ES2220004T3 - Derivados del acido ciclobutil-ariloxiarilsulfonilaminohidroxamico. - Google Patents

Abstract

UN COMPUESTO DE LA FORMULA EN LA QUE Y REPRESENTA LO DEFINIDO ARRIBA Y ES UTIL EN EL TRATAMIENTO DE LA ARTRITIS O DEL CANCER Y DE OTRAS ENFERMEDADES EN LAS QUE INTERVIENE UNA INHIBICION SELECTIVA DE METALOPROTEINASA - 13 MATRICIAL.

Description

Derivados del ácido ciclobutil-ariloxiarilsulfonilaminohidroxámico.

Antecedentes de la invención

La presente invención hace referencia a los derivados del ácido ciclobutil-ariloxiarilsulfonilaminohidroxámico, y a las composiciones farmacéuticas y procedimientos de tratamiento.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores de metaloendopeptidasas de cinc, especialmente aquellas pertenecientes a las subfamilias de las metzincinas de la matriz metaloproteasa (también llamada MMP o matrixina) y reprolisina (también conocida como adamilsina) (Rawlings y col., Methods in Enzimology, 248, 183-228 (1995) y Stocker, y col., Protein Science, 4, 823-840 (1995)).

La subfamilia de enzimas MPP, contiene actualmente diecisiete miembros (MMP-1, MMP-2, MMP-3,
MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17,
MMP-18, MMP-19, MMP-20). Las MMP se conocen bien por su papel en regular la renovación de las proteínas de la matriz extracelular y por lo tanto juega papeles importantes en procesos fisiológicos normales tales como la reproducción, el desarrollo y la diferenciación. Además, los MPP se expresan en muchas situaciones patológicas en las cuales se produce un recambio anormal de tejido conectivo. Por ejemplo, MMP-13, una enzima con potente actividad en la degradación del colágeno de tipo II (el colágeno principal en cartílago), ha demostrado sobreexpresarse en cartílago osteoartrítico (Mitchell, y col., J. Clin. Invest., 97, 761 (1996)). Otras MMP (MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-12) se sobreexpresan también en cartílago osteoartrítico y la inhibición de algunas de estas MMP se espera que ralentice o bloquee la pérdida acelerada de cartílago típica de las enfermedades de las articulaciones tales como osteoartritis o artritis reumatoide.

Las reprolisinas de mamíferos se conocen como ADAM (una desintegrina y metaloproteinasa) (Wolfberg, y col., J. Cell Biol.., 131, 275-278 (1995)) y contiene un dominio desintegrina además de un dominio similar a la metaloproteinasa. Hasta la fecha se han identificado veintitrés ADAM diferentes.

ADAM-17, también conocidas como enzima convertasa del factor de necrosis de tumores-alfa (TACE), es la ADAM mejor conocida. ADAM-17 (TACE) es responsable de la escisión del factor de necrosis tumoral-alfa
(TNF-\alpha, también conocido como caquectina) unido a las células. TNF-\alpha se reconoce que está implicado en muchas enfermedades infecciosas y autoinmunes (W. Friers, FEBS Letters, 285, 199 (1991)). Además, se ha mostrado que TNF-\alpha es el mediador principal de la respuesta inflamatoria vista en la sepsis y el choque séptico (Spooner, y col., Clinical Immunology and Immunopathology, 62, S11 (1992)). Hay dos formas de TNF-\alpha, una proteína de membrana de tipo II de masa molecular relativa de 26.000 (26 kD) y un forma soluble de 17 kD generada a partir de las proteína unida a la célula mediante escisión proteolítica específica. La forma soluble de 17kD de TNF-\alpha se libera por la célula y se asocia con los efectos deletéreos de TNF-\alpha. Esta forma de TNF-\alpha es capaz de actuar en sitios distantes del sitio de síntesis. Así, los inhibidores de TACE impiden la formación de TNF-\alpha soluble e impiden los efectos deletéreos del factor soluble.

Los compuestos seleccionados de la invención son potentes inhibidores de la agrecanasa, una enzima importante en la degradación del agrecano de cartílago. El agrecano se cree que es también una ADAM. La pérdida de agrecano de la matriz del cartílago s un factor importante en la progresión de enfermedades de las articulaciones tales como osteoartritis y artritis reumatoide e se espera que la inhibición de agrecano ralentice o bloquee las pérdida de cartílago en estas enfermedades.

Otras ADAM que han mostrado expresión en situaciones patológicas incluyen ADAMS TS-1 (Kuno y col., J. Biol.. Chem., 272, 556-562 (1997)), y las ADAM 10, 12 y 15 (Wu, y col., Biochem. Biophys. Res. Comm., 235, 437-442 (1997)). El conocimiento de la expresión, los sustratos fisiológicos y la asociación de las ADAM en enfermedad incrementa que se aprecie el significado pleno del papel de la inhibición de esta clase de enzimas.

Las enfermedades en las cuales la inhibición de MPP y/o ADAM proporcionará beneficios terapéuticos que incluyen: artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad del transplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica por contacto, cáncer (tal como tumor canceroso sólido incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bullosa, osteoporosis, pérdida de implantes artificiales de las articulaciones, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo en la cabeza, lesión en la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos o crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía cerebral amiloide, incremento nootrópico o de cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, daño corneal, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización corneal, escleritis, SIDA, sepsis, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por la expresión de metaloproteasas o ADAM.

Esta invención también se refiere a un procedimiento de usar los compuestos de la invención en el tratamiento de las enfermedades anteriormente mencionadas en mamíferos, especialmente humanos, y en las composiciones farmacéuticas útiles, por lo tanto.

Se reconoce que diferentes combinaciones de MMP y ADAM se expresan en diferentes situaciones patológicas. Así, los inhibidores con selectividades específicas para ADAM y/o MMP individuales se prefieren para enfermedades concretas. Por ejemplo, la artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria caracterizada por niveles excesivos de TNF y la pérdida de constituyentes de la matriz de las articulaciones. En este caso, un compuesto que inhibe TACE y agrecanasa igual que MPP tal como MMP-13 puede ser la terapia preferida. En contraste, en una enfermedad articular menos inflamatoria tal como osteoartritis, se prefieren los compuestos los compuestos que inhiben la degradación de las MMP de la matriz tal como MMP-13 pero no TACE.

Los presentes inventores han descubierto también que es posible diseñar inhibidores con actividad diferencial metaloproteasa. Específicamente, por ejemplo, los inventores han sido capaces de diseñar moléculas las cuales inhiben selectivamente la metaloproteasa-13 de la matriz (MMP-13), preferentemente sobre MMP-1.

Los inhibidores de las metaloproteasas de la matriz se conocen bien en la literatura. Específicamente, la publicación PCT WO 96/33172, publicado en el 24 de octubre, 1996, se refiere a los ácidos cíclicos arilsulfonamina hidroxámicos que son útiles como inhibidores de MPP. La patente de los Estados Unidos 5.672.615, la publicación PCT WO 97/20824, la publicación PCT WO 98/08825, la publicación PCT WO 98/27069, y la publicación PCT WO 98/34918, publicada el 13 de agosto, 1998, titulada "Arylsulfonyl Hydroxamic Acid Derivatives" se refieren todas a los ácidos hidroxámicos cíclicos que son útiles como inhibidores de MMP. Las publicaciones PCT WO 96/27583 y WO 98/07697, publicadas el 7 de marzo de 1996 y el 26 de febrero de 1998, respectivamente, se refieren a lo ácidos arilsulfonilhidroxámicos. La publicación PCT 98/03516, publicada el 29 de enero, 1998, se refiere a fosfinatos con actividad MMP. La publicación PCT 98/34915, publicada el 13 de agosto de 1998, titulada "N-Hydroxy-b-Sulfonyl Propionamide Derivatives", se refiere a propionilhidroxamidas útiles como inhibidores de MPP. La publicación PCT WO 98/33768, publicada el 6 de agosto de 1998, titulada "N-Hidroxi-b-Sulfonyl Propionamide Derivatives" se refiere a propionilhidroxamidas útiles como inhibidores MMP. La publicación PCT WO 98/30566, publicada el 16 de julio de 1998, titulada "Cyclic Sulfone Derivatives", se refiere a los ácidos hidroxámicos de sulfona cíclica como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos 60/55208, presentada el 8 de agosto, 1997, se refiere a ácidos biarilhidroxámicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con número de serie 60/55207, presentada el 8 de agosto de 1997, titulada "Aryloxyarylsulfonylamino Hidroxamic Acid Derivatives", se refiere a ácidos ariloxiarilsulfonilhidroxámicos como inhibidores de MMP. La solicitud provisional de patente de los Estados Unidos 60/62766, presentada el 24 de octubre de 1997, titulada "The use of MMP-13 Selective Inhibitors For the Treatment of Osteoarthritis and Other MMP Mediated Disorders", se refiere al uso de inhibidores de MMP-13 para tratar la inflamación y otros trastornos. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos con número de serie 60/68261, presentada el 19 de diciembre, 1997, se refiere al uso de inhibidores de MMP para tratar angiogénesis y otros trastornos. Cada una de las publicaciones y solicitudes referidas anteriormente se incorpora por este medio en su totalidad mediante referencia en su totalidad.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula

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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que

R^{1} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{6}); y

Y es un sustituyente en uno de los átomos de carbono del anillo fenilo capaz de soportar un enlace adicional, preferiblemente de 1 a 2 sustituyentes (más preferiblemente un sustituyente, más preferiblemente un sustituyente en la posición 4) en el anillo fenilo, seleccionado independientemente de hidrógeno, fluoro, cloro, trifluorometilo, alcóxido(C_{1}-C_{6}), trifluorometoxi, difluorometoxi, y alquilo(C_{1}-C_{6}).

El termino "alquilo", como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, incluye radicales hidrocarburos monovalentes saturados que tienen restos lineales, ramificados o cíclicos o combinaciones de los mismos.

El término "alcoxi", como se usa en el presente documento, incluye grupos O-alquilo en los que "alquilo" es como se ha definido anteriormente.

La presente invención se refiere también a las sales de adición ácida aceptables de compuestos de fórmula I. Los ácidos que se usan para preparar las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de los compuestos básicos de esta invención mencionados son aquellos que forman sales de adición ácida no tóxicos, es decir, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como sales de hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, acetato, lactato, citrato, citrato ácido, tartrato, bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato [es decir, 1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)].

La invención se refiere también a las sales de adición básica de fórmula I. Las bases químicas que se pueden usar como agentes para preparar sales básicas farmacéuticamente aceptables de aquellos compuestos de fórmula I que son ácidos en la naturaleza son aquellas que forman sales básicas no tóxicas con tales compuestos. Tales sales básicas no tóxicas incluyen, pero no se limitan a, aquellas derivadas de tales cationes farmacéuticamente aceptables tales como cationes de metales alcalinos (por ejemplo, potasio y sodio) y cationes de metales alcalinotérreos (por ejemplo, calcio y magnesio), amonio o sales de adición de aminas solubles en agua tales como N-metilglucamina-(meglumina), y el alcanolamonio inferior y otras sales básicas de aminas orgánicas farmacéuticamente aceptables.

El compuesto de fórmula I puede tener centros quirales y por lo tanto existir en diferentes formas enantioméricas. Esta invención se refiere a isómeros ópticos y estereoisómeros de los compuestos de fórmula I y mezclas de las mismos.

Esta invención también comprende composiciones farmacéuticas que contienen, y procedimientos de tratamiento o prevención que comprenden administrar, profármacos de los compuestos de fórmula I. Compuestos de fórmula I que tienen grupos libres amino, amido, hidroxi o carboxílicos, se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un residuo aminoácido, o una cadena polipeptídica de dos o más (por ejemplo, dos, tres o cuatro) residuos aminoácidos los cuales están unidos covalentemente a través de enlaces peptídicos a grupos libres amino, hidroxi o carboxílicos de compuestos de fórmula I. Los residuos aminoácidos incluyen los 20 aminoácidos presentes en la naturaleza designados comúnmente por símbolos de tres letras e incluye también 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-emetilhistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gammaaminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. Los profármacos incluyen también compuestos en los cuales carbonatos, carbamatos, amidas, y ésteres de alquilo están covalentemente unidos a los sustituyentes anteriores de fórmula I a través del carbono del grupo carbonilo de la cadena lateral del profármaco. Los profármacos también incluyen compuestos de fórmula I en los cuales el ácido hidroxámico y el resto del grupo carbonilo forman un grupo de fórmula

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en la que Y es como se define en la fórmula I y U y V son independientemente carbonilo, metileno, SO_{2} o SO_{3} y b es un número entero de uno a tres, en el que cada grupo metileno se sustituye opcionalmente con hidroxi.

Los compuestos preferidos de fórmula I incluyen aquellos en los que Y es hidrógeno, fluoro o cloro, preferiblemente 4-fluoro o 4-cloro.

Otros compuestos preferidos de fórmula I incluyen aquellos en los que R^{1} es hidrógeno.

Los compuestos específicos preferidos de fórmula I incluyen los siguientes:

éster etílico del ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonil]-(1-hidroxi-carbamoilciclobutil)amino]-propiónico, y

ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonil]-(1-hidroxi-carbamoilciclobutil)amino]-propiónico.

Otros compuestos de fórmula I incluyen los siguientes:

ácido 3-[(1-hidroxicarbamoilciclobutil)-(4-fenoxibencenosulfonil)amino]propiónico,

ácido 3-[[4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoilciclobutil)amino]-propiónico;

éster etílico del ácido 3-[(1-hidroxicarbamoilciclobutil)-(4-fenoxibencenosulfonil)amino]propiónico; y

éster etílico del ácido 3-[[4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonil]-(1-hidroxicarbamoilciclobutil)amino]-propiónico.

La presente invención se refiere también a la composición farmacéutica para el tratamiento de una afección seleccionada del grupo que consta de artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad del transplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica por contacto, cáncer (tal como tumor canceroso sólido incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bullosa, osteoporosis, pérdida de implantes artificiales de las articulaciones, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo en la cabeza, lesión en la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos o crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía cerebral amiloide, incremento nootrópico o de cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, daño corneal, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización corneal, escleritis, SIDA, sepsis, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por la actividad metaloprotesa en un mamífero, incluido un humano, que comprende una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo efectiva en tales tratamientos y un portador farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica para la inhibición de (a) metaloprotesas de matriz u otras metaloproteasas implicadas en la degradación de la matriz, o (b) una reprolisina de mamífero (tal como agrecanasa o TS-1 de ADAM, 10, 12, 15 y 17, más preferiblemente ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un humano, que comprende una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también se refiere al uso de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I para la preparación de un medicamento para tratar una afección seleccionada del grupo que consiste en artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad del transplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica por contacto, cáncer (tal como tumor canceroso sólido incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bullosa, osteoporosis, pérdida de implantes artificiales de las articulaciones, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo en la cabeza, lesión en la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos o crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía cerebral amiloide, incremento nootrópico o de cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, daño corneal, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización corneal, escleritis, SIDA, sepsis, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad metaloproteasa y otras enfermedades caracterizadas por actividad reprolisina en un mamífero, incluido un humano, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad de un compuesto de fórmula 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo efectiva en el tratamiento de una afección tal.

La presente invención también se refiere al uso de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I para la preparación de un medicamento para la inhibición de (a) metaloproteasas de matriz u otras metaloproteasas implicadas en la degradación de la matriz, o (b), una reprolisina de mamíferos (tal como agrecanasa o TS-1, 10, 12, 15 y 17 de ADAM, preferiblemente ADAM-17) en un mamífero, incluido un humano, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Esta invención también comprende composiciones farmacéuticas que contienen profármacos o compuestos de la fórmula I. Esta invención comprende también procedimientos para tratar o prevenir trastornos que pueden tratarse o provenirse por la inhibición de metaloproteasas de matriz o la inhibición de reprolisina de mamíferos que comprende administrar profármacos de compuestos de la fórmula I. Los compuestos de la fórmula I que tienen grupos libres amino, amido, hidroxi o carboxílicos se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un residuo aminoácido, o una cadena polipeptídica o dos o más (por ejemplo, dos, tres, o cuatro) residuos aminoácidos los cuales están covalentemente unidos a través de enlaces peptídicos a grupos libres amino, hidroxi o ácidos carboxílicos de compuestos de fórmula I. Los residuos de aminoácido incluyen los 20 aminoácidos que se dan en la naturaleza designados comúnmente por símbolos de tres letras e incluyen también, 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvalina, beta-alanina, ácido gamma-amimobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. Los profármacos incluyen también compuestos en los cuales carbonatos, carbamatos, amidas, y ésteres de alquilo están covalentemente unidos a los sustituyentes anteriores de fórmula I a través del carbono del grupo carbonilo de la cadena lateral del profármaco.

Un especialista de habilidad normal en la técnica apreciará que los compuestos de la invención son útiles para tratar una colección diversa de enfermedades. Un especialista de habilidad normal en la técnica apreciará también que cuando se usan los compuestos de la invención en el tratamiento de una enfermedad específica que los compuestos de la invención se pueden combinar con varios agentes terapéuticos existentes usados para esa enfermedad.

Para el tratamiento de artritis reumatoide, los compuestos de la invención se pueden combinar con agentes tales como inhibidores del TNF-\alpha tales como anticuerpos monoclonales anti-TNF y moléculas inmunoglobulinas para el receptor de TNF (tales como Enbrel®), metotrexato de baja dosis, lefunimida, hidroxicloroquina, d-penicilamina, auranofina u oro oral o parenteral.

Los compuestos de la invención se pueden usar también en combinación con los agentes terapéuticos existentes para el tratamiento de la osteoartritis. Los agentes adecuados para usarse en combinación incluyen agentes estándar no esteroídicos antiinflamatorios (subsiguientemente en el presente documento NSAID) tales como piroxicam, diclofenac, ácidos propiónicos tales como naproxen, flubiproben, fenoprofen, ketoprofen e ibuprofen, fenamatos tales como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tales como fenilbutazona, salicilatos tales como aspirina, inhibidores COX-2 tales como celecoxib y rofecoxib, analgésicos y terapias intracelulares tales como corticosteroides y ácidos hialurónicos tales como hyalgan y sinvisco.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con agentes anticancerígenos tales como endostatina y angiostatina o fármacos citotóxicos tales como adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, taxol, taxotere y alcaloides, tales como vincristina, y antimetabolitos tales como metotrexato.

Los compuestos de la presente invención pueden usarse también en combinación con agentes cardiovasculares tales como bloqueantes de canales de calcio, agentes que bajan lípidos tales como estatinas, fibratos, beta-bloqueantes, inhibidores de ACE, antagonistas del receptor de angiotensina-2 y inhibidores de agregación de plaquetas.

Los compuestos de la presente invención pueden usarse también en combinación con agentes CNS tales como antidepresivos (tales como sertralina), fármacos antiparkinsonianos (tales como deprenilo, L-dopa, requip, miratex, inhibidores MAOB tales como selegina y rasagilina, inhibidores de comP tales como Tasmar, inhibidores de A-2, inhibidores de la recaptación de dopamina, antagonistas de NMDA, agonistas de nicotina, agonistas de dopamina e inhibidores de la óxido nítrico sintasa neuronal), y fármacos anti-Alzheimer tales como Aricept, tacrina, inhibidores de COX-2, propentofilina o metrifonato.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con agentes de osteoporosis tales comodroloxifeno o fosomax y agentes inmunosupresores tales como FK-506 y rapamicina.

Descripción detallada de la invención

Los siguientes esquemas de reacción ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. A menos que se indique lo contrario, Y y R^{1} en los esquemas de reacción y la discusión que sigue se definen como anteriormente.

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Esquema 1

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Esquema 1 (continuación)

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El esquema 1 se refiere a la preparación de los compuestos de la fórmula I. En referencia al esquema 1, los compuestos de fórmula I se pararan a partir de un compuesto de fórmula II mediante la eliminación del grupo hidroxilo protector de amina, en el que R^{16} es bencilo. La eliminación del grupo protector de hidroxilamina se lleva a cabo mediante hidrogenolisis del grupo protector bencilo usando paladio catalítico en sulfato de bario en un disolvente polar a una temperatura de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 5 horas, preferiblemente de aproximadamente 3 horas.

El compuesto de fórmula II, en el que R^{16} es bencilo, se prepara a partir de un compuesto de fórmula III mediante activación del compuesto de fórmula III seguido por reacción con bencilhidroxilamina. El compuesto de fórmula III se activó mediante tratamiento con hexafluorofosfato de (benzotriazol-1-iloxi)tris(metilamino) fosfonio en presencia de una base, a temperatura ambiente, en un disolvente polar. La reacción mencionada se presentó durante un periodo de aproximadamente 15 minutos a aproximadamente 4 horas, preferiblemente durante 1 hora. El compuesto activado derivado de la fórmula III se convirtió in situ al compuesto de fórmula II mediante reacción con hidrocloruro de bencilhidroxamina. La reacción con hidrocloruro de bencilhidroxamina se llevó a cabo durante aproximadamente 1 hora a aproximadamente 5 días, preferiblemente durante 16 horas, a una temperatura de aproximadamente 40ºC a aproximadamente 80ºC, preferiblemente aproximadamente 60ºC. Las bases adecuadas incluyen N-metilmorfolina o diisopropiletilamina, preferiblemente diisopropiletilamina. Los disolventes adecuados incluyen N,N-dimetilformamida o N-metilpirrolidina-2-ona, preferiblemente N,N-dimetilformamida.

El compuesto de fórmula III se prepara a partir de un compuesto de fórmula IV, en el que R^{16} es bencilo, mediante eliminación del grupo protector R^{16} y reducción del doble enlace de la cadena lateral mediante hidrogenolisis usando paladio sobre carbono en un disolvente tal como metanol o etanol, durante un periodo de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas, preferiblemente 16 horas, a una temperatura de aproximadamente 20ºC a aproximadamente 25ºC, es decir, a temperatura ambiente.

El compuesto de arilsulfonamino de fórmulas IV, en el que R^{16} es bencilo, se prepara a partir del correspondiente compuesto de fórmula V, mediante reacción con un compuesto de la fórmula HC\equivC-CO_{2}R^{1}, en la que R^{1} es alquilo en presencia de una base, tal como carbonato de potasio, carbonato de cesio, hexametildisilazida de potasio, hidruro de sodio, o fluoruro de tetrabutilamonio, preferiblemente carbonato de cesio. La reacción se agitó en un disolvente polar, tal como dimetilformamida, N-metilpirrolidin-2-ona o t-butanol a temperatura ambiente, durante un periodo de tiempo entre aproximadamente 2 horas y aproximadamente 48 horas, preferiblemente aproximadamente 18 horas.

El compuesto de fórmula V, en el que R^{16} es bencilo, se preparo a partir del correspondiente compuesto de fórmula VI, mediante reacción con un derivado reactivo funcional de un compuesto ácido arilsulfónico de la fórmula

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en presencia de una base, tal como trietilamina, y un disolvente polar, tal como tetrahidrofurano, 1,2-dimetoxietano, dimetilformamida, dioxano, agua o acetonitrilo, preferiblemente dimetilformamida. La mezcla de reacción se agitó, a temperatura ambiente, durante un periodo de tiempo entre aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 60 minutos.

Los compuestos de la fórmula VI se pueden preparar a partir de compuestos de fórmula VIII mediante tratamiento con una azida metálica, tal como azida de sodio, en un disolvente polar, tal como DMF, a temperatura ambiente seguida por la reducción del intermediario azida de fórmula VII, así formados, mediante hidrogenolisis sobre paladio en un disolvente alcohólico que contiene al menos un equivalente de un ácido mineral tal como ácido clorhídrico. El grupo R^{16} de la fórmula VI se puede convertir a otros grupos R^{16} refluyendo los compuestos de la fórmula VI con un exceso del alcohol en tolueno deseado R^{16}OH en presencia de un equivalente de ácido sulfónico de p-tolueno.

Los compuestos de fórmula VIII y IX están comercialmente disponibles o se pueden fabricar mediante procedimientos bien conocidos por aquellos de habilidad normal en la técnica.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos ácidos de la invención son sales formadas con bases, llamadas sales catiónicas, tales como las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, tales como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, igual que las sales de amonio, trimetilamonio, dietilamonio, y tris-(hidroximetil)-metilamonio.

De forma similar las sales de adición ácida, tal como de ácidos minerales, ácidos orgánicos carboxílicos y ácidos orgánicos sulfónicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido metanosulfónico, ácido maleico, están también posiblemente proporcionando un grupo básico, tal como piridilo, que constituyen parte de la estructura.

Los compuestos de la fórmula I los cuales son básicos en la naturaleza son capaces de formar una amplia variedad de diferentes sales con varios ácidos inorgánicos y orgánicos. Aunque tales sales pueden ser farmacéuticamente aceptables para administración a animales, es a menudo deseable en la práctica aislar inicialmente un compuesto de la fórmula I de la mezcla de reacción como una sal farmacéuticamente inaceptable y después simplemente convertir ésta en el compuesto base libe mediante tratamiento con un reactivo alcalino, y subsiguientemente convertir la base libre a una sal de adición ácida farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición ácida de los compuestos básicos de esta invención se preparan adecuadamente tratando el compuesto básico con una cantidad sustancialmente equivalente del mineral o ácido orgánico escogido en un medio disolvente acuoso o en un disolvente orgánico adecuado tal como metanol o etanol. Tras la evaporación cuidadosa del disolvente, se obtiene la sal sólida deseada.

Los ácidos que se usan para preparar las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de los compuestos básicos de la invención son aquellos que forman sales de adición ácida no tóxicas, es decir, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como sales de clorhídrico, bromhídrico, hidroyoduro, nitrato, sulfato o bisulfato, fosfato o fosfato ácido, acetato, lactato, citrato o citrato ácido, tartrato o bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato [es decir, 1,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)].

Aquellos compuestos de fórmula I que son también ácidos en la naturaleza, por ejemplo, donde R^{3} es hidrógeno, son capaces de formar sales básicas con varios cationes farmacológicamente aceptables. Ejemplos de estas sales incluyen las sales de metales alcalinos o metales alcalinotérreos, y, particularmente, las sales de sodio y potasio. Estas sales se preparan todas mediante técnicas convencionales. Las bases químicas que se usan como reactivo para preparar las sales de base farmacéuticamente aceptables de esta invención son aquellas que forman sales de base no tóxicas con los compuestos ácidos de fórmula I descritos en el presente documento. Estas sales básicas no tóxicas incluyen aquellas derivadas de cationes farmacológicamente aceptables tales como sodio, potasio, calcio y magnesio, etc. Estas sales pueden prepararse fácilmente tratando los compuestos ácidos correspondientes con una disolución acuosa conteniendo los cationes farmacológicamente aceptables, y después evaporando la disolución resultante hasta sequedad, preferiblemente bajo presión reducida. Alternativamente, se pueden preparar también mezclando disoluciones en alcanoles inferiores de los compuestos ácidos y el alcóxido de metal alcalino deseado conjuntamente, y después evaporando la disolución resultante hasta sequedad, preferiblemente de la mismas manera que antes. En cualquiera de los dos casos, las cantidades estequiométricas de reactivos se emplean preferiblemente con el fin de asegurar la completación de la reacción y las máximas producciones de producto.

La capacidad de los compuestos de fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables (de aquí en adelante referidas como los compuestos MMP-13 selectivos de la presente invención) para inhibir las metaloproteasas de la matriz, preferiblemente 2, 9, o 13, más preferiblemente MMP-13 y, consecuentemente, demostrar su efectividad para tratar enfermedades caracterizadas por inhibición de la metaloproteasa de la matriz, se muestra por las siguientes pruebas de ensayo in vitro.

Ensayo biológico Inhibición de colagenasa humana (MMP-1)

La colagenasa humana recombinante se activó con tripsina usando la siguiente razón: 10 \mug de tripsina por 100 \mug de colagenasa. La tripsina y la colagenasa se incubaron a temperatura ambiente durante 10 minutos, después se añadió un inhibidor de tripsina de soja en un exceso de cinco veces (50 \mug/10 \mug de tripsina).

Se fabricaron, en dimetilsulfóxido, disoluciones de reserva de 10 mM de inhibidores y después se diluyeron usando el siguiente esquema:

10 mM \longrightarrow 120 \muM \longrightarrow 12 \muM \longrightarrow 1,2 \muM \longrightarrow 0,12 \muM

Después, se añadieron veinticinco microlitros de cada concentración por triplicado a los pocillos apropiados de una placa de microfluorescencia de 96 pocillos. La concentración final de inhibidor será una dilución 1:4 después de la adición de enzima y sustrato. Los controles positivos (enzima, ningún inhibidor) se disponen en los pocillos D1-D6 y los blancos (ninguna enzima, ningún inhibidor) se disponen en los pocillos D7-D12.

La colagenasa se diluye a 400 ng/ml y se añaden entonces 25 \mul a pocillos apropiados de la placa de microfluorescencia. La concentración final de colagenasa en el ensayo es de 100 ng/ml.

El sustrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) está elaborado como una reserva de 5 Mm en dimetilsulfóxido y después se diluyó a 20 mM en el tampón de ensayo. El ensayo se inició mediante la adición de
50 \mul de sustrato por pocillo de la placa de microfluorescencia para dar una concentración final de 10 \muM.

Las lecturas de fluorescencia (excitación a 360 nM, emisión a 460 nm) se tomaron a tiempo 0 y entonces a intervalos de 20 minutos. El ensayo se llevó a cabo a temperatura ambiente con un típico tiempo de ensayo de tres horas.

Después, se representó fluorescencia frente a tiempo tanto para el blanco como para las muestras que contienen colagenasa (los datos se promedian de determinaciones por triplicado). Un punto temporal que proporciona una buena señal (el blanco) y que está en una parte lineal de la curva (usualmente alrededor de 120 minutos) se escoge para determinar los valores de CI_{50}. El tiempo cero se usa como un blanco para cada compuesto a cada concentración y estos valores se sustraen de los datos a 120 minutos. Los datos se representan como concentración del inhibidor frente a % de control (inhibidor de fluorescencia dividido por fluorescencia de colagenasa sola x 100). Los CI_{50} se determinaron a partir de la concentración de inhibidor que proporciona una señal que es el 50% del control.

Si se comunica que CI_{50} es <0,03 entonces los inhibidores se ensayaron a las concentraciones de 0,3 \muM, 0,03 \muM, 0,03 \muM, y 0,003 \muM.

Inhibición de MMP-13

El MMP-13 recombinante humano se activó con 2 mM de APMA (acetato p-aminofenil mercúrico) durante 1,5 horas, a 37ºC y se diluyó a 400 mg/ml en tampón de ensayo (50 mM de Tris, pH 7,5, 200 mM de cloruro de sodio, 5 mM de cloruro de calcio, 20 \muM de cloruro de cinc, 0,02% brij). Se añadieron 25 microlitros de enzima diluida por pocillo en una placa de microfluorescencia de 96 pocillos. La enzima se diluyó entonces en una razón 1:4 en el ensayo por medio de la adición del inhibidor y el sustrato para dar una concentración final en el ensayo de 100 mg/ml.

Se elaboran 10 mM de disoluciones de reserva de inhibidores en dimetilsulfóxido y después se diluyen en tampón de ensayo como por el esquema inhibidor de dilución por inhibición de la colagenasa humana (MMP-1): veinticinco microlitro de cada concentración se añaden por triplicado a la placa de microfluorescencia. Las concentraciones finales en el ensayo son 30 \muM, 3 \muM, 0,3 \muM y 0,03 \muM.

El sustrato se prepara (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) como para inhibición de la colagenasa humana (MMP-1) y se añaden 50 ml por cada pocillo para dar una concentración final de cada ensayo de 10 \muM.. Se toman las lecturas de fluorescencia a tiempo 0 y cada 5 minutos durante 1 hora.

Los controles positivos constan de enzima y sustrato sin inhibidor y el blanco consta sólo de sustrato.

Se determinaron los CI_{50} de acuerdo con la inhibición de colagenasa humana (MMP-1). Si se comunica que los CI_{50} son menores que 0,03 \muM, los inhibidores se ensayaron después a las concentraciones finales de 0,3 \muM, 0,03 \muM,
0,003 \muM y 0,0003 \muM.

Los compuestos de la presente invención poseen una actividad sorprendentemente selectiva contra la metaloproteasa-13 de la matriz (colagenasa 3) en comparación con la metaloproteasa-1 de la matriz (colagenasa 1). Específicamente, compuestos de la fórmula I pueden ser 100 veces más selectivos para la metaloproteasa-13 de la matriz (colagenasa 3) que para la metaloproteasa-1 de la matriz (colagenasa 1) y tiene CI_{50} de menos de 10 nM frente a la metaloproteasa-13 de la matriz (colagenasa 3). La tabla 1 demuestra que los compuestos de la invención poseen una selectividad inesperada por la inhibición de MMP-13.

TABLA 1

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Inhibición de gelatinasa (MMP-2)

La gelatinasa humana recombinante de 72 kD (MMP-2 gelatinasa A) se activó durante 16-18 horas con acetato p-aminofenilmercúrico (a partir de una reserva preparada recientemente de NaOH 0,2 N) a 4ºC, balanceándola con cuidado.

Disoluciones de reserva de 10 mM en dimetilsulfóxido de inhibidores se diluyen en serie en un tampón de ensayo (50 mM TRIS, pH 7,5, 200 mM NaCl, 5 mM CaCl_{2}, 20 \muM ZnCl_{2} y 0,02% BRIJ-35 (vol./vol.)) usando el siguiente esquema:

10 mM \longrightarrow 120 \muM \longrightarrow 12 \muM \longrightarrow 1,2 \muM \longrightarrow 0,12 \muM

Se hacen diluciones adicionales tanto como sea necesario siguiendo este mismo esquema. Un mínimo de cuatro concentraciones inhibitorias para cada compuesto se llevan a cabo en cada ensayo. Se añaden entonces 25 \mul de cada concentración para triplicar los pocillos de una placa de microfluorescencia negra de 96 pocillos con el fondo en U. Como el volumen final del ensayo es de 100 \mul, las concentraciones finales de inhibidor son el resultado de una dilución adicional 1:4 (es decir 30 \muM \longrightarrow 3 \muM \longrightarrow 0,3 \muM \longrightarrow 0,03 \muM, etc.). Se preparan también un blanco (ninguna enzima, ningún inhibidor) y un control positivo de enzima (con enzima, ningún inhibidor) por triplicado.

La enzima activada se diluye a 100 ng/ml en tampón de ensayo, se añaden 25 \mul por pocillo a los pocillos apropiados de la microplaca. La concentración final de enzima en el ensayo es de 25 ng/ml (0,34 nM).

Una disolución de reserva de cinco mM en dimetilsulfóxido de sustrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) se diluye en tampón de ensayo hasta 20 \muM. El ensayo se inició por adición de 50 \mul de sustrato diluido produciendo una concentraciónde ensayo final de 10 \muM de sustrato. A tiempo cero, la lectura de fluorescencia (excitación 320; emisión 390) se toma inmediatamente y las lecturas subsiguientes se toman cada quince minutos a temperatura ambiente con un PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well Plate Reader con el aumento a 90 unidades.

La media de valor de fluorescencia de la enzima y el blanco se representó frente al tiempo. Un tiempo temprano en la parte lineal de esta curva se eligió para las representaciones de CI_{50}. El punto temporal cero para cada compuesto a cada dilución se sustrajo del último punto temporal y los datos expresados como porcentaje de control de enzimas (inhibidor de fluorescencia dividido por fluorescencia del control enzimático positivo x 100). Los datos se representaron como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control enzimático. Los CI_{50} se definen como la concentración de inhibidor que proporciona una señal que es el 50% del control enzimático positivo.

Inhibición de actividad estromelisina (MMP-3)

La estromelisina recombinante humana (MMP-3, estromelisina-1) se activó durante 20-22 horas con 2 mM de acetato p-aminofenilmercúrico (a partir de una reserva recientemente preparada de 100 mM en NaOH 0,2 N) a 37ºC.

Las disoluciones de reserva 10 mM en dimetilsulfóxido se diluyen en serie en tampón de ensayo (50 mM TRIS, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl_{2} y 0,02% BRIJ-35 (vol./vol.)) usando el siguiente esquema:

10 mM \longrightarrow 120 \muM \longrightarrow 12 \muM \longrightarrow 1,2 \muM \longrightarrow 0,12 \muM

Se hacen diluciones adicionales tanto como sea necesario siguiendo este mismo esquema. Un mínimo de cuatro concentraciones inhibitorias para cada compuesto se llevan a cabo en cada ensayo. Se añaden entonces 25 \mul de cada concentración para triplicar los pocillos de una placa de microfluorescencia negra de 96 pocillos con el fondo en U. Como el volumen final del ensayo es de 100 \mul, las concentraciones finales de inhibidor son el resultado de una dilución adicional 1:4 (es decir 30 \muM \longrightarrow 3 \muM \longrightarrow 0,3 \muM \longrightarrow 0,03 \muM, etc.). Se preparan también un blanco (ninguna enzima, ningún inhibidor) y un control positivo de enzima (con enzima, ningún inhibidor) por triplicado.

La enzima activada se diluye a 200 ng/ml en tampón de ensayo, se añaden 25 \mul por pocillo a los pocillos apropiados de la microplaca. La concentración final de enzima en el ensayo es de 50 ng/ml (0,875 nM).

Una disolución de reserva de diez mM en dimetilsulfóxido de sustrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH_{2}) se diluye en tampón de ensayo hasta 6 \muM. El ensayo se inició mediante adición de 50 \mul de sustrato diluido produciendo una concentración final del ensayo de 3 \muM. A tiempo cero, la lectura de fluorescencia (excitación 320; emisión 390) se toma inmediatamente y las lecturas subsiguientes se toman cada quince minutos a temperatura ambiente con un PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well Plate Reader con el aumento a 90 unidades.

La media de valor de fluorescencia de la enzima y el blanco se representó frente al tiempo. Un tiempo temprano en la parte lineal de esta curva se eligió para las representaciones de CI_{50}. El punto temporal cero para cada compuesto a cada dilución se sustrajo del último punto temporal y los datos expresados como porcentaje de control de enzimas (inhibidor de fluorescencia dividido por fluorescencia del control enzimático positivo x 100). Los datos se representaron como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control enzimático. Los CI_{50} se definen como la concentración de inhibidor que proporciona una señal que es el 50% del control enzimático positivo.

Alternativamente, la inhibición de la actividad estromelisina se puede someter a ensayo usando Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH_{2} (3 \muM) bajo condiciones similares a las que se dan en la inhibición de colagenaza humana (MMP-1).

La estromelisina humana se activó durante 20-24 horas a 37ºC con 2 mM de APMA (acetato p-aminofenilmercúrico) y se diluye para proporcionar una concentración final en el ensayo de 50 ng/ml. Se diluyen los inhibidores como para la inhibición de la colagenaza humana (MMP-1) para proporcionar concentraciones finales en el ensayo de 30 \muM, 3 \muM, 0,3 \muM, y 0,03 \muM. Cada concentración se hace por triplicado.

Las lecturas de fluorescencia (excitación 320; emisión 390) se toman a tiempo cero y después a intervalos de 15 minutos durante 3 horas.

Los valores de CI_{50} se determinan según la inhibición de la colagenasa humana (MMP-1). Si se comunica que los CI_{50} son menores que 0,03 \muM, los inhibidores se ensayaron después a las concentraciones finales de 0,03 \muM, 0,003 \muM y 0,0003 \muM.

Los valores de CI_{50} se determinaron de la mima manera que para colagenasa.

Inhibición de la producción de TNF

La capacidad de los compuestos o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para inhibir la producción de TNF y, consecuentemente, demostrar su efectividad para tratar enfermedades implicando la producción de TNF se muestra por el siguiente ensayo in vitro:

Se aislaron células mononucleares humanas a partir de sangre humana anticoagulada usando una técnica de separación Ficoll-hypaque. (2) Las células mononucleares se lavaron tres veces en la solución salina en equilibrio de Nanks (HBSS) con cationes divalentes y se resuspendió a una densidad de 2 x 10^{6} /ml en HBSS que contiene 1% de BSA. Diferentes cuentas determinadas usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que los monocitos variaron del 17 al 24% de las células totales en estas preparaciones.

180 \mul de la suspensión celular se dividieron en alícuotas en placas de 96 pocillos de fondo plano (Costar). Las adiciones de los compuestos y LPS (concentración final de 100 ng/ml) proporcionaron un volumen final de 200 \mul. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de una incubación de 4 horas a 37ºC en un incubador de CO_{2} humidificado, las placas se eliminaron y centrifugaron (10 minutos a aproximadamente 250 x g) y los sobrenadantes se eliminaron y ensayaron para TNFa usando el kit R&D ELISA.

Inhibición de la producción de TNF-\alpha soluble

La capacidad de los compuestos o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para inhibir la liberación celular de TNF-\alpha y, consecuentemente, demostrar su efectividad para tratar enfermedades que implica la desregulación de TNF-\alpha soluble se muestra mediante el siguiente ensayo in vitro:

Procedimiento para la evaluación de actividad conversora de enzimas de TNF-\alpha recombinante Expresión de TACE recombinante

Un fragmento de DNA que codifica para la secuencia señal, preprodominio, prodominio y dominio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473), se puede amplificar mediante reacción en cadena de la polimerasa usando una librería de cDNA de pulmón humano como una plantilla. El fragmento amplificado es entonces clonado dentro del vector pFastBac. La secuencia de DNA del inserto se confirma por ambas cadenas. Un bacmido preparado usando pFastBac en E. coli DH10Bac se transfectó dentro de células de insecto SF9. Las partículas virales se amplificaron después a las fases P1, P2 y P3. Se infectó con el virus P3 se infectó tanto en Sf9 como en las cinco células altas de insecto y de deja crecer a 27ºC durante 48 horas. El medio se recoge y usa para los ensayos y la purificación adicional.

Preparación del sustrato de fluorescencia inactivado

Un modelo peptídico de sustrato TNF-\alpha (LY-Leucina Alanina Glutamina Alanina Valina Arginina Serina-Seina Lisina(CTMR)-Arginina (LY = amarillo Lucifer; CTMR = carboxitetrametilRodamina)) se preparó y la concentración se estimó mediante absorbancia a 560 nm (E_{560}, 60.000 M-1CM-1) de acuerdo al procedimiento de Geoghegan, KF, "Improved method for converting an unmodified peptide to an energy transfer substrate for a proteinase", Bioconjugate Chem. 7, 385-391 (1995). Este péptido comprende el sitio de escisión de pro-TNF el cual se escindió in vivo mediante TACE.

Expresión de TACE recombinante

Un fragmento de DNA que codifica para la secuencia señal, preprodominio, prodominio y dominio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473), se puede amplificar mediante reacción en cadena de la polimerasa usando una librería de cDNA de pulmón humano como una plantilla. El fragmento amplificado es entonces clonado dentro del vector pFastBac. La secuencia de DNA del inserto se confirma por ambas cadenas. Un bacmido preparado usando pFastBac en E. coli DH10Bac se transfectó dentro de células de insecto SF9. Las partículas virales se amplificaron después a las fases P1, P2 y P3. Se infectó con el virus P3 se infectó tanto en Sf9 como en las cinco células altas de insecto y de deja crecer a 27ºC durante 48 horas. El medio se recoge y usa para los ensayos y la purificación adicional.

Reacción enzimática

La reacción, llevada a cabo en un placa de 96 pocillos (Dynatech), se comprende de 70 \mul de disolución tampón (25 mM de Hepes-HCl, pH 7,5, más 20 uM de ZnCl_{2}), 10 \mul de 100 \muM de sustrato fluorescente inactivado, 10 \mul de una disolución de DMSO (5%) del compuesto prueba, y una cantidad de enzima r-TACE la cual causará un 50% de escisión en 60 minutos - en un volumen total de 100 \mul. La especificidad de la escisión enzimática en el enlace amida ente alanina y valina se verificó mediante HPLC y espectrometría de masas. Las tasas iniciales de escisión se someten a seguimiento midiendo la velocidad de incremento en fluorescencia a 530 nm (excitación a 409 nm) durante 30 minutos. Los experimentos se controlan como sigue: 1) por los antecedentes de fluorescencia en el sustrato; 2) por la fluorescencia o sustrato totalmente escindido; 3) por inactivación de la fluorescencia o aumento de las disoluciones que contienen el compuesto prueba.

Los datos se analizaron como sigue. Las tasas de los compuestos no de prueba que contienen reacciones "control" se promediaron para establecer el valor del 100%. La velocidad de reacción en presencia del compuesto prueba se comparó a aquel en ausencia de compuesto, y se tabuló como "porcentaje de compuesto no de prueba". Los resultados se representaron como "% de control" frente al logaritmo de la concentración del compuesto y la mitad del punto máximo del valor de CI_{50} determinado.

Todos los compuestos de la invención tienen CI_{50} de menos de 1 \muM, preferiblemente de menos de 50 nM. Los compuestos más preferidos de la invención son al menos 100 veces menos potentes contra r-MMP-1 que en los ensayos TACE anteriormente mencionados.

Ensayo de monocitos humanos

Las células humanas mononucleares se aislaron a partir de sangre humana sometida a los efectos de un anticoagulante usando una técnica de separación Ficoll-hypaque de una etapa. (2) Las células mononucleares se lavaron tres veces en disolución de salina de Hank en el equilibrio (HBSS) con cationes divalentes y se resuspendieron a una densidad de 2 x 10^{6} /ml en HBSS que contiene 1% de BSA. Las cuentas diferenciales determinadas usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que los monocitos variaron del 17 al 24% de las células totales en estas preparaciones.

180 m de la suspensión de la célula se dispusieron en alícuotas dentro de placas de 96 pocillos (Costar). Adiciones de compuestos y LPS (100 ng/ml de concentración final) dieron un volumen final de 200 \mul. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de cuatro horas de incubación a 37ºC en un incubador con CO_{2} humidificado, las placas se retiraron y centrifugaron (10 minutos a aproximadamente 250 x g) y los sobrenadantes se eliminaron y ensayaron para detectar TNF-\alpha usando el kit R&D ELISA.

Ensayo de agrecanasa

Los condrocitos porcinos primarios del cartílago articular se aislaron mediante digestión secuencial con tripsina y colagenasa seguida por digestión por colagenaza durante toda una noche y se plaquearon a 2 x 10^{5} células por pocillo dentro de placas de 48 pocillos con 5 \muCi/ml ^{35}S (1000 Ci/mmol) de sulfuro en placas recubiertas de colágeno de tipo I. Se permitió a las células incorporar etiqueta dentro de la matriz de proteoglicano (aproximadamente 1 semana) a 37ºC, bajo una atmósfera de 5% de CO_{2}.

La noche antes de iniciar el ensayo, los condorcitos en monocapa se lavaron dos veces en DMEM /1% PSF/G y entonces se permitió incubar en DMEM/1% FBS fresco durante toda una noche.

A la mañana siguiente los condrocitos se lavan en DMEM/1% PSF/G. Al lavado final se le permitió establecerse en las placas en el incubador mientras se realizan diluciones.

Los medios y diluciones pueden hacerse como se describe en la tabla a continuación.

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Las placas se marcan y sólo se usan los 24 pocillos interiores de la placa. Sobre una de las placas, varias columnas se designaron como IL-1 (ningún fármaco) y control (nada de IL-1, ningún fármaco). Estas columnas de control se contaron periódicamente para realizar un seguimiento de la liberación del proteoglicano de 35 S. El control y los medios IL-1 se añadieron a los pocillos (450 ul) seguidos por el compuesto (50 ul) de este modo para iniciar el ensayo. Las placas se incubaron a 37ºC, con una atmósfera con un 5% de CO_{2}.

A una liberación al 40-50% (cuando CPM de los medios IL-1 es 4-5 veces la de los medios de control) como se evalúa mediante contaje de centelleo líquido (LSC) de las muestras de medios, el ensayo se terminó (9-12 horas). El medio se retiró de todos los pocillos y se situó en tubos de centelleo. El centelleo se añadió y las cuentas radiactivas se adquirieron (LSC). Para solubilizar las capas celulares, se añadieron a cada pocillo 500 ul de tampón de digestión de papaína (0,2 M Tris, pH 7,0, 5 mM EDTA, 5 mM DTT, y 1 mg/ml de papaína). Las placas con disolución de digestión se incubaron a 60ºC durante una noche. La capa celular se eliminó de las placas el día siguiente y se situó en tubos de centelleo. Se añadió después el centelleo, y se contaron las muestras (LSC).

Se determinó el porcentaje de cuentas liberadas del total presente en cada pocillo. Las muestras de los triplicados se hicieron con los antecedentes de control sustraídos de cada pocillo. El porcentaje de inhibición del compuesto se basa en las muestras IL-1 como inhibición del 0% (100% del total de cuentas).

Para la administración a seres humanos para la inhibición de la metaloprotreasa-13 de la matriz o la producción de factor de necrosis tumoral (TNF), se puede usar una variedad de rutas convencionales que incluye oralmente, parenteralmente, o tópicamente. En general, el compuesto activo se administrará oralmente o parenteralmente a dosificaciones entre aproximadamente 0,1 y 25 mg/kg de peso corporal del sujeto a tratarse por día, preferiblemente de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 5 mg/kg. Sin embargo, alguna variación en la dosificación ocurrirá necesariamente dependiendo de la afección del sujeto que esté siendo tratado. La persona responsable de la administración determinará, en cualquier caso, la dosis apropiada para el sujeto individual.

Los compuestos de la presente invención e pueden administrar en una amplia variedad de diferentes formas de dosificación, en general, los compuestos terapéuticamente efectivos de esta invención están presentes en tales formas de dosificación a niveles de concentración oscilando de aproximadamente 5,0% a aproximadamente 70% en peso.

Para la administración oral, comprimidos que contienen varios excipientes tales como celulosa microcristalina, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato dicálcico y glicina se pueden emplear conjuntamente con varios desintegrantes tales como almidón (y preferiblemente almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico, y ciertos silicatos complejos, conjuntamente con agentes de unión de granulación, tales como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelación y goma arábiga. Adicionalmente, los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, sulfato de lauril sódico y talco son a menudo muy útiles para los propósitos de comprimir. Las composiciones sólidas de un tipo similar se pueden emplear también como agentes de relleno en cápsulas de gelatina; los materiales preferidos en esta conexión incluyen también lactosa o azúcar de leche, del mismo modo que polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando las suspensiones acuosas y/o elixires se desean para la administración oral, el ingrediente activo se puede combinar con varios agentes edulcorantes o aromatizantes, materiales colorantes o tintes, y, si se desea, agentes emulsificantes y/o de suspensión del mismo modo, conjuntamente con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y varias combinaciones similares de los mismos.

Para la administración parenteral (uso intramuscular, intraperitoneal, subcutáneo e intravenoso) se prepara usualmente una disolución estéril inyectable del ingrediente activo. Se pueden emplear las disoluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención bien en aceite de sésamo o bien en aceite de cacahuete o en propilenglicol acuoso. Estas disoluciones acuosas son adecuadas para propósitos de inyección intravenosa. Las disoluciones aceitosas son adecuadas para propósitos de inyección intraarticular, intramuscular, y subcutánea. La preparación de todas estas disoluciones bajo condiciones estériles se acompleja fácilmente mediante técnicas farmacéuticas estándar bien conocidas para aquellos expertos en la técnica.

Para la administración ocular tópica, la aplicación directa al ojo afectado se puede emplear en forma de una formulación como gotas para los ojos, aerosol, geles o pomadas, o se pueden incorporar en colágeno (tal como poli-2-hidroxietilmetacrilato y copolímeros del mismo), o un escudo polimérico hidrofílico. Los materiales se puede aplicar también como una lente de contacto o un reservorio de vía local o como una composición subconjuntival.

Para administración intraorbital una disolución estéril inyectable del ingrediente activo se preparó usualmente. Se pueden emplear las disoluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención en una disolución o suspensión acuosa (tamaño de partícula de menos de 10 micrones). Las disoluciones acuosas deberían ajustarse y tamponarse adecuadamente, preferiblemente a un pH entre 5 y 8, si es necesario y el diluyente líquido volverse primero isotónico. Pequeñas cantidades de polímeros se pueden añadir para incrementar la viscosidad o para la liberación sostenida (tales como polímeros celulósicos, dextrano polietilenglicol, o ácido algínico). Estas disoluciones son adecuadas para propósitos de inyección intraorbital. La preparación de todas estas disoluciones bajo condiciones estériles se lleva a cabo fácilmente mediante técnicas farmacéuticas estándar bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. En el caso de los animales, los compuestos se pueden administrar intraorbitalmente a niveles de dosificación de aproximadamente 0,1 a 50 mg/kg/día, ventajosamente de 0,2 a 10 mg/kg/día dados en una dosis única o en hasta tres dosis divididas.

Los compuestos activos de la invención se pueden formular también en composiciones rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, conteniendo bases convencionales de supositorios, tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

Para la administración intranasal o administración por inhalación, los compuestos activos de la invención se administran convenientemente en forma de una disolución o suspensión a partir de un contenedor con pulverizador de bomba que es presionado o bombeado por el paciente o como una presentación de pulverizador de aerosol desde un contenedor presurizado o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado la unidad de dosificación se puede determinar proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. El contenedor o nebulizador presurizado puede contener una disolución o suspensión del compuesto activo. Cápsulas y cartuchos (hechos, por ejemplo, de gelatina) para usar en un inhalador o insuflador se puede formular conteniendo un polvo mezcla de un compuesto de la invención y una base adecuada de polvo tal como lactosa o almidón.

Los siguientes ejemplos ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. Los puntos de fusión están sin corregir. Los datos de RMN se notifican en partes por millón (\delta) y se referencian a la señal de bloqueo de deuterio del disolvente muestra (deuteriodimetilsulfóxido a menos que se especifique lo contrario). Los reactivos comerciales se utilizaron sin purificación adicional. TH se refiere a tetrahidrofurano. DMF se refiere a N,N-dimetilformamida. Cromatografía se refiere a una cromatografía en columna diseñada usando 32-63 mm de gel de sílice y ejecutada bajo condiciones de presión de nitrógeno (cromatografía ultrarrápida). Temperatura de la habitación o temperatura ambiente se refiere a de 20 a 25ºC. Todas las reacciones no acuosas se ejecutaron bajo una atmósfera de nitrógeno por conveniencia y para maximizar los rendimientos. La concentración a presión definida significa que se usó un evaporador rotatorio.

Ejemplo 1 Ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]-1[(n-hidroxicarbamoil)-ciclobutil]amino] propiónico A) 1-azidociclobutano-1-carboxilato de etilo

Se añadieron a un matraz 1-bromociclobutano-1-carboxilato (5,0 g, 25 mmol), dimetilformamida (120 ml), y azida sódica (2,43 g, 37,5 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 días, la reacción se en éter y se lavó con agua (3 x 150 ml). La fase orgánica se eliminó y secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó mediante filtración por aspiración y el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio para dar un líquido incoloro, 3,69 g, rendimiento 87%.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,29 (t, 3H), 2,00 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 4,22 (q, 2H); IR (puro) 2.109 cm^{-1}.

B) 1-aminociclobutano-1-carboxilato clorhídrico de etilo

1-azidociclobutano-1-carboxilato de etilo (15,98 g, 94 mmol) se hidrógeno sobre un 5% de paladio sobre carbono (2 g) con ácido clorhídrico concentrado (8 ml) en etanol (250 ml) a 40 psi a temperatura ambiente. Después de aproximadamente 3 horas, el catalizador se eliminó por filtración por aspiración y el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio produciendo un sólido blanco, 16,52 g, rendimiento del 97%.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,34(t, 3H), 2,15(m, 1H), 2,30(m, 1H), 2,70(m,2H), 2,80(m,2H), 4,30(q, 2H), 9,05(s a, 2H).

C) 1-aminociclobutano-1-carboxilato tosilato de bencilo

A un matraz se añadió 1-aminociclobutano-1-carboxilato clorhídrico de etilo (4,97 g, 29,6 mmol), ácido p-toluenosulfónico (6,27 g, 33 mmol), alcohol bencílico (83 ml), y tolueno (138 ml). La reacción se sometió a reflujo mediante evaporador rotatorio. El residuo se recogió en éter y se situó durante toda una noche en un congelador. El sólido blanco resultante se recogió y secó, 5,27 g, producción 93%.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,90 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,40 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 5,10 (s, 2H), 7,05 (d, 2H), 7,25 (s a, 5H), 7,70 (d, 2H), 8,50 (s a, 2H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 206 (M^{+}+1).

D) 1-[4-(4-fluorofenoxil)fenilsulfonilamino]ciclobutano-1-carboxilato de bencilo

Se recogió 1-aminociclobutano-1-carboxilato tosilato de bencilo (27,60 g, 70 mmol) en cloruro de metileno y se lavó con un exceso de disolución de bicarbonato de sodio saturada. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de sacado se eliminó por filtración por aspiración y el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio., Se añadió al residuo cloruro de 4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonilo (20,10 g, 70 mmol), trietilamino (8,48 g, 1,16 ml, 84 mmol), y dimetilformamida (150 ml), y la reacción se agitó durante toda una noche a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con éter y se lavó con ácido clorhídrico 1N (3 x 150 ml), agua (2 x 200 ml), y salmuera saturada (1 x 150 ml). La fase orgánica se separó y secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó por filtración por aspiración y el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio para dar un sólido marrón claro, 24,45 g. Una segunda recogida se obtuvo lavando minuciosamente el agente de secado con cloruro de metileno produciendo después de la evaporación 4,2 g de un sólido blanco, producción total 90%.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,95 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 5,00 (s, 2H), 6,95 (m, 2H), 7,00 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 7,25 (s a, 3H), 7,30 (m, 2H), 7,35 (m, 2H), 7,75 (d, 2H): Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 456 (M^{+}+1).

E)cis y trans 1-{N-(2-etoxicarboniletenil)-N-[4-(4-fluoro-fenoxi)fenilsulfonil]-amino)-ciclobutano-1-carboxilato de bencilo

A un matraz se añadió 1-[4-(4-fluorofenoxil)fenilsulfonilamino]ciclobutano-1-carboxilato de bencilo (10,0 g, 22 mmol), t-BuOH (75 ml), carbonato de cesio (7,16 g, 22 mmol), y propiolato de etilo (4,31 g, 44 mmol, 4,45 ml, d = 0,968). Después de agitar durante aproximadamente 1 hora la reacción se vuelve roja oscura. Después de agitar 5 horas a temperatura ambiente la reacción se diluyó con tolueno y el carbonato de cesio se filtró mediante filtración en el vacío. El filtrado se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó mediante filtración por aspiración y el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio para dar un aceite rojo ladrillo. Esto se cromatografió (columna de 50 mm; 15% de EtOAc: 85% hexano) para dar un aceite amarillo, 5,12 g, rendimiento del 42%. Una segunda parte se obtuvo recromatografiando las reacciones mezcladas produciendo un aceite amarillo, 2,72 g, rendimiento 22% (rendimiento total 64%).

Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 554 (M^{+}+1).

F) Ácido 1-{N-(2-etoxicarboniletil)-N-[4-(4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]-amino)ciclobutano-1-carboxílico

Una mezcla de cis y trans 1-{N-(2-etoxicarboniletenil)-N-[4-(4-fluoro-fenoxi)fenilsulfonil]-amino)-ciclobutano-1-carboxilato de bencilo (11,57 g, 20,9 mmol) se hidrógeno sobre 10% de paladio sobre carbono en etanol (500 ml) durante aproximadamente 24 horas a temperatura ambiente a 40 psi. El catalizador se eliminó por filtración por aspiración y el filtrado hidrogenado como se dijo anteriormente sobre 10% de paladio en carbono (8 g) durante aproximadamente 2 días. El catalizador se eliminó por filtración por aspiración y el disolvente se eliminó medite evaporador rotatorio para dar un espeso aceite almarillo, 4,48 g, rendimiento del 46%.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,24 (t, 3H), 1,80 (m, 1H), 2,10 (m, 1H), 2,45 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 4,12 (q, 2H), 7,00 (d, 2H), 7,10 (m, 4H), 7,80 (d, 2H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 456 (M^{+}+1): HPLXC (C18 NovaPak, 30% a 90% de acetonitrilo/gradiente de agua) 18,6 minutos.

G) 3-{1-[N-benciloxicarbamoil)ciclobutil]-[4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]amino}propionato de etilo

A un matraz se añadió ácido 1-{N-(2-etoxicarboniletil)-N-[4-(4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]-amino)ciclobutano-1-carboxílico (4,48 g, 9,6 mmol), BOP (4,64 g, 10,5 mmol), diisopropiletilamina (1,37 g, 10,5 mmol = 18 ml @ d = 0,742), y DMF (50 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante tres horas aproximadamente. A esta mezcla se añadió diisopropiletilamina (2,49 g, 19,2 mmol, 3,35 ml) y O-bencilhidroxilamina \cdot clorhídrico (1,98 g, 12,48 mmol). Después de agitar durante toda una noche a temperatura ambiente la reacción se recogió en éter y se lavó con ácido clorhídrico 1 N (3 x 150 ml), agua (3 x 100 ml), y salmuera (1 x 200 ml). La fase orgánica se seco sobre sulfato de magnesio, se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se cromatografió (20% de acetato de etilo: 80% hexano) para proporcionar un aceite incoloro espeso, 4,82 g, 88% de rendimiento.

^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 1,23 (t, 3H), 1,60 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 2,20 (m, 2H), 2,55 (m, 4H), 3,45 (m, 2H), 4,08 (q, 2H), 4,97 (s, 2H), 7,00 (d, 2H), 7,10 (m, 4H), 7,25 (m, 3H), 7,35 (m, 2H), 7,75 (d, 2H), 9,70 (s a, 1H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 571 (M^{+}+1).

H) 3-[[4-4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]-1-fenilsulfonil]-1-[(N-hidroxicarbamoil)-ciclobutil]amino]propionato de etilo

El 3-{1-[N-benciloxicarbamoil)ciclobutil]-[4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]amino}propionato de etilo (4,8 g, 8,4 mmol) se hidrógeno sobre paladio al 5% en sulfato de bario (2,5 g) en etanol/acetato de etilo (1;:4) (70 ml) a 40 psi a temperatura ambiente durante aproximadamente 2,5 horas. El catalizador se eliminó mediante filtración por aspiración y el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio para dar una espuma blanca, 3,64 g, rendimiento del 90%.

^{1}H-RMN (DMSO-d6) \delta 1,14 (t, 3H), 1,65 (m, 2H), 2,40 (m, 4H), 2,65 (m, 2H), 3,40 (m, 2H), 4,00 (q, 2H), 7,05 (d, 2H), 7,20 (m, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,90 (s a, 1H), 10,70 (s a, 1H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 481 (M^{+}+1).

I) Ácido 3-[[4-4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]-1-[(N-hidroxicarbamoil)ciclobutil]amino]propionico

A un matraz se añadió 3-[[4-4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]-1-fenilsulfonil]-1-[(N-hidroxicarbamoil)-ciclobutil]amino]propionato de etilo (3,64 g, 7,6 mmol), etanol (50 ml), hidrato hidróxido de litio (1,59 g, 38 mmol). Después de agitar durante toda la noche a temperatura ambiente el disolvente se eliminó mediante evaporador rotatorio. El residuo se recogió en acetato de etilo y se lavó con agua (2 x 200 ml) y 1N ácido clorhídrico 1N (2 x 200 ml). La fase orgánica se eliminó y secó sobre sulfato de magnesio. El agente de secado se eliminó mediante filtración por aspiración y el disolvente se eliminó evaporador rotatorio para dar un sólido blanco, 3,37 g, 98% de rendimiento. Esto se recristalizó a partir de acetato de etilo hexano para dar cristales blancos, 2,23 g, rendimiento de 65%, punto de fusión 168-169ºC.

^{1}H-RMN (DMSO-d6) \delta 1,60 (m, 2H), 2,35 (m, 4H), 2,55 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 7,00 (d, 2H), 7,20 (m, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,85 (s, 1H), 10,65 (s, 1H), 12,25 (s, 1H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 453 (M^{+}+1); HPLC (C18 NovaPak, 30% al 90% de gradiente de acetonitrilo/agua) 9,9 min.; Anal. Calcd: C, 53,09; H, 4,68: N, 6,19: Encontrado: C, 53,40: H, 4,68: N, 6,20.

Claims (12)

1. Un compuesto de la fórmula

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o la sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la que

R^{1} es hidrógeno o alquilo(C_{1}-C_{6}); y

Y es un sustituyente en cualquiera de los átomos de carbono del anillo fenilo capaz de soportar un enlace adicional, seleccionado independientemente de fluoro, cloro, trifluorometilo, alcóxi(C_{1}-C_{6}), trifluorometoxi, difluorometoxi, y alquilo(C_{1}-C_{6}).

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Y es hidrógeno, fluoro o cloro.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Y es 4-fluoro o 4-cloro.

4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R^{1} es hidrógeno.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, en el que R^{1} es hidrógeno.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho compuesto se selecciona del grupo que constituido por:

éster etílico del ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonil]-(1-hidroxi-carbamoilciclobutil)amino]-propiónico, y

ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonil]-(1-hidroxi-carbamoilciclobutil)amino]-propiónico.

7. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una afección seleccionada del grupo constituido por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad por transplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica por contacto, cáncer (tal como tumor canceroso sólido incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bullosa, osteoporosis, pérdida de implantes artificiales de las articulaciones, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo en la cabeza, lesión en la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos o crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía cerebral amiloide, incremento nootrópico o de cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, daño corneal, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización corneal, escleritis, SIDA, sepsis, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por la actividad metaloprotesa en un mamífero, incluido un humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 efectiva en tales tratamientos y un portador farmacéuticamente aceptable.

8. El uso de una cantidad efectiva de un compuesto de reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una afección seleccionada del grupo constituido por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad por transplante de órganos, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad alérgica por contacto, cáncer (tal como tumor canceroso sólido incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración tisular, restenosis, enfermedad periodontal, epidermolisis bullosa, osteoporosis, pérdida de implantes artificiales de las articulaciones, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtico (incluyendo aneurisma aórtico abdominal y aneurisma aórtico cerebral), insuficiencia cardiaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo en la cabeza, lesión en la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos o crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía cerebral amiloide, incremento nootrópico o de cognición, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, daño corneal, degeneración macular, curación anormal de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento tumoral, metástasis tumoral, cicatrización corneal, escleritis, SIDA, sepsis y choque séptico en un mamífero, incluyendo un humano.

9. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una afección la cual puede tratarse mediante la inhibición de las metaloproteasas en un mamífero, incluyendo un ser humano, comprendiendo una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 efectiva en tal tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición farmacéutica para el tratamiento de una afección la cual se puede tratar mediante la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, comprendiendo una cantidad de un compuesto de reivindicación 1 efectiva en tal tratamiento y un portador farmacéuticamente aceptable.

11. El uso de una cantidad efectiva de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para la inhibición de las metaloproteasas de la matriz en un mamífero, incluyendo un ser humano.

12. El uso de una cantidad efectiva de un compuesto de la reivindicación 1 para la preparación de un medicamento para la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano.