50-55%; la fase de día/noche del programa de luz
controlado se ajusta a un periodo de 12 horas). Para la operación,
las ratas reciben una combinación de 3,3 mg/kg de peso corporal de
xilazina y 115 mg/kg de peso corporal de ketamina. Después los
animales se intuban y ventilan con oxígeno al 30%. Se afeita el
tórax, se desinfecta y abre mediante una toracostomía lateral
izquierda. La arteria coronaria izquierda se liga permanentemente
2-3 mm por debajo de la aurícula izquierda del
corazón durante 48 horas o 4 semanas, o se liga durante 30 minutos
y se realiza reperfusión durante 47,5 horas o 4 semanas.
Después de la operación se vuelve a cerrar el
tórax y los animales se desentuban después de empezar la
respiración espontáneamente. La sustancia de ensayo se administra 30
minutos después de la ligadura o inmediatamente antes de la
reperfusión. Después los animales se tratan diariamente con la
sustancia de ensayo. Al final del experimento, los animales se
anestesian otra vez con una combinación de 3,3 mg/kg de peso
corporal de xilazina y 115 mg/kg de peso corporal de ketamina. Para
analizar el movimiento de las paredes, se investigan los animales en
cuyos corazones se ha realizado reperfusión, mediante "Formación
de imágenes de resonancia magnética nuclear". En los animales con
corazones sin reperfusión, se introduce una punta de catéter por la
arteria carótida derecha para medir la presión ventricular y la
contracción en la cámara izquierda del corazón. Después se extrae el
corazón de todos los animales y se realiza perfusión de una manera
retrógrada en un aparato Langendorff por la aorta con solución
caliente Azul de Evans al 1% de concentración a 37ºC, para
determinar la zona de riesgo anatómico y la zona no isquémica.
Después los corazones se cortan en 5-6 láminas
finas y se incuban en solución de cloruro de 2,3,5-
trifeniltetrazolio durante 15 minutos para determinar los tejidos
cardiacos vivos y muertos. El análisis planimétrico de la zona de
riesgo y de la región de infarto se lleva a cabo usando una cámara
(Leica, Bensheim) y una unidad de ordenador unida con software de
análisis (Leitz, Bensheim). La zona de riesgo se expresa en
porcentaje basado en el ventrículo izquierdo más septo, y la región
de infarto en porcentaje basado en la zona de riesgo. El efecto de
un compuesto se indica por la reducción de la región de infarto
basado en la zona de riesgo en comparación con el grupo
testigo.
Claims (16)
1. Un compuesto de fórmula I,
en la
que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -CO-R^{6},
-CO-H o
-CH_{2}-O-R^{7};
Z es oxígeno o azufre;
R^{1} es hidrógeno o metilo;
R^{2} es fenilo, piridilo o alquilo
(C_{1}-C_{4}), donde el resto alquilo puede
estar sustituido con uno o más átomos de flúor, y el resto fenilo
puede estar sustituido con uno o más sustituyentes iguales o
diferentes del grupo que consta de alquilo
(C_{1}-C_{4}), alcoxi
(C_{1}-C_{4}), metilendioxi, etilendioxi,
halógeno, trifluorometilo y trifluorometoxi;
R^{3} y R^{4} son metilo o
trifluorometilo;
R^{5} es hidrógeno o alquilo
(C_{1}-C_{4}), donde el resto alquilo puede
estar sustituido con uno o más átomos de flúor;
R^{6} es hidroxilo, alcoxi
(C_{1}-C_{10}),
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{8}),
feniloxi,
alquil(C_{1}-C_{8})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
fenilcarboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
fenil-alquil(C_{1}-C_{6})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
alcoxi(C_{1}-C_{8})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
feniloxi-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
fenil-alcoxi(C_{1}-C_{6})-carboniloxi-alcoxi(C_{1}-C_{6}),
amino,
mono(alquil(C_{1}-C_{10}))-amino
o
di(alquil(C_{1}-C_{10}))-amino;
R^{7} es hidrógeno o alquilo
(C_{1}-C_{4});
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, o sus sales fisiológicamente
tolerables.
