ES2235461T3 - Acido n,n'-bis (2-hidroxibencil)etilendiamina-n,n'-diacetico y sales de sodio de este para terapia quelante de hierro. - Google Patents

Abstract

Composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, adecuado para inyección subcutánea, en combinación con una cantidad terapéuticamente efectiva de la sal monosódica o disódica del ácido N, N¿-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N, N¿-diacético.

Description

Ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N,N'-diacético y sales de sodio de éste para terapia quelante de hierro.

Introducción Campo técnico

Esta invención se refiere al uso del ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N,N'-diacético (HBED) en la preparación de una composición para la terapia de quelación del hierro. En particular, la invención proporciona el uso subcutáneo del HBED para el tratamiento de un primate, en particular un humano, aquejado de un estado de enfermedad que es tratable con un agente quelante del hierro, en particular, de una sobrecarga de hierro, especialmente una sobrecarga de hierro transfusional.

Antecedentes

En los humanos y otros primates el hierro se almacena en el organismo en forma de ferritina y hemosiderina, que son complejos de proteína, y se transporta al plasma a través de otro complejo de proteína, en especial transferrina. La manera en que se utiliza el hierro es muy eficiente, pero no existe un mecanismo específico para la eliminación del exceso de hierro. En condiciones de sobrecarga de hierro los complejos de proteína quedan saturados con el hierro, con el resultado de que el exceso de hierro se deposita en los tejidos, lo que origina la toxicidad del hierro, y en último lugar conduce a un deterioro del tejido peroxidativo. Un procedimiento habitual que da lugar a una sobrecarga de hierro en humanos es mediante transfusiones de sangre repetidas.

Una manera de tratar la sobrecarga de hierro es mediante la administración de un agente quelante de hierro. En principio, el agente quelante transforma el hierro depositado de nuevo en una forma soluble que es capaz, a continuación, de ser excretada. Sin embargo, ninguno de los agentes quelantes de hierro existentes, y que se utilizan para este propósito, resulta ideal. Los agentes quelantes tienen una pobre absorción intestinal o una baja eficacia y/o efectos secundarios indeseables.

Uno de los quelantes de hierro que no presenta algunas de estas desventajas, y que es ampliamente usado en terapia, es el mesilato de deferoxamina B (DFO). En general, el DFO es capaz de controlar el exceso de hierro del organismo, y puede prolongar la supervivencia, y prevenir o mejorar la disfunción de los órganos en una persona que sufre de una sobrecarga de hierro. Sin embargo, el DFO está lejos de ser un tratamiento ideal para las sobrecargas de hierro ya que resulta molesto, ineficiente, caro y desagradable para el paciente. Debido a que el DFO se absorbe poco en el tracto gastrointestinal y se elimina rápidamente de la circulación, se requiere una infusión parenteral prolongada para el tratamiento. Generalmente se administra mediante una bomba de infusión portátil durante 9-12 horas cada día. No resulta sorprendente el que muy pocos pacientes sean capaces de someterse a las exigencias de dicho régimen. Además, el DFO es muy ineficiente como agente quelante del hierro, y de manera típica sólo el 5% o menos del compuesto administrado se une al hierro.

Todavía otra desventaja la constituye el coste del DFO, que es un sideróforo bacterial que se prepara comercialmente mediante fermentación a gran escala de una cepa de Streptomyces pilosus, un procedimiento de fabricación que resulta muy caro. Además, casi todos los pacientes experimentan una reacción alérgica al DFO, que resulta poco confortable y a veces muy dolorosa. Se piensa que la reacción alérgica está causada por las citoquinas y/o otros productos de fermentación formados durante el procedimiento de fermentación y que no se eliminan completamente durante la purificación de la mezcla del producto crudo.

Por tanto, sería deseable proporcionar un procedimiento para el tratamiento de la sobrecarga de hierro que emplee una alternativa al DFO segura y barata. Idealmente, el agente quelante del hierro no debe requerir una infusión parenteral prolongada, no debe estar asociado con una reacción alérgica en los pacientes, y debe ser un quelante del hierro más eficiente que el DFO. También sería una ventaja si no necesitase ser administrado oralmente, ya que el tratamiento oral requiere que el paciente ingiera grandes cantidades de agente quelante tres o más veces cada día, y existe preocupación de que dichos ligandos puedan exacerbar la toxicidad del hierro y tener ellos mismos efectos laterales indeseables.

Se conoce que el HBED es un compuesto quelante del hierro. La patente US nº 3758540 describe que los quelatos del HBED y otros compuestos con hierro resultan útiles como fuente de hierro en la nutrición de las plantas. La patente US 4528196 describe, en base a los ensayos en rata y ratón, que el HBED y sus ésteres alquílicos son activos oralmente en el tratamiento de la sobrecarga de hierro, y más activos administrados oralmente que el DFO administrado intraperitonealmente. Sin embargo, los resultados en roedores no se han confirmado en animales superiores. Los ensayos en el mono Cebus apella, que se sabe que se trata de un excelente modelo del comportamiento de los quelantes en humanos, han demostrado que el DFO administrado subcutáneamente presenta una actividad significativamente mayor que el HBED o su éster dimetílico administrado oralmente (Bergeron et al., Blood, 81:2166, (1993), Peter et al., "Una Evaluación Comparativa de los Quelantes de Hierro en un Modelo de Primate", p. 373; Desarrollo de Quelantes de Hierro para Uso Clínico, Boca Ratón, CRC Press (1994)). También se ha demostrado que el HBED, cuando se administra oralmente a pacientes humanos, proporciona una excreción de hierro a un nivel que no resulta efectivo para el tratamiento de la sobrecarga de hierro (Grady et al., "Resultados Preliminares de un Ensayo Clínico de Fase I del HBED", en el Desarrollo de Quelantes de Hierro para Uso Clínico, Boca Ratón, CRC Press (1994), p. 395).

