ES2208727T3 - Procedimientos y composiciones para la deteccion in vivo de canceres y estados precancerosos de la cavidad bucal. - Google Patents

Abstract

SE DESCRIBE UN PROCEDIMIENTO PARA LA DETECCION IN VIVO DE LESIONES ORALES PRE-MALIGNAS Y DE CARCINOMAS ORALES, QUE INCLUYE LA ETAPA DE APLICAR A UN TEJIDO ORAL UN TINTE NO TOXICO, DISTINTO DEL AZUL DE TOLUIDINA O, SELECCIONADO ENTRE COMPUESTOS QUE POSEEN LA ESTRUCTURA (I) Y DERIVADOS IONICOS DE LOS MISMOS, EN LA CUAL R{SUP,1} ES H, O UN GRUPO ALQUILO INFERIOR O N(R{SUP,3}){SUB,2}, R{SUP,2} ES N, S U O, Y R{SUP,3} ES H O UN GRUPO ALQUILO INFERIOR.

Description

Procedimientos y composiciones de detección in vivo de cánceres y estados precancerosos de la cavidad bucal.

La presente invención se refiere a procedimientos de detección in vivo de lesiones bucales premalignas y carcinomas bucales.

En otro aspecto, la invención se refiere a composiciones para llevar a cabo tales procedimientos diagnósticos.

En otro aspecto, la invención se refiere a tales procedimientos diagnósticos in vivo y composiciones útiles en los mismos, los cuales son especialmente útiles en la exploración de pacientes para detectar posibles cánceres de la cavidad bucal como parte de exámenes rutinarios dentales o médicos, o procedimientos tales como exámenes médicos, limpiezas dentales, etc.

En todavía otro aspecto, la invención se refiere a procedimientos y composiciones que utilizan pigmentos más fácilmente disponibles y/o menos caros y menos complicados de sintetizar y/o purificar que los pigmentos utilizados en procedimientos de la técnica anterior.

En todavía otro aspecto, la invención se refiere a los procedimientos in vivo y composiciones que utilizan pigmentos potencialmente menos tóxicos que los derivados de fluoresceína y el azul de metileno de la técnica anterior, y que pueden, por lo tanto, aplicarse mediante enjuague de toda la cavidad bucal y/o mediante gargarismo.

En la técnica se conocen procedimientos de diagnóstico in vivo para la detección de lesiones bucales premalignas o carcinomas bucales que utilizan composiciones de pigmentos selectivamente retenidos por los tejidos que se han convertido en anormales debido a displasia, hiperplasia, tumorogénesis y otras lesiones superficiales activas. Por ejemplo, los procedimientos que utilizan fluoresceína o derivados de fluoresceína se dan a conocer en Chenz, Chinese Journal of Stomatology (27:44-47 (1992)) y Filiurin (Stomatologiia (en ruso) 72:44-47 (1993)). Estos procedimientos implican la aplicación del pigmento, seguida de examen bajo luz ultravioleta con el fin de detectar el tejido canceroso/precanceroso, el cual es selectivamente fluorescente.

Otro procedimiento de la técnica anterior implica la aplicación in vivo mediante enjuagado con toluidino azul O, seguido de examen visual rutinario para detectar tejido pigmentado selectivamente. Tales procedimientos se dan a conocer, por ejemplo, en la patente U.S. concedida a Tucci, nº 5.372.801, y en la patente U.S. nº 4.321.251 concedida a Mashberg. El toluidino azul ha sido utilizado durante décadas como pigmento histopatológico para utilización in vitro. A través de su utilización se ha venido a conocer como un pigmento metacromático, que pigmenta ácidos nucleicos ricos en ADN y ARN de un color rosa a violeta. El color azul profundo inherente del toluidino azul se convierte en violeta o rosa cuando el pigmento se une a un ácido nucleico a otra macromolécula celular ácida. Evidentemente, este tipo de pigmentación depende de que el pigmento acceda a las estructuras internas subcelulares, tal como el núcleo. Tal acceso se obtiene fácilmente mediante la "fijación" de una muestra de tejido con formaldehído u otro reactivo que altere la membrana celular sin destruir la estructura celular general.

En contraste con el mecanismo implicado en la utilización in vitro, la pigmentación de tejido bucal in vivo con toluidino azul O se debe a su capacidad de penetrar en los espacios intersticiales agrandados y más accesibles del tejido displástico, el cual retiene el pigmento durante más tiempo que las áreas que contienen tejido normal con sus fuertes uniones intercelulares. Empíricamente, se realiza la observación de que el toluidino azul simplemente no penetra en los espacios intercelulares normales de manera eficiente, permanece tempbucalmente localizado, se difunde hacia fuera con el tiempo, y no permanece unido a las células como haría si de hecho "pigmentase" subestructuras ácidas.

El procedimiento Mashberg implica la aplicación de la solución de toluidino azul O como enjuague de toda la cavidad bucal, con gargarismo, seguido de enjuagues con agua y ácido para eliminar el pigmento que no queda retenido por el tejido canceroso o precanceroso. A continuación, se confirma el diagnóstico preliminar Mashberg mediante la aplicación directa de la composición de toluidino azul O al sitio sospechoso tras 10-14 días.

La patente Tucci nº 5.372.801 da a conocer una composición mejorada de toluidino azul O para su utilización de acuerdo con el procedimiento general Mashberg.

Se ha propuesto un procedimiento in vivo que implica la utilización de solución de Lugol (yodo) y azul toluidino O para detectar cáncer esofágico simultáneo con cánceres del tracto aerodigestivo superior, en Papazian (Gastroenterologie Clinique et Biologique (9:16-22, 1985). Debido a posibles propiedades tóxicas de la fluoresceína, yodo y azul de metileno, se considera que no son adecuados para su aplicación indiscriminada mediante procedimientos de enjuague bucal y/o gargarismo. El azul de toluidino O no es tóxico, pero ha sido caro de sintetizar y purificar en cantidades comerciales.

De acuerdo con lo anterior, sería ventajoso utilizar pigmentos diferentes de la fluoresceína, derivados de fluoresceína, yodo, azul de metileno o toluidino azul O, en procedimientos diagnósticos para la detección in vivo de lesiones bucales premalignas y carcinomas bucales.

El presente inventor ha descubierto ahora que los pigmentos no tóxicos diferentes del azul de metileno o del toluidino azul O, seleccionados entre los compuestos con la estructura

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y derivados iónicos de los mismos, en la que R^{1} es H, un grupo alquil inferior ó N(R^{3})_{2}, R^{2} es N, S o O, y R^{3}es H o un grupo alquil inferior, son efectivos para la detección in vivo de lesiones bucales premalignas o carcinomas bucales. Los grupos alquil inferiores pueden ser grupos C_{1}-C_{4}, de cadena lineal o ramificada, preferentemente grupos metil o etil. En general, se utilizan estos pigmentos de acuerdo con el mismo procedimiento general según se da a conocer en la patente Mashberg nº 4.321.251, es decir, mediante el enjuague secuencial de la cavidad bucal con la composición de pigmento, la cual es retenida selectivamente por tejidos cancerosos y precancerosos, y a continuación, el enjuague de la cavidad bucal para eliminar composición de pigmento no retenida.

La determinación de si un pigmento particular con la estructura anteriormente descrita es retenido selectivamente puede ser fácilmente llevada a cabo por expertos en la técnica sin experimentación excesiva, mediante la utilización del pigmento de acuerdo con el procedimiento general Mashberg, descrito anteriormente. La toxicidad potencial de un pigmento particular puede determinarse fácilmente mediante técnicas y estándares reconocidos en la técnica, por ejemplo, estudios de alimentación animal.

Las composiciones de la invención se formulan preferentemente para rendir una solución final que es sustancialmente isotónica y tiene un pH en el intervalo aproximado comprendido entre 2,5 a 7,0, preferentemente 4,0 a 5,0. Esto se consigue mediante la adición de un sistema tampón hidrosoluble apropiado. El sistema tampón preferido en la actualidad es ácido acético-acetato sódico. Otros sistemas tampón incluyen ácido cítrico-citrato sódico, o sistemas mixtos ácido-sal, tal como ácido cítrico-fosfato sódico y similares.

El disolvente utilizado para proporcionar composiciones de pigmento líquidas es un disolvente acuoso. De acuerdo con la realización preferente de la invención, el disolvente incluye un alcohol farmacéuticamente aceptable, es decir, un alcohol no tóxico, no reactivo, por ejemplo, etil alcohol. Tales disolventes no interfieren apreciablemente con el mecanismo de pigmentación de tejido y no contribuyen por sí mismas a la reducción de las formas cromo de los pigmentos a formas leuco.

Pueden añadirse potenciadores de sabor, estables frente al agente oxidante, con el fin de mejorar la palatabilidad de la solución de pigmento en el caso de que se utilice como "enjuague".

La cantidad de pigmento en las composiciones líquidas se ajusta preferentemente para rendir una concentración de, aproximadamente, 1% en peso en la composición final, aunque pueden utilizarse concentraciones más elevadas y las concentraciones menores son por lo menos parcialmente efectivas, por ejemplo en el intervalo aproximado comprendido entre 0,5 y 3,5% en peso.

Sorprendentemente, los pigmentos con la estructura anteriormente definida, los cuales están íntimamente relacionados con el toluidino azul O, por ejemplo, el azul de metileno y la tionina, han demostrado ser ineficaces, mientras que otros pigmentos íntimamente relacionados con el toluidino azul O, por ejemplo, el azul de cresilo brillante, Azur A, Azur B y Azur C, son eficaces.

