ES2201453T3 - Composicion farmaceutica o alimentaria para el tratamiento de patologias ligadas a un rechazo de injerto, una reaccion alergica o auto-inmune. - Google Patents
Composicion farmaceutica o alimentaria para el tratamiento de patologias ligadas a un rechazo de injerto, una reaccion alergica o auto-inmune.Info
- Publication number
- ES2201453T3 ES2201453T3 ES98909232T ES98909232T ES2201453T3 ES 2201453 T3 ES2201453 T3 ES 2201453T3 ES 98909232 T ES98909232 T ES 98909232T ES 98909232 T ES98909232 T ES 98909232T ES 2201453 T3 ES2201453 T3 ES 2201453T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- pharmaceutical
- food
- food composition
- group
- prel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/001—Preparations to induce tolerance to non-self, e.g. prior to transplantation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/35—Allergens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
La invención se refiere a un compuesto farmacéutico y/o de alimentación que comprende un vehículo farmacéutico o de alimentación adecuado y una proteína de choque térmico y al menos uno de los epítopos de forma o secuencial de una estructura antígena que induce un rechazo del injerto respecto del anfitrión y una reacción alérgica o autoinmune.
Description
Composición farmacéutica o alimentaria para el
tratamiento de patologías ligadas a un rechazo de injerto, una
reacción alérgica o auto-inmune.
La presente invención se refiere a una nueva
composición farmacéutica o alimentaria destinada al tratamiento de
patologías ligadas a un rechazo de injerto, una reacción alérgica o
auto-inmune.
Desde hace una docena de años, estudios
controlados describen la desensibilización que se basa en la
administración oral de alergenos (1). Este método se funda en el
hecho de que la administración oral de un antígeno facilita la
adquisición de una tolerancia inmunológica consigo. La vía
digestiva constituye el modo de contacto del organismo con
antígenos, de origen alimentario o microbiano. Sin embargo, las
reacciones alérgicas son raras. La administración por vía oral de
glóbulos rojos de borrego (GRM) a ratas impide a éstas producir más
tarde anticuerpos anti-GRM después de una inyección
subcutánea; y cuando se actúa sin toma oral previa, la respuesta
alérgica está presente. Este fenómeno constituye inmunológicamente
lo que se denomina tolerancia oral.
Este método de desensibilización por vía oral ha
sido validado en estudios prospectivos y controlados, y permite
reducir los riesgos de anafilaxia, en particular para el polen de
abedul y los ácaros. El método es ya accesible en el mercado de
vacunas mediante una presentación en forma bebible (vendida por la
sociedad Laboratoire des Stallergenes - París).
Por otra parte, se puede considerar que el
beneficio en términos de protección de la alergia a la leche de los
niños de pecho que está constatado desde la introducción de nuevas
fórmulas de leche en polvo predigeridas enzimáticamente, resultaría
de la inducción de tolerancias inmunológicas por la presentación de
antígenos en forma de péptidos.
Sin embargo, es difícil predecir o constatar la
eficiencia de la desensibilización. La observación clínica permite,
fuera de tiempo, constatar o no la mejora eventual de los
síntomas.
Se sabe, por la solicitud de patente
internacional WO 96/36880, que se puede detectar y/o cuantificar
ligandos específicos de una patología ligada a una respuesta
alérgica, auto-inmune o del cáncer de pulmón, por un
ensayo de competición entre ligandos presentes en una muestra con
otros ligandos discriminables. Este ensayo se basa en el hecho de
que los sujetos alérgicos y sintomáticos reconocen por sus
anticuerpos epítopos diferentes de los reconocidos por los
anticuerpos de sujetos tolerantes de la misma estructura antigénica
específica de la citada patología. Este documento describe, además,
la posibilidad de medir la evolución de esta especificidad, en
particular en el caso de niños alérgicos a la leche, y la evolución
hacia la adquisición in vivo de la tolerancia a la
leche.
El documento
WO-A-97/06821 describe composiciones
que contienen una proteína de estrés y un epítopo de una estructura
antigénica incorporados a vehículos que permiten la absorción o la
inyección de dichas composiciones por medio de una aplicación
mucosal o cutánea.
En el tercer párrafo de la página 10, este
documento describe que dichas estructuras antigénicas pueden estar
asociadas a enfermedades auto-inmunes o de alergia,
y que en este caso, dicho antígeno se administra en combinación con
las citadas proteínas de estrés en una cantidad suficiente para ser
tolerogénicas o para inhibir una respuesta inmunitaria preexistente
en contra de dicho antígeno en un sujeto.
Se ha indicado que la cantidad de proteínas de
estrés requerida para inhibir esta respuesta inmunitaria se supone
sustancialmente más importante que las cantidades para obtener una
estimulación.
Sin embargo, no se ha descrito en este documento
ningún ejemplo de aplicación de tales composiciones. En particular,
no se ha dado en este documento ninguna demostración de la
aplicación de tal composición in vivo. Además, no se ha
descrito, ni sugerido, en este documento, ninguna dosis de
administración de dichas composiciones.
El documento
WO-A-95/24920 describe la
utilización de complejos constituidos por la asociación de una
proteína de estrés y por un péptido como vacuna profiláctica o
terapéutica contra patógenos intracelulares.
Este documento no describe, en modo alguno, la
posibilidad de utilizar tales complejos in vivo en el
tratamiento de enfermedades auto-inmunes, de la
alergia o de los rechazos de injertos.
\newpage
La presente invención tiene por objeto
suministrar una nueva composición que puede ser de tipo farmacéutico
o alimentario, tratando de modificar la respuesta inmunitaria del
paciente frente a una patología ligada a una reacción alérgica,
auto-inmune o frente a fenómenos de rechazo de
injerto, de manera que la respuesta inmunitaria de dichos pacientes
se aproxima a la tolerancia natural manifestada por sujetos normales
(que permanecen asintomáticos aunque susceptibles de exponerse
también a esta patología).
La presente invención trata igualmente de
suministrar una composición farmacéutica o alimentaria de bajo
coste, cuya administración sea fácil y que pueda utilizarse de
manera profiláctica y/o terapéutica.
La presente invención se refiere a una
composición farmacéutica o alimentaria que contiene un vehículo
farmacéutico o alimentario adecuado, una proteína de estrés de una
bacteria saprofita (denominada igualmente "heat shock
protein" o HSP) y al menos uno de los epítopos
(conformacional o secuencial) de una estructura antigénica,
estructura antigénica que induce un rechazo de injerto, una reacción
alérgica o una reacción auto-inmune. Con
preferencia, el vehículo farmacéutico o alimentario de la
composición es adecuado para una administración por vía mucosal
(especialmente por vía oral) o cutánea.
De forma ventajosa, la proteína de estrés y el
epítopo forman un complejo de manera natural (es decir sin formación
de enlace covalente) como se describe por Roamn et al.,
febrero (1994), Fouri et al., The Journal of Biological
Chemistry, Vol. 269, nº 48, pp. 30470-30478
(1994), Palleros et al., The Journal of Biological
Chemistry, Vol. 269, nº 48, pp. 13107-13114
(1994), Grageroov y Gottesman, Journal of Molecular
Biology, nº 241, pp. 133-135 (1994), y
Schmid et al., Science, Vol. 260, p. 1991 (1994).
Según la invención, el epítopo (denominado
igualmente determinante antigénico) se obtiene por una hidrólisis,
con preferencia enzimática, especialmente a la pepsina, de la citada
estructura antigénica.
La proteína de estrés es una proteína bacteriana
de estrés presente en las bacterias saprofitas tales como E.
Coli.
Entre las proteínas de estrés de la presente
invención, se pueden mencionar la proteína de estrés GroEL,
las proteínas de estrés GrpE, DnaK o DnaJ tales
como las descritas especialmente por Hendrick y Hartl
(Annual Review of Biochemistry, nº 62, p. 349 (1993) o las
proteínas heat shock HSP 60, 70, ...
