BE1008817A6 - Procede d'obtention d'adn bicatenaire membranaire humain, produit obtenu par ce procede et trousse de diagnostic le contenant. - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne un procédé d'obtention d'ADN bicaténaire membranaire humain présent à la surface de cellules sanguines humaines, dans lequel on isole de cellules cancéreuses sanguines humaines les acides nucléiques présents à leur surface, dans lequel on traite les acides nucléiques par une RNase et/ou une pronase, et dans lequel on recueille l'ADN bicaténaire membranaire humain. La présente invention concerne également l'ADN bicaténaire membranaire humain dépourvu de contaminants protéiques et d'ARN susceptible d'être obtenu par ce procédé, ainsi que la trousse de diagnostic le comprenant.
Description
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EMI1.1
PROCEDE D'OBTENTION D'ADN BICATENAIRE MEMBRANAIRE HUMAIN,
PRODUIT OBTENU PAR CE PROCEDE ET TROUSSE DE DIAGNOSTIC LE
CONTENANT.
Obiet de l'invention.
La présente invention concerne un nouveau procédé d'obtention d'ADN bicaténaire membranaire humain, l'ADN bicaténaire membranaire humain dépourvu de contaminants protéiques et d'ARN, susceptible d'être obtenu par ce procédé, la trousse de diagnostic le contenant et son utilisation pour la détection du lupus erythemateux.
Arrière-plan technologique et état de la technique à la base de l'invention.
De nombreuses pathologies comportant une réponse auto-immunitaire ont une étiologie incertaine ou inconnue et peuvent avoir une origine multifactorielle.
Apparemment, un dérèglement ou une stimulation du système immunitaire des patients constitue un élément important de la progression de ces maladies.
Parmi les maladies auto-immunes, le lupus erythemateux est caractérisé par certains signes cliniques connus qui permettent de le diagnostiquer (Arthritis and Rheumatism, Vol. 25, no 11 (1982), Official Journal of the American Rheumatism Association Section of the Arthritis
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Foundation).
Cependant, de manière à pouvoir identifier cette maladie de manière certaine, on a cherché à mettre au point des dispositifs de détection spécifiques et fiables.
Les techniques actuellement utilisées se basent sur la détection d'anticorps anti-nucléaires (ANA) dirigés contre les composants autologues présents dans le noyau cellulaire. La présence de ces anticorps anti-nucléaires est associée à des expressions cliniques de certaines maladies auto-immunes.
La détection de ces anticorps est généralement effectuée de manière préalable à d'autres tests de confirmation de l'existence d'une maladie auto-immune.
Les auto-anticorps anti-nucléaires (ANA) peuvent être divisés en deux sous-groupes, les auto-anticorps antiADN et les auto-anticorps anti-ENA (antigènes nucléaires extractibles).
Une meilleure caractérisation des ces autoanticorps anti-nucléaires (ANA) permettrait de donner un diagnostic plus détaillé sur le type de maladie auto-immune.
Cependant, pour le lupus erythemateux, il n'a pas encore été possible au stade actuel de fournir une structure antigénique suffisamment pure et spécifique de l'humain pour fournir un diagnostic spécifique du lupus erythemateux humain.
But de l'invention.
La présente invention vise à fournir un procédé d'obtention de l'ADN bicaténaire membranaire humain, spécifique du lupus erythemateux, pouvant être utilisé dans une trousse de diagnostic pour la détection du lupus erythemateux.
La présente invention vise également à obtenir un procédé d'obtention de cet ADN bicaténaire membranaire humain qui puisse être obtenu en grande quantité et de manière reproductible.
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Eléments caractéristiques de la présente invention.
La présente invention concerne un procédé d'obtention d'ADN bicaténaire membranaire humain présent à la surface de cellules sanguines humaines, caractérisé en ce que l'on isole de cellules cancéreuses sanguines humaines, les acides nucléiques présents à leur surface, en ce que l'on traite ces acides nucléiques par une RNase et/ou une pronase, et en ce que l'on recueille l'ADN bicaténaire membranaire obtenu.
Selon le procédé de l'invention, en utilisant des cellules cancéreuses sanguines humaines, il est possible d'obtenir en grande quantité et de manière reproductible, un ADN bicaténaire membranaire spécifique de l'humain.
Selon le procédé de l'invention, on obtient un ADN bicaténaire membranaire humain dépourvu de contaminants protéiques et d'ARN.
La présente invention concerne également les anticorps, de préférence les immunoglobulines G et M dirigées contre l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la présente invention.
L'invention concerne également les anticorps dirigés contre lesdits anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain.
Un autre aspect de la présente invention concerne la trousse de diagnostic comprenant l'ADN bicaténaire membranaire humain, les anticorps dirigés contre ledit ADN bicaténaire membranaire humain et/ou les anticorps dirigés contre les anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain selon l'invention.
De préférence, la trousse de diagnostic comprend également les réactifs destinés à la détection et/ou au dosage de séquences nucléotidiques ou d'anticorps, par un procédé choisi parmi le groupe constitué par l'hybridation in situ, l'hybridation ou la reconnaissance par des anticorps spécifiques marqués (ELISA), sur filtre, sur support solide, en solution, en"sandwich"sur gel, l'hybridation en Dot
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blot, Northern blot, Southern blot, par un marquage isotopique ou non-isotopique tel que l'immunofluorescence ou la biotynilation, par technique sondes froides, par amplification génétique, notamment par PCR ou LCR, par double immuno-diffusion, par contre-immunoélectrophorèse, par haemagglutination et/ou un mélange d'entre eux.
Un dernier aspect de la présente invention concerne l'utilisation de l'ADN bicaténaire membranaire humain, des anticorps dirigés contre cet ADN bicaténaire membranaire humain et/ou les anticorps dirigés contre les anticorps antiADN bicaténaire membranaire humain selon l'invention, pour la détection du lupus erythemateux.
Brève description des ficrures.
Les figures 1 et 2 représentent des gels d'électrophorèse de l'ADN bicaténaire membranaire humain, éventuellement préincubé avec des immunoglobulines (IgG) spécifiques du lupus erythemateux, ayant subi divers traitements.
La figure 3 représente les résultats d'un ELISA mesurant les immunoglobulines (IgG) anti-ADN de membranes purifiées chez les patients lupiques et chez les contrôles.
Les figures 4,5 et 6 représentent un résultat d'immunofluorescence illustrant la fixation des immunoglobulines de patients lupiques sur les membranes plasmatiques des cellules lymphocytaires cancéreuses humaines.
Description d'une forme d'exécution préférée de l'invention. 1. Procédé d'obtention de l'ADN bicaténaire membranaire humain.
La première description de l'ADN bicaténaire membranaire humain présent à la surface des cellules humaines
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diploïdes lymphocytaires, et des immunoglobulines (IgG) dirigées contre cet ADN, a été donnée par Lerner et al.
(Proceeding of National Academy of Sciences, USA, Vol. 68, n 6, pp. 1212-1216 (1971)).
Les lignées cellulaires de lymphocytes B cancéreux" (Wil 2 NS @) obtenues chez ICN Flow Laboratories (ECACC n 90112121) sont maintenues en RPMI 1640 additionné de 10% de sérum de veau foetal (inactivé à la chaleur et testé pour l'absence de mycoplasmes), de L Glutamine et de
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40 ug/ml de Gentamycine, dans une étuve humide à 37 C et à 5% de Cules cellules sont prélevées dans la phase logarithmique de croissance, correspondant à une densité cellulaire de 1-1. 2 106 cellules/ml et montrant une exclusion au Bleu de Trypan de plus de 95%.
Des culots cellulaires obtenus à la suite d'une centrifugation des cultures (500 xg, 10 minutes) sont conservés à-20 C jusqu'à utilisation ultérieure.
1x109 cellules Wil 2 sont rassemblées dans deux tubes à partir de ces culots resuspendus en tampon PBS (tampon phosphate salin 10 mM, pH 7.2) et lavées avec 50 ml du même tampon (500 xg 10 minutes). Deux autres lavages sont
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alors effectués au moyen de 50 ml par tube de tampon RBS (1 ml HCl 1M, 0. 2 ml NaCl 5M, 0. 2 ml MgCl 1M amenés à un litre avec de l'eau distillée). Chaque culot obtenu est resuspendu dans 10 ml de RBS et 30 pi de NP40 sont ajoutés à chaque tube. Après une incubation de 10 minutes à température ordinaire, les tubes sont centrifugés à 2000 xg pendant 4 minutes. Les surnageants sont soumis à une nouvelle centrifugation dans les mêmes conditions et après transfert dans de nouveaux tubes (les éléments suivants étant ajoutés à chaque surnageant : 0.32 ml EDTA 0. 5M, 3.2 ml de NaCl 5M, 1ml de SDS 10%).
Le volume de chaque tube est ajusté à 16. 7 ml.
Après une incubation d'une nuit à 4'C, les surnageants d'une centrifugation (20000 xg, 30 minutes, 4 OC) sont extraits deux fois au phénol et extraits au chloroforme
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: alcool isoamylique (24 : 1). Une centrifugation de 3 minutes à 2000 xg est appliquée entre chaque étape. Deux volumes d'éthanol absolu sont ajoutés par volume de la phase aqueuse obtenue. Après incubation d'une nuit à 4 C, et une centrifugation de 30 minutes à 20000 xg le précipité est remis en suspension dans 0.2 ml de tampon TE (Tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8).
Une électrophorèse en 1% d'agarose du produit obtenu montre une bande d'ADN de + 17000 paires de bases et deux bandes d'ARN plus légères (correspondant à + 2000 et 1000 paires de bases).
En utilisant des lignés cellulaires de lymphocytes B cancéreux, il est donc possible d'obtenir de manière reproductible et fiable une structure antigénique spécifique de l'humain.
Cependant, étant donné que cette structure peut être constituée d'ADN associé à de l'ARN et des protéines, on procède à une digestion d'une heure à 37 OC à la RNaseI 0 fournie par Promega.
A 100 pl de la préparation sont ajoutés 50 U/5 ni de RNase et 25 pl de tampon 10 mM Tris HCL, 5 mM EDTA, 200 mM acétate de sodium, pH 7.5. La réaction est arrêtée par l'ajout de 10 pl de NaCl 5M.
Une nouvelle extraction au phénol est alors réalisée pour éliminer l'enzyme et la préparation est passée sur une colonne de 1 ml de Séphadex G50 ("spun column") pour éliminer les oligonucléotides issus de la digestion de l'ARN.
Une autre digestion à la pronase est effectuée pour s'assurer de l'absence de traces de protéines associées à l'ADN de membrane.
A 100 pi du produit digéré par la RNase, sont ajoutés 5 pg/10 pl de pronase pendant 1 heure à 37 C.
Deux extractions au phénol suivies d'une extraction au chloroforme alcool isoamylique (24 : 4) sont ensuite réalisées et la phase aqueuse est passée sur Séphadex G50.
Une électrophorèse est réalisée en agarose 1% pour s'assurer
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de la taille de l'ADN de membrane ainsi obtenu.
Par comparaison à la taille des fragments de lambda digérés par HindIII, la taille de l'ADN de membrane est estimée à + 17000 paires de bases.
L'ADN de membrane est alors considéré comme étant pur, c'est-à-dire avantageusement dépourvu de contaminants tels que l'ARN ou des protéines pouvant interférer dans le phénomène de reconnaissance avec les anticorps dirigés contre l'ADN.
Les figures 1 et 2 représentent des photos de gels d'électrophorèse des préparations obtenues (éventuellement préincubées avec des immunoglobulines spécifiques du lupus à différentes dilution) et traitées par différentes enzymes, en particulier de la phospholipase, de la pronase, de la RNase et de la DNase. Les produits obtenus sont comparés à des marqueurs.
