MXPA02002615A - Nuevos alcaloides marinos activos. - Google Patents

Abstract

Nuevos alcaloides antitumorales de la formula general (I): en la que R1 es hidrogeno, alquilo o acilo y R2 es hidrogeno o acilo, incluyen jorumicina, donde R1 es hidrogeno y R2 es acetilo, extraida del molusco Jorunna funebris.

Description

NUEVOS ALCALOIDES MARINOS ACTIVOS La presente invención se refiere a nuevos alcaloides activos y, en particular, a un alcaloide aislado del molusco Jorunna funebris. Los organismos marinos, especialmente los corales blandos, las esponjas y los tunicados, proveen muchos metabolitos secundarios y exhiben diversos grados de actividad biológica (Faulkner, D. J. , Nat. Prod. Reports. , 1999, 16, 155-198, y las referencias all í citadas).

BREVE DESCRI PCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee alcaloides que tienen la siguientes fórmula (I ): en la que R1 está seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, un grupo alquilo inferior y un grupo acilo inferior; y R2 está seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y acilo inferior. J 't' En las definiciones de los grupos de la fórmula (I), el grupo alquilo inferior y la porción alquilo inferior del acilo inferior típicamente son un grupo alquilo de cadena recta o ramificado que tiene de 1 a 6 5 átomos de carbono, como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo secundario, butilo terciario, pentilo, neopentilo y hexilo. La jorumicina exhibe actividad contra tumores. En particular, la jorumicina exhibe actividad antitumoral contra líneas de 10 células derivadas de tumores sólidos humanos, tales como carcinoma de pulmón humano, carcinoma humano de colon y melanoma humano, y similares. Es activa contra otras líneas de células tumorales, como leucemia y linfoma. La presente invención provee también un método para 15 tratar un mamífero afectado por un tumor maligno, sensible a un compuesto de la fórmula (I), que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula (O) o una composición farmacéutica del mismo. La presente invención provee adicionalmente 20 composiciones farmacéuticas que contienen como ingrediente activo un compuesto de la fórmula (I), así como un proceso para su preparación. La presente invención provee adicionalmente el uso del compuesto de la fórmula (I) dada más arriba, en la preparación de un 25 medicamento para el tratamiento o la profilaxis de tumores.

Más en particular, la presente invención se refiere a jorumicina (R1 = H y R2 = Ac en la fórmula (I)), extraída y aislada del molusco Jorunna funebris. La jorumicina tiene la fórmula: Se provee jorumicina libre de otros compuestos que ocurren en el molusco, así como jorumicina sustancialmente pura. Un aspecto adicional de la presente invención consiste en un método para preparar el compuesto jorumicina (R1 = H y R2 = Ac en la fórmula (I), que comprende la extracción y eJ aislamiento del molusco Jorunna funebris.

MODALIDADES PREFERIDAS DE LA INVENCIÓN Los ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier forma sólida (tabletas, pildoras , cápsulas, granulos, etc. ) o líquida (soluciones, suspensiones o emulsiones) con formulación adecuada para administración oral, tópica , parenteral u otra, y pueden contener el compuesto puro o en combinación con cualquier portador u otros compuestos farmacológ icamente activos. Estas composiciones pueden hacer necesaria la esterilización cuando son administradas parenteralmente. liL A¿d á L *?~é *- ., -.iilii ^.^.^^^^^^^^ La dosis correcta de la composición farmacéutica que comprende los compuestos de la fórmula (I) variará de acuerdo con la formulación farmacéutica, el modo de aplicación y el sitio particular, el anfitrión y el tumor que están siendo tratados. Otros factores, tales como la edad, el peso del cuerpo, el sexo, la dieta, el tiempo de administración, la velocidad de excreción, la condición del anfitrión , las combinaciones de fármacos, la sensibilidad a la reacción y la severidad de la enfermedad, deberán ser tomados en cuenta . Se puede llevar a cabo la administración en forma continua o periódica , dentro de la dosis máxima tolerada .

LA ACTIVI DAD ANTITUMORAL Se mantuvo cél ulas en fase logarítmica de desarrollo en medio esencial mínimo de Eagle, con sales equilibradas de Earle, con 2.0 mM de L-g lutamina, con aminoácidos no esenciales, sin bicarbonato de sodio (E ME M/neaa); suplementado con 10% de suero de ternera fetal (FCS, acrónimo por su designación en inglés: Fetal Calf Serum), 1 0"2 M de bicarbonato de sodio y 0.1 g/L de penicilina G + sulfato de estreptomicina . Se ha llevado a cabo un procedimiento de selección para determinar y comparar la actividad antitumoral de estos compuestos, usando una forma adaptada del método descrito por Bergeron y coautores (Raymond J . Bergeron , Paul F. Cavanaugh , Jr. , Steven J. Kline, Robert G. Hughes , Jr. , Gary T. Elliot y Cari W . Porter, Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators, Biochem. Bioph. Res. Comm., 1984, 121, 848-854). Las células antitumorales empleadas fueron P-388 (cultivo en suspensión de un neoplasma linfoide de ratón DBA/2), A-549 (cultivo de una sola capa de un carcinoma humano de pulmón), HT-29 (cultivo en una sola capa de un carcinoma humano de colon) y MEL-28 (cultivo en una sola capa de un melanoma humano). Se sembró células P-388 en concavidades de 16 mm a 1 x 104 células por concavidad, en alícuotas de 1 ml de MEM 5FCS que contenía la concentración indicada del fármaco. Se sembró una serie separada de cultivos sin fármaco, como desarrollo de control, para garantizar que las células permanecieran en la fase exponencial de desarrollo. Todas las determinaciones fueron efectuadas por duplicado. Tres días después de la incubación a 37°C, a 10% de CO2 en una atmósfera de 98 por ciento de humedad, se determinó la Cl50 aproximada comparando el desarrollo en las concavidades con fármaco, con el desarrollo en las concavidades de control. Se sembró células A-549, HT-29 y MEL-28 en concavidades de 16 mm a 2 x 104 células por concavidad, en alícuotas de 1 ml de MEM 10 FCS que contenían la concentración indicada de fármaco. Se sembró una serie separada de cultivos sin fármaco como desarrollo de control para garantizar que las células permanecieran en la fase exponencial de desarrollo. Se llevó a cabo todas las determinaciones por duplicado. Después de tres días de incubación a 37°C, 10% de CO2 en una atmósfera a 98 por ciento de ^ ti?M^^^^^^^^ á ^M humedad, se tiñó las concavidades con 0.1 % de violeta Crystal. Se determinó una Cl50 aproximada comparando el desarrollo en las concavidades con fármaco, con el desarrollo en las concavidades de control. Los resultados están dados en la siguiente tabla.

ACTIVIDAD ANTITUMORAL La jorumicina mostró también actividad contra bacterias Gram-positivas (Staphylococcus y otras).

EXTRACCIÓN Y AISLAMI ENTO Se aisló jorumicina del molusco Jorunna funebris (Moluscos: Nudibranquios: Doridinos: Kentrodorídidos), recolectados en Mandapam (India ) en abril de 1998. El producto está presente en el extracto tanto del modo como del manto del n udibranquio. En un procedimiento típico se extrajo la muestra biológ ica congelada (moco o cuerpo del animal) con acetona. Después de retirar el solvente orgánico a presión red ucida , se divid ió el residuo entre 15 ml de au !á?m m •?" agua y acetato de etilo. Se extrajo la fase acuosa tres veces con un total de 34 ml de acetato de etilo. Se fraccionó el residuo aceitoso obtenido retirando el solvente orgánico a presión reducida, por medio de cromatografía en Sephadex LH-20, , después de la elución de los 5 componentes del extracto por medio de TLC con SiO2 (CHC /MeOH 95:5, Rf = 0.4). Se obtuvo la purificación final de Jorumicina mediante columnas analíticas secuenciales de cromatografía con SiO2 (CHCI3/MeOH) y HPLC (Sherisorb S5W, elución ¡socrática con n-hexano/CHCI3/TEA 90:10:10, detector: refractómetro diferencial 0 Waters R401). El producto es soluble en CHCI3, CH2CI2, MeOH. Es sumamente inestable en medios ácidos y básicos. Jorumicina: (C27H30N2O9); [a]D = -57° (c, 0.05 CHCI3); 5 IR (película líquida) 3310, 1731, 1700 cm'1; UV (MeOH) 268 nm (e = 15000); RMN con H (CDCI3 d 1.25 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.93 (s, 3H); 1.96 (s, 3H), 1.96 (s, 3H), 2.24 (d, 1H, J = 20.1 Hz), 2.26 (s, 3H), 2.65 (dd, 1H, J = 20.1 y 7.3 Hz), 2.84 (dd, 1H, J = 16.7 y 2.1 0 Hz), 3.16 (bdt, 1H, J = 12.0, 2.7 y 2.7 Hz), 3.18 (bs, 1H), 3.82 (dd, 1H), J = 11.2 y 3.5 Hz), 3.90 (bs, 1H), 3.98 (s, 3H), 4.00 (bs, 3H), 4.36 (bm, 1H), 4.40 (bs, 1H), 4.42 (dd, 1H, J = 11.2 y 3.7 Hz); RMN con 13C (CDCI3) d 185.8 (s), 181.3 (s), 170.0 (s), 155.7 (s), 155.0 (s), 141.9 (s), 141.7 (s), 137.2 (s), 128.8 (s), 128.4 5 (s), 113.8 (s), 109.4 (s), 83.0 (d), 65.2 (t), 61.0 (d), 57.7 (d), 56.1 (d), 54.4 (d), 52.6 (d), 41 .3 (q), 25.5 (t), 20.7 (q), 20.6 (t), 8.8 (q), 8.7 (q ); ESMS (m/z) 526 (20, M + ), 508 ( 1 00, M + H2O), 494 (10, M + 32); H RESMS (m/z) 508.189 (? + 5 mmu). Se puede preparar fácilmente otros compuestos de la fórmula (I) mediante síntesis qu ímica o mediante hemisíntesis química. aßrtt-i

Claims (6)

REIVINDICACIONES:

1 .- Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente fórmula (I): en la que R1 está seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, un grupo alquilo inferior y un grupo acilo inferior, y R2 está seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno y acilo inferior.

2.- Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es jorumicina, donde R1 es H y R2 es Ac:

3..- Un método para tratar un mamífero afectado por un tumor maligno sensible a un compuesto de la fórmula (I) de la reivindicación 1 , caracterizado porque comprende administrarle una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (I) o una composición farmacéutica del mismo.

4.- Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de la fórmula (I) de la reivindicación 1 , junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

5.- Un método para preparar el compuesto de la reivindicación 2, caracterizado porque comprende la extracción y el aislamiento del molusco Jorunna funebris.

6. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de la reivindicación 1 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores.