MXPA99003372A - Derivados de acido ciclobutil-ariloxiarilsulfonilamino hidroxamico - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula (Ver Fórmula) en la que Y es como se ha definido antes,útil en el tratamiento de artritis o cáncer y otras enfermedades que conllevan la inhibición selectiva de la metaloproteinasa-13 de la matriz.

Description

DERIVADOS DE ACIDO CICLOBUTIL-ARI OXIARILSULFONILAMINO HIDROXAMICO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a derivados de ácido ciclobutil-ariloxiarilsulfonilamino hidroxámico y a composiciones farmacéuticas y procedimientos de tratamiento. Los compuestos de la presente invención son inhibidores de las zinc metaloendopeptidasas, en especial las que pertenecen a las subfamilias de metaloproteinasas de la matriz (también denominada MMP o matrixina) y reprolisina (también conocida como adamilsina) de las metcincinas (Rawlings, y otros, Methods in Enzvmoloav. 248, 183-228 (1995) y Stocker, y otros, Protein Science. 4, 823-840 (1995)). La subfamilia de enzimas MMP, que actualmente cuenta con diecisiete miembros (MMP-1 , MPP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-1 1 , MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP-19 y MMP-20). Las MMP son más conocidas por su función en la regulación de la renovación de las proteínas de la matriz extracelular y como tales desempeñan funciones importantes en los procesos fisiológicos normales como la reproducción, el desarrollo y la diferenciación. Además, las MMP se expresan en muchas situaciones patológicas en las que se produce una renovación anómala del tejido conectivo. Por ejemplo, MMP-13, una enzima con una potente actividad para degradar el colágeno tipo II (el principal colágeno en el cartílago) ha demostrado que se sobreexpresa en el cartílago osteoartrítico (Mitchell, y otros, J. Clin. Invest.. 97, 761 (1996)). Otras MMP (MMP-2, MMP-3, MMP-8, MMP-9, MMP-12) también son sobreexpresadas en el cartílago osteoartrítico y, cabe esperar, que la inhibición de algunas o todas estas MMP disminuya o bloquee la pérdida acelerada de cartílago típica de enfermedades de las articulaciones como la osteoartritis o la artritis reumatoide. Las reprolisinas de mamífero se conocen como ADAM (Una Disintegrina y Metaloproteinasa) (Wolfberg, y otros, J. Cell. Biol.. 131 , 275-278 (1995)) y contiene un dominio de disintegrina además de un dominio similar ai de las metaloproteinasas. Hasta la fecha, se han identificado veintitrés ADAM distintas. ADAM-17, también conocida como enzima conversora del factor alfa de necrosis tumoral (TACE) es la ADAM mejor conocida. ADAM-17 (TACE) es responsable de la separación del factor de necrosis tumoral alfa unido a las células (TNF-a, también conocido como caquectina). Se conoce que el TNF-a está implicado en muchas enfermedades infecciosas y autoinmunes (W. Friers, FEBS Letters. 285, 199 (1991 )). Además, se ha demostrado que el TNF-a es el mediador principal de la respuesta inflamatoria observada en la septicemia y el choque séptico (Spooner, y otros, Clinical Immunoloqy and Immunopatholoqy, 62, S1 1 (1992)). Existen dos formas de TNF-a, una proteína de membrana tipo II de masa molecular relativa 26.000 (26 kD) y una forma soluble de 17 kD generada de las proteínas unidas a las células por escisión proteolítica específica. La forma soluble de 17 kD del TNF-a es liberada por las células y se asocia a los efectos perjudiciales del TNF-a. Esta forma de TNF-a también puede actuar en sitios alejados del lugar de la síntesis. Así, los inhibidores de la TACE evitan la formación de TNF-a soluble y evitan los efectos perjudiciales del factor soluble. Los compuestos seleccionados de la invención son potentes inhibidores de agrecanasa, una enzima importante en la degradación del 1 agrecano del cartílago. Se cree también que la agrecanasa es una ADAM. La pérdida de agrecano de la matriz del cartílago es un factor importante en la progresión de enfermedades de las articulaciones como osteoartritis y artritis reumatoide y, cabe esperar, que la inhibición de agrecanasa ralentice o bloquee la pérdida de cartílago en estas enfermedades. Otras ADAM que han demostrado expresión en situaciones patológicas incluyen ADAM TS-1 (Kuno y otros, J. Biol. Chem.. 272, 556-562 (1997)) y ADAM 10, 12 y 15 (Wu, y otros, Biochem. Bíophvs. Res. Comm.. 235, 437-442 (1997). Como reconocimiento de la expresión, se apreciará la asociación de substratos fisiológicos y enfermedad de la ADAM lo que aumenta el completo significado de la función de inhibición de esta clase de enzima. Las enfermedades en las que la inhibición de MMP y/o ADAM proporcionará un beneficio terapéutico incluyen: artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, síndrome del distrés respiratorio agudo, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer (como cáncer con tumores sólidos incluyendo cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer de pulmón y cáncer de próstata y procesos malignos hematopoyéticos incluyendo leucemias y linfomas), ulceración de tejidos, restenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza de implantes de articulaciones artificales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtica (incluyendo aneurisma aórtica abdominal y aneurisma aórtica cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, úlceras corneales, escleritis, SIDA, septicemia, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por expresión de metaloproteinasas o ADAM. Esta invención se refiere además a un procedimiento de uso de los compuestos de la invención en el tratamiento de las enfermedades anteriores en mamíferos, especialmente en seres humanos y a composiciones farmacéuticas útiles para ellos. Se ha reconocido que diferentes combinaciones de MMP y ADAM se expresan en diferentes situaciones patológicas. Como tales, para enfermedades particulares pueden preferirse inhibidores con selectividades específicas para ADAM y/o MMP particulares. Por ejemplo, la artritis reumatoide es una enfermedad inflamatoria de las articulaciones caracterizada por niveles excesivos de TNF y la pérdida de los constituyentes de la matriz de la articulación. En este caso, la terapia preferida puede ser un compuesto que inhiba TACE y agrecanasa, así como MMP, tal como MMP-13. Como contraste, en una enfermedad de las articulaciones menos inflamatoria como osteoartritis, los preferidos pueden ser compuestos que inhiban las MMP que degradan la matriz como MMP-13, pero no TACE. Los autores de la presente invención también han descubierto que es posible diseñar inhibidores con actividad de metaloproteinasa diferencial. De forma específica, por ejemplo, los inventores han sido capaces de diseñar moléculas que inhiben de forma selectiva la metaloproteinasa-13 de la matriz (MMP-13), preferiblemente sobre la MMP-1. Los inhibidores de las metaloproteinasas de la matriz son bien conocidos en la bibliografía. Concretamente, la publicación de documento PCT WO 96/33172, publicada el 24 de octubre de 1996, se refiere a ácidos arilsulfonilamino hidroxámicos cíclicos que son útiles como inhibidores de MMP. La patente de los Estados Unidos 5.672.615, la publicación de documento PCT WO97/20824, publicación de documento PCT WO98/08825, publicación de documento PCT WO98/27069 y la publicación de documento PCT WO 98/34918, publicadas el 13 de agosto de 1998, titulados "Arylsulfonyl Hidroxamic Acid Derivates" se refieren todas a ácidos hidroxámicos cíclicos que son útiles como inhibidores de MMP. Las publicación de documento PCT WO 98/03516, publicada el 29 de enero de 1998 se refiere a fosfinatos con actividades frente a MMP. La publicación de documento PCT 98/34915, publicada el 13 de agosto de 1998, titulada "N-Hidroxy-b-Sulfonyl Propionamide Derivatives", se refiere a propionilhidroxamidas como inhibidores de MMP útiles. La publicación de documento PCT 98/33768, publicada el 6 de agosto de 1998, titulada "Arylsulfonylamino Hydroxamic Acid Derivatives" se refiere a ácidos arilsulfonilamino hidroxámicos N-sustituidos. La publicación de documento PCT WO 98/30566, publicada el 16 de julio de 1998, titulada "Cyclic Sulfone Derivatives", se refiere a ácidos sulfona hidroxámicos cíclicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos 60/55208, presentada el 8 de agoso de 1997, se refiere a ácidos biaril hidroxámicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos número de serie 60/55207, presentada el 8 de agosto de 1997, titulada "Aryloxyarylsulfonylamino Hydroxamic Acid Derivatives", se refiere a ácidos ariloxiarilsulfonil hidroxámicos como inhibidores de MMP. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos 60/62766, presentada el 24 de octubre de 1997 titulada "The Use of MMP-13 Selective Inhibitors For The Treatment of Osteoarthritis and Other MMP Mediated Disorders", se refiere al uso de inhibidores selectivos de MMP-13 para tratar la inflamación y otros trastornos. La solicitud de patente provisional de los Estados Unidos número de serie 60/68261 , presentada el 19 de diciembre de 1997 se refiere al uso de inhibidores de MMP para tratar angiogénesis y otros transtornos. Cada una de las publicaciones y solicitudes anteriormente citadas se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula: o a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es hidrógeno o alquilo C-?-C6; e Y es un sustituyente sobre cualquiera de los átomos de carbono del anillo de fenilo capaz de soportar un enlace adicional, preferiblemente de 1 a 2 sustituyentes (más preferiblemente un sustituyente, lo más preferible, un sustituyente en la posición 4) sobre el anillo de fenilo, seleccionado independientemente de hidrógeno, fluoro, cloro, trifluorometilo, alcoxi C?-C6, trifluorometoxi, difluorometoxi y alquilo C?-C6. El término "alquilo" tal como se usa en la presente, a no ser que se indique otra cosa, incluye radicales hidrocarburo monovalentes saturados con restos lineales ramificados o cíclicos o combinaciones de los mismos. El término "alcoxi" tal como se usa en la presente, incluye grupos O-alquilo en los que "alquilo" se define como antes. La presente invención también se refiere a las sales, por adición de ácidos, farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I. Los ácidos que se usan para preparar las sales por adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de los compuestos básicos anteriores de esta invención son aquellas que forman sales por adición de ácidos no tóxicas, es decir, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables como las sales clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, acetato, lactato, citrato, citrato ácido, tartrato, bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato [es decir, 1 ,1 '-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)]. La invención se refiere también a sales por adición de bases de fórmula I. Las bases químicas que se pueden usar como reactivos para preparar las sales por adición de bases farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula I que son ácidos son las que forman sales de bases no tóxicas con tales compuestos. Tales sales de bases no tóxicas incluyen, aunque no están limitadas a ellas, a las derivadas de cationes farmacológicamente aceptables como cationes de metales alcalinos (por ejemplo, potasio y sodio) y cationes de metales alcalinotérreos (por ejemplo, calcio y magnesio), amonio o sales de adición de aminas solubles en agua como N-metiiglucamina (meglumina) y las sales de (alcanol inferior) amonio y otras sales de bases de aminas orgánicas farmacéuticamente aceptables. El compuesto de fórmula I puede tener centros asimétricos y, por tanto, existir en diferentes formas enantiómeras. Esta invención se refiere a todos los isómeros ópticos y estereoisómeros de los compuestos de fórmula I y las mezclas de fos mismos. Esta invención también incluye las composiciones farmacéuticas que los contienen y los procedimientos para tratar o prevenir que comprenden administrar profármacos de compuestos de fórmula I. Los compuestos de fórmula I que tienen grupos amino, amido, hidroxi o carboxilo libres se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un resto aminoácido, o una cadena polipeptídica de dos o más restos aminoácido (por ejemplo, dos, tres o cuatro) que están unidos covalentemente a través de enlaces peptídicos a los grupos amino, hidroxi o carboxilo libres de los compuestos de fórmula I. Los restos aminoácido incluyen los 20 aminoácidos naturales designados corrientemente por símbolos de tres letras y también incluyen 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metilhistidina, norvaiina, beta-alalina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. Los profármacos también incluyen compuestos en los que carbonatos, carbamatos, amidas y esteres de alquilo están unidos covalentemente a los sustituyentes anteriores de fórmula I a través del carbono carbonílico de una cadena lateral del profármaco. Los profármacos también incluyen compuestos de fórmula I en los que el ácido hidroxámico y el resto carbonilo, cuando se toman juntos forman un grupo de fórmula en la que Y es como se ha definido en la fórmula I y U y V son, independientemente, carbonilo, metileno, SO2 o SO3 y b es un entero de uno a tres, estando cada grupo metileno opcionalmente sustituido con hidroxi. Compuestos preferidos de fórmula I incluyen aquellos en los que Y es hidrógeno, fluoro o cloro, preferiblemente 4-fluoro o 4-cloro. Otros compuestos preferidos de fórmula I incluyen aquellos en los que R1 es hidrógeno. Compuestos preferidos específicos de fórmula I incluyen los siguientes: éster etílico del ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)benceno-sulfonil]-(1-hidroxicarbamoilciclobutil)amino]propiónico; y ácido 3-[[4-(4-fluorofenoxi)bencenosulfonil]-(1 -hidroxicarbamoilciclobutil)am¡no]propiónico. Otros compuestos de fórmula I incluyen los siguientes: ácido 3-[(1 -hidroxicarbamoilciclobutil)-(4-fenoxibencenosulfonil)amino]propiónico; ácido 3-[[4-(4-clorofenoxi)bencenosulfonil]-(1 -hidroxicarbamoilciclobutil)amino]propiónico; éster etílico del ácido 3-[1-hidrox¡carbamoilciclobutil)-4-fenoxibencenosulfonil)amino]propiónico; y éster etílico del ácido 3-[[4-(4-clorofenoxi)benceno-sulfonil]-(1-hidroxicarbamoilciclobutil)amino]propiónico. La presente invención se refiere también a una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el transpiante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer (como cáncer con tumores sólidos), ulceración de tejidos, restenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza de implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtica (incluyendo aneurisma aórtica abdominal y aneurisma aórtica cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), transtornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, úlceras corneales, escleritis, SIDA, septicemia y choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad de metaloproteinasas y otras enfermedades caracterizadas por actividad de reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, eficaz en tales tratamientos y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La presente invención se refiere también a una composición farmacéutica para la inhibición de (a) metalo-proteinasas de la matriz y otras metaloproteinasas implicadas en la degradación de la matriz, o (b) una reprolisina de mamífero (como agrecanasa o ADAM TS-1 , 10, 12, 15, y 17, lo más preferible ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamernte aceptable del mismo.

La presente invención se refiere también a un procedimiento para tratar un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, restenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza de implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica), aneurisma aórtica (incluyendo aneurisma aórtica abdominal y aneurisma aórtica cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, úlceras corneales, escleritis, SIDA, septicemia, choque séptico y otras enfermedades caracterizadas por actividad de metaloproteinasas y otras enfermedades caracterizadas por actividad de reprolisina en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo eficaz para tratar dicho trastorno. La presente invención se refiere además a un procedimiento para la inhibición de (a) metaloproteinasas de la matriz u otras metaloproteinasas implicadas en la degradación de la matriz, o (b) una reprolisina de mamífero (como agrecanasa o ADAM TS-1 , 10, 12, 15 y 17, preferiblemente ADAM-17) en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende administrar a dicho mamífero una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Esta invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen profármacos de los compuestos de fórmula I. Esta invención también incluye procedimientos para tratar o prevenir trastornos que se pueden tratar o prevenir mediante la inhibición de las metaloproteinasas de la matriz o la inhibición de reprolisina de mamífero que comprende administrar profármacos de compuestos de fórmula I. Los compuestos de fórmula I que tienen grupos amino, amido, hidroxi o carboxilo libres se pueden convertir en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un resto aminoácido, o una cadena polipeptídica de dos o más restos aminoácido (por ejemplo, dos, tres o cuatro), están unidos covalentemente a través de enlaces peptídicos a los grupos amino, hidroxi o carboxilo libres de los compuestos de fórmula I. Los restos aminoácido incluyen los 20 aminoácidos naturales designados corrientemente por símbolos de tres letras y también incluyen 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, demosina, isodemosina, 3-metiIhistidina, norvalina, beta-alalina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. Los profármacos también incluyen compuestos en los que carbonatos, carbamatos, amidas y esteres de alquilo están unidos covalentemente a los sustituyentes anteriores de fórmula I a través del carbono carbonílico de la cadena lateral del profármaco. Un experto en la técnica apreciará que los compuestos de la invención son de utilidad en el tratamiento de una diversidad de enfermedades. Un experto en la técnica también apreciará que cuando se usan los compuestos de la invención en el tratamiento de una enfermedad específica, los compuestos de la invención se pueden combinar con diversos agentes terapéuticos existentes usados para dicha enfermedad. Para el tratamiento de artritis reumatoide, los compuestos de la invención se pueden combinar con agentes como inhibidores de TNF-a como anticuerpos monoclonales anti— TNF y moléculas de inmunoglobulina receptoras de TNF (como Enbrel®), metotrexato en bajas dosis, lefunimida, hidroxicloroquina, d-penicilamina, auranofina o sales de oro por vía oral o parenteral. Los compuestos de la invención se pueden usar también en combinación con agentes terapéuticos existentes para el tratamiento de osteoartritis. Agentes adecuados para usar en combinación incluyen agentes antiinflamatorios no esteroideos convencionales (en lo sucesivo AINE) como piroxicam, diclofenaco, ácidos propiónicos como naproxeno, flubiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos como ácido mefenámico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas como fenilbutazona, salicilatos como aspirina, inhibidores de COX-2 como celecoxib y rofecoxib, analgésicos y terapias ¡ntraarticulares como corticosteroides y ácidos hialurónicos como hialgan y sinvisc. Los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con agentes contra el cáncer como endostatina y angiostatina o fármacos citotóxicos como adriamicina, daunomicina, cis-platino, etopósido, taxol, taxótero y alcaloides, como vincristina y antimetabolitos como metotrexato. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes cardiovasculares como los bloqueantes de los canales del calcio, agentes para la disminución del nivel de lípidos como estatinas, fibratos, beta-bloqueantes, inhibidores de la ACE, antagonistas del receptor de angiotensiana-2 e inhibidores de la agregación de plaquetas. Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en combinación con agentes que actúan en el SNC como antidepresivos (como sertralina), fármacos contra el Parkinson (como deprenil, L-dopa, requip, miratex, inhibidores de la MAOB como selegina y rasagilina, inhibidores de comP como Tasmar, inhibidores de la recaptación de dopamina, antagonistas de la NMDA, agonistas de la nicotina, agonistas de la dpamina e inhibidores de la óxido nítrico sintetasa neuronal y fármacos contra el alzheimer como Aricept, tacrina, inhibidores de la COX-2, propentofilina o metrifonato.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con agentes contra la osteoporosis como droloxifeno o fosomax y agentes inmunosupresores como FK-506 y rapamicina.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los siguientes esquemas de reacción ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. A no ser que se indique otro modo, Y y R1 en los esquemas de reacción y la siguiente descripción son como se han definido antes.

ESQUEMA 1 IV ESQUEMA 1 (CONTINUACIÓN) IV El esquema I se refiere a la preparación de compuestos de fórmula I. Con referencia al esquema I, el compuesto de fórmula I se prepara a partir de un compuesto de fórmula II por retirada del grupo protector de hidroxilamina R16, donde R16 es bencilo. La retirada del grupo protector de hidroxilamina se lleva a cabo por hidrogenólisis del grupo protector bencilo usando paladio catalítico sobre sulfato de bario en un disolvente polar a una temperatura de aproximadamente 20°C a aproximadamente 25°C, es decir, a temperatura ambiente, durante en período de aproximadamente 1 hora aproximadamente 5 horas, preferiblemente aproximadamente 3 horas. El compuesto de fórmula II, donde R16 es bencilo, se prepara a partir de un compuesto de fórmula III por activación del compuesto de fórmula lll, seguida por reacción con bencilhidroxilamina. El compuesto de fórmula lll se activa por tratamiento con hexafluorofosfato de (benzotriazol- 1 -iloxi) tris (dimetilamino) fosfonio en presencia de una base, a temperatura ambiente y en un disolvente polar. La reacción anteriormente citada se lleva a cabo durante un periodo de aproximadamente 15 minutos a aproximadamente 4 horas, preferiblemente aproximadamente 1 hora. El compuesto activado derivado de la fórmula lll se convierte in situ en el compuesto de fórmula II por reacción con clorhidrato de bencilhidroxilamina. La reacción con clorhidrato de bencilhidroxilamina se lleva a cabo durante aproximadamente 1 hora a aproximadamente 5 días preferiblemente durante aproximadamente 16 horas, a una temperatura de aproximadamente 40°C a aproximadamente 80°C, preferiblemente aproximadamente 60°C. Bases adecuadas incluyen N- metilmorfolina c diisopropiletilamina, preferiblemente diisopropiletilamina. Disolventes adecuados incluyen N,N-dimetilformam¡da o N-metilpirroiidin-2-ona, preferiblemente N,N-dimetilformamida. El compuesto de fórmula lll se prepara a partir de un compuesto de fórmula IV, donde R16 es bencilo, retirando el grupo protector de R16 y reduciendo el doble enlace de la cadena lateral por hidrogenólisis usando paladio sobre carbón en un disolvente como metanol o etanol, durante un período de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 48 horas, preferiblemente 16 horas, a una temperatura de aproximadamente 20°C a aproximadamente 25°C, es decir, temperatura ambiente. El compuesto de arilsulfonilamino de fórmula IV, donde R16 es bencilo, se prepara a partir del compuesto correspondiente de fórmula V, mediante reacción con un compuesto de fórmula HC=C-COaR1, donde R1 es alquilo Ci-Cß, en presencia de una base, como carbonato potásico, carbonato de cesio, hexametildisililazida de potasio, hidruro sódico o fluoruro de tetrabutilamonio, preferiblemente carbonato de cesio. La reacción se agita en un disolvente polar, como dimetilformamida, N-metilpirrolidin-2-ona o t-butanol a temperatura ambiente durante un período de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 48 horas, preferiblemente aproximadamente 18 horas. El compuesto de fórmula V, donde R16 es bencilo, se prepara a partir del compuesto correspondiente de fórmula VI por reacción con un derivado funcional reactivo de un compuesto de ácido arilsulfónico de fórmula IX en presencia de una base, como trietilamina y un disolvente polar como tetrahidrofurano, 1 ,2-dimetoxietano, dimetilformamida, dioxano, agua o acetonitrilo, preferiblemente dimetilformamida. La mezcla de reacción se agita, a temperatura ambiente, durante un período de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 24 horas, preferiblemente aproximadamente 60 minutos. Los compuestos de fórmula VI se pueden preparar a partir de compuestos de fórmula VIII por tratamiento con una azida metálica, como azida sódica, en un disolvente polar como DMF a temperatura ambiente, seguido por la reducción de la azida intermedio de fórmula Vil así formada, por hidrogenólisis sobre paladio en un disolvente a base de alcohol que contiene al menos un equivalente de un ácido mineral como ácido clorhídrico. El grupo R16 de fórmula VI se puede convertir en otros grupos R16 por tratamiento a reflujo de los compuestos de fórmula VI con un exceso del alcohol R16CH deseado en tolueno en presencia de un equivalente de ácido p-tolueno sulfónico. Los compuestos de fórmula VIII y IX están disponibles de forma comercial o se pueden preparar por procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos ácidos de la invención son sales formadas con bases, a saber, sales catiónicas como sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, así como sales de amonio, como sales de amonio, trimetilamonio, dietilamonio y tris(hidroximetil)metilamonio. Igualmente, también son posibles sales por adición de ácidos como ácidos minerales, ácidos carboxílicos orgánicos y sulfónicos orgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido metanosulfónico, ácido maleico, con tal que forme parte de la estructura un grupo básico como piridilo. Los compuestos de fórmula I que son de naturaleza básica pueden formar una amplia gama de diferentes sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Aunque tales sales deben ser farmacéuticamente aceptables para administración a animales, con frecuencia se desea en la práctica aislar inicialmente un compuesto de fórmula I de la mezcla de reacción como una sal farmacéuticamente no aceptable y luego simplemente convertir la anterior en el compuesto base libre por tratamiento con un reactivo alcalino, y seguidamente convertir la base libre en una sal por adición de ácidos farmacéuticamente aceptable. Las sales por adición de ácidos de los compuestos básicos de esta invención se preparan fácilmente por tratamiento del compuesto básico con una cantidad substancialmente equivalente del ácido mineral u orgánico elegido de un medio disolvente acuoso o en un disolvente orgánico adecuado como metanol o etanol. Tras evaporar cuidadosamente el disolvente, se obtiene la sal sólida deseada.

Los ácidos que se usan para preparar las sales por adición de ácidos farmacéuticamente aceptables de los compuestos básicos de esta invención son los que forman sales por adición de ácidos no tóxicas, es decir, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables como sales clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato, sulfato o bisulfato, fosfato o fosfato ácido, acetato, lactato, citrato o citrato ácido, tartrato o bitartrato, succinato, maleato, fumarato, gluconato, sacarato, benzoato, metanosulfoanto y pamoato [es decir, 1 ,1'-metileno-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)]. Los compuestos de fórmula I que son de naturaleza acida, por ejemplo, cuando R3 es hidrógeno, pueden formar sales de bases con diferentes cationes farmacológicamente aceptables. Ejemplos de tales sales incluyen sales de metales alcalinos y alcalinotérreos y en particular, las sales de sodio y de potasio. Estas sales se preparan todas por técnicas convencionales. Las bases químicas que se usan como reactivos para preparar las sales de bases farmacéuticamente aceptables de esta invención son las que forman sales de bases no tóxicas con los compuestos de fórmula I ácidos aquí descritos. Estas sales de bases no tóxicas incluyen las derivadas de cationes farmacológicamente aceptables como sodio, potasio, calcio y magnesio, etc. Estas sales pueden prepararse fácilmente tratando los compuestos ácidos correspondientes con una solución acuosa que contiene los cationes farmacológicamente aceptables deseados y luego evaporando la solución resultante a sequedad, preferiblemente a presión reducida. Como alternativa, estas se pueden preparar también mezclando soluciones en alcanoles inferiores de los compuestos ácidos y el alcóxido del metal alcalino deseado y luego evaporando a sequedad la solución resultante de la misma forma que antes. En cualquier caso, con preferencia se emplean cantidades estequiométricas de" los reactivos con el fin de asegurar una finalización de la reacción y un rendimiento de producto máximo. La capacidad de los compuestos de fórmula I o sus sales farmacéuticamente aceptables (en los sucesivo denominados compuestos selectivos hacia MMP-13 de la presente invención) para inhibir las metaloproteinasas de la matriz, preferiblemente 2, 9 o 13, lo más preferible MMP-13 y, por consiguiente, demostrar se eficacia para tratar enfermedades caracterizadas por inhibición de las metaloproteinasas de la matriz se muestra por los siguientes ensayos in vitro.

ENSAYO BIOLÓGICO Inhibición de colaqenasa humana (MMP-1) Se activa colagenasa recombinante humana con tripsina usando la siguiente relación: 10 µg de tripsina por 100 µg de colagenasa. La tripsina y la colagenasa se incuban a temperatura ambiente durante 10 minutos y se añade después un exceso de 10 veces (50 µg/10 µg de tripsina) de inhibidor de tripsina de soja. Se preparan soluciones madre 10 mM de inhibidores en dimetil sulfóxido y se diluyen después usando el siguiente esquema: 10 mM ? 120 µM ? 12 µM ? 1.2 µM ? 0.12 µM Después se añaden por triplicado, veinticinco micrólitros de cada concentración a pocilios apropiados de una placa Microfluor de 96 pocilios. La concentración final de inhibidor será una dilución 1 :4 después de la adición de enzima y substrato. Se preparan controles positivos (con enzima y sin inhibidor) en los pocilios D1-D6 y ensayos en blanco (sin enzima y sin inhibidor) en los pocilios D7-D12. Se diluye colagenasa hasta 400 ng/ml y se añaden después 25 µl a pocilios apropiados de la placa Microfluor. La concentración final de colagenasa en ensayo es 100 ng/ml. Se prepara substrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala- Lys(Nma)-NH2) como una solución madre 5 mM en dimetil sulfóxido y se diluye después hasta 20 mM en tampón del ensayo. El ensayo se inicia por la adición de 50 µl de substrato por pocilio de la placa Microfluor para dar una concentración final de 10 µM. Se tomaron lecturas de la fluorescencia (360 nm en excitación y 460 nm en emisión) en el tiempo 0 y después a intervalos de 20 minutos. El ensayo se realiza a temperatura ambiente con un tiempo típico de ensayo de 3 horas. Se construye después una gráfica de la fluorescencia en función del tiempo, tanto para las muestras que contienen colagenasa como para las del ensayo en blanco (en las determinaciones por triplicado, se determina el valor medio). Para determinar valores de la IC50 se elige el tiempo que porporciona una buena señal (ensayo en blanco) y el que está en la parte lineal de la curva (normalmente alrededor de 120 minutos). Los valores correspondientes al tiempo cero se usan como blanco para cada compuesto a cada concentración y estos valores se restan de los datos correspondientes a 120 minutos. Los datos se representan gráficamente como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control (fluorescencia del inhibidor dividida por fluorescencia de colagenasa sola y multiplicada por 100). Se determinan las IC50 a partir de la concentración de inhibidor que da una señal que es de 50% de la del control. Si las IC50 son inferiores a 0.03 µM, entonces se ensayan los inhibidores a concentraciones de 0.3 µM, 0.03 µM, ,0.03 µM y 0.003 µM.

Inhibición de MMP-13 Se activa MMP-13 recombinante humana con APMA (acetato p-aminofenilmercúrico) 2 mM durante 1.5 horas a 37°C y se diluye hasta 400 mg/ml en tampón de ensayo (Tris 50 mM, pH 7.5, cloruro sódico 200 mM, cloruro calcico 5 mM, cloruro de zinc 20 µM y Brij al 0.02%. En una placa Microfluor de 96 pocilios se añaden veinticinco micrólitros de enzima diluida por pocilio. La enzima se diluye después a una relación :4 en el ensayo por adición de inhibidor y substrato para dar una concentración final en el ensayo de 100 mg/ml. Se preparan soluciones madre 10 mM de inhibidores en dimetil sulfóxido y se diluyen después en tampón de ensayo como en el esquema de dilución de inhibidores del ensayo de inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ). En la placa Microfluor se añaden, por triplicado, veinticinco micrólitros de cada concentración. Las concentraciones finales en el ensayo son 30 µM, 3 µM, 0.3 µM y 0.03 µM. Se prepara substrato (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me, -His-Ala-Lys (Nma)-NH2) como en el ensayo de inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ) y se añaden 50 µl a cada pocilio para da una concentración final en el ensayo de 10 µM. Se hacen lecturas de la fluorescencia (360 nm en excitación y 450 nm en emisión) en el tiempo 0 y a intervalos de 5 minutos durante 1 hora. Los controles positivos comprenden enzima y substrato, sin inhibidor, y los ensayos en blanco comprenden sólo substrato. Se determinan las IC50 como en el ensayo de inhibición de colagenasa humana (MMP-1 ). Si las IC50 son inferiores a 0.03 µM, entonces los inhibidores se ensayan a concentraciones finales de 0.3 µM, 0.03 µM, 0.003 µM y 0.0003 µM. Los compuestos de la presente invención poseen una actividad sorprendentemente selectiva frente a metaloproteinasa-13 de la matriz (colagenasa 3) comparada con la metaloproteinasa-1 (colagenasa 1 ). Especialmente, los compuestos de fórmula I pueden ser 100 veces más selectivos para la metaloproteinasa-13 de la matriz (colagenasa 3) que la metaloproteinasa-1 (colagenasa 1 ) y tienen IC50 menores que 10 nM frente a la metaloproteinasa-13 de la matriz (colagenasa 3). La tabla 1 demuestra que los compuestos de la invención poseen una selectividad inesperada para la inhibición de MMP-13.

CUADRO 1 Inhibición de gelatinasa (MMP-2) Se activa gelatinasa humana recombinante de 72 kD (MMP-2, gelatinasa A) con acetato p-aminofenilmercúrico 1 mM durante 16-18 horas (a partir de una solución madre 100 mM recién preparada en NaOH 0.2N) a 4°C, con oscilaciones suaves. Se diluyen en serie soluciones madre en dimetil sulfóxido 10 mM de inhibidores en tampón de ensayo (TRIS 50 mM, pH 7.5, NaCI 200 mM, CaCI2 5 mM, ZnCI2 20 µM y BRIJ-35 al 0.02% (vol/vol)) usando el siguiente esquema: 10 mM - - >120 µM->12µM->1 .2 µM--> 0.12 µM Las diluciones posteriores se realizan según es necesario siguiendo este mismo esquema: En cada ensayo, se realizan un mínimo de cuatro concentraciones inhibidoras para cada compuesto. Se añaden entonces 25 µl de cada concentración a pocilios por triplicado de una placa Microfluor con fondo en U de 96 pocilios negra. Cuando el volumen final del ensayo es 100 µl, las concentraciones finales de inhibidor son el resultado de otra dilución 1 :4 (es decir, 30 µM- >3 µM- >0.3 µM- >0.03 µM, y así sucesivamente). También se prepara por triplicado un ensayo en blanco (sin enzima, sin inhibidor) y un control de enzima positivo (con enzima, sin inhibidor). La enzima activada se diluye hasta 100 ng/ml en tampón de ensayo, se añaden 25 µl por pocilio a los pocilios apropiados de la placa de microvaloración. La concentración final de enzima en el ensayo es 25 ng/ml (0.34 nM). Se diluye en el tampón de ensayo hasta 20 µM una solución madre en dimetil sulfóxido 5 mM de substrato (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2). El ensayo se inicia mediante la adición de 50 µl de substrato diluidoi proporcionando una concentración final de ensayo de substrato 10 µM. En el tiempo cero, se toma una lectura de fluorescencia (320 en excitación; 390 en emisión) inmediatamente y se toman posteriores lecturas cada quince minutos a temperatura ambiente con un Lector de Placas PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well Píate Reader con la ganancia a 90 unidades. El valor promedio de la fluorescencia de la enzima y el ensayo en blanco se representan frente al tiempo. Para las determinaciones de la IC50 se elige uno de los primeros tiempos de la parte lineal de esta curva. El tiempo cero para cada compuesto en cada dilución se resta del tiempo anterior y los datos se expresan entonces como porcentaje de control de la enzima (fluorescencia dei inhibidor dividida por fluorescencia del control de enzima positivo x 100). Los datos se representan como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control de la enzima. Las IC50 se definen como la concentración de inhibidor que origina una señal que es el 50% del control de enzima positivo.

Inhibición de la actividad de la estromelísina (MMP-3) Se activa estromelisina humana recombinante (MMP-3, estromelisina-1 ) durante 20-22 horas con acetato p-aminofenil mercúrico 2 mM (de una solución madre 100 mM recién preparada en NaOH 0.2 N) a 37°C. Las soluciones madre en dimetilsulfóxido 10 mM de inhibidores se diluyen en serie en tampón de ensayo (TRIS 50 mM, pH 7.5 NaCI 150 mM, CaC 10 mM y BRIJ-35 al 0.05% (vol/vol) usando el siguiente esquema: 10 mM - - >120 µM- ->12 µM- ->1.2 µM - - >0.12 µM Las diluciones posteriores se realizan según es necesario siguiendo este mismo esquema. En cada ensayo, se realizan un mínimo de cuatro concentraciones inhibidoras para cada compuesto. Se añaden entonces 25 µl de cada concentración a pocilios por triplicado de una placa Microfluor con fondo en U de 96 pocilios negra. Cuando el volumen final del ensayo es 100 µl, la concentraciones finales de inhibidor son el resultado de otra dilución 1 :4 (es decir, 30 µM- ->3 µM- -> 0.3 µM- ->0.03 µM, y así sucesivamente). También se prepara por triplicado un ensayo en blanco (sin enzima, sin inhibidor) y un control de enzima positivo (con enzima, sin inhibidor). La enzima activada se diluye hasta 200 ng/ml en tampón de ensayo, se añaden 25 µl por pocilio a los pocilios apropiados de la placa de microvaloración. La concentración final de enzima en el ensayo es 50 ng/ml (0.875 nM). Se diluye en el tampón de ensayo hasta 6 µm una solución madre en dimetil sulfóxido 10 µM de substrato (Mca-Arg-Pro-Lys-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH2). El ensayo se inicia mediante la adición de 50 jul de substrato diluido proporcionando una concentración final de ensayo de substrato 3 µM. En el tiempo cero, se toma una lectura de fluorescencia (320 en excitación; 390 en emisión) inmediatamente y se toman posteriores lecturas cada quince minutos a temperatura ambiente con un Lector de Placas PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-well Píate Reader con la ganancia a 90 unidades. El valor promedio de la fluorescencia de la enzima y el ensayo en blanco se representan frente al tiempo. Para las determinaciones de la IC5o se elige uno de los primeros tiempos de la parte lineal de esta curva. El tiempo cero para cada compuesto en cada dilución se resta del tiempo anterior y los datos se expresan entonces como porcentaje de control de la enzima (fluorescencia del inhibidor dividido por fluorescencia del control de enzima positivo x 100). Los se representan como concentración de inhibidor frente a porcentaje de control de la enzima. Las IC50 se definen como la concentración de inhibidor que origina una señal que es el 50 % del control de enzima positivo. Como alternativa, se puede ensayar la inhibición de actividad de estromelisina usando Mca-Arg-Pro-Lys-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH2 (3 µM) en condiciones similares a las de la inhibición de colagenasa humana (MMP-1). La estromelisina humana se activa durante 20-24 horas a 37°C con APMA 2 mM acetato p-aminofenil mercúrico) y se diluye proporcionando una concentración final en el ensayo de 50 ng/ml. Los inhibidores se diluyen como en el caso de inhibición de colagenasa humana (MMP-1) proporcionando concentraciones finales en el ensayo de 30 µM, 3 µM y 0.3 µM y 0.03 µM. Cada concentración se realiza por triplicado. Las lecturas de fluorescencia (320 nm en excitación, 390 en emisión) se toman en el tiempo cero y luego en intervalos de 15 minutos durante 3 horas. Las IC50 se determinan como en el caso de la inhibición de colagenasa humana MMP-1). Si las ÍC50 son menores que 0.03 µM, entonces los Inhibidores se ensayan a concentraciones finales de 0.03 µM, 0.003 µM, 0.0003 µM y 0.00003 µM. Los valores de la IC50 se determinaron de la misma manera que para la colagenasa.

Inhibición de la producción de TNF La capacidad de los compuestos o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos de inhibir la producción de TNF y, en consecuencia, de demostrar su eficacia para tratar enfermedades que implican la producción de TNF se muestra por el siguiente ensayo in vitro: Se aislaron leucocitos mononucleares de sangre humana anticoagulada, usando una técnica de separación de Ficoll-hypaque de una etapa. Los leucocitos mononucleares se lavaron tres veces en solución salina equilibrada de Hanks HBSS con cationes divalentes y se volvieron a suspender a una densidad de 2 x 106/ml en HBSS que contenía 1 % de BSA. Los recuentos diferenciales determinados usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que, en estas preparaciones, los monocitos variaban de 17 a 24% de las células totales. Se colocaron partes alícuotas de 180 µl de la suspensión de células en placas de 96 pocilios de fondo plano (Costar). Adiciones de compuestos y de LPS (concentración final de 100 ng/ml) dieron un volumen final de 200 µl. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de incubar durante cuatro horas a 37°C en un incubador con CO2 humidificado, se separaron las placas y se centrifugaron 10 minutos aproximadamente 250 g), se separaron los líquidos sobrenadantes y se ensayó en ellos el TFA-a usando el estuche R&D ELISA.

Inhibición de la producción de TNF-a soluble La capacidad de los compuestos o de las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para inhibir la liberación celular de TNF-a y, en consecuencia, demostrar su eficacia para tratar enfermedades que conllevan la regulación anómala de TNF-a soluble se muestra por el siguiente ensayo in vitro: Procedimiento de evaluación de la actividad de la enzima Conversora de TNF-a recombinante Expresión de TAE recombinante: Se puede amplificar un fragmento de ADN que codifica la secuencia señalizadora, preprodominio, prodominio y dominio catalítico de TAE (aminoácidos 1-473) por reacción en cadena con polimerasa usando una genoteca de ADNc de pulmón humano como molde. El fragmento amplificado se clona a continuación en el vector pFastBac. La secuencia de ADN del inserto se confirma para ambas cadenas. Se transfecta en células de insecto SF9 un bácmido preparado usando pFastBac en DHI OBac de E. coli. Las partículas víricas se amplifican entonces hasta los estadios P1 , P2, P3. El virus P3 se infecta en células de insecto Sf9 y High five y se desarrollan durante 48 horas a 27°C. El medio se recoge y se usa para ensayos y purificación adicionales.

Preparación del substrato extinguido fluorescente: Se prepara un substrato para TNF-a peptídico modelo (LY-LeucinaAlaninaGlutaminaAlaninaValinaArgininaSerinaSerinaLysina CTMR)-Arginina (LY-Amarillo Lucifer; CTMR-CarboxitetrametilRodamina)) y se determina la concentración por absorbancia a 560 nm (E 560, 60.000M-1 CM-1 ) conforme al procedimiento de Geoghegan, KF, "Improved Method for converting an unmodified peptide to an energy-transfer substate for a proteinasa". Bioconiuqate Chem. 7, 385-391 (1995). Este péptido incluye el lugar de escisión en pro-TNF en el que se encinde in vivo por TACE.

Expresión de TACE recombinante: Se amplifica un fragmento de ADN que codifica la secuencia señalizadora, el preprodominio, prodominio y el diminio catalítico de TACE (aminoácidos 1-473) por reacción en cadena con polimerasa usando una genoteca de ADNc de pulmón humano como molde. El fragmento amplificado se clona a continuación en el vector pFastBac. La secuencia de ADN del inserto se confirma para ambas cadenas. Se transfecta en células de insecto SF9 un bácmido preparado usando pFastBac en DHI OBac de E. coli. Las partículas víricas se amplifican entonces hasta los estadios P1 , P2, P3. El virus P3 se infecta en células de insecto Sf9 y High Five y se desarrollan durante 48 horas a 27°C. El medio se recoge y se usa para ensayos y purificación adicionales.

Reacción enzimática La reacción, llevada a cabo en una placa de 96 pocilios (Dynatech) comprende 70 µl de solución tampón (Hepes 25-HCI mM, pH 7.5, más ZnC 20 µM), 10 µl de substrato extinguido fluorescente 100 µM, 10 µl de solución en DMSO (5%) de compuesto de ensayo y una cantidad de la enzima r-TACE que producirá una escisión del 50% en 60 minutos - en un volumen total de 100 µl. La especificidad de la escisión enzimática en el enlace amida entre la aianina y valina se verifica por HPLC y espectrometría de masas. Se controlan las velocidades iniciales de escisión midiendo la velocidad de aumento de la fluorescencia a 530 nm (excitación a 409 nm) durante 30 minutos. El experimento se controla como sigue: 1 ) la fluorescencia de fondo del substrato; 2) la fluorescencia del substrato totalmente escindido; 3) la extinción o aumento de la fluorescencia a partir de las soluciones que contienen compuesto de ensayo. Los datos se analizan como sigue. Se promedian las velocidades de reacciones de "control" sin compuesto de ensayo para deteminar el valor 100%. La velocidad de reacción en presencia de compuesto de ensayo se comparó con la misma en ausencia de compuesto y se tabuló como "porcentaje de control sin compuesto de ensayo". Los resultados se representan como "% de control" frente al logaritmo de la concentración de compuesto y se determina un punto hemimáximo o valor IC5o. Todos los compuestos de la invención tienen IC50 menores que 1 µM, con preferencia menores que 50 nM. Los compuestos más preferidos de la invención son al menos 100 veces menos potentes frente a r-MMP-1 que en el ensayo de TACE anterior.

Ensayo de monocitos humanos Se aislaron leucocitos mononucleares de sangre humana anticoagulada, usando una técnica de separación de Ficollhypaque de una etapa. (2) Los leucocitos mononucleares se lavaron tres veces en solución salina equilibrada de Hanks (HBSS) con cationes divalentes y se volvieron a suspender a una densidad de 2 x 106 /ml en HBSS que contenía 1 % de BSA. Los recuentos diferenciales determinados usando el analizador Abbott Cell Dyn 3500 indicaron que, en estas preparaciones, los monocitos variaban de 17 a 24% de las células totales. Se colocaron parte alícuotas de 180 µl de la suspensión de células en placas de 96 pocilios de fondo plano (Costar). Adiciones de compuestos y de LPS (concentración final de 100 ng/ml) dieron un volumen final de 200 µl. Todas las condiciones se realizaron por triplicado. Después de incubar durante cuatro horas a 37°C en un incubador con CO2 humidificado, se separaron ias placas y se centrifugaron (10 minutos a aproximadamente 250 g), se separaron los líquidos sobrenadantes y se ensayó en ellos el TFA-a usando el estuche R&D ELISA.

Ensayo de aqrecanasa Se aislaron por digestión secuencial en tripsina y colagenasa condrocitos primarios de porcino del cartílago de la articulación, seguido por la digestión durante toda la noche en colagenasa y se cultivaron a una densidad de 2 x 105 células por pocilio en placas de 48 pocilios con 5 µCi/ml de 35S (1000 Ci/mmoles) en las placas revestidas de colágeno tipo I. Se dejó incorporar el marcador en las células en su matriz de proteoglucano (aproximadamente 1 semana) a 37°. C, a una atmósfera de CO2 al 5%. La noche antes de iniciarse el ensayo, se lavaron las monocapas de condrocitos dos veces en DMEM/PSF al 1 %/G y luego se dejó incubar en DMEM/FBS al 1 % recién preparado durante toda la noche. A la mañana siguiente, los condrocitos se lavaron una vez en DMEM/PSF al 1 %/G. El líquido de lavado final se dejó reposar en las placas en el incubador mientras se realizaban las diluciones. Los medios y diluciones se pueden realizar tal y como se describe en el siguiente cuadro.

Medio de DMEM solo (medio de control) control Medio IL-1 DMEM + IL (5 ng/ml) Diluciones Preparar todas las soluciones madre de los compuestos a 10 mM en de DMSO fármacos Preparar una solución madre 100 µM de cada compuesto en DMEM en placa de 96 pocilios. Almacenar en el congelador durante toda la noche. El día siguiente realizar diluciones en serie en DMEM con IL-1 hasta 5 µM, 500 nM y 50 nM. Aspirar el líquido de lavado final de los pocilios y añadir 50 µl de compuesto de las diluciones anteriores hasta 450 µl de medio IL-1 en los pocilios apropiados de las placas de 48 pocilios. Las concentraciones finales de compuestos son 500 nM, 50 nM y 5 nM. Todas las muestras se realizaron por triplicado con muestras de control y en IL-1 sola en cada placa.

Las placas se marcan y solo se usan los 24 pocilios interiores de la placa. En una de las placas, se designan varias columnas como IL-1 (sin fármaco) y Control (sin IL-1 , sin fármaco). Estas columnas de control se recuentan de forma periódica para controlar la liberación de 35S-proteo-glucano. Los medios de control e IL-1 se añaden a los pocilios (450 µl) seguidos por el compuesto (50 µl) con el fin de iniciar el ensayo. Las placas se incuban a 37°C con una atmósfera de CO2 al 5%.

A una liberación de 40-50% (cuando los CPM (recuentos por minuto) de los medios IL-1 son 4-5 veces los medios de control) determinado por recuento de centelleo líquido (LSC) de las muestras, el ensayo termina (9-12 horas). Los medios se retiran de todos los pocilios y se colocan en tubos centelleo. Se añade líquido de centelleo y se toman los recuentos radiactivos (LSC). Para solubilizar las capas de células, se añaden a cada pocilio 500 µl de tampón de digestión de papaína (Tris 0.2 M, pH 7.0 EDTA 5 mX, DTT 5 mM y 1 mg/ml de papaína). Las placas con solución de digestión se incuban a 60°C durante toda la noche. La capa de células se retira de las placas el día siguiente y se coloca en los tubos de centelleo. Se añade líquido de centelleo y se realiza el recuento de las muestras (LSC). Se determina en cada pocilio el porcentaje de recuentos emitidos de los totales presentes. Se realiza el promedio de las muestras por triplicado, restando de cada pocilio el valor de fondo del control. El porcentaje de inhibición de compuestos se basa en muestras en IL-1 como inhibición 0% (100% de los recuentos totales). Para administración a humanos para la inhibición de metaloproteinasa-13 de la matriz o la producción de factor de necrosis tumoral (TNF), se pueden usar una diversidad de vías de administración convencionales que incluyen la vía oral, parenteral y tópica. En general, el compuesto activo se puede administrar por vía oral o parenteral en dosis que varían de aproximadamente 0.1 a 25 mg/kg de peso corporal del sujeto que se trata por día, preferiblemente de aproximadamente 0.3 a 5 mg/kg. Sin embargo, se producirá necesariamente alguna variación de la dosis dependiendo del trastorno del sujeto que se trate. El responsable de la administración determinará en cualquier caso la dosis apropiada para el sujeto particular. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una amplia gama de formas de dosificación diferentes, en general, los compuestos terapéuticamente eficaces de esta invención están presentes en dichas formas de dosificación en niveles de concentración que varían de aproximadamente 5.0% a aproximadamente 70% en peso. Para administración oral, pueden emplearse comprimidos que contienen diferentes excipientes como celulosa microcristalina, citrato sódico, carbonato calcico, fosfato dicálcico y glicina, junto con diferentes disgregantes como almidón (y con preferencia, almidón de maíz, patata o tapioca), ácido algínico y ciertos silicatos complejos, junto a ligantes de granulación como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y goma arábiga. Además, a efectos de la preparación de comprimidos, son muy útiles con frecuencia agentes lubricantes como estearato de magnesio, laurilsulfato sódico y talco. También pueden emplearse composiciones sólidas de un tipo similar como cargas en cápsulas de gelatina; incluyendo además los materiales preferidos a este respecto lactosa o azúcar de la leche, así como poietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones acuosas y/o elixires para administración oral, el ingrediente activo se puede combinar con diversos agentes edulcorantes o aromatizantes, materiales colorantes o tintes y, si así se desea, también agentes de emulsión y/o de suspensión, junto con diluyentes como agua, etanol, propilenglicol, glicerol y las diferentes combinaciones de los mismos. Para administración parenteral (uso Intramuscular, intraperitoneal, subucutáneo e intravenoso), se prepara normalmente una solución inyectable estéril del ingrediente activo. Se pueden emplear soluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención en aceite de sésamo o de cacahuete o en propilenglicol acuoso. Las soluciones acuosas se ajustarán y tamponarán de modo adecuado, preferiblemente a pH mayor de 8, si fuera necesario y el diluyente líquido se hará en primer lugar isotónico. Estas soluciones acuosas son adecuadas a efectos de inyección intravenosa. Las soluciones oleosas son adecuadas a efectos de inyección intraarticular, intramuscular y subcutánea. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se realiza de modo sencillo por técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por los expertos en la técnica. Para administración ocular tópica, se puede emplear la aplicación directa al ojo afectado en forma de una formulación de gotas para ojos, aerosol, geles o ungüentos, o se puede incorporar en colágeno (como poli-2-hidroxietil-metacrilato y copolímeros del mismo, o en una cobertura polímera hidrófila. Los materiales también se pueden aplicar como una lente de contacto o a través de un reservorio local o como una formulación para administrar en la subconjuntiva.

Para administración intraorbital, normalmente se prepara una solución inyectable estéril de ingrediente activo. Se pueden emplear soluciones de un compuesto terapéutico de la presente invención en solución o suspensión acuosa (tamaño de partículas menor que 100 micrómetros). Si fuera necesario, las soluciones acuosas se ajustarán y tamponarán de forma adecuada, con preferencia a un pH de 5 a 8, y el diluyente líquido se harán en primer lugar, isotónico. Para aumentar la viscosidad o conseguir una liberación sostenida se pueden añadir pequeñas cantidades de polímeros (como polímeros de celulosa, dextrano, polietilenglicol o ácido algínico). Estas soluciones son adecuadas a efectos de inyección intrasorbital. La preparación de todas estas soluciones en condiciones estériles se lleva a cabo fácilmente por técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por los expertos. En el caso de animales, los compuestos se pueden administrar intraorbitalmente en niveles de dosis de aproximadamente 0.1 a 50 mg kg/día, de forma ventajosa de 0.2 a 10 mg/kg/día, administrados en una única dosis o hasta en 3 dosis divididas. Los compuestos activos de la invención se pueden formular también en composiciones rectales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, conteniendo bases convencionales de supositorios como manteca de cacao y otros glicéridos. Para administración intranasal o administración por inhalación, los compuestos activos de la invención se liberan convenientemente en forma de una solución o suspensión desde un recipiente pulverizador de bombeo que es presionado o bombeado por el paciente o como una presentación de pluverizador en aerosol desde un recipiente presurizado o un nebulizador, usando un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la dosis unitaria se puede determinar disponiendo una válvula para liberar una cantidad medida. El recipiente presurizado o nebulizador puede contener una solución o suspensión del compuesto activo. Se pueden formular cápsulas o cartuchos (realizados, por ejemplo, de gelatina) para usar en un inhalador o insuflador, conteniendo una mezcla en polvo de un compuesto de la invención y una base en polvo adecuada como lactosa almidón. Los siguientes ejemplos ilustran la preparación de los compuestos de la presente invención. Los puntos de fusión están sin corregir. Los datos de RMN se dan en partes por millón (d) y están referidos a ia señal de estabilización del deuteric del disolvente de la muestra (deuteriodimetil-sulfóxido, a no ser que se indique otro.) Los reactivos comerciales se usaron sin purificación adicional. THF se refiere a tetrahidrofurano. DMF se refiere a N,N-dimet¡l-formamida. Cromatografía se refiere a cromatografía en columna realizada usando gel de sílice de 32-63mm y ejecutada bajo condiciones de presión de nitrógeno (cromatografía ultrarrápida). Temperatura ambiente se refiere a 20-25°C. Todas las reacciones no acuosas se ejecutaron bajo una atmósfera de nitrógeno por motivos de conveniencia y para maximizar los rendimientos. La concentración a presión reducida significa que se usó un evaporador rotatorio.

EJEMPLO1 Acido3-rr4-fluorofenoxi)fenilsulfon¡n-i r(N-hidroxicarbamoip- ciclobuti-laminolpropiónico A) 1-Azidociclobutano-1-carboxiiato de etilo: Se añadieron 1-bromociclobutano-1 -carboxilato de etilo (5.0g, 25mmol), dimetilformamida (120ml) y azida de sodio (2.43g, 37.5mmol) a un matraz. Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 días, se suspendió la reacción de éter y se lavó con agua (3 x 150ml). La capa orgánica de separó y se secó sobre sulfato de magnesio. Se eliminó el reactivo de secado por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria proporcionando un líquido incloro (3.69g, rendimiento 87%). RMN de 1H (CDCI3) d 1.29 (T, 3h), 2.00 (M, 2h), 2.25 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 4.22 (q, 2H); IR (puro) 2109 c?rf1.

B) Clorhidrato del 1-aminociclobutano-1 -carboxilato de etilo Se sometió 1 -azidociclobutano-1 -carboxilato de etilo (15.98g, 94mmol) a hidrogenación con paladio ai 5% sobre carbono (2g) con ácido clorhídrico concentrado (8ml) en etanol (250ml) a temperatura ambiente y 2.76 x 106 Pa. Después de aproximadamente 3 horas, se eliminó el catalizador por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria proporcionando un sólido blanco (16,52g, rendimiento 97%). RMN de 1H (CDCI3) d 1.34 (t, 3H), 2.15 (m, 1 H), 2.30 (m, 1 H), 2.70 (m, 2H), 2.80 (m, 2H), 4.30 (q, 2H), 9.05 (s ancho, 2H). C) Tosilato del 1-aminociclobutano-1 -carboxilato de bencilo Se añadieron clorhidrato del 1-aminociclobutano-1 -carboxilato de etilo (4.97g, 29.6mmol), ácido p-tolueno- sulfónico (183 ml) a un matraz. La reacción se mantuvo a reflujo durante 2 días con una trampa de Dean-Stark. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se eliminó el disolvente por evaporación rotatoria. El residuo se suspendió en éter y se colocó en un refrigerador durante toda la noche. El sólido blanco resultante se recogió y se secó: 5.27g, rendimiento 93%. RMN de 1H (CDCI3) d 1.90 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.40 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 7.05 (d, 2H), 2.40 (m, 2H), 2.55 (m, 2H), 8.50 ( s ancho, 2H); Espectro de masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 206 (M++1 ).

D) 1 -[4-(4-Fluorofenoxi) fenilsulfonilaminol ciclobutano -1 -carboxilato de bencilo Se suspendió tosilato de 1-aminociclobutano-1 -carboxilato bencilo (27.60g, 70mmol) en cloruro de metileno y se lavó con un exceso de solución saturada de bicarbonato sódico. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria. S e añadieron cloruro de 4-(4-flouorofenoxi) fenilsulfonilo (20.10g, 70mmol), tretilamina (8.48g, 11.6ml, 84mmol) y dimetilformamida (150ml) al residuo y la reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con éter y se lavó con ácido clorhídrico 1 N (3 x 150ml), agua (2 x 200ml) y salmuera saturada (1 x 150ml). La capa orgánica se separó y se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria proporcionando un sólido marrón claro, 24.45g. Se obtuvo una segunda tanda por lavado a fondo del reactivo de secado con cloruro de metileno, proporcionando después de la evaporación 4.2g de un sólido blanco, rendimiento total 90%. RMN de 1H (CDCI3) d 1.95 (m, 2H), 2.45 (m, 2H), 5.00 (s, 2H), 6.95 (m, 2H), 7.00(m, 2H), 7.05 (m, 2H), 7.25 (s ancho, 3H), 7.30 (m, 2H), 7.35 (m, 2H), 7.75 (d, 2H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 456 (M-+1 ). 01 Cis Trans 1-{N-(2-etoxicarbonileteniD-n-r4-(4-fluorofenox¡)fen¡lsulfonil1amino)ciclobutano-1 -carboxilato de bencilo Se añadieron a un matraz 1-[4-(4-fluorofenoxi)fenil-sulfonilamino]ciclobutano-1 -carboxilato de bencilo (10.0g, 22mmol), t-BuOH (75ml), carbonato de cesio (7.16g, 22 mmol) y propilato de etilo (4.31g, 44mmol, 4.54 ml), d=0.968). Después de agitar durante aproximadamente 1 hora la reacción viró a color rojo oscuro. Después de agitar 5 horas a temperatura ambiente, la reacción se diluyó con tolueno y se eliminó por filtración el carbonato de cesio por filtración a vacío. El filtrado se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó por filtración a vacío. El filtrado se lavó con agua y salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria, proporcionando un aceite rojo ladrillo. Este se sometió a cromatografía (columna de 50 mm; EtOAc al 15%/hexano al 85%) proporcionando un aceite amarillo (5.12g rendimiento 42%) proporcionando un aceite amarillo (5.12g rendimiento 42%). Se obtuvo una segunda tanda con una nueva cromatografía de las fracciones mixtas proporcionando un aceite amarillo, 2.72g, rendimiento 22% (rendimiento total 64%). Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 554 (M++1).