La figure 2 montre que la préparation brute comporte peu de protéines éliminées par la pronase (colonne 4) mais qu'il est possible d'obtenir un produit pur dépourvu d'ARN (colonne 5).
La colonne 6 indique clairement que le produit actif obtenu est constitué d'ADN.
2. Mesure des anticorps IgG reconnaissant spécifiquement un épitoges présent sur l'ADN de membrane par ELISA
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Les cupules d'une microplaque"IMMUNOPLATE MAXISORB OE)" (NUNC) sont recouvertes de 100 pi de polylysine (10 pg/ml) pendant 2 heures à 37 C.
Puis, 100 pi d'ADN de membrane purifié, digéré à la RNase et à la pronase (15 mg/ml) sont incubés dans les puits pendant 3 heures à 37 C.
Une saturation des cupules est réalisée grâce à l'incubation d'une solution de 10% de sérum de cheval fourni par Pharmacia en tampon PBS (150 pl/cupule, 2 heures, 37 C).
Le sérum de patients lupiques ou de contrôle sains (donneurs de sang) est ensuite incubé dans les cupules en dilutions sériées (100 pi des dilutions de 1/20 à 1/1280 en
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tampon PBS) pendant une nuit à température ordinaire.
100 ni d'immunoglobulines (IgG) de lapin dirigées contre les immunoglobulines (IgG) humaines et conjuguées à la peroxydase (DAKO) diluées 1/250 en tampon PBS sont ajoutés dans chaque cupule pendant 2 heures à 37 C.
La dernière étape est une réaction colorimétrique
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constituée par la solution"substrat" (30 ul PLO (Perhydrol OE), Merck) et 17. 5 mg d'orthophénylène diamine dans 20 ml de tampon PBS).
Un lavage des cupules est réalisé entre chaque étape par du tampon PBS.
3. Preuves de la spécificité anti-ADN de membrane des immunoglobulines (loG) de patients lupiaues permettant de discriminer radicalement les populations lupiaues des copulations contrôles.
3. 1. Résultats de J'ELISA # mesurant les immunoglobulines (IgG) anti-ADN de membrane purifiées chez les patients luoiaues et chez les contrôles.
Les sera de patients lupiques testés par cette méthode montrent une densité optique systématiquement plus élevée que la valeur donnée par la fixation non spécifique.
De plus, ces valeurs de densité optique décroissent en fonction de la dilution du sérum. D'autre part, les sera des contrôles donnent une densité optique correspondant à celle de la fixation non spécifique (figure 3).
3.2. Effet de la préincubation des immunoGlobulines (IGG- de oatients luoiaues ou de contrôle avec LADY de membrane purifié sur sa migration en Gel d'acrarose.
Comme le montre la photo de la figure 1, la préincubation de l'ADN de membrane avec les différentes dilutions d'immunoglobulines (IgG) purifiées à partir de sérum de patient lupique, montre un retard de migration proportionnel à la quantité d'IgG ajoutées.
La digestion de ce mélange par la pronase abolit ou diminue fortement ce retard. Par contre, la même expérience réalisée avec des immunoglobulines (IgG) purifiées
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à partir d'un sérum de donneur de sang ne montre aucun effet sur la migration électrophorétique de l'ADN de membrane.
3. 3 Effet de la Drédicrestion des cellules par la RNase ou la DNase sur la fixation des IgG de patients lupiques sur les membranes plasmatiques des cellules wil 2.
Le tableau I reprennent le pourcentage de cellules fluorescentes donnant chacune des images ("0" = absence de fluorescence ; "1"= fluorescence membranaire en points ;"2"= fluorescence membranaire continue). Les valeurs reprises sont la moyenne arithmétique des résultats de 6 expériences.
Le traitement des cellules par de la DNase provoque pour les sera des patients 1,2, 6 une diminution du pourcentage de cellules donnant une image"2", alors que pour les sera des patients 3,4, 5, on observe soit aucun effet de l'enzyme, soit même une augmentation du pourcentage de cellules"2".
