ES2215559T3 - Procedimiento para la separacion de enantiomeros y reactivo enantiopuro. - Google Patents

Procedimiento para la separacion de enantiomeros y reactivo enantiopuro.

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ES2215559T3 ES00201285T ES00201285T ES2215559T3 ES 2215559 T3 ES2215559 T3 ES 2215559T3 ES 00201285 T ES00201285 T ES 00201285T ES 00201285 T ES00201285 T ES 00201285T ES 2215559 T3 ES2215559 T3 ES 2215559T3
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Abstract

Procedimiento para la separación de enantiómeros que comprenden al menos un grupo funcional libre, en el cual (a) se hace reaccionar una mezcla que comprende los enantiómeros en medio básico con un reactivo a base de un aminoácido enantiopuro, reactivo en el cual al menos un grupo amino del aminoácido lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato o isotiocianato y en el cual al menos un grupo carboxilo del aminoácido está sustituido y (b) se somete la mezcla de diastereoisómeros obtenida a una operación de separación.

Description

Procedimiento para la separación de enantiómeros y reactivo enantiopuro.
La invención se refiere a un procedimiento para la separación de enantiómeros y a reactivos a base de un aminoácido enantiopuro, utilizables en la separación de enantiómeros.
La separación de enantiómeros es un asunto de gran importancia en la industria farmacéutica, química y biotecnológica. En efecto, los dos enantiómeros de una sustancia química de constitución idéntica pueden tener actividades biológicas radicalmente diferentes. Por ello es deseable disponer de reactivos y de técnicas de separación que permitan separar los enantiómeros y analizar la pureza enantiomérica de los productos farmacéuticos, químicos y biotecnológicos.
Un artículo de Marfey, P. (Carlsberg Res. Comm. 49, 1984, 591-596) describe un procedimiento de separación de enantiómeros por RP-HPLC. Según este procedimiento conocido, se emplea 1-flúoro-2,4-dinitrofenil-5-L-alaninamida como reactivo para la derivatización de aminoácidos. Se conocen también otros procedimientos similares. Sin embargo, el procedimiento y reactivo descritos por Marfey así como los otros procedimientos y reactivos presentan numerosos inconvenientes. Iwaki et al., Chromatographia, 23 Nº 12 (1987) p. 899-902, describen la separación de compuestos enantioméricos aminados por derivatización con succinimido-carbamatos de feniletilamina o de naftiletilamina, seguida de cromatografía HPLC.
El derivado obtenido en la reacción del aminoácido con el reactivo debe aislarse mediante operaciones sucesivas de neutralización, secado, redisolución y filtración. Estas operaciones requieren mucho tiempo y, en consecuencia, son poco interesantes para una aplicación industrial. Además existe el riesgo, en el caso de aplicaciones analíticas, de que existan errores en los resultados del análisis, causados por una solubilidad diferente de los derivados diastereoisoméricos en el disolvente de redisolución. En el procedimiento conocido, cuando se efectúan análisis cuantitativos con ayuda de la espectrometría UV, se encuentran dificultades debidas a diferencias de coeficientes de absorción de los derivados diastereoisoméricos. Por último, el elevado precio del reactivo hace deseable encontrar alterna-
tivas.
La invención pretende solucionar estos problemas.
En consecuencia, la invención se refiere a un procedimiento para la separación de enantiómeros que comprenden al menos un grupo funcional libre, en el cual
(a) se hace reaccionar una mezcla que comprende los enantiómeros en medio básico con un reactivo a base de un aminoácido enantiopuro, reactivo en el cual al menos un grupo amino del aminoácido lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato y en el cual al menos un grupo carboxilo del aminoácido está sustituido y
(b) se somete la mezcla de diastereoisómeros obtenida a una operación de separación.
Se ha encontrado, de manera sorprendente, que el procedimiento según la invención permite obtener buenos resultados en separación de enantiómeros que comprenden al menos un grupo funcional libre, especialmente en aplicaciones analíticas cuantitativas. El procedimiento según la invención permite una derivatización y separación de enantiómeros rápidas y en condiciones flexibles y económicas.
La invención se refiere también a un reactivo a base de un aminoácido enantiopuro en el cual al menos un grupo amino del aminoácido lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato y en el cual al menos un grupo carboxilo del aminoácido está sustituido.
Para los objetivos de la presente invención, mediante el término aminoácido se entiende que se designa todo compuesto que comprende al menos un grupo NH_{2} y al menos un grupo carboxilo. Los aminoácidos utilizados en la presente invención son aminoácidos quirales que contienen al menos un carbono asimétrico. Se puede utilizar todo aminoácido quiral bien conocido por si mismo, de origen natural o sintético.
Ejemplos de reactivos según la invención son, por ejemplo, a base de los aminoácidos naturales siguientes:
alanina, valina, norvalina, leucina, norleucina, isoleucina, serina, isoserina, homoserina, treonina, alotreonina, metionina, etionina, ácido glutámico, ácido aspártico, asparagina, cisteína, cistina, fenilalanina, tirosina, triptófano, lisina, arginina, histidina, ornitina, glutamina y citrulina.
También son utilizables los enantiómeros no naturales.
Entre los ejemplos de aminoácidos de origen sintético utilizables como base del reactivo según la invención se incluyen, por ejemplo, los aminoácidos siguientes: (1-naftil)alanina, (2-naftil)alanina, homofenilalanina, (4-clorofenil)alanina, (4-fluorofenil)alanina, (3-piridil)alanina, fenilglicina, ácido diaminopimélico (ácido 2,6-diaminoheptano-1,7-dioico), ácido 2-aminobutírico, ácido 2-aminotetralin-2-carboxílico, eritro \beta-metilfenilalanina, treo \beta-metilfenilalanina, (2-metoxifenil)alanina, ácido 1-amino-5-hidroxiindan-2-carboxílico, ácido 2-aminoheptan-1,7-dioico, (2,6-dimetil-4-hidroxifenil)alanina, eritro \beta-metiltirosina, treo \beta-metiltirosina.
Mediante el término aminoácido enantiopuro se entiende que se designa un aminoácido quiral constituido esencialmente por un enantiómero. El exceso enantiomérico (ee) se define según: ee(%)= 100(x_{1}-x_{2})/(x_{1}+x_{2}), con x_{1}>x_{2}; x_{1} y x_{2} representan, respectivamente, los contenidos en enantiómero 1 y enantiómero 2 en la mezcla.
