ES2207981T3

ES2207981T3 - Terapia endocrina para el cancer de mama: tratamiento combinado con tamoxifeno mas dibenzofuranos policlorados alquilicos.

Info

Publication number: ES2207981T3
Application number: ES99967497T
Authority: ES
Inventors: Stephen H. Safe
Original assignee: Texas A&M University System
Current assignee: Texas A&M University System
Priority date: 1998-12-21
Filing date: 1999-12-21
Publication date: 2004-06-01
Anticipated expiration: 2019-12-21
Also published as: AU772920B2; DE69912477D1; WO2000037065A2; US6136845A; AU2376600A; EP1140047B1; DE69912477T2; JP2002532546A; CA2356624A1; EP1140047A2; WO2000037065A3; ATE252896T1

Abstract

Productos que contienen un primer compuesto de **fórmula** en la que R1, R3, R6 y R8 o R2, R4, R6 y R8 son individual e independientemente un hidrógeno o un sustituyente seleccionado de cloro, flúor, bromo y un grupo alquilo lineal o ramificado de uno a cuatro carbonos, teniendo dicho compuesto al menos un sustituyente alquilo y al menos dos sustituyentes halógenos; y un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos; como un preparación combinada para uso simultáneo o secuencial para inhibir el crecimiento de un tumor dependiente de estrógenos.

Description

Terapia endocrina para el cáncer de mama: tratamiento combinado con tamoxifeno más dibenzofuranos policlorados alquílicos.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a la terapia y prevención tumoral. Más particularmente, se refiere a métodos y combinaciones farmacéuticas para inhibir los tumores dependientes de estrógenos.

Antecedentes de la invención

Muchos tumores de mama son dependientes de estrógenos, quiere decir que necesitan estrógenos para su crecimiento. Durante varios años se han utilizando antiestrógenos en un tratamiento común y con éxito del cáncer de mama. Los antiestrógenos son un tipo de compuestos que inhiben a los estrógenos el que causen una respuesta total en los tejidos diana. Un compuesto antiestrógeno que se ha utilizado durante años como un fármaco preventivo y terapéutico en el cáncer de mama es el tamoxifeno. Se han utilizado mucho también la progesterona y las progestinas relacionadas para tratar el cáncer de mama en animales de laboratorio y en seres humanos. Se han descrito en los últimos años otros muchos compuestos antiestrógenos como posibles alternativas del tamoxifeno, comprendiendo inhibidores de aromatasas (Bednarski, patente de E.E.U.U. nº 4.745.109), hidrazonas antiestrógenas (Morgan, patente de E.E.U.U: Nº 4.732.904) y benzotiofenos antiestrógenos (Jones, patente de E.E:U:U: nº 4.418.068).

Sin embargo, muchos antiestrógenos no actúan como estrictos antagonistas, sino más bien actúan como agonistas parciales sobre el receptor de estrógenos (ER, por sus siglas en inglés). Se ha visto que esta actividad agonista parcial es una "espada de doble filo". Mientras que se ha visto que la actividad agonista parcial produce efectos beneficiosos, tales como reducir el colesterol del suero y evitar la osteoporosis, recientemente se ha visto implicada por varios estudios independientes como promotora de aumentar la formación de tumores del endometrio. (Las células del endometrio consisten en células epiteliales del estroma y de la luz, que además de las células del endometrio de músculo liso, comprenden los principales tipos celulares del útero). Por ejemplo, los hallazgos del National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project concluían que "el riesgo de cáncer de endometrio aumenta después del tratamiento con tamoxifeno para el cáncer de mama; sin embargo, el beneficio neto sobrepasa con mucho el riesgo" (Fisher et al. (1994)). Se confirmó recientemente en un estudio con 87.323 mujeres con cáncer de mama, así como con otros, la incidencia aumentada de cáncer de endometrio después de terapia auxiliar con tamoxifeno para cáncer de mama (Rutqvist et al. (1995), Fornander et al. (1989), Mouridsen et al. (1988), Ryden et al. (1986)). La actividad agonista parcial o "similar al estrógeno" del tamoxifeno en el útero humano y los efectos de tamoxifeno sobre la incidencia aumentada del cáncer de endometrio está de acuerdo con estudios anteriores en modelos de animales de laboratorio y cultivos celulares. Por ejemplo, la hiperplasia uterina inducida por tamoxifeno en la mayoría de los modelos de animales y crecimiento tumoral en ratones sin sistema inmune sin timo que llevan tumores de endometrio transplantados que responden a los estrógenos.

Así, el método del estado anterior de la técnica que trata tumores de mama dependientes de estrógenos da como resultado un aumento significativo de la incidencia de tumores de endometrio. Esta incidencia aumentada de tumores de endometrio se puede deber a la actividad similar al estrógeno de tamoxifeno en el útero.

Más recientemente, se ha dirigido otra zona de investigación a la actividad antiestrógeno de agonistas del receptor de aril-hidrocarburos (AhR, por sus siglas en inglés) utilizando 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD, por sus siglas en inglés) como un compuesto modelo. El TCDD y los compuestos relacionados inhiben el crecimiento del tumor de mama en modelos de roedores y en respuestas inducidas por 17\beta-estradiol (E2) en células cancerígenas de útero de roedores y de mama de ser humano. Mientras que se demostró que el TCDD era un antiestrógeno eficaz en cultivo en líneas cancerígenas de cáncer de mama de ratas, ratones y de seres humanos MCF-7, se demostró que era demasiado hepatocarcinógeno para utilizarse como antiestrógeno terapéutico. Estudios anteriores han demostrado que el TCDD induce respuestas tóxicas y bioquímicas en la rata; una de tales respuestas bioquímicas, la instrucción de aril-hidrocarburo-hidroxilasa (AHH), por sus siglas en inglés) o actividades de etoxiresorufin-O-deetilasa (EROD, por sus siglas en inglés), dependientes de CYPIA1, en el hígado, se correlacionan con la toxicidad de TCDD.

Se sintetizaron originalmente una serie de 6-alquil-1,3,8-triclorodibenzofuranos (triCDFs) para investigar sus actividades como antagonistas parciales de AhR. Los 6-alquil-1,3,8-triCDFs son de fórmula:

1

en la que R_{1}, R_{3} y R_{8} son cloro, R_{6} es un grupo alquilo lineal o ramificado de uno a cuatro carbonos, R_{2}, R_{4}, R_{7} y R_{9} son hidrógeno, se utilizó 6-alquil-1,3,8-triclorodibenzofurano (6-MCDF, por sus siglas en inglés) como un prototipo para esta serie de compuestos.