Ceci pourrait être dû au fait que l'image de fluorescence regroupe plusieurs spécificités reconnues sur la membrane des cellules Wil 2, spécificités incluant l'ADN de membrane.
Le traitement à la RNase, quant à lui, provoque une augmentation du pourcentage de cellules donnant l'image"2", suggérant que l'ARN peut-être associé à l'ADN de membrane pourrait masquer en partie les sites spécifiques de ces anticorps.
3.4. Fluorescence obtenue sur les membranes des cellules Wil 2 après fixation de sérum. de la fraction IgG ou de la fraction IgG spécifique de l'ADN de membrane
Le tableau II prouve que la fraction du sérum responsable de l'image fluorescente est due aux immunoglobulines (IgG). De plus, les IgG spécifiques de l'ADN de membrane purifiées par immunoaffinité permettent quelquefois d'obtenir une image fluorescente. Il faut souligner à ce stade que les IgG spécifiques de l'ADN de membrane sont utilisées à des concentrations plus faibles que les IgG totales (voir aussi figures 4 à 6),
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Tableau I : Images observées en fluorescence suite à
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l'incubation de séra de patients lupiques sur des cellules Wil 2.
EMI10.2
<tb>
<tb>
"2" <SEP> "1" <SEP> "0"
<tb> Contrôle <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 100
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 100
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 0 <SEP> 96 <SEP> 4
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 1 <SEP> 86 <SEP> 21 <SEP> 3
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 3 <SEP> 92 <SEP> 5
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 94 <SEP> 3 <SEP> 3
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 2 <SEP> 59 <SEP> 23 <SEP> 18
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 27 <SEP> 43 <SEP> 30
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 65 <SEP> 18 <SEP> 17
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 3 <SEP> 11 <SEP> 20 <SEP> 79
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 17 <SEP> 28 <SEP> 55
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 53 <SEP> 35 <SEP> 30
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 4 <SEP> 19 <SEP> 25 <SEP> 56
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 18 <SEP> 12 <SEP> 70
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 31 <SEP> 33 <SEP> 36
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 5 <SEP> 78 <SEP> 9 <SEP> 13
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 79 <SEP> 4 <SEP> 17
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 79 <SEP> 9 <SEP>
12
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 6 <SEP> 21 <SEP> 24 <SEP> 55
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 6 <SEP> 22 <SEP> 72
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 55 <SEP> 28 <SEP> 17
<tb> Patient <SEP> LED <SEP> 7 <SEP> 89 <SEP> 2 <SEP> 9
<tb> + <SEP> DNase <SEP> 1 <SEP> 15 <SEP> 24
<tb> + <SEP> RNase <SEP> 94 <SEP> 1 <SEP> 5
<tb>
Légende : image"0"= absence de fluorescence image"1"= fluorescence membranaire en points image "2"'" fluorescence membranaire continue
La première ligne de résultats correspond à la moyenne (sur 6 expériences) du nombre de cellules montrant
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chaque image fluorescente. La seconde ligne (DNase) et le troisième ligne (RNase) reprennent le pourcentage de ces cellules après prédigestion soit par de la DNase, soit par de la RNase.
Tableau 2 : Image d'immunofluorescence due à la liaison sur les cellules Wil 2 de sérum, d'egg totales ou d'IgG spécifiques d'ADN de membrane.
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<tb>
<tb>
Sérum, <SEP> IgG <SEP> ou <SEP> IgG <SEP> anti-mDNA <SEP> Cellules <SEP> Cellules
<tb> fixées <SEP> non <SEP> fixées
<tb> Sérum <SEP> de <SEP> contrôle <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> IgG <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> LED <SEP> 1 <SEP> sérum <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> IgG <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> IgG-mDNA <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> + <SEP> 2
<tb> LED <SEP> 2 <SEP> sérum <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> IgG <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> IgG-mDNA <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> + <SEP> 2
<tb> LED <SEP> 3 <SEP> sérum <SEP> 2 <SEP> 2
<tb> IgG <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> IgG-mDNA <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>
Ce tableau présente les résultats de trois expériences différentes.