Se entiende por "fenómeno de rechazo de
injerto, reacción alérgica o auto-inmune", las
reacciones de hipersensibilidad, de tipo inmediato o diferido,
provocadas por contacto especialmente con un alergeno (esta reacción
puede ser inmediata y específica (anafilaxia, urticaria, etc.) o
diferida en el tiempo) o enfermedades auto-inmunes,
y los desórdenes del sistema inmunitario de tipo inmediato o
diferido ligados a los rechazos de injertos de tipo hospedante
contra injerto e injerto contra hospedante.
La auto-inmunidad es un estado de
inmunización de un sujeto contra sus propios constituyentes y el
fenómeno de rechazo de injerto es un estado de inmunización de un
sujeto contra constituyentes extraños (fluidos corporales tales como
sangre, líquido céfalo-raquídeo,..., células,
tejidos, órganos, anticuerpos,...) implantados de manera voluntaria
en el paciente. Estos fenómenos se observan en particular en las
patologías elegidas entre el grupo constituido por infecciones
ligadas al SLE (Systemic Lupus Erythematosus disease),
síndrome Gougerot-Sjögren (o patología
Sjögren), poliartritis reumatoide, así como patologías de
tipo sarcoidosis y osteopenia, espondiloartritis, escleroderma,
esclerosis en placas (esclerosis múltiple), esclerosis amiotrófica
lateral, hipertiroidismo, enfermedad de Addison, anemia
hemolítica auto-inmune, enfermedad de Crohn,
síndrome de Goddpasture, enfermedad de Graves,
tiroiditis de Hashimoto, hemorragia purpural idiopática,
diabetes dependientes de insulina, miastenia, pemphigus
vulgaris, anemia perniciosa, gromerulonefritis
post-estreptocócica, psoriasis y esterilidad
espontánea, así como fenómenos inmediatos o diferidos observados
durante los rechazos de injerto.
Se entiende por "estructura antigénica que
induce un rechazo de injerto, una reacción alérgica o
auto-inmune", alergenos, con preferencia elegidos
entre grupos constituidos por antígenos principales alérgicos
presentes en alimentos tales como huevos, soja, leche, en particular
beta-lactoglobulina bovina (BLG), procedente de la
leche de vaca, antígenos principales alérgicos presentes en los
vegetales, mohos, medicamentos (en particular antibióticos),
pólenes, antígenos principales alérgicos presentes en animales, en
particular en los pelos, veneno, en particular veneno de avispa,
antígenos principales de la reacción alérgica a los ácaros, a la
polilla presente en el polvo doméstico (antígeno P1
Dermatophagoides pteronyssinus), antígeno principal de
Aspergillus fumagatus, y enterotoxina B staphylococcal
(SEB).
Otros ejemplos no limitativos de alergenos o
mezclas de alergenos se han descrito igualmente en la publicación
ISBN-91-970475-5-4
de Pharmacia AB.
\newpage
La "estructura antigénica" puede igualmente
ser un complejo antigénico que induce una enfermedad
auto-inmune. Con preferencia, esta estructura
antigénica es específica de lupus (SLE) o de la patología de
Sjögren, en particular la membrana plasmática o una porción
de esta membrana que contiene DNA membranal con un peso superior a
100 KD, tal como se describe especialmente en la solicitud de
patente WO96/13723.
Otros ejemplos no limitativos de complejos
antigénicos que inducen enfermedades auto-inmunes se
han descrito igualmente por Roitt I.M. (Essential
Immunology, Blackwell Scientific Publication (ch. 14) ISBN
0-632-01994-8) y por
Humbel R.L. (Auto-anticuerpos y enfermedades
auto-inmunes, Ed. Scientifiques Elsevier
(1994) ISBN
2-906077-58-5).
Esta estructura antigénica puede igualmemnte ser
un locus principal de histocompatibilidad (MHC I y/o MHC II) o una
porción de éste específica de un individuo y que interviene en los
fenómenos de rechazo de injertos (incluyendo transfusiones de
fluidos corporales).
El vehículo farmacéutico o alimentario adecuado
según la presente invención puede ser cualquier aditivo o vehículo,
tal como una sustancia compatible, no tóxica para la administraciíón
a un paciente de la composición según la invención. El tipo de
vehículo farmacéutico o alimentario adecuado utilizado dependerá del
modo de administración elegido. En particular, para la
administración oral, estos pueden consistir en disoluciones acuosas,
jarabes, tabletas, cápsulas, etc. Pueden elegirse otros vehículos
farmacéuticos tales como cremas o ungüentos, en función del tipo de
administración, en particular para administraciones cutáneas.
El especialista puede igualmente adaptar el
vehículo farmacéutico en función de una administración subcutánea,
intradérmica, intravenosa, intramuscular, parenteral, por vía de
inhalación nasal o bucal, etc.
El porcentaje de compuesto activo presente en la
composición según la invención dependerá del tipo de paciente, de la
patología tratada y de la vía de administración. Las dosis estarán
únicamente limitadas por la tolerancia del producto por parte del
paciente, así como por las frecuencias de administración.
Las concentraciones de administración se elegirán
en particular de manera que se reduzcan los signos y síntomas de las
patologías anteriormente mencionadas y, con preferencia, se
supriman, por las dosis de administración previstas por la
posología.
De forma inesperada, los inventores han
descubierto que la utilización de la composición farmacéutica y/o
alimentaria según la invención permite modificar la respuesta
inmunitaria de un paciente inducido por la mencionada estructura
antigénica. La modificación de la respuesta inmunitaria de un
paciente puede especialmente detectarse y cuantificarse según el
procedimiento y la técnica descritos en la solicitud de patente
WO96/36880 o por cualquier método de análisis clínico del paciente
tratado, bien conocido por el especialista (incluyendo el modo
profiláctico).
Otro aspecto de la presente invención se refiere
a la utilización de la composición según la invención para la
preparación de un medicamento destinado a modificar la respuesta
inmunitaria de un paciente frente a una estructura antigénica que
induce un rechazo de injerto, una reacción alérgica o
auto-inmune. En particular, la presente invención se
refiere a la utilización de la composición farmacéutica y/o
alimentaria según la invención para la preparación de un medicamento
destinado a la desensibilización de alergias atópicas o no
atópicas.
Otro aspecto de la presente invención se refiere
a la utilización de la composición farmacéutica y/o alimentaria
según la invención para la preparación de un medicamento destinado a
la prevención o al tratamiento de reacciones alérgicas, enfermedades
auto-inmunes antes mencionadas, al tratamiento o a
la prevención de rechazos de injerto, eventualmente en combinación
con un producto específico para disminuir o neutralizar las
reacciones alérgicas, las reacciones auto-inmunes y
los fenómenos de rechazo de injerto (en particular la administración
de inmuno-supresores tales como azatioprina,
esteroides, globulinas anti-linfocitarias,
ciclosporina A, rapamicina, KF-506
(tacrolimus) o linfoquinas (en particular
IL-10), sus análogos y sus agonistas bien conocidos
por el especialista.
Se entiende por "análogos y agonistas" de
estas moléculas, otras moléculas o derivados de estas moléculas, que
actúan sobre el mismo receptor o a través del mismo mecanismo de
acción que los productos específicos antes mencionados.
La presente invención se refiere igualmente a un
procedimiento de tratamiento terapéutico o profiláctico de un
paciente, que consta de la etapa de administración de la composición
según la invención a dicho paciente, de manera que se modifique la
respuesta inmunitaria del paciente frente a una estructura
antigénica que induce un rechazo de injerto, una reacción alérgica o
auto-inmune.
La presente invención se describirá de modo más
detallado refiriéndose a las Figuras descritas en los ejemplos de
ejecución que siguen a continuación.
La administración oral permitió una inducción de
tolerancia inmunológica, y se aplicó de forma cada vez más extendida
en el dominio de la desensibilización anti-alérgica.
Sin embargo, requirió el uso de cantidades más importantes de
antígenos que por vía parenteral, y debió extenderse a periodos de
al menos varios años. La optimación del régimen de dosis
administrada y de su periodicidad fue adaptable para el
especialista, de forma que se evitaron las reacciones sindrómicas
(replicación de la sintomatología alérgica en caso de sobredosis),
que son frecuentes pero no peligrosas debido a la progresividad
lenta del aumento de las dosis administradas (2).