Se emplea generalmente un aminoácido enantiopuro cuyo exceso enantiomérico es superior o igual a 99%. Se prefiere un aminoácido enantiopuro cuyo exceso enantiomérico es superior o igual a 99,5%. De forma especialmente preferida, se emplea un aminoácido enantiopuro cuyo exceso enantiomérico es superior o igual a 99,9%.
Todo aminoácido enantiopuro es utilizable como base del reactivo según la invención. Preferentemente, el aminoácido enantiopuro se selecciona entre los aminoácidos de origen natural o sintético nombrados anteriormente. Los aminoácidos que comprenden al menos un núcleo aromático, tales como, por ejemplo, fenilalanina o sus derivados resultan convenientes como aminoácidos enantiopuros. De forma especialmente preferida, el aminoácido enantiopuro se selecciona entre: fenilalanina, (1-naftil)alanina, (2-naftil)alanina, o \alpha o \beta triptófano ((2-indolil)alanina o (3-indolil)alanina), eventualmente sustituidos.
En el reactivo según la invención, al menos un grupo amino del aminoácido enantiopuro lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato.
Mediante la expresión precursor activo de un grupo isocianato se entiende que se designa todo precursor que cuando se emplea en un disolvente utilizable en el procedimiento según la invención con un equivalente de fenilalanina en presencia de 1 equivalente de base reacciona a una temperatura inferior o igual a 35ºC de forma esencialmente completa en un período inferior o igual a 30 minutos, para formar la correspondiente urea. Preferentemente, el precursor reactivo libera el grupo isocianato a una temperatura inferior o igual a 30ºC, en un período inferior o igual a 15 minutos. De forma muy especialmente preferida, el precursor reactivo libera el grupo isocianato a temperatura ambiente en un período inferior o igual a 10 minutos. Se describen condiciones de test utilizables para determinar el precursor activo por ejemplo en el ejemplo 3 de más adelante.
El grupo activador está constituido generalmente por un derivado carbonilo ligado a un sustituyente electronegativo. Por ejemplo, se puede utilizar como grupo activador un grupo ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, 1,3-imidazolil-N-carbonilo o 1,2,4-triazolil-N-carbonilo. Entre los grupos ariloxicarbonilo resultan convenientes aquellos que llevan un sustituyente -I, -M sobre un núcleo aromático. Un sustituyente -I, -M es un grupo que tiene un efecto negativo inductivo y de resonancia, según se define en J. March, Advanced Organic Chemistry, 4. Ed., 1992, p. 17-19, 273-275. Entre los sustituyentes -I, -M figuran, por ejemplo, -NO_{2}, -SO_{2}R, -SO_{2}OR, -NR_{3}^{+}, SR_{2}^{+}. Preferentemente, los sustituyentes se encuentran en al menos una de las posiciones 2, 4 o 6 del núcleo aromático o en posiciones análogas a las posiciones 2 o 4 en sistemas aromáticos condensados. Se prefiere utilizar un grupo activador ariloxicarbonilo que lleve al menos un sustituyente nitro en un núcleo aromático. Se prefiere en especial el grupo (4-nitrofeniloxi)carbonilo.
En una variante, el sustituyente electronegativo comprende un sustituyente -I (efecto negativo inductivo) independientemente del efecto de resonancia (M), tal y como se han definido anteriormente. El grupo activador es, en esta variante, preferentemente, un grupo ariloxicarbonil portador de al menos un sustituyente -I. El sustituyente -I se encuentra, preferentemente, en las posiciones indicadas anteriormente para los sustituyentes -I, -M. Ejemplos de sustituyentes -I utilizables en el reactivo según la invención son, por ejemplo, los halógenos. Resultan adecuados el cloro y el flúor. Se prefiere el flúor.
En una variante de la invención, permaneciendo iguales todas las demás cosas, el reactivo es a base de una aminoácido enantiopuro en el cual al menos un grupo amino del aminoácido lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isociananto. Por ejemplo, se puede utilizar como grupo activador un grupo tiocarbonilo unido a un grupo electronegativo tal y como los descritos anteriormente. Se prefiere un grupo (4-nitrofeniloxi)tiocarbonilo o (4-fluorofeniloxi)tiocarbonilo.
Se ha encontrado que en esta variante de la invención la reacción del reactivo con el compuesto orgánico que comprende un grupo funcional libre da lugar, generalmente, a la formación de derivados que comprenden un grupo tiocarbonilo, lo que puede dar una separación de enantiómeros aún mejor que la de los derivados oxigenados. La presencia de azufre en los derivados diastereoisoméricos facilita aún más la detección de dichos derivados, especialmente por espectrometría UV.
En el reactivo según la invención al menos un grupo carboxilo del aminoácido es sustituido.
Generalmente, el sustituyente con el cual el grupo carboxilo del aminoácido está sustituido no comprende grupo funcional libre, susceptible de reaccionar con el precursor activo. Entre los sustituyentes utilizables figuran, por ejemplo, los grupos alquilo que comprenden de 1 a 4 átomos, lineales o ramificados, tales como los grupos metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo o t-butilo, los éteres, los grupos arilo, los grupos alquilo, éter o arilo que están eventualmente funcionalizados por, por ejemplo, halógenos, ésteres carboxílicos, sulfónicos, ésteres de sulfato, ésteres fosfónicos, ésteres de fosfato. Resultan adecuados los sustituyentes hidrófilos que aseguran una buena solubilidad del reactivo en mezclas de agua con disolventes orgánicos.
El sustituyente hidrófilo asegura generalmente que una disolución del reactivo en una mezcla dioxano/agua 1:1 en volumen es homogénea a 20ºC cuando la concentración del reractivo es de al menos 0,5\cdot10^{-3} mol/l. A menudo la concentración es de al menos 1\cdot10^{-3} mol/l. Preferentemente la concentración es de al menos 0,5\cdot10^{-2} mol/l. Buenos sustituyentes hidrófilos aseguran que la solución es homogénea a 20ºC cuando la concentración del reactivo es de al menos 1\cdot10^{-2} mol/l.
Se prefiere utilizar un sustituyente que contiene al menos un enlace éter. Ejemplos de sustituyentes que contienen al menos un enlace éter son, por ejemplo, los éteres de alquilo o de arilo de mono-, oligo- o polialquilenglicoles, tales como, por ejemplo, el mono-, oligo-, o polietilenglicol o el mono-, oligo- o propilenglicol. Se prefiere en especial el sustituyente 2-metoxietilo.
Variantes especialmente preferidas del reactivo según la invención que comprenden un sustituyente hidrófilo responden a la fórmula general (I)
1
en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2}, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, R_{2} = Me, Et, alquilo o cicloalquilo C3-C6 y x representa un número entero de 1 a 5.
En una variante, el sustituyente con el cual se sustituye el grupo carboxilo del aminoácido, comprende al menos un cromóforo. Mediante el término cromóforo se entiende que se designa un grupo funcional que absorba radiación electromagnética. Generalmente, el máximo de absorción de los cromóforos es de 170 a 2500 nm. Preferentemente, el máximo de absorción de los cromóforos es de 200 a 1000 nm. Ejemplos de cromóforos utilizables son sistemas aromáticos, eventualmente sustituidos en posiciones 2 ó 4 por un sustituyente -I, -M tal como los descritos anteriormente en el texto. Entre los sustituyentes que comprenden al menos un cromóforo, se prefieren en especial los grupos 4-nitrobencilo, (2-antraquinoil)-metilo y (9(9H-fluorenilmetilo)).
Variantes preferidas del reactivo según la invención que comprenden al menos un cromóforo, responden a la fórmula general (II)
2
3
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en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2}, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, e Y corresponde a una cualquiera de las fórmulas (III a V), estando indicado mediante * el carbono por el cual Y está unida al oxígeno del grupo carboxilo del aminoácido enantiopuro.
Se puede emplear un sustituyente hidrófilo que comprende al menos un cromóforo.
Variantes especialmente preferidas del reactivo según la invención que comprenden un precursor activo de un grupo isotiocianato y un sustituyente hidrófilo responden a la fórmula general (VI)
5
en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2} o F, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, R_{2} = Me, Et, alquilo o cicloalquilo C3-C6 y x representa un número entero de 1 a 5.
Variantes preferidas del reactivo según la invención que comprenden un precursor activo de un grupo isotiocianato y al menos un cromóforo, responden a la fórmula general (VII)
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en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2}, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, e Y corresponde a una cualquiera de las fórmulas (III a V), estando indicado mediante * el carbono por el cual Y está unida al oxígeno del grupo carboxilo del aminoácido enantiopuro.
Cuando el aminoácido enantiopuro contiene más de un grupo carboxilo, se prefiere proteger todos los grupos carboxilos. De forma especialmente preferida, todos los grupos carboxilos se sustituyen con un sustituyente tal como los descritos anteriormente.
Cuando están presentes grupos funcionales libres en el aminoácido enantiopuro, se prefiere proteger dichos grupos mediante las técnicas conocidas para ello.
El reactivo según la invención se puede obtener a partir del respectivo aminoácido enantiopuro. Son utilizables métodos conocidos para efectuar la esterificación de al menos un grupo carboxilo del aminoácido. Se puede, por ejemplo, emplear el aminoácido enantiopuro y el alcohol correspondiente al sustituyente a introducir, en un disolvente orgánico como por ejemplo tolueno o benceno, en presencia de ácido p-toluensulfónico, preferentemente en condiciones de esterificación azeotrópica. Por esta vía de síntesis se obtienen derivados de tosilato de amonio de éster de aminoácido, que resultan adecuados para introducir un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato.
A título de ejemplo de introducción de un grupo activador, se cita la reacción de un cloruro de ariloxicarbonilo con el grupo -NH_{2}, eventualmente convertido en derivado de amonio, de un aminoácido o de un éster de aminoácido en medio básico neutro en un disolvente orgánico polar. Como base resultan especialmente adecuadas bases de amina terciarias, como por ejemplo la trietilamina o la piridina. Cuando se trabaja en medio neutro, se prefiere emplear hidrógenocarbonato de sodio. Así, se obtienen buenos resultados cuando se hace reaccionar un tosilato de amonio de éster de aminoácido con cloruro de p-nitrofeniloxicarbonilo en presencia de hidrógenocarbonato de sodio en un disolvente orgánico polar como el acetonitrilo.
En el procedimiento según la invención se hace reaccionar el reactivo según la invención en medio básico con una mezcla que comprende al menos enantiómeros que comprenden al menos un grupo funcional libre.
El esquema 1 que va a continuación ilustra de forma no limitadora la reacción de un reactivo según la invención, obtenido a partir del éster 2-metoxietílico de L-fenilalanina y de cloruro de (4-nitrofenoxi)formiato con una aminoácido. Los productos de esta reacción son ureas que comprenden dos aminoácidos en los cuales al menos una función carboxilo está sustituida con un sustituyente.
\newpage
Esquema 1
8
Generalmente, el grupo funcional libre es un grupo amino, eventualmente monoalquilado, un grupo hidroxilo o un grupo tiol. Igualmente, el grupo funcional libre puede estar constituido por un anión como por ejemplo un carbanión o un enolato. Los enantiómeros que comprenden al menos un grupo funcional libre separables mediante el procedimiento según la invención son generalmente aminoácidos, aminas primarias o secundarias, péptidos, alcoholes, hidroxiácidos o tioles. El procedimiento según la invención da buenos resultados para separar los enantiómeros de aminoácidos como, por ejemplo, los aminoácidos de origen natural o sintético mencionados anteriormente en el texto.
El procedimiento según la invención da buenos resultados igualmente para separar una mezcla de enantiómeros de iminoácidos. Por iminoácido se entiende que se designa todo compuesto que comprende al menos un grupo NHR, en el cual R representa un radical orgánico como por ejemplo un radical alquilo o arilo, y al menos un grupo carboxilo. Tales iminoácidos son, por ejemplo, los que pertenecen al grupo constituido por prolina, ácido pipecólico (ácido piperidin-2-carboxílico), ácido morfolin-3-carboxílico, ácido piperazin-2-carboxílico, ácido 1-tia-4-azaciclohexano-3-carboxílico, \alpha-metilprolina, cis-4-hidroxiprolina, baicaína (ácido 1,2,3,5-tetrahidropiridin-2-carboxílico), ácido cis-4-hidropipecólico, ácido trans-5-hidroxipipecólico, ácido 1,2,3,4-tetrahidronorharmano-1-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetrahidro-6-hidroxiisoquinolin-3-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-1-carboxílico y N-metilvalina.
El procedimiento según la invención se efectúa en un sistema de disolventes, en el cual la mezcla de enantiómeros y el reactivo poseen una solubilidad suficiente y el grupo funcional libre posee una nucleofilicidad suficiente para reaccionar con un isocianato. Resultan convenientes, por ejemplo, como sistema disolvente sistemas que comprenden al menos un disolvente orgánico polar y eventualmente agua. Disolventes orgánicos polares utilizables son, por ejemplo, éteres alifáticos o alicíclicos como dietiléter, tetrahidrofurano o 1,4-dioxano, así como ésteres alifáticos como por ejemplo acetato de etilo, amidas alifáticas secundarias como por ejemplo dimetilformamida y dimetilacetamida o por ejemplo N-metilpirrolidona o acetonitrilo.
Se obtienen buenos resultados para compuestos orgánicos que comprenden un grupo funcional libre como un grupo amino, eventualmente monoalquilado, un grupo hidroxil arílico o un grupo tiol, en un sistema disolvente que comprende un disolvente orgánico polar y agua. Como disolvente orgánico polar se prefiere el dioxano. La relación ponderal entre el disolvente orgánico polar y el agua es generalmente inferior o igual a 99:1. La mayoría de las veces, la relación es inferior o igual a 75:25. La relación es generalmente superior o igual a 1:99. La mayoría de las veces, la relación es superior o igual a 25:75.
La invención se refiere también a una disolución del reactivo según la invención en un disolvente orgánico polar, como por ejemplo los disolventes orgánicos polares descritos anteriormente en el texto. La concentración del reactivo en la disolución es generalmente de al menos 1 \cdot 10^{-3} mol/l. Preferentemente, la concentración es de al menos 1 \cdot 10^{-2} mol/l. La concentración del reactivo en la disolución es generalmente de cómo mucho 1 \cdot 10^{-1} mol/l. Preferentemente, la concentración es como mucho 6 \cdot 10^{-2} mol/l. En la disolución según la invención se prefiere utilizar un disolvente orgánico polar de pureza analítica. Si se desea, la disolución según la invención puede contener aditivos como, por ejemplo, estabilizantes.
La invención se refiere igualmente a la utilización de la disolución según la invención en un aparato automático de derivatización y de separación de enantiómeros de compuestos orgánicos que comprenden al menos un grupo funcional libre. La cantidad de reactivo a emplear depende del número de grupos funcionales libres en el compuesto orgánico. Se emplea al menos 1 equivalente molar de reactivo por grupo funcional libre. Generalmente, se emplean al menos 10 equivalentes molares de reactivo por grupo funcional libre. La mayoría de las veces, se emplean al menos 5 equivalentes molares de reactivo por grupo funcional libre. Preferentemente, se emplean al menos 3 equivalentes molares de reactivo por grupo funcional libre. De manera especialmente preferida, se emplean de 1,1, a 2,5 equivalentes molares de reactivo por grupo funcional libre.
El carácter básico del medio de reacción se genera por métodos conocidos. Preferentemente, se trabaja en presencia de al menos una base. Como base resultan especialmente convenientes bases de aminas terciarias como por ejemplo trietilamina o diisopropiletilamina, que comprenden respectivamente una funcionalidad básica, o la N,N,N,N-tetrametiletilendiamina, que comprende 2 funcionalidades básicas.
La cantidad de base a utilizar depende de la cantidad de reactivo y del número de funcionalidades básicas en la base. La relación molar entre el reactivo y las funcionalidades básicas es de al menos 1. La relación es generalmente de 2 como mucho. Una relación de 1 da buenos resultados.
En el procedimiento según la invención, la duración del período durante el cual se hace reaccionar el reactivo con la mezcla que contiene los enantiómeros es, generalmente, inferior o igual a 30 minutos. La mayoría de las veces, la duración es inferior o igual a 20 minutos. Preferentemente, la duración es inferior o igual a 15 minutos. Se obtienen buenos resultados con una duración superior o igual a 15 segundos. En la práctica, la mayoría de las veces, se aplica una duración superior o igual a 1 minuto. Resulta conveniente una duración de 5 a 15 minutos.
La temperatura a la cual se hace reaccionar el reactivo con la mezcla que comprende al menos los enantiómeros de un compuesto orgánico es generalmente inferior o igual a 35ºC. La mayoría de las veces, la temperatura es inferior o igual a 30ºC. La temperatura es generalmente superior o igual a -20ºC. La mayoría de las veces, la temperatura es superior o igual a 0ºC. De forma especialmente preferida, la temperatura es la temperatura ambiente, es decir, generalmente de 15 a 30ºC, preferentemente de 20 a 25ºC.
En el procedimiento según la invención, se somete la mezcla de diastereoisómeros obtenida a una operación de separación. Las operaciones de separación utilizables para la separación de una mezcla de diastereoisómeros se describen, por ejemplo, en E. Eliel, Stereochemistry of Organic compounds, 1994, p.344-381. Como ejemplo pueden citarse las operaciones de destilación, cristalización o cromatografía gaseosa o líquida. Entre estas operaciones, se prefieren las operaciones de cromatografía líquida como por ejemplo la cromatografía HPLC. De forma especialmente preferida, la operación de separación es una cromatografía HPLC-RP (fase inversa). Informaciones acerca de la cromatografía HPLC se hallan, por ejemplo, en RÖMPP CEIME-LEXIKON, 9 Ed., p.1860-1861. Igualmente, se puede utilizar la cromatografía en capa fina.
Se conocen eluyentes utilizables en una operación de cromatografía. En el caso en que el procedimiento según la invención comprenda como operación de separación una cromatografía HPLC-RP, se han obtenido buenos resultados con un eluyente que comprende acetonitrilo o metanol.
En una variante del procedimiento según la invención, que es preferida, se somete la mezcla de diastereoisómeros obtenida a la operación de separación sin purificación previa. En los métodos de separación de enantiómeros conocidos, se aísla una mezcla bruta, sin refinar, de diastereoisómeros que debe someterse a una depuración o purificación, previamente a la separación de los diastereoisómeros. El procedimiento y el reactivo según la invención permiten no aislar la mezcla bruta de diastereoisómeros y efectuar la operación de separación sin purificación previa.
El procedimiento y el reactivo según la invención pueden utilizarse para la separación preparativa o analítica de enantiómeros. El procedimiento y el reactivo resultan adecuados para la separación analítica de enantiómeros. En una variante, el procedimiento y el reactivo se emplean para determinar el exceso enantiomérico de un aminoácido o de una amina primaria o secundaria. En otra variante, el procedimiento o el reactivo se emplean para determinar el exceso enantiomérico de un péptido.
La invención se refiere también a un procedimiento para la obtención de un compuesto enantiopuro que comprende al menos un grupo funcional libre en el cual
(a)
se somete una mezcla que comprende los enantiómeros del compuesto que comprenden al menos un grupo funcional libre al procedimiento de separación según la invención;
(b)
se efectúa una operación de desdoblamiento o resolución de un diastereoisómero puro obtenido por separación de la mezcla de diastereoisómeros;
(c)
se recupera el compuesto enantiopuro.
Como operación de desdoblamiento o resolución puede utilizarse, por ejemplo, una operación de hidrazinolisis en un disolvente tal como, por ejemplo, un alcohol.