2. Un compuesto de fórmula I según la
reivindicación 1, en la que R^{3} y R^{4} son ambos metilo o
son ambos trifluorometilo, en todas sus formas estereoisómeras y
sus mezclas en todas las proporciones, o sus sales fisiológicamente
tolerables.
3. Un compuesto de fórmula I según la
reivindicación 1 y/o 2, en la que Z es oxígeno, en todas sus formas
estereoisómeras y sus mezclas en todas las proporciones, o sus
sales fisiológicamente tolerables.
4. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 3, en la que R^{1} es metilo y R^{5} es
metilo, en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas en todas
las proporciones, o sus sales fisiológicamente tolerables.
5. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 4, en la que R^{2} es piridilo, fenilo no
sustituido, fenilo que está sustituido con un resto metilendioxi o
un resto etilendioxi, fenilo que está sustituido con uno o dos
grupos alcoxi (C_{1}-C_{4}), o alquilo
(C_{1}-C_{4}) que puede estar sustituido con
uno o más átomos de flúor, en todas sus formas estereoisómeras y sus
mezclas en todas las proporciones, o sus sales fisiológicamente
tolerables.
6. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 5, en la que E es
-CO-R^{6} o -CH_{2}-OH y R^{6}
es hidroxilo, alcoxi (C_{1}-C_{6}), en todas
sus formas estereoisómeras y sus mezclas en todas las proporciones,
o sus sales fisiológicamente tolerables.
7. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 6, en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -COOH, -COOC_{2}H_{5},
-COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}-OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es metilo;
R^{2} es fenilo no sustituido, piridilo o
metilo;
R^{3} y R^{4} es metilo;
R^{5} es metilo;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, o sus sales fisiológicamente
tolerables.
8. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 6, en la que
A es ciclopropilmetilo o isobutilo;
E es -COOH, -COOC_{2}H_{5},
-COOiC_{3}H_{7} o -CH_{2}OH;
Z es oxígeno;
R^{1} es metilo;
R^{2} es fenilo no sustituido, piridilo o
metilo;
R^{3} y R^{4} son trifluorometilo;
R^{5} es metilo;
en todas sus formas estereoisómeras y sus mezclas
en todas las proporciones, o sus sales fisiológicamente
tolerables.
9. Un procedimiento para preparar compuestos de
fórmula I según una o más de las reivindicaciones 1 a 8, que
comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula II con un
compuesto de fórmula III
\vskip1.000000\baselineskip
donde A, E, Z, R^{1}, R^{2},
R^{3}, R^{4} y R^{5} son como se definen en las
reivindicaciones 1 a 8, o hay grupos funcionales en forma protegida
o en forma de precursores, y donde G es hidroxicarbonilo,
alcoxi(C_{1}-C_{6})-carbonilo
o derivados de ácido carboxílico
activados.
10. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 8 y/o sus sales fisiológicamente tolerables
para usar como medicamento.
11. Una preparación farmacéutica que comprende
uno o más compuestos de fórmula I según una o más de las
reivindicaciones 1 a 8, y/o sus sales fisiológicamente tolerables y
un vehículo farmacéutico tolerable.
12. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 8 y/o sus sales fisiológicamente
tolerables, para usar como antiinflamatorios.
13. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 8 y/o sus sales fisiológicamente
tolerables, para usar para tratar la artritis, artritis reumatoide,
poliartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, lupus
eritematoso sistémico, esclerosis múltiple o enfermedades
inflamatorias del sistema nervioso central.
14. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 8 y/o sus sales fisiológicamente
tolerables, para usar para tratar el asma o alergias.
15. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 8 y/o sus sales fisiológicamente
tolerables, para usar para tratar enfermedades cardiovasculares,
aterosclerosis, infarto de miocardio, síndrome coronario agudo,
ataque de apoplejía, restenosis, diabetes, daño en trasplantes de
órganos, enfermedades inmunitarias, enfermedades autoinmunes,
crecimiento de tumor, metástasis de tumor, malaria,
cardioprotección o profilaxis secundaria del ataque de
apoplejía.
16. Un compuesto de fórmula I según una o más de
las reivindicaciones 1 a 8 y/o sus sales fisiológicamente
tolerables, para usar como inhibidores en la adhesión y/o migración
de leucocitos, o para inhibir el receptor VLA-4.
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