ES2238782T3

ES2238782T3 - Derivados de alcaloides citotoxicos tales como la asmarina a y b, aislados de una esponja.

Info

Publication number: ES2238782T3
Application number: ES98962610T
Authority: ES
Inventors: Yoel Pharma Mar S.A. KASHMAN; Amira Pharma Mar S.A. Rudi; Tesfamariam Pharma Mar S.A. YOSIEF; Dolores G. Pharma Mar S.A. GRAVALOS
Original assignee: Instituto Biomar SA
Current assignee: Instituto Biomar SA
Priority date: 1997-12-23
Filing date: 1998-12-23
Publication date: 2005-09-01
Anticipated expiration: 2018-12-23
Also published as: RU2221800C2; DE69829223D1; WO1999033832A1; PL341475A1; JP2001527076A; EP1070067A1; GB9727301D0; HUP0100838A3; AU1774099A; CN1258534C; CN1336928A; BR9814462A; KR100533244B1; IL136956A0; EP1070067B1; CA2316308A1; DE69829223T2; KR20010033447A; ATE290005T1; AU763093B2

Abstract

Compuesto que tiene la fórmula (I) o la fórmula (II): donde R1 representa hidrógeno o alquilo inferior o alcanoilo inferior; R2 representa hidrógeno o alquilo inferior; R3 es un grupo alquilo que contiene una o varias unidades de isopreno; R4 y R5 representan hidrógeno o alquilo inferior; R6 representa alquilo inferior; y X representa F o Cl o Br o I; y el alquilo inferior y la mitad de alquilo inferior del alcanoilo inferior significan un grupo alquilo de cadena recta o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo.

Description

Derivados de alcaloides citotóxicos tales como la Asmarina A y B, aislados de una esponja.

La presente invención se refiere a los nuevos alcaloides citotóxicos Asmarina A y B aislados de la esponja Raspailia sp.

Antecedentes de la invención

Los organismos marinos, y especialmente los corales blandos, las esponjas y los tunicados, producen muchos metabolitos secundarios y presentan un grado variable de actividad biológica (Referencia 1). Una familia de estos metabolitos es la familia de los alcaloides diterpénicos; habiéndose publicado en 1984 (Referencia 2) la estructura de cuatro Agelasinas:

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1) Agelasina ...

Hemos aislado de la esponja Raspailia sp. nuevos alcaloides diterpénicos citotóxicos relacionados con esta familia de agelasinas.

Las Asmarinas A, B y C están descritas en Tetrahedron Lett., 1998, 39 (20), 3323-6, que fue publicado después de la primera fecha de prioridad de la presente solicitud.

Breve exposición de la invención

La presente invención aporta nuevos alcaloides diterpénicos que tienen la fórmula (I) o la fórmula (II):

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donde R^{1} representa hidrógeno o alquilo inferior o alcanoilo inferior; R^{2} representa hidrógeno o alquilo inferior; R^{3} es un grupo alquilo que contiene una o varias unidades de isopreno; R^{4} y R^{5} representan hidrógeno o alquilo inferior; R^{6} representa alquilo inferior; y X representa F o Cl o Br o I.

En las definiciones de los grupos en las fórmulas (I) y (II), el alquilo inferior y la mitad de alquilo inferior del alcanoilo inferior significan un grupo alquilo de cadena recta o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo.

Más en particular, la presente invención se refiere a Asmarina A y Asmarina B extraídas y aisladas de la esponja Raspailia sp. La estructura de la Asmarina A es la siguiente:

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La estereoquímica ilustrada es para una configuración relativa.

La Asmarina A y la Asmarina B presentan actividad antitumoral. En particular, la Asmarina A y la Asmarina B presentan actividad antitumoral contra líneas celulares sacadas de tumores sólidos humanos tales como el carcinoma de pulmón humano, el carcinoma de colon humano y el melanoma humano y tumores similares, y son activas contra otras líneas celulares tumorales tales como la leucemia y el linfoma.

La presente invención también aporta el uso de un compuesto de fórmula (I) o de fórmula (II) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores. Tal medicamento puede opcionalmente contener uno o varios compuestos antitumorales.

La presente invención aporta además composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo un compuesto que tiene la fórmula (I) o la fórmula (II), así como un proceso para su preparación.

Los ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen toda composición sólida (tabletas, píldoras, cápsulas, gránulos, etc.) o líquida (soluciones, suspensiones o emulsiones) con una formulación adecuada para la administración oral, tópica o parenteral, y pueden contener el compuesto puro o en combinación con cualquier vehículo o con otros compuestos farmacológicamente activos. Estas composiciones pueden tener que ser estériles cuando sean administradas por vía parenteral.

La correcta dosificación de una composición farmacéutica que comprenda compuestos que tengan la fórmula (I) o la fórmula (II) variará de acuerdo con la formulación farmacéutica, con el modo de aplicación, con el situs específico, con el huésped y con el tumor que se trate. Deberán ser tomados en consideración otros factores como la edad, el peso corporal, el sexo, la dieta, las horas de administración, la velocidad de excreción, el estado del huésped, las combinaciones de drogas, las sensibilidades reactivas y la gravedad de la enfermedad. La administración puede ser efectuada de manera continua o periódica dentro de la máxima dosis tolerada.

Actividad antitumoral

Las células fueron mantenidas en fase logarítmica de crecimiento en Medio Esencial Mínimo de Eagle, con Sales Equilibradas de Earle, con L-glutamina 2,0 mM, con aminoácidos no esenciales, sin bicarbonato sódico (EMEM/neaa); suplementado con un 10% de Suero de Ternero Fetal (FCS), bicarbonato sódico 10^{-2} M y 0,1 g/l de penicilina-G + sulfato de estreptomicina.

Se ha ejecutado un procedimiento de selección para determinar y comparar la actividad antitumoral de estos compuestos usando una forma adaptada del método descrito por Bergeron et al. (Referencia 3). Las células antitumorales empleadas fueron las P-388 (cultivo en suspensión de un neoplasma linfoide de ratón DBA/2), A-549 (cultivo monocapa de un carcinoma de pulmón humano), HT-29 (cultivo monocapa de un carcinoma de colon humano) y MEL-28 (cultivo monocapa de un melanoma humano).

Las células P-388 fueron sembradas en el interior de cavidades de 16 mm a razón de 1 x 10^{4} células por cavidad en partes alícuotas de 1 ml de MEM 5FCS que contenía la concentración indicada de droga. Los de un conjunto aparte de cultivos sin droga fueron sembrados como cultivo de control para asegurar que las células se mantuviesen en fase de crecimiento exponencial. Todas las determinaciones fueron efectuadas por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, con un 10% de CO_{2} en una atmósfera con un 98% de humedad, se determinó una concentración aproximadamente IC_{50} comparando el crecimiento en las cavidades con droga con el crecimiento en las cavidades de control.

Fueron sembradas células A-549, HT-29 y MEL-28 en cavidades de 16 mm a razón de 2 x 10^{4} células por cavidad en partes alícuotas de 1 ml de MEM 10 FCS que contenía la concentración indicada de droga. Los de un conjunto aparte de cultivos sin droga fueron sembrados como cultivo de control para asegurar que las células se mantuviesen en fase de crecimiento exponencial. Todas las determinaciones fueron efectuadas por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, con un 10% de CO_{2} en una atmósfera con una humedad del 98%, las cavidades fueron coloreadas con un 0,1% de Violeta Cristal. Se determinó una concentración aproximadamente IC_{50} comparando el crecimiento en las cavidades con droga con el crecimiento en las cavidades de control.

Se indican en la tabla siguiente los resultados de las pruebas citotóxicas in vitro para Asmarina A y Asmarina B con las líneas celulares P-388, A-549, HT-29 y MEL-28:

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Extracción y aislamiento

Fueron registrados en un espectrómetro de masas de impacto electrónico espectros de masas de baja resolución. Fueron registrados en un espectrómetro Bruker ARX-500 espectros de resonancia magnética nuclear de ^{1}H y ^{13}C. Todos los desplazamientos químicos están indicados con respecto al tetrametilsilano (\delta = 0 ppm).