Cuando se utilizan el procedimiento o el reactivo según la invención para la separación analítica de enantiómeros, se emplea una técnica de detección conocida para la determinación del contenido de la mezcla en enantiómeros. Resultan adecuadas como técnicas de detección las técnicas ópticas, como, por ejemplo, la espectrometría UV, la espectrometría visible o la fluorimetría.
Los ejemplos que vienen a continuación pretenden ilustrar la invención sin, no obstante, limitarla.
Ejemplo 1 Síntesis del reactivo según la invención
Etapa A
En un matraz de un solo cuello, se introdujo 1 equivalente de aminoácido enantiopuro, 1,5 equivalentes de ácido paratoluensulfónico monohidratado, 50 equivalentes de tolueno PA y 5 equivalentes de metoxietanol. Se calentó la mezcla a reflujo y se eliminó el agua por medio de un Dean-Stark. Tras 4 horas de reflujo, se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se diluyó con éter etílico. La mezcla de reacción diluida se colocó en el frigorífico durante 16 horas. El sólido blanco obtenido se filtró, se lavó con éter y se secó a vacío.
Etapa B
En un matraz de un solo cuello, se pesó NaHCO_{3} (2,6 equivalentes) y se introdujo, bajo corriente de nitrógeno acetonitrilo (5\cdot10^{-3}moles en 36 ml). Se enfrió la mezcla a 0ºC y se introdujeron, sucesivamente, (4-nitro-fenoxi)cloroformato (1 equivalente) seguido de la sal de amonio del aminoácido enantiopuro obtenido según el ejemplo 1, etapa A (1 equivalente). La mezcla se agitó vigorosamente 1 hora a 0ºC y a continuación se mantuvo a temperatura ambiente durante 4 horas. Pasado este tiempo, la mezcla se transfirió a un embudo de decantación, se diluyó con una disolución 1 molar de HCl y se extrajo tres veces con éter. Se secaron las fase orgánicas combinadas sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto bruto se sometió a un tratamiento adecuado de purificación.
Ejemplo 2
Se llevaron a cabo las etapas A y B utilizando L-fenilalanina como aminoácido enantiopuro. El producto bruto fue recristalizado en isopropanol, hasta obtención de la pureza deseada. El rendimiento de la etapa B fue de 64%. Se obtuvo un sólido cristalino estable al almacenamiento a temperatura ambiente
El reactivo así obtenido presentó los datos analíticos siguientes:
RMN (H^{1}) (referencia dioxano a 3,71 ppm; producto disuelto en dioxano-d6)
8,40 (2H, d) 2H del (4-nitrofeniloxi)carbonilo
7,44 (7H, m) 2H del (4-nitrofeniloxi)carbonilo y 5H del fenilo
7,31 (1H, d) NH del carbamato
4,83 (1H, m) CH de la fenilalanina
4,41 (2H, m) CH_{2}OC=O
3,70 (2H, m) CH_{2}OMe
3,47 (3H, s) CH_{3}O
3,27 (2H, AB) 2H bencílicos
En todos los casos para los cuales se indica un espectro RMN, se realizó la resonancia magnética nuclear (RMN) con un espectrómetro Brücker AMX 500 MHz. Los desplazamientos químicos se indican en ppm respecto de la resonancia del TMS (tetrametilsilano). Para los aspectos de las resonancias se usan las abreviaturas siguientes: m = multiplete; s = singlete; d= doblete; t = triplete; q = cuadruplete. El número nH indica el número de protones correspondientes a la señal.
Punto de fusión: 71-72ºC.
Rotación óptica: [\alpha]: +42,608 (c = 0,86 g/100 ml en dioxano; T = 26ºC, l = 589 nm).
La cromatografía en capa fina (CCM, por sus siglas en francés) se realizó usando placas de gel de sílice MERCK® 60F-254. Relación frontal = 0,45 (eluyente dietiléter/éter de petróleo: mezcla 75/25 en volumen).
Ejemplos 3-48
Derivatización y separación de mezclas de enantiómeros
En un vial de 10 ml, se pesó de manera precisa la mezcla de enatiómeros de un compuesto orgánico que comprendía al menos un grupo funcional libre, según los ejemplos 3-48 (ver tabla) (1 equivalente), que se disolvió en agua destilada (concentración 5 \cdot 10^{-3}mol/l), en presencia de trietilamina. La relación molar de trietilamina con respecto al reactivo era de 1. En un segundo vial de 10 ml, se introdujo el reactivo obtenido según el ejemplo 1 en el cual el aminoácido enantiopuro era L-fenilalanina. El reactivo se disolvió en dioxano de pureza analítica (concentración: 3 \cdot 10^{-2}mol/l). Con una jeringa, y bajo agitación vigorosa, se transfirió la disolución acuosa del ácido aminado a la disolución del reactivo de derivatización. Tras 15 minutos de agitación a temperatura ambiente, se muestrearon 500 \mul de la mezcla de reacción, que se diluyeron con 500 \mul de dioxano. Esta disolución se analizó mediante HPLC en fase inversa por inyección de 10 \mul de disolución en una columna VYDAC®.
Se utilizaron las siguientes condiciones estándar para los ejemplos de separación de mezclas de enantiómeros por HPLC.
Se utilizó una columna VYDAC® de Fase Inversa C18 CAT 201 TP54.
Se empleó para la elución una mezcla acetonitrilo/H_{2}O con un gradiente en acetonitrilo de 1,58%/min en presencia de 0,1% en volumen de ácido trifluoroacético.
La detección se realizó mediante espectrometría UV a 205 y 220 nm.
La tabla 1 que se presenta a continuación recoge las mezclas de enantiómeros que se emplearon con el reactivo obtenido según el ejemplo 1 y los resultados de separación obtenidos.
TABLA 1
9
10
11
Leyenda para las tablas 1 a 6.
(a)
Tiempo de retención correspondiente al derivado del enantiómero L (L, L)
(b)
Tiempo de retención correspondiente al derivado del enantiómero D (D, L)
(c)
Factor de separación; \alpha = (Tr2-Tr0)/(Tr1-Tr0) donde Tr2 y Tr1 son, respectivamente, los tiempos de retención de los compuestos segundo y primero y Tr0 es el tiempo de retención de un compuesto no retenido.
(d)
Factor de resolución;
Rs = 0,25 [(\alpha-1)/ \alpha][k'2/(1+k'2)] \surd N
donde k'2 es el factor de capacidad del segundo compuesto y N el número de platos teóricos.
* Derivatización asimismo de la función que lleva la cadena lateral.
^{\dolar{1}} La atribución de los tiempos de retención a los isómeros (L, L) y (D, L), respectivamente, no es segura, puesto que la mezcla de enantiómeros sometida a la separación era racémica.
Ejemplo 49
Se llevaron a cabo las etapas A y B empleando como aminoácido enantiopuro L-(2-naftil)alanina. El producto bruto fue recristalizado en isopropanol hasta obtención de la pureza deseada. El rendimiento de la etapa B fue de 77%. Se obtuvo un sólido cristalino que era estable al almacenamiento a temperatura ambiente.
Se obtuvo el siguiente espectro RMN del reactivo:
\newpage
RMN (H^{1}) (referencia dioxano a 3,71 ppm; producto disuelto en dioxano-d6)
8,20 (2H, d) 2H del (4-nitrofeniloxi)carbonilo
7,79 (4H, m) 4H del naftilo
7,45 (3H, m) 3H del naftilo
7,21 (3H, m) 2H del (4-nitrofeniloxi)carbonilo y 1H del naftilo
4,78 (1H, m) CH de la naftilalanina
4,27 (2H, m) CH_{2}OC=O
3,52 (2H, m) CH_{2}OMe
3,28 (3H, s) CH_{3}O
3,29 (2H, AB) 2H bencílicos
Punto de fusión 76-77ºC
Rotación óptica [\alpha]: 83,5 (c = 1,025 g/100 ml en dioxano; T = 26ºC, \lambda = 589 nm).
La cromatografía en capa fina (CCM, por sus siglas en francés) se realizó usando placas de gel de sílice MERCK® 60F-254. Relación frontal anterior = 0,4 (eluyente dietiléter/éter de petróleo: mezcla 75/25 en volumen).
Se llevó a cabo la reacción del éster 2-metoxietílico de L-N-(4-nitrofenoxi)carbonil-(2-naftil)alanina con una mezcla de enantiómeros de arginina y la operación de separación en las condiciones de los ejemplos 3-48.
Se emplearon 2 equivalentes de reactivo y 2 equivalentes de trietilamina por equivalente de arginina.
La tabla 2 que se presenta a continuación muestra el resultado de separación obtenido.
TABLA 2
Ejemplo Mezcla de enantiómeros Tr L,L^{(a)} Tr D,L^{(b)} \alpha^{(c)} Rs^{(d)} Cantidad de reactivo^{(e)} (equivalentes)
49 Arginina 20,168 19,625 1,030 1,73 2
Ejemplo 50
Se llevó a cabo la reacción del éster 2-metoxietílico del L-N-(4-nitrofenoxi)carbonil-\beta-triptófano con una mezcla de enantiómeros de valina y la operación de separación en las condiciones de los ejemplos 3-48. Se emplearon 2 equivalentes de reactivo y 2 equivalentes de trietilamina por equivalente de valina.
La tabla 3 que se presenta a continuación muestra el resultado de separación obtenido.
TABLA 3
Ejemplo Mezcla de enantiómeros Tr L,L^{(a)} Tr D,L^{(b)} \alpha^{(c)} Rs^{(d)} Cantidad de reactivo^{(e)} (equivalentes)
50 Valina 19,19 20,42 1,069 5,80 2
Ejemplo 51 Preparación del éster 4-nitrobencílico de N-((4-nitrofenoxi)carbonil fenilalanina)
Etapa A
En un matraz de una sola boca, se introdujeron 4 g (1 equivalente) de Z-(L)-fenilalanina, 2,89 g (1 equivalente) de bromuro de 4-nitrobencilo y 26 ml (25 equivalentes) de dimetilformamida. Luego se añadieron 1,55 g (2 equivalentes) de fluoruro de potasio seco, bajo nitrógeno. La mezcla se agitó a 60ºC durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó mediante 100 ml de acetato de etilo. La fase orgánica se lavó dos veces con 100 ml cada vez de una disolución de NaHCO_{3} al 5% así como dos veces con 100 ml cada vez de agua. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a presión reducida. El sólido obtenido se secó en estufa durante una noche. Rendimiento: 6,3 g (85%).
Etapa B
El sólido obtenido en la etapa 1 se diluyó en 25 ml de ácido acético glacial. Se añadieron con precaución 6,9 ml (3 equivalentes) de una disolución al 33% en peso de HBr sobre el ácido acético. La mezcla se agitó durante una hora y media a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con 200 ml de éter etílico y el precipitado blanco formado se filtró y lavó tres veces con 200 ml de éter etílico cada vez. El sólido se secó en estufa durante una noche.
Rendimiento: 5,53 g (99%).
Etapa C
En un matraz de una sola boca, se pesaron 0,82 g de NaHCO_{3}\cdot (2,6 equivalentes) y se introdujeron bajo corriente de nitrógeno 27 ml de acetonitrilo (135 equivalentes). La mezcla se enfrió a 0ºC y se introdujeron sucesivamente 0,81 g (1 equivalente) de cloruro de (4-nitrofenoxi)carbonilo seguidos de 1,5 g (1 equivalente) de la sal de bromo del derivado 4-nitrobencílico de fenilalanina. La mezcla se agitó vigorosamente 1 hora a 0ºC y a continuación se mantuvo a temperatura ambiente durante 11 horas. Pasado este tiempo, la mezcla se transfirió a un embudo de decantación, se diluyó con 60 ml de una disolución 1M de ácido clorhídrico y se extrajo tres veces con 60 ml de acetato de etilo en cada ocasión. El conjunto de las fases orgánicas combinadas se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y concentró a presión reducida, para dar un sólido beige. Éste se trituró en 50 ml de éter y se filtró.
Rendimiento 1,44 g (82%)
RMN (H^{1}) (referencia metanol a 3,32 ppm; producto disuelto en metanol-d4)
8,32 (2H, d) 2H del (4-nitrofenoxi)carbonilo
8,28 (2H, d) 2H del 4-nitrobencilo
7,63 (2H, d) 2H del 4-nitrofenoxicarbonilo
7,34-7,41 (7H, m) 2H del 4-nitrobencilo y 5H del fenilo
5,37 (2H, s) CH_{2} bencílico del 4-nitrobencilo
4,65 (1H, m) CH de la fenilalanina
3,23 (2H, AB) CH_{2} bencílicos de la fenilalanina
Punto de fusión 118,3ºC
Rotación óptica [\alpha]: +20,83 (c = 0,96 g/100 ml en dioxano; T = 24ºC, \lambda = 589 nm).
La cromatografía en capa fina (CCM, por sus siglas en francés) se realizó usando placas de gel de sílice MERCK® 60F-254. Relación frontal = 0,4 (eluyente dietiléter/éter de petróleo: mezcla 75/25 en volumen).
Ejemplo 52
La tabla 4 presenta el resultado de separación de una mezcla de enantiómeros de valina que se llevó a cabo con el reactivo obtenido según el ejemplo 51, según el modo operatorio del ejemplo 3. La detección se efectuó por espectrometría UV a 205, 220 y 270 nm.
TABLA 4
Ej. Mezcla de Tr L,L^{(a)} Tr D,L^{(b)} \alpha^{(c)} Rs^{(d)} (nm) Equivalentes de Rs (nm)
enantiómeros reactivos
52 Valina 26,207 27,246 1,042 3,92 (205 nm) 2 4,77 (220 – 270)
Se observó que este reactivo permite una detección a 220 nm y a 270 nm. Se obtuvo, a estas longitudes de onda, un factor de separación mayor que cuando se realiza la detección a 205 nm.
Ejemplo 53
Se sintetizó, según el modo operatorio del ejemplo 51, el éster 2-metilantraquinónico de N-((4-nitrofenoxi)carbonil)fenilalanina. La tabla 5 presenta el resultado de separación de una mezcla de enantiómeros de valina que se llevó acabo con el reactivo obtenido según el ejemplo 51, según el modo operatorio del ejemplo 3. La detección se efectuó por espectrometría UV a 205, 220, 270 y 330 nm.
TABLA 5
Ej. Mezcla de Tr L,L^{(a)} Tr D,L^{(b)} \alpha^{(c)} Rs^{(d)} (nm) Equivalentes de Rs (nm)
enantiómeros reactivos
53 Valina 30,168 30,884 1,025 3,01 (205 nm) 2 3,11 (270 y 330)
Se observó que este reactivo permite una detección a 270 nm y a 330 nm. Se obtuvo, a estas longitudes de onda, un factor de separación mayor que cuando se realiza la detección a 205 nm.
Parece que el reactivo según la invención se puede obtener fácilmente. El reactivo según la invención presenta una buena estabilidad a temperatura ambiente.
El procedimiento según la invención permite separar una gran variedad de compuestos orgánicos quirales que comprenden al menos un grupo funcional libre, de forma simple, rápida y en condiciones uniformes de separación, sin tener que aislar el producto de la reacción previamente a la etapa de separación.
Ejemplo 54
En un matraz de una sola boca, se pesó NaHCO_{3} (2,6 equivalentes) y se introdujo acetonitrilo (12,10 - 3 moles en 83 ml) bajo corriente de nitrógeno. La mezcla se enfrió a 0ºC y se introdujeron sucesivamente 4-fluorofenoxiclorotionoformiato (1 equivalente), seguidos de la sal de amonio del aminoácido enantiopuro obtenido según el ejemplo 1, etapa A (1 equivalente). La mezcla se agitó enérgicamente durante 1 hora a 0ºC y a continuación se mantuvo a temperatura ambiente durante 4 horas. Pasado este tiempo la mezcla se transfirió a un pequeño embudo de decantación, se diluyó con una disolución 1 molar de HCl y se extrajo tres veces con éter. El conjunto de las fases orgánicas se secó sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró a presión reducida. El producto bruto se sometió a un tratamiento adecuado de purificación.
El reactivo así obtenido fue el éster metoxietílico de (S)-N-(4-fluoro-fenoxitiocarbonil)-fenilalanina. Presentó los datos analíticos siguientes:
RMN (H^{1}): (referencia dioxano a 3,71 ppm; producto disuelto en dioxano-d6)
8,88 (2H, d) 2H del 4-fluorofenoxicarbonilo
7,20-7,49 (7H, m): 2H del 4-fluorofenoxitiocarbonilo y 5H del fenilo
6,99 (1H, d): NH del carbamato
5,36 (1H, m): CH de la fenilalanina
4,42 (2H, m): CH_{2}=C=O
3,69 (2H, m): CH_{2}Ome
3,48 (3H, s): CH_{3}O
3,41 (2H, AB): 2H bencílicos
Ejemplos 55-57
Se efectuó la derivatización y separación de las mezclas de enantiómeros de compuestos orgánicos que comprenden un grupo funcional libre de los ejemplos 55-57 (tabla) en las condiciones de los ejemplos 3-48, utilizando como reactivo el obtenido en el ejemplo 54. La detección se efectuó únicamente a 245 nm. La tabla que se presenta a continuación muestra los resultados de separación obtenidos.
TABLA 6
Ejemplos Mezcla de enantiómeros Tr L,L^{(a)} Tr D,L^{(b)} \alpha^{(c)} Rs^{(d)} Cantidad de reactivo^{(e)}
(equivalentes)
55 Valina 24,79 22,11 1,129 12,89 2
56 Prolina 19,42 21,22 1,099 7,68 2
57 Tirosina 22,14 23,26 1,054 4,4 5
El reactivo permite una separación muy eficaz de los enantiómeros. La detección por espectrometría UV puede efectuarse a una sola longitud de onda y es altamente sensible.

Claims (25)

1. Procedimiento para la separación de enantiómeros que comprenden al menos un grupo funcional libre, en el cual
(a) se hace reaccionar una mezcla que comprende los enantiómeros en medio básico con un reactivo a base de un aminoácido enantiopuro, reactivo en el cual al menos un grupo amino del aminoácido lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato o isotiocianato y en el cual al menos un grupo carboxilo del aminoácido está sustituido y
(b) se somete la mezcla de diastereoisómeros obtenida a una operación de separación.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el cual el grupo carboxilo del aminoácido está sustituido con un sustituyente hidrófilo y/o un sustituyente que comprende al menos un cromóforo.
3. Procedimiento según la reivindicación 2, en el cual el sustituyente hidrófilo del reactivo es un grupo 2-metoxietilo.
4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el cual el grupo activador del reactivo es un grupo (4-nitrofeniloxi)carbonilo.
5. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el cual el reactivo es a base de un aminoácido enantiopuro seleccionado entre los del grupo constituido por: alanina, valina, norvalina, leucina, norleucina, isoleucina, serina, isoserina, homoserina, treonina, alotreonina, metionina, etionina, ácido glutámico, ácido aspártico, asparagina, cisteína, cistina, fenilalanina, tirosina, triptófano, lisina, arginina, histidina, ornitina, glutamina, citrulina, (1-naftil)alanina, (2-naftil)alanina, homofenilalanina, (4-clorofenil)alanina, (4-fluorofenil)alanina, (3-piridil)alanina, fenilglicina, ácido diaminopimélico (ácido 2,6-diaminoheptano-1,7-dioico), ácido 2-aminobutírico, ácido 2-aminotetralin-2-carboxílico, eritro \beta-metilfenilalanina, treo \beta-metilfenilalanina, (2-metoxifenil)alanina, ácido 1-amino-5-hidroxiindan-2-carboxílico, ácido 2-aminoheptan-1,7-dioico, (2,6-dimetil-4-hidroxifenil)alanina, eritro \beta-metiltirosina y treo \beta-metiltirosina.
6. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el cual se hace reaccionar la mezcla de enantiómeros con el reactivo a temperatura ambiente, durante un período de duración inferior o igual a 15 minutos y se somete la mezcla de diastereoisómeros obtenida a la operación de separación sin purificación previa.
7. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el cual la operación de separación es una cromatografía HPLC.
8. Reactivo a base de un aminoácido enantiopuro en el cual al menos un grupo amino del aminoácido lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato o isotiocianato y en el cual al menos un grupo carboxilo del aminoácido está sustituido, con la condición de que cuando el aminoácido es L-fenilalanina y el grupo activador forma un precursor activo de un isocianato:
(a) el grupo activador se escoge entre: un grupo heteroariloxicarbonilo, 1,3-imidazolil-N-carbonilo, 1,2,4-triazolil-N-carbonilo, 4-nitrofeniloxicarbonilo o un grupo ariloxicarbonilo que lleva un sustituyente halógeno, -SO_{2}R, -SO_{2}OR, NR_{2}^{+} o SR_{2}^{+} en al menos una de las posiciones 2, 4 ó 6 del núcleo aromático, o en posiciones análogas a las posiciones 2 ó 4 en sistemas aromáticos condensados; o
(b) el sustituyente por el cual se sustituye el grupo carboxilo del aminoácido se escoge entre un grupo metilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t-butilo, éteres y grupos arilo, eventualmente funcionalizados; o
(c) el sustituyente por el cual se sustituye el grupo carboxilo del aminoácido se escoge entre los grupos alquilo que comprenden de 1 a 4 átomos de carbonos, lineales o ramificados, funcionalizados de manera que formen un sustituyente hidrófilo.
9. Reactivo según la reivindicación 8, en el cual al menos un grupo amino del aminoácido enantiopuro lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isocianato.
10. Reactivo según la reivindicación 8, en el cual al menos un grupo amino del aminoácido enantiopuro lleva un grupo activador para formar un precursor activo de un grupo isotiocianato.
11. Reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en el cual el aminoácido enantiopuro es un aminoácido de origen natural.
12. Reactivo según la reivindicación 11, en el cual el aminoácido se escoge entre: alanina, valina, norvalina, leucina, norleucina, isoleucina, serina, isoserina, homoserina, treonina, alotreonina, metionina, etionina, ácido glutámico, ácido aspártico, asparagina, cisteína, cistina, fenilalanina, tirosina, triptófano, lisina, arginina, histidina, ornitina, glutamina y citrulina.
13. Reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en el cual el aminoácido enantiopuro es un aminoácido de origen sintético.
14. Reactivo según la reivindicación 13, en el cual el aminoácido se escoge entre: 1-(naftil)alanina, (2-naftil)alanina, homofenilalanina, (4-clorofenil)alanina, (4-fluorofenil)alanina, (3-piridil)alanina, fenilglicina, ácido diaminopimélico (ácido 2,6-diaminoheptan-1,7-dioico), ácido 2-aminobutírico, ácido 2-aminotetralin-2-carboxílico, eritro \beta-metilfenilalanina, treo \beta-metilfenilalanina, (2-metoxifenil)alanina, ácido 1-amino-5-hidroxiindan-2-carboxílico, ácido 2-aminoheptan-1,7-dioico, (2,6-dimetil-4-hidroxifenil)alanina, eritro \beta-metiltirosina, treo \beta-metiltirosina y los enantiómeros no naturales de: alanina, valina, norvalina, leucina, norleucina, isoleucina, serina, isoserina, homoserina, treonina, alotreonina, metionina, etionina, ácido glutámico, ácido aspártico, asparagina, cisteína, cistina, fenilalanina, tirosina, triptófano, lisina, arginina, histidina, ornitina, glutamina y citrulina.
15. Reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14, en el cual el grupo activador es un grupo ariloxicarbonilo que lleva al menos un sustituyente nitro sobre un núcleo aromático.
16. Reactivo según la reivindicación 9, que responde a la fórmula general (I)
12
en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2}, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, R_{2} = Me, Et, alquilo o cicloalquilo C3-C6 y x representa un número entero de 1 a 5.
17. Reactivo según la reivindicación 10, que comprende al menos un cromóforo, que responde a la fórmula general (II)
13
14
en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2}, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, e Y corresponde a una cualquiera de las fórmulas III a V, estando marcado mediante * el carbono por el cual Y está unida al oxígeno del grupo carboxilo del aminoácido enantiopuro.
18. Reactivo según la reivindicación 9, que responde a la fórmula general (VI)
15
en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2} o F, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, R_{2} = Me, Et, alquilo o cicloalquilo C3-C6 y x representa un número entero de 1 a 5.
19. Reactivo según la reivindicación 10, que comprende al menos un cromóforo, que responde a la fórmula general (VII)
16
17
en la cual Z_{1} y/o Z_{2} = NO_{2}, R_{1} = fenilo, \alpha o \beta-indolilo, 1-naftilo o 2-naftilo, e Y corresponde a una cualquiera de las fórmulas (III a V), estando marcado mediante * el carbono por el cual Y está unida al oxígeno del grupo carboxilo del aminoácido enantiopuro.
20. Reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 15, en el cual el aminoácido enantiopuro es fenilalanina.
21. Reactivo según la reivindicación 20, que responde a la fórmula
18
22. Disolución del reactivo según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 21 en un disolvente orgánico polar.
23. Utilización de la disolución según la reivindicación 22, en un aparato automático de derivatización y de separación de enantiómeros de compuestos orgánicos que comprenden al menos un grupo funcional libre.
24. Utilización del procedimiento, del reactivo o de la disolución según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, para la separación de enantiómeros de un aminoácido, de una amina primaria o secundaria o de un péptido.
25. Procedimiento para la obtención de un compuesto enantiopuro que comprende al menos un grupo funcional libre en el cual
(a) se somete una mezcla que comprende los enantiómeros del compuesto que comprende al menos un grupo funcional libre al procedimiento de separación según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7;
(b) se efectúa una operación de desdoblamiento o resolución de un diastereoisómero puro obtenido para separación de la mezcla de diastereoisómeros;
(c) se recupera el compuesto enantiopuro.
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