ES2200922T3 - Nuevos alcaloides marinos activos. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de la fórmula siguiente (I): en donde R1 está seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo de entre 1 y 6 átomos de carbono y alcanoilo de entre 2 y 7 átomos de carbono y R2 está seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno y alcanoilo de entre 2 y 7 átomos de carbono.

Description

Nuevos alcaloides marinos activos.

La presente invención hace referencia a nuevos alcaloides activos y en particular a un alcaloide aislado del molusco Jorunna funebris.

Los organismos marinos, especialmente los corales blandos, las esponjas y los tunicatos, proporcionan muchos metabolitos secundarios y muestran un grado variable de actividad biológica (D. J. Faulkner, Nat. Prod. Reports, 1999, 16, 155-198 y las referencias allí citadas).

D.J. Faulkner y H.Y. He, J. Org. Chem. 1989, 54, 5822-5824, describen los compuestos renieramicinas E y F y su aislamiento a partir de la esponja Reniera sp.

Resumen de la Invención

La presente invención proporciona alcaloides que tienen la siguiente fórmula (I):

1

en donde R^{1} está seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo de entre 1 y 6 átomos de carbono y alcanoilo de entre 2 y 7 átomos de carbono y R^{2} está seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno y alcanoilo de entre 2 y 7 átomos de carbono.

En las definiciones de los grupos de fórmula (I), el grupo alquilo y la mitad alquilo del grupo alcanoilo son un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada de entre 1 y 6 átomos de carbono tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, tert-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo.

La jorumicina muestra una actividad antitumoral. En particular, la jorumicina muestra una actividad antitumoral frente a líneas celulares derivadas de tumores sólidos humanos, tales como carcinoma de pulmón humano, carcinoma de colon humano y melanoma humano, y similares. Es activo frente a otras líneas celulares tumorales, del tipo leucemia y linfoma.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo un compuesto de fórmula (I), así como un procedimiento para su preparación.

La presente invención también proporciona el uso del compuesto de fórmula (I) en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la profilaxis de tumores.

De forma más particular, la presente invención hace referencia a la jorumicina (R^{1} = H y R^{2} = Ac en la fórmula (I)), extraída y asilada a partir del molusco Jorunna funebris. La jorumicina tiene la fórmula que se indica:

2

Se proporciona la jorumicina libre de otros compuestos en el molusco, así como la jorumicina sustancialmente pura. Un aspecto adicional de la invención es un método para la preparación del compuesto Jorumicina (R^{l} = H y
R^{2} = Ac en la fórmula (I)), que comprende la extracción y el aislamiento a partir del molusco Jorunna funebris.

Realizaciones preferidas de la invención

Ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier sólido (comprimidos, pastillas, cápsulas, gránulos, etc.) o líquido (soluciones, suspensiones o emulsiones) con una formulación adecuada de para una administración oral, tópica u de otro tipo, y puede contener el compuesto puro o en combinación con cualquier soporte u otros compuestos farmacológicamente activos. Estas composiciones pueden necesitar ser estériles cuando se administran por vía parenteral.

La dosis correcta de una composición farmacéutica que comprende compuestos de fórmula (I), variará de acuerdo con la formulación farmacéutica, el modo de aplicación, y el sitio particular, el huésped o el tumor a tratar. Deberán tomarse en consideración otros factores como la edad, el peso corporal, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la condición del huésped, las combinaciones de fármacos, la sensibilidad de la reacción y la severidad de la enfermedad. La administración puede ser llevada a cabo de forma continua o periódicamente dentro de la dosis máxima tolerada.

Actividad Antitumoral

Se mantuvieron las células en una fase de crecimiento logarítmica en el medio esencial mínimo de Eagle (EMEM), con sales equilibradas de Earle, con 2,0 mM de L-glutamina, con amino ácidos no esenciales, sin bicarbonato sódico (EMEM/neaa); se suplementó un 10% de suero de vaca fetal, bicarbonato sódico 10^{-2} M y 0,1 g/1 de penicilina-G + sulfato de estreptomicina.

Se llevó a cabo un procedimiento de selección para determinar y comparar la actividad antitumoral de estos compuestos, utilizando una forma adaptada del método descrito por Bergeron y col. (Raymond J Bergeron, Paul F Cavanaugh, Jr, Steven J Kline, Robert G Hughes, Jr, Gary T Elliot y Carl W Porter. Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984,121,848-854). Las células antitumorales utilizadas fueron las P-388 (cultivo en suspensión de un neoplasma limfoideo obtenido de ratón DBA/2), A-549 (cultivo en monocapa de un carcinoma de pulmón humano), HT-29 (cultivo en monocapa de un carcinoma de colon humano) y MEL-28 (cultivo en monocapa de un melanoma humano).

Se sembraron células P-388 en pocillos de 16 mm a una concentración de 1 x 10^{4} células por pocillo en alícuotas de 1 ml de MEM 5FCS conteniendo la concentración indicada del fármaco. Se sembró un equipo separado de cultivos sin fármaco como control de crecimiento para asegurar que las células permanecían en una fase de crecimiento exponencial. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, 10% CO_{2} en una atmósfera con el 98% de humedad, se determinó una IC_{50} aproximada por comparación del crecimiento en celdas con fármaco respecto al crecimiento en celdas control.

Se sembraron células A-549, HT-29 y MEL-28 en celdas de 16 mm a una concentración de 2 x 10^{4} células por celda en alícuotas de 1 ml de MEM 10FCS conteniendo la concentración indicada de fármaco. Se sembró un grupo separado de cultivos sin fármaco como crecimiento control para asegurar que las células se mantenían en fase exponencial de crecimiento. Todas las determinaciones se llevaron a cabo por duplicado. Después de tres días de incubación a 37ºC, 10% de CO_{2} en una atmósfera con una humedad del 98%, se tiñeron las celdas con violeta del cristal al 0,1%. Se determinó la IC_{50} de forma aproximada por comparación del crecimiento en celdas con el fármaco respecto al crecimiento en celdas control.

Los resultados se presentan en la tabla siguiente:

	IC_{50} (\muM)
	P-388	A-549	HT-29	MEL-28
Jorumicina	0.02	0.02	0.02	0.02

Actividad Antitumoral

La jorumicina mostró también actividad frente a las bacterias Gram-positivas (Staphiloococcus y otras).

Extracción y Aislamiento

Se aisló la jorumicina del molusco Jorunna funebris (Mollusca: Nudibranchia: Doridina: Kentrodorididae) recogido en Mandapam (India) en Abril de 1998. El producto está presente tanto en el extracto del moco como en el del mantillo de la rama nuda. En un procedimiento típico, se extrajo la muestra biológica congelada (moco o cuerpo animal) con acetona. Después de eliminar el disolvente orgánico a presión reducida se repartió el residuo entre agua (15 ml) y acetato de etilo. Se extrajo la fase acuosa tres veces con acetato de etilo (34 ml en total). Se separó el residuo en forma de aceite obtenido por eliminación del disolvente orgánico a presión reducida por cromatografía con Sephadex LH-20 siguiendo la elución de los componentes del extracto por CCF sobre SiO_{2} (CHCl_{3}/MeOH 95:5, Rf = 0,4). Se obtuvo la purificación final de la jorumicina por cromatografías secuenciales sobre SiO_{2} (CHCl_{3}/MeOH) y por HPLC (columna analítica Sherisorb S5W, elución isocrática con: n-hexano/CHCl_{3}/TEA 90:10:10, detector: refractómetro diferencial Waters R401). El producto es soluble en CHCl_{3}, CH_{2}Cl_{2}, MeOH. Es altamente inestable en medio ácido y básico.

Jorumicina:

(C_{27}H_{30}N_{2}O_{9});

[\alpha]_{D} = -57º (c 0,05 CHCl_{3});

IR (película líquida) 3310,1731,1700 cm-1;

UV (MeOH) 268 nm (\varepsilon = 15000);

RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta 1,25 (m, 1H), 1,75 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,96 (s, 3H), 2,24 (d, 1H, J = 20,1 Hz), 2,26 (s, 3H), 2,65 (dd, 1H, J = 20,1 y 7,3 Hz), 2,84 (dd, 1H, J = 16,7 y 2,1 Hz) 3,16 (dt ancho, 1H, J = 12,0, 2,7 y 2,7 Hz). 3.18 (s ancho, 1H), 3,82 (dd, 1H, J = 11, 2 y 3,5 Hz), 3,90 (s ancho, 1H), 3,98 (s, 3H), 4.00 (s ancho, 3H), 4,36 (m ancho, 1H), 4,40 (s ancho, 1H), 4,42 (dd, 1H, J = 11,2 y 3,7Hz);

RMN ^{13}C (CDCl_{3}) \delta 185,8 (s), 181,3 (s), 170,0 (s), 155,7 (s), 155,0 (s), 141,9 (s), 141,7 (s), 137,2 (s), 128,8 (s), 128,4 (s), 113,8 (s), 109,4 (s), 83,0 (d), 65,2 (t), 61,0 (d), 57,7 (d), 56,1 (d), 54,4 (d), 52,6 (d), 41,3 (c), 25,5 (t), 20,7 (c), 20,6 (t), 8,8 (c), 8,7 (c);

ESMS (m/z) 526 (20, M+), 508 (100, M-H_{2}O), 494 (10, M-32);

HRESMS (m/z) 508,189 (\rho + 5 mmu).

Otros compuestos de fórmula (I) pueden ser fácilmente preparados por síntesis química o semisíntesis.

Claims (5)

1. Un compuesto de la fórmula siguiente (I):

1

en donde R^{1} está seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo de entre 1 y 6 átomos de carbono y alcanoilo de entre 2 y 7 átomos de carbono y R^{2} está seleccionado entre el grupo constituido por hidrógeno y alcanoilo de entre 2 y 7 átomos de carbono.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, el cual es la jorumicina, en donde R^{l} es H y R^{2} es Ac:

2

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1, junto con un soporte farmacéuticamente aceptable.

4. Un método para la preparación del compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende la extracción y el aislamiento a partir del molusco Jorunna funebris.

5. El uso de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores.