ES2211454T3 - Pirrolilamidas como inhibidores de la colageno fosforilasa. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula I: un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que Q es fenilo; cada uno de Z y X es independientemente (C, CH o CH2), N, O o S; X1 es NRa, -CH2-, O o S; cada - - - - es, independientemente, un enlace o o está ausente, con la condición de que ambos - - - - no sean simultáneamente enlaces; R1 es hidrógeno o halógeno; cada uno de Ra y Rb es independientemente hidrógeno o -alquilo C C1-C8; *FORMULA01* R2 es hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C8, -CN, -C=--C-SiMe3, S alquilo C1-C8 o alquinilo C2-C8; R3 es hidrógeno, halógeno, -alquilo C1-C8, -CN, -C=-C-Si(CH3)3, -O(alquilo C1-C8), -S(alquilo C1-C8), -CF3, -NH2, -NH(alquilo C1-C8), -N(alquilo C1-C8)2, -NO2, -CO2H, -CO2(alquilo C1-C8), -(alquenilo C2-C8) o -(alquinilo C2-C8); R4 es -C(=O)A; A es -NRdRd, o *FORMULA02* cada Rd es independientemente hidrógeno, alquilo C1-C8, alcoxi C1-C8, un grupo arilo seleccionado entre fenilo o naftilo; o un grupo heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidinilo, imidazolilo, tienilo, furilo, pirazinilo, pirrolilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, triazolilo, piridazinilo, indazolilo, pirinilo, quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, isotiazolilo, benzo[b] tienilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolil o isoxazolilo, en los que cada grupo arilo o heteroarilo puede opcionalmente 65 sustituirse con halo, alquilo C1-C8, alcoxi C1-C8, -CF3, -NH2, -NH(alquilo C1-C8), -N(alquilo C1-C8)2, -NO2, -CN, -CO2H, -CO2(alquilo C1-C8); cada Rc es independientemente hidrógeno, -C(=O)ORa, -ORa, -SRa o -NRaRa; y cada n es independientemente de 1 a 3.

Description

Pirrolilamidas como inhibidores de la colágeno fosforilasa.

Esta invención se refiere a pirrolilamidas bicíclicas y a composiciones farmacéuticas que comprenden pirrolilamidas bicíclicas. Esta invención se refiere también al tratamiento de la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis e isquemia de los tejidos, en particular isquemia de miocardio, usando las pirrolilamidas bicíclicas.

Antecedentes de la invención

A pesar del temprano descubrimiento de la insulina y su posterior uso extendido en el tratamiento de la diabetes, y el posterior descubrimiento y uso de las sulfonilureas, las biguanidas y tiazolidenodionas, tales como troglitazona, rosglitazona o pioglitazona, como agentes orales hipoglucemiantes, el tratamiento de la diabetes continúa siendo poco satisfactorio.

El uso de la insulina requiere varias dosis diarias, normalmente por autoinyección. La determinación de la dosis correcta de insulina requiere frecuentes estimaciones del azúcar en orina o en sangre. La administración de una dosis excesiva de insulina causa hipoglucemia, con efectos que varían desde anomalías leves en la glucosa en sangre al coma, o incluso a la muerte. El tratamiento de la diabetes mellitus no insulinodependiente (diabetes Tipo II, NIDDM) consiste normalmente en una combinación de dieta, ejercicio, agentes hipoglucemiantes orales, por ejemplo, tiazolidenodionas y, en los casos más severos, insulina. Sin embargo, los agentes hipoglucemiantes disponibles clínicamente pueden tener efectos secundarios que limitan su uso, o un agente puede no ser eficaz con un paciente particular. En el caso de diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I), la insulina es normalmente el curso principal de terapia. Son necesarios agentes hipoglucemiantes que tengan menores efectos secundarios o que tengan éxito cuando otros no lo tienen.

La aterosclerosis, una enfermedad de las arterias, es conocida por ser la causa principal de muerte en los Estados Unidos y en Europa Occidental. La secuencia patológica que conduce a la aterosclerosis y a la enfermedad cardíaca oclusiva es bien conocida. La primera etapa en esta secuencia es la formación de "depósitos grasos" en las arterias carótidas, coronarias y cerebrales y en la aorta. Estas lesiones son de color amarillo debido a la presencia de depósitos lipídicos encontrados fundamentalmente dentro de las células del músculo liso y en los macrófagos de la capa íntima de las arterias y la aorta. Además, se cree que la mayor parte del colesterol encontrado en los depósitos grasos, da lugar a su vez al desarrollo de la "placa fibrosa" que está compuesta de células del músculo liso de la íntima acumuladas cargadas de lípidos y rodeadas por lípido extracelular, colágeno, elástica y proteoglucanos. Las células más la matriz forman un tapón fibroso que cubre un depósito más profundo de restos celulares y más lípidos extracelulares. Los lípidos son fundamentalmente colesterol libre y esterificado. La placa fibrosa se forma lentamente, y probablemente con el tiempo se calcifica y sufre necrosis, avanzando hasta la denominada "lesión complicada", que justifica la oclusión arterial y la tendencia hacia la trombosis mural y el espasmo del músculo de las arterias que caracteriza la aterosclerosis avanzada.

La evidencia epidemiológica ha establecido de forma contundente la hiperlipidemia como un factor de riesgo primario causante de la enfermedad cardiovascular (CVD) debida a la aterosclerosis. En los últimos años, los líderes de la profesión médica han puesto un énfasis renovado en disminuir los niveles de colesterol en plasma y en particular, del colesterol asociado a lipoproteínas de baja densidad, como una etapa fundamental en la prevención de la CVD. Se conocen ahora límites superiores "normales" significativamente menores que los conocidos con anterioridad. Como resultado, grandes segmentos de la población occidental se están dando cuenta de que está en situación de riesgo particularmente alto. Tales factores de riesgo independientes incluyen la intolerancia a la glucosa, hipertrofia ventricular izquierda, hipertensión y ser varón. La enfermedad cardiovascular es especialmente prevalente entre los sujetos diabéticos, al menos en parte debido a la existencia de varios factores de riesgo independientes en esta población. Es de excepcional importancia médica en la población general y, en particular, en sujetos diabéticos, el tratamiento de la hiperlipidemia.

La hipertensión (o elevada tensión arterial) es un trastorno que se presenta en la población humana como un síntoma secundario a otros trastornos distintos tales como la estenosis de la arteria renal, feocromocitoma o trastornos endocrinos. Sin embargo, la hipertensión también es evidente en muchos pacientes en los que se desconoce el agente o el trastorno causante. Aunque dicha hipertensión "esencial" se asocia con frecuencia a trastornos como la obesidad, la diabetes y la hipertrigliceridemia, no se ha determinado la relación entre estos trastornos. Además, muchos pacientes presentan síntomas de elevada tensión arterial en una ausencia total de cualquier otro signo de enfermedad o trastorno.

Es conocido que la hipertensión puede conducir directamente a la insuficiencia cardíaca, a la insuficiencia renal y a la apoplejía (hemorragia cerebral). Estos trastornos pueden causar la muerte en un paciente. La hipertensión también contribuye al desarrollo de la aterosclerosis y la enfermedad coronaria. Estos trastornos debilitan de forma gradual a un paciente y pueden conducir a la muerte.

La causa exacta de la hipertensión esencial se desconoce, aunque se cree que una serie de factores contribuyen al inicio de la enfermedad. Entre tales factores se encuentran el estrés, emociones incontroladas, liberación hormonal no regulada (la renina, angiotensina, sistema de la aldosterona), sales y agua excesivos debido al malfuncionamiento renal, endurecimiento e hipertrofia de la pared de la vasculatura originando vasos sanguíneos obstruidos y a factores genéticos.

El tratamiento de la hipertensión esencial se ha llevado teniendo en cuenta los factores anteriores. Así, se han desarrollado y comercializado como antihipertensores una amplia gama de beta-bloqueantes, vasoconstrictores, inhibidores de la enzima conversora de la angiotensina y agentes similares. El tratamiento de la hipertensión usando estos compuestos ha demostrado ser beneficioso en la prevención de las muertes a corto plazo como la insuficiencia cardíaca, la insuficiencia renal y la hemorragia cerebral. Sin embargo, el desarrollo de la aterosclerosis o enfermedad cardíaca debida a la hipertensión durante un largo período de tiempo sigue siendo un problema. Esto implica que aunque se reduce la elevada presión arterial, la causa subyacente de la hipertensión esencial no responde a este tratamiento.

La hipertensión se ha asociado a niveles elevados de insulina en sangre, un trastorno conocido como hiperinsulinemia. La insulina, una hormona peptídica cuyas funciones principales son promover la utilización de la glucosa, la síntesis de proteínas y la formación y almacenamiento de lípidos neutros, también actúa promoviendo el crecimiento celular vascular y aumenta la retención de sodio renal, entre otras cosas. Estas últimas funciones se pueden llevar a cabo sin que se vean afectados los niveles de glucosa y son causas conocidas de hipertensión. El crecimiento de la vasculatura periférica, por ejemplo, puede causar la constricción de los capilares periféricos mientras que la retención de sodio aumenta el volumen de sangre. Así, la disminución de los niveles de insulina en hiperinsulinémicos puede prevenir un crecimiento vascular anómalo y la retención de sodio renal provocada por elevados niveles de insulina y por tanto, aliviar la hipertensión.

La hipertrofia cardíaca es un factor de riesgo significativo en el desarrollo de la muerte súbita, infarto de miocardio e insuficiencia cardíaca congestiva. Estos sucesos cardíacos se deben, al menos en parte, a una mayor susceptibilidad a la lesión miocárdica después de una isquemia y reperfusión que pueden producirse en pacientes ambulatorios, además de en situaciones perioperatorias. Existe una necesidad médica no cubierta para prevenir o minimizar los sucesos perioperatorios miocárdicos adversos, en particular, el infarto de miocardio perioperatorio. Tanto la cirugía no cardíaca como la cardíaca llevan asociadas riesgos sustanciales de infarto de miocardio o de muerte. Aproximadamente 7 millones de pacientes que se someten a cirugía no cardíaca se consideran población de riesgo, con incidencias de muerte perioperatoria y complicaciones cardíacas graves de hasta un 20-25% en algunas series. Además, de los 400.000 pacientes que se someten a cirugía de desviación coronaria cada año, se estima que el infarto de miocardio perioperatorio se produce en el 5% y la muerte en un 1 a 2%. Existe actualmente una terapia con fármacos no comercializada en este área que reduce los daños al tejido cardíaco por isquemia miocárdica perioperatoria o que mejora la resistencia a episodios isquémicos. Se cree que dicha terapia salvará vidas y reducirá las hospitalizaciones, mejorando la calidad de vida y reduciendo los costes globales de asistencia de los pacientes de alto riesgo. El mecanismo(s) responsable de la lesión miocárdica observada después de la isquemia y reperfusión no se comprende completamente. Se ha descrito (M. F. Allard, et al., Am. J. Physiol., 267: H66-H74 (1994)) que "la reducción del glucógeno previa a la isquemia.... se asocia con una recuperación funcional del ventrículo izquierdo después de la isquemia mejorada en corazones de rata hipertróficos".

Además de la isquemia de miocardio, otros tejidos pueden sufrir isquemia y resultar dañados, generándose graves problemas para el paciente. Ejemplos de tales tejidos incluyen el cardíaco, cerebral, hepático, pulmonar, intestinal, del músculo esqueletal, del bazo, pancreático, nervioso, de la médula espinal, el tejido retinal, la vasculatura o el tejido intestinal.

La producción de glucosa hepática es un importante objetivo para la terapia de la NIDDM (Diabetes Mellitus no InsulinoDependiente). El hígado es el principal regulador de los niveles de glucosa plasmática en el estado postabsorbente (ayuno) y la velocidad de la producción de glucosa hepática en pacientes NIDDM es significativamente elevada con respecto a individuos normales. Igualmente, en el estado postprandial (alimentado), cuando el hígado desempeña una función proporcionalmente menor en el suministro de glucosa plasmática total, la producción de glucosa hepática es anormalmente elevada en pacientes NIDDM.

La glucogenolisis es un objetivo importante para la interrupción de la producción de glucosa hepática. El hígado produce glucosa por glucogenolisis (descomposición del glucógeno polímero en glucosa) y la gluconeogénesis (síntesis de glucosa a partir de precursores de 2 y 3 carbonos). Algunas líneas de evidencia indican que la glucogenolisis puede tener una importante contribución en la producción de glucosa hepática en NIDDM. En primer lugar, se estima que en el hombre en estado postabsorbente normal, hasta un 75% de la producción de glucosa hepática se origina de la glucogenolisis. En segundo lugar, los pacientes que sufren enfermedades relacionadas con el almacenamiento del glucógeno hepático, incluyendo la enfermedad de Hert (déficit de glucógeno fosforilasa), presentan episodios de hipoglucemia. Estas observaciones sugieren que la glucogenolisis puede ser un proceso significativo para la producción de glucosa hepática.

La glucogenolisis es catalizada en el hígado, el músculo y en el cerebro por isoformas específicas del tejido de la enzima glucógeno fosforilasa. Esta enzima rompe la macromolécula glucógeno liberando glucosa-1-fosfato y una nueva macromolécula de glucógeno más corta. Se han descrito hasta la fecha varios tipos de inhibidores de la glucógeno fosforilasa: glucosa y análogos de la glucosa [Martín, J. L. et al., Biochemistry, 30:10101 (1991)]; la cafeína y otros análogos de la purina [Kasvinsky, P. J. et al., J. Biol. Chem., 253:3343-3351 y 9102-9106 (1978)]; N-(indol-2-carbonil)-amidas sustituidas [publicación PCT número WO 96/39385]; y N-(indol-2-carbonil)-glicinamidas sustituidas (publicación PCT número WO96/39384]. Estos compuestos y los inhibidores de la glucógeno fosforilasa en general, se han descrito por ser útiles para el tratamiento de la NIDDM reduciendo la producción de la glucosa hepática y reduciendo la glucemia. [Blundell, T. B. et al., Diabetologia, 35, Suppl. 2, 569-576 (1992) y Martín et al., Biochemistry, 30, 10101 (1991)].

La lesión isquémica miocárdica puede producirse en pacientes ambulatorios así como en situaciones perioperatorias y puede conducir al desarrollo de la muerte súbita, el infarto de miocardio o la insuficiencia cardíaca congestiva. Existe una necesidad médica no satisfecha para evitar o minimizar la lesión isquémica en el miocardio, en particular, el infarto de miocardio perioperatorio. Se prevé que dicha terapia salvará vidas y reducirá las hospitalizaciones, mejorando la calidad de vida y reduciendo los costes totales de asistencia y tratamiento de pacientes de alto riesgo.

Aunque existen una diversidad de terapias para la hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperlipidemia, aterosclerosis e isquemia de los tejidos, existe una continua necesidad y una búsqueda continua en este campo de la técnica de terapias alternativas.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula I:

1

sus estereoisómeros o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que

Q es fenilo;

cada uno de Z y X es independientemente (C, CH o CH_{2}), N, O o S;

X^{1} es NR^{a}, -CH_{2}-, O o S;

cada - - - - es, independientemente, un enlace o o está ausente, con la condición de que ambos - - - - no sean simultáneamente enlaces;

R^{1} es hidrógeno o halógeno;

cada uno de R^{a} y R^{b} es independientemente hidrógeno o -alquilo C_{1}-C_{8};

Y es 2 o está presente;

R^{2} es hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, -CN, -C\equivC-SiMe_{3}, S alquilo C_{1}-C_{8} o alquinilo C_{2}-C_{8};

R^{3} es hidrógeno, halógeno, -alquilo C_{1}-C_{8}, -CN, -C\equivC-Si(CH_{3})_{3}, -O(alquilo C_{1}-C_{8}), -S(alquilo C_{1}-C_{8}), -CF_{3}, -NH_{2}, -NH(alquilo C_{1}-C_{8}), -N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}, -NO_{2}, -CO_{2}H, -CO_{2}(alquilo C_{1}-C_{8}), -(alquenilo C_{2}-C_{8}) o -(alquinilo C_{2}-C_{8});

R^{4} es -C(=O)A;

A es -NR^{d}R^{d}, o

3

cada R^{d} es independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, un grupo arilo seleccionado entre fenilo o naftilo; o un grupo heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidinilo, imidazolilo, tienilo, furilo, pirazinilo, pirrolilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, triazolilo, piridazinilo, indazolilo, pirinilo, quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, isotiazolilo, benzo[b] tienilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolil o isoxazolilo, en los que cada grupo arilo o heteroarilo puede opcionalmente

cada R^{c} es independientemente hidrógeno, -C(=O)OR^{a}, -OR^{a}, -SR^{a} o -NR^{a}R^{a}; y cada n es independientemente de 1 a 3.

En una realización preferida de los compuestos de Fórmula I, R^{b} y R^{1} son hidrógeno.

En otra realización preferida de los compuestos de Fórmula I,

R^{b} es hidrógeno;

R^{1} es hidrógeno;

Y es

4

y A es

5

En otra realización preferida de los compuestos de Fórmula I,

R^{b} es hidrógeno;

R^{1} es hidrógeno;

Y o está ausente; y

A es

6

En otra realización preferida de los compuestos de Fórmula I,

R^{b} es hidrógeno;

R^{1} es hidrógeno;

Z es C;

X es O o S;

Y está ausente;

A es

7

R^{2} es hidrógeno; y

R^{3} es hidrógeno, halógeno o metilo.

En otra realización preferida de los compuestos de Fórmula I,

Q es fenilo y A es

8

En otra realización preferida, la invención proporciona compuestos de Fórmula I

9

los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables,

en la que

Q es fenilo;

(Z es S y X es C), (Z es C y X es S) o (Z es C y X es O);

cada - - - - es, independientemente, un enlace o o está ausente, con la condición de que ambos - - - - no sean simultáneamente enlaces;

R^{1} es hidrógeno o halógeno;

cada uno de R^{a} y R^{b} es independientemente hidrógeno o -alquilo C_{1}-C_{8};

Y es 10 o está ausente;

R^{2} y R^{3} son independientemente hidrógeno, halógeno, -alquilo C_{1}-C_{8}, -CN, -C\equivCSi(CH_{3})_{3} o -alquinilo C_{2}-C_{8};

R^{4} es -C(=O)-A;

A es -NR^{d}R^{d},

11

cada R^{d} es independientemente alquilo C_{1}-C_{8};

cada R^{c} es independientemente hidrógeno, -OH o -C(=O)-O(alquilo C_{1}-C_{8});

cada n es independientemente de 1 a 3.

En otra realización preferida de los compuestos de Fórmula I, A es

12

También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula I, los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables.

También se proporcionan usos de un compuesto de fórmula I, los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de las enfermedades siguientes:

(i)

aterosclerosis

(ii)

diabetes, particularmente cuando la diabetes es diabetes mellitus no insulinodependiente (Tipo II) o la diabetes es diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I);

(iii)

la resistencia a la insulina;

(iv)

la neuropatía diabética;

(v)

la nefropatía diabética;

(vi)

la retinopatía diabética;

(vii)

las cataratas;

(viii)

la hipercolesterolemia;

(ix)

la hipertrigliceridemia;

(x)

la hiperlipidemia;

(xi)

la hiperglucemia;

(xii)

la hipertensión;

(xiii)

la isquemia de los tejidos; o

(xiv)

la isquemia de miocardio.

También se proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, el estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un medicamento para inhibir la glucógeno fosforilasa.

La presente invención proporciona los compuestos:

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 6H-tieno[2,3-b]pi-
rrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno
[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno
[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

\newpage

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Dimetilcarbamoil-2-feniletil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

Ester etílico del ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}piperidin-4-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metil-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-trimetilsilaniletinil-6H-tieno[2,3b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-etinil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

Ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}-piperidin-4-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-bromo-4H-tieno
[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-4H-tieno[3,2-b]-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3S,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4R)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico; y

[(1S)-Bencil-2-(4-hidroxipiperidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico, y los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

También se proporcionan estuches para el tratamiento de la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética o las cataratas en un paciente que padece diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética o cataratas, comprendiendo los estuches:

a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos;

b) una segunda composición farmacéutica que comprende un segundo compuesto útil para el tratamiento de la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética o las cataratas; y

c) un recipiente para contener las composiciones primera y segunda.

En una realización preferida de los estuches, el segundo compuesto se selecciona de:

insulina y análogos de la insulina;

GLP-1 (7-37) (insulinotropina) y GLP-1 (7-36)-NH_{2};

sulfonilureas y análogos;

biguanidas;

\alpha_{2}-antagonístas;

imidazolinas;

glitazonas (tiazolidenodionas);

agonístas PPAR-gamma;

inhibidores de la oxidación de ácidos grasos;

inhibidores de la \alpha-glucosidasa;

\beta-agonistas;

inhibidores de la fosfodiesterasa;

agentes que reducen los niveles de lípidos;

agentes antiobesidad;

vanadato, complejos de vanadio y complejos de peroxovanadio;

antagonistas de amilina;

antagonistas del glucagón;

inhibidores de la gluconeogénesis;

análogos y antagonistas de la somatostatina; y

agentes antilipolíticos.

En otra realización preferida de los estuches, el segundo compuesto se selecciona de insulina LysPro, GLP-1 (7-37) (insulinotropina), GLP-1 (7-36)-NH_{2}, clorpropamida, glibenclamida, tolbutamida, tolazamida, acetohexamida, glipizida, glimepirida, repaglinida, meglitinida, metformina, fenformina, buformina, midaglizol, isaglidol, deriglidol, idazoxan, efaroxan, fluparoxan, linoglirida, ciglitazona, pioglitazona, englitazona, troglitazona, darglitazona, rosiglitazona, clomoxir, etomoxir, acarbosa, miglitol, emiglitato, voglibosa, benfluorex, fenfluramina, Naglivan®, acipimox, Symlim^{TM}, nateglinida, camiglibosa, (MDL73945), \beta-D-glucopiranósido, [(2,R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)-2-piperidinil]metilo (MDL25637), exendina 4 sintética un polipéptido conteniendo 39 aminoácidos (AC2993), ácido [4-[(2R)-2-[[(2R)-2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil]amino]propil]fenoxi]acético (BRL 37344), [4-[-2-[[2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil]amino]propil]fenoxi]metilacetato (BRL35135), [4-[(3R)-3-[bis[(2R)-2-hidroxi-2-fenetil]amino]butil]benzamida (Ro 16-8714), N-ciclohexil-2'-O-metiladenosina (WAG 994), 2-[4-[2-[[(2S)-2-hidroxi-3-fenoxipropil]amino]etoxi]fenoxi]-N-(2-metoxietil)-acetamida (ICI-D 7114), sal disódica del ácido 5-[2-[[2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil]amino]propil]-1,3-benzodioxol-2, 2-dicarboxílico (CL 316243) y clorhidrato de (1,S,2R)-9-(2-fluoro-1-metilpropil)-2-metoxi-6-(1-piperazinil)purina (L-686.398).

En otra realización preferida de los estuches, el segundo compuesto se selecciona de insulina, sulfonilureas, biguanidas y tiazolidindionas.

También se proporcionan estuches para el tratamiento de la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética o las cataratas, en un paciente que padece diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética o cataratas, comprendiendo los estuches:

a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables;

b) una segunda composición farmacéutica que comprende un segundo compuesto útil para el tratamiento de la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos; y

c) un recipiente para contener las composiciones primera y segunda.

También se proporcionan los usos de un compuesto de Fórmula I, los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables, combinados con al menos otro compuesto útil para el tratamiento de la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos.

También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula I, los estereoisómeros o las sales farmacéuticamente aceptables y al menos un compuesto útil para tratar la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a compuestos de Fórmula I, a los estereoisómeros de los compuestos de Fórmula I y a las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula I. La invención se refiere también a procedimientos para el tratamiento de la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos, en particular, isquemia de miocardio, y a composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden un compuesto de fórmula I, los estereoisómeros de compuestos de Formula I, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula I, los profármacos de los compuestos de Fórmula I y las sales farmacéuticamente aceptables de los profármacos de los compuestos de Fórmula I.

A continuación se definen ciertos términos que se usan en la esta solicitud.

El término "alquilo" significa un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada. Ejemplos representativos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, pentilo y hexilo. Los grupos alquilo preferidos son alquilo C_{1}-C_{8}.

El término "alcoxi" significa un grupo alquilo unido a un átomo de oxígeno. Ejemplos representativos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, terc-butoxi, propoxi e isobutoxi. Los grupos alcoxi preferidos son alcoxi C_{1}-C_{8}.

El término "halógeno" significa cloro, flúor, bromo o yodo.

El término "alquenilo" significa un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más dobles enlaces carbono-carbono.

El término "alquinilo" significa un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene uno o más triples enlaces carbono-carbono.

El término "cicloalquilo" significa un hidrocarburo cíclico. Ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. Los grupos cicloalquilo preferidos son cicloalquilo C_{3}-C_{8}. También es posible que el grupo cicloalquilo tenga uno o más dobles enlaces, pero no es aromático. Ejemplos de grupos cicloalquilo que tienen dobles enlaces incluyen ciclopentenilo, ciclohexenilo, ciclohexadienilo, ciclobutadienilo y grupos similares.

El término "perfluoroalquilo" significa un grupo alquilo en el que todos los átomos de hidrógeno han sido reemplazados por átomos de flúor.

El término "acilo" significa un grupo derivado de un ácido orgánico (-COOH) mediante la eliminación de un grupo hidroxi (-OH).

El término "arilo" significa un hidrocarburo aromático cíclico. Ejemplos de grupos arilo incluyen fenilo y naftilo.

El término "heteroátomo" incluye oxígeno, nitrógeno, azufre y fósforo.

El término "heteroarilo" significa un hidrocarburo aromático cíclico en el que uno o más átomos de carbono han sido reemplazados por un heteroátomo. Si el grupo heteroarilo contiene más de un heteroátomo, los heteroátomos pueden ser iguales o distintos. Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen piridilo, pirimidinilo, imidazolilo, tienilo, furilo, pirazinilo, pirrolilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, triazolilo, piridazinilo, indazolilo, purinilo, quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, isotiazolilo y benzo[b]tienilo. Los grupos heteroarilo preferidos son los anillos de cinco o seis miembros y contienen de uno a tres heteroátomos.

El término "heterocicloalquilo" significa un grupo cicloalquilo en el que uno o más de los átomos de carbono han sido reemplazados por un heteroátomo. Si el grupo heterocicloalquilo contiene más de un heteroátomo, los heteroátomos pueden ser iguales o distintos. Ejemplos de grupos heterocicloalquilo incluyen tetrahidrofurilo, morfolinilo, piperazinilo, piperadilo y pirrolidinilo. Los grupos heterocicloalquilo preferidos son los anillos de cinco o seis miembros y contienen de uno a tres heteroátomos. También es posible que el grupo heterocicloalquilo tenga uno o más dobles enlaces, pero no aromáticos. Ejemplos de grupos heterocicloalquilo que contienen dobles enlaces incluyen dihidrofurano y similares.

También se apreciará que los grupos con anillo cíclicos, es decir, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo pueden comprender más de un anillo. Por ejemplo, el grupo naftilo es un sistema de anillo bicíclico condensado. También se pretende que la presente invención incluya grupos de anillos que tengan átomos con puente, o grupos de anillos que tengan una orientación espiro.

Los ejemplos representativos de anillos aromáticos de cinco a seis miembros, que opcionalmente tienen uno o dos heteroátomos, son fenilo, furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo y pirazinilo.

Ejemplos representativos de anillos de cinco a ocho miembros parcialmente saturados, totalmente saturados o totalmente insaturados que tienen de uno a tres heteroátomos son ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo y fenilo. Otros anillos ejemplo de cinco miembros son furilo, tienilo, pirrolilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, pirrolidinilo, 1,3-dioxolanilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, 2H-imidazolilo, 2-imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolilo, 2-pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, 1,2-ditiolilo, 1,3-ditiolilo, 3H-1,2-oxatiolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 3H-1,2,3-dioxazolilo, 1,2,4-dioxazolilo, 1,3,2-dioxazolilo, 1,3,4-dioxazolilo, 5H-1,2,5-oxatiazolilo y 1,3-oxatiolilo.

Otros anillos ejemplo de seis miembros son 2H-piranilo, 4H-piranilo, piridinilo, piperidinilo, 1,2-dioxinilo, 1,3-dioxinilo, 1,4-dioxanilo, morfolinilo, 1,4-ditianilo, tiomorfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo, 1,2,4-triazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,3,5-tritianilo, 4H-1,2-oxazinilo, 2H-1,3-oxazinilo, 6H-1,3-oxazinilo, 6H-1,2-oxazinilo, 1,4-oxazinilo, 2H-1,2-oxazinilo, 4H-1,4-oxazinilo, 1,2,5-oxatiazinilo, 1,4-oxazinilo, o-isoxazinilo, p-isoxazinilo, 1,2,5-oxatiazinilo, 1,2,6-oxatiazinilo y 1,4,2-oxadiazinilo.

Otros anillos ejemplo de siete miembros son azepinilo, oxepinilo, tiepinilo y 1,2,4-triazepinilo.

Otros anillos ejemplo de ocho miembros son ciclooctilo, ciclooctenilo y ciclooctadienilo.

Anillos bicíclicos ejemplo que comprenden dos anillos de cinco y/o seis miembros condensados parcialmente saturados, totalmente saturados o totalmente insaturados, tomados independientemente, que opcionalmente tienen de uno a cuatro heteroátomos son indolizinilo, indolilo, isoindolilo, indolinilo, ciclopenta(b)piridinilo, pirano(3,4-b)pirrolilo, benzofurilo, isobenzofurilo, benzo(b)tienilo, benzo(c)tienilo, 1H-indazolilo, indoxazinilo, benzoxazolilo, antranililo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, purinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, cinolinilo, ftalazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, 1,8-naftiridinilo, pteridinilo, indenilo, isoindenilo, naftilo, tetralinilo, decalinilo, 2H-1-benzopiranilo, pirido(3,4-b)-piridinilo, pirido(3,2-b)-piridinilo, pirido(4,3-b)-piridinilo, 2H-1,3-benzoxazinilo, 2H-1,4-benzoxazinilo, 1H-2,3-benzoxazinilo, 4H-3,1-benzoxazinilo, 2H-1,2-benzoxazinilo, y 4H-1,4-benzoxazinilo.

Un grupo de anillo cíclico puede estar unido a otro grupo de varias formas. Si no se especifica la disposición de unión particular, entonces se contemplan todas las disposiciones posibles. Por ejemplo, el término "piridilo" incluye 2-, 3- o 4-piridilo, y el término "tienilo" incluye 2- o 3-tienilo.

El término "sustituido" significa que un átomo de hidrógeno o una molécula orgánica ha sido sustituida por un átomo o por una molécula diferentes. El átomo o molécula que reemplaza al átomo de hidrógeno se denomina un sustituyente. Ejemplos de sustituyentes adecuados incluyen halógenos, -O-(alquilo C_{1}-C_{8}), -(alquilo C_{1}-C_{8}), -CF_{3}, -NH_{2}, -NH(alquilo C_{1}-C_{8}), -N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}, -NO_{2}, -CN, -CO_{2}H, -CO_{2}(alquilo C_{1}-C_{8}) y grupos similares.

El símbolo "-" representa un enlace covalente.

La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto que alivia, atenúa o elimina uno o más síntomas de una enfermedad o trastorno particular o previene o retrasa el inicio de uno o más síntomas de una enfermedad o trastorno particular.

El término "paciente" significa animales, como perros, gatos, vacas, caballos, ovejas y seres humanos. Los pacientes particularmente preferidos son los mamíferos. El término paciente incluye ambos sexos.

El término "farmacéuticamente aceptable" significa que el vehículo, diluyente, excipientes y/o sal deberá ser compatible con el resto de ingredientes de la formulación y no ser perjudicial para el paciente.

Las expresiones "un compuesto de la presente invención, compuestos de la presente invención, un compuesto de Fórmula I, o un compuesto conforme a la Fórmula I" y las expresiones similares, incluyen los estereoisómeros del(de los) compuesto(s), sales farmacéuticamente aceptables del(de los) compuesto(s), profármacos del(de los)

\hbox{compuesto(s)}

y sales farmacéuticamente aceptables de los profármacos.

Los términos "disolvente inerte para la reacción" o "disolvente inerte" se refieren a un disolvente o mezcla de disolventes que no interaccionan con los materiales de partida, reactivos, intermedios o productos de una forma que afecte adversamente al producto deseado.

Los términos "tratar", "trato" o "tratamiento" incluyen el tratamiento preventivo (por ejemplo, profiláctico) y paliativo.

La expresión "inhibidor de la glucógeno fosforilasa" se refiere a cualquier sustancia o agente o cualquier combinación de sustancias y/o agentes que reduzca, retrase o elimine la acción enzimática de la glucógeno fosforilasa. La acción enzimática conocida en la actualidad de la glucógeno fosforilasa es la degradación del glucógeno por catálisis de la reacción reversible de una macromolécula de glucógeno y fosfato inorgánico a glucosa-1-fosfato y una macromolécula de glucógeno que es un resto glucosilo menor que la macromolécula de glucógeno original (en la dirección de avance de la gluconeogénesis).

Un paciente que necesita inhibición de la glucógeno fosforilasa es un paciente que padece una enfermedad o trastorno en el que la glucógeno fosforilasa desempeña una función en la enfermedad o trastorno. Ejemplos de pacientes que necesitan la inhibición de la glucógeno fosforilasa incluyen los pacientes que padecen diabetes (incluyendo la diabetes tipo I, tipo II, la tolerancia reducida a la glucosa, resistencia a la insulina y complicaciones diabéticas como la nefropatía, la retinopatía, la neuropatía y las cataratas), la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis y la isquemia de los tejidos.

Las características de los pacientes con riesgo de padecer aterosclerosis son bien conocidas por los expertos en la técnica e incluyen, pacientes que tienen historial familiar de enfermedad cardiovascular, incluyendo la hipertensión y aterosclerosis, pacientes obesos, pacientes que realizan poco ejercicio, pacientes con hipercolesterolemia, pacientes que tienen niveles elevados de lipoproteínas de baja densidad (LDL), pacientes que tienen niveles reducidos de lipoproteínas de alta densidad (HDL) y similares.

Los pacientes con riesgo de sufrir isquemia de miocardio y otras isquemias en los tejidos también son bien conocidos por los expertos en la técnica e incluyen pacientes que se someten o se han sometido a cirugía, traumatismo o un gran estrés.

Los compuestos de la presente invención se administran a un paciente en una cantidad terapéuticamente eficaz. Los compuestos se pueden administrar solos o como parte de una composición o formulación farmacéuticamente aceptable. Además, los compuestos o composiciones se pueden administrar de una vez, como por ejemplo, por una inyección de gran tamaño, varias veces, tal como mediante una serie de comprimidos o liberarse de forma sustancialmente uniforme a lo largo de un período de tiempo, como por ejemplo, usando liberación transdérmica. Se apreciará que la dosis del compuesto puede variarse con el tiempo.

Además, los compuestos de la presente invención se pueden administrar solos, combinados con otros compuestos de la presente invención o con otros compuestos farmacéuticamente activos. Los otros compuestos farmacéuticamente activos pueden destinarse a tratar la misma enfermedad o trastorno que los compuestos de la presente invención o a una enfermedad o trastorno diferente. Si el paciente va a recibir o está recibiendo varios compuestos farmacéuticamente activos, los compuestos se pueden administrar de forma simultánea o secuencial. Por ejemplo, en el caso de comprimidos, los compuestos activos pueden encontrarse en un comprimido o en comprimidos separados, que se pueden administrar a la vez o de forma secuencial en cualquier orden. Además, se apreciará que las composiciones pueden ser formas diferentes. Por ejemplo, uno o más compuestos se pueden administrar mediante un comprimido, mientras que otro se administra por inyección u oralmente como jarabe. Se contemplan todas las combinaciones, procedimientos de liberación y secuencias de administración.

Puesto que un aspecto de la presente invención contempla el tratamiento de las enfermedades/trastornos con una combinación de agentes farmacéuticamente activos que pueden administrarse por separado, la invención se refiere además a combinar composiciones farmacéuticas separadas en forma de estuche. El estuche comprende dos composiciones farmacéuticas separadas: un compuesto de la presente invención y un segundo compuesto farmacéutico. El estuche comprende un envase para contener las composiciones separadas como un frasco dividido o un envase de lámina metálica dividido. Otros ejemplos de envases incluyen jeringas, cajas, bolsas y similares. De forma típica, el estuche comprende instrucciones para la administración de los componentes separados. La forma de estuche es particularmente ventajosa cuando los componentes separados se administran preferiblemente en formas de dosificación diferentes (por ejemplo, oral y parenteral), se administran en diferentes intervalos de dosificación, o cuando el médico encargado desee el aumento o reducción de los componentes individuales.

Un ejemplo de dicho estuche es el denominado envase blíster. Los envases blíster son bien conocidos en la industria del envasado y se usan ampliamente para envasar formas de dosis unitarias farmacéuticas (comprimidos, cápsulas y similares). Los envases blíster están formados por lo general por una lámina de material relativamente rígido cubierta con una delgada hoja de un material plástico, preferiblemente transparente. Durante el procedimiento de envasado, se conforman unos alveolos en la hoja delgada de plástico. Los alveolos tienen el tamaño y la forma de los comprimidos o cápsulas a envasar. A continuación, se colocan en los alveolos los comprimidos o cápsulas y se sella la lámina de material relativamente rígido a la hoja delgada de plástico en la cara de la hoja opuesta a la dirección en que se han conformado los alveolos. Como resultado, los comprimidos o cápsulas quedan herméticamente cerrados en los alveolos entre la hoja delgada de plástico y la lámina. Con preferencia, la resistencia de la lámina es tal que los comprimidos o cápsulas se pueden extraer del envase blíster aplicando una presión manual sobre los alveolos, mediante la cual se practica una abertura en la lámina en la posición donde se encuentra el alveolo. El comprimido o cápsula pueden extraerse entonces a través de dicha abertura.

Sería deseable proporcionar un medio de ayuda a la memoria en el estuche, por ejemplo, en forma de números cerca de los comprimidos o cápsulas, de forma que los números correspondan a los días de la pauta de administración en la que deben ingerirse los comprimidos o cápsulas especificados. Otro ejemplo de dicho medio de ayuda a la memoria es un calendario impreso en la tarjeta, por ejemplo, tal como sigue "Primera semana, Lunes, Martes, y así sucesivamente. Segunda semana, Lunes, Martes, y así sucesivamente". Serán evidentes otras variaciones de medios de ayuda a la memoria. Una "dosis diaria" puede ser un único comprimido o cápsula o varias pastillas o cápsulas que se deben tomar en un día dado. Además, una dosis diaria de compuesto de Fórmula I puede consistir en un comprimido o cápsula, mientras que una dosis diaria del segundo compuesto puede consistir en varios comprimidos o cápsulas y viceversa. El medio de ayuda a la memoria deberá reflejar esto y ayudar a la correcta administración de los agentes activos.

En otra realización preferida de la invención, se proporciona un dispensador diseñado para dispensar las dosis diarias en cada momento en el orden de su uso deseado. Con preferencia, el dispensador está dotado de un medio de ayuda a la memoria, para facilitar el cumplimiento de la pauta de dosificación. Un ejemplo de dicho medio de ayuda a la memoria es un contador mecánico que indique el número de dosis diarias que se han dispensado. Otro ejemplo de dicho medio de ayuda a la memoria es una memoria de microprocesador que funcione a pilas acoplada a una pantalla de cristal líquido, o una señal de recuerdo audible que, por ejemplo, muestre la fecha en que se ha tomado la última dosis y/o recuerde cuando debe tomarse la dosis siguiente.

Si se desea, los compuestos de la presente invención y otros agentes farmacéuticamente activos se pueden administrar a un paciente por vía oral, rectal, parenteral (por ejemplo, intravenosa, intramuscular o subcutánea), intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, intravesicular, local (por ejemplo, polvos, pomadas o gotas) o como pulverizador bucal o nasal.

Las composiciones adecuadas para inyección parenteral pueden comprender soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones estériles fisiológicamente aceptables, acuosas o no acuosas, y polvos estériles para su reconstitución en soluciones o dispersiones estériles inyectables. Ejemplos de soportes, diluyentes, disolventes o vehículos acuosos o no acuosos adecuados incluyen agua, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol y similares), sus mezclas adecuadas, aceites vegetales (como el aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables como el oleato de etilo. Se puede mantener una fluidez adecuada, por ejemplo, usando un recubrimiento como lecitina, manteniendo el tamaño de partículas deseado en el caso de dispersiones y usando tensioactivos.

Estas composiciones pueden contener además adyuvantes como conservantes, humectantes, emulsionantes y agentes de dispersión. La contaminación por microorganismos se puede evitar añadiendo diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. Puede ser deseable también incluir agentes de isotonicidad, por ejemplo, azúcares, cloruro sódico y similares. La absorción prolongada de composiciones farmacéuticas inyectables se puede conseguir mediante el uso de agentes que retrasen la absorción, por ejemplo, el monoestearato de aluminio o la gelatina.

Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se mezcla al menos con un excipiente convencional inerte (o vehículo) tal como citrato sódico o fosfato dicálcico o (a) cargas o extendedores, como por ejemplo, almidones, lactosa, sacarosa, manitol y ácido silícico; (b) ligantes, como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga; (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol; (d) agentes disgregantes, como por ejemplo, agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos complejos y carbonato sódico; (e) retardadores de la solución, como por ejemplo, parafina; (f) aceleradores de la absorción, como por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario; (g) agentes humectantes, como por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol; (h) adsorbentes, como por ejemplo, caolín o bentonita; e (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato sódico o mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas y comprimidos, las formas de dosificación pueden comprender además agentes tampón.

En cápsulas de gelatina dura y blanda rellenas se pueden usar también composiciones sólidas de un tipo similar usando excipientes tales como la lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular.

Las formas de dosificación sólidas como comprimidos, grageas, cápsulas, pastillas y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y envueltas, tales como recubrimientos entéricos y otros bien conocidos en la técnica. Estas pueden contener también agentes opacificadores y también pueden estar constituidos de una composición tal que libere el compuesto o compuestos activo(s) en una parte determinada del tracto intestinal de una forma retardada. Ejemplos de composiciones embebidas que se pueden usar son sustancias poliméricas o ceras. Los compuestos activos pueden estar en forma microencapsulada, si es apropiada, con uno o más de los excipientes anteriormente citados.

Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, la forma de dosificación líquida puede contener diluyentes inertes usados corrientemente en la técnica, como el agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, como por ejemplo, alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, en particular, el aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de semilla de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino y aceite de semilla de sésamo, glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán o mezclas de estas sustancias.

Además de los diluyentes inertes, la composición puede incluir también adyuvantes, como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumes.

Las suspensiones, además del compuesto activo, pueden contener agentes de suspensión, como por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilensorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto o mezclas de estas sustancias.

Las composiciones para administración rectal son preferiblemente supositorios, que se pueden preparar mezclando los compuestos de la presente invención con excipientes o vehículos no irritantes adecuados como la manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorios, que son sólidos a la temperatura ambiente habitual pero líquidos a la temperatura corporal y, por tanto, se funden en el recto o la cavidad vaginal y liberan el componente activo.

Las formas de dosificación para administración tópica de un compuesto de la presente invención incluyen pomadas, polvos, pulverizadores e inhaladores. El compuesto o compuestos activo(s) se mezclan en condiciones estériles con un vehículo fisiológicamente aceptable y los conservantes, tampones o propulsores que puedan ser necesarios. Las formulaciones oftálmicas, pomadas oculares, polvos y soluciones también se contemplan dentro del alcance de la presente invención.

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar a un paciente en niveles de dosificación que varían en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 3000 mg por día. Para un humano adulto normal que tiene un peso de aproximadamente 70 kg, una dosificación en el intervalo de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso es normalmente suficiente. La dosificación y el intervalo de dosificación específicos que se pueden usar depende de una serie de factores que incluyen las necesidades del paciente, la intensidad de la enfermedad o trastorno tratado y la actividad farmacológica del compuesto que se administra. La determinación de los intervalos de dosificación y las dosificaciones óptimas para un paciente particular se encuentran dentro del conocimiento de un experto medio en la técnica.

Los siguientes párrafos describen formulaciones ejemplo, dosificaciones, etc., útiles para animales no humanos. La administración de un compuesto de la presente invención se puede efectuar por vía oral o no oral, tal como por inyección. Se administra una cantidad de un compuesto de la presente invención tal que se reciba una dosis eficaz, por lo general, una dosis diaria que, cuando se administra oralmente a un animal normalmente varía de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal, preferiblemente de 0,1 a 50 mg/kg de peso corporal. Por conveniencia, la medicación puede llevarse a cabo en el agua potable de modo que la dosificación terapéutica del agente se ingiera con el suministro diario de agua. El agente puede dosificarse directamente en el agua potable, preferiblemente en forma de un concentrado soluble en agua líquido (tal como una solución acuosa de una sal soluble en agua). Convenientemente, el ingrediente activo se puede añadir también directamente al alimento, como tal, o en forma de un suplemento alimentario para el animal, también denominado suplemento o concentrado. Un suplemento o concentrado de agente terapéutico en un vehículo se emplea más corrientemente para la inclusión del agente en el alimento. Los vehículos adecuados son líquidos o sólidos, según se desee, como el agua, diversas harinas como la harina de alfalfa, harina de soja, harina de aceite de algodón, harina de aceite de linaza, harina de mazorcas de maíz y harina de maíz, melazas, urea, harina de huesos y mezclas minerales tales como las que se emplean corrientemente en alimentos para aves de corral. Un vehículo particularmente eficaz es el propio alimento del animal; es decir, una pequeña parte de dicho alimento. El vehículo facilita la distribución uniforme de los materiales activos en el alimento final con el que se mezcla el suplemento. Es importante que el compuesto se mezcle de forma uniforme en el suplemento y, por consiguiente, en el alimento. En este sentido, el agente se puede dispersar o disolver en un vehículo oleoso adecuado tal como aceite de semilla de soja, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón y similares, o en un disolvente orgánico volátil y luego se mezcle con el vehículo. Se apreciará que las proporciones de material activo en el concentrado pueden variar ampliamente puesto que la cantidad de agente en el alimento final puede ajustarse mezclando la proporción apropiada de suplemento con el alimento para obtener un nivel deseado de agente terapéutico.

Se pueden mezclar concentrados de alta potencia por el fabricante del alimento con un vehículo proteináceo tal como harina de aceite de soja y otras harinas como las descritas antes, para producir suplementos concentrados que son adecuados para la alimentación directa de animales. En tales casos, se permite a los animales consumir su dieta habitual. Como alternativa, tales suplementos concentrados se pueden añadir directamente al alimento produciendo un alimento final nutricionalmente equilibrado que contiene un nivel terapéuticamente eficaz de un compuesto conforme a la invención. Las mezclas se combinan uniformemente por procedimientos convencionales, tales como una mezcladora de doble carcasa, para garantizar la homogeneidad.

Si el suplemento se usa como aderezo añadido superficialmente para el alimento, éste puede igualmente ayudar a garantizar la uniformidad de la distribución del material activo en toda la parte superior del alimento aderezado.

El agua potable y el alimento eficaz para aumentar la deposición de carne magra y para mejorar la relación de carne magra a grasa se preparan por lo general mezclando un compuesto de la invención con una cantidad suficiente de alimento del animal, proporcionando de aproximadamente 10^{-3} a aproximadamente 500 ppm del compuesto en el alimento o el agua.

El alimento medicado preferido para cerdos, ovejas y cabras contiene por lo general de aproximadamente 1 a aproximadamente 400 gramos de ingrediente activo por tonelada de alimento, siendo normalmente la cantidad óptima para estos animales de aproximadamente 50 a aproximadamente 300 gramos por tonelada de alimento.

Los alimentos preferidos para aves de corral y mascotas domésticas contienen normalmente de aproximadamente 1 a aproximadamente 400 g por tonelada de alimento.

Para administración parenteral a animales, los compuestos de la presente invención se pueden preparar en forma de una pomada espesa o un pelet y administrarse como implante, normalmente bajo la piel del cuello u oreja del animal.

En general, la administración parenteral implica la inyección de una cantidad suficiente de un compuesto de la presente invención para proporcionar al animal de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg/día de peso corporal del ingrediente activo. La dosificación preferida para aves de corral, cerdos, vacas, ovejas y cabras y animales domésticos varía en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg/kg/día.

Las formulaciones de pomadas espesas se pueden preparar dispersando el compuesto activo en un aceite farmacéuticamente aceptable tal como aceite de cacahuete, aceite de sésamo, aceite de maíz.

Los pelets que contienen una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención se pueden preparar mezclando un compuesto de la presente invención con un diluyente como Carbowax, cera de carnauba y similares, y se puede añadir un lubricante como estearato de magnesio o de calcio para mejorar las condiciones del proceso de peletizado.

Por supuesto, es sabido que puede administrarse más de un pelet a un animal para conseguir el nivel de dosis deseado. Además, se ha encontrado que los implantes se pueden realizar de forma periódica durante el período de tratamiento del animal con el fin de mantener el nivel de agente activo correcto en el cuerpo del animal.

Los términos sales, ésteres, amidas o profármacos farmacéuticamente aceptables se refieren a sales carboxilato, sales de adición de aminoácidos, ésteres, amidas y profármacos de los compuestos de la presente invención que están todos dentro del alcance del criterio médico, adecuados para usar con pacientes sin toxicidad, irritación, respuestas alérgicas indebidas, o efectos similares, de forma equilibrada con la relación beneficio/riesgo y eficaces para su uso deseado, así como las formas híbridas, cuando sean posibles, de los compuestos de la presente invención.

El término "sales" se refiere a las sales inorgánicas y orgánicas de los compuestos de la presente invención. Las sales se pueden preparar in situ durante la fase final de aislamiento y purificación del compuesto, o se puede hacer reaccionar por separado un compuesto purificado en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico aislando la sal así formada. Las sales representativas incluyen las sales bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, nitrato, acetato, oxalato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, toluenosulfonato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato, y sales similares. Las sales pueden incluir cationes basados en metales alcalinos y alcalinotérreos, como el sodio, litio, potasio, calcio, magnesio y similares, así como los cationes amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos, incluyendo, aunque sin quedar limitados a los mismos, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina. Por ejemplo, véase S. M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66: 1-19 (1977).

Ejemplos de ésteres no tóxicos, farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención, si se da el caso, incluyen ésteres alquilo C_{1}-C_{8}. Los ésteres aceptables incluyen también ésteres cicloalquilo C_{5}-C_{7}, así como los ésteres arilalquilo como bencilo. Se prefieren los ésteres alquilo C_{1}-C_{4}. Los ésteres de los compuestos de la presente invención se pueden preparar conforme a procedimientos que son bien conocidos en la técnica.

Ejemplos de amidas no tóxicas, farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención incluyen las amidas derivadas de amoníaco, (alquil C_{1}-C_{8})aminas primarias y (dialquil C_{1}-C_{8})aminas secundarias. En el caso de aminas secundarias, la amina puede estar también en forma de grupo heterocicloalquilo de 5 ó 6 miembros que contiene al menos un átomo de nitrógeno. Las amidas derivadas del amoníaco, (alquil C_{1}-C_{3})aminas primarias y (dialquil C_{1}-C_{2})aminas secundarias son las preferidas. Las amidas de los compuestos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica.

El término "profármaco" significa compuestos que se transforman in vivo proporcionando un compuesto de fórmula I. La transformación puede producirse por diversos mecanismos, tales como mediante hidrólisis en la sangre. En T. Higuchi and W. Stella, "Pro-Drugs as Novel Delivery Systems", Vol. 14 de la A.C.S. Symposium Series y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987 pueden encontrarse una descripción del uso de profármacos.

Por ejemplo, si el compuesto de la invención contiene un grupo funcional ácido carboxílico, un profármaco puede comprender un éster formado por la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo ácido con un grupo como alquilo C_{1}-C_{8}, (alcanoiloxi C_{2}-C_{12})metilo, 1-(alcanoiloxi)etilo con 4 a 9 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcanoiloxi)etilo con 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetilo con 3 a 6 átomos de carbono, 1-(alcoxicarboniloxi)etilo con 4 a 7 átomos de carbono, 1-metil-1-(alcoxicarboniloxi)etilo con 5 a 8 átomos de carbono, N-(alcoxicarbonil)aminometilo con 3 a 9 átomos de carbono, 1-(N-(alcoxicarbonil)amino)etilo con 4 a 10 átomos de carbono, 3-ftalidilo, 4-crotonolactonilo, gamma-butirolacton-4-ilo, di-N,N-(alquil C_{1}-C_{2})amino(alquilo C_{2}-C_{3}) (tal como \beta-dimetilaminoetilo), carbamoil-(alquilo C_{1}-C_{2}), N,N-di(alquil C_{1}-C_{2})carbamoil-(alquilo C_{1}-C_{2}) y piperidino-, pirrolidino- o morfolino(alquilo C_{2}-C_{3}).

De igual forma, si el compuesto de la presente invención comprende un grupo funcional alcohol, se puede formar un profármaco mediante la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo alcohol por un grupo como (alcanoiloxi C_{1}-C_{6})metilo, 1-(alcanoiloxi C_{1}-C_{6})etilo, 1-metil-1-(alcanoiloxi C_{1}-C_{6})etilo, (alcoxi C_{1}-C_{6})carboniloximetilo, N-(alcoxi C_{1}-C_{6})carbonilaminometilo, succinoílo, (alcanoílo C_{1}-C_{6}), \alpha-amino(alcanoílo C_{1}-C_{4}), arilacilo y \alpha-aminoacilo, o \alpha-aminoacil-\alpha-aminoacilo, estando cada no de los grupos \alpha-aminoacilo seleccionado independientemente de los L-aminoácidos naturales, P(O)(OH)_{2}, -P(O)-(O(alquilo C_{1}-C_{6}))_{2} o glicosilo (formando el radical resultante de la eliminación del grupo hidroxi del hemiacetal un carbohidrato).

Si el compuesto de la presente invención comprende un grupo funcional amina, se puede formar un profármaco por la sustitución del átomo de hidrógeno del grupo amina por un grupo tal como R-carbonilo, RO-carbonilo, NRR'-carbonilo, siendo R y R' independientemente alquilo C_{1}-C_{10}, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, bencilo, o R-carbonilo es un \alpha-aminoacilo natural o \alpha-aminoacilo natural-\alpha-aminoacilo natural, -C-(OH)C(O)OY, siendo Y, H, alquilo C_{1}-C_{6} o bencilo, -C(OY_{o})Y_{1}, siendo Y_{o} alquilo C_{1}-C_{4} e Y_{1} alquilo C_{1}-C_{6}, carboxi(alquilo C_{1}-C_{6}, amino(alquilo C_{1}-C_{4}) o mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{6})aminoalquilo, -C(Y_{2})Y_{3}, siendo Y_{2} H o metilo e Y_{3} mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{6})amino, morfolino, piperidin-1-ilo o pirrolidin-1-ilo.

Los compuestos de la presente invención pueden contener centros asimétricos o quirales y, por tanto, existir en diferentes formas estereoisoméricas. Se contempla que formen parte de la presente invención todas las formas estereoisoméricas de los compuestos, así como las mezclas de las mismas, incluyendo las mezclas racémicas. Además, la presente invención contempla todos los isómeros geométricos y posicionales. Por ejemplo, si el compuesto contiene un doble enlace, se contemplan tanto las formas cis como las trans, además de sus mezclas.

Las mezclas de diastereoisómeros se pueden separar en sus componentes estereoquímicos individuales en base a sus diferencias físico-químicas por procedimientos conocidos per se, por ejemplo, por cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiómeros se pueden separar convirtiendo la mezcla de enantiómeros en una mezcla de diastereoisómeros mediante la reacción con un compuesto ópticamente activo adecuado (por ejemplo, un alcohol), separando los diastereoisómeros y convirtiendo (por ejemplo, por hidrólisis) en los enantiómeros puros correspondientes. Además, algunos de los compuestos de esta invención pueden ser atropoisómeros (por ejemplo, biarilos sustituidos) y se consideran parte de esta invención.

Los compuestos de la presente invención pueden existir en forma solvatada y no solvatada con disolventes farmacéuticamente aceptables como el agua, etanol y similares. La presente invención contempla e incluye las formas solvatadas y las no solvatadas.

También es posible que los compuestos de la presente invención puedan existir en formas tautómeras diferentes. Se contemplan todos los tautómeros de los compuestos de la presente invención. Por ejemplo, todos los tautómeros del resto imidazol están incluidos en esta invención. Además, por ejemplo, se incluyen en esta invención todas las formas ceto-enol o imina-enamina de los compuestos.

Los expertos en la técnica reconocerán que los nombres de los compuestos contenidos en la presente memoria pueden basarse en un tautómero particular de un compuesto. Aunque se pueda usar el nombre para un único tautómero particular, se pretende que todos los tautómeros estén incluidos en el nombre del tautómero particular y se incluyen como parte de la invención.

También se pretende que la invención descrita en la presente memoria abarque los compuestos que se sintetizan in vitro usando técnicas de laboratorio, tales como las bien conocidas por los químicos de síntesis; o se sintetizan usando técnicas in vivo tales como mediante metabolismo, fermentación, digestión y similares. También se contempla que los compuestos de la presente invención se puedan sintetizar usando una combinación de técnicas in vivo e in vitro.

La presente invención también incluye compuestos marcados con radioisótopos, que son idénticos a los mencionados en la presente memoria, salvo por el hecho de que uno o más átomos están reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número másico diferentes de la masa atómica o número másico encontrados normalmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, como ^{2}H, ^{3}H, ^{13}C, ^{14}C, ^{15}N, ^{18}O, ^{17}O, ^{31}P, ^{32}P, ^{35}S, ^{18}F y ^{36}Cl respectivamente. Los compuestos de la presente invención que contienen los isótopos mencionados anteriormente y/u otros isótopos de otros átomos, están dentro del alcance de esta invención. Ciertos compuestos marcados con radioisótopos de la presente invención, por ejemplo, aquellos en los que se han incorporado isótopos radiactivos como ^{3}H y ^{14}C, son útiles en ensayos de distribución de fármacos y/o tejidos substratos. Los isótopos de H tritiado, es decir, ^{3}H, y de carbono 14, es decir, ^{14}C, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y de detección. Además, la sustitución con isótopos más pesados como el deuterio, es decir, ^{2}H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas originadas por la mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una mayor semivida in vivo o la necesidad de dosis menores y, por tanto, pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Por lo general, los compuestos marcados con isótopos de Fórmula I de esta invención y sus profármacos pueden prepararse llevando a cabo los procedimientos descritos en los Esquemas y/o en los Ejemplos siguientes, sustituyendo un reactivo sin marcador isotópico por un reactivo marcado con isótopos fácilmente disponible.

En general, los compuestos de esta invención se pueden preparar por procedimientos que incluyen procedimientos análogos a los conocidos en la técnica química, en particular, a la luz de la descripción contenida en la presente memoria.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al tratamiento de la diabetes, incluyendo tolerancia reducida a la glucosa, resistencia a la insulina, diabetes mellitus insulinodependiente (Tipo I) y diabetes mellitus no insulinodependiente (NIDDM o Tipo II). También se incluyen en el tratamiento de la diabetes el tratamiento de las complicaciones diabéticas como la neuropatía, la nefropatía y la retinopatía diabética o las cataratas.

La diabetes se puede tratar administrando a un paciente que padece diabetes (Tipo I o Tipo II), resistencia a la insulina, tolerancia reducida a la glucosa o cualquiera de las complicaciones diabéticas como la neuropatía, la nefropatía, retinopatía o las cataratas, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. También se contempla que la diabetes se trate administrando un compuesto de la presente invención o un inhibidor de la flucógeno fosforilasa combinado con otro agente que se pueda usar para tratar la diabetes y/o la obesidad. Los inhibidores de la glucógeno fosforilasa preferidos que son útiles en combinación con otros agentes útiles para tratar la diabetes y/o la obesidad incluyen aquellos de fórmula I. Se describen inhibidores de la glucógeno fosforilasa adicionales preferidos en las publicaciones PCT WO 98/39384 y WO 96/39385.

Agentes representativos que se pueden usar para tratar la diabetes incluyen insulina y análogos de la insulina (por ejemplo, insulina LysPro, formulaciones de inhalación que comprenden insulina); GLP-1 (7-37) (insulinotropina) y GLP-1 (7-36)-NH_{2}; sulfonilureas y análogos: clorpropamida, glibenclamida, tolbutamida, tolazamida, acetohexamida, glipizida, glimepirida, repaglinida, meglitinida; biguanidas: metformina, fenformina, buformina; antagonistas á2 e imidazolinas: midaglizol, isaglidol, deriglidol, idazoxan, efaroxan, fluparoxan; otros secretagogos de la insulina: linoglirida, insulinotropina, exendina-4, BTS-67582, A-4166; glitazonas: ciglitazona, pioglitazona, englitazona, troglitazona, darglitazona, rosiglitazona; agonistas PPAR-gamma, agonistas RXR: JTT-501, MCC-555, MX-6054, DRF-2593, GI-282570, KPR-297, LG 100268; inhibidores de la oxidación de ácidos grasos: clomoxir, etomoxir; inhibidores de la \alpha-glucosidasa: pracosa, acarbosa, miglitol, emiglitato, voglibosa, MDL-25.637, camiglibosa, MDL-73.945; \beta-agonistas: BRL 35135, BRL 37344, Ro 16-8714, ICI D7114, CL 316.243, TAK-667, AZ40140; inhibidores de la fosfodiesterasa de tipo cAMP y cGMP: sildenafil, L686398, L-386.393; agentes para reducir los niveles de lípidos: benfluorex, atorvastatina; agentes antiobesidad: fenfluramina, orlistat, sibutramina; complejos de vanadato y de vanadio (por ejemplo, Naglivan®) y complejos de peroxovanadio; antagonistas de amilina: pramlintida, AC-137; inhibidores de lipoxigenasa: masoprocal; análogos de la somatostatina: BM-23014, saglitida, octreotida; antagonistas del glucagón: BAY 278-9965, agonistas de señalización de la insulina, emuladores de insulina, inhibidores de PTB1B: L-783281, TER17411, TER17529; inhibidores de la gluconeogénesis: GP3034; análogos de la somatostatina y antagonistas de la somatostatina; agentes antilipolíticos: ácido nicotínico, acipimox, WAG 994; agentes estimuladores del transporte de la glucosa: BM-130795; inhibidores de la glucosa síntasa quinasa: cloruro de litio, CT98014, CT98023; agonistas del receptor de la galanina; inhibidores de MTP tales como los descritos en la solicitud de patente provisional de Estados Unidos número 60/164.803; secretagogos de la hormona del crecimiento tales como los descritos en las publicaciones PCT números WO97/24369 y WO 98/58947; antagonistas de NPY: PD-160170, BW-383, BW1229, CGP-71683A, NGD 95-1, L-152804; agentes anorexígenos incluidos antagonistas y/o emuladores de receptores de 5-HT y 5-HT2C: dexfenfluramina, Prozac (R), Zoloft (R); agonistas de receptores de CCK: SR-278978; antagonistas de receptores de galatina; antagonistas de MCR-4: HP-228; leptina o emuladores de leptina: inhibidores de 11-beta-hidroxiesteroide deshidrogenas tipo I; emuladores de urocortina, antagonistas de CRF, y proteínas de unión a CRF: RU-488, urocortina. Otros agentes anti-diabéticos que se pueden usar en combinación con un inhibidor de la glucógeno fosforilasa incuyen ergoset y D-quiroinositol. Se puede administrar cualquier combinación de agentes de los descritos anteriormente.

Además de las categorías y los compuestos citados antes, los compuestos de la presente invención se pueden administrar combinados con compuestos tiromiméticos, inhibidores de la aldosa reductasa, antagonistas del receptor de glucocorticoides, inhibidores de la NHE-1 o inhibidores de la sorbitol deshidrogenasa, o combinaciones de los mismos, para tratar o prevenir la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos, en particular, la isquemia de miocardio.

Se acepta de forma general que las hormonas tiroideas, en especial, las yodotironinas biológicamente activas, son críticas para el desarrollo normal y para mantener la homeostasis metabólica. Las hormonas tiroideas estimulan el metabolismo del colesterol a ácidos biliares y potencian la respuesta lipolítica de las células grasas a otras hormonas. Las patentes de los Estados Unidos números 4.766.121, 4.826.876, 4.910.305 y 5.061.798 describen ciertos miméticos de hormonas tiroideas (tiromiméticos), a saber, 3,5-dibromo-3'-[6-oxo-3(1H)-piridazinilmetil]-tironinas. La patente de los Estados Unidos número 5.284.971 describe ciertos agentes tiromiméticos que reducen los niveles de colesterol, a saber, compuestos 4-(3-ciclohexil-4-hidroxi o -metoxi fenilsulfonil)-3,5-dibromo-fenilacéticos. Las patentes de los Estados Unidos números 5.401.772, 5.654.468 y 5.569.674 describen ciertos tiromiméticos que son agentes que reducen los niveles de lípidos, a saber, derivados del ácido heteroacético. Además, en la técnica se conocen ciertos derivados de ácidos oxámicos de hormonas tiroideas. Por ejemplo, N. Yokoyama, et al., en un artículo publicado en el Journal of Medicinal Chemistry, 38(4):695-707 (1995) describen reemplazar un grupo -CH_{2} en un metabolito natural de T_{2} por un grupo -NH, dando como resultado -HNCOCO_{2}H. Igualmente, R.E. Steele et al., en un artículo publicado en el International Congressional Service (Atherosclerosis X) 1066:321-324 (1995) y Z.F. Stephan et al., en un artículo publicado en Atherosclerosis, 126:53-63 (1996) describen ciertos derivados de ácidos oxámicos útiles como agentes tiromiméticos que reducen los niveles de lípidos, exentos de actividad cardíaca indeseable.

Cada uno de los compuestos tiromiméticos citados antes y otros compuestos tiromiméticos se pueden usar en combinación con los compuestos de la presente invención para tratar la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también combinados con inhibidores de la aldosa reductasa. Los inhibidores de la aldosa reductasa constituyen una clase de compuestos que cada vez son más conocidos por su utilidad en prevenir y tratar trastornos derivados de complicaciones de la diabetes como la neuropatía y la nefropatía diabéticas. Tales compuestos son bien conocidos por los expertos en la técnica y se identifican fácilmente por ensayos biológicos convencionales. Por ejemplo, los inhibidores de la aldosa reductasa zopolrestat, ácido 1-ftalazinacético, 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[5-(trifluorometil)-2-benzotiazolil]metil]- y los compuestos relacionados se describen en la patente de los Estados Unidos 4.939.140 de Larson et al.

Los inhibidores de la aldosa reductasa se han descrito por su uso para reducir los niveles de lípidos en mamíferos. Véase por ejemplo, la patente de los Estados Unidos 4.492.706 de Kallai-sanfacon y el documento EP 0 310 931 A2 (Ethyl Corporation).

La patente de los Estados Unidos 5.064.830 de Going describe el uso de ciertos inhibidores de la aldosa reductasa a base de ácido oxoftalazinil acético, incluyendo el zopolrestat, para reducir los niveles de ácido úrico en sangre.

La patente de los Estados Unidos 5.391.551, de cesión común, describe el uso de ciertos inhibidores de la aldosa reductasa, incluyendo el zopolrestat, para reducir los niveles de lípidos en sangre en seres humanos. La descripción expone qué utilidades terapéuticas se derivan del tratamiento de enfermedades provocadas por un nivel elevado de triglicéridos en sangre, incluyendo tales enfermedades trastornos cardiovasculares como la trombosis, la arteriosclerosis, el infarto de miocardio y la angina de pecho. Un inhibidor de la aldosa reductasa preferido es ácido 1-ftalazinacético, 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[(5-trifluorometil)-2-benzotiazolil]metil]-, también conocido como zopolrestat.

El término inhibidor de la aldosa reductasa se refiere a compuestos que inhiben la bioconversión de glucosa en sorbitol, que está catalizada por la enzima aldosa reductasa.

Se puede usar cualquier inhibidor de la aldosa reductasa combinado con un compuesto de la presente invención. La inhibición de la aldosa reductasa se determina fácilmente por los expertos en la técnica conforme a ensayo convencionales (J. Malone, Diatebes, 29:861-864 (1980). "Red Cell Sorbitol, an Indicator of Diabetic Control"). En la presente memoria se describen una serie de inhibidores de la aldosa reductasa; sin embargo, los expertos en la técnica conocerán bien otros inhibidores de la aldosa reductasa útiles en las composiciones y procedimientos de esta invención.

La actividad de un inhibidor de la aldosa reductasa en un tejido se puede determinar ensayando una cantidad de inhibidor de la aldosa reductasa que sea necesaria para reducir el sorbitol del tejido (es decir, inhibiendo la producción adicional de sorbitol después de bloquear la aldosa reductasa) o reducir la fructosa en el tejido (inhibiendo la producción de sorbitol después de bloquear la aldosa reductasa y, por consiguiente, la producción de fructosa).

En consecuencia, ejemplos de inhibidores de la aldosa reductasa que son útiles en las composiciones, combinaciones y procedimientos de la presente invención incluyen:

1. ácido 3-(4-bromo-2-fluorobencil)-3,4-dihidro-4-oxo-1-ftalazinacético (ponalrestat; patente U.S. 4.251.528);

2. N[[(5-trifluorometil)-6-metoxi-1-naftalenil]tioxometil]-N-metilglicina (tolrestat, patente U.S. 4.600.724);

3. ácido 5-[(Z,E)-\beta-metilcinnamilideno]-4-oxo-2-tioxo-3-tiazolidenacético (epalrestat, patentes U.S. 4.464.382, U.S. 4.791.126 y U.S. 4.831.045);

4. ácido 3-(4-bromo-2-fluorobencil)-7-cloro-3,4-dihidro-2,4-dioxo-1(2H)-quinazolinacético (zenarestat, patentes U.S. 4.734.419 y 4.883.800);

5. ácido 2R,4R-6,7-dicloro-4-hidroxi-2-metilcroman-4-acético (patente U.S. 4.883.410);

6. ácido 2R,4R-6,7-dicloro-6-fluoro-4-hidroxi-2-metilcroman-4-acético (patente U.S. 4.883.410);

7. ácido 3,4-dihidro-2,8-diisopropil-3-oxo-2H-1,4-benzoxazin-4-acético (patente U.S. 4.771.050);

8. 3,4-dihidro-3-oxo-4-[(4,5,7-trifluoro-2-benzotiazolil)metil]-2H-1,4-benzotiazin-2-acético (SPR-210, patente
U.S. 5.252.572);

9. N-[3,5-dimetil-4-[(nitrometil)sulfonil]fenil]-2-metil-bencenoacetamida (ZD5522, patentes U.S. 5.270.342 y
U.S. 5.430.060);

10. (S)-6-fluoroespiro[croman-4,4'-imidazolidina]-2,5'diona (sorbinilo, patente U.S. 4.130.714);

11. d-2-metil-6-fluoro-espiro(croman-4',4'-imidazolidina)-2',5'-diona (patente U.S. 4.540.704);

12. 2-fluoro-espiro(9H-fluoreno-9,4'-imidazolidina)2',5'-diona (patente U.S. 4.438.272);

13. 2,7-difluoro-espiro(9H-fluoreno-9,4'-imidazolidina)-2',5'-diona (patentes U.S. 4.436.745 y U.S.
4.438.272);

14. 2,7-difluoro-5-metoxi-espiro(9H-fluoreno-9,4'-imidazolidina)-2',5'-diona (patentes U.S. 4.436.745 y U.S.
4.438.272);

15. 7-fluoro-espiro (5H-indenol[1,2-b]piridina-5,3'-pirrolidina)-2,5'-diona (patentes U.S. 4.436.745 y U.S.
4.438.272);

16. d-cis-6'-cloro-2',3'-dihidro-2'-metil-espiro-(imidazolidina-4,4',4'-H-pirano(2,3-b)piridina)-2,5-diona (patente U.S. 4.980.357);

17. espiro[imidazolidina-4,5'(6H)quinolina]2,5-diona-3'-cloro-7',8'-dihidro-7'-metil-(5'-cis) (patente U.S.
5.066.659);

18. (2S,4S)-6-fluoro-2',5'-dioxoespiro(croman-4'-4'-imidazolidin)-2-carboxamida (patente U.S. 5.447.946); y

19. 2-[(4-bromo-2-fluorofenil)metil]-6-fluoroespiro[isoquinolina-4(1H),3'-pirrolidina]-1,2',3,5'(2H)-tetrona
(ARI-509, patente U.S. 5.037.831).

Otros inhibidores de la aldosa reductasa incluyen los compuestos de fórmula Ia siguiente

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o una de sal o profármaco de los mismos farmacéuticamente aceptables, en la que

Z es O u S;

R^{1} es hidroxi o un grupo capaz de retirarse in vivo produciendo un compuesto de fórmula I, en el que R^{1} es OH; y

X e Y son iguales o distintos y se seleccionan de hidrógeno, trifluorometilo, fluoro y cloro.

Un subgrupo preferido dentro del grupo anterior de compuestos incluye los compuestos numerados como 1, 2,
3, 4, 5, 6, 9, 10 y 17 y los siguientes compuestos de Fórmula Ia:

20. ácido 3,4-dihidro-3-(5-fluorobenzotiazol-2-ilmetil)-4-oxoftalazin-1-il acético [R^{1} = hidroxi; X = F; Y = H];

21. ácido 3-(5,7-difluorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético [R^{1} = hidroxi; X = Y = F];

22. ácido 3-(5-clorobenzotiazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-il acético [R^{1} = hidroxi; X = Cl; Y = H];

23. ácido 3-(5,7-diclorobenzotiazol-2-ilmetil)-3, 4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético [R^{1} = hidroxi; X = Y = Cl];

24. ácido 3,4-dihidro-4-oxo-3-(5-trifluorometilbenzoxazol-2-ilmetil)ftalazin-1-il acético [R^{1} = hidroxi; X = CF_{3}; Y = H];

25. ácido 3,4-dihidro-3-(5-fluorobenzoxazol-2-ilmetil)-4-oxoftalazin-1-il acético [R^{1} = hidroxi; X = F; Y = H];

26. ácido 3-(5,7-difluorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético [R^{1} = hidroxi; X = Y = F];

27. ácido 3-(5-clorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-il acético [R^{1} = hidroxi; X = Cl; Y = H];

28. ácido 3-(5,7-diclorobenzoxazol-2-ilmetil)-3,4-dihidro-4-oxoftalazin-1-ilacético [R^{1} = hidroxi; X = Y = Cl]; y

29. zopolrestat; ácido 1-ftalazinacético, 3,4-dihidro-4-oxo-3-[[5-(trifluorometil)-2-benzotiazolil]metil]-, [R^{1}=hi-
droxi; X=trifluorometilo; Y=H].

En los compuestos 20 a 23 y 29, Z es S. En los compuestos 24 a 28, Z es O.

Del subgrupo anterior, los compuestos 20 a 29 son los más preferidos, siendo el 29 especialmente preferido. Los procedimientos para preparar los inhibidores de la aldosa reductasa de fórmula Ia se pueden encontrar en la publicación de documento PCT número WO 99/26659.

Cada uno de los inhibidores de la aldosa reductasa citados antes y otros inhibidores de la aldosa reductasa se pueden usar combinados con los compuestos de la presente invención para tratar la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también combinados con antagonistas del receptor glucocorticoide. El receptor glucocorticoide (GR) está presente en las células sensibles a los glucocorticoides en las que reside en el citosol en estado inactivo hasta que es estimulado por un agonísta. Después de la estimulación, el receptor glucocorticoide se traslada al núcleo de la célula en el que interacciona específicamente con el ADN y/o proteínas y regula la transcripción de una forma sensible a los glucocorticoides. Dos ejemplos de proteínas que interaccionan con el receptor glucocorticoide son los factores de transcripción, API y NF_{k}-B. Dichas interacciones tienen como resultado la inhibición de la transcripción mediada por API y NF_{k}-B y se cree que es responsable de la actividad antiinflamatoria de los glucocorticoides administrados de forma endógena. Además, los glucocorticoides pueden ejercer también efectos fisiológicos independientes de la transcripción nuclear. Los agonistas del receptor glucocorticoide biológicamente importantes incluyen el cortisol y la corticosterona. Existen muchos agonistas del receptor glucocorticoide sintéticos, incluyendo la dexametasona, prednisona y prednisolona. Por definición, los antagonistas del receptor glucocorticoide se unen al receptor y evitan que los agonistas del receptor glucocorticoide se unan y desencadenen los sucesos mediados por el GR, incluyendo la transcripción. RU486 es un ejemplo de un antagonista del receptor glucocorticoide no selectivo. Los antagonistas del GR se pueden usar en el tratamiento de enfermedades asociadas con un exceso o una deficiencia de glucocorticoides en el cuerpo. Como tales, se pueden usar también para tratar los siguientes trastornos: obesidad, diabetes, enfermedad cardiovascular, hipertensión, síndrome X, depresión, ansiedad, glaucoma, virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) o síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), neurodegeneración (por ejemplo, enfermedad de Alzheimer o de Parkinson), potenciación de la cognición, síndrome de Cushing, enfermedad de Addison, osteoporosis, fragilidad ósea, enfermedades inflamatorias (como osteoartritis, artritis reumatoide, asma y rinitis), ensayos de la función suprarrenal, infección vírica, inmunodeficiencia, inmunomodulación, enfermedades autoinmunes, alergias, cicatrización de heridas, conducta compulsiva, resistencia a varios fármacos, adicción, psicosis, anorexia, caquexia, síndrome de estrés postraumático, fractura ósea postquirúrgica, catabolismo médico y prevención de la fragilidad muscular. Ejemplos o antagonistas del GR que se pueden usar en combinación con un compuesto de la presente invención incluyen compuestos de fórmula Ib siguientes:

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un isómero del mismo, un profármaco de dicho compuesto o isómero, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, isómero o profármaco;

en la que m es 1 ó 2;

- - - representa un enlace opcional;

A se selecciona del grupo formado por

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y

A-5

D es CR_{7}, CR_{7}R_{16}, N, NR_{7} u O;

E es C, CR_{6} o N;

F es CR_{4}, CR_{4}R_{5} u O;

G, H e I junto con 2 átomos de carbono del anillo A o 2 átomos de carbono del anillo B forman un anillo heterocíclico de 5 miembros que comprende uno o más átomos de N, O o S; con la condición de que exista al menos uno de O y S por anillo;

J, K, L y M junto con 2 átomos de carbono del anillo B forman un anillo heterocíclico de 6 miembros que comprende 1 o más átomos de N;

X es a) o está ausente, b) -CH_{2}-, c) -CH(OH)- o d) -C(O)-;

R_{1} es a) -H, b) -Z-CF_{3}, c) -(alquilo C_{1}-C_{6}), d) -(alquenilo C_{2}-C_{6}), e) -(alquinilo C_{2}-C_{6}), f) -CHO, g) -CH=N-OR_{12}, h) -Z-C(O)OR_{12}, i) -Z-C(O)-NR_{12}R_{13}, j) -Z-C(O)-NR_{12}-Z-het, k) -Z-NR_{12}R_{13}, l) -Z-NR_{12}het, m) -Z-het, n) -Z-O-het, o) -Z-arilo', p) -Z-O-arilo', q) -CHOH-arilo' o r) -C-(O)-arilo', estando el arilo' en los sustituyentes o) r) sustituido independientemente con 0, 1 ó 2 de los siguientes: -Z-OH, -Z-NR_{12}R_{13}, -Z-NR_{12}-het, -C(O)NR_{12}R_{13}, -C-(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}), -C(O)OH, -C(O)het, -NR_{12}-C(O)-(alquilo C_{1}-C_{6}), -NR_{12}-C(O)(alquenilo C_{2}-C_{6}), -NR_{12}-C(O)(alquinilo C_{2}-C_{6}), -NR_{12}-C(O)-Z-het, -CN, -Z-het, -O-(alquil C_{1}-C_{3})-C(O)-NR_{12}R_{13}, -O-(alquil C_{1}-C_{3})-C(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}), -NR_{12}-Z-C(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}), -N(Z-C(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}))_{2}, -NR_{12}-Z-C(O)-NR_{12}R_{13}, -Z-NR_{12}-SO_{2}-R_{13}, -NR_{12}-SO_{2}-het, -C(O)H, -Z-NR_{12}-Z-O-(alquilo C_{1}-C_{6}), -Z-NR_{12}-Z-NR_{12}R_{13}, -Z-NR_{12}(cicloalquilo C_{3}-C_{6}), -Z-N(Z-O(alquilo C_{1}-C_{6}))_{2}, -SO_{2}R_{12}, -SOR_{12}, -SR_{12}, -SO_{2}NR_{12}R_{13}, -O-C(O)-(alquilo C_{1}-C_{4}), -O-SO_{2}-(alquilo C_{1}-C_{4}), -halo o -CF_{3};

Z en cada aparición es independientemente a) -(alquilo C_{0}-C_{6}), b) -(alquenilo C_{2}-C_{6}) o c) -(alquinilo C_{2}-C_{6});

R_{2} es a) -H, b) -halo, c) -OH, d) -(alquilo C_{1}-C_{6}) sustituido con 0 ó 1 -OH, e) -NR_{12}R_{13}, f) -Z-C(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}), g) -Z-C(O)NR_{12}R_{13}, h), -O-(alquilo C_{1}-C_{6}), i) -Z-O-C(O)-(alquilo C_{1}-C_{6}), j) -Z-O-(alquil C_{1}-C_{3})-C(O)-NR_{12}R_{13}, k) -Z-O-(alquil C_{1}-C_{3})-C(O)-O(alquilo C_{1}-C_{6}), l) -O-(alquenilo C_{2}-C_{6}), m) -O-(alquinilo C_{2}-C_{6}), n) -O-Z-het, o) -COOH, p) -C(OH)R_{12}R_{13} o q) -Z-CN;

R_{3} es a) -H, b) -(alquilo C_{1}-C_{10}), en el que 1 ó 2 átomos de carbono distintos de los átomos de carbono de unión, pueden estar opcionalmente reemplazados por 1 ó 2 heteroátomos seleccionados independientemente de S, O y N y en el que cada uno de los átomos de carbono está sustituido con 0, 1 ó 2 R_{y}, c) -(alquenilo C_{2}-C_{10}) sustituido con 0, 1 ó 2 R_{y}, d) -(alquinilo C_{2}-C_{10}) en el que 1 átomo de carbono, distinto del átomo de carbono de unión, puede estar opcionalmente reemplazado por 1 átomo de oxígeno y en el que cada uno de los átomos de carbono está sustituido con 0, 1 ó 2 R_{y}, e) -CH=C=CH_{2}, f) -CN, g) -(cicloalquilo C_{3}-C_{6}), h) -Z-arilo, i) -Z-het, j) -C-(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}), k) -O(alquilo C_{1}-C_{6}), l) -Z-S-R_{12}, m) -Z-S(O)-R_{12}, n)-Z-S(O)_{2}-R_{12}, o) -CF_{3}, p) -NR_{12}-O-(alquilo C_{1}-C_{6}) o q) -CH_{2}OR_{y};

con la condición de que uno de R_{2} y R_{3} o está ausente cuando existe un doble enlace entre CR_{2}R_{3} (la posición 7) y el resto F (la posición 8) del anillo C;

R_{y} es para cada aparición independientemente, a) -OH, b) -halo, c) -Z-CF_{3}, d) -Z-CF(alquilo C_{1}-C_{3})_{2}, e) -CN, f) -NR_{12}R_{13}, g) -(cicloalquilo C_{3}-C_{6}), h) (cicloalquenilo C_{3}-C_{6}), i) -(alquil C_{0}-C_{3})-arilo, j) -het o k) -N_{3};

o R_{2} y R_{3} se toman conjuntamente formando a) =CHR_{11}, b) =NOR_{11}, c) =O, d) =N-NR_{12}, e) =N-NR_{12}C(O)-R_{12}, f) oxiranilo o g) 1,2-dioxolan-4-ilo;

R_{4} y R_{5} son para cada aparición, independientemente a) -H, b) -CN, c) -(alquilo C_{1}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, d) -(alquenilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, g) -O-(alquenilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, h), -O-(alquinilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, i) halo, j) -OH, k) (cicloalquilo C_{3}-C_{6}) o l) -(cicloalquenilo C_{3}-C_{6});

o R_{4} y R_{5} se toman conjuntamente formando =O;

R_{6} es a) -H, b) -CN, c)-(alquilo C_{1}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, d) -(alquenilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, e) -(alquinilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo o f) -OH;

R_{7} y R_{16} son para cada aparición independientemente a) -H, b) -halo, c) -CN, d) -(alquilo C_{1}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, e) -(alquenilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, o f) -(alquinilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo; con la condición de que R_{7} es distinto de -CH o -halo cuando D es NR_{7};

o R_{7} y R_{16} se toman conjuntamente formando =O;

R_{8}, R_{9}, R_{14} y R_{15} son para cada aparición a) -H, b) -halo, c) alquilo C_{1}-C_{6} sustituido con 0 a 3 halo; d) -(alquenilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, e) -(alquinilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 3 halo, f) -CN, g) -(cicloalquilo C_{3}-C_{6}), h) -(cicloalquenilo C_{3}-C_{6}), i) -OH, j) -O-(alquilo C_{1}-C_{6}), k) -O-(alquenilo C_{1}-C_{6}), l) -O-(alquinilo C_{1}-C_{6}), m) -NR_{12}R_{13}, n) C(O)OR_{12} u o) -C(O)NR_{12}R_{13};

o R_{8} y R_{9} se toman conjuntamente sobre el anillo de C formando =O; con la condición de que cuando m es 2, solo un grupo de R_{8} y R_{9} se toman conjuntamente formando =O;

o R_{14} y R_{15} se toman conjuntamente formando =O; con la condición de que cuando R_{14} y R_{15} se toman conjuntamente formando =O, D es distinto de CR_{7} y E es distinto de C;

R_{10} es a) -(alquilo C_{1}-C_{10}) sustituido con 0 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de -halo, -OH y -N_{3}, b) -(alquenilo C_{2}-C_{10}) sustituido con 0 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de -halo, -OH y N_{3}, c) -(alquinilo C_{2}-C_{10}) sustituido con 0 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de -halo, -OH y N_{3}, d) -halo, e) -Z-CN, f) -OH, g) -Z-het, h) -Z-NR_{12}R_{13}, i) -Z-C(O)-het, j) -Z-C(O)-(alquilo C_{1}-C_{6}), k) -Z-C(O)-NR_{12}R_{13}, l) -Z-C(O)-NR_{12}-Z-CN, m) -Z-C(O)-NR_{12}-Z-het, n) -Z-C(O)-NR_{12}-Z-arilo, o) -Z-C(O)-NR_{12}-Z-NR_{12}R_{13}, p) -Z-C(O)-NR_{12}-Z-O(alquilo C_{1}-C_{6}), q) -(alquil C_{1}-C_{6})-C(O)OH, r) -Z-C(O)O(alquilo C_{1}-C_{6}), s) -Z-O-(alquil C_{0}-C_{6})-het, t) -Z-O-(alquil C_{0}-C_{6})-arilo, u) -Z-O-(alquilo C_{1}-C_{6}) sustituido con 0 a 2 R_{x}, v) -Z-O-(alquil C_{1}-C_{6})-CH(O), w) -Z-O-(alquil C_{1}-C_{6})-NR_{12}-het, x) -Z-O-Z-het-Z-het, y) -Z-O-Z-het-Z-NR_{12}R_{13}, z) -Z-O-Z-het-C(O)-het, a1) -Z-O-Z-C(O)-het, b1) -Z-O-Z-C(O)-het-het, c1) -Z-O-Z-C(O)-(alquilo C_{1}-C_{6}), d1) -Z-O-Z-C(S)-NR_{12}R_{13}, e1) -Z-O-Z-C(O)-NR_{12}R_{13}, f1) -Z-O-Z-(alquil C_{1}-C_{3})-C(O)-NR_{12}R_{13}, g1) -Z-O-Z-C(O)-O(alquilo C_{1}-C_{6}), h1) -Z-O-Z-C(O)-OH, i1) -Z-O-Z-C(O)-NR_{12}-O(alquilo C_{1}-C_{6}), j1) -Z-O-Z-C(O)-NR_{12}-OH, k1) -Z-O-Z-C(O)-NR_{12}-Z-NR_{12}R_{13}, l1) -Z-O-Z-C(O)-NR_{12}-Z-het, m1) -Z-O-Z-C(O)-NR_{12}-SO_{2}-(alquilo C_{1}-C_{6}), n1) -Z-O-Z-C(=NR_{12})(NR_{12}R_{13}), o1) -Z-O-Z-C(=NOR_{12})(NR_{12}R_{13}), p1) -Z-NR_{12}-C(O)-O-Z-NR_{12}R_{13}, q1) -Z-S-C(O)-NR_{12}R_{13}, r1) -Z-O-SO_{2}-(alquilo C_{1}-C_{6}), s1) -Z-O-SO_{2}-arilo, t1) -Z-O-SO_{2}-NR_{12}R_{13}, u1) -Z-O-SO_{2}-CF_{3}, v1) -Z-NR_{12}C(O)OR_{13} o w1) -Z-NR_{12}C(O)R_{13};

o R_{9} y R_{10} se toman conjuntamente sobre el resto de fórmula A-5 formando a) =O o b) =NOR_{12};

R_{11} es a) -H, b) -(alquilo C_{1}-C_{5}), c) -(cicloalquilo C_{3}-C_{6}) o d) -(alquil C_{0}-C_{3})-arilo;

R_{12} y R_{13} para cada caso son independientemente a) -H, b) -(alquilo C_{1}-C_{6}), en el que 1 ó 2 átomos de carbono, distintos de los átomos de carbono de unión, pueden estar opcionalmente reemplazados por 1 ó 2 heteroátomos seleccionados independientemente de S, O y N y en el que cada átomo de carbono está sustituido con 0 a 6 halo, c) -(alquenilo C_{2}-C_{6}) sustituido con 0 a 6 halo o d) -(alquinilo C_{1}-C_{6}) en el que 1 átomo de carbono, distinto del átomo de carbono de unión, puede estar opcionalmente reemplazado por 1 átomo de oxígeno y en el que cada átomo de carbono está sustituido con 0 a 6 halo;

o R_{12} y R_{13} se toman conjuntamente con el N formando het;

o R_{6} y R_{14} o R_{15} se toman conjuntamente formando 1,3-dioxolanilo;

arilo es a) fenilo sustituido con 0 a 3 R_{x}, b) naftilo sustituido con 0 a 3 R_{x} o c) bifenilo sustituido con 0 a 3 R_{x};

het es un anillo de 5, 6 ó 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene de uno (1) a tres (3) heteroátomos seleccionados independientemente del grupo formado por nitrógeno, oxígeno y azufre; e incluye cualquier grupo bicíclico en el que cualquiera de los anillos heterocíclicos anteriores está condensado con un anillo bencénico u otro heterociclo; y el nitrógeno puede estar en el estado de oxidación que da la forma N-óxido; y está sustituido con 0 a 3 R_{x};

R_{x} es, para cada aparición, independientemente a) -halo, b) -OH, c) -(alquilo C_{1}-C_{6}), d) -(alquenilo C_{2}-C_{6}), e) -(alquinilo C_{2}-C_{6}), f) -O(alquilo C_{1}-C_{6}), g) -O(alquenilo C_{2}-C_{6}), h) -O(alquinilo C_{2}-C_{6}), i) -(alquil C_{0}-C_{6})-NR_{12}R_{13}, j) -C(O)-NR_{12}R_{13}, k) -Z-SO_{2}R_{12}, l) -Z-SOR_{12}, m) -Z-SR_{12}, n) -NR_{12}-SO_{2}R_{13}, o) -NR_{12}-C(O)-R_{13}, p) -NR_{12}-OR_{13}, q) -SO_{2}-NR_{12}R_{13}, r) -CN, s) -CF_{3}, t) -C(O)(alquilo C_{1}-C_{6}), u) =O, v) -Z-SO_{2}-fenilo o w) -Z-SO_{2}het';

arilo' es fenilo, naftilo o bifenilo;

het' es un anillo de 5, 6 ó 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene de uno (1) a tres (3) heteroátomos seleccionados independientemente del grupo formado por nitrógeno, oxígeno y azufre; y que incluye cualquier grupo bicíclico en el que cualquiera de los anillos heterocíclicos anteriores está condensado con un anillo bencénico u otro heterociclo;

con la condición de que:

1) X-R_{1} es distinto de hidrógeno o metilo;

2) cuando R_{9} y R_{10} son sustituyentes sobre el anillo A, éstos son distintos de mono- o di-metoxi;

3) cuando R_{2} y R_{3} se toman juntos formando =CHR_{11} u =O, en el que R_{11} es -O(alquilo C_{1}-C_{6}), entonces -X-R_{1} es distinto de alquilo C_{1}-C_{4};

4) cuando R_{2} y R_{3} tomados conjuntamente son C=O y R_{9} es hidrógeno sobre el anillo A; o cuando R_{2} es hidroxi, R_{3} es hidrógeno y R_{9} es hidrógeno sobre el anillo A, entonces R_{10} es distinto de -O-(alquilo C_{1}-C_{6}) u -O-CH_{2}-fenilo en la posición 2 del anillo A;

5) cuando X-R_{1} es alquilo C_{1}-C_{4}, alquenilo C_{2}-C_{4} o alquinilo C_{2}-C_{4}, R_{9} y R_{10} son distintos de monohidroxi u =O, incluyendo su forma diol, cuando se toman conjuntamente, y

6) cuando X o está ausente, R_{1} es distinto de un resto que contiene un heteroátomo seleccionado independientemente de N, O o S, directamente unido a la unión del anillo B y el anillo C. (Véase la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos número 60/132.130).

Cada uno de los antagonistas del receptor glucocorticoide citados antes y otros antagonistas del receptor glucocorticoide se pueden usar combinados con los compuestos de la presente invención para tratar o prevenir la diabetes, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con inhibidores de la sorbitol deshidrogenasa. Los inhibidores de la sorbitol deshidrogenasa reducen los niveles de fructosa y se han usado para tratar o prevenir complicaciones diabéticas como la neuropatía, nefropatía, retinopatía, cardiomiopatía, microangiopatía y macroangiopatía. Las patentes de los Estados Unidos números 5.728.704 y 5.866.578 describen compuestos y un procedimiento para tratar o prevenir las complicaciones diabéticas inhibiendo la enzima sorbitol deshidrogenasa.

Cada uno de los inhibidores de la sorbitol deshidrogenasa citados antes y otros inhibidores de la sorbitol deshidrogenasa se pueden usar en combinación con los compuestos de la presente invención para tratar la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos.

Los compuestos de la presente invención se pueden usar también en combinación con inhibidores del tipo I del intercambiador de sodio-hidrógeno (NHE-1). Los inhibidores de NHE-1 se pueden usar para reducir la lesión en los tejidos producida por isquemia. La lesión en los tejidos que se produce como resultado de isquemia de los tejidos cardíaco, cerebral, hepático, renal, pulmonar, del estómago, del músculo esqueletal, del bazo, pancreático, nervioso, de la médula espinal o de la retina, en la vasculatura o en el tejido intestinal es de gran importancia. Los inhibidores de NHE-1 pueden administrarse también para prevenir la lesión isquémica miocárdica perioperatoria.

Ejemplos de inhibidores de NHE-1 incluyen un compuesto que tiene la Fórmula Ic

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un profármaco del mismo o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de dicho profármaco, en la que

Z es un anillo de cinco miembros diaza, diinsaturado conectado a través de un carbono, que tiene dos nitrógenos contiguos, estando dicho anillo opcionalmente mono, di o trisustituido con hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente de R^{1}, R^{2} y R^{3};

o

Z es un anillo de cinco miembros triaza, diinsaturado conectado a través de un carbono, estando dicho anillo opcionalmente mono o disustituido con hasta dos sustituyentes seleccionados independientemente de R^{4} y R^{5};

siendo cada uno de R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4} y R^{5} independientemente hidrógeno, hidroxi(alquilo C_{1}-C_{4}), alquilo C_{1}-C_{4}, (alquil C_{1}-C_{4})tio, cicloalquilo C_{3}-C_{4}, (cicloalquil C_{3}-C_{7}) (alquilo C_{1}-C_{4}), alcoxi C_{1}-C_{4}, (alcoxi C_{1}-C_{4})(alquilo C_{1}-C_{4}), mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})carbamoílo, M o M(alquilo C_{1}-C_{4}), teniendo cualquiera de los restos alquilo C_{1}-C_{4} anteriores de uno a nueve átomos de flúor; estando dichos alquilo C_{1}-C_{4} o cicloalquilo C_{3}-C_{4} opcionalmente mono- o disustituido independientemente con hidroxi, alcoxi C_{1}-C_{4}, (alquil C_{1}-C_{4})tio, (alquil C_{1}-C_{4})sulfinilo, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonilo, alquilo C_{1}-C_{4}, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})carbamoílo o mono-N, o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})aminosulfonilo; y teniendo dicho cicloalquilo C_{3}-C_{4} opcionalmente de uno a siete átomos de flúor;

siendo M un anillo de cinco a ocho miembros parcialmente saturado, totalmente saturado o totalmente insaturado que opcionalmente tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, o un anillo bicíclico que comprende dos anillos de tres a seis miembros condensados parcialmente saturados, totalmente saturados o totalmente insaturados, tomados independientemente, que opcionalmente tienen de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente de nitrógeno, azufre y oxígeno;

estando dicho M opcionalmente sustituido, sobre un anillo si el resto es monocíclico, o sobre uno o ambos anillos si el resto es bicíclico, sobre un carbono o nitrógeno con hasta tres sustituyentes seleccionados independientemente de R^{6}, R^{7} y R^{8}, siendo uno de R^{6}, R^{7} y R^{8} opcionalmente un anillo de tres a siete miembros parcialmente saturado, totalmente saturado o totalmente insaturado que opcionalmente tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente de oxígeno, azufre y nitrógeno, opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{4} y además, R^{6}, R^{7} y R^{8} son opcionalmente hidroxi, nitro, halo, alcoxi C_{1}-C_{4}, (alcoxi C_{1}-C_{4})carbonilo, alquilo C_{1}-C_{4}, formilo, alcanoílo C_{1}-C_{4}, alcanoiloxi C_{1}-C_{4}, (alcanoil C_{1}-C_{4})amino, (alcoxi C_{1}-C_{4})carbonilamino, sulfonamido, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonamido, amino, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})amino, carbamoílo, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})carbamoílo, ciano, tiol, (alquil C_{1}-C_{4})tio, (alquil C_{1}-C_{4})sulfinilo, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonilo, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})aminosulfonilo, alquenilo C_{2}-C_{4}, alquinilo C_{2}-C_{4} o cicloalquenilo C_{5}-C_{7},

estando dichos sustituyentes R^{6}, R^{7} y R^{8} alcoxi C_{1}-C_{4}, alquilo C_{1}-C_{4}, alcanoílo C_{1}-C_{7}, (alquil C_{1}-C_{4})tio, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})amino o cicloalquilo C_{3}-C_{7} opcionalmente monosustituidos independientemente con hidroxi, (alcoxi C_{1}-C_{4})carbonilo, cicloalquilo C_{3}-C_{7}, alcanoílo C_{1}-C_{4}, (alcanoil C_{1}-C_{4})amino, (alcanoiloxi C_{1}-C_{4}), (alcoxi C_{1}-C_{4})carbonilamino, sulfonamido, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonamido, amino, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})amino, carbamoílo, mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})carbamoílo, ciano, tiol, nitro, (alquil C_{1}-C_{4})tio, (alquil C_{1}-C_{4})sulfinilo, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonilo, o mono-N- o di-N,N-(alquil C_{1}-C_{4})aminosulfonilo u opcionalmente sustituidos con uno a nueve átomos de flúor. (Véase la solicitud de patente PCT número PCT/IB99/00206).

Cada uno de los inhibidores de NHE-1 citados antes y otros inhibidores de NHE-1 se pueden usar en combinación con los compuestos de la presente invención para tratar o prevenir la diabetes, la resistencia a la insulina, la neuropatía diabética, la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las cataratas, la hiperglucemia, la hipercolesterolemia, la hipertensión, la hiperinsulinemia, la hiperlipidemia, la aterosclerosis o la isquemia de los tejidos.

Los ejemplos presentados a continuación son para ilustrar realizaciones particulares de la invención y no se destinan a limitar el alcance de la memoria descriptiva, incluyendo las reivindicaciones, en modo alguno.

Ejemplos Ejemplos químicos

A continuación se proporcionan procedimientos ejemplo para la fabricación de los compuestos de la invención y se ilustran en los esquemas de reacción. Estos procedimientos se pueden llevar a cabo en rutas de síntesis secuenciales o convergentes. Los procedimientos de purificación incluyen la cristalización y la cromatografía en fase normal o en fase inversa.

Como norma general, la preparación de los compuestos descritos en la presente memoria puede requerir protección de un grupo funcional remoto (por ejemplo, amina primaria, amina secundaria, carboxilo). La necesidad de dicha protección variará dependiendo de la naturaleza del grupo funcional remoto y de las condiciones de los procedimientos de preparación. La necesidad de dicha protección se determinará fácilmente por un experto en la técnica. El uso de tales procedimientos de protección/desprotección también está dentro del alcance de los expertos en la técnica. En T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York 1991 puede encontrarse una descripción general de grupos protectores y su uso.

En la presente memoria se usan las siguientes abreviaturas.

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Et	Etilo
DMF	Dimetilformamida
BOC	terc-butiloxicarbonilo
CBz	benciloxicarbonilo
Ph	Fenilo
h	Horas
d	Días
min	Minutos
equiv Equivalentes
DMSO	Dimetilsulfóxido
desc	Descomposición
p.f.	Punto de fusión
CIMS Espectrometría de Masas de Ionización Química

Esquema I

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Esquema I (continuación)

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Esquema II

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Esquema III

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Esquema III (continuación)

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Esquema IV

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Esquema V

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Esquema VI

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Esquema VII

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Esquema VIII

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Los pirrolilácidos bicíclicos de Fórmula 5 se pueden preparar por diversos procedimientos de síntesis. Con referencia al Esquema I, un procedimiento preferido (Hemetsberger, H. et al. Monatshefte fur Chemie, 103: 194-204 (1972)) comienza con la condensación de un alquiléster del ácido azido-acético con un aldehído de Fórmula 2 en un disolvente a base de alcohol en presencia de un alcóxido. El alcohol y el alcóxido preferidos son los derivados del alquiléster para evitar problemas de transesterificación. La reacción se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 25ºC, durante aproximadamente 1 a 24 horas, por lo general empleando de 3 a 8 equivalentes del alcóxido y una cantidad equimolar del alquiléster del ácido azido-acético. Las azidas resultantes se calientan seguidamente a reflujo en un disolvente inerte tal como xilenos, proporcionando los ésteres de heterociclopirrol de Fórmula 3. Un ejemplo de una preparación adecuada se muestra por el Procedimiento H siguiente.

Los aldehídos de Fórmula 2 se pueden preparar por procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la técnica o los procedimientos para su preparación se puede determinar a partir de la bibliografía (véase, por ejemplo, Ortiz, J.A. et al., Eur. J. Med. Chem., 23:477-482 (1988)). Con relación al Esquema II, las preparaciones ejemplo incluyen la formilación de heterociclos de Villsmeyer-Haack (R''=H) de fórmula 1 (véase O. Meth-Cohn and S. P. Stanforth en Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, Vol. 2 Pergamon, New York, 1991, C.H. Heathcock, Ed. p. 777), intercambio de metal-halógeno de bromo o yodoheterociclos (R''=Br, I) de Fórmula 1 o litiación de heterociclos de Fórmula 1 (R''=H), seguido pr el tratamiento de aril-litios de Fórmula 11 con una gente de formilación tal como dimetilformamida (Ortiz, J.A. et al., Eur. J. Med. Chem., 23:477-482 (1988)) o N-metil formanilida. (Véase D. Comins & S.P. Joseph en Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, Vol 5, Wiley, New York 1995, L. A. Paquette, Ed., p. 3503), reducción de ésteres heterocíclicos de Fórmula 12 (R=alquilo) o ácidos (R=H) a alcoholes de Fórmula 13 o aldehídos de Fórmula 2 (Nicolaou, K.C. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 36:166-7 (1997)) con agentes de reducción (Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, Vol. 8, I. Fleming, Ed. Pergamon, 1991, New York) tal como hidruro de litio y aluminio, hidruro de diisobutilaluminio o borano y la posterior oxidación de alcoholes de Fórmula 13 a aldehídos de Fórmula 2 usando agentes oxidantes (Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, Vol. 7, S.V. Ley, Ed. Pergamon, 1991, New York) tal como clorocromato de piridinio, dióxido de manganeso, reactivo de Swern y óxido de bario o halogenación de los aldehídos de Fórmula 14 usando fuentes de haluro electrófilas tales como N-halosuccinimida (R.M. Kellogg et al., J. Org. Chem., 33:2092-2909 (1968)), sales de N-fluoropiridinio (Umemoto, T. et al., J. Am. Chem. Soc., 112:8563-75 (1990)) o halógeno elemental (Ortiz, J.A. et al., Eur. J. Med. Chem., 23:477-482 (1988)).

Como alternativa se puede llevar a cabo la sustitución de los heterociclopirroles de Fórmula 3 por procedimientos convencionales análogos conocidos por los expertos en la técnica o se pueden determinar fácilmente los procedimientos de sustitución a partir de la bibliografía. Por ejemplo, con referencia al Esquema III, se puede llevar a cabo la sustitución mono- y bis-haluro por tratamiento con una fuente de haluro electrófila tal como N-halosuccinimida, sales de N-fluoropiridinio o halógeno elemental (Gale, W.W. et al., J. Org. Chem., 29:2160-2165 (1964)) produciendo los heterociclopirroles de Fórmula 4 (R', R'' =H y/o haluro). La sustitución metílica se puede llevar a cabo por formilación de Villsmeyer-Haack a aldehídos de Fórmula 4 (R'''=CHO), seguida por la reducción completa del grupo formilo en diversas condiciones de reducción tales como cianoborohidruro sódico en presencia de yoduro de cinc en dicloroetano (C.K. Lau et al. J. Org. Chem., 51: 3038-3043 (1964)). La sustitución metílica y de otros alquilos se puede llevar a cabo acoplando bromo- o yodoheterociclopirroles de Fórmula 3 (R=Br, I) con reactivos de alquil-metal como reactivos de alquil-cobre (Corey E.J. et al., J. Am. Chem. Soc.: 89: 3911-12 (1967)). También se pueden acoplar con los bromo- o yodoheterociclopirroles de Fórmula 3 (R=Br, I) en presencia de un catalizador como paladio alquenos y alquinos, en presencia de sales de cobre tales como yoduro de cobre (J.M. Tour et al., J. Org. Chem. 61: 6906-6921 (1996); G.M. Whitesides et al. J. Org. Chem., 53: 2489-2496 (1988)), y alquenil y alquinil estannanos (Stille, J.K. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 25: 508-524 (1986)). Los catalizadores de paladio incluyen, aunque no quedan limitados a los mismos, cloruro de paladio, diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) y acetato de paladio. Otras condiciones ejemplo útiles para formar enlaces carbono con anillos aromáticos se describen por K. Tamao, D.W. Knight, and K. Sonogashira en Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, Vol. 3 (Pergamon, New York, 1991, G. Pattenden, Ed., páginas 435-551). La condensación de hidroxilamina con ésteres formilados de Fórmula 3 (R'''=CHO) o ácidos de Fórmula 5 (R=CHO) puede realizarse directamente (Ford, R.E. et al., J. Med. Chem., 29, 538-549 (1986)) o después de una segunda etapa de hidratación (Malicorne, G. et al., Eur. J. Med. Chem. Chim. Ther., 26: 3-11 (1991) proporcionando nítricos. Como alternativa, la sustitución de nitrilos se puede llevar a cabo por acoplamiento de cianuro cuproso con los bromo- o yodoheterociclopirroles de Fórmula 3 (R=Br, I) en dimetilformamida (Klemm, L.H. et al., J. Heterocyclic Chem., 21: 785-9 (1984)). Otras condiciones ejemplo útiles para formar nitrilos se describen por R. Grashey en Comprehensive Organic Synthesis: Selectivity, Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry, Vol. 6 (Pergamon, New York, 1991, Ed. Winterfeldt, Ed., pág. 225). Un ejemplo de la preparación de nitrilos es el Procedimiento G siguiente.

Como alternativa, los procedimientos anteriormente citados de sustitución de los heterociclopirroles de Fórmula 3 se pueden aplicar también a las amidas de las Fórmulas 6 y 7.

El acoplamiento de un ácido de Fórmula 5 (Esquema I) con una amina de Fórmula A (Esquema IV) o P (Esquema VII) para preparar un compuesto de la presente invención se puede llevar a cabo de varias formas, que son análogas a las bien conocidas por los expertos en la técnica.

En un procedimiento típico de acoplamiento, se combinan el ácido y la amina con un agente de acoplamiento adecuado. Un agente de acoplamiento adecuado es un agente que transforme el grupo ácido carboxílico en una especie reactiva de modo que se forme una unión amida entre el ácido carboxílico y la amina.

El agente de acoplamiento puede proporcionar el acoplamiento en un procedimiento de una única etapa o se pueden necesitar varias etapas para conseguir el acoplamiento. Ejemplos de agentes de acoplamiento adecuados incluyen clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida-hidroxibenzotriazol (DEC/HBT), carbonildiimidazol, diciclohexilcarbodiimida/hidroxibenzotriazol, 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (EEDQ), carbonildiimidazol/HBT, anhídrido propanofosfónico (anhídrido del ácido propanofosfónico, PAA) y cianuro de dietilfosforilo.

La reacción de acoplamiento se lleva a cabo por lo general en un disolvente inerte, preferiblemente en un disolvente aprótico a una temperatura de aproximadamente -20ºC a aproximadamente 50ºC durante aproximadamente 1 a aproximadamente 48 horas, opcionalmente en presencia de una amina terciaria como trietilamina. Los disolventes adecuados incluyen acetonitrilo, diclorometano, acetato de etilo, dimetilformamida y cloroformo, o mezclas de los mismos.

En un ejemplo de un procedimiento de acoplamiento de varias etapas, el grupo ácido carboxílico se hace reaccionar con el agente de acoplamiento formando un intermedio activado, que puede aislarse en la primera etapa del procedimiento. En una segunda etapa, el intermedio activado se hace reaccionar entonces con la amina formando la amida. Ejemplos de agentes de acoplamiento que convierten un ácido en un intermedio activado incluyen el cloruro de tionilo, cloruro de oxalilo, que forman cloruros de ácidos, fluoruro cianúrico, que forma fluoruros de ácidos, o un cloroformiato de alquilo tal como cloroformiato de isobutilo o de isopropenilo (con una base de amina terciaria), que forma un anhídrido mixto del ácido carboxílico. Si el agente de acoplamiento es cloruro de oxalilo, es ventajoso emplear una pequeña cantidad de dimetilformamida como disolvente cooperante con otro disolvente tal como diclorometano, para catalizar la formación del cloruro de ácido. El cloruro de ácido se puede acoplar con la amina en un disolvente apropiado y una base adecuada. Las combinaciones disolvente/base aceptables incluyen diclorometano, dimetilformamida o acetonitrilo, o mezclas de los mismos en presencia de una base de amina terciaria tal como trietilamina. Otras combinaciones disolvente/base apropiadas incluyen agua o un alcohol C_{1}-C_{5}, o mezclas de los mismos, junto con un disolvente cooperante como diclorometano, tetrahidrofurano o dioxano, y una base como carbonato sódico o potásico, hidróxido sódico, potásico o de litio o bicarbonato sódico, en cantidad suficiente para consumir el ácido liberado en la reacción. El uso de un catalizador de transferencia de fase (de forma típica de 1 a 10% en moles) tal como un haluro de amonio cuaternario (por ejemplo, bromuro de tetrabutilamonio o cloruro de metil trioctilamonio) es ventajoso cuando se emplea una mezcla de disolventes cooperantes solo parcialmente miscibles (por ejemplo, diclorometano-agua o diclorometano-metanol). El uso de estos agentes de acoplamiento y la selección apropiada de los disolventes y las temperaturas son conocidos por los expertos en la técnica y se pueden determinar fácilmente a partir de la bibliografía. Estas y otras condiciones ejemplo útiles para acoplar ácidos carboxílicos con aminas se describen en Houben-Weyl, Vol. XV, parte II, E. Wunsch, Ed., G. Thieme Verlag, 1974, Stuttgart y M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer Verlag Berlin, 1984 y The Peptides: Analysis, Synthesis and Biology (Ed. E. Gross and J. Meienhofer) Vol. 1 a 5 (Academic Press, NY 1979-1983).

Las aminas que se hacen reaccionar con el grupo funcional ácido carboxílico para preparar una amida de la presente invención se pueden sintetizar de una serie de formas. Con referencia al Esquema IV, se puede proteger un alfa aminoácido de Fórmula A en el nitrógeno de la amina con un grupo protector apropiado (Pr) formando un aminoácido protegido de Fórmula B. Un experto en la técnica puede seleccionar fácilmente un grupo protector de amino adecuado. Por ejemplo, dos grupos protectores comunes son BOC, que se introduce tratando el aminoácido con di-terc-butildicarbonato, preferiblemente en un disolvente prótico o en una mezcla de disolventes a un pH elevado, y CBZ, que se introduce por tratamiento del aminoácido con cloroformiato de bencilo, preferiblemente en un disolvente prótico o una mezcla de disolventes, y una base. El compuesto aminoácido protegido en el amino de Fórmula B se acopla entonces con una amina apropiada de fórmula HNRR (en la que los grupos R son consistentes con los compuestos de la presente invención) en un procedimiento análogo a la reacción de acoplamiento expuesta antes para formar un compuesto de amida protegido de Fórmula C. La amida protegida de Fórmula C se puede desproteger entonces formando una amida de Fórmula D. Si el grupo protector es BOC, la desprotección se realiza de forma típica tratando el compuesto protegido con un ácido en un disolvente aprótico. Ácidos adecuados incluyen HCl, CH_{3}SO_{3}H y ácido trifluoroacético.

También puede desearse preparar ésteres de los compuestos de Fórmulas A o B. Con referencia al Esquema V, los ésteres de los compuestos A y B se pueden preparar haciendo reaccionar el compuesto con un alcohol apropiado y un catalizador ácido tal como ácido sulfúrico concentrado o por tratamiento con haluro de alquilo tal como yoduro de metilo y una base como carbonato potásico. Los compuestos de Fórmula E se pueden preparar también protegiendo un compuesto de Fórmula A y luego formando el ester. Como alternativa, los compuestos de Fórmula E se pueden preparar comenzando con un compuesto de Fórmula A, formando un éster y luego protegiendo el grupo amina. Son bien conocidos por los expertos en la técnica procedimientos análogos para la formación y separación de ésteres y la protección de grupos amina.

Conforme al Esquema VI, los compuestos de Fórmula A en los que R^{b} no es hidrógeno se pueden preparar como sigue. El aminoácido de Fórmula B se puede preparar por N-alquilación de un compuesto de Fórmula G, que es un alfa-aminoácido protegido en el grupo amino. La N-alquilación es bien conocida en la técnica y se puede llevar a cabo usando un agente de alquilación apropiado y una base adecuada. En Benoiton, Can. J. Chem., 55: 906-910 (1985) y Hansen, J. Org. Chem., 50: 945-950 (1977) se describen procedimientos específicos para la alquilación. Por ejemplo, cuando R^{b} es metilo, y Pr es BOC, se puede usar hidruro sódico y yoduro de metilo en tetrahidrofurano. La desprotección del compuesto de Fórmula B produce un compuesto de Fórmula A.

Como alternativa, se puede N-alquilar un compuesto de Fórmula H mediante una secuencia de tres etapas que implica la bencilación reductiva, tal como con benzaldehído seguido por hidrogenación catalizada por Pd/C, dando el derivado de mono-N-bencilo y la aminación reductiva con un compuesto carbonílico apropiado, por ejemplo, formaldehído y cianoborohidruro sódico para introducir R^{b} como metilo, dando el aminoácido sustituido con N-bencilo. El grupo protector N-bencilo se retira de forma conveniente, por ejemplo, por hidrogenación con un catalizador apropiado, proporcionando un compuesto de Fórmula A. Reinhold et al., J. Med. Chem., 11: 258-260 (1968) describen condiciones específicas para el procedimiento de alquilación en tres etapas.

Aunque se conocen muchos de los materiales de partida a base de alfa-aminoácidos, éstos se pueden sintetizar por una serie de procedimientos que son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, se pueden usar la síntesis de Strecker o variaciones de la misma. Por consiguiente, un aldehído, cianuro sódico o potásico y cloruro de amonio reaccionan formando un aminonitrilo. Se apreciará que el aldehído seleccionado está determinado por el aminoácido deseado. El aminonitrilo se hidroliza entonces con un ácido mineral formando el aminoácido deseado. Como alternativa, se puede usar el procedimiento de Bucherer-Berg en el que se forma hidantoína calentando un aldehído con carbonato amónico y cianuro potásico, seguido por hidrólisis, por ejemplo, con hidróxido de bario en dioxano a reflujo, con ácido o base, formando los compuestos deseados.

En revisiones de Duthaler, Tetrahedron, 50: 1539-1650 (1994) o de Williams, Synthesis of Optically Active Amino Acids, Pergamon, Oxford, U.K., 1989 se encuentran procedimientos adecuados para la síntesis y/o resolución de compuestos de Fórmula H (Esquema VI) (alfa-aminoácidos). Otro procedimiento se presenta en Corey and Link, J. Am. Chem. Soc., 114: 1906-1908 (1992).

La síntesis de los compuestos de la presente invención en los que Y es

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\melm{\delm{\para}{H}}{C}{\uelm{\para}{CH}}

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se lleva a cabo acoplando un compuesto de amida de Fórmula P (Esquema VII) con un ácido pirrolil carboxílico bicíclico de Fórmula 5. El procedimiento de acoplamiento se puede llevar a cabo como se ha descrito antes. La síntesis de las amidas de Fórmula P se ilustra por el Esquema VII. Para comenzar, se trata un aminoaldehído con el nitrógeno protegido de Fórmula J con cianuro sódico o potásico en una solución acuosa con un disolvente común tal como dioxano o acetato de etilo a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 50ºC, proporcionando un compuesto de Fórmula K que es una cianohidrina. La cianohidrina de Fórmula K se hace reaccionar entonces con un alcohol como metanol y un catalizador a base de ácido fuerte como HCl a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 50ºC, seguido por la adición de agua, si fuera necesaria. El grupo protector se retira entonces, si todavía está presente, por un procedimiento apropiado de desprotección, proporcionando un compuesto de Fórmula L. Por ejemplo, si el grupo protector es BOC, el compuesto de Fórmula L se forma directamente a partir del compuesto de Fórmula K, y no es necesaria la adición de agua. El compuesto de Fórmula L se puede proteger sobre el nitrógeno formando un compuesto de Fórmula M seguido por hidrólisis del éster con álcali acuoso a una temperatura de aproximadamente 0ºC a aproximadamente 50ºC en un disolvente inerte de reacción, dando lugar al hidroxiácido correspondiente de Fórmula N. El hidroxiácido de Fórmula N se acopla con una amina adecuada formando la aminoamida protegida de Fórmula O, que se desprotege seguidamente formando un compuesto de Fórmula P. En la publicación de documento PCT WO/9325574, Ejemplo 1a, se proporciona un ejemplo análogo de la conversión del compuesto de Fórmula K en el compuesto correspondiente de Fórmula L. Otros ejemplos análogos en los que se convierte una cianohidrina en un compuesto de Fórmula M se pueden encontrar en la patente de los Estados Unidos número 4.814.342 y en la publicación EPO 0438233.

Puede ser deseable tener una cierta estequiometría en las posiciones alfa y beta de los compuestos de Fórmula P. (La posición alfa es el átomo de carbono que contiene el grupo hidroxilo). La estereoquímica deseada se puede obtener mediante el uso de un único aldehído estereoisómero de Fórmula J. La cianohidrina de Fórmula K se puede preparar a partir del aldehído estereoquímicamente puro por tratamiento con cianuro sódico o potásico como se ha descrito antes, manteniendo la estereoquímica del carbono quiral del aldehído, dando lugar a una mezcla de estereoisómeros, que se pueden separar, como es bien conocido por los expertos en la técnica, por cristalización. Véase por ejemplo, Biochemistry, 31: 8125-8141 (1992). Como alternativa, la separación de los isómeros se puede efectuar por técnicas de cromatografía o recristalización después de la conversión de un compuesto de Fórmula K en un compuesto de Fórmula L, M, N, O o P, por procedimientos descritos en la presente y análogos a los bien conocidos en la técnica.

Con referencia al Esquema VIII, se pueden preparar los aminoaldehídos de Fórmula J a partir del alfa-aminoácido correspondiente de Fórmula Q. En un procedimiento, se protege el alfa-aminoácido de Fórmula Q en el nitrógeno y se esterifica formando un compuesto de Fórmula R. El compuesto de Fórmula R se reduce, por ejemplo, con hidruro de diisobutilaluminio en hexano o tolueno, o en una mezcla de ambos, a una temperatura de aproximadamente -78ºC a aproximadamente -50ºC, seguido por la extinción con metanol a -78ºC, como se describe en J. Med. Chem., 28: 1779-1790 (1985), formando el aldehído de Fórmula J.

Como alternativa, los aldehídos de Fórmula J se pueden preparar por oxidación de alcoholes de Fórmula T, por ejemplo, con piridina-SO_{3} a una temperatura de aproximadamente -10ºC a aproximadamente 40ºC en un disolvente inerte de reacción, preferiblemente dimetilsulfóxido. Los aminoalcoholes protegidos de Fórmula T, si no están disponibles comercialmente, se pueden preparar protegiendo los aminoalcoholes de Fórmula S. Los aminoalcoholes de Fórmula S se preparan mediante la reducción de aminoácidos de Fórmula Q. La reducción se puede llevar a cabo tratando los aminoácidos de Fórmula Q con hidruro de litio y aluminio conforme al procedimiento descrito por Dickman et al., Organic Synthesis; Wiley, New York, 1990; Collect. Vol. VIII, pág. 530, o con ácido sulfúrico-borohidruro sódico por el procedimiento de Abiko and Masamune, Tetrahedron Lett., 333: 5517-5518 (1992) o con borohidruro sódico-yodo conforme al procedimiento de McKennon and Myers, J. Org. Chem., 58: 3568-3571 (1993), en los que también se revisan otros procedimientos. La preparación del alfa-aminoácido y alfa-aminoácidos N-alquilados se ha descrito antes.

Además, las publicaciones PCT WO96/3985, publicada el 12 de diciembre de 1996 y WO96/39384, publicada el 12 de diciembre de 1996, contienen detalles adicionales y ejemplos de los procedimientos de aspectos de síntesis de los presentes compuestos.

Equipo y procedimientos generales

Los espectros de RMN se registraron en un espectrómetro Bruker AM300 o Varian XL-400 a aproximadamente 23ºC a 300 ó 400 MHz, respectivamente, para los núcleos de protones. A no ser que se indique de otro modo, los datos del espectro de RMN se registran para un espectrómetro a 400 MHz. Los datos del espectro de masas de rutina se obtuvieron usando un espectrómetro VG/Fisons Instruments Platform II que funcionaba con una fuente APCI (Ionización Química a Presión Atmosférica). Los puntos de fusión están sin corregir y se determinaron en un aparato de puntos de fusión capilar Thomas Hoover. A no ser que se indique de otro modo, los reactivos se usaron tal y como se obtuvieron de los suministradores comerciales. El término "concentra" se refiere a la eliminación del disolvente en un evaporador rotatorio. Las excepciones en el uso de los Procedimientos A-H se anotan de forma particular entre paréntesis, seguido de la mención del procedimiento.

Procedimientos generales de síntesis

Procedimiento A

Formación de amida usando 1-hidroxibenzotriazol hidratado y clorhidrato de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida

Se trató con 1 equivalente de clorhidrato de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida una mezcla 0,1-0,7 M a 0ºC de la amina primaria (1 equivalente, o una sal de la amina primaria y 1 equivalente de trietilamina por equivalente de HCl), 1 equivalente del ácido carboxílico especificado y 1 equivalente de 1-hidroxibenzotriazol hidratado (1 equivalente con respecto al ácido carboxílico) en diclorometano:dimetilformamida 3:1. La mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante varias horas, se agitó durante toda la noche, se concentró para eliminar el diclorometano y se repartió entre acetato de etilo y HCl 1-2N. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron dando un producto bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice y/o recristalización.

Procedimiento B

Formación de amida usando 1-hidroxi-7-azabenzotriazol hidratado y clorhidrato de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida

Se trató con 1 equivalente (correspondiente a la relación molar a ácido carboxílico) de clorhidrato de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida una mezcla 0,1-0,3M a 0ºC de la amina primaria o una sal de la amina primaria (1 equivalente), 1 equivalente de trietilamina, 1 equivalente del ácido carboxílico especificado y 1 equivalente de 1-hidroxibenzotriazol hidratado (1 equivalente con respecto al ácido carboxílico). La mezcla se dejó calentar hasta temperatura ambiente durante varias horas, se agitó durante toda la noche y se repartió entre acetato de etilo y HCl 1-2N. La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró dando un producto bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice.

Procedimiento C

Formación de amida usando 1-hidroxi-7-azabenzotriazol hidratado y metyoduro de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida

Se trató con 1,2 equivalentes de metyoduro de 1-(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida una mezcla 0,3M del clorhidrato de la amina primaria (1 equivalente), 1,2 equivalentes de trietilamina, 1 equivalente del ácido carboxílico especificado y 1,2 equivalentes de 1-hidroxibenzotriazol hidratado en dimetilformamida. La mezcla se agitó durante toda la noche y se repartió entre acetato de etilo y HCl 1N. La fase orgánica se lavó secuencialmente con HCl 1N y agua, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró dando un producto bruto.

Procedimiento D

Hidrólisis del éster etílico con hidróxido potásico

Se calentó a reflujo durante 1 a 7 horas una suspensión 0,1-0,8M del éster etílico (1 equivalente) y KOH (2 equivalentes) en agua, se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se agitó durante toda la noche y se extrajo con acetato de etilo. La fase acuosa se acidificó con HCl 2N y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron dando un producto bruto que se purificó por cromatografía y/o lavando con disolvente.

Procedimiento E

Hidrólisis del éster etílico con hidróxido sódico

Se calentó a 65ºC durante 2 horas una suspensión 0,1-0,8M del éster etílico (1 equivalente) y NaOH (10 equivalentes) en metanol, se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se concentró para eliminar el metanol, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La fase acuosa se acidificó con HCl 2N y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron dando un producto bruto que se purificó por recristalización.

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Procedimiento F

Hidrólisis del éster etílico con hidróxido de litio

Se calentó a 60-65ºC durante toda la noche una solución 0,1-0,3M del éster etílico (1 equivalente) y LiOH-H_{2}O (4-6 equivalentes) en tetrahidrofurano:metanol: agua 3:2:1, se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se concentró para eliminar el tetrahidrofurano y el metanol y se acidificó con HCl 1-2N. El precipitado resultante se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío dando el producto.

Procedimiento G

Formación de nitrilo con clorhidrato de hidroxilamina

Se calentó a 125ºC durante toda la noche una mezcla 0,1-0,2M del aldehído (1 equivalente) y clorhidrato de hidroxilamina (2,2-4 equivalentes) en dimetilformamida, se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas reunidas se lavaron con agua, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron dando el producto bruto que se purificó por cromatografía sobre gel de sílice.

Procedimiento H

Anulación con éster etílico del ácido azido-acético

Se trató una solución 0,6-1,2M a 0ºC de sodio (3-4 equivalentes) en etanol con una mezcla del aldehído (1 equivalente) y éster etílico del ácido azido-acético (1 equivalente respecto al sodio), gota a gota de modo que la temperatura de la reacción se mantuvo a 5-10ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 1-2 horas, se extinguió con NH_{4}Cl acuoso saturado frío y se extrajo con éter. Las fases orgánicas reunidas se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron. El residuo se purificó por cromatografía sobre gel de sílice. Se calentó a reflujo durante 20 a 60 minutos una solución 0,1-0,2M del acrilato resultante en xilenos y se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. La solución de reacción se enfrió además para inducir la cristalización del producto o se concentró dando el producto bruto que se purificó lavando con hexanos y/o por cromatografía sobre gel de sílice.

Ejemplo 1 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (Soth, S. et al., Bull.Soc. Chim. Fr., 2511-2515 (1975)) y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento A (también se añadió 4-(dimetilamino)piridina (0,1 eq.) a la mezcla de reacción).

P.f.: 137-145ºC, CIMS m/e 430,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,67 (s a, 1H), 7,74 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,21 (m, 4H), 7,11 (m, 1H), 6,96 (s, 3H), 5,03 (dd, J= 2,9, 7,5 Hz, 0,5 H), 4,93 (m, 1H), 4,87 (m, 0,5 H), 4,80 (dd, J= 2,9, 7,5 Hz, 0,5 H), 4,74 (s a, 0,5H), 4,40 (s a, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,06 (dc, J= 3,2, 5,3 Hz, 0,5H), 3,99-3,87 (m, 1,5H), 3,54 (m, 1H), 3,38 (m, 0,5H), 3,25-3,06 (m, 2,5H), 2,94-2,81 (m, 2H).

Ejemplo 1a

Ester bencílico del ácido [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]carbámico

Se acoplaron ácido (2R,3S)-3-benciloxicarbonilamino-2-hidroxi-4-fenilbutírico (Takita, T. et al., J. Med. Chem., 20: 510-515 (1977) y clorhidrato de pirrolidin-(3S,4S)-diol según el Procedimiento A (dimetilformamida como disolvente de la reacción concentrado a la mitad de volumen antes del procedimiento).

CIMS m/e 415,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 7,28-7,15 (m, 10H), 7,07-7,01 (m, 1H), 4,94-4,75 (m, 4,5H), 4,65 (d, J= 7,7 Hz, 0,5H), 4,09-3,88 (m, 4H), 3,51-3,38 (m, 1H), 3,27-3,07 (m, 3H), 2,83-2,63 (m, 2H).

Ejemplo 1b

(3S)-Amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona

Según un procedimiento de Takita, T. et al. (J. Med. Chem., 20: 510-515 (1977)) se agitó una mezcla de éster bencílico del ácido [(1S)-bencil-3-(3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]carbámico (1,2 g, 2,9 mmol) y paladio al 10% sobre carbón (120 mg) en metanol (20 ml) en atmósfera de hidrógeno (2,72-3,01 atm) en un dispositivo de Parr durante la la noche, se filtró a través de Celite (R), y se concentró. Se obtuvo el producto en forma de un sólido pegajoso (1,0 g, 100%).

CIMS m/e 281,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 7,27-7,13 (m, 5H), 4,95-4,80 (m, 3H), 3,93 (s a, 2H), 3,83 (dd, J= 3,3, 9,1 Hz, 1H), 3,45-3,05 (m, 6H), 2,99 (dc, J= 3,5, 6,3 Hz, 1H), 2,65 (m, 1H), 2,50 (m, 1H).

Ejemplo 2 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento A.

P.f.: 143-145ºC, CIMS m/e 508,0/510,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,72 (s a, 1H), 7,84 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,22 (m, 5H), 7,11 (m, 1H), 6,99 (s, 1H), 5,04 (d, J= 7,3 Hz, 0,5H), 4,95 (m, 1H), 4,89 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,80 (d, J= 7,7 Hz, 0,5H), 4,75 (d, J= 4,4 Hz, 0,5H), 4,40 (m, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,00-3,85 (m, 2H), 3,54 (m, 1H), 3,39 (dd, J= 4,9, 12,6 Hz, 0,5H), 3,22 (m, 1,5H), 3,16-3,06 (m, 1H), 2,94-2,81 (m, 2H).

Ejemplo 2a

Ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (Eras, J., Gálvez, C, García, F., J. Heterocycl. Chem., 21: 215-217 (1984)) según el Procedimiento F.

CIMS m/e 244,0/246,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,66 (s a, 1H), 12,10 (s a, 1H), 7,22 (s, 1H), 6,87 (d, J= 2,1 Hz, 1H).

Ejemplo 3 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 15:1 diclorometano:dimetilformamida, fases orgánicas combinadas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 154-157ºC, CIMS m/e 442,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,58 (m, 1H), 7,66 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,22-7,10 (m, 5H), 6,86 (s, 1H), 6,64 (s, 1H), 5,03-4,73 (m, 3H), 4,38 (s a, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,98-3,88 (m, 2H), 3,53 (m, 1H), 3,39-3,05 (m, 3H), 2,90-2,83 (m, 2H), 2,38 (s, 3H).

Ejemplo 3a

Ester etílico del ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Utilizando un procedimiento de C.K. Lau et al. (J. Org. Chem., 51: 3038-3043 (1986)), se agitaron una mezcla de éster etílico del ácido 2-formil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (Soth, S. et al., Bull. Soc. Chim. Fr., 2511-2515 (1975), 500 mg, 2,24 mmol), ZnI_{2} (1,08 g, 3,36 mmol) y NaBH_{3}CN (1,06 g, 16,8 mmol) en dicloroetano (25 ml) durante 7 días y se inactivó con NH_{4}Cl acuoso saturado (25 ml). La mezcla bifásica resultante se agitó durante otros 30 minutos, se extrajo con acetato de etilo, se secó sobre Na_{2}SO_{4}, y se concentró. Se purificó el producto por cromatografía Chromatotron (3:2 hexanos: éter) y se obtuvo en forma de una espuma blanca (233 mg, 50%). P.f.: 107-109ºC, CIMS m/e 208,3 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,13 (s a, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 4,33 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,36 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

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Ejemplo 3b

Ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento E.

P.f.: 180-182ºC desc., CIMS m/e 180,1 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,36 (s, 1H), 11,93 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,66 (s, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,36 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 3c

Ester terc-butílico del ácido [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]carbámico

Se acoplaron ácido (2R,3S)-3-terc-butoxicarbonilamino-2-hidroxi-4-fenilbutírico y clorhidrato de pirrolidin-(3R,
4S)-diol según el procedimiento A (1,05 eq. de trietilamina, 1,1 eq. ácido carboxílico, 1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, después de la eliminación de diclorometano, se repartió el residuo entre acetato de etilo y NaOH 2N, se lavaron las fases orgánicas combinadas secuencialmente con HCl 2N y NaCl saturado).

CIMS m/e 381 (MH^{+}).

Ejemplo 3d

(Clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona

Se añadió a una disolución a 0ºC de éster terc-butílico del ácido [(1S)-bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]carbámico (1,1 g, 2,9 mmol) en metanol (4 ml), HCl 4N en dioxano (7,2 ml, 28,9 mmol). Se dejó calentar la disolución lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción y se lavó el residuo con metanol y se secó a vacío. Se obtuvo el producto en forma de un sólido blanco (1,03 g, 113%).

CIMS m/e 281,2 (MH^{+}).

Ejemplo 4 [1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (\pm)-2-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 15:1 diclorometano:dimetilformamida, fases orgánicas combinadas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 134-136ºC, CIMS m/e 412,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,60 (s, 1H), 8,37 (m, 1H), 7,27-6,98 (m, 6H), 6,65 (s, 1H), 4,99-4,73 (m, 3H), 4,05-3,82 (m, 2,5H), 3,40-2,87 (m, 5,5H), 2,38 (s, 3H).

Ejemplo 4a

Ester terc-butílico del ácido (\pm)-[1-bencil-2-((3R,4S)- dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]carbámico

Se acoplaron Boc-DL-fenilalanina y clorhidrato de pirrolidin-(3R,4S)-diol según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, diclorometano, tiempo de reacción 3 días).

CIMS m/e 351,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,28-7,19 (m, 5H), 5,35 (m, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,14-3,99 (m, 1,5H), 3,78-3,63 (m, 1,5H), 3,46-3,34 (m, 2H), 3,00-2,65 (m, 3H), 1,40 (s, 9H).

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Ejemplo 4b

Clorhidrato de (\pm)-2-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona

Se añadió a una disolución a 0ºC de éster terc-butílico del ácido (\pm)-[1-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]carbámico (6,5 g, 20 mmol) en metanol (8 ml), HCl 4N en dioxano (50 ml, 200 mmol). Se dejó calentar la disolución lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción blanca resultante se diluyó con éter y se filtró el precipitado, se lavó con éter y se secó a vacío. Se obtuvo el producto en forma de un sólido blanco (5 g, 87%).

CIMS m/e 251,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,28 (s a, 3H), 7,38-7,21 (m, 5H), 5,11-4,93 (m, 2H), 4,34-4,22 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 3,81-3,70 (m, 1H), 3,89 (m, 0,5H), 3,47 (m, 0,5H), 3,33-2,85 (m, 4H), 2,63 (m, 1H).

Ejemplo 5 [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, fases orgánicas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 140.142ºC, CIMS m/e 477,9/479,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,73 (s, 1H), 8,55 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,26-7,09 (m, 7H), 5,00 (s a, 0,5H), 4,91-4,85 (m, 1,5H), 4,77 (m, 1H), 4,07-3,93 (m, 1,5H), 3,83 (m, 1,5H), 3,41-3,25 (m, 1H), 3,13 (m, 2H), 3,00-2,87 (m, 2H).

Ejemplo 5a

Ester terc-butílico del ácido [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]carbámico

Se acoplaron Boc-L-fenilalanina y clorhidrato de pirrolidin-(3R,4S)-diol según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, diclorometano, mezcla de reacción diluida con acetato de etilo y lavada secuencialmente con NaOH 1N, HCl 1N y cloruro de sodio saturado antes del secado),

CIMS m/e 351,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 7,25-7,13 (m, 5H), 7,06 (dd, J= 8,4, 13,6 Hz, 1H), 4,98 (d, J= 5,4 Hz, 0,5H), 4,91 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,84 (m, 1H), 4,25 (dd, J= 8,5, 14,3 Hz), 4,02 (m, 0,5H), 3,94 (m, 0,5H), 3,79 (m, 1H), 3,68 (dd, J= 5,9, 10,1 Hz, 0,5 H), 3,38 (dd, J= 5,3, 12,2 Hz, 0,5H), 3,27-3,10 (m, 3H), 2,83-2,67 (m, 2H), 1,27 (s, 5H), 1,25 (s, 4H).

Ejemplo 5b

Clorhidrato de (2S)-amino-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona

Se añadió a HCl 1N en dioxano (120 ml, 480 mmol), éster terc-butílico del ácido [(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]carbámico (27 g, 77 mmol). La disolución se agitó durante 2,5 horas y se concentró. Se obtuvo el producto en forma de un sólido blanco (21,5 g, 98%).

CIMS m/e 251,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 8,33 (s a, 3H), 7,32-7,16 (m, 5H), 5,10-4,86 (m, 2H), 4,25-4,13 (m, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,73-3,66 (m, 1H), 3,54 (m, 0,5H), 3,46-3,23 (m, 1,5H), 3,18-3,05 (m, 2H), 3,00 (m, 0,5H), 2,91-2,79 (m, 1H), 2,57 (dd, J= 5,6, 10,0 Hz, 0,5H).

Ejemplo 6 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, fases orgánicas combinadas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 148-152ºC, CIMS m/e 464,0/465,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,71 (m, 1H), 7,84 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,23-6,98 (m, 7H), 5,05-4,74 (m, 3H), 4,39 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,02-3,88 (m, 2H), 3,54 (m, 0,5H), 3,41-3,06 (m, 3,5H), 2,94-2,83 (m, 2H).

Ejemplo 6a

Ester etílico del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Utilizando un procedimiento modificado de R.M. Kellogg et al. (J. Org. Chem., 33: 2902-290) (1968)), se añadió a una disolución a 0ºC de éster etílico del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (Eras, J., Gálvez, C, García, F., J. Heterocycl. Chem., 21:215-217 (1984), 1,45 g, 7,44 mmol) en ácido acético (15 ml) y CHCl_{3} (15 ml), N-clorosuccinimida (1,04 g, 7,81 mmol) durante 2 horas. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante varias horas, se agitó durante la noche, se concentró para eliminar el cloroformo, se diluyó con agua, se alcalinizó con NaOH 5N y se extrajo con acetato de etilo. Se lavaron las fases orgánicas combinadas con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secaron sobre MgSO_{4}, y se concentraron. Se purificó el producto por cromatografía Chromatron (radial) utilizando 90:10 hexanos/éter dietílico (90:10). Por último, se purificó adicionalmente el producto de recristalización por cromatografía en columna ultrarrápida utilizando 90:10 de éter de petróleo/éter isopropílico. El producto resultante se obtuvo en forma de un sólido blanco (824 mg, 48%).

CIMS m/e 228,2/230,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,28 (s a, 1H), 6,98 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 4,33 (c, J= 7,2 Hz, 2H), 1,35 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 6b

Ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento D (reacción calentada a 85ºC).

CIMS m/e 200,1/202,1 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,66 (s a, 1H), 12,08 (s, 1H), 7,11 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,86 (t, J= 2,1 Hz, 1H).

Ejemplo 7 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, fases orgánicas combinadas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 142-145ºC, CIMS m/e 432,1/434,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,72 (m, 1H), 8,55 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,28-7,10 (m, 7H), 5,00 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,99-4,70 (m, 2,5H), 4,09-3,76 (m, 2,5H), 3,41-3,24 (m, 2H), 3,13 (m, 1,5H), 3,02-2,87 (m, 2H).

Ejemplo 8 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, 0,06 M).

P.f.: 130-134ºC (desc.), CIMS m/e 496,2/498,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,13 (s a, 1H), 7,40-7,15 (m, 7H), 5,51 (d, J= 5,8 Hz, 0,5H), 5,38 (d, J= 6,3 Hz, 0,5H), 4,99 (d, J= 4,9 Hz, 1H), 4,92 (d, J= 4,8 Hz, 0,5H), 4,85 (d, J= 4,1 Hz, 0,5H), 4,55-4,40 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,08-3,90 (m, 2H), 3,56-2,89 (m, 6H).

Ejemplo 8a

Ester etílico del ácido 2,4-dicloro-6H-tienol[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se añadió a una disolución a 0ºC de éster etílico del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (180 mg, 0,92 mmol) en ácido acético (2 ml) y CHCl_{3} (2 ml), N-clorosuccinimida (294 mg, 2,2 mmol) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante varias horas, se agitó durante la noche, se concentró para eliminar el cloroformo, se diluyó con agua, se alcalinizó con NaOH 5N y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO_{3} acuoso saturado, se secaron sobre MgSO_{4}, y se concentraron. El producto se purificó por cromatografía Chromatron (4:1 hexanos:éter) y se obtuvo en forma de un sólido blanco (180 mg, 74%).

P.f.: 166-167ºC, CIMS m/e 262,1/264.1 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,21 (s a, 1H), 6,90 (s, 1H), 4,37 (c, J= 7,2 Hz, 2H), 1,39 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 8b

Ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3b]pirrol-5-carboxílico según el procedimiento E (reflujo durante 12 horas antes de dejar enfriar a temperatura ambiente, acidificación con HCl concentrado, sin purificación).

CIMS m/e 234,0/236,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,28 (s a, 1H), 7,17 (s, 1H).

Ejemplo 9 [1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico (Soth, S., Farnier, M, Paulmier, C., Can. C. Chem., 56, 1429-34 (1978)) y clorhidrato de (\pm)-2-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento A (9:1 diclorometano:dimetilformamida, 0,06 M, fases orgánicas combinadas lavadas con NaOH 2N, secadas sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 212ºC, CIMS m/e 400,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,59 (m, 1H), 8,51 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,36 (d, J= 5,2 Hz, 1H), 7,30-7,11 (m, 5H), 6,92 (m, 1H), 5,01 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,92 (d, J= 4,8 Hz, 0,5H), 4,87-4,76 (m, 2H), 4,04-3,93 (m, 1H), 3,83 (m, 1,5H), 3,43-3,25 (m, 2,5H), 3,13 (m, 1H), 3,03-2,86 (m, 2H).

Ejemplo 10 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]-5-pirrol-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-bromo-4H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento B (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxi-7-azabenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida antes del procedimiento, fases orgánicas combinadas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 138-143ºC, CIMS m/e 508,0/510,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,68 (m, 1H), 7,86 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,25-7,18 (m, 4H), 7,12-7,08 (m, 2H), 7,02 (s, 1H), 5,05 (d, J= 7,5 Hz, 0,5 H), 4,95 (m, 1H), 4,88 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,81 (d, J= 7,5 Hz, 0,5H), 4,75 (d, J= 3,5 Hz, 0,5H), 4,46-4,37 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,08-3,85 (m, 2H), 3,54 (m, 1H), 3,40-3,05 (m, 3H), 2,95-2,81 (m, 2H).

Ejemplo 10a

Ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico (Eras, J., Gálvez, C, García, F., J. Heterocycl. Chem., 21: 215-217 (1984)) según el procedimiento D (después del enfriamiento a temperatura ambiente, acidificación con HCl 2N, filtración del precipitado resultante, suspensión en tolueno, concentración, sin purificación).

CIMS m/e 244,0/246,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,63 (s, 1H), 12,04 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 6,97 (s, 1H).

Ejemplo 11 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento A (fases orgánicas combinadas lavadas con NaOH 2N, secadas sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 185-190ºC, CIMS m/e 430,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,57 (s, 0,5H), 11,53 (s, 0,5H), 7,80 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,32 (dd, J= 0,9, 5,3 Hz. 1H), 7,23 (m, 4H), 7,12 (m, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,91 (m, 1H), 5,06 (d, J= 7,3 Hz, 0,5H), 4,96 (m, 1H), 4,89 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,82 (d, J= 7,5 Hz, 0,5H), 4,76 (d, J= 4,2 Hz, 0,5H), 4,45-4,38 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,01-3,86 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 3,40 (dd, J= 4,9, 12,6 Hz, 0,5H), 3,23 (m, 1,5H), 3,17-3,07 (m, 1H), 2,97-2,83 (m, 2H).

Ejemplo 12 [1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (\pm)-2-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento A (1:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción agitada durante 3 días, fases orgánicas combinadas lavadas con NaOH 2N, secadas sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 100-101ºC (desc.), CIMS m/e 462,2/464,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,33 (m, 1H), 8,41 (dd, J= 2,8, 8,2 Hz, 1H), 7,27-7,18 (m, 4H), 7,13 (m, 1H), 6,93 (d, J= 5,8 Hz, 1H), 6,69 (d, J= 0,8 Hz, 1H), 4,98-4,75 (m, 3H), 3,99 (m, 0,5H), 3,93 (m, 0,5H), 3,81 (m, 1,5H), 3,41-3,21 (m, 2,5H), 3,12 (m, 1H), 3,00-2,82 (m, 2H).

Ejmeplo 12a

Ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico (Krutosikova, A., Kovac, J. Dandarova, M, Lesko, J, Ferik, S., Collect. Czech. Chem. Commun., 46: 2564-2573 (1981)) según el procedimiento E (4 eq. de NaOH 2N, etanol, reflujo durante 5 horas, temperatura ambiente durante la noche, después de la concentración para eliminar el etanol, reparto del residuo entre acetato de etilo y HCl 2N, fases orgánicas combinadas secadas sobre Na_{2}SO_{4}, sin purificación).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,47 (s a, 1H), 11,67 (s, 1H), 6,76 (d, J= 0,8 Hz, 1H), 6,67 (t, J= 0,8 Hz, 1H).

Ejemplo 13 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento A (2:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción agitada durante 3 días, fases orgánicas combinadas lavadas con NaOH 2N, secadas sobre Na_{2}SO_{4}.

P.f.: 112-123ºC (desc.), CIMS m/e 492,1/494,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,31 (s, 0,5H), 11,27 (s, 0,5H), 7,71 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,25-7,18 (m, 4H), 7,11 (m, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,68 (d, J= 2,9 Hz, 1H), 5,05-4,73 (m, 3H), 4,44-4,34 (m, 1H), 4,17 (s a, 1H), 3,98-3,85 (m, 2H), 3,56-3,48 (m, 1H), 3,40-3,06 (m, 3H), 2,94-2,80 (m, 2H).

Ejemplo 14 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 15:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción agitada durante 3 días, después NaHCO_{3} acuoso saturado, fases orgánicas combinadas lavadas con agua, secadas sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 179-184ºC, CIMS m/e 400,1 (MH^{+}), 398,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,79 (s a, 1H), 8,52 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,34-7,16 (m, 6H), 7,04 (m, 2H), 5,04 (d, J= 5,1 Hz, 0,5H), 4,96 (d, J= 4,9 Hz, 0,5H), 4,90-4,80 (m, 2H), 4,09-3,98 (m, 1H), 3,89 (m, 1,5H), 3,49-3,29 (m, 2,5H), 3,19 (m, 1H), 3,08-2,91 (m, 2H).

Ejemplo 15 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, la mezcla de reacción se agitó durante 3 días, las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 140-143ºC, CIMS m/e 476.1/478,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,73 (m, 1H), 8,61 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,34-7,15 (m, 6H), 5,05-4,84 (m, 3H), 4,15-3,85 (m, 2,5H), 3,48-2,95 (m, 5,5H).

Ejemplo 16 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-metil-4H-tieno[3,2b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción agitada durante 3 días, fases orgánicas combinadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado, secadas sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 128-130ºC, CIMS m/e 412,2 ((M-H)^{+}), 414,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,40 (m, 1H), 8,38 (m, 1H), 7,37-7,05 (m, 6H), 6,65 (s, 1H), 4,97 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,90-4,76 (m, 2,5H), 4,07-3,82 (m, 2,5H), 3,42-3,25 (m, 2H), 3,13 (m, 1,5H), 3,01-2,87 (m, 2H), 2,44 (d, J= 1 Hz, 3H).

Ejemplo 16a

Ester etílico del ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 5-metil-2-tiofencarboxaldehído según el Procedimiento H (fases orgánicas de acrilato secadas sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 129-130ºC, CIMS m/e 208,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,90 (s a, 1H), 7,04 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 4,33 (c, J= 7,1 Hz, 1H), 2,54 (s, 3H), 1,36 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 16b

Ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento D (después del enfriamiento a temperatura ambiente, acidificación con HCl 2N, extracción con acetato de etilo, fases orgánicas secadas sobre Na_{2}SO_{4}, sin purificación).

CIMS m/e 180,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,35 (s a, 1H), 11,72 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,73 (s, 1H), 2,51 (s, 3H).

Ejemplo 17 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,1 eq. de clorhidrato 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, 25:1 diclorometano:dimetilformamida, tiempo de reacción 2 días, fases orgánicas combinadas lavadas con agua antes de NaHCO_{3} acuoso saturado, secado sobre Na_{2}SO_{4}).

P.f.: 203-204ºC, CIMS m/e 468,1/470,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,20 (s, 1H), 7,65-7,58 (m, 1H), 7,28-7,08 (m, 6H), 5,04 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 4,98-4,80 (m, 3H), 4,08-3,95 (m, 1H), 3,91-3,74 (m, 2H), 3,26-3,10 (m, 2H), 3,10-2,88 (m, 2H).

Ejemplo 18 [(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-ciano-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-(3-hidroxiazetidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B.

CIMS m/e 395,1 (MH^{+})

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,09 (s, 1H), 8,74 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,29-7,12 (m, 6H), 5,68 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 4,28 (m, 0,5H), 4,11-3,90 (m, 2H), 3,69 (m, 0,5H), 3,57-3,49 (m, 1H), 3,01-2,88 (m, 2H).

Ejemplo 18a

Ácido 2-ciano-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se trató ácido 2-formil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (Soth et al., Bull. Soc. Chim. Fr., 2511-2515 (1975)) con clorhidrato de hidroxilamina según el Procedimiento G (temperatura de 100ºC durante 13 horas, 125ºC durante 7 horas, después de enfriamiento a temperatura ambiente, la concentración proporcionó el producto bruto).

CIMS m/e 190,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 13,03 (s a, 1H), 12,39 (s a, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,04 (s, 1H).

Ejemplo 19 [(1S)-Bencil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-morfolin-4-il-3-fenilpropan-1-ona (Véase por ejemplo Suzuki, K, Fujita, H., Sasaki, Y, Shiratori, M., Sakurada, S., Kisara, K., Chem. Pharm. Bull., 36, 4834-40 (1988)) según el Procedimiento C (disolución del producto en acetato de etilo, lavado con agua, secado sobre MgSO_{4}, concentrado).

P.f.: 108-110ºC, CIMS m/e 416,3/418,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,84 (m, 1H), 8,65 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 7,39-7,13 (m, 7H), 5,08 (c, J=7,6 Hz, 1H), 3,60-3,30 (m, 7H), 3,23 (m, 1H), 3,09-2,95 (m, 2H).

Ejemplo 20 [(1S)-Dimetilcarbamoíl-2-feniletil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y trifluoroacetato de (2S)-amino-N,N-dimetil-3-fenilpropionamida (Véase por ejemplo, Holladay, N. et al., J. Med. Chem., 37, 630-5 (1994)) según el Procedimiento C (producto lavado con acetato de etilo).

P.f.: 234-235ºC, CIMS m/e 374,2/376,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,72 (s, 1H), 8,53 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,23 (m, 4H), 7,13 (m, 3H), 5,01 (m, 1H), 3,01-2,88 (m, 5H), 2,78 (s, 3H).

Ejemplo 21 [(1S)-Bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-3-fenilpropan-1-ona (documento WO96/39384, ejemplo 40a) según el Procedimiento C (disolución del producto en acetato de etilo, lavado con agua, secado sobre MgSO_{4}, concentrado).

P.f.: 125-129ºC, CIMS m/e 450,2/452,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,80 (m, 1H), 8,75 (dd, J= 8,1, 12,9, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,26-7,14 (m, 5H), 5,08-4,97 (m, 1H), 4,81 (m, 0,5H), 4,63 (d, J= 11,4, 0,5H), 4,55 (d, J= 12,5, 0,5H), 4,45 (d, J= 12,4, 0,5H), 4,25 (m, 1H), 3,90-3,75 (m, 1H), 3,55-3,35 (m, 2H), 3,05 (m, 2H).

Ejemplo 22 Ester etílico del ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}piperidin-4-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato del éster etílico del ácido 1-[(2S)-amino-3-fenilpropionil]piperidin-4-carboxílico según el Procedimiento C (disolución del producto en acetato de etilo, lavado con agua, secado sobre MgSO_{4}, concentrado).

P.f.: 104-105ºC, CIMS m/e 486,2/488,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,84 (m, 1H), 8,64 (t, J= 8,8 Hz, 1H), 7,32-7,14 (m, 7H), 5,10 (m, 1H), 4,30-3,89 (m, 4H), 3,15-2,92 (m, 3H), 2,80-2,50 (m, 2H), 1,83-1,69 (m, 2H), 1,52-0,94 (m, 5H).

Ejemplo 22a

Ester etílico del ácido 1-((2S)-terc-butoxicarbonilamino-3-fenilpropionil)piperidin-4-carboxílico

Se acoplaron Boc-L-fenilalanina (1,1 eq.) y el éster etílico del ácido piperidin-4-carboxílico según el Procedimiento A (1,5 eq. de hidrato de 1-hidroxibenzotriazol, 1,3 eq. de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, temperatura ambiente, diclorometano, mezcla de reacción vertida sobre agua, acidificada con HCl 1N, precipitado resultante filtrado, filtrado extraído con CHCl_{3}, fase orgánica lavada secuencialmente con agua y salmuera, secada sobre MgSO_{4} antes de concentración).

CIMS m/e 405,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,26-7,14 (m, 5H), 5,40 (dd, J= 8,9, 19,3 Hz, 1H), 4,82 (m, 1H), 4,34-4,24 (m, 1H), 4,09 (dc, J= 2,0, 7,1 Hz, 2H), 3,57 (m, 1H), 2,99-2,88 (m, 2,5H), 2,72 (m, 1H), 2,45-2,32 (m, 1,5H), 1,95-1,79 (m, 1,5H), 1,58 (m, 2H), 1,40 (d, J= 2,1 Hz, 9H), 1,23 (m, 3H), 0,68 (m, 0,5H).

Ejemplo 22b

Clorhidrato del éster etílico del ácido 1-((2S)-amino-3- fenilpropionil)piperidina-4-carboxílico

Se hizo circular HCl gaseoso a través de una disolución de éster etílico del ácido 1-((2S)-terc-butoxicarbonilamino-3-fenilpropionil)piperidin-4-carboxílico (11 g, 27,20 mmol) en acetato de etilo (150 ml) durante 10 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se concentró, se redisolvió en acetato de etilo y éter, y se concentró. Se precipitó el producto bruto con hexanos, se filtró y se secó a vacío proporcionando el compuesto del título (9,1 mg, 98%).

CIMS m/e 305,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,56 (s a, 2H), 7,29-7,18 (m, 5H), 4,94-4,82 (m, 1H), 4,22-3,97 (m, 4H), 3,53 (dt, J= 4,5, 12,7 Hz, 1H), 3,41-3,27 (m, 1H), 3,12 (m, 1H), 2,95 (m, 0,5H), 2,76 (t, J= 10,9 Hz, 0,5H), 2,66 (m, 0,5H), 2,27 (m, 1H), 2,07 (m, 0,5H), 1,79-1,51 (m, 2H), 1,38-1,11 (m, 3,5H), 0,41 (m, 0,5H).

Ejemplo 23 [(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-(3-hidroxiazetidon-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B.

CIMS m/e 448,1/450,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,77 (s, 1H), 8,55 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,26-7,10 (m, 7H), 5,00-4,76 (m, 3H), 4,07-3,94 (m, 1,5H), 3,83 (m, 1,5H), 3,40-3,22 (m, 1H), 3,13 (m, 2H), 2,93 (m, 2H).

Ejemplo 24 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metil-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-metil-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico (Krutosikova, A., Kovac, J., Dandarova, M., Lesko, J., Ferik, S., Collect. Czech. Chem. Commun., 46: 2564-2573 (1981)) y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento B (fase acuosa ácida extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas antes del procedimiento básico).

CIMS m/e 396,3 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 10,96 (m, 1H), 8,23 (m, 1H), 7,27-7,19 (m, 4H), 7,14 (m, 1H), 6,83 (d, J= 5,4 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 4,97 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,89 (d, J= 4,6 Hz, 0,5H), 4,80 (m, 2H), 3,99 (m, 0,5H), 3,93 (m, 0,5H), 3,82 (m, 1,5H), 3,38 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,13 (m, 1,5H), 3,00-2,85 (m, 2H), 2,31 (s, 3H).

Ejemplo 25 [(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-trimetilsilaniletinil-6H-tieno[2,3b]pirrol-5-carboxílico

Utilizando un procedimiento modificado de J.M. Tour et al., (J. Org. Chem., 61, 6906-6921 (1996)), se añadieron secuencialmente a una disolución desgasificada de [(1S)-bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (106 mg, 0,24 mmol) en tetrahidrofurano (5 ml), diisopropilamina (36 \mul, 0,26 mmol), una mezcla de yoduro de cobre (I) (9 mg, 0,05 mmol), diclorobis(trifenilfosfina)paladio (II) (68 mg, 0,1 mmol) y (trimetilsilil)acetileno (41 \mul, 0,29 mmol). La mezcla se agitó durante la noche, se vertió sobre agua y se extrajo con diclorometano. Se lavaron las fases orgánicas combinadas con NaCl saturado, se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron. Se purificó el producto por cromatografía Chromatotron (diclorometano, 20:1 diclorometano:metanol) proporcionando el compuesto del título (4,5 mg, 4%).

CIMS m/e 464,3 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,86 (s, 1H), 8,54 (t, J= 8,9 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,23 (m, 4H), 7,13 (m, 2H), 5,66 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 4,41 (m ,1H), 4,28 (m, 0,5H), 4,11-3,89 (m, 2H), 3,66 (m, 0,5H), 3,57-3,46 (m, 1H), 2,99-2,85 (m, 2H), 0,23 (s, 9H).

Ejemplo 26 [(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-etinil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico

Utilizando un procedimiento análogo al de G.M. Whitesides et al., (J. Org. Chem., 53:2489-2496 (1988)), se añadió a una disolución de [(1S)-bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-trimetilsilaniletinil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico (110 mg, 0,02 mmol) en metanol (0,5 ml), una disolución acuosa al 5% de hidróxido de potasio (7 \mul, 0,06 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 3 horas, se concentró para eliminar el metanol, se diluyó con agua y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró proporcionando el compuesto del título (7 mg, 77%).

CIMS m/e 392,1 ((M-H)^{+})

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 7,32-7,16 (m, 7H), 7,03 (m, 2H), 4,66 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,75-3,56 (m, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,04 (m, 2H).

Ejemplo 27 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (tiempo de reacción 4 días).

P.f.: 128-132ºC, CIMS m/e 416,1 ((M-H)^{+}), 418,2 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,72 (m, 1H), 8,49 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 7,28-7,13 (m, 6H), 6,71 (s, 1H), 4,99 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,91 (d, J= 4,8 Hz, 0,5H), 4,86 (d, J= 3,7 Hz, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,01 (m, 0,5H), 3,94 (m, 0,5H), 3,83 (m, 1,5H), 3,42-3,24 (m, 2,5H), 3,14 (m, 1H), 3,01-2,84 (m, 2H).

Ejemplo 27a

Ester etílico del ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 5-fluorotiofen-2-carbaldehído (véase por ejemplo Schuetz, R.D. y Nilles, G.P., J. Org. Chem., 36: 2188-90 (1971)) según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (0,6M de éster), fase orgánica acrilato lavada con NaCl acuoso saturado antes del secado, acrilato no purificado).

CIMS m/e 212,1 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,16 (s a, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,33 (c, J= 7,2 Hz, 2H), 1,36 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 27b

Ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (fase acuosa acidificada extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentradas).

CIMS m/e 184,1 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,47 (s a, 1H), 12,03 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,73 (s, 1H).

Ejemplo 28 [(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-(3-hidroxiazetidin-1-il)3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 377,1 ((M-H)^{+}), 379,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,78 (s, 1H), 8,68 (t, J= 8,2 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,22 (m, 4H), 7,15 (m, 1H), 7,01 (d, J= 3,1 Hz, 1H), 5,68 (m, 1H), 4,59 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,26 (m, 0,5H), 4,05 (m, 1H), 3,92 (m, 1H), 3,65 (m, 0,5H), 3,53 (m, 1H), 3,00-2,88 (m, 2H).

Ejemplo 28a

Ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se trató ácido 2-formil-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico (véase por ejemplo, Krutosikova, A. Dandarova, M., Alfodi, J., J. Chem. Pap., 48: 268-73 (1994)) con clorhidrato de hidroxilamina según el Procedimiento G.

CIMS m/e 174,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 13,10-12,60 (s a, 1H), 12,05 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 6,75 (s, 1H).

Ejemplo 29 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (tiempo de reacción 3 días, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 418,1/420,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,36 (s, 1H), 8,42 (dd, 2,9, 8,3 Hz, 1H), 7,27-7,10 (m, 5H), 6,94 (d, J= 6,0 Hz, 1H), 6,63 (m, 1H), 4,99 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,91 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,86-4,77 (m, 2H), 4,00 (m, 0,5H), 3,94 (m, 0,5H), 3,81 (m, 1,5H), 3,43-3,21 (m, 2,5H), 3,13 (m, 1H), 3,00-2,85 (m, 2H).

\newpage

Ejemplo 29a

Ester etílico del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 4-clorofuran-2-carbaldehído (Snyder, H.R., Jr., Seehausen, P.H., J. Heterocycl. Chem., 10: 385-6 (1973)) según el Procedimiento H (8 eq. de sodio, aldehído y éster etílico del ácido azidoacético se añaden en forma de disolución etanólica (0,9 M de éster), se deja calentar a temperatura ambiente la condensación de la mezcla de reacción, se agita durante un periodo de 1 hora, se inactiva a -40ºC, se diluye con agua y se extrae con éter, acrilato no purificado, furanopirrol filtrado antes de la concentración).

CIMS m/e 212,0/214,1 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,69 (s a, 1H), 6,74 (dd, J= 0,8, 1,7 Hz, 1H), 6,31 (d, J= 0,6 Hz, 1H), 4,33 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 1,36 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 29b

Ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura ambiente durante la noche, temperatura de 50ºC durante 4 horas, fase acuosa acidificada extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentradas).

CIMS m/e 183,8/185,8 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,47 (s a, 1H), 11,70 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 6,67 (s, 1H).

Ejemplo 30 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pi-rrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento B (tiempo de reacción 3 días, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 448,1/450,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,33 (m, 1H), 7,72 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 7,25-7,09 (m, 5H), 6,82 (s, 1H), 6,61 (dd, J= 0,7, 3,0 Hz, 1H), 5,04 (d, J= 7,3 Hz, 0,5H), 4,94 (m, 1H), 4,89 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,80 (d, J= 7,5 Hz, 0,5H), 4,75 (d, J= 4,2 Hz, 0,5H), 4,45-4,35 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 4,00-3,88 (m, 2H), 3,57-3,49 (m, 1H), 3,39 (m, 0,5H), 3,26-3,06 (m, 2,5H), 2,95-2,80 (m, 2H).

Ejemplo 31 Ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}piperidin-4-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}piperidin-4-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura ambiente, después de la concentración residuo de la reacción repartido entre acetato de etilo y NaOH 1-2N, fase acuosa acidificada con HCl 2N, extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentradas, producto bruto lavado con éter).

P.f.: 145-150ºC.

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,21 (s, 1H), 11,83 (s, 0,5H), 11,77 (s, 0,5H), 8,58 (m, 1H), 7,26-7,11 (m, 7H), 5,05 (m, 1H), 4,23 (d, 13,3 Hz, 0,5H), 4,10 (d, J= 12,5 Hz, 0,5H), 3,93 (d, J= 12,7 Hz, 0,5H), 3,85 (d, J= 13,5 Hz, 0,5H), 3,11-2,90 (m, 3H), 2,77-2,61 (m, 1H), 2,49-2,39 (m, 1H), 1,75-1,65 (m, 2H), 1,43-1,17 (m, 1,5 H), 1,07-0,97 (m, 0,5H).

Ejemplo 32 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 434,0/436,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,09 (m, 1H), 8,57 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,40 (m, 0,5H), 7,28-7,10 (m, 6,5H), 5,00 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,92 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,84 (m, 2H), 4,10-3,93 (m, 1H), 3,82 (m, 1,5H), 3,44-3,23 (m, 2,5H), 3,13 (m, 1H), 3,02-2,87 (m, 2H).

Ejemplo 32a

Ester etílico del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 4-clorotiofen-2-carbaldehído (Iriarte, J., Martínez, E., Muchowski, J.M., J. Heterocycl. Chem., 13:393-4 (1976)) según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1,2 M de éster) de modo que la temperatura de reacción se mantuvo a 0ºC, la mezcla de reacción se dejó calentar a 10ºC, se agitó durante 1,5 horas, se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso saturado, después de extraer con éter se lavaron las fases orgánicas combinadas de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, acrilato no purificado).

CIMS m/e 228,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,02 (s a, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 4,37 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 1,38 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 32b

Ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (7 equivalentes de LiOH\cdotH_{2}O, temperatura ambiente durante la noche, después temperatura de 50ºC durante otra noche, fase acuosa acidificada extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentradas).

CIMS m/e 199,9/201,8 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,71 (s a, 1H), 12,40 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,06 (d, J= 1,9 Hz, 1H).

Ejemplo 33 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 464,0/466,0 (MH^{+})

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,4 (m, 1H), 7,89 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,38 (s, 0,5H), 7,26-7,10 (m, 5,5H), 7,05 (d, J= 3,1 Hz, 1H), 5,08 (d, J= 7,1 Hz, 0,5H), 4,97-4,84 (m, 2H), 4,76 (d, J= 4,2 Hz, 0,5H), 4,44 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,09-3,88 (m, 2H), 3,53 (m, 1H), 3,38 (m, 0,5H), 3,25-3,06 (m, 2,5H), 2,97-2,82 (m, 2H).

Ejemplo 34 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 475,9/478,2 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,99 (m, 1H), 8,56 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J= 1,2 Hz, 0,5H), 7,27-7,12 (m, 6,5H), 4,99 (d, J= 5,2, 0,5H), 4,91 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,84 (m, 2H), 4,09-3,92 (m, 1,5H), 3,78 (m, 1,5H), 3,43-3,22 (m, 2H), 3,13 (m, 1H), 2,99-2,85 (m, 2H).

\newpage

Ejemplo 34a

Ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 4-bromotiofen-3-carbaldehído según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1,2 M de éster) de modo que la temperatura de reacción se mantuvo a 0ºC, la mezcla de reacción se dejó calentar a 10ºC, se agitó durante 1 hora, se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso saturado, después de extraer con éter se lavaron las fases orgánicas combinadas de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, acrilato no purificado).

CIMS m/e 272,0/273,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 8,99 (s a, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,13 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 4,37 (c, J= 7,2 Hz, 2H), 1,38 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 34b

Ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (7 equivalentes de LiOH\cdotH_{2}O, temperatura ambiente durante la noche, después temperatura de 50ºC durante otra noche, fase acuosa acidificada extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentra-
das).

CIMS m/e 243,9/245,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,69 (s a, 1H), 12,33 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,08 (s, 1H).

Ejemplo 35 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 508,1/501,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,96 (s, 0,5H), 11,91 (s, 0,5H), 7,90 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 7,46 (s, 0,5H), 7,22 (m, 4,5H), 7,12 (m, 1H), 7,04 (m, 1H), 5,08 (d, J= 6,9 Hz, 0,5H), 4,94 (m, 1H), 4,89 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,85 (d, J= 7,1 Hz, 0,5H), 4,75 (d, J= 4,4 Hz, 0,5H), 4,45 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,08-3,87 (m, 2H), 3,53 (m, 1H), 3,40-3,30 (m, 0,5H), 3,22 (m, 1H), 3,15-3,05 (m, 1,5H), 2,98-2,82 (m, 2H).

Ejemplo 36 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 464,0/466,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,72 (s, 0,5H), 11,67 (s, 0,5H), 7,85 (d, J= 9,1 Hz, 1H), 7,21 (m, 4H), 7,12 (m, 1H), 7,00 (m, 2H), 5,05 (d, J= 7,1 Hz, 0,5H), 4,95 (m, 1H), 4,89 (d, J= 4,8 Hz, 0,5H), 4,81 (d, J= 7,5 Hz, 0,5H), 4,75 (d, J= 3,9 Hz, 0,5H), 4,41 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,00-3,87 (m, 2H), 3,54 (m, 1H), 3,40 (m, 0,5H), 3,22 (m, 1,5H), 3,15-3,06 (m, 1H), 2,94-2,80 (m, 2H).

Ejemplo 36a

Ester etílico del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 5-clorotiofen-2-carbaldehído según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1,2 M de éster) de modo que la reacción se mantuvo a 0-5ºC, la mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, se agitó durante 2 horas, se vertió sobre NH_{4}Cl frío acuoso saturado, después de extraer con éter se lavaron las fases orgánicas combinadas de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, la disolución de acrilato bruto 0,5M se calentó durante 1,5 horas).

CIMS m/e 228,0/229,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,04 (s a, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 4,34 (c, J= 7,2 Hz, 2H), 1,37 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 36b

Ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura de 50ºC durante 9 horas).

CIMS m/e 199,9/201,8 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,62 (s, 1H), 12,04 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,97 (s, 1H).

Ejemplo 37 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxi-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 434,0/436,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,73 (m, 1H), 8,57 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,28-7,19 (m, 4H), 7,13 (m, 2H), 7,01 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 5,00 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,92 (d, J= 5,2 Hz,0,5H), 4,86 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,08-3,94 (m, 1H), 3,82 (m, 1,5H), 3,42-3,24 (m, 2H), 3,14 (m, 1,5H), 3,01-2,87 (m, 2H).

Ejemplo 38 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 412,1 ((M-H)^{+}), 414,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,69 (m, 1H), 8,45 (m, 1H), 7,28-7,18 (m, 4H), 7,12 (m, 2H), 6,93 (d, J= 1,0 Hz, 1H), 4,98 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,90 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,83 (m, 2H), 4,03-3,92 (m, 1H), 3,83 (m, 1,5H), 3,42-3,23 (m, 2,5H), 3,14 (m, 1H), 3,03-2,88 (m, 2H), 2,24 (s, 3H).

Ejemplo 38a

Ester etílico del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 4-metiltiofen-2-carbaldehído (Detty, M.R., Hays, D.S., Heterocycles, 40:925-37 (1995)) según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1,1 M de éster), la reacción se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso saturado, después de extraer con éter se lavaron las fases orgánicas combinadas de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, acrilato no purificado).

CIMS m/e 207,9 ((M-H)^{+}), 209,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,02 (s a, 1H), 7,09 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 6,91 (d, J= 1,0 Hz, 1H), 4,35 (cuart, J= 7,3 Hz, 1H), 2,32 (d, J= 1,2 Hz, 3H), 1,38 (t, J= 7,2 Hz, 3H).

Ejemplo 38b

Ácido 3-metil-4H-tieno[3,2b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura de 50ºC durante 13 horas, fase acuosa acidificada extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentradas).

CIMS m/e 179,9 ((M-H)^{+}), 181,8 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,45 (s a, 1H), 11,99 (s, 1H), 7,02 (m, 1H), 6,96 (m, 1H), 2,25 (s, 3H).

Ejemplo 39 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 442,1 ((M-H)^{+}), 444,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) 11,66 (s, 0,5H), 11,62 (s, 0,5H), 7,76 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,22 (m, 4H), 7,11 (m, 1H), 7,01 (d, J= 1,7 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,06 (d, J= 7,3 Hz, 0,5H), 4,95 (m, 1H), 4,90 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,82 (d, J= 7,5 Hz, 0,5H), 4,77 (d, J= 4,4 Hz, 0,5H), 4,44 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,01-3,87 (m, 2H), 3,55 (m, 1H), 3,40 (dd, J= 5,0, 12,6 Hz, 0,5H), 3,24 (m, 1,5H), 3,16-3,06 (m, 1H), 2,97-2,83 (m, 2H), 2,23 (s, 3H).

Ejemplo 40 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-4H-tieno[3,2-b]-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-ciano-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el procedimiento B (mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua antes del lavado ácido).

CIMS m/e 423,1 ((M-H)^{+}), 425,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,15 (m, 1H), 8,85 (d, J= 8,3 Hz, 1H), 7,79 (m, 1H), 7,29-7,11 (m, 6H), 5,00 (m, 0,5H), 4,93-4,78 (m, 2,5H), 4,04-3,93 (m, 1H), 3,81 (m, 1,5H), 3,43-3,25 (m, 2,5H), 3,15 (m, 1H), 3,03-2,89 (m, 2H).

Ejemplo 40a

Ácido 2-formil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-formil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico (véase por ejemplo Gale, W.W. et al., J. Org. Chem., 29: 2160-2165 (1964)) según el Procedimiento F (temperatura de 50ºC durante la noche, fase acuosaacidificada extraída con acetato de etilo, fases orgánicas combinadas secadas sobre MgSO_{4}, concentradas).

CIMS m/e 193,9 ((M-H)^{+}), 195,8 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 13,38-12.78 (s a, 1H), 12,43 (s, 1H), 9,90 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,08 (s, 1H).

Ejemplo 40b

Ácido 2-ciano-4H-tieno[3,2b]pirro-5-carboxílico

Se trató ácido 2-formil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico con clorhidrato de hidroxilamina según el Procedimiento G.

CIMS m/e 190,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 13,06 (s a, 1H), 12,45 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,09 (s, 1H).

Ejemplo 41 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento A (1 eq. de trietilamina, dimetilformamida, tiempo de reacción de 4 días, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 137-140ºC. CIMS m/e 437,1 ((M-H)^{+}), 439,0 (MH^{+}).

RMn-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,70 (m, 1H), 7,99 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,22 (m, 4H), 7,12 (m, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,09 (d, J= 7,2 Hz, 0,5 H), 4,95 (m, 1H), 4,89 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,83 (d, J= 7,3 Hz, 0,5H), 4,76 (d, J= 3,9 Hz, 0,5H), 4,42 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,08-3,89 (m, 2H), 3,61-3,50 (m, 1H), 3,40 (m, 0,5H), 3,24 (m, 1,5H), 3,13 (m, 1H), 2,95-2,80 (m, 2H).

Ejemplo 42 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento A (dimetilformamida, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 140ºC (desc.), CIMS m/e 461,9/463,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,75 (m, 1H), 8,47 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,90 (d, J= 0,8 Hz, 1H), 7,33-7,15 (m, 5H), 6,98 (dd, J= 1,5, 3,4 Hz, 1H), 5,03 (d, J= 5,3 Hz, 0,5H), 4,95 (d, J= 5,1 Hz, 0,5H), 4,91-4,83 (m, 2H), 4,13-3,97 (m, 1H), 3,86 (m, 1,5H), 3,48-3,25 (m, 2,5H), 3,18 (m, 1H), 3,08-2,92 (m, 2H).

Ejemplo 42a

Ester etílico del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 4-bromo-2-furaldehído según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1M de éster) a una disolución de etóxido a -20ºC, periodo de 35 minutos a una temperatura de -20ºC, periodo de 1,5 horas a una temperatura de -5ºC, periodo de 15 minutos a una temperatura de 5ºC, la reacción se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso frío saturado, después de extracción con éter se lavó la fase orgánica de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, se calentó la disolución de acrilato bruto 0,5 M).

CIMS m/e 257,8/259,8 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,81 (s a, 1H), 7,48 (s, 1H), 6,79 (d, J= 1,8 Hz, 1H), 4,35 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 1,36 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 42b

Ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó éster etílico del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura de 50ºC durante un periodo de 14 horas, fase acuosa acidificada extraída con acetato de etilo, fase orgánica secada sobre MgSO_{4}, concentrada).

CIMS m/e 228,0/230,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 12,60 (s a, 1H), 12,06 (s a, 1H), 7,98 (s, 1H), 6,77 (d, J= 1,8 Hz, 1H).

Ejemplo 43 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento A (1 eq. de trietilamina, dimetilformamida, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 140ºC, (desc.), CIMS m/e 492,0/494,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 11,73 (s, 0,5H), 11,68 (s, 0,5H), 7,88 (d, J= 0,7 Hz, 1H), 7,79 (d, J= 8,9 Hz, 1H), 7,27 (m, 4H), 7,17 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,18-4,74 (m, 3H), 4,56-4,40 (m, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,05-3,94 (m, 1,5H), 3,64-3,11 (m, 4,5H), 3,02-2,85 (m, 2H).

Ejemplo 44 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento B (2:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

CIMS m/e 484,0 ((M-H)^{+}), 486,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,00 (s, 0,5H), 11,95 (s, 0,5H), 7,83 (m, 1H), 7,55 (dd, J= 0,8, 5,2 Hz, 1H), 7,35 (dd, J= 1,2, 5,2 Hz, 1H), 7,23 (m, 4H), 7,12 (m, 2H), 5,07 (d, J= 7,3 Hz, 0,5H), 4,96 (m, 1H), 4,90 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,81 (d, J= 7,5 Hz, 0,5H), 4,76 (d, J= 4,2 Hz, 0,5H), 4,44 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,08-3,88 (m, 1,5H), 3,57 (m, 1H), 3,40 (m, 0,5H), 3,26 (m, 1,5H), 3,17-3,07 (m, 1,5H), 2,97-2,84 (m, 2H).

Ejemplo 44a

Ester etílico del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico

Se formó un anillo con tieno[2,3-b]tiofen-2-carbaldehído (Dopper, J.H. et al., J. Am. Chem. Soc., 95: 3692-8 (1973)) según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1M de éster) a una disolución de etóxido a -20ºC, periodo de 30 minutos a una temperatura de -20ºC, temperatura de -20ºC a ambiente durante un periodo de 2,5 horas, la reacción se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso frío saturado, después de extracción con éter se lavó la fase orgánica de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, se calentó la disolución de acrilato bruto 0,35 M).

CIMS m/e 250,1 ((M-H)^{+}), 251,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,46 (s a, 1H), 7,35 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 7,29 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 7,14 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 4,38 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 1,39 (t, J= 7,1 Hz, 3H)

Ejemplo 44b

Ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopena[a]pentalen-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura de 50ºC durante 11 horas).

CIMS m/e 222,0 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,51 (s, 1H), 12,32 (s, 1H), 7,59 (d, J= 5,3 Hz, 1H), 7,38 (J= 5,3Hz, 1H), 7,05 (d, J= 1,9 Hz, 1H).

Ejemplo 45 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (1:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

CIMS m/e 454,0 ((M-H)^{+}), 456,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,03 (m, 1H), 8,53 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,55 (dd, J= 0,8, 5,2, Hz, 1H), 7,34 (dd, J= 2,7, 5,2 Hz, 1H), 7,29-7,19 (m, 5H), 7,12 (m, 1H), 4,99 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,91 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,84 (m, 2H), 3,98 (m, 1H), 3,83 (m, 2H), 3,41-3,29 (m, 3H), 3,13 (m, 1H), 2,95 (m, 2H).

Ejemplo 46 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidrato de (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (1:1 diclorometano:dimetilformamida, tiempo de reacción 2 días, mezcla de reacción concentrada para eliminar el diclorometano, repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 139-141ºC, CIMS m/e 448,1/450,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,95 (m, 1H), 8,54 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 7,28-7,18 (m, 4H), 7,13 (m, 2H), 4,98 (d, J= 5,2 Hz, 0,5H), 4,90 (d, J= 4,6 Hz, 0,5H), 4,83 (m, 2H), 4,02-3,92 (m, 1H), 3,82 (m, 1,5H), 3,41-3,22 (m, 2,5H), 3,14 (m, 1H), 3,01-2,90 (m, 2H), 2,20 (d, J= 2,5 Hz, 3H).

Ejemplo 46a

5-Cloro-4-metiltiofen-2-carbaldehído

Utilizando un procedimiento modificado de Silverstein et al (Organic Synthesis Coll. Vol. 4, Wiley, New York, 1963, N. Rabjohn, Ed. pág. 831) se añadió gota a gota a una disolución amarilla pálida a 80ºC de 2-cloro-3-metiltiofeno (Crast. L.B., Jr., Patente estadounidense 3290291, ejemplo 2, 70 g, 0,53 mol) en dimetilformamida (48,3 g, 0,66 mol), oxicloruro de fósforo (101,5 g, 0,66 mol) durante 45 minutos manteniendo la temperatura a 80-97ºC. La disolución marrón oscura se agitó a 90ºC durante 3 horas y se vertió lentamente sobre agua (500 ml) a una temperatura de 90ºC. La mezcla resultante se destiló fraccionadamente y se enfrió el destilado a 0ºC, proporcionando cristales blancos. Se extrajeron los primeros 500 ml de destilado con cloroformo, se concentraron y el residuo se recristalizó con hexano (100 ml) y se filtró el material insoluble. Se diluyó el filtrado con hexano (50 ml), se agitó con Norit(R) (2 g), y se concentró. Se purificó el producto por recristalización con hexano (50 ml) a una temperatura de -40ºC y se obtuvo en forma de cristales blancos (7,5 g, 13%). El destilado restante de la destilación fraccionada se extrajo con cloroformo (2 x 250 ml) y los cristales blancos se disolvieron en cloroformo (1,5 l). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre MgSO_{4}, se filtraron, se agitaron con Norit(R) (30 g) durante 15 minutos, y se concentraron. Se disolvió el residuo en hexano (350 ml), se filtró el material insoluble, se agitó el filtrado a una temperatura de -15ºC durante 10 minutos y se filtró el precipitado resultante. Se obtuvo el producto del título en forma de cristales amarillo pálido (48,6 g, 83%).

P.f.: 39-40ºC.

Ejemplo 46b

Ester etílico del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 5-cloro-4-metiltiofen-2-carbaldehído según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1M de éster) a una disolución de etóxido a una temperatura de -20ºC, se dejó calentar a 10ºC durante 2 horas, se mantuvo a una temperatura de 10ºC durante 2 horas, la reacción se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso frío saturado, después de la extracción con éter se lavó la fase orgánica de acrilato con agua hasta que se neutralizó la fase acuosa, se añadió la disolución de acrilato bruto a xilenos a reflujo durante 5 minutos y después se calentó a reflujo).

CIMS m/e 243,8/245,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,25 (s a, 1H), 7,02 (d, J= 1,9 Hz, 1H), 4,36 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 2,28 (s, 3H), 1,38 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 46c

Ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura de 50ºC durante 14 horas).

CIMS m/e 213,8/215,8 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,61 (s a, 1H), 12,25 (s, 1H), 6,96 (dd, J= 0,5, 2,0 Hz, 1H), 2,23 (s, 1H).

Ejemplo 47 [(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y (3S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-4-fenilbutan-1-ona según el Procedimiento B (4:5 diclorometano:dimetilformamida, tiempo de reacción 2 días, mezcla de reacción concentrada para eliminar el diclorometano, repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado).

P.f.: 150-153ºC, CIMS m/e 478,1/480,1 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,91 (s, 0,5H), 11,86 (s, 0,5H), 7,82 (d, J= 8,7, 1H), 7,22 (m, 4H), 7,11 (m, 1H), 7,01 (m, 1H), 5,07 (d, J= 6,8 Hz, 0,5H), 4,95 (m, 1H), 4,90 (d, J= 5,0 Hz, 0,5H), 4,82 (d, J= 6,8 Hz, 0,5H), 4,77 (d, J= 3,7 Hz, 0,5H), 4,44 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,08-3,88 (m, 1,5H), 3,56 (m, 1H), 3,40 (m, 0,5H), 3,24 (m, 1,5H), 3,14 (m, 1H), 3,08 (m, 0,5H), 2,95-2,82 (m, 2H).

Ejemplo 48 [(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se acoplaron ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico y clorhidratode (2S)-amino-1-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-3-fenilpropan-1-ona según el Procedimiento B (1:1 diclorometano:dimetilformamida, mezcla de reacción concentrada para eliminar el diclorometano, repartida entre acetato de etilo y agua, fase orgánica lavada con HCl 2N antes de NaHCO_{3} acuoso saturado.

P.f.: 104-110ºC, 444,0 ((M-H)^{+}), 445,9 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 11,61 (m, 1H), 8,52 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,28-7,12 (m, 6H), 6,97 (d, J= 3,9 Hz, 1H), 4,99 (d, J= 5,1 Hz, 0,5H), 4,91 (d, J= 5,1 Hz, 0,5H), 4,83 (m, 2H), 4,06-3,94 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 3,43-3,24 (m, 2H), 3,14 (m, 1H), 3,02-2,87 (m, 2H), 2,46 (s, 3H).

Ejemplo 48a

Ester etílico del ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se formó un anillo con 5-metilsulfaniltiofen-2-carbaldehído según el Procedimiento H (aldehído y éster etílico del ácido azidoacético añadidos en forma de disolución etanólica (1M de éster) a una disolución de etóxido a una temperatura de -20ºC, se dejó calentar durante 4 horas a 10ºC, la reacción se vertió sobre NH_{4}Cl acuoso frío saturado, después de extracción con éter se lavó la fase orgánica de acrilato con agua hasta neutralizar la fase acuosa, se calentó la disolución de acrilato bruto a reflujo durante 2 horas, se dejó enfriar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche).

CIMS m/e 240,0 ((M-H)^{+}), 242,0 (MH^{+}).

RMN-^{1}H (CDCl_{3}) \delta 9,05 (s a, 1H), 7,04 (m, 1H), 6,97 (s, 1H), 4,35 (c, J= 7,1 Hz, 2H), 2,53 (s, 3H), 1,37 (t, J= 7,1 Hz, 3H).

Ejemplo 48b

Ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico

Se hidrolizó el éster etílico del ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico según el Procedimiento F (temperatura de 40ºC durante la noche).

CIMS m/e 211,9 ((M-H)^{+}).

RMN-^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 12,56 (s, 1H), 11,90 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 2,47 (s, 1H).

Los siguientes compuestos también pueden preparase como los indicados anteriormente:

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico,

[(1S)-Bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico,

[(1S)-Bencil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico,

[(1S)-Bencil-2-((3S,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico,

[(1S)-Bencil-2-((3R,4R)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico,

[(1S)-Bencil-2-(4-hidroxipiperidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico.

Protocolos biológicos

La utilidad de los compuestos de la presente invención como agentes médicos en el tratamiento o prevención de enfermedades (tales como las descritas en la presente memoria) en animales, en particular, en mamíferos (por ejemplo, seres humanos) se demuestra por la actividad de los compuestos de esta invención en ensayos convencionales y en los ensayos in vitro e in vivo descritos a continuación. Tales ensayos se proporcionan además como medio mediante el cual se pueden comparar las actividades de los compuestos de esta invención con las actividades de otros compuestos conocidos. Los resultados de estas comparaciones son útiles para determinar los niveles de dosificación en animales, en particular, en mamíferos, incluyendo a los seres humanos, para el tratamiento de tales enfermedades.

Producción y ensayos de glucógeno fosforilasa

Las tres isoenzimas diferentes de la glucógeno fosforilasa (GP) purificadas, en las que la glucógeno fosforilasa está en el estado activado "a" (denominado glucógeno fosforilasa a, o con la abreviatura GPa), y denominadas aquí glucógeno fosforilasa hepática a humana (HLGPa), glucógeno fosforilasa a de músculo humano (HMGPa) y glucógeno fosforilasa a de cerebro humano (HBGPa), pueden obtenerse por los siguientes procedimientos.

Expresión y fermentación

Los ADNc de HLGP (obtenidos como se describe en Newgard et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 83: 8132-8136 (1986) y Newgard et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 263: 3850-3857 (1988), respectivamente) y los ADNc de HMGP (obtenidos por rastreo de una genoteca de ADNc de músculo humano de Stratagene (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, CA) con un fragmento de ADNc generado por reacción en cadena con polimerasa (PCR) en base a la información y metodología descrita para aislar el gen de la glucógeno fosforilasa de músculo esqueletal humano y la secuencia parcial de ADNc de Kubish et al., Center for Molecular Neurobiology, University of Hamburg, Martinistrasse 85, Hamburg, 20246, Alemania; Genbank (National Center for Biotechnology Information, National Institutes of Health, USA), números de acceso U94774, U94775, U94776 y U94777, presentados el 20 de marzo de 1997; Burke et al. Proteins, 2: 177-187 (1987); y Hwang et al. Eur. J. Biochem., 152: 267-274 (1985)) se expresan a partir del plásmido pKK233-2 (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey) en la cepa XL-1 Blue de E. coli (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, CA). La cepa se inocula en medio LB (que consta de 10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 5 g de NaCl y 1 ml de NaOH 1 N por litro) más 100 mg/l de ampicilina, 100 mg/l de piridoxina y 600 mg/l de MnCl_{2}, y se deja crecer a 37ºC hasta una densidad celular de DO_{550} = 1,0. En este momento, las células se inducen con isopropil-1-tio-\beta-D-galactósido (IPTG) 1 mM. Tres horas después de la inducción, las células se recogen por centrifugación y los sedimentos celulares se congelan a -70ºC hasta que se necesitan para la purificación.

El ADNc de HBGP puede expresarse por varias metodologías, por ejemplo, por el procedimiento descrito por Crerar et al., (J. Biol. Chem. 270: 13748-13756 (1995)). El procedimiento descrito por Crerar et al., (J. Biol. Chem. 270: 13748-13756 (1995)) para la expresión de HBGP es el siguiente: el ADNc de HBGP puede expresarse en el plásmido pTACTAC en la cepa 25A6 de E. coli. La cepa se inocula en medio LB (que consta de 10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 5 g de NaCl y 1 ml de NaOH 1N por litro) más 50 mg/l de ampicilina, se desarrolla durante una noche, después se resuspende en un medio LB nuevo más 50 mg/l de ampicilina, se vuelve a inocular en un volumen 40 veces de medio LB/amp que contiene isopropil-1-tio-\beta-D-galactósido (IPTG) 250 \muM, piridoxina 0,5 mM y MgCl_{2} 3 mM y se desarrolla a 22ºC durante 48-50 horas. Las células después pueden recogerse por centrifugación y los sedimentos celulares se congelan a -70ºC hasta que se necesitan para la purificación.

El ADNc de HLGP se expresa en el plásmido pBlueBac III (Invitrogen Corp. San Diego, CA) que se utiliza para co-transfectar con el ADN Viral Lineal de BaculoGold (Pharmingen, San Diego, CA) en células Sf9. Posteriormente, los virus recombinantes se purifican en placas. Para la purificación de proteínas, se infectan las células Sf9 desarrolladas en un medio sin suero (SF 900-II Gibco BRL Life Technologies, Grand Island, NY) con una multiplicidad de infección (moi) de 0,5 y a una densidad celular de 2 x 10^{6} células/ml. Después de dejarse crecer durante 72 horas a 27ºC, las células se centrifugan y los sedimentos celulares se congelan a -70ºC hasta que se necesitan para la purificación.

Purificación de glucógeno fosforilasa expresada en E. coli

Las células E. coli en los sedimentos descritas anteriormente, se resuspenden en \beta-glicerofosfato 25 mM (pH 7,0) con DTT 0,2 mM, MgCl_{2} 1 mM, más los siguientes inhibidores de proteasa:

0,7 \mug/ml	Pepstatina A
0,5 \mug/ml	Leupeptina
0,2 mM	fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), y
0,5 mM	EDTA

se lisan por pretratamiento con 200 \mug/ml de lisozima y 3 \mug/ml de ADNasa, seguido por sonicación en lotes de 250 ml durante 5 x 1,5 minutos en hielo, usando un rompedor de células ultrasónico Branson Modelo 450 (Branson Sonic Power Co. Danbury CT). Los lisados de células E. coli después se aclaran por centrifugación a 35.000 X g durante 1 hora, seguido por filtración a través de filtros de 0,45 \mum. La GP en la fracción soluble de los lisados (que se estima que es menor de un 1% de la proteína total) se purifica controlando la actividad enzimática (como se describe en la sección de Ensayo de Actividad de Gpa, mostrada más adelante) en una serie de etapas cromatográficas detalladas más adelante.

Cromatografía de afinidad inmovilizada en metal (IMAC)

Esta etapa se basa en el procedimiento de Luong et al (Luong et al. Journal of Chromatography (1992) 584: 77-84). Se introducen 500 ml de la fracción soluble filtrada de los lisados celulares (preparados a partir de aproximadamente 160-250 g de sedimento de células originales) en una columna de 130 ml de IMAC Chelating-Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey) que se había cargado con CuCl_{2} 50 mM y \beta-glicerofosfato 25 mM, NaCl 250 mM e imidazol 1 mM en un tampón de equilibrio a pH 7. La columna se lava con tampón de equilibrio hasta que la A_{280} vuelve a la línea basal. Después, la muestra se eluye desde la columna con el mismo tampón que contiene imidazol 100 mM para eliminar la GP unida y otras proteínas unidas. Las fracciones que contienen la actividad GP se reúnen (aproximadamente 600 ml) y se añaden ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), DL-ditiotreitol (DTT), fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), leupeptina y pepstatina A para obtener concentraciones 0,3 mM, 0,2 mM, 0,2 mM, 0,5 \mug/ml y 0,7 \mug/ml, respectivamente. La GP reunida se desalifica sobre una columna Sephadex G-25 (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri) equilibrada con Tris-HCl 25 mM (pH 7,3) y tampón DTT 3 mM (Tampón A) para eliminar el imidazol y se almacena en hielo hasta la segunda etapa cromatográfica (siguiente) si fuera necesario.

Cromatografía en 5'-AMP-Sepharosa

La muestra GP reunida y desalificada (aproximadamente 600 ml) se mezcla a continuación con 70 ml de 5'-AMP Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, New Jersey) que se ha equilibrado con Tampón A (véase anteriormente). La mezcla se agita suavemente durante 1 hora a 22ºC y después se introduce en una columna y se lava con Tampón A hasta que la A_{280} vuelve a la línea basal. La GP y otras proteínas se eluyen de la columna con Tris-HCl 25 mM, DTT 0,2 mM y adenosina-5'-monofosfato (AMP) 10 mM a pH 7,3 (Tampón B). Las fracciones que contienen GP se reúnen después de la identificación, determinando la actividad enzimática y visualizando la banda proteica de GP de aproximadamente 97 kdaltons M_{r} mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE) seguido por tinción con plata (2D-silver Stain II "Daiichi Kit", Daiichi Pure Chemicals Co., LTD., Tokyo, Japan) y después se reúnen. La GP reunida se dializa en \beta-glicerofosfato 25 mM, DTT 0,2 mM, EDTA 0,3 mM, NaCl 200 mM, tampón pH 7,0 (Tampón C) y se almacena en hielo hasta su uso.

Antes del uso de la enzima GP, la enzima se convierte desde la forma inactiva que se expresa en la cepa XL-1 Blue de E. coli (denominada GPb) (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, California), en la forma activa (denominada GPa) por el procedimiento descrito en la sección (A) Activación de GP, mostrada más adelante.

Purificación de la glucógeno fosforilasa expresada en células SF9

Las células Sf9 de los sedimentos descritos anteriormente se resuspenden en \beta-glicerolfosfato 25 mM (pH 7,0) con DTT 0,2 mM y MgCl_{2} 1 mM, más los siguientes inhibidores de proteasa:

0,7 \mug/ml	Pepstatina A
0,5 \mug/ml	Leupeptina
0,2 mM	fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), y
0,5 mM	EDTA

se lisan por pre-tratamiento con 3 \mug/ml de ADNasa seguido por sonicación en lotes, durante 3 x 1 minutos en hielo, usando un rompedor de células ultrasónico Branson Modelo 450 (Branson Sonic Power Co. Danbury CT). Los lisados de células Sf9 después se aclaran por centrifugación a 35.000 X g durante 1 hora, seguido por filtración a través de filtros de 0,45 \mum. La GP en la fracción soluble de los lisados (que se estima que es un 1,5% de la proteína total) se purifica controlando la actividad enzimática (como se describe en la sección de Ensayo de Actividad de Gpa, mostrada más adelante) en una serie de etapas cromatográficas detalladas más adelante.

Cromatografía de afinidad inmovilizada en metal (IMAC)

La Cromatografía de Afinidad Inmovilizada en Metal se realiza como se describe en la sección anterior. La GP reunida y desalificada después sealmacena en hielo hasta que se procesa posteriormente.

Activación de GP

Antes de realizar otra cromatografía, la fracción de la enzima inactiva, según se expresa en las células Sf9 (denominada GPb), se convierte en la forma activa (denominada GPa) por el siguiente procedimiento descrito en la sección (A) Activación de GP mostrado más adelante.

Cromatografía de intercambio aniónico

Después de la activación de la GPb purificada por IMAC a GPa mediante reacción con la fosforilasa quinasa inmovilizada, como se describe más adelante, las fracciones de GPa reunidas se dializan frente a Tris-HCl 25 mM, pH 7,5 que contiene DTT 0,5 mM, EDTA 0,2 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF) 1,0 mM, 1,0 \mug/ml de leupeptina y 1,0 \mug/ml de pepstatina. La muestra después se introduce en una columna de Cromatografía de Intercambio Aniónico MonoQ (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey). La columna se lava con tampón de equilibrio hasta que la A_{280} vuelve a la línea basal. Después, la muestra se eluye de la columna con un gradiente lineal de NaCl de 0-0,25 M para eliminar la GP unida y otras proteínas unidas. Las fracciones que contienen GP eluyen dentro del intervalo de NaCl de 0,1-0,2 M, como se detecta controlando el eluyente con respecto a la absorbancia de los picos de las proteínas a A_{280}. La proteína GP después se identifica visualizando la banda proteica M_{r} de GP de aproximadamente 97 kdaltons por electroforesis en gel de poliacrilamida y dodecil sulfato sódico (SDS-PAGE), seguido por tinción con plata (2D-silver Stain II "Daiichi Kit", Daiichi Pure Chemicals Co., LTD., Tokyo, Japan) y después se reúne. La GP reunida se dializa en ácido N,N-bis[2-hidroxietil]-2-aminoetanosulfónico 25 mM, DTT 1,0 mM, EDTA 0,5 mM, NaCl 5 mM, tampón pH 6,8 y se almacena en hielo hasta el uso.

Determinación de la actividad enzimática de GP

A) Activación de GP: conversión de GPb en GPa

Antes de la determinación de la actividad enzimática de GP, la enzima se convierte desde la forma inactiva, según se expresa en la cepa XL-1 Blue de E. coli (denominada GPb) (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, California), en la forma activa (denominada GPa) por fosforilación de Gp usando la fosforilasa quinasa como se indica a continuación. La fracción de la enzima inactiva según se expresa en células Sf9 (denominada GPb) también se convierte en la forma activa (denominada GPa) por el siguiente procedimiento.

Reacción de Gp con fosforilasa quinasa inmovilizada

Se inmoviliza fosforilasa quinasa (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) en Affi-Gel® 10 (BioRad Corp., Melvile, NY) siguiendo las instrucciones del fabricante. En resumen, la enzima fosforilasa quinasa (10 mg) se incuba con perlas de Affi-Gel® lavadas (1 ml) en 2,5 ml de HEPES 100 mM y CaCl_{2} 80 mM a pH 7,4, durante 4 horas a 4ºC. Las perlas de Affi-Gel® después se lavan una vez con el mismo tampón antes del bloqueo con HEPES 50 mM y glicina metil éster 1 M a pH 8,0, durante una hora a temperatura ambiente. El tampón de bloqueo se retira y se reemplaza con HEPES 50 mM (pH 7,4), \beta-mercaptoetanol 1 mM y NaN_{3} al 0,2% para el almacenamiento. Antes del uso para convertir GPb en GPa, las perlas de Affi-gel® con la fosforilasa quinasa inmovilizada se equilibran lavándolas en el tampón usado para realizar la reacción de la quinasa, que consta de \beta-glicerofosfato 25 mM, DTT 0,3 mM y EDTA 0,3 mM a pH 7,8 (tampón de ensayo de quinasa).

La GP inactiva y parcialmente purificada obtenida de la cromatografía en 5'-AMP-Sepharose anterior (procedente de E. coli) o la mezcla de GPa y GPb obtenidas de la IMAC anterior (procedentes de células Sf9) se diluye 1:10 con el tampón de ensayo de quinasa y después se mezcla con la enzima fosforilasa quinasa mencionada anteriormente inmovilizada sobre las perlas de Affi-Gel®. Se añade NaATP a una concentración 5 mM y MgCl_{2} a una concentración 6 mM. La mezcla resultante se mezcla suavemente a 25ºC durante 30-60 minutos. La muestra se retira de las perlas y se estima el porcentaje de activación de GPb por conversión a GPa determinando la actividad enzimática de GP en presencia y ausencia de AMP 3,3 mM. Después se calcula el porcentaje de actividad enzimática total de GP debido a la actividad de la enzima GPa (independiente de AMP) como se indica a continuación:

% de HLGPa total = \frac{\text{actividad de HLGP - AMP}}{\text{actividad de HLGP + AMP}}

De forma alternativa, la conversión de GPb en Gpa puede controlarse mediante enfoque isoeléctrico, basándose en el desplazamiento de la movilidad electroforética que se detecta después de la conversión de Gpb en GPa. Las muestras de GP se analizan por enfoque isoeléctrico (IEF) utilizando el sistema Pharmacia PfastGel (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, New Jersey), usando geles previamente fundidos (intervalo pI 4-6,5) y el procedimiento recomendado por el fabricante. Después se visualizan las bandas resueltas de GPa y GPb sobre los geles mediante tinción con plata (2D-silver Stain II "Daiichi Kit", Daiichi Pure Chemicals Co., LTD., Tokyo, Japan). La identificación de GPa y GPb se realiza mediante comparación con los patrones de GPa y GPb derivados de E. coli que se ensayan en paralelo sobre los mismos geles que las muestras experimentales.

B) Ensayo de actividad de GPa

Las actividades de tratamiento/prevención de enfermedades/afecciones descritas en este documento de los compuestos inhibidores de la glucógeno fosforilasa de esta invención, pueden determinarse indirectamente evaluando el efecto de los compuestos de esta invención sobre la actividad de la forma activada de la glucógeno fosforilasa (GPa) por uno de dos procedimientos; la actividad de la glucógeno fosforilasa a se mide en la dirección de avance controlando la producción de glucosa-1-fosfato a partir de glucógeno, o siguiendo la reacción inversa, midiendo la síntesis de glucógeno a partir de glucosa-1-fosfato por la liberación de fosfato inorgánico. Todas las reacciones pueden realizarse por triplicado en placas de microvaloración de 96 pocillos y se mide el cambio de absorbancia debido a la formación del producto de reacción a la longitud de onda especificada más adelante, en un Lector Elisa MCC/340 MKII (Lab Systems, Finland) conectado a un Titertech Microplate Stacker (ICN Biomedical Co., Huntsville, Alabama).

Para medir la actividad enzimática de la GPa en la dirección de avance, la producción de glucosa-1-fosfato a partir de glucógeno se controla por el procedimiento general multienzimático acoplado de Pesce et al. [Pesce, M. A., Bodourian, S. H., Harris, R. C. y Nicholson, J. F. (1977) Clinical Chemistry 23: 1711-1717] modificado como se indica a continuación: se diluyen de 1 a 100 \mug de GPa, 10 unidades de fosfoglucomutasa y 15 unidades de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, IN) a 1 ml, en tampón D, a pH 7,2 y contiene HEPES 50 mM, KCl 100 mM, ácido etilenglicoltetraacético (EGTA) 2,5 mM, MgCl_{2} 2,5 mM, KH_{2}PO_{4} 3,5 mM y ditiotreitol 0,5 mM. Se añaden 20 \mul de esta solución madre a 80 \mul de tampón D que contiene 0,47 mg/ml de glucógeno, glucosa 9,4 mM y 0,63 mM de la forma oxidada de nucleótido fosfato de nicotinamida adenina (NADP+). Los compuestos a ensayar se añaden en forma de 5 \mul de solución en dimetilsulfóxido (DMSO) al 14% antes de la adición de las enzimas. La proporción basal de actividad enzimática de GPa en ausencia de inhibidores, por ejemplo, un compuesto de esta invención, se determina añadiendo 5 \mul de DMSO al 14% y se obtiene una proporción totalmente inhibida de la actividad enzimática de Gpa añadiendo 20 \mul de la sustancia de ensayo de control positivo, cafeína, a 50 mM. La reacción se sigue a temperatura ambiente midiendo la conversión de NADP+ oxidado a NADPH reducido a 340 nm.

Para medir la actividad enzimática de la GPa en la dirección inversa, se mide la conversión de glucosa-1-fosfato en glucógeno + fosfato inorgánico por el procedimiento general descrito por Engers et al [Engers, H. D., Shechosky, S. y Madsen, N. B. Can J. Biochem. 48: 746-754 (1970)], modificado como se indica a continuación: se diluyen de 1 a 100 ug de GPa en 1 ml de Tampón E (pH 7,2, HEPES 50 mM, KCl 100 mM, EGTA 2,5 mM, MgCl_{2} 2,5 mM y ditiotreitol 0,5 mM). Se añaden 20 \mul de esta solución madre a 80 \mul de Tampón E con 1,25 mg/ml de glucógeno, glucosa 9,4 mM y glucosa-1-fosfato 0,63 mM. El compuesto a ensayar se añade en forma de 5 \mul de solución en DMSO al 14% antes de la adición de la enzima. La proporción basal de la actividad enzimática de GPa en ausencia de inhibidores añadidos se determina añadiendo 5 \mul de DMSO al 14% y la proporción totalmente inhibida de la actividad enzimática de GPa se obtiene añadiendo 20 \mul de cafeína 50 mM. Esta mezcla se incuba a temperatura ambiente durante 1 hora y el fosfato inorgánico liberado de la glucosa-1-fosfato se mide por el procedimiento general de Lanzetta et al. [Lanzetta, P. A., Alvarez, L. J., Reinach, P. S. y Candia, O. A. Anal. Biochem. 100: 95-97 (1979)] modificado como se indica continuación: se añaden 150 ml de molibdato amónico 10 mg/ml y 0,38 mg/ml de verde de malaquita en HCl 1 N a 100 \mul de la mezcla de enzima. Después de un período de incubación de 20 minutos a temperatura ambiente, se mide la absorbancia a 620 nm.

Los ensayos anteriores realizados con un intervalo de concentraciones de compuestos de ensayo, permiten la determinación de un valor de CI_{50} (concentración del compuesto de ensayo necesaria para una inhibición del 50%) para la inhibición in vitro de la actividad enzimática de GPa por ese compuesto de ensayo.

Los compuestos de esta invención se adaptan fácilmente al uso clínico como agentes hipoglucemiantes. La actividad hipoglucemiante de las combinaciones de esta invención puede determinarse por la cantidad de compuesto de ensayo que reduce los niveles de glucosa con respecto a un vehículo sin compuesto de ensayo, en ratones macho ob/ob. El ensayo también permite la determinación de un valor de la dosis eficaz mínima aproximada (MED) para la reducción in vivo de la concentración de glucosa en plasma en tales ratones para tales compuestos de ensayo.

Puesto que la concentración de la glucosa en sangre está muy relacionada con el desarrollo de trastornos diabéticos, los compuestos de la presente invención, en virtud de su acción hipoglucemiante, previenen, detienen y/o invierten los trastornos diabéticos.

Se encierran cinco ratones macho de 5 a 8 semanas de edad, C57BL/6J-ob/ob (obtenidos de Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) por jaula, bajo las prácticas convencionales del cuidado de animales. Después de un período de aclimatación de una semana, se pesan los animales y se extraen 25 \mul de sangre del seno retroorbital antes de ningún tratamiento. La muestra de sangre se diluye inmediatamente 1:5 con solución salina que contiene un 0,025% de heparina sódica y se mantienen en hielo para realizar un análisis de metabolitos. Los animales se asignan a grupos de tratamiento de forma que cada grupo tenga una media similar para la concentración de glucosa en plasma. Después de la asignación de los grupos, los animales reciben por vía oral, cada día, durante 4 días, el vehículo que consta de: 1) 0,25% p/v de hipromelosa en agua sin ajuste del pH; o 2) 0,1% de Pluronic® P105 Block Copolymer Sufactant (BASF Corporation, Parsippany, NJ) en solución salina al 0,1% sin ajuste del pH. En el día 5, los animales se pesan de nuevo y después reciben por vía oral el compuesto de ensayo o el vehículo solo. Todos los compuestos se administran en un vehículo que consta de: 1) 0,25% p/v de hipromelosa en agua sin ajuste del pH; o 2) 10% de DMSO/0,1% de Pluronic® P105 en solución salina al 0,1% sin ajuste del pH; o 3) PEG400 puro sin ajuste del pH. Tres horas después, se extrae sangre de los animales por el seno retro-orbital para determinar los niveles de los metabolitos en sangre. Las muestras recién recogidas se centrifugan durante dos minutos a 10.000 x g a temperatura ambiente. En el sobrenadante se analiza la glucosa, por ejemplo, por el sistema Abbott VP^{TM} (Abbott Laboratories, Diagnostics División, Irving, TX) y VP Super System® Autoanalizer (Abbott Laboratories, Irving, TX) o el Abbott Spectrum CCX^{TM} Autoanalizer (Abbott Laboratories, Irving, TX) usando el sistema reactivo A-Gent^{TM} Glucose-UV (Abbott Laboratories, Irving, TX) (una modificación del procedimiento de Richterich y Dauwalder, Schweizerische Medizinische Wochenschrift, 101: 860 (1971)) (procedimiento de hexoquinasa), usando un patrón de 100 mg/dl. Después se calcula la glucosa en plasma por la ecuación:

Glucosa en plasma (mg/dl) = valor de muestra x 8,14

donde 8,14 es el factor de dilución, ajustado para el hematocrito del plasma (suponiendo que el hematocrito es del 44%).

Los animales que recibieron el vehículo mantienen unos niveles de glucosa hiperglucémicos sustancialmente invariables (por ejemplo, mayores o iguales a 250 mg/dl), los animales tratados con los compuestos de ensayo a dosis adecuadas tienen los niveles de glucosa significativamente reducidos. La actividad hipoglucemiante de los compuestos de ensayo se determina mediante análisis estadísticos (prueba t no emparejada) de la concentración de glucosa media en plasma entre el grupo tratado con compuestos de ensayo y el grupo tratado con vehículos en el día 5. El ensayo anterior realizado con un intervalo de dosis de compuestos de ensayo, permite la determinación de un valor aproximado de la dosis eficaz mínima (MED) para la reducción in vivo de la concentración de glucosa en plasma.

Los compuestos de esta invención se adaptan fácilmente al uso clínico como agentes para invertir la hiperinsulinemia, como agentes para reducir los triglicéridos y como agentes hipocolesterolémicos. Tal actividad puede determinarse por la cantidad de compuesto de ensayo que reduce los niveles de insulina, triglicéridos o colesterol con respecto a un vehículo de control sin compuesto de ensayo en ratones machos ob/ob.

Dado que la concentración del colesterol en la sangre está muy relacionada con el desarrollo de trastornos cardiovasculares, cerebrovasculares o vasculares periféricos, los compuestos de esta invención, en virtud de su acción hipocolesterolémica, evitan, detienen y/o invierten la aterosclerosis.

Dado que la concentración de la insulina en sangre está muy relacionada con la promoción del crecimiento de células vasculares y el aumento de la retención de sodio por el riñón, (además de otras acciones, por ejemplo, la promoción de la utilización de glucosa) y estas funciones son causas conocidas de hipertensión, los compuestos de esta invención, en virtud de su acción hipoinsulinémica, previenen, detienen y/o invierten la hipertensión.

Dado que la concentración de triglicéridos y de ácidos grasos libres en la sangre contribuye a los niveles globales de lípidos en sangre, los compuestos de esta invención, en virtud de su actividad reductora de triglicéridos y de ácidos grasos, previenen, detienen y/o invierten la hiperlipidemia.

Los ácidos grasos libres contribuyen al nivel global de lípidos en sangre e, independientemente, se han correlacionado negativamente con la sensibilidad a la insulina en una diversidad de estados fisiológicos y patológicos.

Se encierran cinco ratones macho de 5 a 8 semanas de edad, C57BL/6J-ob/ob (obtenidos de Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) por jaula, bajo las prácticas convencionales del cuidado de animales y se alimentan ad libitum con una dieta convencional para roedores. Después de un período de aclimatación de una semana, se pesan los animales y se extraen 25 \mul de sangre del seno retroorbital antes de ningún tratamiento. La muestra de sangre se diluye inmediatamente 1:5 con solución salina que contiene un 0,025% de heparina sódica y se mantienen en hielo para realizar un análisis de glucosa en plasma. Los animales se asignan a grupos de tratamiento de forma que cada grupo tenga una media similar para la concentración de glucosa en plasma. El compuesto a ensayar se administra mediante una sonda nasogástrica como una solución de aproximadamente el 0,02% al 2,0% (peso/volumen (p/v)) en (1) 10% de DMSO/0,1% de Pluronic® P105 Block Copolymer Surfactant (BASF Corporation, Parsippany, NJ) en solución salina al 0,1% sin ajuste de pH o (2) 0,25% p/v de hipromelosa en agua sin ajuste del pH. Como alternativa, los compuestos se pueden ensayar administrándolos por sonda nasogástrica disueltos o en suspensión en PEG400. Se mantiene una dosificación de una vez al día (s.i.d) o una dosificación de dos veces al día (b.i.d.) durante 1 a, por ejemplo, 15 días. Los ratones de control reciben sólo el 10% de DMSO/0,1% de Pluronic® P105 en solución salina al 0,1% sin ajuste de pH o el 0,25% p/v de hipromelosa en agua sin ajuste del pH.

Tres horas después de administrar la última dosis, los animales se sacrifican por decapitación y se recoge la sangre del tronco en tubos separadores de suero de 0,5 ml que contienen 3,6 mg de una mezcla 1:1 peso/peso de fluoruro sódico:oxalato potásico. Las muestras recién recogidas se centrifugan durante 2 minutos a 10.000 x g a temperatura ambiente y el sobrenadante del suero se transfiere y se diluye 1:1 volumen/volumen con una solución de 1TIU/ml de aprotinina en solución salina al 0,1% sin ajuste del pH.

Las muestras de suero diluidas después se almacenan a -80ºC hasta el análisis. Las muestras de suero diluidas y descongeladas se analizan con respecto a la insulina, triglicéridos, ácidos grasos libres y niveles de colesterol. La concentración de insulina en suero se determina usando estuches Equate® RIA INSULIN (procedimiento de doble anticuerpo; como se especifica por el fabricante) adquiridos de Binax, South Portland, ME. El coeficiente de variación entre ensayos es \leq 10%. Los triglicéridos en suero se determinan usando el sistema Abbott VP^{TM} y VP Super System® Autoanalyzer (Abbott Laboratories, Irving, TX) o el Abbott Spectrum CCX^{TM} (Abbott Laboratories, Irving, TX) usando el sistema reactivo A-Gent^{TM} Triglycerides Test (Abbott aboratories, Diagnostics Division Irving, TX) (procedimiento de enzima acoplada a lipasa; una modificación del procedimiento de Sampson et al., Clinical Chemistry 21: 1983 (1975)). Los niveles de colesterol total en suero se determinan usando el Abbott VP^{TM} y VP Super System® Autoanalizer (Abbott Laboratories, Irving, TX) y el sistema reactivo A-Gent^{TM} Cholesterol Test (procedimiento de enzima acoplada a colesterol esterasa; una modificación del procedimiento de Allain, et al., Clinical Chemistry 20: 470 (1974)) usando patrones de 100 y 300 mg/dl. La concentración de ácidos libres en suero se determina utilizando un estuche de Amano International Enzyme Co., Inc., adaptado para uso con el Abbott VP^{TM} y VP Super System® Autoanalyzer (Abbott Laboratories, Irving, TX) o el Abbott Spectrum CCX^{TM} (Abbott Laboratories, Irving, TX). Después se calculan los niveles de insulina, triglicéridos, ácidos grasos libres y colesterol total en suero por las ecuaciones,

Insulina en suero (\muU/ml) = Valor de muestra x 2

Triglicéridos en suero (mg/dl) = Valor de muestra x 2

Colesterol total en suero (mg/dl) = Valor de muestra x 2

Ácidos grasos libres en suero (\muEq/l) = Valor de muestra x 2

donde 2 es el factor de dilución.

Los animales que recibieron el vehículo mantienen unos niveles sustancialmente invariables y elevados de insulina en suero (por ejemplo, 275 \muU/ml), de triglicéridos en suero (por ejemplo, 235 mg/dl), de ácidos grasos libres en suero (por ejemplo, 1500 \muEq/ml) y de colesterol total en suero (por ejemplo, 190 mg/dl), mientras que los animales tratados con los compuestos de la presente invención, generalmente presentan menores niveles de insulina, triglicéridos, ácidos grasos libres y colesterol total en suero. La actividad de reducción de la insulina, triglicéridos, ácidos grasos libres y colesterol total en suero de los compuestos de ensayo se determina por análisis estadísticos (pruebas t no emparejadas) de la concentración media de insulina, triglicéridos, ácidos grasos libres o colesterol total en suero, entre el grupo tratado con compuesto de ensayo y el grupo de control tratado con vehículo.

Claims (15)

1. Un compuesto de Fórmula I:

27

un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

en la que

Q es fenilo;

cada uno de Z y X es independientemente (C, CH o CH_{2}), N, O o S;

X^{1} es NR^{a}, -CH_{2}-, O o S;

cada - - - - es, independientemente, un enlace o o está ausente, con la condición de que ambos - - - - no sean simultáneamente enlaces;

R^{1} es hidrógeno o halógeno;

cada uno de R^{a} y R^{b} es independientemente hidrógeno o -alquilo C_{1}-C_{8};

Y es 28 o está ausente;

R^{2} es hidrógeno, halógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, -CN, -C\equivC-SiMe_{3}, S alquilo C_{1}-C_{8} o alquinilo C_{2}-C_{8};

R^{3} es hidrógeno, halógeno, -alquilo C_{1}-C_{8}, -CN, -C\equivC-Si(CH_{3})_{3}, -O(alquilo C_{1}-C_{8}), -S(alquilo C_{1}-C_{8}), -CF_{3}, -NH_{2}, -NH(alquilo C_{1}-C_{8}), -N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}, -NO_{2}, -CO_{2}H, -CO_{2}(alquilo C_{1}-C_{8}), -(alquenilo C_{2}-C_{8}) o -(alquinilo C_{2}-C_{8});

R^{4} es -C(=O)A;

A es -NR^{d}R^{d}, o

29

cada R^{d} es independientemente hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, un grupo arilo seleccionado entre fenilo o naftilo; o un grupo heteroarilo seleccionado entre piridilo, pirimidinilo, imidazolilo, tienilo, furilo, pirazinilo, pirrolilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, indolilo, isoindolilo, indolizinilo, triazolilo, piridazinilo, indazolilo, pirinilo, quinolizinilo, isoquinolilo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, isotiazolilo, benzo[b] tienilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolil o isoxazolilo, en los que cada grupo arilo o heteroarilo puede opcionalmente sustituirse con halo, alquilo C_{1}-C_{8}, alcoxi C_{1}-C_{8}, -CF_{3}, -NH_{2}, -NH(alquilo C_{1}-C_{8}), -N(alquilo C_{1}-C_{8})_{2}, -NO_{2}, -CN, -CO_{2}H, -CO_{2}(alquilo C_{1}-C_{8});

cada R^{c} es independientemente hidrógeno, -C(=O)OR^{a}, -OR^{a}, -SR^{a} o -NR^{a}R^{a}; y

cada n es independientemente de 1 a 3.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{b} y R^{1} son hidrógeno.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que

R^{b} es hidrógeno;

R^{1} es hidrógeno;

Y es;

30

y A es

31

4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que

R^{b} es hidrógeno;

R^{1} es hidrógeno;

Y está ausente; y

A es

32

5. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que

R^{b} es hidrógeno;

R^{1} es hidrógeno;

Z es C;

X es O o S;

Y está ausente;

A es

33

R^{2} es hidrógeno; y

R^{3} es hidrógeno, halógeno o metilo.

6. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que A es

34

7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1, un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. Uso de un compuesto de fórmula I definido por cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, un estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 7 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir aterosclerosis, diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperglucemia, hipertensión, isquemia de los tejidos, o isquemia de miocardio, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar a un paciente que padece o tiene riesgo de padecer aterosclerosis, diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hiperglucemia, hipertensión, isquemia de los tejidos, o isquemia de miocardio.

9. Uso de un compuesto de fórmula I definido por cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, un estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 7 en la fabricación de un medicamento para inhibir la glucógeno fosforilasa.

10. El compuesto:

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno
[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-2-metil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno
[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[1-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido (\pm)-2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2,4-dicloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Dimetilcarbamoíl-2-feniletil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

Ester etílico del ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}piperidin-4-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metil-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-trimetilsilaniletinil-6H-tieno[2,3b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-etinil-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-fluoro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

Ácido 1-{(2S)-[(2-cloro-6H-tieno[2,3-b]pirrol-5-carbonil)amino]-3-fenilpropionil}-piperidin-4-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-bromo-4H-tieno
[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-ciano-4H-tieno[3,2-b]-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-ciano-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 3-bromo-4H-furo[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 4H-1,7-ditia-4-azaciclopenta[a]pentalen-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-3-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-(2R)-hidroxi-3-oxopropil]amida del ácido 2-cloro-3-metil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-metilsulfanil-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(3-hidroxiazetidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-morfolin-4-il-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3S,4S)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico;

[(1S)-Bencil-2-((3R,4R)-dihidroxipirrolidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico; o

[(1S)-Bencil-2-(4-hidroxipiperidin-1-il)-2-oxoetil]amida del ácido 2-bromo-4H-tieno[3,2-b]pirrol-5-carboxílico, o un estereoisómero, una sal o un profármaco farmacéuticamente aceptable del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del profármaco.

11. Un estuche con equipopara el tratamiento de la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos en un paciente que padece diabetes, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos, comprendiendo el estuche:

a) una primera composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1, o un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptables del mismo;

b) una segunda composición farmacéutica que comprende un segundo compuesto útil para el tratamiento de la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, las cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos; y

c) un recipiente para contener las composiciones primera y segunda.

12. Uso de un compuesto de fórmula I como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptables del mismo con al menos un compuesto adicional útil para el tratamiento de la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar a un paciente que padece diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hipertensión, hiperinslinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis, o isquemia de los tejidos.

13. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según la reivindicación 1, un estereoisómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y al menos un compuesto adicional útil para el tratamiento de la diabetes, resistencia a la insulina, neuropatía diabética, nefropatía diabética, retinopatía diabética, cataratas, hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertensión, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerosis o isquemia de los tejidos.

14. La composición farmacéutica según la reivindicación 13, en la que el segundo compuesto se selecciona de:

insulina y análogos de la insulina;

GLP-1 (7-37) (insulinotropina) y GLP-1 (7-36)-NH_{2};

sulfonilureas y análogos;

biguanidas;

\alpha_{2}-antagonistas;

imidazolinas;

glitazonas (tiazolidindionas);

agonistas PPAR-gamma;

inhibidores de la oxidación de ácidos grasos;

inhibidores de la \alpha-glucosidasa;

\beta-agonistas;

inhibidores de la fosfodiesterasa;

agentes que reducen los niveles de lípidos;

agentes antiobesidad;

vanadato, complejos de vanadio y complejos de peroxovanadio;

antagonistas de amilina;

antagonistas del glucagón;

inhibidores de la gluconeogénesis;

análogos y antagonistas de la somatostatina; y

agentes antilipolíticos.

15. La composición farmacéutica según la reivindicación 13, en la que el segundo compuesto es útil para tratar la diabetes y se selecciona de: insulina LysPro, GLP-1 (7-37) (insulinotropina), GLP-1 (7-36)-NH_{2}, clorpropamida, glibenclamida, tolbutamida, tolazamida, acetohexamida, glipizida, glimepirida, repaglinida, meglitinida; metformina, fenformina, buformina, midaglizol, isaglidol, deriglidol, idazoxan, efaroxan, fluparoxan, linoglirida, ciglitazona, pioglitazona, englitazona, troglitazona, darglitazona, rosiglitazona, clomoxir, etomoxir, acarbosa, miglitol, emiglitato, voglibosa, benfluorex, fenfluramina, Naglivan®, acipimox, Symlim®, nateglinida, camiglibosa (MDL73945), \beta-D-glucopiranósido, [(2,R,3S,4S,5R,6R)-3,4,5-trihidroxi-6-(hidroximetil)-2-piperidinil]metilo (MDL25637), exendina 4 sintética un polipéptido conteniendo 39 aminoácidos (AC2993), ácido [4-[(2R)-2-[[(2R)-2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil]amino]propil]fenoxi]acético (BRL 37344), [4-[-2-[[2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil]amino]propil]fenoxi]metilacetato (BRL35135), [4-[(3R)-3-[bis[(2R)-2-hidroxi-2-fenetil]amino]butil]benzamida (Ro 16-8714), N-ciclohexil-2'-O-metiladenosina (WAG 994), 2-[4-[2-[[(2S)-2-hidroxi-3-fenoxipropil]amino]etoxi]fenoxi]-N-(2-metoxietil)-acetamida (ICI-D 7114), sal disódica del ácido 5-[2-[[2-(3-clorofenil)-2-hidroxietil]amino]propil]-1,3-benzodioxol-2,2-dicarboxílico (CL 316243) y clorhidrato de (1,S,2R)-9-(2-fluoro-1-metilpropil)-2-metoxi-6-(1-piperazinil)purina (L-686.398).