E) Ácido 1 -(N-(2-etox¡carboniletil)-N-r4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfon¡namino)ciclobutano-1 -carboxílico Se sometió a hidrogenación con paladio al 10% sobre carbón en etanol (500ml) durante aproximadamente 24 horas a temperatura ambiente y 2.76 x 105 Pa una mezcla de cis y trans 1-{N-(2-etoxicaroboniletenil)-N-[4-(4-fluorofenoxi fenilsulfonil]amino}ciclobutano-1 -carboxilato de bencilo (11.57g, 20.9mmol). El catalizador se eliminó por filtración a vacío y el filtrado se sometió a hidrogenación como antes en paladio al 10% sobre carbón (8g) durante aproximadamente 2 días. El catalizador se eliminó por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria proporcionando un aceite amarillo espeso (4.48g, rendimiento 46%). RMN de 1H (CDCI3) d 1.24 (t, 3H), 1.80 (m, 1 H), 2.10 (m, 1 H), 2.45 ((m, 2H), 2.60 (m, 2H), 2.75 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 4.12 (q, 2H), 7.00 (d, 2H), 7. 10 (m, 4H), 7.80 (d, 2H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 456 (M++1 ); HPLC (C18 NovaPak, gradiente de acetonitrilo 30% a 90%/agua), 18.6 minutos. G) 3-(1 -r(N-benc¡loxicarbamoil)ciclobutil1-r4-(-fluorofenoxi)fenilsulfonil1amino)propionato de etilo Se añadieron a un matraz ácido 1-{N-(2-etoxicarbonil-etil)-N-[4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]amino}ciclobutano-1 -carboxílico (4.48g, 9.6mmol), BOP (4.64g, 10.5mmol), disopropiletilamina (1.37g, 10.5 mmol=1.8ml @ d=0.742, y DMF (50ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. A esta mezcla se añadieron disopropiletilamina (2.49g, 19.2mmol, 3.35ml) y clorhidrato de O-bencil hidroxilamina (1.98g, 12.48mmol). Después de agitar durante toda la noche a temperatura ambiente, se suspendió la reacción la reacción en éter y se lavó con ácido clorhídrico 1 N (3 x 150ml), agua (3 x 100ml) y salmuera (1 x 200ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró el filtrado. El residuo se sometió a cromatrografía (acetato de etilo al 20%/hexano al 80%) proporcionando un aceite incoloro espeso, (4.28g, rendimiento 88%).

RMN de 1H (CDCI3) d 1.23 (t, 3H), 1.60 (m, 1 H), 1.80 (m, 1H), 2.20 (m, 2H), 2.55 (m, 4H), 3.45 (m, 2H), 4.08 (q, 2H), 4.97 (s 2H), 7.00 (d, 2H), 7.10 (m, 4H), 7.25 (m, 3H), 7.35 (m, 2H), 7.75 (d, 2H), 9.70 (s ancho, 1H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 571 (M++1 ).

H) Acido 3-r r4-(4-fluorofenoxi,fen¡lsulfon¡p-1-IYN-hidroxicarbamoiQciclobutillamino.propionato de etilo Se sometió a hidrogenación con paladio al 5% sobre sulfato de bario (2.5g) en etanol/acetato de etilo (1 :4) (70ml) a 2.76 x 105 Pa y temperatura ambiente durante aproximadamente 2.5 horas el 3-{1-[(N-benciloxicarba-moil)ciclobutil]-[4-(4-fluorofenoxi)fenilsulfonil]amino}- propionato de etilo (4.8g, 8.4mmol). El catalizador se eliminó por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria proporcionando una espuma blanca, (3.64g, rendimiento 90%). RMN de 1H (DMSO-d6) d 1.14 (t, 3H), 1.65 (m, 2H), 2.40 (m, 4H), 2.65 (m, 2H), 3.40 (m, 2H), 4.00 (q, 2H), 7.05 (d, 2H), 7.20 (m, 2H), 7.25 (m, 2H), 7.75 (d, 2H), 8.90 (s ancho, 1 H), 10.70 (s ancho, 1 H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 481 (M"+1 ). ü Acido 3-(r4-(4-fluorofenoxi ,fenilsulfonip-i r(N-hidroxicarbamoiDciclobutillaminolpropiónico Se añadieron a un matraz 3-[[4-(4-fluorofenoxi) fenil-sulfonil]-1-[(N-hidroxicarbamoil)ciclobutil]amino]propionato de etilo (3.64g, 7.6mmol), etanol (50ml), hidróxido de litio hidratado (1.59g, 38mmol). Después de agitar durante toda la noche a temperatua ambiente se eliminó el disolvente por evaporación rotatoria. El residuo se suspendió en acetato de etilo y se lavó con agua (2 x 200 ml) y ácido clorhídrico 1 N (2 x 200 ml). La capa orgánica se separó y se secó sobre sulfato de magnesio. El reactivo de secado se eliminó por filtración a vacío y el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria proporcionando un sólido blanco (3.37 g, rendimiento 98%). Este se recristalizó en hexano/acetato de etilo proporcionando cristales blancos (2.23 g, rendimiento 65%, p.f. 168-169°C). RMN de 1H (DMSO-d6) d 1 ,60 (m, 2H), 2,35 (m, 4H), 2,55 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 7.00 (d, 2H), 7.20 (m, 2H), 7.25 (m, 2H), 7.75 (d, 2H), 8.85 (s, 1 H), 10.65 (s, 1 H), 12.25 (s, 1 H); Espectro de Masas de Ionización Química a Presión Atmosférica: 435 (M++1); HPLC (C18 NovaPak, gradiente de acetonitrilo 30% a 90%/agua) 9.9 minutos; Análisis calculado: C, 53.09; H, 4.68; N, 6.19; Encontrado: C, 53.40; H, 4.68; N. 6.20.

Claims (12)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de la fórmula o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que R1 es hidrógeno o alquilo de C.-Cß; e Y es un sustituyente sobre cualquiera de los átomos de carbono del anillo de fenilo, capaz de soportar un enlace adicional, seleccionando independientemente de fluoro, cloro, trifluorometoxi y alquilo de

2.- Un compuesto según la reivindicación 1 , en el que Y es hidrógeno, fluoro o cloro.

3.- Un compuesto según la reivindicación 1 , en el que Y es 4-fluoro o 4-cloro.

4.- Un compuesto según la reivindicación 1 , en el que R es hidrógeno.

5.- Un compuesto según la reivindicación 3, en el que R1 es hidrógeno.

6.- Un compuesto según la reivindicación 1 , en el que dicho compuesto se selecciona del grupo formado por: éster etílico del ácido 3-[[4-4-fluorofenoxibenceno-sulfononil]-(1-hidroxicarbamcilciclobutil)amino]propiónico; y ácido 3-[[4-4-fluorofenoxi)bencenosulfonil]-(1 -hidroxicarbamoilciclobutil aminolpropiónico.

7.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilldad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, restenosis, enfermedad periodontal, epidermóiisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza de implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa aterosclerótica) aneurisma aórtica abdominal y aneurisma aórtica cerebral), insuficiencia cardíaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad Huntington. Enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, curación anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, úlceras corneales, escleritis, SIDA, septicemia y choque séptico en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 , eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8.- El uso de un compuesto de la reivindicación 1 , efectivo para el tratamiento de una condición como tal, para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno seleccionado del grupo formado por artritis (incluyendo osteoartritis y artritis reumatoide), enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfisema, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad de Alzheimer, toxicidad en el trasplante de un órgnano, caquexia, reacciones alérgicas, hipersensibilidad por contacto alérgica, cáncer, ulceración de tejidos, restenosis, enfermedad periodontal, epidermólisis ampollosa, osteoporosis, falta de firmeza de implantes de articulaciones artificiales, aterosclerosis (incluyendo ruptura de la placa ateroscleróstica), aneurisma aórtica (incluyendo aneurisma aórtica (incluyendo aneurisma aórtica abdominal y aneurisma aórtica cerebral), insuficienca cardíaca congestiva, infarto de miocardio, apoplejía, isquemia cerebral, traumatismo craneal, lesión de la médula espinal, trastornos neurodegenerativos (agudos y crónicos), trastornos autoinmunes, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, migraña, depresión, neuropatía periférica, dolor, angiopatía amiloide cerebral, potenciación, nootrópica o cognitiva, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, angiogénesis ocular, lesión corneal, degeneración macular, cuaración anómala de heridas, quemaduras, diabetes, invasión tumoral, crecimiento de tumor, metástasis tumoral, úlceras corneales, escleritis, SIDA, septicemia, choque séptico en un mamífero, incluyendo un ser humano.

9.- Una composición farmacéutica para ei tratamiento de un trastorno que se puede tratar mediante la inhibición de metaloproteinasas de la matriz en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 , eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de un trastorno que se puede tratar mediante la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano, que comprende una cantidad de un compuesto de la reivindicación 1 , eficaz en dicho tratamiento y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

11.- El uso de un compuesto de la rivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para la inhibición de metaloproteinasas de la matriz en un mamífero, incluyendo un ser humano.

12.- El uso de un compuesto de la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para la inhibición de una reprolisina de mamífero en un mamífero, incluyendo un ser humano.