ES2205450T3 - Tratamiento de enfermedades inflamatorias cronicas con la toxina cm 101/gbs. - Google Patents

Abstract

Se presenta un procedimiento para tratar una enfermedad inflamatoria crónica tal como la artritis reumatoide o la psoriasis, que incluye el tratamiento de un paciente con una toxina derivada de la bacteria Streptococcus Beta-hemolítica del grupo B. La toxina GBS purificada, o el CM101, puede administrarse de forma intravenosa al paciente en dosis repetitivas.

Description

Tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas con la toxina CM101/GBS.

Introducción Campo de la invención

Esta invención está relacionada con medios para el tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas dependientes de angiogénesis, incluyendo la artritis reumatoide y la psoriasis.

Antecedentes

Las enfermedades inflamatorias crónicas, tales como la artritis reumatoide (RA) y la psoriasis, son enfermedades debilitadoras que afectan a millones de personas.

La RA es una enfermedad inflamatoria, crónica, generalizada, que afecta aproximadamente a entre el 1 y el 2% de la población mundial. Las manifestaciones de la RA son habitualmente más graves en las articulaciones. Las articulaciones afectadas con mayor frecuencia son las articulaciones interfalángicas y las metacarpofalángicas en las manos y las articulaciones metacarpofalángicas en los pies. Los hombros, codos, rodillas, tobillos y muñecas son también objetivos habituales de la RA. Las articulaciones afectadas por la RA ("articulaciones activas") son particularmente sensibles. Por consiguiente, los que padecen de RA experimentan a menudo dolor y dificultades de movimiento. Si bien la gravedad y el avance de la RA varían considerablemente entre los individuos afectados, los pacientes de RA, como grupo, presentan el doble de tasa de mortalidad que sus homólogos no afectados. Este descenso en las expectativas parece ser debido en parte a los efectos secundarios de los actuales tratamiento de la RA.

En los estadios iniciales de la RA, el sinovio de la articulación afectada crece y se inflama. La expansión del sinovio va acompañada de angiogénesis y de neovascularización. Esto, a su vez, facilita la infiltración en el área de células plasmáticas, linfocitos y macrófagos. A medida que las células inflamatorias se acumulan dentro del mismo, el sinovio se convierte en edematoso e hiperplásico. Los neutrófilos se infiltran en el fluido sinovial y se agrupan sobre la superficie del sinovio. El depósito de fibrina también tiene lugar en el espacio articular. El fluido sinovial se incrementa en volumen y en turbidez con la acumulación de neutrófilos, células mononucleares y glóbulos rojos ocasionales.

La inflamación crónica provoca que el sinovio gane grosor y se extienda sobre la superficie articular, dando lugar a vellosidades que se proyectan hacia el interior del espacio articular. Esta estructura anómala y altamente vascularizada se denomina un paño. El paño invade y erosiona al cartílago subyacente, teniendo lugar la destrucción de cartílago más activa en la interfase entre el paño y el cartílago. La destrucción del cartílago es efectuada por la colagenasa y las metalo-proteinasas segregadas por las células inflamatorias del paño. Finalmente la erosión se extiende hacia el hueso subcondrial, la cápsula articular y los ligamentos. Las moléculas osteoclásicas liberadas por las células inflamatorias y por los sinoviocitos permiten que el sinovio penetre en el hueso y de lugar a erosiones yuxto-articulares, quistes subcondriales y osteoporosis.

Una vez destruido el cartílago, el paño llena el espacio articular total de la articulación, sirviendo de apoyo a las bandas fibrosas que hacen de puente entre los huesos opuestos. A medida que este anquilosamiento fibroso se va calcificando, se forma un anquilosamiento óseo el cual se fusiona con los huesos opuestos y evita el funcionamiento de la articulación.

La RA es una enfermedad autoinmune en la que los pacientes presentan anticuerpos antinucleares y anticuerpos dirigidos a autoproteínas, tales como la inmunoglobulina G (IgG), el colágeno y las proteínas filamentosas citoesqueléticas. Los factores reumatoides (RFs) son autoanticuerpos encontrados en el suero y en el fluido sinovial los cuales se unen a la porción Fc de la IgG. Los Rfs se han visto implicados en la patogénesis de la RA, Cuando los RFs se unen a las IgGs se forman inmunocomplejos de complemento activante. El complemento activado provoca la liberación de sustancias vasoactivas y quimiotácticas, las cuales atraen neutrófilos y macrófagos hacia el complejo inmune. A medida que estas células ingieren y destruyen los complejos inmunes, liberan moléculas que provocan inflamación y degradación proteínica y que atraen otras a células que contribuyen a la patogénesis de la RA. Debido al hecho de que los RFs se sintetizan en las articulaciones y a que los RFs de la clase de IgG son auto-asociativos, los complejos inmunes se localizan frecuentemente en las articulaciones. Sin embargo, los complejos inmunes circulan en algunos pacientes y se cree que son la causa de las manifestaciones extra-articulares de la RA, tal como los nódulos reumatoides, la amiloidosis reactiva y la vasculitis aguda.

La evidencia de que la RA tiene orígenes autoinmunes está apoyada por la averiguación de que la inyección de colágeno aviar de tipo II en ratas o ratones provoca el que los mismos desarrollen anticuerpos que reconocen el colágeno endógeno de los roedores. La respuesta autoinmune resultante, conocida como "artritis inducida por colágeno", imita los síntomas fisiológicos de la RA, tales como la inflamación de la articulación (Trentham et al., Autoimmunity to type II collagen: an experimental model of artritis, J. of Experimental Medecine, 146:857 (1977); Courtenay et al., Nature 283: 666). La artritis inducida por colágeno constituye un sistema modelo bien establecido para el estudio de la RA (Staines & Wooley, Collagen artritis-what can it teach us?, British Journal of Rheumatology, 1994, 33: 798 (1994)).

El principal procedimiento para el tratamiento de la RA se considera que es la administración de fármacos que suprimen al sistema inmune o reducen la inflamación. Las dos principales clases de inhibidores de inflamación son los corticosteroides y los fármacos anti-inflamatorios no esteroides (NSAIDs).

Los corticosteroides no son considerados como una medicación favorita para la RA porqué, a pesar de que los mismos pueden alcanzar espectaculares mejoras en la RA, el tratamiento a largo plazo no resulta aconsejable debido a los graves efectos secundarios y a la reducida eficacia del fármaco. El tratamiento con corticosteroides a corto plazo se encuentra también lejos de ser considerado un tratamiento ideal, debido a que los síntomas de la artritis reaparecen rápidamente, a menudo con gravedad creciente, una vez finalizado el tratamiento. Si bien corticosteroides tales como la prednisona pueden suprimir los síntomas clínicos de la RA, los fármacos no previenen la destrucción de la articulación mediada por la RA. Además, entre los efectos secundarios típicos de los corticosteroides se encuentran: la úlcera péptica, la hipertensión, la diabetes mellitus y el glaucoma.

NSAIDs tales como la aspirina, el ibuprofeno y la indometacina son frecuentemente prescritos para la RA. Si bien estos fármacos pueden reducir la hinchazón en las articulaciones activas por medio de la inhibición de la síntesis de prostaglandina, su pobre capacidad de penetración en los espacios articulares precisa de la administración de dosis elevadas y las citadas dosis elevadas tienden a provocar irritación gastrointestinal, ulceración, y hemorragias. Los NSAIDs afectan a los procesos regulados por prostaglandinas no asociados con el proceso de inflamación. Los NSAIDs son también potentes toxinas renales y por tanto resultan también inadecuadas para el tratamiento de la RA.

Los pacientes con RA activa grave pueden ser tratados con inmunosupresores tales como la ciclofosfamida, el metotrexato y la azatioprina. Si bien los mismos pueden reducir la inflamación, estos fármacos afectan totalmente al sistema inmune del paciente y presentan graves efectos secundarios, entre los cuales se incluyen enfermedades hepáticas, supresión de médula ósea y riesgo incrementado de malignidad.

Otras medicaciones frente a la RA incluyen penicilamina, cloroquina, hidroxicloroquina y sales de oro. Todas ellas presentan potenciales efectos secundarios. La D-penicilamina puede provocar supresión de médula ósea, proteinuria y nefrosis. Se ha informado también acerca de fallecimientos como consecuencia de tratamiento con penicilamina. Los pacientes tratados con hidroxicloroquina o cloroquina tienen que ser monitorizados en busca de señales de daños irreversibles en la retina. El oro puede inducir reacciones tóxicas en forma de dermatitis, fallo renal o hepatitis y su eficacia en el tratamiento de la artritis es cuestionable.

Las personas que padecen psoriasis representan aproximadamente entre el 1 y el 3% de la población en los Estados Unidos e incluso un porcentaje más elevado en las personas del norte de Europa. La psoriasis es una enfermedad crónica inflamatoria de la piel en la cual la piel del paciente muestra placas eritomatosas recurrentes. Estas se presentan en forma de lesiones de descamación sobre la piel, de color blanco o plateado, especialmente en el área del cuello cabelludo, codos, rodillas, espalda y nalgas. El escozor y quemazón que la acompañan puede provocar incomodidad. En formas graves, se desarrolla también artritis o exfoliación grave.

Las lesiones de psoriasis muestran hiperplasia epidérmica, infiltración de células inflamatorias y anormalidades de redes capilares dérmicas. Se cree que las mismas provienen de la hiperproliferación celular epitelial, la neovascularización y, naturalmente, de la infiltración de células inflamatorias en el área. Se considera que la angiogénesis resulta necesaria para mantener la inflamación y dirigir los neutrófilos y linfocitos hacia la lesión psoriática. Adicionalmente, los pacientes de psoriasis tienen autoanticuerpos dirigidos al estrato córneo. Estos autoanticuerpos están involucrados en la patogénesis de la enfermedad.

El actual tratamiento para la psoriasis incluye aceites o cremas lubricantes, queratolíticos y corticosteroides tópicos. Para formas graves de la enfermedad puede suministrarse metotrexato, pero su elevado potencial de toxicidad requiere condiciones de tratamiento controladas rígidamente, incluyendo la cuidadosa monitorización de la función hematológica, renal y hepática. El tratamiento para la artritis psoriática es similar al de la RA, con algunas excepciones. Por ejemplo, los productos antimalaria pueden agravar la psoriasis subyacente.

La RA y la psoriasis son enfermedades caracterizadas por angiogénesis no regulada. El factor de crecimiento endotélico vascular (VEGF) ha sido involucrado en la conducción de la citada angiogénesis no regulada, mediante la estimulación de las células del endotelio que revisten las proximidades de los microvasos para proliferar e iniciar el proceso que conduce a la formación de un nuevo vaso sanguíneo. Existe evidencia de que los receptores VEGF son sobreexpresados por las células endotélicas que revisten los vasos sanguíneos suministrando las reacciones inflamatorias que conducen a estos trastornos. (Dvorak, Int. Arch. Allergy Immunol., May-June 1995).

Se necesita un método para tratamiento médico para las enfermedades inflamatorias crónicas, tales como la RA y la psoriasis. Existe la necesidad de disponer de un compuesto que inhiba los signos y los síntomas de estas enfermedades y particularmente reduzca el dolor, la inflamación, la hinchazón de la articulación y las lesiones asociadas con estas enfermedades. Además, lo que se necesita es un método para tratamiento y particularmente un compuesto que resulte fácil de administrar y que sea no tóxico.

La presente invención proporciona la utilización de una toxina de Streptococcus \beta-hemolítico de Grupo B (GBS) en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en un procedimiento para tratar a un paciente con una enfermedad inflamatoria crónica dependiente de angiogénesis, comprendiendo el citado método:

la administración de la citada toxina al paciente en cantidad suficiente para reducir la probabilidad de formación de nuevos vasos sanguíneos en un punto de enfermedad.

Entre las enfermedades tratables se incluyen la RA y la psoriasis.

Los pacientes de RA tratados con CM101 experimentan una reducción en el dolor, hinchazón de la articulación, e inflamación aguda y experimentan también inhibición de la formación de paño. El CM101 puede ser administrado antes de la aparición de la RA, cuando se detectan los primeros síntomas de la RA y/o en estadios posteriores en el avance de la RA.

Los pacientes de psoriasis tratados con CM101 experimentan también una reducción de las señales y de los síntomas de su enfermedad. Además de la mejoría de la artritis psoriática asociada, existe una reducción en el tamaño y en la ocurrencia de las lesiones psoriáticas y en el malestar asociado. Al igual que con el tratamiento para RA, el CM101 puede ser administrado en diversos estadios de la enfermedad.

La administración de CM101 a pacientes que sufren de enfermedades inflamatorias crónicas dependientes de angiogénesis tiene gran utilidad, específicamente en la inhibición del desarrollo de la RA, en la reducción de la inflamación de la articulación en pacientes de RA, y en la reducción de la neovascularización en tejidos sinoviales. Además, la utilización de la presente invención tiene gran utilidad a la hora de inhibir el desarrollo de la psoriasis y de la artritis psoriática y, particularmente, en la reducción de la probabilidad de formación de vasculatura anormal, la cual facilita las reacciones inflamatorias que provocan las lesiones. Otras enfermedades inflamatorias crónicas dependientes de la angiogénesis que son caracterizadas por angiogénesis pueden también ser tratadas ventajosamente.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra los diámetros de las muñecas de ratones afectados por artritis inducida por colágeno a lo largo del tiempo. Los ratones recibieron 20 ug/kg de CM101, 60 ug/kg de CM101 o solución salina. El tratamiento con CM101 se inició a la cuarta semana y continuó hasta la semana 9. Se efectuaron mediciones con anterioridad al inicio del experimento (PRE) y en las semanas 2,3,4,5,7,9 y 11.

La Figura 2 muestra los diámetros de la articulación el pie de ratones afectados por artritis inducida por colágeno, a lo largo del tiempo. Los ratones recibieron 20ug/kg de CM101, 60ug/kg de CM101 o solución salina. El tratamiento con CM101 se inició en la semana 4 y continuó hasta la semana 9. Se efectuaron mediciones con anterioridad al inicio del experimento (PRE) y en las semanas 2,3,4,5,7,9 y 11.

La Figura 3 muestra los diámetros de la articulación de codo de ratones afectados por artritis inducida por colágeno, a lo largo del tiempo. Los ratones recibieron 20ug/kg de CM101, 60ug/kg de CM101 o solución salina. El tratamiento con CM101 se inició en la semana 4 y continuó hasta la semana 9. Se efectuaron mediciones con anterioridad al inicio del experimento (PRE) y en las semanas 2,3,4,5,7,9 y 11.

La Figura 4 muestra los diámetros de la articulación de rodilla de ratones afectados por artritis inducida por colágeno, a lo largo del tiempo. Los ratones recibieron 20ug/kg de CM101, 60ug/kg de CM101 o solución salina. El tratamiento con CM101 se inició en la semana 4 y continuó hasta la semana 9. Se efectuaron mediciones con anterioridad al inicio del experimento (PRE) y en las semanas 2,3,4,5,7,9 y 11.

La Figura 5 representa secciones transversales de la articulación de rodilla de un ratón normal (A), de un ratón afectado por artritis inducida por colágeno (B) y de un ratón afectado por artritis inducida por colágeno tratado con CM101, a razón de 60ug/kg (C).

Descripción detallada de la invención

La CM101, una toxina GBS, es una molécula de polisacárido aislada a partir de un Streptococcus \beta-hemolítico del Grupo B (GBS). De manera específica, el Streptococcus \beta-hemolítico del Grupo B patógeno produce una exotoxina polisacárido. La exotoxina es el agente putativo para una dolencia conocida como neumonía GBS o "enfermedad de aparición temprana", la cual se caracteriza por sepsis, granulocitopenia y dificultad respiratoria, a saber, hipertensión pulmonar y edema pulmonar proteináceo (Hellerquist, C.G. et al., Studies on group B \beta-hemolytic Streptococcus I. Isolation and partial characterization of an extracellular toxin., Peditar. Res., 12:892-898 (1981). Se cree que únicamente los niños recién nacidos son susceptibles a la enfermedad de aparición temprana debido a que los receptores de CM101 se encuentran presentes inicialmente sobre los pulmones de los recién nacidos, pero estos receptores se pierden aproximadamente entre cuatro y siete días después del nacimiento. No se tienen noticias de que el CM101 provoque toxicidad en humanos mayores.

Una vez aislado y purificado, se ha demostrado que el CM101 desarrolla efectos tóxicos sobre modelos experimentales de oveja, los cuales imitan la neumonía de los niños GBS (Hellerquist, C.G. et al., Studies on group B \beta-hemolytic Streptococcus I. Isolation and partial characterization of an extracellular toxin., Peditar. Res., 12:892-898 (1981). En el modelo de oveja para enfermedad de aparición temprana en recién nacidos, la toxina GBS provoca hipertensión pulmonar, permeabilidad vascular pulmonar incrementada, granulocitopenia y secuestro pulmonar de granulocitos.

El CM101 tiene un peso molecular de aproximadamente 300.000 Daltons y comprende N-acetilgalactosamina, N-acetilglucosamina, glucosa, galactosa, y restos de manosa. Se considera que restos de ácido carboxílico forman también parte integral de esta molécula. Los epítopos activos repetitivos desempeñan, muy probablemente, un importante papel en la respuesta patofisiológica al CM101, por medio de receptores reticulantes sobre el endotelio objetivo (Hellerquist, C.G. et al., Early results of a Phase I Trial of CM101 in Cancer Patients. Proceedings of the American Association of Cancer Research Annual Meeting, 36:224 (1995)).

En la patente US Nº. 5.010.062 se proporciona un procedimiento para la purificación de CM101. No obstante, preferiblemente, el CM101 se purifica según el procedimiento descrito en el documento EP-A-0932696.

Una fuente de suministro para el producto de partida GBS para ser utilizado en el procedimiento de la presente invención puede ser obtenida mediante el cultivo de cepas de bacterias Streptococcus \beta-hemolíticas de grupo B que han sido recientemente infectadas o que sean capaces de infectar a recién nacidos. Pueden obtenerse cepas clínicas de las citadas cepas a partir de la sangre o del líquido cefalorraquídeo de niños infectados.

La toxina GBS, tal como se utiliza en el presente documento, se define como cualquier fracción o componente aislado a partir de bacterias GBS naturales o sometidas a lisis, o procedente de medios sobrenadantes de bacterias GBS sometidas a lisis y/o a autoclave y que presenten una actividad biológica que puede ser puesta en evidencia por medio de la inducción de dificultades respiratorias en el ensayo de la oveja (Hellerquist, C.G. et al., Studies on group B \beta-hemolytic Streptococcus I. Isolation and partial characterization of an extracellular toxin., Peditar. Res., 12:892-898 (1981) o mediante la activación de complemento y de unión con neovasculatura, tal como se demuestra a través del ensayo de la peroxidasa-antiperoxidasa (PAP) de una muestra de tejido tumoral (Hellerquist, C.G. et al., Anti-tumor effects of GBS toxin: a polysaccharide exotoxin from group B \beta-hemolytic streptococcus, J. Cancer Res. Clin. Oncol.., 120:63-70 (1993); y (Hellerquist, C.G. et al., Early results of a Phase I Trial of CM101 in Cancer Patients. Proceedings of the American Association of Cancer Research Annual Meeting, 36:224 (1995)). Toxina GBS significa también cualquier polisacárido sintético con la misma estructura o función de cualquier molécula derivada de GBS con la actividad mencionada anteriormente.

Toxina GBS sustancialmente pura significa una preparación en la cual la toxina GBS tiene una pureza superior al 40% (por ejemplo, presente a una concentración de al menos aproximadamente el 40% en peso), preferiblemente al menos una pureza del 60%, más preferiblemente al menos una pureza de aproximadamente el 90% y, más preferiblemente, al menos una pureza del 95%. Las dosis descritas en el presente documento son para una toxina GBS de una purea del 95%. Las dosis de toxina GBS de una pureza inferior deberían ser modificadas en consecuencia. La pureza de la toxina GBS se describe con mayor detalle en el documento PCT/US97/17535 (EP-A-0932696).

Artritis reumatoide o RA, tal como se utiliza en el presente documento, incluye cualquier enfermedad que satisfaga los criterios de diagnosis establecidos por la American Rheumatism Association for rheumatoid artritis. Estos criterios se presentan en la Tabla 1, la cual está adaptada a partir de Rheumatology, Klippel and Dieppe, eds., Mosby, publ. (1994). La RA incluye también variaciones de RA tales como RA juvenil, enfermedad de Still o síndrome de Felty.

TABLA 1

Criterios de diagnóstico revisados en 1987 para la clasificación de la artritis reumatoide
1	Rigidez matinal de al menos una hora.*
2	Artritis en al menos 3 áreas de articulación (interfalángica próxima derecha o izquierda,
	matacarpofalángica, muñeca, codo, rodilla, tobillo y articulaciones metatarsofalángicas)
	con hinchazón o fluido.*
3	Artrítis de articulaciones de las manos (al menos un área hinchada en una muñeca, arti-
	culación metatarsofalángica o interfalángica próxima).*
4	Hinchazón y dificultad de articulación simétrica.*
5	Nódulos subcutáneos.
6	Cambios radiográficos típicos de la artritis reumatoide.
7	Factor reumatoide positivo.
*Criterio especificado que tiene que encontrarse presente durante un período de al menos 6 semanas.

El tratamiento de la RA, tal como se utiliza en el presente documento, incluye la prevención, la mejoría, la disminución de la gravedad, la inhibición del avance, el alivio o la eliminación de la RA o de los síntomas de la misma. Los criterios para la diagnosis de RA se relacionan en la Tabla 1. Las personas genética o ambientalmente predispuestas a desarrollar la RA pueden ser también tratadas, particularmente si las mismas presentan niveles elevados de RF. Los niveles de RF pueden ser medidos por medio de pruebas de aglutinación, tales como la prueba de fijación de látex o la prueba de dilución en tubo de bentonita. Un mamífero tiene necesidad de tratamiento con CM101 si padece RA o propensión a desarrollarla.

La reducción en los síntomas de RA puede ser medida mediante la observación del grado de hinchazón de la articulación o de dolor, o a través de la obtención de imágenes radiográficas, mediante ultrasonidos o de resonancia magnética de la morfología de la articulación. La toxina GBS resulta particularmente útil para la reducción de la hinchazón. Asimismo, el calor constituye un síntoma de RA y la eficacia del CM101 puede ser por tanto medida a través de fotografías térmicas de las articulaciones.

La monitorización del CM101 puede ser lograda mediante la medición de los descensos en el nivel de células CD4+. Esto puede ser logrado por medio de citometría de flujo. Resulta también posible la monitorización de un incremento en los niveles de citoquina, tales como el factor de necrosis tumoral (TNF), IL-8, IL-6, IL-10 y de proteína \alpha inflamatoria macrófago (MIP\alpha). Además, la obtención de imágenes por medio de resonancia magnética (MRI) resulta de utilidad para la visualización de la vascularización y la disponibilidad de una medida relativa de la densidad de vasos.

Para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias crónicas dependientes de la angiogénesis, el CM101 puede ser administrado de manera tópica, parenteral, a través de inyección interna de un bolus, por medio de inyección directa en las articulaciones afectadas o mediante inhalación de spray en formulaciones de dosis unitarias que contienen soportes convencionales no-tóxicos farmacéuticamente aceptables, adyuvantes y vehículos. El término parenteral tal como se utiliza en el presente documento incluye inyecciones subcutáneas, intradérmicas o intraperitoneales, al igual que técnicas de inyección intravenosa, intra-arterial, intramuscular, intrastenal o técnicas de infusión. Resulta preferible la técnica de la administración parenteral y la de administración intravenosa la más preferida. Si bien una simple administración intravenosa puede tardar hasta 120 minutos, la banda de duración preferida se sitúa entre 5 a 60 minutos y la banda de entre 5 y 30 minutos la de duración más preferible.

Para el tratamiento de enfermedades inflamatorias crónicas dependientes de angiogénesis, el CM101 es administrado en dosis de al menos aproximadamente 1\mug/kg de peso corporal del paciente, preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 100\mug/kg, más preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 50\mug/kg y muy preferiblemente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 25\mug/kg. Se entenderá, no obstante, que el nivel de dosis específica para cada uno de los pacientes en particular dependerá de una diversidad de factores, entre los cuales se incluyen la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo, la alimentación y la gravedad de la inflamación o de la enfermedad del paciente que está sometido a terapia, al igual que del tiempo y ruta de administración de CM101.

El CM101 puede ser administrado diariamente, semi-semanalmente, semanalmente, semi-mensual o a intervalos mensuales. Preferiblemente, el intervalo residirá en la banda de entre una semana y un mes. Más preferiblemente, el intervalo oscilará entre 7 días y 2 semanas. La gravedad de la enfermedad del paciente puede ser tenida en cuanta cuando se determinan los intervalos adecuados para los tratamientos con CM101. El intervalo adecuado puede ser también determinado mediante el ensayo de los niveles de granulocitos maduros en la sangre del paciente. El nivel de granulocitos maduros resulta relevante para el establecimiento de las pautas temporales de administración de CM101, ya que el CM101 puede provocar la activación de granulocitos y el agotamiento subsiguiente, si es administrado con demasiado frecuencia. Por consiguiente, los tratamientos futuros con CM101 pueden resultar más eficaces si se ha repone el suministro de granulocitos maduros del paciente. Un procedimiento para la monitorización de niveles de granulocitos maduros es la citometría de flujo, utilizando el antígeno CD69 para detectar granulocitos maduros.

Los tratamientos con CM101 pueden continuar durante el transcurso de varios meses, un año, diversos años o durante toda la vida del paciente. De manera alternativa, el CM101 puede ser administrado en forma de una única dosis, siempre y cuando no reaparezcan los síntomas de la enfermedad. Preferiblemente, el paciente recibirá al menos aproximadamente 5, 10 ó 15 tratamientos.

La reducción en la hinchazón de las articulaciones mediada por CM101 puede ser monitorizada por medio de mediciones externas del tamaño de la articulación, del grado de dolor con la palpación, del grado de movilidad de la articulación y por medio de radiografías u otras imágenes de la morfología de la articulación. La reducción de tamaño mediada por CM101, el número y el grado de inflamación de las lesiones psoriásicas resultará evidente tras efectuar observación visual.

El CM101 debe ser administrado en niveles suficientes para reducir el dolor a largo plazo en el organismo del paciente. El experto en la materia se dará cuenta de que deben ser administradas dosis crecientes de CM101 hasta que el paciente experimente una reducción en el dolor y la administración de CM101 adicional no se traduce en una mejoría del dolor. Se puede establecer una administración intravenosa de tal forma que el paciente pueda controlar las dosis futuras de CM101, según la cantidad de dolor que experimente aproximadamente una vez transcurridas 8 horas desde el tratamiento con CM101.

En otro aspecto, puede utilizarse un artículo de fabricación, tal como un equipo. El artículo incluye una composición farmacéutica que comprende una toxina GBS y, particularmente, CM101 y un soporte farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede ser colocada en un recipiente adecuado, tal como es bien sabido en el estado de la técnica. Se incluyen también instrucciones para el tratamiento de pacientes según la presente invención.

Sin que ello represente vinculación a una teoría en particular, se considera que la toxina GBS, y especialmente el CM101, opera como un agente anti-angiogénico que evita la formación de nuevos vasos sanguíneos. El CM101 inhibe la angiogénesis mediante su unión a células desdiferenciadas, las células que son estimuladas por estados hipóxicos para formar nuevos vasos sanguíneos. El CM101 facilita la unión y la optimización por medio de C3 de células endoteliales y estas células se convierten en el objetivo de las células inflamatorias, conduciendo en última instancia a la destrucción de las células endoteliales.

La angiogénesis juega un papel clave en la patogénesis de la RA, debido a que la hipoxia sinovial induce la liberación de VEGF, lo cual provoca la desdiferenciación de las células endoteliales y la formación de nuevos vasos sanguíneos. Dado que la formación de estos vasos se ve dificultada por el tratamiento con CM101, la hiperplasia de tejido sinovial y la infiltración de linfocitos resultan al menos parcialmente inhibidas. Como resultado, la formación de un nuevo paño resulta minimizada y se reduce el paño existente. Se cree que estos mecanismos sirven de base para la reducción mediada por CM101 de la hinchazón de la articulación, de la inflamación aguda, de la deposición de fibrina y de la formación de paño, demostrada en el presente documento.

La angiogenesis juega también un papel clave en la patogénesis de la psoriasis, debido a que la misma facilita la infiltración de neutrófilos y de linfocitos en la lesión psoriática. Dado que la formación de nuevos vasos sanguíneos se ve dificultada por el tratamiento con CM101, la formación, el mantenimiento y la ampliación de las lesiones psoriáticas se ve dificultada.

Tanto la RA como la psoriasis son enfermedades caracterizadas por inflamación. Por el hecho de que la inflamación resulta perjudicial para las personas que padecen de RA o de psoriasis, respectivamente, y debido al hecho de que existen evidencias de que el CM101 funciona estimulando la inflamación, podría esperarse que el tratamiento con CM101 exacerbase estas enfermedades. De manera sorprendente, el CM101 reduce, al menos parcialmente, las señales y los síntomas de las enfermedades inflamatorias, tales como la RA y la psoriasis.

Se ha informado acerca de que el AGM-1470 es un compuesto anti-angiogénico que reduce la hinchazón de las articulaciones en ratas con artritis inducida por colágeno (Peacock et al., Angiogenesis inhibition supresses collagen artritis .J. Exp. Med., 175:1135 (1992)).El AMG-1470 es un análogo sintético de la fumagilina, un antibiótico antifúngico de origen natural procedente del Aspergillus fumigatus fresenius (Ingber et al., Synthetic analogues of fumagillin that inhibit angiogenesis and suppress tumor growth, Nature 348:555 (1990)). Debido a que no es un polisacárido, el AGM-1470 no está estructuralmente relacionado con el CM101. El mecanismo de acción del AGM-1470 difiere también del CM101: se ha informado al respecto de que la actividad del AGM-1470 no requiere la inducción del sistema inmunitario del huésped (Brem & Folkman, Análisis of experimental antiangiogenic therapy, (Brem & Folkman, Análisis of experimental antiangiogenic therapy, J. Ped. Surg., 28:445 (1993)).

Otra diferencia entre el AGM-1470 y el CM101 reside en el hecho de que el AGM-1470 inhibe tanto la angiogénesis fisiológica como la patológica, mientras que el CM101 tan solo inhibe la angiogénesis patológica. Tal como sugieren sus nombres, la angiogénesis patológica está asociada con la enfermedad y la angiogénesis fisiológica se desarrolla en condiciones normales de salud. La cicatrización de heridas, el ciclo menstrual femenino y el embarazo, son ejemplos de angiogénesis fisiológica (Brem & Folkman, Análisis of experimental angiogenic therapy, J. Ped. Surg., 28:445 (1993)). La angiogénesis patológica se desarrolla en la retinopatía diabética, en el hemangioma, en cáncer, psoriasis, RA, y osteoartritis (Folkman et al., Angiogenic factors, Science, 235:442 (1987); Kimball et al., Meeting report-angiogenesis in pannus formation, Agents & Actions, 34:329 (1991)). Por consiguiente, además de su ya conocido papel a la hora de inhibir la angiogénesis en estados patológicos, tales como tumores y RA, el AGM-1470 inhibe la cicatrización de heridas (Brem et al., Time dependent suppression on wound heating with the angiogenesis inhibitor, AGM-1470, J. Cell Biol., 115:403 (1991) y reproducción femenina (D'Amato, Abstract from IBC Conference on Angiogenesis), un efecto claramente indeseable. Por comparación, el CM101 no inhibe el crecimiento de la placenta o del endometrio. El CM101, no tan solo no logra inhibir la cicatrización de heridas, sino que realmente se ha demostrado que la facilita, tal como se pone en evidencia por medio de una solicitud también pendiente depositada de manera concurrente con la presente (EP-A-0973431). Por consiguiente, el CM101 puede ser administrado para tratar la RA o la psoriasis sin provocar los indeseables efectos secundarios de infertilidad femenina o comprometer la capacidad de cicatrización que resultaría del tratamiento con AGM-1470.

Los siguientes ejemplos se aportan a los efectos de ilustrar la presente invención y no deben entenderse como limitaciones de la cobertura de la misma.

Ejemplos Ejemplo 1 El tratamiento con CM101 reduce la hinchazón de las articulaciones

Para ensayar los efectos del CM101 sobre la RA se utilizó un modelo de ratón para RA (Courtenay et al., Immunisation against heterologous type II collagen induces artritis in mice, Nature 283:666 (1980). Ratones macho de la cepa DBA/1 recibieron inyecciones intradérmicas de colágeno de pollo de tipo II, en 4-6 puntos de la espalda. El colágeno inyectado fue preparado del siguiente modo: 100 \mug de colágeno se disolvieron en 100 ml de ácido acético 0,1M y se emulsionaron en un volumen igual de Adyuvante Completo de Freund (0,5 mg/ml M. Butyricum). Tres semanas más tarde, en la semana cero del experimento, todos los animales fueron inmunizados por medio de una única inyección intraperitoneal de 100 \mug de colágeno. Dos semanas después de la inyección inicial de colágeno, la totalidad de los animales dieron positivo en lo concerniente a anticuerpos de colágeno anti-pollo. Esto se utilizó como una diagnosis de artritis incipiente inducida por colágeno.

Los animales con anticuerpos positivos fueron divididos en dos grupos experimentales y un grupo control positivo. Desde la semana 4 a la semana 9 todos los animales recibieron inyecciones intravenosas de 100 \mul tres veces por semana. Para los ratones en el primer grupo experimental (n=10), cada una de las inyecciones contenía 20 \mug/kg de CM101 disueltos en solución salina. Para el segundo grupo experimental (n=10), se inyectaron cada vez 60 \mug/kg de CM101 disueltos en solución salina. El grupo de control positivo (n=10), que previamente había recibido inyecciones de colágeno y dió resultado positivo en lo que concierne a anticuerpos anti-colágeno, recibió inyecciones de solución salina fisiológica en vez de CM101.

La inflamación de la articulación fue objeto de registro mediante medición con un compás especial accionado por muelles (Slarrett # 1015 MA2). Las mediciones se efectuaron con anterioridad al inicio del experimento (PRE) y en las semanas 2,3,4,5,7,9 y 11. Dos días después de aplicar el tratamiento final en la semana 9, se sacrificaron 18 animales procedentes de los diferentes grupos y sus extremidades delanteras y traseras fueron fijadas con formalina y seccionadas para su análisis histológico. El resto de los animales no fue sacrificado hasta que se llevaron a cabo las mediciones de sus articulaciones en la semana 11.

Las Figuras 1, 2, 3 y 4 muestran las mediciones de diámetro de articulaciones de muñeca, pie, codo y de rodilla, respectivamente, de ratones tratados con CM101 y de ratones control.

Con anterioridad a la inyección de colágeno inicial (PRE), todos los ratones presentaban articulaciones de pequeño tamaño. La mediciones de articulación de los ratones tratados con CM101 y de los ratones control continuaron siendo muy similares en las dos semanas siguientes al segundo turno de inyecciones de colágeno: los diámetros de articulación permanecieron estables alrededor de los niveles de pre-tratamiento en las semanas 2 y 3 y después se incrementaron de manera drástica entre las semanas 3 y 4. En la semana 4, las articulaciones de los animales eran entre el 35 y el 70% más grandes que en el inicio del experimento.

Los tratamientos con CM101 empezaron en la semana 4 y continuaron en base a tres aplicaciones por semana, hasta la semana 9. Durante estas semanas, las mediciones de articulación de los animales que recibieron CM101 eran significativamente más pequeñas que las mediciones de articulación de los ratones control y la dosis de 60\mug/kg de CM101 aparecía como más efectiva que la de 20 \mug/kg de CM101, a la hora de reducir el tamaño de la articulación.

A pesar de que no recibieron tratamientos con CM101 después de la semana 9, los animales tratados con CM101 mostraron una reducción adicional en el tamaño de la articulación entre las semanas 9 y la 11. En la semana 11, las mediciones de articulación de los ratones tratados con 20\mug/kg de CM101 o con 60 \mug/kg eran bastante similares-sus articulaciones eran significativamente más pequeñas que las articulaciones de los ratones control y habían casi recuperado su tamaño anterior al inicio de la experimentación.

Por consiguiente, el CM101 reduce la hinchazón pre-existente en las articulaciones. Si bien la dosis de 60 \mug/kg reduce la hinchazón de una manera más efectiva que la dosis de 20 \mug/kg durante cortos períodos de tiempo, las dos dosis presentan eficacia similar a largo plazo. El papel terapéutico del CM101 en la mejoría de la hinchazón de articulaciones está también apoyada por los resultados de un experimento similar, en el cual ratones afectados por artritis inducida por colágeno fueron tratados con 60 \mug/kg o 240 \mug/kg de CM101 desde la semana 2 hasta la semana 9 (datos no mostrados).

Ejemplo 2 El CM101 reduce la inflamación aguda y la formación de paño

Se siguió el protocolo descrito anteriormente, con la excepción de que el CM101 fue administrado a dosis de 0 \mug/kg, 60 \mug/kg y 240 \mug/kg en solución salina y la administración se llevó a cabo tres veces por semana desde la semana 2 a la semana 9. Dos días después de la finalización del tratamiento en la semana 9 se obtuvieron secciones histológicas.

Tal como se muestra en la Figura 5, el CM101 reduce las manifestaciones celulares de la RA.

En condiciones normales (Fig.5A), las superficies articulares son curvilíneas en forma y están recubiertas por una membrana sinovial delgada. Justo debajo del sinovio se localiza una capa espesa, uniforme, de cartílago hialino (la cual está teñida de oscuro en estas preparaciones). Bajo el cartílago hialino se encuentra el hueso subcondrial.

La articulación de un ratón con artritis inducida por colágeno (Fig. 5B) muestra un aplanamiento de la superficie articular, una inflamación activa del espacio articular, hipertrofia sinovial e hiperplasia, inflamación del paño y anquilosamiento moderado. Resulta evidente la destrucción del cartílago hialino subyacente y del hueso, lo cual ha provocado el paño.

A diferencia de su homóloga no tratada, la articulación de un ratón tratado con CM101 (Fig.5C) carece de inflamación activa y de formación de paño. La capa de cartílago hialino es gruesa y uniforme. Los únicos signos morfológicos de artritis están constituidos por un aplanamiento articular moderado, algo de pérdida de cartílago articular y de hueso subcondrial y fibrosis en el área donde hubiera existido paño.

Por consiguiente, el tratamiento con CM101 reduce la inflamación periarticular, la formación de paño, la erosión del cartílago y del hueso y el anquilosamiento.

Claims (15)

1. Utilización de una toxina de Streptocossus \beta-hemolítico del grupo B (GBS) en la fabricación de un medicamento para ser utilizado en un procedimiento para el tratamiento de un paciente con una enfermedad inflamatoria crónica dependiente de angiogénesis, donde dicha toxina se administra al paciente en una cantidad suficiente para reducir la probabilidad de formación de nuevos vasos sanguíneos en un punto de la enfermedad.

2. Utilización de la reivindicación 1, en donde la enfermedad inflamatoria crónica se selecciona de entre artritis reumatoide y psoriasis.

3. Utilización de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2, en donde la toxina GBS tiene se administra por vía intravenosa.

4. Utilización de la reivindicación 1, en donde el paciente tiene al menos 7 días de edad.

5. Utilización de la reivindicación 1, en donde el medicamento es para un tratamiento que se mantiene mediante la administración repetida de una toxina GBS al paciente, en un intervalo comprendido en el largo de una semana a un mes.

6. Utilización de la reivindicación 1, en donde la toxina GBS se administra a un nivel de entre 1 \mug/kg a 100 \mug/kg de peso.

7. Utilización de la reivindicación 1, en donde la toxina GBS se administra en una cantidad suficiente para reducir el dolor en el cuerpo de un paciente, aproximadamente 8 horas después de la administración de la toxina GBS.

8. Utilización de la reivindicación 1, en donde la toxina GBS se administra en una cantidad suficiente para reducir la hinchazón en las articulaciones del cuerpo.

9. Utilización de la reivindicación 1, en donde la toxina GBS se administra en una cantidad suficiente para inhibir la angiogénesis en los tejidos sinoviales del paciente.

10. Utilización de la reivindicación 2, en donde la enfermedad es psoriasis y la toxina GBS se administra en una cantidad suficiente para reducir las lesiones psoriáticas.

11. Utilización de la reivindicación 1, en donde dicha toxina es tal que la administración reduce la probabilidad de formación de nuevos vasos sanguíneos en un punto de la enfermedad, pero no inhibe la cicatrización.

12. Utilización según la reivindicación 1, en donde el medicamento se utiliza en un procedimiento para tratar la artritis reumatoide en el cuerpo de un paciente, en donde dicha toxina se administra al paciente en una cantidad suficiente para reducir los signos o síntomas de la artritis reumatoide.

13. Utilización según la reivindicación 1, en el cual el medicamento se utiliza en un procedimiento para tratar la psoriasis en el cuerpo de un paciente, en donde dicha toxina se administra en una cantidad suficiente para reducir los signos o síntomas de la psoriasis.

14. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, 12 ó 13, en donde la toxina GBS es sustancialmente pura.

15. Utilización de la reivindicación 14, en donde la toxina GBS tiene una pureza de al menos aproximadamente el 90%.