Los estudios iniciales mostraban que el 6-MCDF unido al receptor de Ah era un inductor débil de CYPIA1 y exhibía una toxicidad mínima. Aún más, 6-MCDF inhibía las respuestas tóxicas inducidas de TCDD y se caracterizaba como un antagonista del receptor de Ah, (B. Astroff et al. (1988); M. Harris et al. (1989); R. Bannister et al. (1989); C. Yao et al. (1989)). Sin embargo, el 6-MCDF no inhibía la actividad antiestrógena inducida por el TCDD; el 6-MCDF era también un antiestrógeno en el útero de rata. (B. Astroff y Safe (1991)). En 1988, Astroff y Safe informaron que TCDDy 6-MCDF causaban una disminución dependiente de la dosis en la unión de receptor de la progesterona (PR, por sus siglas en inglés) y de ER nuclear y citosólico en el útero de ratas Sprague-Dawley hembras de 21 a 25 días de edad. Aún más, el 6-MCDF era solamente de 300 a 570 veces menos activo que el TCDD como un compuesto antiestrógeno, pero era > 157.000 veces menos potente que el TCDD como inductor del CYPIA1 hepático en los mismos animales (CYPIA1 es un sustituto de la potencia tóxica). Los estudios posteriores mostraron que el 6-MCDF y compuestos relacionados inhibían la hipertrofia inducida por E2, la actividad de la peroxidasa, unión del PR y ER citosólico, y los niveles del receptor de EGF y del mRNA de c-fos en el útero de la rata. Así, era aparente que el 6-MCDF era capaz del efecto beneficioso antiestrógeno sin los efectos secundarios tóxicos del TCDD.

Se ha investigado la actividad antiestrógena in vivo de una serie de dibenzofuranos policlorados sustituidos con alquilo (PCDFs, por sus siglas en inglés) en el útero de ratas Sprague-Dawley hembras inmaduras (B. Astroff et al. (1991); R. Dickerson et al. (1995)). Los compuestos utilizados en este estudio contienen dos, tres, o cuatro sustituyentes laterales y comprenden: 6-MCDF, 6-etil-1,3,8-triCDF, 6-n-propil-1,3,8-triCDF, 6-i-propil-1,3,8-triCDF, 6-t-butil-1,3,8-triCDF, 8-MCDF (dos sustituyentes laterales); 6-metil-2,3,8-triCDF, 6-metil-2,3,4,8-tetraCDF, 8-metil-1,3,7-triCDF, y 8-metil-1,2,4,7-tetraCDF (tres sustituyentes laterales); 8-metil-2,3,7-triCDF, 8-metil-2,3,4,7-tetraCDF (cuatro sustituyentes laterales). Se investigaron también dos compuestos adicionales, 8-metil-2,3,7-triclorodibenzo-p-dioxina y 8-metil-2,3,7-tribromodibenzo- p-dioxina (cuatro sustituyentes laterales). Todos los compuestos sustituidos con alquilo inhibían el aumento de peso húmedo uterino inducido por los estrógenos y la unión de PR y ER nuclear y citosólico. Se determinaron las relaciones cuantitativas estructura-actividad antiestrógena utilizando 6-i-propil-1,3,8-triCDF, 6-metil-2,3,4,8-tetraCDF y 8-metil-2,3,4,7-tetraCDF como congéneres representativos que contienen dos, tres y cuatro sustituyentes laterales, respectivamente. Los valores de ED_{50} (ED_{50} se define como la dosis que produce 50% de respuesta máxima) para la capacidad antiestrógena eran similares para los tres compuestos; sin embargo los valores de ED_{50} para la inducción de la actividad hepática dependiente de CYPIA1 eran 73.600 (estimado), 8,52 y 5,31 mmol/kg para 6-i-propil-1,3,8-triCDF, 6-metil-2,3,4,8-tetraCDF y 8-metil-2,3,4,7-tetraCDF, respectivamente. En base a los resultados de estudios anteriores, se puede utilizar CYPIA1 como un sustituto de la potencia tóxica en la rata; por tanto, las relaciones ED_{50} elevada (inducción de CYPIA1)/ ED_{50} (actividad antiestrógena) son indicativas de baja toxicidad y elevada potencia antiestrógena. La relación era 13.990 - 17.100 para 6-i-propil-1,2,8.tri-CDF, mientras que las relaciones correspondientes para los compuestos con tres o cuatro sustituyentes laterales variaba de 0,64 - 3,34. Estos datos sugerían que los PCDFs con alquilo sustituido en posiciones alternas 1,3,6,8 eran modelos estructurales útiles para desarrollar nuevos antiestrógenos mediados por AhR para el tratamiento de cáncer de mama. Los datos de los efectos antiestrógenos de alquil-dibenzofuranos sustituidos de forma alterna 1,3,6,8 o 2,4,6,8 se han presentado en la patente de E.E.U.U. nº 5.516.790.

Se investigó la actividad antitumoral in vivo de 6-MCDF, 8-MCDF (8-metil-1,3,6-triCDF) y 6-ciclohexil-1,3,8-triCDF (6-CHDF) en el modelo de tumor de mama de rata DMBA (McDougal et al., Inhibition of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene-induced rat mammary tumor growth by aryl hydrocarbon receptor agonist. Cancer Letters 120: 53-63, 1997). En dosis de 5, 10 o 25 mg/kg/semana, 6- y 8-MCDF inhibían de forma significativa el crecimiento de los tumores de mama, y en la dosis de 5 mg/kg/semana, se observaba una inhibición del crecimiento de > 50% para los dos isómeros. Por el contrario, 6-CHDF era inactivo en la dosis de 5 mg/kg/semana, y las relaciones de estructura-actividad antitumoral (6-/8-MCDF >> 6-CHDF) se correlacionaban con los estudios estructura-capacidad antiestrógena (útero de la rata) y las afinidades de unión relativa de estos compuestos para el AhR. La actividad antitumoral de 6- u 8-MCDF en el mamífero no se acompañaba con cualquier cambio significativo en las relaciones de peso hígado/cuerpo, morfología del hígado o inducción de actividad hepática dependiente de CYPIA1, que es uno de los indicadores más sensibles de exposición a agonistas de AhR. La RT-PCR y los análisis por inmunotransferencia (Western blot) del mRNA del tumor de mama y de extractos de proteína, respectivamente, confirmaban la presencia de la AhR, sugiriendo que las vías de señalización mediadas por el AhR son funcionales en los tumores de mama de rata, pero simplemente no activadas por 6- u 8-MCDF.

Intentando no estar obligado por la teoría, se cree que la mayoría de los antiestrógenos (es decir, tamoxifeno) y los alquil-PCDFs funcionan mediante dos mecanismos diferentes. Se cree que AhR hace disminuir el ER mediante un mecanismo desconocido (presumiblemente postranscripcional). Se cree que los alquil-PCDFs trabajan mediante el AhR que interfiere con el ER. Se cree que el tamoxifeno se une al ER y bloquea la acción del ER en la mama. Se cree que el 6-MCDF actúa a través del AhR y se une por tanto al receptor. Se cree que el 6-MCDF es un antagonista de AhR para las respuestas tóxicas (es decir, inhibe la toxicidad del TCDD en estudios de co-tratamiento) pero se cree que actúa como un agonista del receptor de Ah para la capacidad antiestrógena (es decir, actúa como el TCDD).

El método del estado anterior de la técnica de tratar los tumores de mama dependientes de estrógenos frecuentemente implica la administración de tamoxifeno. Tal como se menciona anteriormente, se ha visto que la terapia con tamoxifeno se asocia con una incidencia significativamente elevada de formación de tumores de endometrio en varios ensayos independientes (Fornander et al. (1989), Rutqvist et al. (1995), Mouridsen et al. (1988), Ryden et al. (1986), Fisher et al. (1994)). Algunos estudios han sugerido que se puede reducir la incidencia de formación de tumores de endometrio con dosis más bajas de tamoxifeno. El ensayo de Estocolmo demostró un riesgo aproximadamente 6 veces más elevado para tumores de endometrio con un protocolo de tratamiento de 40 mg/día durante 2 años (Fornander et al. (1989), Rutqvist et al. (1995)), mientras que los ensayos daneses y del Sur de Suecia demostraron riesgos de solamente 3,3 y 2,0 veces más elevados, respectivamente. En los dos últimos experimentos, se administró tamoxifeno en una dosis de 30 mg/día durante un año. En los ensayos escoceses y de Manchester (Inglaterra), en los cuales el tamoxifeno se administró en una dosis de 20 mg/día, no parecía que hubiera riesgo aumentado de sufrir tumores de endometrio (Stewart et al. (1989), Stewart (1992), Ribeiro et al. (1992)). Sin embargo, un tercer estudio con 2843 pacientes demostró un riesgo aumentado 7,5 veces de formación de tumores de endometrio con la misma dosis (20 mg/día) de tamoxifeno (Fisher et al. (1994)). A la vista de los menores tamaños de población de los estudios anteriores, se deben interpretar con cuidado los resultados de los ensayos escocés y de Manchester (Inglaterra). Así, parece claro considerando la mayoría de los estudios, que la terapia con tamoxifeno da como resultado unos riesgos significativamente elevados de formación de tumores de endometrio. Sin embargo, no está actualmente claro considerando los ensayos existentes, si una reducción en la dosis de tamoxifeno dé como resultado un riesgo reducido de formación de tumores de endometrio.

Aunque no existe una clara indicación de que al reducir la dosis de tamoxifeno se reduce de forma correspondiente el riesgo de la formación de tumores de endometrio, se debería tener en cuenta que los ensayos basados en grandes poblaciones no se han realizado con dosis de tamoxifeno menores de 20 mg/día. Sin embargo, los datos de los modelos de cultivos celulares y de animales sí que sugieren que causa un efecto en el útero relacionado con la dosis para tamoxifeno y esto está de acuerdo con los principios farmacológicos. Por ejemplo, el tamoxifeno producía aumentos significativos dependientes de la dosis en el peso húmedo de úteros de rata, que se correlacionaban con aumentos de la concentración del fármaco. Por tanto, como consecuencia las reducciones similares en dosis de tamoxifeno podía dar también como resultado la disminución en la formación de tumores de endometrio.

Esta invención utiliza la combinación de un compuesto antiestrógeno convencional y un alquil-PCDF (una nueva clase de antiestrógenos aromátiicos halogenados) para reducir la concentración de los compuestos antiestrógenos sin reducir la eficacia en la prevención o tratamiento de cáncer de mama. Merece indicarse, que aunque el estado anterior de la técnica enseña que los fármacos antiestrógenos se han utilizado durante al menos una década para tratar cáncer de mama, no se ha realizado la combinación de compuestos antiestrógenos y alquil-PCDFs, sugiriendo en verdad que esta invención no es obvia.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona productos que contienen un primer compuesto de fórmula:

2

en la que R_{1}, R_{3}, R_{6} y R_{8} o R_{2}, R_{4}, R_{6} y R_{8} son individual e independientemente un hidrógeno o un sustituyente seleccionado de cloro, flúor, bromo y un grupo alquilo lineal o ramificado de uno a cuatro carbonos, teniendo dicho compuesto al menos un sustituyente alquilo y al menos dos sustituyentes halógenos; y

un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos;

como una preparación combinada para uso simultáneo o secuencial para inhibir el crecimiento de un tumor dependiente de estrógenos.

Por tanto, la presente invención implica la administración y uso de PCDFs en combinación con análogos y derivados de sustratos antiestrógenos esteroideos y no esteroideos. Los análogos de sustratos antiestrógenos no esteroideos pueden ser, pero no se limitan, compuestos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos. Más específicamente, se puede seleccionar el segundo compuesto de tamoxifeno, toremifeno, clomifeno, nafoxidina y hidroxitamoxifeno.

El término inhibición en esta invención indica o una reducción en la tasa de crecimiento tumoral, tamaño tumoral, volumen tumoral, o incluso la eliminación total de un tumor. Aún más, puede ser para retrasar la aparición de un tumor o prevenir completamente la aparición de un tumor (para tratamiento preventivo de pacientes con elevado riesgo) o recurrencia (después de un tratamiento anterior de tumores dependientes de estrógenos).

La presente invención proporciona también:

productos que contiene un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

y un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos;

en forma de una preparación combinada para su uso simultáneo o secuencial para inhibir el crecimiento de un tumor dependiente de estrógenos;

una combinación farmacéutica para inhibir el crecimiento de tumores dependientes de estrógenos que comprende un primer compuesto de fórmula:

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en la que R_{1} a R_{4}, R_{6} y R_{8} son tal como se definen anteriormente y un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos;

una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de un tumor dependiente de estrógenos que comprende un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

y un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos;

uso de un primer compuesto de fórmula:

4

en la que R_{1} a R_{4}, R_{6} y R_{8} son tal como se definen anteriormente, para la fabricación de un medicamento para usarse en combinación con un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos, para la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos;

uso de un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos, para la fabricación de un medicamento para usarse en combinación con un primer compuesto de fórmula:

5

en la que R_{1} a R_{4}, R_{6} y R_{8} son tal como se definen anteriormente, para la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos:

uso de un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

para la fabricación de un medicamento para usarse en la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos en combinación con un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos y

uso de un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil- etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos antiestrógenos, para la fabricación de un medicamento para usarse en la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos en combinación con un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

Esta invención proporciona mejoras significativas con respecto a la técnica anterior al proporcionar una formulación de combinación de un derivado de trifenil-etileno y un alquil-PCDF sustituido en 1,3,6,8 o en 2,4,6,8, que actúan juntos, por sinergia o adición, para inhibir el crecimiento de tumores dependientes de estrógenos. El resultado de este efecto combinado es que se puede reducir la concentración a la cual son efectivos los derivados de trifenil-etileno, reduciendo de esta manera el potencial de inducción de tumores de endometrio. Aún mas. además de la reducción de la capacidad endocrina de formación de tumores, debido a la concentración reducida necesaria de trifenil-etileno, los compuestos alquil-PCDF sustituidos en 1,3,6,8 actúan como inhibidores directos de la formación de tumores de endometrio inducidos por estrógenos.

Otros y más objetos, características y ventajas serán aparentes y más fácilmente entendidos al leer la siguiente descripción y al ver las figuras anejas.

Breve descripción de las Figuras

La Figura 1 muestra el volumen tumoral y el efecto del tratamiento con tamoxifeno, MCDF, o co-tratamiento.

La Figura 2 muestra el volumen tumoral y el efecto del tratamiento con tamoxifeno.

La Figura 3 muestra el volumen tumoral y el efecto del tratamiento con MCDF.

La Figura 4 muestra el volumen tumoral y el efecto del co-tratamiento con tamoxifeno y MCDF.

Las Figuras 5A, 5B y 5C muestran la actividad de la peroxidasa uterina con tratamiento con tamoxifeno, MCDF y co-tratamiento.

Las Figuras 6A y 6B muestran los pesos uterinos con tratamiento con tamoxifeno, MCDP y co-tratamiento.

Descripción detallada de la realización preferida

Es fácilmente aparente para el experto en la técnica que se pueden hacer diferentes realizaciones y modificaciones de la invención descrita en esta solicitud sin desviarse del alcance y espíritu de la invención.

Una realización específica de la presente invención es que proporciona una formulación para la inhibición de tumores dependientes de estrógenos que comprende un alquil-PCDF sustituido en 1,3,6,8 o en 2,4,6,8 utilizado en combinación con un segundo compuesto que es un antiestrógeno.

Se entenderá para el experto en la técnica que la presente invención implica la administración y uso de PCDFs en combinación con análogos y derivados de sustratos antiestrógenos esteroides y no esteroides. Los análogos de sustratos antiestrógenos no esteroides pueden ser, pero no se limitan a, compuestos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos. El grupo de compuestos antiestrógenos de fenil-etileno comprende, pero no se limita a, tamoxifeno, análogos y derivados de tamoxifeno, y toremifeno, análogos y derivados de toremifeno. Esto comprende, pero no se limita a, todos los compuestos, y sus equivalentes, que se describen, por ejemplo, en las siguientes patentes de E.E.U.U., cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia en su totalidad: patente de E.E.U.U nº 5.807.899, concedida a Bohlmann et al., 15 de septiembre de 1998, patente de E.E.U.U nº 5.750.576, concedida a De Gregorio el 12 de mayo de 1998, patente de E.E.U.U nº 4.656.187, concedida a Black et al. el 7 de abril de 1987; patente de E.E.U.U nº 5.554.628, concedida a Bryant et al., el 10 de septiembre de 1996; patente de E.E.U.U nº 5.604.248, concedida a Bryant et al. el 18 de febrero de 1997; y patente de E.E.U.U nº 5.691.355, concedidad a Bryant et al. el 25 de noviembre de 1997. El grupo de compuestos de hidrazonas antiestrógenas comprende, pero no se limita a, azido-, 4-nitro-, 2,4-dinitrofenil-hidrazonas y todos los compuestos y sus equivalentes, que se describen, por ejemplo, en la patente de E.E.U.U nº 4.732.904 concedida a Morgan el 22 de marzo de 1988. El grupo de benzotiofenos antiestrógenos comprende, pero no se limita a, raloxifeno, análogos y derivados de raloxifeno y todos los compuestos, y sus equivalentes, que se describen, por ejemplo, en la patente de E.E.U.U nº 4.418.068, concedida a Jones el 29 de noviembre de 1983. El grupo de inhibidores de aromatasas comprende, pero no se limita a, 4-hidroxiandrostenodiona, (4-OHA), letrozol, anastrozol y todos los compuestos, y sus equivalentes, que se describen, por ejemplo, en la patente de E.E.U.U nº 4.745.109, concedida a Bednarski et al. el 17 de mayo de 1988. El grupo de compuestos de dihidronaftaleno comprende, pero no se limita a, mesilato de trioxifeno y todos los compuestos, y sus equivalentes, que se describen, por ejemplo, en la patente de E.E.U.U nº 4.230.862, concedida a Suarez y Jones el 28 de octubre de 1980.

Otra realización de la presente invención es el uso de un alquil-PCDF sustituido en 1,3,6,8 o en 2,4,6,8. Los posibles sustituyentes comprenden halógenos, tales como bromo, cloro, flúor y/o sustituyentes lineales o ramificados, tales como grupos alquilo de aproximadamente uno a aproximadamente cinco carbonos. También las posiciones 2,4,6 u 8 y 1,3,6 u 8 pueden ser ocupadas individual e independientemente por un hidrógeno en vez de un sustituyente. Los sustituyentes alquilo apropiados comprenden, pero no se limitan a, grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo (i-propilo), n-butilo, sec-butilo, o terc-butilo.

Los PCDFs utilizados en la presente invención se describen, por ejemplo, en la patente de E.E.U.U. nº 5.516.790, concedida a Stephen Safe el 14 de mayo de 1996. Los PCDFs pueden comprender, pero no se limitan a, los que tienen la fórmula:

6

en la que R_{1}, R_{3}, R_{6} y R_{8} o R_{2}, R_{4}, R_{6} y R_{8} son individual e independientemente un hidrógeno o un sustituyente seleccionado del grupo que consiste en cloro, flúor y bromo, y un grupo alquilo lineal o ramificado de uno a cuatro carbonos, y en la que el compuesto tiene al menos un sustituyente alquilo y al menos dos sustituyentes halógenos; más aún, el halógeno puede ser cloro, el sustituyente alquilo se puede seleccionar de un grupo que consiste en metilo, etilo y propilo; R_{6} puede ser un sustituyente alquilo y R_{1}, R_{3}, y R_{8} se pueden seleccionar del grupo que consiste en cloro, flúor y bromo; aún más R_{8} puede ser un sustituyente alquilo y R_{1}, R_{3} y R_{6} se pueden seleccionar del grupo que consiste en cloro, flúor y bromo, el sustituyente alquilo puede ser metilo; aún más R_{6} puede ser un alquilo y R_{2}, R_{4} y R_{8} se pueden seleccionar del grupo que consiste en cloro, flúor y bromo; y, por ejemplo, R_{8} puede ser un sustituyente alquilo y R_{2}, R_{4} y R_{6} se pueden seleccionar del grupo que consiste en cloro, flúor y bromo. Ejemplos de PCDFs pueden comprender, pero no se limitan a,

6-metil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,6-triclorodibenzofurano,

6-i-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

6-etil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

6-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano, y

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

En una realización, los PCDFs que poseen dos sustituyentes laterales (los sustituyentes "laterales" pueden estar en las posiciones 2,3,7 u 8 del dibenzofurano) se utilizan en combinación con un segundo compuesto antiestrógeno. En una realización preferida, se utiliza 6-MCDF como un PCDF representativo en combinación con tamoxifeno. En otra realización preferida, se utiliza 6-i-propil-1,3,8-triCDF en combinación con tamoxifeno. Se combinan el PCDF y los segundos compuestos antiestrógenos con una relación en peso esencialmente de 50:1 a 1:50, preferiblemente 25:1 a 1:25, y más preferiblemente 10:1 a 1:10. Las relaciones más preferidas para alquil-PCDF: antiestrógeno son 1:1 a 1:4 a 4:1 (PCDF: antiestrógeno).

De esta manera, la invención permite a un paciente con un tumor dependiente de estrógenos ser tratado mediante la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un PCDF en combinación con un segundo compuesto antiestrógeno (véase anteriormente). El PCDF y el compuesto antiestrógeno se administran simultáneamente o secuencialmente. La administración simultánea de los compuestos es el método preferido de suministro. Sin embargo, en el caso de un suministro secuencial, se prefiere que el primer compuesto administrado sea todavía bioactivo en el momento que se administra el segundo compuesto. En una realización, el PCDF y los compuestos antiestrógenos se suministran oralmente. Se pueden administrar también, por ejemplo, por vía intraperitoneal.

Estos métodos aquí descritos no son de ninguna manera exhaustivos, y otros métodos apropiados para la aplicación específica serán aparentes para el experto. Además, se puede aproximar más la cantidad efectiva de las composiciones por analogía con compuestos conocidos que ejercen el efecto deseado.

Los siguientes ejemplos se describen como ejemplos, y no intentan limitar de ninguna manera el alcance de la invención.

Ejemplo 1

Se obtuvieron ratas Sprague Dawley hembras y vírgenes de Harlan (Houston) y se permitió que se aclimataran durante 10 días, dejándoles el acceso a comida y agua ad libitum, y se mantuvieron en un régimen de 12 h luz/oscuridad. Se indujeron tumores de mama en ratas de 50 \pm 3 días mediante la administración de una sola dosis mediante sonda de 20 mg de DMBA en 0,5 ml de aceite de maíz. Después de 30 a 75 días, se podían detectar los tumores mediante el tacto en los conductos de las glándulas mamarias. Frecuentemente se desarrollaban múltiples tumores en una sola rata. Cuando el tumor o el mayor de los tumores llegaba a un pequeño tamaño (50-100 mm^{3}), se trataban las ratas diariamente mediante sonda solamente con aceite de maíz (excipiente control), un PCDF, y un segundo compuesto antiestrógeno, o un co-tratamiento de PCDF y un segundo compuesto antiestrógeno durante 20 días, y seguidamente se sacrificaban el día 21. Se medían los tamaños de los tumores con calibradores, y se calculaban los volúmenes mediante fórmula (longitud x anchura x profundidad)/6\Pi y se expresaban como porcentaje del control.

Las dosis del PCDF y del segundo compuesto antiestrógeno son de manera adecuada lo suficientemente grandes para conseguir, en combinación, la deseada inhibición de crecimiento del cáncer. En general, se administra cada uno de los compuestos en una dosis de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 20 mg/kg/día.

Los compuestos de PCDF administrado son, pero no se limitan a,

6-metil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,6-triclorodibenzofurano,

6-etil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

6-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano, y

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

Los segundos compuestos administrados son, pero no se limitan a, esos, compuestos de trifenil-etileno (p. ej., tamoxifeno, toremifeno, clomifeno, nafoxidina), compuestos de hidrazona (p. ej. azido, 4-nitro y 2,4-dinitrofenil-hidrazonas), benzotiofenos (p. ej. raloxifeno), inhibidores de aromatasas (p. ej. 4-hidroxiandrostenediona, letrozol, y anastrozol) y dihidronaftalenos (p. ej. mesilato de trioxifeno).

Ejemplo 2

Se obtuvieron ratas Sprague Dawley hembras y vírgenes de Harlan (Houston) y se permitió que se aclimataran durante 10 días, dejándoles el acceso a comida y agua ad libitum, y se mantuvieron en un régimen de 12 h luz/oscuridad. Se indujeron tumores de mama en ratas de 50 \pm 3 días mediante la administración de una sola dosis mediante sonda de 20 mg de DMBA en 0,5 ml de aceite de maíz. Después de 30 a 75 días, se podían detectar los tumores mediante el tacto en los conductos de las glándulas mamarias. Frecuentemente se desarrollaban múltiples tumores en una sola rata. Cuando el tumor o el mayor de los tumores llegaba a un pequeño tamaño (50-100 mm^{3}), se trataban las ratas diariamente mediante sonda solamente con aceite de maíz (control del excipiente), 0,4 mg/kg de 6-MCDF, 0,4 mg/kg de tamoxifeno, o un co-tratamiento de 0,4 mg/kg de 6-MCDF más 0,4 mg/kg de tamoxifeno durante 20 días, y seguidamente se sacrificaban el día 21. Se medían los tamaños de los tumores con calibradores, y se calculaban los volúmenes mediante fórmula (longitud x anchura x profundidad)/6\Pi y se expresaban como porcentaje del control. Una semana después de la última inyección, se sacrificaban las ratas mediante asfixia. Se extraían todos los tumores, se pesaban, y se seccionaban. Se congelaba una parte en nitrógeno líquido para análisis por PCR, una parte se colocaba en formalina al 10% para análisis histopatológico; y la mayor parte se homogeneizaba inmediatamente para la preparación de fracciones microsomales y citosólicas. Se perfundían los hígados y se pesaban, y se preparaban citosol y microsomas, tal como se ha descrito previamente.

Los resultados de este estudio se resumen en la Tabla 1. A dosis de 0,4 mg/kg/día, tamoxifeno y 6-MCDF por separado inhibían de forma significativa el volumen tumoral (58,5 y 66,4% de inhibición, respectivamente).

TABLA 1 Inhibición porcentual del volumen tumoral o del peso tumoral con solamente tamoxifeno (0,4 mg/kg/día), solamente 6-MCDF (0,4 mg/kg/día), y tamoxifeno más 6-MCDF (cada uno 0,4 mg/kg/día).

	% de inhibición
\underline{tratamiento}	\underline{volumen tumoral}	\underline{peso tumoral}
tamoxifeno	58,5*	disminución no significativa
6-MCDF	66,4*	disminución no significativa
tamoxifeno/6-MCDF	86,2*	78,0*
* P < 0,05 en comparación con el control sin tratar utilizando ANOVA y el test estadístico de Duncan para
significancia.

Los dos fármacos en solitario disminuían también el peso tumoral; sin embargo, esta respuesta inhibitoria no era significativa. Por el contrario, había una inhibición significativa de 86,2 y 78,0% del volumen tumoral y del peso tumoral de mama en animales cotratados con tamoxifeno más 6-MCDF. Los resultados indicados en la Tabla 1 muestran claramente que se bloquea de forma esencial el crecimiento tumoral en los animales co-tratados con los dos fármacos. Más aún, el tratamiento con los compuestos solos o en combinación no afectaba a los pesos corporales o de los órganos o no causaba cambios aparentes histopatológicos en estos tejidos. La inducción de la actividad de EROD dependiente de CYPYA1 por compuestos aromáticos halogenados tóxicos, tal como TCDD, es uno de los indicadores más sensibles de exposición a estos compuestos y existe una excelente correlación entre los compuestos tóxicos y las potencias de inducción de EROD. Los PCDFs sustituidos de forma alterna se caracterizan por su baja toxicidad y su baja potencia como inductores de la actividad hepática EROD. Los resultado resumidos en la Tabla 1 muestran que tamoxifeno, 6-MCDF y tamoxifeno más 6-MCDF no inducían actividad hepática de EROD y esto está de acuerdo con la baja toxicidad de 6-MCDF. Estos resultados demuestran claramente que 6-MCDF favorece la actividad antitumoral de tamoxifeno en modelos de tumor de mama de rata inducido con DMBA, indicando que el tratamiento combinado de tamoxifeno más alquil-PCDFs es una nueva terapia endocrina y más eficaz para el tratamiento de cáncer de mama.

Ejemplo 3

El Ejemplo 3, resumido en la Tabla 2 y Figura 1, muestra los efectos de 6-MCDF y tamoxifeno, solos o en combinación en el modelo de tumores de mama inducidos con DMBA.

Métodos: Se les administró a ratas Sprague Dawley hembras y vírgenes de edad exacta en la tarde del día 55 20 mg/rat de 7,12-dimetilbenzo[a]antraceno en un volumen de 0,5 ml/rata de aceite de maíz (las ratas pesan aprooximadamente 165 g, dando como resultado 120 mg/kg de DMBA y 3 ml/kg de aceite de maíz). Se trataban las ratas diariamente mediante sonda solamente con aceite de maíz (excipiente), 0,4 mg/kg de 6-MCDF, 0,4 mg/kg de tamoxifeno, o un co-tratamiento de 0,4 mg/kg de 6-MCDF más 0,4 mg/kg de tamoxifeno durante 20 días, y seguidamente se sacrificaban el día 21.

(Tabla pasa a la página siguiente)

TABLA 2 Efectos de 6-MCDF y tamoxifeno, solo y en combinación, en el modelo de tumor de mama de rata inducido con DMBA

7

La Figura 1 muestra el volumen tumoral y el efecto del tratamiento sobre tumores de mama de 0,4 mg/kg/día de tamoxifeno, MCDF, o co-tratamiento.

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Ejemplo 4

El Ejemplo 4, resumido en las Tablas 3, 4 y Figuras 2, 3 y 4, muestra los efectos de bajas dosis de 6-MCDF y tamoxifeno, solos o en combinación en el modelo de tumores de mama inducidos con DMBA.

Métodos: Se les administró a ratas Sprague Dawley hembras y vírgenes de edad exacta en la tarde del día 55 20 mg/rat de 7,12-dimetilbenzo[a]antaceno en un volumen de 0,5 ml/rata de aceite de maíz (las ratas pesan aproximadamente 165 g, dando como resultado 120 mg/kg de DMBA y 3 ml/kg de aceite de maíz). Se trataban las ratas diariamente mediante sonda solamente con aceite de maíz (excipiente), 0,1, 0,05 y 0,025 mg/kg de 6-MCDF, 0,1, 0,05, 0,025 mg/kg de tamoxifeno, o un co-tratamiento de 0,1, 0,05 y 0,025 mg/kg de 6-MCDF más 0,1, 0,05 y 0,025 mg/kg de tamoxifeno durante 20 días, y seguidamente se sacrificaban el día 21.

TABLA 3 Efectos de 6-MCDF y tamoxifeno, solos y en combinación, sobre el modelo de tumores de mama de rata inducidos con DMBA

8

Las Figuras 2, 3 y 4 muestran el volumen tumoral y el efecto del tratamiento sobre tumores de mama de 0,1, 0,05 y 0,025 mg/kg/día de tamoxifeno, MCDF, o co-tratamiento.

(Tabla pasa a la página siguiente)

TABLA 4 Efectos de bajas dosis de 6-MCDF y tamoxifeno, solos y en combinación, sobre el modelo de tumores de mama de rata inducidos con DMBA pesos corporales y de los órganos

9

El tamoxifeno solo en una dosis de 0,1 mg/kg/día hacía disminuir de forma significativa el crecimiento tumoral (peso y volumen), mientras que en dosis menores (0,05 y 0,025 mg/kg/día) era inactivo. Por el contrario, 6-MCDF era antitumoral en dosis de 0,1 y 0,05 mg/kg/día, pero inactivo en la menor dosis ensayada (0,025 mg/kg/día). En estudios de combinación, se utilizaron dosis equivalentes en peso de tamoxifeno más 6-MCDF para determinar los efectos interactivos como agentes antitumorales. Los resultados ilustrados en la Tabla 3 y en la Figura 4 mostraban que todas las combinaciones inhibían de manera significativa el crecimiento de tumores de mama. Y lo más importante, la combinación en baja dosis de antitumorales (tamoxifeno más 6-MCDF en 0,025 mg/kg/día de cada compuesto) utilizaba dosis de los compuestos que son inactivas individualmente. Los análisis estadísticos de estos datos mostraban que esta interacción de tamoxifeno (0,025 mg/kg/día) más 6-MCDF (0,025 mg/kg/día) inhibía de forma sinérgica el crecimiento de los tumores de mama en el modelo de tumores de rata inducidos con DMBA. Estos resultados demuestran claramente que 6-MCDF favorece la actividad antitumoral de tamoxifeno en el modelo de tumores de rata inducidos con DMBA, indicando que el tratamiento combinado con bajas dosis de tamoxifeno más bajas dosis de 6-MCDF es una terapia endocrina nueva y más eficaz para el tratamiento del cáncer de mama. Además estos datos muestran que los dos compuestos bloquean de forma sinérgica el crecimiento tumoral en el modelo de roedores en dosis extremadamente bajas. Con la reducción del tamoxifeno a estos bajos niveles sin reducir la eficacia, dicha invención mantiene los efectos beneficiosos de tamoxifeno y minimiza los efectos tumorales de tamoxifeno en el útero.

Ejemplo 5

El Ejemplo 5 muestra los efectos bondadosos de dosis diarias de tamoxifeno y 6-MCDF en ratas sin ovarios (ovariectomizadas). Se utiliza la rata ovariectomizadas como un modelo para la osteroporosis. Los actuales estudios miden la histomorfometría ósea (Evans et al. (1996) o densidad mineral del hueso con absorciometría de rayos X (Ezawa (1995)), así como la longitud del hueso, peso húmedo y peso seco (Takahashi et al. (1996)). En 1987 se informó que el tamoxifeno actuaba como un agonista de los estrógenos en el tejido óseo de ratas ovariectomizadas (Turner et al. (1987)), aunque que el tamoxifeno no tiene ningún efecto en ratas con el ciclo menstrual (Takahashi et al. (1996)). Se analizaron los fémures de las ratas tratadas con tamoxifeno, MCDF, o tamoxifeno + MCDF para determinar la capacidad antiestrógenos de MCDF específica del tejido.

Métodos: Se ovariectomizaron las ratas a los 97 días de edad. Después de aproximadamente 3 semanas, se alimentaron las ratas oralmente con aceite de maíz (excipiente), 0,4 mg/kg/día de tamoxifeno, 0,8 mg/kg/día de 6-MCDF, o co-tratamiento de 0,4 mg/kg de tamoxifeno más 0,8 mg/kg de 6-MCDF diariamente. Se sacrificaron las ratas el día 21. Posteriormente se extrajeron los úteros y se procesaron, los dos fémures, derecho e izquierdo, se extrajeron y se midió su longitud con calibres. A causa de que no había un protocolo barato en la bibliografía para soltar todos los músculos de los huesos, se utilizó un lavado de 4 horas con PBS, pH 2, y se ablandó el tejido conjuntivo sin afectar visiblemente al hueso. Se midió el peso húmedo después de que se eliminó el tejido conjuntivo residual. Se midió el peso seco después de que se secaran los huesos durante 12 horas a 130ºC.

TABLA 5 Efectos en los huesos de dosis diarias de tamoxifeno (0,4 mg/kg) y 6-MCDF (0,8 mg/kg) en la rata Sprague-Dawley ovariectomizada

10

Ejemplo 6

El Ejemplo 6 muestra los efectos en el útero de dosis diarias de tamoxifeno y 6-MCDF en ratas ovariectomizadas.

Métodos: Se ovariectomizaron las ratas a los 97 días de edad y se empezó eltratamiento a los 117 días de edad. Se alimentaron las ratas oralmente durante 20 días con aceite de maíz (excipiente), 0,4 mg/kg/día de tamoxifeno, 0,4 mg/kg/día de 6-MCDF, o co-tratamiento de 0,4 mg/kg de tamoxifeno más 0,4 mg/kg de 6-MCDF, con 5 ratas en cada grupo de tratamiento. Se sacrificaron las ratas el día 21. El 6-MCDF causaba un ligero aumento, pero significativo, en el peso húmedo del bazo.

(Tabla pasa a la página siguiente)

TABLA 6 Efectos en el útero de dosis diarias de tamoxifeno (0,4 mg/kg) y 6-MCDF (0,4 mg/kg) en la rata Sprague-Dawley ovariectomizada

11

Ejemplo 7

El Ejemplo 7 muestra el efecto en el peso corporal y en el de los órganos del tratamiento con tamoxifeno, MCDF, y co-tratamiento.

Métodos: El procedimiento de preparar las soluciones de dosificación es como sigue: el MCDF necesita un suave calentamiento para disolverse, y el tamoxifeno necesita ser disuelto en etanol (5% del volumen final) que se adiciona seguidamente al aceite de maíz. Se separa por evaporación el etanol con una suave corriente de aire. Primero, el aceite de maíz para la dosis de tamoxifeno se calienta en un baño María hirviendo, y se deja que se enfríe. Posteriormente, se pesó el MCDF para MCDF solamente y para TAM + MCDF y se disolvió en cantidades apropiadas de aceite de maíz con calentamiento. Para el excipiente de control y para el excipiente de MCDF se añadió etanol (5% en volumen) y seguidamente se dejó evaporar. El tamoxifeno para el tratamiento con tamoxifeno y para TAM + MCDF se disolvió en etanol. Seguidamente se añadió una parte alícuota al excipiente de aceite de maíz apropiado (el aceite de maíz precalentado para tamoxifeno, y el aceite de maíz conteniendo MCDF para TAM + MCDF), y se evaporó el etanol.

TABLA 7 Efecto del tratamiento en los pesos corporales y de los órganos

12

Ejemplo 8

El Ejemplo 8 (Tablas 8 y 9 y Figuras 5 y 6) muestra efectos en el útero de dosis diarias de tamoxifeno y 6-MCDF en ratas ovariectomizadas.

Para la Tabla 8 y la Figura 5, se ovariectomizaron las ratas en el día 97 de edad. Después de aproximadamente 3 semanas, se dosificaron oralmente durante 20 días con aceite de maíz (excipiente), 0,4 mg/kg/día de tamoxifeno, 0,8 mg/kg/día de 6-MCDF, o un co-tratamiento de 0,4 mg/kg de tamoxifeno más 0,8 mg/kg de 6-MCDF diariamente. Se sacrificaron las ratas el día 21.

TABLA 8 Efectos en el útero de dosis diarias de tamoxifeno (0,4 mg/kg) y de 6-MCDF (0,8 mg/kg) en la rata Sprague-Dawley ovariectomizada efectos del tratamiento en ensayos uterinos

13

Las Figuras 5A, 5B y 5C muestran la actividad de la peroxidasa uterina (extractos nucleares) con tratamiento con tamoxifeno, MCDF y co-tratamiento.

Para la Tabla 9 y las Figuras 6A y 6B, se alimentaron ratas Sprague-Dawley hembras y vírgenes de edad exacta en el día 55 por la tarde con 20 mg/rata de 7,12-dimetilbenzo{a]antaceno en un volumen de 0,5 ml/rata de aceite de maíz (las ratas pesan aproximadamente 165 g, dando como resultado 120 mg/kg de DMBA y 3 ml/kg de aceite de maíz). Se trataron las ratas diariamente mediante sonda con aceite de maíz (excipiente), 0,4 mg/kg/día de 6-MCDF, 0,4 mg/kg/día de tamoxifeno, o un co-tratamiento de 0,4 mg/kg de 6-MCDF más 0,4 mg/kg de tamoxifeno durante 20 días y seguidamente se sacrificaron las ratas el día 21.

TABLA 9 Efectos del tratamiento en los pesos corporales y de los órganos

14

Las Figuras 6A y 6B muestran los pesos de los úteros con tratamiento con tamoxifeno, MCDF y co-tratamiento.