La Raspailia sp. (Rob Van Soest) (Clase Demorspongia, Orden poecilosclerida, Familia Raspailiidea) fue recogida en el Archipiélago Dahlak, de Eritrea, mediante submarinismo hasta una profundidad de 23,5 m en mayo de 1997. Está depositada una muestra de referencia en la Universidad de Tel Aviv (ET-338). La esponja fue congelada in situ. La esponja secada por congelación (20 g) fue sometida a extracción 2 veces con acetato de etilo, habiendo sido obtenidos tras la evaporación 1,2 g de goma parda. Esta goma parda fue fraccionada por el método de Kupchon en cuatro fracciones: hexano, tetracloruro de carbono, cloroformo y agua. Las fracciones de CHCl_{3} y de CCl_{4} eran similares. Estas dos fracciones fueron combinadas y sometidas a cromatografía en una columna de sephadex LH-20 efectuando la elución con MeOH:CHCl_{3} (1:1), con lo cual se obtuvieron cinco fracciones. Las fracciones (3-5) fueron sometidas adicionalmente a cromatografía repetidamente en una columna de sephadex LH-20 con el mismo sistema disolvente, habiendo sido así obtenida Asmarina A (100 mg) en forma de un sólido, mp = 232ºC (mp = punto de fusión), m/z+ = 423 (C_{25}H_{37}N_{5}O), (100%) 188 (C_{8}H_{6}N_{5}O^{+}), [\alpha]_{D}^{20} +55º (c = 0,5, CHCl_{3}), IR 3400, 2928, 1600, 1553, 1451, 1400, 1388, 900 cm^{-1}; habiendo sido la estructura de esta Asmarina A confirmada mediante análisis por rayos X. Con el mismo disolvente fue también aislada Asmarina B (120 mg) en forma de un aceite, m/z+ = 423 (C_{25}H_{37}N_{5}O), (100%) 188 (C_{8}H_{6}N_{5}O^{+}), [\alpha]_{D}^{20} +55º (c = 0,5, CHCl_{3}), IR 3400, 2927, 1606, 1553, 1451, 1404, 1388, 900 cm^{-1}.

Para los datos de resonancia magnética nuclear para Asmarina A y B, véase la Tabla siguiente: en todos los casos el disolvente es CDCl_{3}, y todos los desplazamientos químicos están indicados con respecto al tetrametilsilano (\delta = 0 ppm).

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Referencias

1.: Faulkner, D. Nat. Prod. Rep. 1997, 14, 259-302 and references therein.

2.: Nakamura, H. et al. Tetrahedron Lett. 1984, 25, 2989-2992.

3.: Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline, Robert G. Hughes, Jr., Gary T. Elliot and Carl W. Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984, 121, 848-854.

Claims

1. Compuesto que tiene la fórmula (I) o la fórmula (II):

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donde R^{1} representa hidrógeno o alquilo inferior o alcanoilo inferior; R^{2} representa hidrógeno o alquilo inferior; R^{3} es un grupo alquilo que contiene una o varias unidades de isopreno; R^{4} y R^{5} representan hidrógeno o alquilo inferior; R^{6} representa alquilo inferior; y X representa F o Cl o Br o I; y

el alquilo inferior y la mitad de alquilo inferior del alcanoilo inferior significan un grupo alquilo de cadena recta o ramificado que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo.

2. Compuesto Asmarina A según la reivindicación 1, que tiene la fórmula siguiente:

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3. Compuesto Asmarina B según la reivindicación 1, que tiene la fórmula:

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y tiene los siguientes datos de resonancia magnética nuclear en CDCl_{3}:

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(Tabla pasa a página siguiente)

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4. Uso de un compuesto que tiene la fórmula (I) o la fórmula (II) como se define en la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores malignos.

5. Uso de Asmarina A (como la definida en la reivindicación 2) o de Asmarina B (como la definida en la reivindicación 3) en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores malignos.

6. Preparación farmacéutica que contiene como ingrediente activo un compuesto que tiene la fórmula (I) o la fórmula (II) como se define en la reivindicación 1.

7. Preparación farmacéutica que contiene como ingrediente activo Asmarina A (como la definida en la reivindicación 2) o Asmarina B (como la definida en la reivindicación 3).

8. Uso de un compuesto que tiene la fórmula (I) o la fórmula (II) como se define en la reivindicación 1, junto con uno u otros varios compuestos antitumorales, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores malignos.

9. Uso de Asmarina A (como la definida en la reivindicación 2) o de Asmarina B (como la definida en la reivindicación 3), junto con uno u otros varios compuestos antitumorales, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de tumores malignos.