En base a los anteriores resultados, es totalmente inesperado que el HBED resulte ser un compuesto altamente eficiente para el tratamiento de la sobrecarga de hierro cuando se administra subcutáneamente. El HBED bajo administración subcutánea no requiere una infusión parenteral prolongada para una quelación y extracción efectiva del hierro, no está asociado con una reacción alérgica en los pacientes y es un agente quelante del hierro más efectivo que el DFO.

Objetivos de la invención

Un objetivo de esta invención es proporcionar una composición que se pueda usar en un procedimiento mejorado para el tratamiento de un estado de enfermedad en primates, en particular humanos, estado de enfermedad que sea tratable mediante un quelante del hierro.

Otro objetivo de esta invención es proporcionar una composición para el tratamiento subcutáneo de un estado de enfermedad que es tratable mediante un agente quelante del hierro, en particular cuando el estado de enfermedad es una sobrecarga de hierro.

Otro objetivo de esta invención es proporcionar un procedimiento para la preparación de una composición administrable subcutáneamente que resulte útil para el tratamiento de un estado de enfermedad que es tratable mediante un agente quelante del hierro, en particular cuando el estado de enfermedad es una sobrecarga de hierro.

Otro objetivo de esta invención es proporcionar una composición para el tratamiento de un estado de enfermedad que es tratable mediante un agente quelante del hierro, y que no requiera el tratamiento prolongado de un paciente (p.e., mediante infusión parenteral), en particular cuando el estado de enfermedad es una sobrecarga de hierro.

Otro objetivo de esta invención es proporcionar una composición para tratamiento que minimice las reacciones alérgicas de los pacientes que son tratados debido a un estado de enfermedad mediante un agente quelante del hierro.

Otros objetivos de la invención pueden resultar aparentes para una persona experta en la técnica leyendo la siguiente especificación y reivindicaciones.

Literatura Relevante

Resultan de interés las patentes US nº 3758540, 4116991 y 4528196.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a la fabricación de una composición adecuada para el uso en un procedimiento de tratamiento de un mamífero que tiene un estado de enfermedad que es tratable mediante un agente quelante del hierro. El procedimiento comprende la administración subcutánea de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I)

1

en especial, el ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil) etilen-diamina-N,N'-diacético (HBED) o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable. El procedimiento resulta particularmente adecuado para el tratamiento de la sobrecarga de hierro en un primate.

Otro aspecto de esta invención es una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable y adecuado para la inyección subcutánea en combinación con HBED como su sal mono- o disódica.

Todavía otro aspecto de esta invención es un objeto de fabricación que comprende un contenedor que contiene una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado para inyección subcutánea en combinación con HBED en forma de su sal monosódica o disódica, en el que el contenedor contiene una cantidad terapéuticamente efectiva del HBED y está asociada con instrucciones impresas en la rotulación para la administración subcutánea de la composición para el tratamiento de un estado de enfermedad que resulta tratable mediante un quelante de hierro.

Todavía otro aspecto de esta invención es un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica, dicho procedimiento comprende la combinación de un excipiente farmacéuticamente aceptable y adecuado para inyección subcutánea con HBED en forma de su sal monosódica o disódica.

Descripción de las realizaciones preferidas Procedimiento de Tratamiento

Un aspecto de esta invención permite un procedimiento para el tratamiento de mamíferos que tienen un estado de enfermedad que es tratable mediante un agente quelante del hierro. Este procedimiento comprende la administración subcutánea de una cantidad terapéuticamente efectiva de HBED o de una sal terapéuticamente efectiva del mismo. Un estado de enfermedad que es tratable con un agente quelante de hierro y que incluye cualquier enfermedad de un mamífero individual, en particular un primate tal como un humano, en el que el individuo muestra una mejoría cuando se le administra un agente quelante del hierro, y que se selecciona entre: malaria, cáncer, infecciones por HIV, enfermedad del intestino inflamado, rechazo del huésped/injerto, rechazo del injerto/huésped, lesiones de reperfusión, desórdenes neurológicos y una sobrecarga de hierro. El estado de enfermedad en el que el procedimiento resulta más útil es la "sobrecarga de hierro". Se caracteriza por un depósito generalizado o focal, mayor de lo normal, del hierro en los tejidos del organismo (hemosiderosis). Cuando este depósito focal o generalizado se asocia con lesión en el tejido, con un hierro total en el organismo mayor que aproximadamente 15 gramos, se conoce como hemocromatosis. Generalmente, la hemocromatosis primaria proviene de un error determinado genéticamente que origina una mayor adsorción del hierro en una dieta normal, generalmente debido a un rasgo recesivo autosomal, pero incluye también atransferrinemia, talasemia mayor, y la anemia hipocrómica ligada a \gamma. La hemosiderosis secundaria o hemocromatosis indica una mayor toma de hierro parenteral tal como a través de transfusiones repetidas (sobrecarga de hierro transfusional) o hierro dextrano introducido intramuscularmente. Esto también puede ser debido a un aumento de la adsorción de hierro a causa de una mayor ingestión de hierro o una mayor adsorción de hierro procedente de una cantidad normal de hierro en la dieta, pero teniendo anemia con hiperplasia eritróide y posiblemente a través de megadosis de Vitamina C. La hemosiderosis focal puede ser pulmonar, renal o hepática.

Aunque el Manual Merck, 15ª edición, establece la clasificación de estas condiciones, la diagnosis diferencial es difícil. La diagnosis depende de la historia de la administración del hierro, el examen de la familia del paciente, el grado de la sobrecarga de hierro, y la presencia o ausencia de signos localizadores. Para la hemocromatosis primaria, cuya forma más común afecta de tres a ocho personas por cada mil, los signos y síntomas son extraños antes de una mediana edad. Las manifestaciones típicas son cirrosis del hígado, pigmentación marrón de la piel, diabetes mellitus y cardiomiopatía, que se puede manifestar mediante cardiomegalia, fallo congestivo y arritmias o desarreglos circulatorios. En el caso de fallo de la pituitaria, se puede ver atrofia testicular y pérdida de la libido. Con menor frecuencia tiene lugar dolor abdominal, artritis y condriocalcinosis. La hemosiderosis focal tiene lugar principalmente en los pulmones y riñones. La hemosiderosis pulmonar puede ser debida a hemorragia pulmonar recurrente que ocurre como una entidad idiopática, p.e., como parte del Síndrome de Goodpasture. La diagnosis de estas condiciones se puede encontrar en el Manual Merck. Cada una de estas condiciones se debe considerar como una enfermedad que se puede tratar con un agente quelante del hierro.

Tal como se ha mencionado en este documento anteriormente, el punto importante para el tratamiento es la administración subcutánea del compuesto HBED tal como se indica en la Fórmula I anteriormente indicada, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

"Sal farmacéuticamente aceptable" significa una sal que conserva la efectividad y las propiedades biológicas del HBED y que no es indeseable biológicamente o por cualquier otra causa. El HBED es capaz de formar sales tanto con ácidos como con bases debido a la presencia tanto de grupos ácido carboxílico como de grupos amino.

1.

Se pueden preparar sales de adición con bases farmacéuticamente aceptables a partir de bases inorgánicas y orgánicas. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, pero no quedan limitadas a, las sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, pero no quedan limitadas a, las sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas substituidas y aminas cíclicas, que incluyen isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanol-amina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glicociamina, N-alquilglucaminas, teobromina, purinas, piperazina, piperidina y N-etilpiperidina. También se debe entender que en la práctica de esta invención pueden ser también útiles los derivados de otros ácidos carboxílicos, por ejemplo, las amidas de ácidos carboxílicos que incluyen las carboxamidas, las carboxamidas de alquilos inferiores y las dicarboxamidas de alquilos inferiores.

2.

Se pueden preparar sales de adición con ácidos farmacéuticamente aceptables a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos. Los ácidos inorgánicos adecuados incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, y ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos adecuados incluyen ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinnámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico y ácido salicílico.

Las preferidas son las sales disódica, monosódica, el diclorhidrato, y el monoclorhidrato.

El término "tratamiento" tal como se usa en este documento cubre cualquier tratamiento de una enfermedad tratable mediante un agente quelante del hierro en un mamífero, en particular un humano, e incluye:

(i)

prevención de que a un sujeto le ocurra una enfermedad a la que pueda estar predispuesto pero que todavía no se ha diagnosticado que la tenga;

(ii)

inhibición de la enfermedad, es decir, parar su desarrollo;

(iii)

alivio de la enfermedad, es decir, causar una regresión de la enfermedad.

Se ha encontrado que el procedimiento de administración que resulta sorprendentemente efectivo es la administración subcutánea del HBED o una sal farmacéuticamente efectiva del mismo. Por administración subcutánea se entiende que se inyecta el compuesto en forma de una composición inyectable apropiada en el tejido conectivo aerolar justo debajo de la piel. La inyección puede ser una solución, una suspensión, o una formulación que proporciona una liberación controlada del principio activo. La administración subcutánea se efectúa con excipientes que resultan adecuados para la administración subcutánea, lo que significa que los excipientes tienen que cumplir las consideraciones USP en cuanto a ser apropiados para las composiciones inyectables. Por tanto, la composición debe ser estéril para evitar cualquier complicación en el punto de inyección debido a la no esterilidad.

La cantidad de ingrediente activo que está presente en la composición que debe inyectarse y que será inyectada es una cantidad terapéuticamente efectiva, es decir, una cantidad que resulta suficiente para dar lugar a un trata miento con éxito tal como se ha definido anteriormente cuando se administra a un mamífero que presenta un estado de enfermedad tratable mediante un agente quelante del hierro, p.e. un estado de enfermedad de una sobrecarga de hierro. La cantidad terapéuticamente efectiva variará dependiendo del sujeto y del estado de enfermedad que debe tratarse, la severidad de la aflicción y el modo de administración, y se puede determinar de manera rutinaria por una persona experta en la técnica a la vista del descubrimiento de esta memoria. La dosis diaria típica de HBED varía de acuerdo con las necesidades individuales, la severidad de la condición a tratar y la sal específica elegida. Generalmente, a un paciente se le administra aproximadamente de 5 micromoles (\muM) a 500 \muM de la substancia activa, es decir, HBED, por cada kilogramo (Kg). Las dosis adecuadas están en el margen general desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal del paciente por día, preferiblemente en el margen desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 100 mg/kg, más preferiblemente en el margen desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 80 mg/kg.

Composiciones Farmacéuticas de la Invención

De manera general, las composiciones de la invención son la combinación del HBED como su sal monosódica o disódica con un excipiente farmacéutico que resulte adecuado para inyección. Generalmente, las composiciones de la invención o preparadas para el uso de la invención pueden estar dentro de una de las seis (6) categorías:

1.

una solución ya preparada para la inyección,

2.

una composición soluble seca que está preparada para combinarse con un solvente justo antes de su uso,

3.

una suspensión preparada para la inyección,

4.

una composición insoluble seca que está preparada para combinarse con un solvente justo antes de su uso,

5.

una emulsión preparada para la inyección, y

6.

un concentrado líquido preparado para su dilución justo antes de la administración.

En la preparación de una composición para la administración subcutánea se debe prestar especial atención al ajuste de la tonicidad para evitar irritación en las numerosas terminaciones nerviosas en esta área anatómica.

Generalmente, las inyecciones subcutáneas son bastante diluidas y el componente que está presente en la más alta proporción es el vehículo. Normalmente, el vehículo no tiene actividad terapéutica y no es tóxico, pero presenta el constituyente activo a los tejidos humanos en una forma apropiada para la absorción. La absorción normalmente ocurre de manera más rápida y completa cuando el HBED o su sal o su éster apropiado se presenta como una solución acuosa. Sin embargo, la modificación del vehículo con líquidos miscibles en agua o la substitución con líquidos inmiscibles en agua puede afectar la velocidad de absorción. La absorción a partir de una suspensión puede estar afectada por factores tales como viscosidad del vehículo, su capacidad para impregnar las partículas sólidas, el equilibrio de solubilidad producido por el vehículo y el coeficiente de distribución entre el vehículo y el sistema acuoso del cuerpo. Preferiblemente, el mejor vehículo para su composición subcutánea es el agua que cumple las especificaciones USP para el agua de inyectables. Generalmente, el agua de calidad adecuada para la preparación de composiciones se prepara ya sea por destilación o por ósmosis reversa para cumplir las especificaciones USP. Las especificaciones apropiadas se describen en Remington: La Ciencia y la Práctica de la Farmacia, 19ª edición, en p. 1526-1528. Para la preparación de las composiciones que son adecuadas para la inyección subcutánea, se pueden usar vehículos acuosos, vehículos miscibles en agua y vehículos no acuosos. Algunos vehículos acuosos se reconocen oficialmente debido a su uso válido en los inyectables parenterales en general y en los subcutáneos específicamente. Estos vehículos se usan como vehículos isotónicos a los que se puede añadir el compuesto en el momento de la administración. Una solución isotónica es aquella que da lugar a que las células ni se contraigan ni se hinchen cuando se pone en contacto con dichas células. Se preparan de manera que el efecto osmótico adicional del principio activo no sea suficiente para dar lugar a incomodidad cuando se administra subcutáneamente. Estos vehículos acuosos útiles en la invención incluyen la inyección de cloruro sódico, la inyección de Ringer, la inyección de dextro, la inyección de cloruro sódico y dextro, y la inyección de Ringer lactada. Preferiblemente, se usa una solución acuosa tamponada de fosfato de la sal monosódica del HBED.

Los vehículos miscibles en agua resultan también útiles en la formulación de la composición subcutánea de esta invención. Estos solventes se usan principalmente para influir en la solubilidad de las diferentes formas del HBED y para reducir la hidrólisis del compuesto. Los solventes más importantes de este grupo son el alcohol etílico, el polietilen glicol y el propilen glicol.

Los vehículos no acuosos también se pueden usar para una sal del HBED que sea relativamente insoluble en agua, p.e., la sal diclorhidrato del HBED. Estos vehículos incluyen los aceites fijos, por ejemplo, los de origen vegetal, para permitir un metabolismo adecuado. Para una composición de una inyección subcutánea USP, la USP especifica límites al grado de insaturación y al contenido de los ácidos grasos libres. Los aceites más comúnmente usados son el aceite de maíz, el aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, y el aceite de sésamo. También son útiles algunos aceites neutros recientemente desarrollados que son ésteres de ácidos grasos de cadena media, que también se conocen como aceite de coco fraccionado. Los ácidos grasos de cadena media, p.e., los de 8 a 10 átomos de carbono, incluyen compuestos que se conocen como MIGLYOL®, que lo vende Dynamit Nobel. Cinco de los tipos del MIGLYOL® resultan útiles, que se identifican como MIGLYOL® 810, 812, 818, 829 y 840. Éstos están más plenamente descritos por Dynamit Nobel en la literatura de marca. Una formulación útil es aquella que contiene aproximadamente 33% peso/volumen de la sal diclorhidrato del HBED en un vehículo MIGLYOL. También resultan útiles algunos otros ésteres como vehículos no acuosos, por ejemplo, triglicéridos y los diésteres del propilen glicol.

Para salvaguardar o mejorar la calidad de la composición, a las composiciones inyectables subcutáneas de esta invención se les puede añadir substancias adicionales. Así, una substancia añadida puede afectar la solubilidad, proporcionar confortabilidad al paciente, aumentar la estabilidad química o proteger la preparación contra el crecimiento de microorganismos. Por tanto, la composición puede incluir un solubilizante apropiado, substancias que hagan isotónica la solución, substancias que actúen como antioxidantes o tamponantes y substancias que actúen como conservantes para evitar el crecimiento de microorganismos. Estas substancias están presentes en una cantidad que es apropiada para su función, pero que no afecta de manera adversa a la acción de la composición como tratamiento para la sobrecarga de hierro. Los ejemplos de agentes antimicrobianos apropiados incluyen timerasol, cloruro de benzetonio, cloruro de benzalconio, fenol, p-hidroxi-benzoato de metilo y p-hidroxi-benzoato de propilo. Los tamponantes y antioxidantes apropiados se pueden encontrar en Remington et al., p. 1529.

Generalmente, la composición inyectable subcutánea de esta invención comprende desde aproximadamente 0,1% en peso hasta 50% en peso de HBED o una sal correspondiente, y el excipiente o excipientes apropiados constituyen la cantidad restante.

Procedimiento de Preparación

Otro aspecto de esta invención procede del descubrimiento de los resultados no usuales obtenidos por administración subcutánea del medicamento. Este aspecto es un procedimiento de preparación de una composición farmacéutica adecuada para la administración subcutánea. Dicho procedimiento comprende la combinación del HBED en forma de su sal monosódica o disódica con un excipiente farmacéutico adecuado para la administración subcutánea bajo condiciones que resultan efectivas para proporcionar una composición estéril adecuada para la administración subcutánea. Por tanto, en la preparación de las composiciones de esta invención, se debe tener cuidado de asegurar que la composición final es estéril y adecuada para la inyección subcutánea. Generalmente, el procedimiento cumple los buenos procedimientos de fabricación (GMP) actualmente aprobados con el fin de ofrecer un producto subcutáneo deseado. Cuando se emplean vehículos acuosos, se debe usar para la preparación de la propia composición el agua USP para inyección y preferiblemente se usa en la preparación del equipo para la preparación de la composición. Las consideraciones generales para la fabricación de las preparaciones subcutáneas se pueden encontrar en Remington: Ciencia y Práctica de la Farmacia, 19ª edición, Cap. 87.

Objeto de Fabricación

Otro aspecto de esta invención es un objeto de fabricación que comprende un contenedor que contiene una composición adecuada para la inyección en combinación con instrucciones impresas en la rotulación que proporcionan una discusión sobre cómo administrar la composición subcutáneamente. Una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición se encuentra contenida en cualquier contenedor que no interacciona de manera significativa con la composición y que estará rotulada apropiadamente para indicar que solamente es para uso subcutáneo. Asociadas con el contenedor se encontrarán las instrucciones tal como han sido aprobadas por la FDA en el procedimiento de obtención de la aprobación para el uso del HBED en forma de su sal monosódica o disódica, para su uso en el tratamiento tal como se ha descrito anteriormente en este documento. El contenedor que contiene la composición de esta invención puede ser un contenedor que tiene una composición líquida adecuada para inyección, que tiene una aguja adecuada para la inyección y una jeringa de manera que el paciente, el doctor, la enfermera u otro profesional pueda administrar el medicamento. Los ejemplos representativos de un contenedor adecuado incluyen aquellos usados con el sistema de inyección cerrado TUBEX® de Wyeth-Ayerst, con el producto de SmithKline Beecham inyectable COMPRAZINE® y con el producto inyectable de Hoechst- Rousell LASIX® de jeringa prellenada. Alternativamente, la composición puede ser una composición seca que contiene una versión soluble, o que se puede poner en suspensión, de la sal del HBED, para combinarse con un vehículo acuoso o no acuoso con el fin de disolver o suspender la composición. Alternativamente, el contenedor puede tener una suspensión en un líquido o puede ser una versión insoluble de la sal del HBED para combinar con un vehículo en el que se suspende la versión insoluble. Los contenedores apropiados se discuten en Remington: Capítulo 37. Cualquiera que sea el contenedor particular, un aspecto clave de la invención es la rotulación puesto que en último término no se puede comercializar el producto a menos que esté aprobado por la Food and Drug Administration en los Estados
Unidos.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se dan como representaciones no limitantes de los diferentes aspectos de la invención para permitir que una persona experta en la técnica pueda preparar y usar la invención. Entre los ejemplos, deferoxamina B (DFO) en la forma de su sal metansulfonato (marca comercial DESFERAL) está fabricada por Ciba-Geigy (Basilea, Suiza), el diclorhidrato dihidrato del HBED se obtiene de Strem Chemical Co. (Newburyport, MA), Cremophor RH-40 se obtiene de BASF (Parsippany, NJ).(CREMOPHOR es una marca comercial). Las ratas Sprague-Dawley se compran en Charles River (Wilmington, MA). Los monos Cebus apella se obtienen de Worl Wide Primates (Miami, FL). Todos los reactivos y soluciones de hierro normalizadas se obtienen de Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, W).

Ejemplo 1

Este ejemplo explica cómo manejar las ratas y los monos Cebus apella en los estudios para determinar la eficacia del procedimiento y la composición de esta invención.

A. Canulación del conducto biliar en las ratas

Se colocan ratas macho Sprague-Dawley, con un peso promedio de 400 g, en jaulas metabólicas de plástico Nalgene durante el periodo experimental y se les proporciona libre acceso al agua. Los animales se anestesian usando pentobarbital sódico (55 mg/kg) administrado intra-peritonealmente. El conducto biliar se canula, usando tubo de polietileno del calibre 22, aproximadamente a 1 cm desde el duodeno. La cánula se inserta unos 2 cm en el interior del conducto y, una vez establecido el flujo biliar, se sujeta la cánula cómodamente en el lugar. Se inserta una aguja que atraviesa la piel desde el área de la espalda hasta la incisión abdominal. La cánula se cuela a través de la aguja hasta que emerge por la obertura de la espalda. A continuación, la cánula se pasa desde la rata hasta el torniquete en el interior de la ligadura metálica que transmite el impulso mecánico, la cual se encuentra unida a una cubierta de roedor alrededor del cuello del animal. La cánula se dirige desde la rata a un micro colector de fracciones Gilson mediante un torniquete de fluidos montado encima de la jaula metabólica. Este sistema permite que el animal se mueva libremente en la jaula mientras se recogen las muestras de bilis en continuo. Las muestras de bilis se recogen a intervalos de 3 horas durante 24 horas. Cada 24 horas se recogen muestras de orina. La toma y manejo de las muestras se lleva a cabo tal como se ha descrito previamente (Bergeron et al., Journal of Medicinal Chemistry, 34:2072 (1991); Bergeron et al., Blood, 79:1882, (1992)).

B. Carga de hierro de los monos Cebus apella

Después de la anestesia intramuscular con cetamina, se inicia una infusión endovenosa en una vena de la pierna. Se añade hierrodextrano a aproximadamente 90 ml de solución salina normal estéril y se administra a los animales por infusión lenta a una dosis de 200 a 300 mg de hierro por kg de peso corporal a lo largo de 45 a 60 minutos. Para proporcionar aproximadamente 500 mg de hierro por kg de peso corporal son necesarias de dos a tres infusiones, separadas por entre 10 y 14 días. Después de la administración de hierro-dextrano, la saturación de hierro transferrina en suero alcanza el 70-80%. La semivida del hierro-dextrano en suero en humanos es de 2,5 a 3,0 días. Antes de utilizar cualquiera de los animales en experimentos para evaluar los agentes quelantes de hierro se deja transcurrir, por lo menos, veinte semividas, o sea, sesenta días.

C. Estudios del balance de hierro en monos Cebus apella

Siete días antes de la administración, los animales se colocan en jaulas metabólicas y se inicia una dieta líquida baja en hierro. Los monos se mantienen en una dieta líquida baja en hierro durante el experimento. Se les administra alimento según su peso corporal y se controla cuidadosamente la ingesta.

Tres días antes de la administración del compuesto, desde el día -2 hasta el día 0, se miden los valores de la línea basal de ingesta y de excreción de hierro. Esta misma medida se efectúa desde el día +1 hasta el +3. Se compara la cantidad total de ingesta de hierro con la cantidad total de hierro excretado.

D. Muestras de orina y heces de primates

Se recogen muestras de orina y de heces a intervalos de 24 horas. La recogida de muestras empieza cuatro días antes de la administración del producto a ensayar y se continúa durante otros cinco días después de administrar el compuesto. Las muestras fecales se analizan para comprobar la presencia de sangre oculta, se pesan y se mezclan con agua desionizada y destilada antes de pasar por un autoclave durante 30 minutos. A continuación, la mezcla se liofiliza y una parte conocida del polvo se mezcla con ácido nítrico bajo en hierro y se refluye durante 24 horas. Una vez eliminadas por centrifugación todas las partículas de las muestras digeridas, se determina la concentración de hierro por absorción atómica de llama. Las muestras de orina de mono se acidifican y si es necesario se reconstituyen hasta el volumen inicial después de esterilizar.

Ejemplo 2

Este ejemplo explica cómo se preparan las formulaciones para el procedimiento (administración s.c.) y la composición de esta invención se compara con el procedimiento conocido (administración oral) en la técnica.

A. Preparación y Administración del Compuesto

Se administra a las ratas DFO a una dosis de 150 moles/kg en Cremophor RH-40 al 40%, se administra HBED subcutáneamente (s.c.) y oralmente con el pienso (p.o.) a las ratas a una dosis de 150 moles/kg en un tampón fosfato.

En los primates, el DFO se administra s.c. en agua estéril para inyección a una dosis de 150 moles/kg, mientras que el HBED se disuelve primero en un tampón fosfato y se administra s.c. en Cremophor RH-40 al 40% peso/vol. a una dosis de 75 o 150 moles/kg. Además, para imitar mejor las aplicaciones clínicas en pacientes, el HBED también se administra a los monos s.c. a una dosis de 150 moles/kg en un tampón fosfato, sin usar vehículo Cremophor.

B. Cálculo de la Eficiencia del Quelante de hierro

La eficiencia de cada uno de los agentes quelantes se calcula en base a un complejo hierro-ligando 1:1. En los monos, los resultados se obtienen promediando la excreción de hierro durante cuatro días antes de la administración del compuesto, restando estos valores de la excreción de hierro de los dos días después de la administración del compuesto, y a continuación se divide por la excreción teórica; el resultado se expresa en porcentaje. La eficiencia en el modelo de roedores se calcula restando la excreción de hierro de los animales control de la excreción de hierro de los animales tratados. Este resultado se divide a continuación por la excreción teórica. El resultado se expresa en porcentaje.

C. Análisis Estadístico

Los datos se presentan como el promedio \pm error standard del promedio. Para la comparación de los promedios de los dos grupos, se usa las dos muestras t-test (sin la asunción de igualdad de las varianzas) para analizar los datos de los roedores, mientras que los datos de los primates se analizan usando un t-test igualado. Todos los ensayos se hacen por duplicado y se usa un nivel de significación de P<0,05.

Ejemplo 3

Este ejemplo compara la eficacia en las ratas de la administración subcutánea de HBED según la invención frente a la administración oral de HBED y administración subcutánea de DFO. Los comparadores incluyen la línea, a lo largo del tiempo, de la excreción de hierro inducida por los agentes quelantes del hierro y las cantidades máximas de hierro excretado.

Estos estudios se llevan a cabo en ratas canuladas en el conducto de la bilis, sin sobrecarga de hierro. Los agentes quelantes del hierro se administran a una dosis de 150 moles/kg de peso corporal. A los grupos de ratas se les administra DFO por inyección subcutánea s.c. (n = 6) o HBED oralmente con el pienso (n = 4) o por inyección s.c. (n = 3). Los valores a lo largo del tiempo de la excreción promedio de hierro biliar inducida por los quelantes en cada uno de los grupos de ratas, se expresa como g Fe/kg de peso corporal. Las cantidades máximas de hierro excretado con HBED s.c. son más de dos veces superiores a la excreción máxima de hierro después de DFO s.c. o HBED administrado con el pienso (P < 0,05 a t = 3 h y P < 0,01 a t = 6 h). La excreción de hierro inducida por los quelantes en cada uno de los grupos de ratas se expresa como la cantidad promedio neta de hierro excretado en la orina y en la bilis (g Fe/kg de peso corporal) y como la eficiencia de la quelación del hierro (excreción de hierro neta/capacidad total de enlace con el hierro del quelante administrado, expresado en porcentaje).

El FDO administrado subcutáneamente induce la excreción de 209 \pm 59 g de Fe/kg de peso corporal y demuestra una eficiencia de 2,5 \pm 0,7% (rango, 1,7 a 3,7%), con aproximadamente un 74% del hierro excretado por la inducción del agente quelante a través de la bilis y aproximadamente 26% a través de la orina. En comparación con DFO s.c., el HBED administrado oralmente con el pienso da lugar a una excreción dos veces mayor, de 436 \pm 176 g Fe/kg de peso corporal (P<0,02); la eficiencia es de 5,2 \pm 2,1% (rango, 3,5 a 8,3), con aproximadamente 97% del hierro excretado por la inducción del agente quelante a través de la bilis y aproximadamente 3% a través de la orina. El HBED administrado a los roedores mediante inyección s.c. resulta más de tres veces más efectivo para la inducción de la excreción del hierro que el FDO administrado s.c. (P<0,001), con una inducción de la excreción de 679 \pm 8 g de Fe/kg de peso corporal y con una eficiencia global de 8,1 \pm 0,1% (rango, 7,9 a 8,2%). Aproximadamente el 83% del hierro se excreta por la bilis y el 17% a través de la orina. No se han observado efectos secundarios desfavorables en los roedores.

Ejemplo 4

Este ejemplo compara la efectividad en los monos Cebus apella del HBED administrado subcutáneamente según la invención versus el HBED administrado oralmente y FDO administrado subcutáneamente. La comparación incluye la excreción de hierro inducida por los quelantes del hierro a lo largo del tiempo y las cantidades máximas de hierro excretado.

Excreción de hierro inducido por un agente quelante en los monos Cebus apella

Los estudios se llevan a cabo en monos Cebus apella a los que previamente se les ha administrado por vía endovenosa hierro-dextrano para proporcionar aproximadamente 500 mg de hierro por kg de peso corporal, tal como se ha descrito anteriormente. A grupos de monos (n=6 en cada grupo) se les da s.c. inyecciones de FDO o HBED. El FDO en solución acuosa se da s.c. a una dosis de 150 moles/kg e induce la excreción de 435 \pm 115 g de Fe/kg de peso corporal y demuestra una eficiencia de 5,1 \pm 1,3% (rango, 3,3 a 6,6%), con aproximadamente un 65% del hierro excretado por la inducción del agente quelante a través de las heces y aproximadamente 35% a través de la orina. En nuestros experimentos iniciales, el HBED se disolvía en una solución tampón de fosfato y se administraba en Cremophor RH-40 al 40% peso/volumen, y se usaba un aceite de castor polietoxilado como vehículo para los compuestos con una mala solubilidad acuosa, debido a la baja solubilidad en agua del diclorhidrato dihidrato del HBED. El HBED-Cremophor se administra mediante inyección s.c. a dosis de 75 o 150 moles/kg. A la dosis de 75 moles/kg, el HBED-Cremophor induce una eliminación de 793 \pm 410 g/kg de hierro y demuestra una eficiencia de 18,4 \pm 9,1% (rango, 7,4 a 27,8%). La mayor parte del hierro (92%) se excreta por las heces, mientras que el 8% a través de la orina. A la dosis de 150 moles/kg, el HBED-Cremophor induce una eliminación de 1349 \pm 475 g/kg y una eficiencia de 16,1 \pm 5,6% (rango, 9,3 a 23,0%). De nuevo, la mayor parte del hierro, 90%, se excreta por las heces y el 10% se encuentra en la orina.

Finalmente, para imitar mejor las aplicaciones clínicas potenciales, el HBED (en forma de su sal monosódica) se administra también s.c. al mismo grupo de monos utilizados en los experimentos anteriores, a una dosis de 150 moles/kg en un tampón fosfato, sin usar Cremophor como vehículo. Una vez más, el HBED administrado subcutáneamente induce la excreción de aproximadamente dos veces más la cantidad de hierro que el DFO, 899 \pm 193 g de Fe/kg de peso corporal (P<0,001), y tiene una eficiencia de 10,7 \pm 2,3% (rango, 8,3 a 13,8%), con aproximadamente el 92% de la excreción del hierro inducida por el quelante a través de las heces y aproximadamente el 8% a través de la orina. A la dosis de 150 moles/kg no se encuentra diferencia significativa (P > 0,2) entre la excreción de hierro neto promedio inducida por el HBED preparado en una solución de tampón fosfato o en Cremophor. La excreción de hierro promedio inducida por DFO administrado s.c. en una solución acuosa y HBED administrado s.c. en un tampón a una dosis de 150 moles/kg de peso corporal se expresan como la cantidad neta promedio de hierro excretado en la orina y en las heces (g Fe/kg de peso corporal) y como la eficiencia de quelación del hierro. Los resultados de este estudio se pueden comparar con los resultados de un estudio publicado previamente de la administración oral del HBED en un tampón fosfato a un grupo de monos Cebus apella con una sobrecarga de hierro de magnitud similar. El HBED oral induce una excreción de solamente 50 \pm 44 g de Fe/kg de peso corporal y tiene una eficiencia de 0,5 \pm 0,5% (rango, 0,1 a 1,1%), con aproximadamente el 56% de la excreción del hierro inducida por el quelante a través de las heces y aproximadamente el 44% en la orina. No se observa en los monos efectos adversos debido a la administración del quelante; todos los análisis hematológicos y bioquímicos permanecen dentro de los márgenes de normalidad.