Las proteínas de estrés (heat shock
proteins HSP) constituyen una serie de familias de proteínas,
muy bien conservadas durante la evolución desde las bacterias hasta
el hombre, y que tienen la capacidad de unirse a los péptidos o a
las proteínas cuya estructura de conformación está alterada o en vía
de conformación definitiva (4).
Estas proteínas desempeñaron varios papeles cuya
participación en el transporte intracelular que lleva al conjunto
polipeptídico para la síntesis de ciertas proteínas o su
eliminación. Algunos se expresaron en la superficie de diferentes
células y pudieron contribuir a la presentación antigénica, en
particular en linfocitos T a los receptores para antígenos de tipo
gamma-delta, que colonizan las mucosas y los órganos
linfoideos asociados a la mucosa digestiva.
La presentación antigénica por intermedio de los
HSP de la familia HSP70, a los linfocitos T
gamma-delta (\gamma, \delta) permitió pasarse de
la presentación dependiente del complejo principal de
histocompatibilidad de tipo II.
La inyección parenteral a animales de
experimentación de complejos HSP-péptidos permitió
obtener un efecto adyuvante notable (5, 6) que determinó o amplificó
el poder antigénico de estos péptidos.
Ciertos HSP de bacterias de las familias HSP60 y
HSP70 son la meta de respuestas inmunes que tienen un papel
protector respecto a la infección por estos gérmenes.
Recientemente se propuso desensibilizar por vía
oral dando extractos peptídicos de E. Coli que contenían
HSP60, a pacientes afectados de artritis reumatoide, con un cierto
efecto beneficioso (5, 6). Considerando el poco efecto secundario,
los autores propusieron intentar el ensayo en otras afecciones
inflamatorias para manipular una repuesta dirigida contra una de
estas HSP microbianas, considerada como sustituto de un
auto-antígeno.
De forma inesperada, los inventores descubrieron
que las proteínas de estrés constituian un vector notable para
presentar péptidos al sistema linfoide del tubo digestivo e inducir
una tolerancia. Las proteínas de estrés de las bacterias saprofitas
parecieron ser las más abundantes naturalmente en el canal
digestivo. Es probable también que los péptidos procedentes de la
digestión alimentaria constituyan la masa más abundante de
fragmentos antigénicos disponibles para la formación de complejos
HSP-péptidos. Sin embargo, la abundancia de péptidos
generados y la cantidad presumida limitada de bacterias HSP hizo
aleatoria la formación de una cantidad inmunológicamente eficiente
de estos complejos HSP-péptidos antigénicos, y esto
tanto más cuanto que la cantidad absorbida de antígeno de objetivo
desensibilizante fue muy baja (algunas decenas de \mug), frente a
la carga proteica alimentaria.
Los inventores propusieron favorecer la formación
de estos complejos antes de la llegada al tubo digestivo, es decir
in vitro, utilizando proteínas de estrés de E. Coli
purificadas y péptidos procedentes de la digestión pepsínica de
BLG.
Los dos anticuerpos monoclonales denominados de
aquí en adelante M6 y M7 reconocen cada uno un epítopo de
conformación diferente en la molécula de BLG. Se utilizaron sus
propiedades cualitativas diferentes como marcadores de
reconocimiento de epítopos singulares en una competición con el
conjunto de anticuerpos séricos de un sujeto. Los estudios clínicos
pusieron de manifiesto que los sujetos sintomáticos y los sujetos
asintomáticos reconocieron en esta molécula epítopos que, por una
parte al menos, eran diferentes (7), lo que se denomina a
continuación perfiles de epítopos.
El epítopo reconocido como M6 fue particularmente
bien reconocido por los sujetos alérgicos y sintomáticos. La
fijación del anticuerpo M6 en BLG intacto fue, en efecto, mejor
inhibida por los sueros de niños alérgicos a la leche que por los de
sujetos no alérgicos, ya se tratase de niños o de adultos con buen
estado de salud (donantes de sangre).
El epítopo reconocido como M7 fue mejor
reconocido por los sujetos asintomáticos que por los sujetos
alérgicos. La fijación del anticuerpo M7 en BLG fue mejor inhibida
por los sujetos asintomáticos que por los sujetos alérgicos.
\newpage
Se utilizó la competición de enlace antigénico
contra M6 como índice de especificidad representando el perfil de
epítopos reconocido por los sujetos alérgicos, y complementariamente
la competición contra M7 como índice de especificidad representando
el perfil de epítopos reconocido por los sujetos asintomáticos.
La validación de esta interpretación se confirmó
longitudinalmente por estudios clínicos.
La adquisición de un estado de tolerancia a la
leche se acompañó de una conversión de la especificidad fina de los
anticuerpos séricos, hacia el perfil típico de los sujetos
asintomáticos.
Esta discriminación de epítopos expresada a
escala de los anticuerpos circulantes es la que sirvió aquí de
dispositivo de análisis por la influencia de la modulación
antigénica oral.
Ratones singénicos recibieron, en su agua de
bebida, cantidades muy pequeñas de péptidos procedentes de la
digestión pepsínica de beta-lactoglobulina (BLG)
previamente acopladas o no con proteínas de estrés purificadas y
cuya capacidad funcional estaba intacta (capacidad de unirse a
péptidos o a proteínas alteradas).
Se han tomado 40 individuos de 8 a 16 semanas en
una cría de ratones Balbc sometidos después de varias generaciones a
una alimentación pobre de leche de vaca: 30 \mug de
beta-lactoglobulina/gramo de granulados
nutritivos.
Se ha digerido la BLG en contacto con pepsina
acoplada a la agarosa (Sigma) en condiciones de digestión
incompleta, y luego filtrada sobre filtro de 10.000 Daltons. La
concentración del producto de digestión (pB) se midió por
espectrofotometría (rendimiento igual a 30 a 50% de la proteína
intacta).
Se incubaron disoluciones de tampón de fosfato
(PBS) de 1 \mug/ml con disoluciones de 1 \mug/ml de proteínas de
estrés de los E. Coli siguientes: DnaK, DnaJ, GroEL, GrpE
(Gen de estrés) durante una hora al menos, a temperatura ordinaria.
Se congelaron partes alícuotas de 1 ml de cada combinación.
Se añadió una disolución de complejos (1 ml),
después de descongelada, al biberón de agua de 100 ml cotidianamente
distribuida para cada jaula de cuatro ratones. Cada tipo de
complejo se administró a 8 ratones. Un grupo de control recibió el
antígeno pB no complejado.
La disolución se añadió 3 veces por semana
durante dos semanas (o sea 6 veces), a partir del tiempo cero.
Se realizó una extracción individual de sangre en
el plexo retro-orbital, en el tiempo cero y después
de cuatro semanas. Los animales se anestesiaron con éter y luego se
sangraron, al cabo de 8 semanas.
La especificidad de los anticuerpos séricos se
examinó por un ensayo de competición de tipo ELISA.
Placas multipocillos de poliestireno se
recubrieron pasivamente, por absorción a temperatura ordinaria, con
una pequeña cantidad de BLG (0,3 \mug/ml en tampón de
hidrógeno-carbonato), luego saturadas por gelatina
(1%, peso/volumen-Haemacel (R).
El suero de ratones se diluyó a 1/100 en tampón
de disolución (PBSdil) constituido de: PBS-EDTA (10
mM)-Tween 20 (0,05%)-gelatina
(Haemacel-1%).
Se seleccionaron dos anticuerpos monoclonales de
ratón producidos por su especificidad con respecto a epítopos de
conformación de BLG. Se biotinaron y se utilizaron en su dilución
límite de fijación antigénica definida de la forma siguiente: la
que permitió una señal máxima pero sensible a toda reducción de la
carga de antígeno, a su propia dilución, e inhibible por la
competición con una cantidad de suero de ratones no tratados. Estas
originaron en efecto anticuerpos naturales contra la BLG, en
relación con la exposición antigénica alimentaria, incluso
mínima.
Se mezclaron en un pocillo 100 \mul de suero
diluido y de anticuerpo biotinado, en ejemplar doble.
