ES2215032T3

ES2215032T3 - Preparacion de arn 2'-sustituido.

Info

Publication number: ES2215032T3
Application number: ES00909534T
Authority: ES
Inventors: Colin Bernard King's College London REESE; Quanlai Song
Original assignee: Avecia Ltd
Current assignee: Avecia Ltd
Priority date: 1999-03-19
Filing date: 2000-03-15
Publication date: 2004-10-01
Anticipated expiration: 2020-03-15
Also published as: WO2000056747A1; AU3181600A; KR20020013511A; US6884881B1; DE60007848D1; GB9906328D0; EP1165584A1; ATE258187T1; DK1165584T3; DE60007848T2; JP2002540117A; CA2362714A1; EP1165584B1

Abstract

Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (1): en la que: X y X1 son cada uno independientemente H o un grupo protector; B es una base; y R es un grupo alquilo, alcoxialquilo, alquenilo, o alquinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido; que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (2): en la que: L es un grupo saliente; y B, X y X1 son como se definen anteriormente; con un compuesto de fórmula Al(OR)3, en la que R es como se define anteriormente, en condiciones sustancialmente anhidras.

Description

Preparación de ARN 2'-sustituido.

La presente invención se refiere a un procedimiento para preparar nucleósidos 2'-O-sustituidos, y más particularmente un procedimiento para la preparación de uridina y citidina 2'-O-sustituidos.

La posibilidad de que los oligonucleótidos sintéticos puedan ser inhibidores eficaces de la expresión génica y de que se puedan usar como agentes quimioterapéuticos ha estimulado en años recientes gran parte del trabajo de investigación. A fin de evitar su degradación por las nucleasas celulares, es esencial modificar tales oligonucleótidos. Las modificaciones se pueden realizar en las uniones entre nucleótidos, en los restos de las bases y en los restos de azúcares. Se ha descrito un gran número de análogos oligonucleotídicos en los que se han modificado las uniones internucleotídicas, especialmente como fosforotioatos con átomos de azufre que no forman puentes. Varios de estos análogos de tipo fosforotioato son candidatos farmacéuticos prometedores que ahora están bajo ensayos clínicos. Sin embargo, los fosforotioatos tienen algunas desventajas. De este modo, no desarrollan propiedades óptimas de unión a ARN, y también tienen tendencia a unirse a proteínas de manera no específica. Las modificaciones posibles de las bases están claramente limitadas por cuanto no deben conducir a una disminución significativa en las propiedades de hibridación. De forma reciente, se ha dirigido un considerable interés con respecto a la modificación de los restos de los azúcares. Un tipo particular de modificación implica la introducción de grupos 2'-\alpha-alcoxi (como en 2'-O-alquil-oligorribonucleótidos). Aunque, en general, los grupos alcoxi pequeños (tales como metoxi) promueven mejores propiedades de hibridación con ácidos ribonucleicos (ARN) complementarios, la resistencia a las nucleasas tiende a aumentar con el aumento en el tamaño del grupo alcoxi. El grupo 2-metoxietoxi ha aparecido como un grupo alcoxi que confiere tanto buenas propiedades de hibridación como una elevada resistencia a las nucleasas. Por lo tanto, parece probable que los 2'-O-(2-metoxietil)-ribonucleósidos se incorporarán en una segunda generación de agentes quimioterapéuticos oligonucleotídicos potenciales. Por esta razón, el desarrollo de métodos convenientes para la preparación de 2'-O-(2-metoxietil)-ribonucleósidos se ha convertido en un asunto de gran
importancia.

La preparación de 2'-O-(2-metoxietil)-ribonucleósidos, partiendo de D-ribosa, ha sido descrita previamente. Estas preparaciones implican el uso de grupos protectores, y requieren un número de etapas relativamente grande. Por ejemplo, la 2'-O-(2-metoxietil)-5-metiluridina ha sido preparada por Martin, P. Helv. Chim. Acta 1995, 78, 486-504, a partir de D-ribosa en 10 etapas y con un rendimiento global del 33%. Un documento posterior de McGee y Zhai en Abstracts of American Chemical Society National Meeting, Division of Organic Chemistry, marzo de 1996, publicación 253, reveló un procedimiento mucho más conveniente para la preparación de derivados 2'-O-alquílicos de los ribonucleósidos pirimidínicos principales. De este modo, cuando se calentó 5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-2,2'-anhidro-1-\beta-D-arabinofurano-siluracilo con metóxido de magnesio en N,N-dimetilformamida (DMF) a 100ºC, se obtenía 5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-2'-O-metiluridina con un rendimiento de 94%. Se obtuvieron rendimientos en cierto modo menores de los derivados correspondientes 5'-O-etil-, 5'-O-(n-propil)- y 5'-O-alil-uridina en las reacciones entre el mismo sustrato y los alcóxidos de magnesio apropiados. También se dio a conocer que los alcóxidos de magnesio se podrían sustituir por alcóxidos de calcio. McGee et al., Nucleosides and Nucleotides 1996, 15 (11 & 12), 1797 - 1803, describe la preparación de nucleósidos de 2'-O-alquil-pirimidina usando alcóxidos de metales
divalentes.

Ross et al. dio a conocer en Nucleosides and Nucleotides, 1997, 16, 1641-3 que, cuando se calienta 2,2'-anhidro-1-\beta-D-arabinofuranosiluracilo sin proteger con un exceso de dos veces de borato de trimetilo y una cantidad estequiométrica de ortoformiato de trimetilo en metanol a 150ºC, a presión, durante 42 h, se obtenía 2'-O-metiluridina con un rendimiento aislado del 86%. De forma similar, se preparó 2'-O-metil-5-metiluridina a partir de 2,2'-anhidro-5-metil-(1-\beta-D-arabinofuranosiluracilo) mediante el procedimiento del éster de borato y, aunque no se proporcionaron detalles experimentales, también se dio a conocer la preparación de 2'-O-metilcitidina. Se estableció que el rendimiento de 2'-O-alquil-uridina disminuye al aumentar el tamaño del alcohol. El documento WO 96/27606 describe la síntesis de nucleósidos pirimidínicos 2'-O-sustituidos en presencia de ácidos de Lewis, especialmente ésteres de borato.

Sigue siendo deseable identificar vías adicionales o alternativas para la preparación de nucleósidos 2'-O-sustituidos.

Según la presente invención, se proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (1):

1

en la que:

X y X^{1} son cada uno independientemente H o un grupo protector;

B es una base; y

R es un grupo alquilo, alcoxialquilo, alquenilo, o alquinilo, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido;

que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (2):

2

en la que:

L es un grupo saliente; y

B, X y X^{1} son como se definen anteriormente;

con un compuesto de fórmula A1(OR)_{3} en la que R es como se define anteriormente, en condiciones sustancialmente anhidras.

Cuando R es alquenilo, el grupo alquenilo a menudo es un grupo alquenilo C_{2-4}, especialmente un grupo alilo o crotilo. Cuando R representa alquilo, el grupo alquilo es preferiblemente un grupo alquilo C_{1-4}, y lo más preferible un grupo metilo o etilo. Cuando R representa alcoxialquilo, el grupo alcoxialquilo a menudo es un grupo alquil C_{1-4} oxialquilo C_{1-4}, y preferiblemente un grupo metoxietilo. Cuando R es alquinilo, el grupo alquinilo es a menudo un grupo alquinilo C_{2-4}, especialmente un grupo propargilo. Los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo y alcoxialquilo pueden estar ellos mismos sustituidos con uno o más sustituyentes, particularmente halógeno, especialmente F, Cl o Br, y sustituyentes amino.

Ejemplos de grupos protectores que se pueden representar por X y X^{1} incluyen grupos protectores lábiles ácidos, particularmente grupos tritilo y tritilo sustituido tales como grupos dimetoxitritilo y 9-fenilxanten-9-ilo; grupos protectores acetálicos lábiles a ácidos, particularmente 1-(2-fluorofenil)-4-metoxipiperidin-4-ilo (Fpmp); y grupos protectores lábiles a bases, tales como grupos acilo, que comprenden habitualmente hasta 16 átomos de carbono, tales como grupos etanoilo o grupos alcanoilo graso, incluyendo particularmente grupos alcanoilo C_{6-16} lineal o ramificado, tales como grupos lauroilo; benzoilo y grupos benzoilo sustituidos, tales como grupos benzoilo sustituidos con alquilo, habitualmente alquilo C_{1-4}, y halo, habitualmente cloro o fluoro.

Otros grupos protectores adecuados incluyen los derivados de gamma-cetoácidos, tales como grupos levulinoilo y grupos levulinoilo sustituidos. Los grupos levulinoilo sustituidos incluyen 5-halo-levulinoilo, tal como grupos 5,5,5-trifluorolevulinoilo y benzoilpropionilo; y sililéteres y éteres de siloxano, tales como alquil, habitualmente alquil C_{1-4}, y aril, habitualmente fenil, sililéteres, particularmente grupos trialquilsililo, a menudo grupos tri(alquil C_{1-4})sililo, tales como grupos terc-butildimetilsililo y terc-butildifenilsililo.

Las bases que pueden estar representadas por B incluyen nucleobases, particularmente purinas, especialmente adenina (A) y guanina (G); y pirimidinas, especialmente timina (T), citosina (C), y uracilo (U); y derivados sustituidos de las mismas. Ejemplos de sustituyentes que pueden sustituir a las bases, además de los grupos protectores, incluyen sustituyentes alquilo, especialmente alquilo C_{1-4}, particularmente metilo; halógeno, particularmente Cl o Br; amino; alquenilo, especialmente alquenilo C_{1-4} y particularmente alilo; alcoxialquilo, especialmente alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-4}, particularmente metoxialquilo; y alquinilo, particularmente propargilo. Los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo y alcoxialquilo pueden ellos mismos estar sustituidos con uno o más sustituyentes, particularmente halógeno, especialmente F, Cl o Br, y sustituyentes de tipo amino.

Además de la presencia de grupos protectores X y X^{1}, las bases empleadas en la presente invención también se pueden proteger cuando sea necesario mediante grupos protectores adecuados. Los grupos protectores empleados son los conocidos en la técnica para proteger tales bases. Por ejemplo, A y/o C se pueden proteger mediante benzoilo, incluyendo benzoilo sustituido, por ejemplo alquil- o alcoxi-, a menudo alquil C_{1-4} o alcoxi C_{1-4}, benzoilo; pivaloilo; y amidina, particularmente dialquilaminometileno, preferiblemente di(alquil C_{1-4})aminometileno tal como dimetil- o dibutilaminometileno. G se puede proteger mediante un grupo fenilo, incluyendo fenilo sustituido, por ejemplo 2,5-diclorofenilo, y también mediante un grupo isobutirilo. T y U generalmente no se protegen, pero en ciertas realizaciones se pueden proteger ventajosamente, por ejemplo en O4 mediante un grupo fenilo, incluyendo fenilo sustituido, por ejemplo 2,4-dimetilfenilo, o en N3 mediante pivaloiloximetilo, benzoilo, benzoilo alquil o alcoxi sustituido, tal como alquil C_{1-4} o alcoxi C_{1-4} benzoilo.

En ciertas realizaciones, X y X^{1} comprenden un grupo protector único que protege tanto a las posiciones 3' como 5'. Ejemplos de tales grupos incluyen disiloxanos, especialmente tetraalquildisiloxanos, tal como tetraisopropildisiloxano.

Los grupos salientes que se pueden representar mediante L incluyen los grupos salientes que se pueden sustituir mediante un nucleófilo de fórmula RO^{-}. Ejemplos de grupos salientes preferidos incluyen grupos de fórmula -OSO_{2}CH_{3}, -OSO_{2}CF_{3}, Cl, Br, I, O-mesilo, O-brosilo y O-tosilo.

En ciertas realizaciones preferidas, el grupo saliente comprende la base, B, químicamente enlazada a la posición 2', habitualmente vía un átomo de oxígeno o de azufre o un grupo de fórmula -NR^{x}-, en la que R^{x} es H o un grupo alquilo C_{1-6} o arilo, tal como un fenilo. Lo más preferible, la base es uracilo enlazado a la posición 2' vía un átomo de oxígeno.

En consecuencia, un segundo aspecto de la presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (3):

3

en la que:

X y X^{1} son como se definen anteriormente;

R^{1} y R^{2} son cada uno independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, o halógeno; y

que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (4)

4

en la que

X, X^{1}, R^{1} y R^{2} son como se definen anteriormente;

con un compuesto de fórmula Al(OR)_{3}, en la que R es como se define anteriormente, en condiciones sustancialmente anhidras.

Cuando cualquiera de R^{1} y R^{2} es alquenilo, el grupo alquenilo es a menudo un grupo alquenilo C_{2-4}, especialmente un grupo alilo o crotilo. Cuando cualquiera de R^{1} y R^{2} representan alquilo, el grupo alquilo es preferiblemente un alquilo C_{1-4}, y lo más preferible un grupo metilo o etilo. Cuando cualquiera de R^{1} y R^{2} representan alcoxialquilo, el grupo alcoxialquilo es a menudo un grupo alquil C_{1-4}-oxialquilo C_{1-4}, y preferiblemente un grupo metoxietilo. Cuando cualquiera de R^{1} y R^{2} es alquinilo, el grupo alquinilo es a menudo un grupo alquinilo C_{2-4}, especialmente un grupo propargilo. Los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo representados por R^{1} o R^{2} pueden estar sustituidos con uno o más sustituyentes, particularmente halógeno, especialmente F, Cl o Br, y con sustituyentes de tipo amino. Cuando cualquiera de R^{1} y R^{2} es halógeno, el halógeno es preferiblemente Cl, Br o I. Lo más preferible, tanto R^{1} como R^{2} representan H, o R^{1} representa alquilo C_{1-4} y R^{2} representa H.

El procedimiento según la presente invención tiene lugar en presencia de un disolvente adecuado sustancialmente anhidro. Ejemplos de disolventes adecuados incluyen halocarburos tales como cloroformo, 1,2-dicloroetano y clorobenceno; ésteres, particularmente ésteres alquílicos tales como acetato de etilo, y propionato de metilo o de etilo; amidas, tales como N-metilpirrolidinona, dimetilformamida y particularmente dimetilacetamida; nitrilos de alquilo inferior, por ejemplo C_{2-4}, tal como acetonitrilo; éteres tales como glima y diglima, y ésteres cíclicos tales como tetrahidrofurano y dioxano; aminas terciarias, tales como N-metilpirrolidina y aminas aromáticas heterocíclicas tales como piridina; y alcoholes, más habitualmente el alcohol correspondiente al grupo R, por ejemplo metanol, etanol, metoxietanol, alcohol alílico o alcohol propargílico.

El procedimiento de la presente invención se lleva a cabo a menudo a una temperatura desde la temperatura ambiente, tal como aproximadamente 25ºC, hasta la temperatura de reflujo del disolvente empleado. Si se desea se pueden emplear temperaturas por encima de la temperatura de ebullición normal del disolvente empleado, llevando a cabo el procedimiento en condiciones de presión por encima de la atmosférica, por ejemplo en una vasija de reacción cerrada herméticamente. Habitualmente, la temperatura está en el intervalo de 50 a 150ºC.

El procedimiento tiene lugar habitualmente durante un período que oscila desde varias horas, por ejemplo de 4 a 12 horas, hasta varios días, por ejemplo de 1 a 2 días, dependiendo de los reactivos y de las condiciones de reacción empleadas.

Cuando el compuesto de fórmula (1) comprende la base uracilo, el resto uracilo se puede convertir a un resto citosina. De forma similar, el resto uracilo comprendido en el compuesto de fórmula (3) también se puede convertir a un resto citosina. El experto reconocerá que se puede emplear un gran número de técnicas diferentes. Ejemplos de tales técnicas incluyen:

a) la ruta nitrofenílica (véase Miah et al., Nucleosides and Nucletides, 1997, 16, p. 53-65) en la que, por ejemplo, el compuesto que contiene uracilo se hace reaccionar con clorotrimetilsilano en acetonitrilo/1-metilpirrolidina, y después con anhídrido trifluoroacético, seguido de 4-nitrofenol. El resto 4-nitrofenol se sustituye entonces con amoníaco en dioxano acuoso para producir el compuesto que contiene citosina; y

b) el procedimiento de triazolación (véase Divakar et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1,1982, 1171-6) en el que, por ejemplo, el compuesto que contiene uracilo se hace reaccionar con anhídrido acético en piridina, y posteriormente, después del tratamiento, con cloruro de fosforilo, 1,2,4-triazol y trietilamina en acetonitrilo para dar la 4-triazolopirimidina. El resto triazólico se sustituye entonces con amoníaco en dioxano acuoso, y los grupos acetílicos se eliminan para producir el compuesto que contiene citosina.

Los grupos protectores se pueden eliminar usando métodos conocidos en la técnica para el grupo protector y la función particulares. Por ejemplo, los grupos protectores acilo, tales como grupos etanoilo y benzoilo, se pueden eliminar por tratamiento con una disolución de amoníaco en un alcohol tal como etanol.

Los grupos benzoilo, pivaloilo y amidina se pueden eliminar por tratamiento con amoníaco acuoso concentrado.

Los grupos tritilo presentes se pueden eliminar por tratamiento con ácido, por ejemplo una disolución de ácido dicloroacético en diclorometano. Con respecto a la estrategia global de desbloqueo, una consideración importante es que la eliminación de los grupos protectores tritilo ("destritilación"), a menudo DMTr, debe proceder sin despurinación concomitante cuando la base B representa una purina, especialmente adenina. Tal despurinación se puede suprimir efectuando la "destritilación" con una disolución diluida de cloruro de hidrógeno a baja temperatura, particularmente disolución de cloruro de hidrógeno de aproximadamente 0,45 M en dioxano-diclorometano (1:8 v/v) a -50ºC. En estas condiciones de reacción, la "destritilación" se puede completar rápidamente, y en ciertos casos después de 5 minutos o menos.

Los grupos protectores sililo se pueden eliminar por tratamiento con fluoruro, por ejemplo con una disolución de una sal de fluoruro de tetraalquilamonio tal como fluoruro de tetrabutilamonio.

Los grupos protectores Fpmp se pueden eliminar mediante hidrólisis ácida en condiciones suaves.

Los compuestos producidos mediante la presente invención se pueden incorporar en la estructura de un oligonucleótido deseado acoplándolos con otros nucleósidos u oligonucleótidos (que ellos mismos han podido ser preparados usando la presente invención), y tal procedimiento forma un aspecto adicional de la presente invención. Los procedimientos de acoplamiento empleados son los conocidos en la técnica para la preparación de oligonucleótidos.

La presente invención se ilustra adicionalmente, pero no se limita, mediante los siguientes Ejemplos.

Detalles experimentales generales

Los espectros de ^{1}H y ^{13}C NMR se midieron a 360,1 y 90,6 MHz respectivamente, con un espectrómetro Bruker AM 360; se usó tetrametilsilano como un patrón interno. La TLC se llevó a cabo con placas prerrevestidas F_{254} de gel de sílice 60 de Merck (Art 5715), que se desarrollaron en un sistema disolvente A [CHCl_{3}-MeOH (85:15 v/v)]. La cromatografía en columna corta se llevó a cabo sobre gel de sílice (Merck Art 7729). El acetonitrilo y la 1-metilpirrolidina se secaron por calefacción, a reflujo, con hidruro de calcio, y se destilaron entonces. La N,N-dimetilacetamida (DMA) se secó por destilación sobre hidruro de calcio a presión reducida. El 2-metoxietanol se secó calentando con papel de aluminio (1 g/250 ml), a reflujo, y después se destiló. El éter dietílico se secó sobre alambre de sodio.

Preparación de 2,2'-anhidro-1-\beta-D-arabinofuranosiluracilo

Se calentaron juntos, con agitación, a 100ºC, uridina (12,21 g, 50 mmoles), carbonato de difenilo (11,79 g, 55 mmoles), hidrogenocarbonato de sodio (0,21 g, 2,5 mmoles) y DMA seca (10 ml). Después de 5 h, los productos se enfriaron a temperatura ambiente, y se añadió éter dietílico (100 ml) con agitación. Después de 2 horas, el precipitado incoloro (11,70 g) se recogió por filtración, y se lavó con éter (2 x 50 ml). El constituyente nucleosídico único del material precipitado se identificó como 2,2'-anhidro-1-\beta-D-arabinofuranosiluracilo (rendimiento cuantitativo calculado,11,31 g) por comparación con material auténtico.

Preparación de 2'-O-(2-metoxietil)uridina

Se calentó a reflujo papel de aluminio (3,64 g, 0,135 moles) y 2-metoxietanol seco (135 ml), durante aproximadamente 1 h hasta que se consumió todo el aluminio. Se añadió 2,2'-anhidro-1-\beta-D-arabinofuranosiluracilo (10,18 g, aproximadamente 43,5 mmoles) bruto (véase lo anterior), y los agentes reaccionantes se calentaron, a reflujo, durante 48 horas. A los productos enfriados se añadió etanol absoluto (200 ml), seguido de agua (7,3 ml, 0,405 moles) y Celite. La mezcla resultante se calentó, a reflujo, durante 10 minutos, y después se filtró. El residuo se lavó con etanol (3 x 100 ml). El filtrado combinado y los lavados se evaporaron a presión reducida para dar un sólido amarillo pálido. El material se purificó mediante cromatografía en columna corta sobre gel de sílice (70 g): las fracciones apropiadas, que se eluyeron con diclorometano-metanol (90:10 v/v), se evaporaron a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido incoloro (12,05 g, aproximadamente 91%).

Preparación de 2'-O-(2-metoxietil)citidina

Se agitaron juntos a temperatura ambiente 2'-O-(2-metoxietil)uridina (6,05 g, 20,0 mmoles), 1-metil-pirrolidina (20 ml, 0,192 moles), clorotrimetilsilano (7,6 ml, 59,9 mmoles) y acetonitrilo seco (100 ml). Después de 1 hora, los agentes reaccionantes se enfriaron hasta 0ºC (baño de hielo y agua), y se añadió gota a gota anhídrido trifluoroacético (7,1 ml, 50,3 mmoles) durante 5 minutos. Después de un período adicional de 30 minutos a 0ºC, se añadió 4-nitrofenol (8,35 g, 60 mmoles) a los agentes reaccionantes en agitación, que se mantuvieron a 0ºC. Después de 3 horas, los productos se vertieron en hidrogenocarbonato de sodio acuoso saturado (200 ml), y la mezcla resultante se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), y se evaporaron a presión reducida. Se añadió amoníaco acuoso concentrado (d 0,88, 20 ml) a una disolución agitada del residuo en dioxano (100 ml), contenida en un matraz cerrado herméticamente que entonces se calentó a 55ºC durante 24 horas. La disolución amarilla resultante se concentró a presión reducida, y el residuo se evaporó con etanol absoluto (3 x 50 ml). Los productos se fraccionaron mediante cromatografía en columna corta sobre gel de sílice: las fracciones apropiadas, que se eluyeron con diclorometano-metanol-trietilamina (93:7:0,5 hasta 90:10:0,5 v/v), se evaporaron a presión reducida para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (5,07 g, 84%).

Claims

1. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (1):

5

en la que:

X y X^{1} son cada uno independientemente H o un grupo protector;

B es una base; y

que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (2):

6

en la que:

L es un grupo saliente; y

B, X y X^{1} son como se definen anteriormente;

2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que el grupo saliente se selecciona del grupo que consta de -OSO_{2}CH_{3}, -OSO_{2}CF_{3}, Cl, Br, I, O-mesilo, O-brosilo, O-tosilo, y la base, B, está químicamente unida a la posición 2', vía un átomo de oxígeno o de azufre o un resto de fórmula -NR^{x}-, en la que R^{x} es H o un grupo alquilo C_{1-6} o un grupo arilo.

3. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (3):

7

en la que:

X y X^{1} son como cada uno independientemente H o un grupo protector;

que comprende hacer reaccionar un compuesto de fórmula (4)

8

en la que

X, X^{1}, R^{1} y R^{2} son como se definen anteriormente;

4. Un procedimiento según la reivindicación 3, en el que R^{1} y R^{2} son ambos H, o R^{1} es alquilo C_{1-4}, y R^{2} es H.

5. Un procedimiento según cualquier reivindicación precedente, en el que R es un grupo alquenilo C_{2-4}, un grupo alquilo C_{1-4}, un grupo alquil C_{1-4}-oxialquilo C_{1-4} o un grupo alquinilo C_{2-4}.

6. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que R es un grupo metoxietilo.

7. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (1) en la que B representa citosina, o un derivado sustituido del mismo, que comprende:

a) preparar un compuesto de fórmula (1), en la que B representa uracilo, o un derivado sustituido del mismo, mediante un procedimiento según la reivindicación 1; y

b) convertir el resto uracilo al resto citosina equivalente; o

c) preparar un compuesto de fórmula (3) mediante un procedimiento según la reivindicación 2; y

d) convertir el resto uracilo de aquél a un resto citosina.

8. Un procedimiento para la preparación de un producto oligonucleotídico que comprende:

a) preparar un compuesto de fórmula (1):

9

en la que:

X y X^{1} son cada uno independientemente H o un grupo protector;

B es una base; y

o un compuesto de fórmula (3):

10

en la que:

X y X^{1} son cada uno independientemente H o un grupo protector;

mediante un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7; y

b) acoplar el compuesto de fórmula (1) o de fórmula (3) a un nucleósido o a un oligonucleótido.