Según los conocimientos actuales del presente inventor, se utilizaron Azur B y Azur C de acuerdo con la realización actualmente preferente de la invención.

Ejemplos

Se presentan los siguientes ejemplos con el fin de ilustrar la práctica de la invención a los expertos en la materia.

Ejemplo 1

Se prepararon composiciones de ensayo de pigmentos Azur B, Azur C, azul de cresilo brillante ("BCB") y tionina, y una composición control, pigmento toluidino azul O ("TBO"), mediante la mezcla de cada uno de los pigmentos con los ingredientes indicados en las proporciones siguientes (% en peso):

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Ingrediente	% en peso
Agua purificada, U.S.P.	83,86
Ácido acético glacial, U.S.P.	4,61
Acetato sódico trihidrato, U.S.P.	2,45
Etil alcohol SD18	7,48
Peróxido de hidrógeno 30%, U.S.P.	0,41
IFF Frambuesa IC563457	0,20
Pigmento	1,00

Ejemplo 2

Se preparó una solución de enjuague mediante la mezcla de los ingredientes siguientes en las proporciones que se indican (% en peso):

Agua purificada, U.S.P.	98,7
Ácido acético glacial, U.S.P.	1,00
Benzoato sódico, U.S.P.	0,10
IFF Frambuesa IC563457	0,20

Ejemplo 3

Se determinó la efectividad clínica de cada una de las mezclas de ensayo, en comparación con la mezcla de control TBO, mediante el protocolo Mashberg.

En primer lugar, se exploraron los pacientes con el fin de identificar patologías bucales utilizando la mezcla de control TBO. Tras identificar potenciales patologías cancerosas o precancerosas, se eliminaron todos los restos de TBO mediante enjuagues repetidos con agua y la solución de enjuague de ácido acético. Aquellos pacientes que mostraban patología bucal se utilizaron, a continuación, como sujetos de ensayo para cada una de las mezclas de ensayo. Se aplicaron 2-3 centímetros cúbicos de cada mezcla de ensayo mediante el pintado de las superficies mucosas patológicas, seguido de enjuague con la mezcla de enjuague y agua para eliminar el exceso de composición de pigmento. Tras examinar cada pigmento, y previamente al ensayo con el pigmento siguiente, se eliminaron todos los restos del pigmento de la lesión mediante enjuague repetido con la mezcla de enjuague y agua.

La mezcla de ensayo de Azur B proporcionó una intensidad de pigmentación, localización de las lesiones, y delineación de los límites de éstas, equivalentes a TBO. El tejido adyacente no pigmentado muestra una ligera acumulación de pigmento, pero sin perjudicar la discriminación de la lesión.

La mezcla de ensayo de Azur C proporcionó una intensidad de pigmentación, localización de las lesiones, y delineación de los límites de las lesiones, equivalentes a TBO. Los tejidos adyacentes no implicados estaban pigmentados de un tono rojo/violeta, pero sin perjudicar la discriminación de la lesión.

La mezcla de ensayo de azul de cresilo brillante proporcionó resultados similares a Azur B y Azur C.

La mezcla de ensayo de tionina proporcionó una pigmentación de fondo de color rojo cálido sobre ambos tejidos, pigmentados y no pigmentados, de manera que la discriminación de los límites de la lesión era insuficiente.

Ejemplo 4

Se repiten los procedimientos del Ejemplo 2, excepto en que las composiciones de ensayo y de control se aplican a la mucosa bucal mediante enjuague, con gargarismo, en lugar de mediante aplicación directa en la localización de los sitios sospechosos. Se obtienen resultados equivalentes.

Tras dar a conocer la invención del presente inventor en términos que permitan a los expertos en la materia llevar a cabo y hacer uso de la misma, y, tras identificar las realizaciones preferidas de la misma en la actualidad.

Claims (5)

1. Utilización, en la fabricación de una preparación para la detección in vivo mediante examen visual rutinario de lesiones bucales premalignas y carcinomas bucales, de una composición de pigmento que comprende un pigmento no tóxico diferente de toluidino azul O y azul de metileno, seleccionado entre los compuestos con la estructura:

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y derivados iónicos de los mismos, en la que los grupos R^{1} son iguales o diferentes y se seleccionan de entre H, un grupo C_{1} a C_{4}, ó N(R^{3})_{2}; los grupos R^{2} son iguales o diferentes y se seleccionan de entre N, S o O; y los grupos R^{3} son iguales o diferentes y se seleccionan de entre H o un grupo alquil C_{1} a C_{4}.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que el pigmento se selecciona de entre Azur B, Azur C, y azul de cresilo brillante.

3. Utilización según la reivindicación 1 ó 2, en la que el pigmento es Azur B.

4. Utilización según la reivindicación 1 ó 2, en la que el pigmento es Azur C.

5. Utilización según la reivindicación 1 ó 2, en la que el pigmento es azul de cresilo brillante.