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Description des figures : Fiqure 1 1. lambda HindIII marqueurs 2. mADN digéré par phospholipase 3. mADN digéré par pronase 4. mADN préincubé avec IgG lupus 1/20 5. mADN préincubé avec IgG lupus 1/20 puis digestion pronase 6. mADN préincubé avec IgG lupus 1/5 7. mADN préincubé avec IgG lupus 1/5 puis digestion pronase 8. EcoRI marqueurs 9. mADN pur digéré à la Dnase 10. mADN pur digéré à la Rnase et à la pronase Figure 2 1. Vide 2. HindIII 3. préparation brute 4. préparation brute digérée à la pronase 5. préparation brute digérée à la RNase 6. préparation brute digérée à la Dnase Figure 3 Analyse par Elisa de la liaison des anticorps dirigés contre l'ADN bicaténaire membranaire humain à différentes dilutions de serum.
Figure 4 à 6 Ces figures représentent des cellules lymphocytaires cancéreuses humaines ayant fixé sur leur membrane des immunoglobulines de patient lupique.
Figure 4 fluorescence membranaire continue (2) Figure 5 fluorescence membranaire continue (2) + fluorescence membranaire en points (1) Figure 6 fluorescence membranaire en points (1)
Claims (9)
1. Procédé d'obtention d'ADN bicaténaire membranaire humain présent à la surface de cellules sanguines humaines, caractérisé en ce que l'on isole de cellules cancéreuses sanguines humaines les acides nucléiques présents à leur surface, en ce que l'on traite les acides nucléiques par une RNase et/ou une pronase, et en ce que l'on recueille l'ADN bicaténaire membranaire humain.
2. ADN bicaténaire membranaire humain dépourvu de contaminants protéiques et d'ARN, susceptible d'être obtenu par le procédé selon la revendication 1.
3. Anticorps dirigé contre l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 2.
4. Anticorps dirigé contre l'anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 3.
5. Trousse de diagnostic comprenant l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 2, l'anticorps dirigé contre l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 3 et/ou l'anticorps dirigé contre l'anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 4.
6. Trousse de diagnostic selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle comprend également les réactifs destinés à la détection et/ou au dosage de séquences nucléotidiques ou d'antigènes par un procédé choisi parmi le groupe constitué par l'hybridation in situ, l'hybridation ou la reconnaissance par des anticorps spécifiques marqués (ELISA), sur filtre, sur support solide, en solution, en "sandwich"sur gel, l'hybridation en Dot blot, Northern blot, Southern blot, par un marquage isotopique ou non-isotopique tel que l'immunofluorescence, par technique sondes froides, par amplification génétique, notamment par PCR ou LCR, par double immuno-diffusion, par contre-immunoélectrophorèse, par haemagglutination et/ou un mélange d'entre eux.
7. Utilisation de l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 2, de l'anticorps dirigé contre
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l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 3 et/ou de l'anticorps dirigé contre l'anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 4 pour la détection du lupus erythemateux.
<Desc/Clms Page number 15>
l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 3 et/ou de l'anticorps dirigé contre l'anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 4 pour la détection du lupus erythemateux.
8. Composition pharmaceutique comprenant l'ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 2, l'anticorps dirigé contre l'ADN bicaténaire membranaire humain
EMI15.1
1 e selon la revendication 3 et/ou l'anticorps dirigé contre l'anticorps anti-ADN bicaténaire membranaire humain selon la revendication 4.
9. Composition pharmaceutique selon la revendication 8 pour le traitement et/ou la prévention du lupus erythemateux.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE9400985A BE1008817A6 (fr) | 1994-10-28 | 1994-10-28 | Procede d'obtention d'adn bicatenaire membranaire humain, produit obtenu par ce procede et trousse de diagnostic le contenant. |
| PCT/BE1995/000100 WO1996013723A2 (fr) | 1994-10-28 | 1995-10-30 | Marqueur pour pathologies impliquant une reaction auto-immune et/ou pour maladies inflammatoires |
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