Ejemplo 5

Para preparar una composición acuosa, tamponada, inyectable subcutáneamente según esta invención, se disuelven 60 mg de la sal disódica del HBED en 1 ml de tampón fosfato acuoso estéril adecuado para inyección, con el fin de proporcionar una solución de una composición de esta invención.

Ejemplo 6

Para preparar una composición no acuosa inyectable subcutáneamente según esta invención, se disuelven 60 mg de la sal diclorhidrato dihidrato en 1 ml de CREMOPHOR RH-40 estéril, un aceite de castor polietoxilado, para proporcionar una composición de esta invención.

Claims (20)

1. Composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, adecuado para inyección subcutánea, en combinación con una cantidad terapéuticamente efectiva de la sal monosódica o disódica del ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N,N'-diacético.

2. Composición de la reivindicación 1, en la que el compuesto se combina con un excipiente farmacéuticamente aceptable como una solución inyectable.

3. Composición de la reivindicación 1, en la que el compuesto se combina con un excipiente farmacéuticamente aceptable como una suspensión inyectable.

4. Composición de la reivindicación 1, en la que el compuesto se combina con un excipiente farmacéuticamente aceptable como una composición acuosa.

5. Composición de la reivindicación 1, en la que el compuesto se combina con un excipiente farmacéuticamente aceptable como una composición no acuosa.

6. Uso de un excipiente farmacéuticamente aceptable, adecuado para inyección subcutánea, y ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N,N'-diacético o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de una composición para el tratamiento de un mamífero que tiene un estado de enfermedad que es tratable con un agente quelante de hierro y se escoge entre malaria, cáncer, infecciones por HIV, enfermedad del intestino inflamado, rechazo del huésped/injerto, rechazo del injerto/huésped, lesiones de reperfusión, desórdenes neurológicos, así como una sobrecarga de hierro, en el que se ha de administrar una cantidad terapéuticamente efectiva mediante inyección subcutánea.

7. Uso de la reivindicación 6, en el que el estado de la enfermedad es una sobrecarga de hierro.

8. Uso de la reivindicación 7, en el que el estado de la enfermedad es una hemocromatosis.

9. Uso de la reivindicación 7, en el que el estado de la enfermedad es una hemocromatosis secundaria.

10. Uso de la reivindicación 7, en el que el estado de la enfermedad es una hemosiderosis focal.

11. Objeto de fabricación que comprende un contenedor que contiene una composición farmacéutica que comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable, adecuado para inyección subcutánea, en combinación con la sal monosódica o disódica del ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil) etilendiamina-N,N'-diacético, en el que el contenedor contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de la sal y está asociada con instrucciones impresas en la rotulación para la administración de la composición en el tratamiento de un estado de enfermedad que resulta tratable mediante un quelante de hierro, estando seleccionada la citada enfermedad entre malaria, cáncer, infecciones por HIV, enfermedad del intestino inflamado, rechazo del huésped/injerto, rechazo del injerto/huésped, lesiones de reperfusión, desórdenes neurológicos y sobrecarga de hierro.

12. Objeto de fabricación de la reivindicación 11, en el que el estado de la enfermedad es un estado de sobrecarga de hierro que es una hemocromatosis primaria, hemocromatosis secundaria o hemosiderosis focal.

13. Objeto de fabricación de la reivindicación 11, en el que el compuesto se combina con un excipiente farmacéuticamente aceptable como una solución inyectable, una suspensión inyectable, una composición acuosa o una composición no acuosa.

14. Procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica. Dicho procedimiento comprende la combinación de un excipiente farmacéuticamente aceptable y adecuado para inyección subcutánea con la sal monosódica o disódica del ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendi-amina-N,N'-diacético.

15. Procedimiento de la reivindicación 14, en el que la sal es la sal disódica.

16. Procedimiento de la reivindicación 14, en el que la sal es la sal monosódica.

17. Procedimiento de la reivindicación 14, 15 o 16, en el que la sal se combina con un excipiente farmacéuticamente aceptable como una solución inyectable, una suspensión inyectable, una composición acuosa o una composición no acuosa.

18. La sal monosódica del ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N,N'-diacético.

19. La sal disódica del ácido N,N'-bis-(2-hidroxibencil)etilendiamina-N,N'-diacético.

20. Procedimiento de preparación de una composición útil para el tratamiento de un mamífero que tiene un estado de enfermedad que es tratable mediante un quelante de hierro, seleccionándose la citada enfermedad entre malaria, cáncer, infecciones por HIV, enfermedad del intestino inflamado, rechazo del huésped/injerto, rechazo del injerto/huésped, lesiones de reperfusión, desórdenes neurológicos y sobrecarga de hierro, procedimiento que comprende la combinación de un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado para inyección subcutánea con la sal monosódica o disódica del ácido N,N'-bis-(2-hidroxi-bencil)etilendiamina-N,N'-diacético.