Después de una incubación de una noche a
temperatura ordinaria, se midió la fijación del anticuerpo
monoclonal por la retención proporcional de biotina revelada por
captación de estreptavidina acoplada a peroxidasa de rábano blanco.
Esta coloreó un sustrato de
orto-fenilén-diamina. Se midió la
densidad óptica (D.O.) por espectrofotometría. Se midió el ruido de
fondo (b.f.) en pocillos sin antígeno. Se definió la fijación
máxima, bien en ausencia de competición (anticuerpo monoclonal
solo), o bien en presencia de suero particularmente poco
inhibidor.
Los resultados se expresaron en porcentaje de
inhibición de fijación del anticuerpo monoclonal por: % inhib. =
100 x (D.O. del ensayo-D.O. b.f.)/(D.O.
máxima-D.O. b.f.).
La correspondencia entre perfil de epítopos
reconocidos en el antígeno y el estado clínico del sujeto
(tolerancia o no) se confirmó por otros ejemplos:
- -
- modelo de alergia a los ácaros:
- la evolución de la especificidad fina de los anticuerpos antiácaros en los niños alérgicos mostró la existencia de un perfil de epítopos bajo el efecto de la desensibilización inducida tanto por vía parenteral como oral,
- -
- evolución de anticuerpos.
La Figura 1 resume los datos de la
experimentación:
En la parte izquierda, se representaron las
evoluciones de los medios de inhibición (+ desviación típo) de la
fijación del anticuerpo monoclonal M6 por los sueros individuales,
para los diferentes grupos de tratamiento.
Los datos en cifras se incluyeron en la Tabla
1.
El grupo de control que recibió los péptidos
digeridos de la pepsina (pB) vio aumentar su capacidad media de
inhibición de 45 a 60%, y 59% después de 4 y 8 semanas. Esta
variación fue significativa (p < 0,05 - ensayo T doble) con
respecto al principio, pero estable después de 4 semanas.
Para el grupo que recibió los complejos de
DnaK-pB, esta capacidad pasó de 48 a 56% y luego 77%
en el mismo periodo, siendo esta última más importante que en el
grupo de control (p < 0,01 - ensayo T no doble) y muy
significativo con respecto al tiempo cero (p< 0,001 - T
doble).
De igual modo, los grupos que recibieron los
complejos DnaJ-pB, GroEL-pB y
GrpE-pB mostraron una elevación muy significativa
después de 4 semanas y que se acentuó aún a la octava semana
(situada bien por encima del valor del grupo de control para los
complejos GroEL-pB y GrpE-pB en el
momento correspondiente).
En la parte derecha de la Figura 1, se
representaron las evoluciones de los medios de inhibición (+
desviación tipo) de la fijación del anticuerpo monoclonal M7, por
los sueros individuales, para los diferentes grupos tratados.
Los datos en cifras se incluyeron en la Tabla
2.
El grupo de control que recibió los péptidos de
BLG digeridos por pepsina (pB) tuvieron una capacidad media de
inhibición que disminuyó de 70 a 52%, y 57% en 4 y 8 semanas. Esta
variación fue significativa (p < 0,01 - ensayo T doble), aunque
estable después de 4 semanas.
Para el grupo que recibió los complejos
DnaK-pB, esta capacidad se redujo ya
significativamente a la cuarta semana, pasando de 68 a 51%, como en
el grupo de control.
Pero el resultado bajó a 17% a la octava semana
(p < 0,001 - T doble), lo que fue claramente inferior al del
grupo de control para la muestra correspondiente (p < 0,01 -
ensayo T no doble).
La evolución fue paralela a la del grupo tratado
con los complejos de DnaJ-pB.
Para el grupo que recibió complejos de
GroEL-pB, la reducción del poder inhibidor fue, de
entrada, máxima, alcanzando 28% desde la cuarta semana, y permaneció
al mismo nivel de 30% a la octava semana.
En el grupo que recibió complejos
GrpE-pB, la reducción del poder inhibidor fue
también, de entrada, máxima, pasando de 72 a 22% desde la cuarta
semana, pero pareció aumentar luego alcanzando un porcentaje medio
de 41%.
La administración de péptidos procedentes de la
digestión enzimática de un antígeno principal de leche, en el caso
de la beta-lactoglobulina, en forma de complejos
unidos a proteínas de estrés, según la invención, y por vía oral,
implicó una modificación radical y muy rápida del perfil de los
epítopos reconocidos por los anticuerpos circulantes. Estos
anticuerpos estuvieron presentes naturalmente en todos los sujetos
expuestos al antígeno para su alimentación.
En un modelo de ratones, expuestos crónicamente a
una pequeña cantidad del antígeno por esta vía, la dosis de antígeno
administrada durante un breve lapso de tiempo fue muy pequeña, lejos
por debajo de la cantidad ingerida naturalmente (estimación 0,25
\mug por sujeto y por día de tratamiento en forma de complejos, y
150 \mug por sujeto y por día en la alimentación corriente).
La rapidez del cambio fue más notable cuando la
semi-vida de los anticuerpos séricos,
principalmente de los IgG fue de 3 semanas, lo que significó que a
la octava semana, debería aún subsistir la cuarta parte de los
anticuerpos presentes al final del tratamiento de solamente 2
semanas. Todas las proteínas de estrés utilizadas fueron eficaces.
En una segunda experiencia con complejos DnaK-pB.
una tentativa de determinar una dosis límite inferior no tuvo éxito,
a pesar del uso de dosis hasta 10 veces inferiores (0,1
\mug/biberón de 100 ml/3 días por semana).
Animales singénicos (ratones Balbc) recibieron
una preparación proteica disuelta en su agua de bebida. Esta
preparación contenía fragmentos de antígenos de histocompatibilidad
de ratones singénicos de otra familia, que rechazarían cualquier
injerto (ratones C3H).
Se esperó el efecto tolerógeno de manera
reforzada cuando estos fragmentos se asociaron a una proteína de
estrés de bacteria (aquí DnaK de E. Coli).
Como ejemplo de control, un grupo de ratones
recibió de la misma manera un complejo de DnaK con fragmentos
peptídicos, obtenidos de forma análoga, a partir de
beta-lactoglobulina (antígeno principal de la
leche).
Se debería esperar que la sensibilización oral
debiese atenuar de forma específica la reactividad linfocitaria
respecto de una cepa de linfocitos extraños del mismo tipo que los
utilizados para la preparación oral y no frente a una tercera cepa
no emparentada.
Se tomaron 3 grupos de 12 ratones en un criadero
de ratones singénicos de la familia Balbc en que se criaron en
jaulas de 6 animales, Cada grupo recibió durante 2 semanas una de
las preparacionaes siguientes en el biberón de agua de bebida, a
razón de 3 distribuciones por semana (un día sobre dos y no el fin
de semana) y una dosis de 1 \mug de complejo por 100 ml de
agua:
- -
- un complejo de Dnak-péptidos de beta-lactoglobulina (preparación de control);
- -
- una disolución de péptidos de membrana linfocitaria esplénica de ratón C3H digerida en pepsina (que contenía fragmentos de antígenos de histocompatibilidad);
- -
- un complejo de estos péptidos asociado a Dnak purificado de E. Coli (Gen de estrés).
Este ensayo se basó en un cultivo linfocitario
mixto unidireccional.
Las células que respondían se aislaron a partir
del bazo de los animales que se iban a ensayar. Las células
linfo-monocitarias se obtuvieron después de la
centrifugación en gradiente de densidad con una mezcla de
ficoll-isopaque (Farmacia). Se resuspendieron con
ayuda de 4 millones de células/ml en medio de cultivo RPMI 1640
tamponado en Hepes y con hidrógeno-carbonato,
suplementado con 2-mercapto-etanol,
glutamina, geomicina, y 10% de suero de vaca.
Las células estimulantes se obtuvieron de la
misma manera, de ratones de familias diferentes a nivel de su MHC:
la familia C3H fue una familia doméstica (DOM).
Se incubaron durante una hora en presencia de
mitomicina, a fin de bloquear su potencial de multiplicación. Se
resuspendieron luego en las mismas condiciones que las células que
respondían.
\newpage
Se mezcló un volumen igual de suspensión (0,1 ml)
de células que respondían y de células estimulantes, en 3
ejemplares, en pocillos de fondo redondo de placas multipocillos de
cultivo, de poliestireno, para incubarse después durante 5 días en
una incubadora de aire/CO_{2} (95/5%; vol/vol), humidificada, a
37,5ºC.
Cada pocillo de microcultivo recibió 2 \muc de
timidina tritiada con 2 C/mM (Amersham) 16 horas antes de la
detención del cultivo que se realizó con ayuda de un aparato MASH II
que filtró cada microcultivo sobre una membrana de fibra de vidrio
que retuvo los núcleos celulares.
La radiactividad nuclear de cada residuo, que
refleja la incorporación de novo de timidina en el ADN, se
midió por conteo mediante centelleo líquido (Packard Tricarb).
Los resultados se indicaron en Golpes por Minuto
y representaron el valor medio de 3 muestras del mismo cultivo a
escala individual.
Las tomas de muestras tuvieron lugar en 2
momentos diferentes:
- -
- durante la 3ª semana que siguió al comienzo de la administración oral de una de las preparaciones;
- -
- durante la 7ª semana.
Los animales se sacrificaron 3 veces por
periodo.
Cada experiencia de cultivo empleó 2 animales por
grupo tratado.
El cultivo linfocitario mixto se realizó
paralelamente:
- a)
- frente a células mitomicinadas de origen C3H,
- b)
- frente a células mitomicinadas de origen DOM.
Se aislaron linfocitos (20 millones) de una
familia de ratón apropiada, a partir del bazo. Se trató de una
mezcla de linfocito T y B en cantidades aproximadamente iguales y,
por tanto, portadores de antígenos de tipo I y II. Se trataron por
ultrasonidos (3 x 10 segundos) y luego se centrifugaron a 1.000 g
durante 10 minutos. El líquido sobrenadante se recogió y se
centrifugó de la misma manera. A continuación, se centrifugó el
líquido sobrenadante en dos muestras de 8.000 g. El último
sobrenadante estuvo enriquecido en membranas celulares y liberado de
residuos de núcleo celular y de aparato de Golgi. Se sometió luego a
una digestión por pepsina acoplada a bolas de agarosa, a pH 2 en
tampón de glicina, durante 1 hora 30 minutos y a 37ºC. Después de la
centrifugación suave para separar las bolas de agarosa, y
neutralización a pH 7 por tampón TRIS, se filtró la mezcla sobre
filtro (Millipore limite 10 kD). El rendimiento fue del orden de
500 \mug de péptido (determinación por espectrofotometría)
denominado LMp.
Se mezcló una disolución de 50 \mug de péptido
con una disolución de 50 \mug de Dnak (gen de estrés) para formar
un complejo Dnak-LMp.
El complejo Dnak con péptido de
beta-lactoglobulina (Bp) estuvo constituido de la
misma manera, utilizando péptidos procedentes de la digestión
pepsínica de beta-lactoglobulina purificada (véase
supra).
El grupo de ratones que había recibido el
complejo Dnak-LMp respondió al menos bien a la
estimulación de células C3H mitomicinadas (C3Hm).
Este fue diferente (p < 0,02;
T-ensayo) del grupo que recibió el péptido LMp sólo,
e igualmente el que recibió el complejo testigo
Dnak-Bp (p < 0,01; T-ensayo).
Sin embargo, es preciso notar que la
administración del péptido sólo (sin Dnak) tuvo igualmente un
efecto, ya que este grupo era significativamente menos apto para
responder que el grupo testigo (p <0,01;
T-ensayo).
Sin embargo, la especificidad de la inhibición de
respuesta estuvo garantizada por el hecho de que la reactividad
linfocitaria de los tres grupos era equivalente respecto a células
mitomicinadas de una tercera familia, no emparentada (DOMm).
\newpage
Las diferencias entre los 3 grupos quedaron bien
marcadas. El grupo tratado con Dnak-LMp fue el más
inhibido tanto respecto al que recibió el péptido membranario
solamente (p < 0,02; T-ensayo) como al grupo
testigo (p < 0,01; T-ensayo).
La administración del péptido sólo permitió
también una atenuación de respuesta frente al grupo testigo (p <
0,01; T-ensayo).
La especificidad de la respuesta fue también, una
vez verificada por el ensayo paralelo frente a las células
mitomicinadas de una familia no emparentada (DOMm) y en que los tres
grupos tratados diferentemente reaccionaron de la misma forma.
La administración de péptidos obtenidos por
digestión pepsínica de linfocitos esplénicos de familias de ratones
caracterizadas por una incompatibilidad en el sistema
H-2 tanto en los niveles K y D como en
A-E en cantidades extremadamente pequeñas y durante
dos semanas, tuvo por efecto atenuar fuertemente la respuesta
incondicional de linfocitos inmuno-competentes,
in vitro, que confirma habitualmente esta
incompatibilidad.
Esta atenuación se reforzó por la presentación de
este tipo de péptido en forma de complejos
péptidos-Dnak.
Esta atenuación fue específica y no alcanzó en
ningún caso la capacidad de respuesta respecto a una variedad
diferente, sin relación con la familia utilizada para la
tolerancia.
- -
- Balbc para los animales considerados tolerantes
- -
- C3H para los animales donantes de células para injertar (alogénicas) y de células estimulantes en cultivo linfocitario mixto (MLC).
Se criaron en jaulas de 6 animales. Cada grupo
estuvo constituido por 12 animales por tratamiento.
El tratamiento oral se efectuó según el protocolo
precedente.
Complejos administrados en el agua de bebida:
días 0, 2, 4, 7 y
9
Injerto alogénico: 20 x 10^{6} células
esplénicas de C3H en forma intra-peritoneal:
día
16
Sacrificio, colecta de bazos y puesta en cultivo
de las células esplénicas:
15 semanas después del
injerto
Ensayo funcional en cultivo mixto singénico
bidireccional.
Las células esplénicas de ratones tratados e
injertados se pusieron en cultivo con células de ratones singénicos
(Balbc) no tratados (naturales).
Normalmente, no ha de esperarse ninguna respuesta
proliferativa si el contenido de las células esplénicas de animales
tratados e injertados estuvo únicamente compuesto de células
singénicas.
Por el contrario, la presencia de células
alogénicas, señalando la toma de injerto in vivo, debería
implicar una proliferación de tipo MLC para las células denominadas
naturales, no tolerantes, tanto más importantes cuanto más elevado
sea el número de células extrañas.
Para evaluar el orden de magnitud de la toma de
injerto, se efectuó una tentativa de cuantificación relativa de la
respuesta por referencia a una curva dosis/respuesta obtenida
añadiendo cantidades conocidas y crecientes de células alogénicas
C3H a una cantidad idéntica de células naturales y de respuesta (200
x 10^{3} células/pocillo).
Numeración directa por
inmuno-fluorescencia en
cito-fluorometria de flujo utilizando un anticuerpo
monoclonal de ratón específico de MHC tipo I del ratón C3H :
H-2 kk (Serotec), acoplado a la fluoresceína o a la
ficoeritrina en una suspensión de células esplénicas.
Como se ve en la Figura 4, 15 semanas después del
injerto peritoneal, las células esplénicas del grupo tratado por
complejos DnaK-péptidos de membranas linfocitarias
de ratón C3H, fueron incapaces de responder a la estimulación por
células C3H mitomicenadas. Esto fue testimonio de la inducción de
una tolerancia alogénica.
El grupo tratado por el péptido sólo fue
igualmente tolerado en una menor medida.
El grupo tratado por DnaK-péptido
de beta-lactoglobulina no fue tolerante del
todo.
Por otra parte, los cultivos mixtos estimulados
por otra población proveniente de una familia
histo-incompatible diferente de C3H, fueron todos
semejantes. Esto es un testimonio de que ningún tratamiento alteró
ni diferenció la capacidad de respuesta en MLC, y que el efecto de
tratamiento fue bien específico de la familia de raton de la que
provenían los péptidos de membranas.