Referencias

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2. B. Astroff et al., Comparative antiestrogenic activities of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and 6-methyl-1,3,8-trichlorodibenzofuran in the female rat, Itoxicol. Appl. Pharmacol. 95 (1988) 435-443;

3. B. Astroff et al., 6-Substituted-1,3,8-trichlorodibenzofurans as 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin antagonists in the rat: structure-activity relationships, Toxicology, 59 (1989) 285-296;

4. B. Astroff et al., 6-Alkyl-1,3,8-trichlorodibenzofurans as antiestrogens in female Sprague-Dawley rats, Toxicology, 69 (1991) 187-197;

5. R. Bannister et al., 6-Methyl-1,3,8-trichlorodibenzofuran (MCDF) as a 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin antagonist in C57BL/6 mice, Toxicology, 54 (1989) 139-150;

6. R. Dickerson et al., Alkyl polychlorinated dibenzofurans and related compounds as antiestrogens en the female rat uterus; structure-activity studies, Toxicol. Appl. Pharmacol. 135 (1995) 287-298;

7. G. L. Evans et al., Raloxifene inhibits bone turnover and prevents further cancellous bone loss in adult ovariectomized rats with established osteopenia, Endo. (1996) 137: 4139-4144;

8. I. Ezawa et al., The effect of ovariectomy on bone metabolism in rats, Bone 17: 1638-1678;

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11. M. Harris et al., Partial antagonism of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-mediated induction of aryl hydrocarbon hydroxylase by 6-methyl-1,3,8-trichlorodibenzofuran; mechanistic studies, Mol. Pharmacol. 35 (1989) 729-735;

12. A. McDougal et al., Inhibition of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene-induced rat mammary tumor growth by aryl hydrocarbon receptor agonista, Cancer Letters (1997) 120: 53-63;

13. Mouridsen et al., Acta Oncol. (1998); (27): 699-705;

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Claims

1. Productos que contienen un primer compuesto de fórmula:

15

como un preparación combinada para uso simultáneo o secuencial para inhibir el crecimiento de un tumor dependiente de estrógenos.

2. Productos según la reivindicación 1, en el que el segundo compuesto se selecciona de tamoxifeno, toremifeno, clomifeno, nafoxidina e hidroxitamoxifeno.

3. Productos según la reivindicación 1 ó 2, en el que el halógeno del primer compuesto es cloro.

4. Productos según la reivindicación 1 ó 2, en el que dichos sustituyentes halógenos del primer compuesto se seleccionan de cloro, bromo y flúor.

5. Productos según una cualquiera de las anteriores reivindicaciones, en los que dichos sustituyentes alquilo del primer compuesto se seleccionan de metilo, etilo y propilo.

6. Productos según la reivindicación 1 ó 2, en los que el primer compuesto es 6-metil-1,3,8-triclorodibenzofurano, 8-metil-1,3,6-triclorodibenzofurano o 6-i-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano.

7. Productos según la reivindicación 1 ó 2, en los que el primer compuesto se selecciona de:

6-etil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

6-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano.

8. Productos que contiene un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

\newpage

9. Una combinación farmacéutica para inhibir el crecimiento de tumores dependientes de estrógenos que comprenden un primer compuesto de fórmula:

16

en la que R_{1}, R_{3}, R_{6} y R_{8} o R_{2}, R_{4}, R_{6} y R_{8} son individual e independientemente un hidrógeno o un sustituyente seleccionado de cloro, flúor, bromo y un grupo alquilo lineal o ramificado de uno a cuatro carbonos, teniendo dicho primer compuesto al menos un sustituyente alquilo y al menos dos sustituyentes halógenos; y

un segundo compuesto que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos.

10. La combinación farmacéutica de la reivindicación 9, en la que el segundo compuesto se selecciona de tamoxifeno, toremifeno, clomifeno, nafoxidina e hidroxitamoxifeno.

11. La combinación farmacéutica de la reivindicación 9 ó 10, en la que el halógeno del primer compuesto es cloro.

12. La combinación farmacéutica de la reivindicación 9 ó 10, en la que dichos sustituyentes halógenos del primer compuesto se seleccionan de cloro, bromo y flúor.

13. La combinación farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en la que dichos sustituyentes alquilo del primer compuesto se seleccionan de metilo, etilo y propilo.

14. La combinación farmacéutica de la reivindicación 9 ó 10, en la que el primer compuesto es 6-metil-1,3,8-triclorodibenzofurano, 8-metil-1,3,6-triclorodibenzofurano o 6-i-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano.

15. La combinación farmacéutica de la reivindicación 9 ó 10, en la que el primer compuesto se selecciona de:

6-etil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

6-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano.

16. Una composición farmacéutica para inhibir el crecimiento de un tumor dependiente de estrógenos que comprende un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

y un segundo componente que se selecciona de antiestrógenos de trifenil-etileno, inhibidores de aromatasas, hidrazonas antiestrógenas, benzotiofenos antiestrógenos, y dihidronaftalenos.

17. La combinación farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 16, en la que la cantidad del primer compuesto es de 1 a 50 partes en peso y la del segundo compuesto es de 1 a 50 partes en peso.

18. La combinación farmacéutica de la reivindicación 17, en la que la cantidad del primer compuesto es de 1 a 10 partes en peso y la del segundo compuesto es de 1 a 10 partes en peso.

19. La combinación farmacéutica de la reivindicación 17, en la que la cantidad del primer compuesto es de 1 a 4 partes en peso y la del segundo compuesto es de 1 a 4 partes en peso.

20. Uso de un primer compuesto tal como se define en la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para usarse en combinación con un segundo compuesto tal como se define en la reivindicación 1, para la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos.

21. Uso de un segundo compuesto tal como se define en la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para usarse en combinación con un primer compuesto tal como se define en la reivindicación 1, para la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos.

22. Uso según la reivindicación 20 o la 21, en el que el segundo compuesto se selecciona de tamoxifeno, toremifeno, clomifeno, nafoxidina e hidroxitamoxifeno.

23. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, en el que el halógeno del primer compuesto es cloro.

24. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, en el que dichos sustituyentes halógenos del primer compuesto se seleccionan de cloro, bromo y flúor.

25. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 24, en el que dichos sustituyentes alquilo del primer compuesto se seleccionan de metilo, etilo y propilo.

26. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, en el que el primer compuesto es 6-metil-1,3,8-triclorodibenzofurano, 8-metil-1,3,6-triclorodibenzofurano o 6-i-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano.

27. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 24, en el que el primer compuesto se selecciona de:

6-etil-1,3,8-triclorodibenzofurano,

6-propil-1,3,8-triclorodibenzofurano.

28. Uso de un primer compuesto seleccionado de:

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano,

para la fabricación de un medicamento para su uso para la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos en combinación con un segundo compuesto tal como se define en la reivindicación 1.

29. Uso de un segundo compuesto tal como se define en la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para usarse para la inhibición de un tumor dependiente de estrógenos en combinación con un primer compuesto seleccionado de :

6-metil-2,3,8-triclorodibenzofurano,

6-metil-2,3,4,8-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-1,3,7-triclorodibenzofurano,

8-metil-1,2,4,7-tetraclorodibenzofurano,

8-metil-2,3,7-triclorodibenzofurano, y

8-metil-2,3,4,7-tetraclorodibenzofurano.