Como se representa en la Figura 5, se utilizó la
respuesta en MLC de células de animales ni tratados, ni injertados,
para revelar la existencia de células extrañas en una mezcla de
células esplénicas de animales injertados, que serían, por tanto
aquí de origen C3H.
Se vió que los bazos de ratones tratados
oralmente antes del injerto por LMp y DnaK-LMp
contenián elementos alogénicos, puesto que dieron lugar a una
respuesta proliferativa muy significativamente diferente de la
respuesta del grupo controlado tratado por un complejo
DnaK-péptidos irrelevantes
(beta-lactoglobulina). Esta última tuvo una
respuesta que no se diferenció del ruido de fondo.
Como ejemplo comparativo, una serie de cultivos
mixtos se llevaron paralelamente con cantidades conocidas y
crecientes de células C3H (Figura 6). Estos dieron lugar a una
respuesta proliferativa proporcional a la cantidad de células
extrañas.
El nivel medio de respuesta registrado con
células esplénicas de animales injertados y hechos tolerantes por
complejos DnaK-LMp correspondió a un contenido de
aproximadamente 30% de células C3H.
La presencia de células de tipo injertado en el
bazo se midió por inmuno-fluorescencia, con ayuda de
un anticuerpo específico de MHC I de C3H (H-2kk)
(Tabla 5). El grupo tratado por DnaK-LMp contenía
14,7% de valor medio, valor significativamente superior al de los
otros grupos.
Esta presencia de alo-antígenos
no fue observable más que con la condición de dejar reposar las
células esplénicas de animales injertados durante al menos una suit
a 37ºC en ausencia de suero. Esto sugirió que era indispensable
permitir la reexpresión de estos antígenos cuya presencia sería así
modulada in vivo, probablemente, por anticuerpos
anti-H-2kk. Esto añadió otro
mecanismo de tolerancia del injerto a la tolerancia puramente
dirigida a las células T que respondían.
| % de inhibición del enlace de M6 | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 1: Control (dBLG solamente) | ||||
| PREL | 1 | 45,0100 | 8,4146 | 8 |
| PREL | 2 | 60,6750 | 3,9304 | 8 |
| PREL | 3 | 59,6338 | 17,4714 | 8 |
| % de inhibición del enlace de M6 | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 2: complejos dBLG-DnaK | ||||
| PREL | 1 | 48,4350 | 7,0540 | 8 |
| PREL | 2 | 56,3675 | 5,6146 | 8 |
| PREL | 3 | 77,0975 | 3,8966 | 8 |
| Grupo 3: dBLG-DnaJ | ||||
| PREL | 1 | 23,7350 | 15,3990 | 8 |
| PREL | 2 | 65,7013 | 6,2958 | 8 |
| PREL | 3 | 65,3863 | 4,7270 | 8 |
| Grupo 4: dBLG-GroEL | ||||
| PREL | 1 | 24,9538 | 4,7972 | 8 |
| PREL | 2 | 56,0100 | 4,3929 | 8 |
| PREL | 3 | 80,0287 | 1,9401 | 8 |
| Grupo 5: dBLG-GrpE | ||||
| PREL | 1 | 37,3313 | 6,4248 | 8 |
| PREL | 2 | 56,6962 | 5,5641 | 8 |
| PREL | 3 | 87,1525 | 7,8731 | 8 |
| % de inhibición del enlace de M7 | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 1: Control (dBLG solamente) | ||||
| PREL | 1 | 70,0658 | 3,5541 | 8 |
| PREL | 2 | 52,8224 | 2,3458 | 8 |
| PREL | 3 | 57,0592 | 7,8996 | 8 |
| Grupo 2: complejos dBLG-DnaK | ||||
| PREL | 1 | 68,9145 | 2,6698 | 8 |
| PREL | 2 | 51,6908 | 3,0857 | 8 |
| PREL | 3 | 17,2697 | 8,0473 | 8 |
| % de inhibición del enlace de M7 | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 3: dBLG-DnaJ | ||||
| PREL | 1 | 78,4276 | 3,4832 | 8 |
| PREL | 2 | 50,8553 | 3,9778 | 8 |
| PREL | 3 | 26,9145 | 3,2069 | 8 |
| Grupo 4: dBLG-GroEL | ||||
| PREL | 1 | 73,9671 | 3,1679 | 8 |
| PREL | 2 | 28,5132 | 8,6072 | 8 |
| PREL | 3 | 30,2829 | 14,2174 | 8 |
| Grupo 5: dBLG-GrpE | ||||
| PREL | 1 | 72,8355 | 4,7722 | 8 |
| PREL | 2 | 22,2961 | 9,5040 | 8 |
| PREL | 3 | 41,3684 | 6,4331 | 8 |
| Ln de títulos (A.U.) | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 1: Control (dBLG solamente) | ||||
| PREL | 1 | 3,8526 | 0,4547 | 8 |
| PREL | 2 | 4,2162 | 0,3395 | 8 |
| PREL | 3 | 4,2059 | 0,2946 | 8 |
| Grupo 2: complejos dBLG-DnaK | ||||
| PREL | 1 | 3,9738 | 0,7957 | 8 |
| PREL | 2 | 4,3749 | 0,6353 | 8 |
| PREL | 3 | 3,2562 | 0,5057 | 8 |
| Grupo 3: dBLG-DnaJ | ||||
| PREL | 1 | 3,7073 | 0,4435 | 7 |
| PREL | 2 | 4,1348 | 0,5475 | 8 |
| PREL | 3 | 4,3917 | 0,5047 | 8 |
| Ln de títulos (A.U.) | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 4: dBLG-GroEL | ||||
| PREL | 1 | 4,3714 | 0,4215 | 8 |
| PREL | 2 | 3,6419 | 0,4704 | 8 |
| PREL | 3 | 3,9964 | 0,2724 | 8 |
| Grupo 5: dBLG-GrpE | ||||
| PREL | 1 | 4,1526 | 0,6401 | 8 |
| PREL | 2 | 4,1739 | 0,4464 | 8 |
| PREL | 3 | 3,6126 | 0,4873 | 8 |
| % de inhibición del enlace de M6 | ||||
| -% de inhibición del enlace de M7 | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 1: Control (dBLG solamente) | ||||
| PREL | 1 | -25,0558 | 9,0035 | 8 |
| PREL | 2 | 7,8526 | 5,6470 | 8 |
| PREL | 3 | 2,5745 | 19,8676 | 8 |
| Grupo 2: complejos dBLG-DnaK | ||||
| PREL | 1 | -20,4795 | 8,5253 | 8 |
| PREL | 2 | 4,6767 | 6,1131 | 8 |
| PREL | 3 | 59,8278 | 9,2686 | 8 |
| Grupo 3: dBLG-DnaJ | ||||
| PREL | 1 | -54,6926 | 13,8705 | 8 |
| PREL | 2 | 14,8460 | 6,4665 | 8 |
| PREL | 3 | 38,4718 | 5,6903 | 8 |
| Grupo 4: dBLG-GroEL | ||||
| PREL | 1 | -49,0134 | 3,9824 | 8 |
| PREL | 2 | 27,4968 | 10,6337 | 8 |
| PREL | 3 | 49,7459 | 14,6732 | 8 |
| % de inhibición del enlace de M6 | ||||
| -% de inhibición del enlace de M7 | ||||
| Media | Desviación estándar | Número de casos | ||
| Grupo 5: dBLG-GrpE | ||||
| PREL | 1 | -35,5043 | 4,8959 | 8 |
| PREL | 2 | 34,4002 | 13,4093 | 8 |
| PREL | 3 | 45,7841 | 8,7931 | 8 |
| Tratamiento oral | |||||
| DnaK-Bp | Linfocito Membrana | DnaK-LMp | |||
| péptido (LMp) sólo | |||||
| 1,0% | 0,9% | 14,2% | |||
| 1,5 | 2,8 | 25,0 | |||
| 0,5 | 3,6 | 9,2 | |||
| 0,5 | 3,7 | 10,4 | |||
| Media ET | Media ET | Media ET | |||
| 0,9% | 0,5 | 2,7% | 1,3 | 14,7% | 7,2 |
| T-ensayos acoplados: | ||
| DnaK-LMp/DnaK-Bp: | p = 0,026 | |
| DnaK-LMp/LMp: | p = 0,052 |
1. Patterson, R. et al., Allergy
Proc., Vol.15 (5),PP. 239-264
(1994).
2. Ferrick, D.A.,
Mak-TW Tolerance and
Self-Reactivity in V gamma 1.1 C gamma 4
transgenic mice.
3. Staines, U. et al., J.
Rheumatol., Vol. 54 (3), pp. 145-154
(1995).
4. Polla, B.S. et al., Clin. Exp.
Allergy, Vol. 23(7), pp. 548-556
(1993).
5. Healy, A.M. et al., Ann. N.Y. Acad.
Sci., Vol. 663, pp. 319-330
(1992).
6. Revillard, J.P. et al., Dev. Viol.
Stand., Vol. 77, pp. 31-37
(1992).
7. Bousquet, J. et al., Allergy,
Vol.49, pp. 31-36 (1994).
Claims (15)
1. Composición farmacéutica y/o alimentaria que
contiene con un vehículo farmacéutico y/o alimentario adecuado, una
proteína de estrés y al menos uno de los epítopos conformacionales
o secuenciales de una estructura antigénica que induce un rechazo
de injerto o una reacción alérgica o una reacción
auto-inmune, siendo dicha proteína bacteriana de
estrés una proteína de estrés de una bacteria saprofita.
2. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
la reivindicación 1, caracterizada porque el vehículo
farmacéutico y/o alimentario es adecuado para una administración
por vía mucosal o por vía cutánea.
3. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque la proteína de
estrés y el epítopo forman un complejo.
4. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
una cualquiera de las reivindicaciones precedentes,
caracterizada porque el epítopo se obtiene por una
hidrólisis ventajosamente enzimática, con preferencia con pepsina,
de dicha estructura antigénica.
5. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada
porque la proteína de estrés es una proteína de estrés de E.
Coli.
6. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada
porque la proteína de estrés se elige entre el grupo constituido
por la proteína de estrés GroEL, GrpE, DnaK o DNAJ.
7. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
una cualquiera de las reivindicaciones precedentes,
caracterizada porque la estructura antigénica es un alergeno
elegido entre el grupo constituido por los antígenos principales
alérgicos presentes en la leche, los antígenos principales
alérgicos presentes en los vegetales, en los pelos de animales,
en los venenos de animales, los antígenos principales de la
reacción alérgica a los ácaros, a la polilla presente en el
polvo doméstico (antígeno P1 del Dermatophagoides
pteronyssinus), el antígeno principal del Aspergillus
fumigatus y la enterotoxima B estafilocócica (SEB).
8. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
una cualquiera de las reivindicaciones precedentes,
caracterizada porque la estructura antigénica es un alergeno
elegido entre el grupo constituido por la
beta-lactoglobulina bovina (BLG) procedente de la
leche de vaca y los antígenos principales alérgicos presentes en
los pólenes y en el veneno de avispa.
9. Composición farmacéutica y/o alimentaria según
una cualquiera de las reivindicaciones precedentes,
caracterizada porque la estructura antigénica es el
locus principal de histocompatibilidad de tipo I o II.
10. Composición farmacéutica y/o alimentaria
según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes,
caracterizada porque contiene un
inmuno-supresor, con preferencia elegido entre
el grupo constituido por azatio-prinana,
esteroides, globulinas anti-linfocitarias,
ciclosporina A, rapamicina, FK 506 (tacrolimus), o
linfoquinas, sus análogos, sus agonistas o una mezcla de
estos.
11. Utilización de la composición farmacéutica
y/o alimentaria según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
10, para la preparación de un medicamento destinado a modificar la
respuesta inmunitaria de un paciente frente a una estructura
antigénica específica de una patología ligada a un rechazo de
injerto, una reacción alérgica o una reacción
auto-inmune.
12. Utilización de la composición farmacéutica
y/o alimentaria según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
10 para la preparación de un medicamento destinado a la
desensibilización de alergias atópicas o no atópicas.
13. Utilización de la composición farmacética y/o
alimentaria según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10
para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a
la prevención de enfermedades auto-inmunes.
14. Utilización según la reivindicación 13,
caracterizada porque las enfermedades
auto-inmunes son patologías elegidas entre el grupo
constituido por las infecciones ligadas al SLE (Systemic Lupus
Erythematosus disease), el síndrome
Gougerot-Sjögren (o patología
Sjögren), la poliartritis reumatoide, así como las
patologías de tipo sarcoidosis y osteopenia, espondiloartritis,
escleroderma, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica,
hipertiroidismo, enfermedad de Addison, anemia hemolítica
auto-inmune, enfermedad de Crohn, síndrome
de Goddpasture, enfermedad de Graves, tiroiditis de
Hashimoto, purpura hemorrágica idiopática, diabetes
dependiente de insulina, miastenia, penfigus vulgaris,
anemia perniciosa, glomerulonefritis
post-estreptocócica, psoriasis y esterilidad
espontánea.
\newpage
15. Utilización de la composición farmacéutica
y/o alimentaria según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
10 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento
o a la prevención de rechazos de injerto.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE9700199A BE1011033A6 (fr) | 1997-03-05 | 1997-03-05 | Composition pharmaceutique et/ou alimentaire pour le traitement de pathologies liees a un rejet de greffe, une reaction allergique ou auto-immune ou du cancer. |
| BE9700199 | 1997-03-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2201453T3 true ES2201453T3 (es) | 2004-03-16 |
Family
ID=3890389
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98909232T Expired - Lifetime ES2201453T3 (es) | 1997-03-05 | 1998-03-05 | Composicion farmaceutica o alimentaria para el tratamiento de patologias ligadas a un rechazo de injerto, una reaccion alergica o auto-inmune. |
| ES03017072T Expired - Lifetime ES2354941T3 (es) | 1997-03-05 | 1998-03-05 | Composición farmacéutica o alimentaria para el tratamiento de patologías asociadas a un rechazo de injerto. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03017072T Expired - Lifetime ES2354941T3 (es) | 1997-03-05 | 1998-03-05 | Composición farmacéutica o alimentaria para el tratamiento de patologías asociadas a un rechazo de injerto. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6312711B1 (es) |
| EP (2) | EP0975362B1 (es) |
| JP (1) | JP4554728B2 (es) |
| AT (2) | ATE246003T1 (es) |
| BE (1) | BE1011033A6 (es) |
| CA (1) | CA2283143C (es) |
| DE (2) | DE69816796T2 (es) |
| DK (2) | DK0975362T3 (es) |
| ES (2) | ES2201453T3 (es) |
| WO (1) | WO1998039029A2 (es) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6709672B2 (en) * | 1997-03-05 | 2004-03-23 | Biotech Tools S.A. | Pharmaceutical or food composition for treating pathologies associated with graft rejection or an allergic or autoimmune reaction |
| AU743647B2 (en) | 1998-01-31 | 2002-01-31 | Mt. Sinai School Of Medicine Of New York University | Methods and reagents for decreasing allergic reactions |
| US20020012667A1 (en) * | 2000-05-16 | 2002-01-31 | Mcmichael John | Method for preventing allograft rejection |
| CA2410903A1 (en) * | 2000-06-02 | 2001-12-06 | University Of Connecticut Health Center | Complexes of alpha (2) macroglobulin and antigenic molecules for immunotherapy |
| US20020168376A1 (en) * | 2001-02-28 | 2002-11-14 | Michael Babich | Compositions of multimeric profilin for diagnosis and treatment of allergies |
| EP1536829A4 (en) * | 2001-08-20 | 2006-05-31 | Univ Connecticut Health Ct | METHOD FOR PRODUCING COMPOSITIONS WITH HEAT SHOCK PROTEINS OR ALPHA-2-MACROGLOBULIN FOR THE TREATMENT OF CANCER AND INFECTION DISEASES |
| EP1603391A4 (en) * | 2003-02-20 | 2009-06-24 | Univ Connecticut Health Ct | METHOD OF USE OF COMPOSITIONS COMPRISING HIGH SHOCK PROTEINS OR ALPHA-2-MACROGLOBULIN IN THE TREATMENT OF CANCER AND INFECTION DISEASES |
| ES2396231T3 (es) * | 2003-05-21 | 2013-02-20 | Biotech Tools S.A. | Complejo peptídico |
| EP2316844A3 (en) | 2003-05-21 | 2011-07-20 | Biotech Tools S.A. | Peptide complex |
| EP1479689A1 (en) * | 2003-05-21 | 2004-11-24 | Biotech Tools S.A. | Peptide complex |
| DK1641488T3 (da) * | 2003-06-23 | 2011-07-18 | Biotech Tools Sa | Epitopsammensætning til enterisk administrering fremstillet ved hydrolyse af antigenstrukturer med chymotrypsin |
| WO2004112833A1 (en) * | 2003-06-23 | 2004-12-29 | Biotech Tools Sa | Epitope composition for sublingual, buccal or enteric administration prepared by hydrolysis of antigenic structures with chymotrypsin |
| EP2391229B1 (en) * | 2009-01-29 | 2015-07-15 | Alfa Biogene International B.V. | Functional food product comprising heat shock protein or a hydrolysate thereof from alfalfa |
| US20140255449A1 (en) | 2011-07-21 | 2014-09-11 | Biotech Tools S.A. | Dosage of dnak |
| AU2017341096A1 (en) | 2016-10-05 | 2019-04-04 | Asit Biotech S.A. | Prevention of allergy |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0700445T3 (da) * | 1993-06-04 | 2002-05-13 | Whitehead Biomedical Inst | Stressproteiner og anvendelser deraf |
| US5961979A (en) * | 1994-03-16 | 1999-10-05 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Stress protein-peptide complexes as prophylactic and therapeutic vaccines against intracellular pathogens |
| BE1008817A6 (fr) | 1994-10-28 | 1996-08-06 | Univ Bruxelles | Procede d'obtention d'adn bicatenaire membranaire humain, produit obtenu par ce procede et trousse de diagnostic le contenant. |
| JP3656277B2 (ja) * | 1995-05-17 | 2005-06-08 | 味の素株式会社 | 組換えｄｎａ法によるトランスグルタミナーゼの効率的製造法 |
| BE1009359A7 (fr) | 1995-05-19 | 1997-02-04 | Univ Bruxelles | Procede de detection et/ou de quantification de ligands specifiques d'une pathologie liee a une reponse allergique. |
| EP0888053A4 (en) * | 1995-08-18 | 2002-07-31 | Sloan Kettering Inst Cancer | METHOD FOR THE TREATMENT OF CANCER AND INFECTIOUS DISEASES AND COMPOSITIONS USEFUL FOR THE TREATMENT |
| EP0941315B1 (en) * | 1996-11-26 | 2006-03-01 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Fusion proteins containing stress proteins for inducing immune responses |
| US6017540A (en) * | 1997-02-07 | 2000-01-25 | Fordham University | Prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with heat shock/stress protein-peptide complexes |
-
1997
- 1997-03-05 BE BE9700199A patent/BE1011033A6/fr not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-03-05 AT AT98909232T patent/ATE246003T1/de active
- 1998-03-05 EP EP98909232A patent/EP0975362B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 EP EP03017072A patent/EP1354599B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 DE DE69816796T patent/DE69816796T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 CA CA2283143A patent/CA2283143C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 DK DK98909232T patent/DK0975362T3/da active
- 1998-03-05 US US09/380,548 patent/US6312711B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 AT AT03017072T patent/ATE485054T1/de active
- 1998-03-05 WO PCT/BE1998/000030 patent/WO1998039029A2/fr active IP Right Grant
- 1998-03-05 ES ES98909232T patent/ES2201453T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 DK DK03017072.4T patent/DK1354599T3/da active
- 1998-03-05 DE DE69841966T patent/DE69841966D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 ES ES03017072T patent/ES2354941T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-03-05 JP JP53800398A patent/JP4554728B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1354599A2 (fr) | 2003-10-22 |
| DK1354599T3 (da) | 2011-02-07 |
| EP1354599B1 (fr) | 2010-10-20 |
| JP4554728B2 (ja) | 2010-09-29 |
| DE69816796T2 (de) | 2004-05-27 |
| EP1354599A3 (fr) | 2003-12-10 |
| US6312711B1 (en) | 2001-11-06 |
| DE69841966D1 (de) | 2010-12-02 |
| BE1011033A6 (fr) | 1999-04-06 |
| ATE246003T1 (de) | 2003-08-15 |
| WO1998039029A3 (fr) | 1999-01-14 |
| DE69816796D1 (de) | 2003-09-04 |
| WO1998039029A2 (fr) | 1998-09-11 |
| EP0975362B1 (fr) | 2003-07-30 |
| JP2001514623A (ja) | 2001-09-11 |
| ES2354941T3 (es) | 2011-03-21 |
| CA2283143C (fr) | 2014-05-27 |
| EP0975362A2 (fr) | 2000-02-02 |
| DK0975362T3 (da) | 2003-11-10 |
| ATE485054T1 (de) | 2010-11-15 |
| CA2283143A1 (fr) | 1998-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2201453T3 (es) | Composicion farmaceutica o alimentaria para el tratamiento de patologias ligadas a un rechazo de injerto, una reaccion alergica o auto-inmune. | |
| Mestecky et al. | Mucosal immunology | |
| JP4447657B2 (ja) | 免疫寛容誘導剤 | |
| Bowersock et al. | Oral vaccination with alginate microsphere systems | |
| Lockey et al. | Allergens and allergen immunotherapy | |
| Hanson et al. | The immunological role of breast feeding. | |
| Polewicz et al. | Novel vaccine formulations against pertussis offer earlier onset of immunity and provide protection in the presence of maternal antibodies | |
| Tseng et al. | Humoral immunity to aerosolized staphylococcal enterotoxin B (SEB), a superantigen, in monkeys vaccinated with SEB toxoid-containing microspheres | |
| Pérez et al. | New vaccines require potent adjuvants like AFPL1 and AFCo1 | |
| KR20190003798A (ko) | 광범위한, 미확인 또는 혼합된 임상적 적용에서 치료용 조성물들 및 방법들 | |
| Quinello et al. | Passive acquisition of protective antibodies reactive with bordetella pertussis in newborns via placental transfer and breast‐feeding | |
| Wallace et al. | A role for intestinal T lymphocytes in bronchus mucosal immunity. | |
| Winkler et al. | The role of Foxp3+ T cells in long‐term efficacy of prophylactic and therapeutic mucosal tolerance induction in mice | |
| ES2347566T3 (es) | Inmunomodulador que comprende celulas enteras de bacterias tsukamurella. | |
| Hufnagl et al. | Intranasal tolerance induction with polypeptides derived from 3 noncross-reactive major aeroallergens prevents allergic polysensitization in mice | |
| Friedman | Induction of anergy in Th1 lymphocytes by oral tolerance. Importance of antigen dosage and frequency of feeding | |
| Guzman‐Bautista et al. | Effect of age and maternal antibodies on the systemic and mucosal immune response after neonatal immunization in a porcine model | |
| Huang et al. | Effect of neonatal sublingual vaccination with native or denatured ovalbumin and adjuvant CpG or cholera toxin on systemic and mucosal immunity in mice | |
| Lönnqvist et al. | Neonatal exposure to staphylococcal superantigen improves induction of oral tolerance in a mouse model of airway allergy | |
| Husby | Sensitization and tolerance | |
| Huang et al. | Neonatal sublingual vaccination with Salmonella proteins and adjuvant cholera toxin or CpG oligodeoxynucleotides induces mucosal and systemic immunity in mice | |
| Blackwell et al. | Infection, inflammation and sleep: more pieces to the puzzle of sudden infant death syndrome (SIPS) | |
| US6709672B2 (en) | Pharmaceutical or food composition for treating pathologies associated with graft rejection or an allergic or autoimmune reaction | |
| Wood et al. | Intranasal administration of a Pseudomonas lipopolysaccharide vaccine in cystic fibrosis patients | |
| JPH09506867A (ja) | アレルギー性疾患の予防法 |