ES2150107T5 - Inmunogenos no toxicos que proceden de una proteina de regulacion retroviral, anticuerpos dirigidos contra estos inmunogenos, procedimiento para su preparacion y composiciones farmaceuticas que los contienen. - Google Patents
Inmunogenos no toxicos que proceden de una proteina de regulacion retroviral, anticuerpos dirigidos contra estos inmunogenos, procedimiento para su preparacion y composiciones farmaceuticas que los contienen. Download PDFInfo
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Abstract
COMPUESTO INMUNOGENO ADMINISTRABLE AL HOMBRE YA QUE ESTA DESPROVISTO DE TOXICIDAD, QUE SE DERIVA DE UNA PROTEINA DE REGULACION DE UN VIRUS VIH TRATAMIENTO QUIMICO MEDIANTE UN AGENTE DE ACOPLAMIENTO TAL COMO UN ALDEHIDO, O DE UNA PROTEINA PORTADORA ACTIVADA POR UN PRETRATAMIENTO MEDIANTE UN ALDEHIDO, QUE LE PERMITE SER RECONOCIDO POR ANTICUERPOS DIRIGIDOS CONTRA DICHA PROTEINA DE REGULACION, Y CONSERVAR PROPIEDADES INMUNOGENAS SUFICIENTES PARA CREAR ANTICUERPOS QUE NEUTRALIZAN O BLOQUEAN DICHA PROTEINA NATIVA, A LA VEZ QUE SE PIERDEN AL MENOS 50 % DE LAS PROPIEDADES BIOLOGICAS TOXICAS DE DICHA PROTEINA NATIVA.
Description
Inmunógenos no tóxicos que proceden de una
proteína de regulación retroviral, anticuerpos dirigidos contra
estos inmunógenos, procedimiento para su preparación y composiciones
farmacéuticas que los contienen.
La presente invención se refiere a nuevos
inmunógenos retrovirales que utilizan proteínas retrovirales de
regulación, cuyas propiedades biológicas esenciales han sido
previamente inactivadas de tal forma que se conserven o aumenten
sus propiedades inmunógenas, a un procedimiento de preparación y a
composiciones farmacéuticas que los contienen. Estos nuevos
inmunógenos "inactivados" pueden utilizarse para inducir en el
hombre una inmunización activa susceptible de prevenir o corregir
los efectos de la desregulación que las proteínas naturales de las
que proceden pueden contribuir a producir.
Igualmente, la presente invención se refiere a
nuevos anticuerpos obtenidos por utilización de estos inmunógenos
"inactivados", a procedimientos de preparación y a las
composiciones farmacéuticas que los contienen para una inmunización
pasiva.
La molécula Tat es una proteína de regulación
del VIH que no se encuentra en la partícula viral pero que está
codificada por el genoma del VIH-1. En el interior
de células infectadas, esta proteína codificada por el DNA proviral
juega un papel transactivador de genes virales o celulares. Esta
proteína de regulación genética puede sin embargo encontrarse
igualmente en el exterior de las células en el medio circundante
extracelular, excretada en el seno de los residuos de células
muertas en estado natural o fragmentario o por procesos de
secreción. Su presencia en el medio circulante explica la existencia
de anticuerpos anti-Tat detectables en ciertos
sujetos seropositivos. En este contexto extracelular del Tat, el
segmento C terminal portador de residuos RGD reconocidos por las
integrinas de la superficie celular y la región básica de la
molécula (residuos 45 - 70) van a permitir, como lo hacen las
toxinas bacterianas, actuar sobre las células no infectadas de
diferentes tejidos. Así la proteína Tat circulante que actúa como
verdadera toxina viral, puede ejercer efectos nocivos sobre las
células endoteliales y en asociación con el factor de crecimiento
BFGF, contribuir a la neoangiogénesis del sarcoma de Kaposi que
caracteriza la enfermedad denominada SIDA. La proteína Tat
circulante puede igualmente agravar la inmunosupresión que se
produce progresivamente en los enfermos de SIDA, es decir por acción
inmunosupresora directa sobre las células T contribuyendo a
desregular la producción de interferón \alpha por las células que
presentan antígenos, denominadas APC (macrófagos o células
dendríticas).
El síndrome de inmunodeficiencia adquirida
(SIDA) se define clínicamente por enfermedades oportunistas debidas
a una inmunosupresión o por el sarcoma de Kaposi. La inmunosupresión
adquirida, instalación progresiva durante la infección por VIH, se
manifiesta biológicamente por la pérdida de reactividad inmunológica
de las células T (citostasis y disminución de producción de IL2)
después de simulación en primer lugar por antígenos de recuerdo, y
luego por aloantígenos y por último por mitógenos (PHA). Esta
inmunosupresión está asociada a la superproducción de interferones
\alpha y \gamma.
Los mecanismos citopatógenos que inducen la
inmunosupresión son complejos y hacen intervenir diferentes factores
de origen viral que actúan bien directamente sobre las células de
inmunidad, linfocitos T y APC, bien indirectamente por medio de la
red de las citoquinas. Así la proteína de la envolvente gp120
llevada por la partícula del VIH-1 y cuya presencia
extracelular se mide por la carga viral sérica puede inducir
directamente la anergia de las células T de fenotipo CD4. A su lado
las proteínas de regulación del VIH, principalmente Tat, en su
configuración extracelular de toxina viral circulante, parecen
igualmente inducir una inmunosupresión directa de las células T o
de otros efectos patógenos, debido por ejemplo a que in vitro
las células T activadas por un antígeno de recuerdo o por
anticuerpos anti-CD3 no proliferan más en presencia
de la molécula Tat. Además la proteína Tat circulante parece
facilitar la superproducción por los APC de interferón \alpha,
citoquina citostática y apoptógeno susceptible de amplificar la
inmunosupresión y la apoptosis observada en el SIDA. En efecto, la
secreción del interferón \alpha por los macrófagos no parece
además, en presencia de Tat, ser detenida por una retroregulación
(feedback) que en estado normal controla esta producción de
interferón \alpha (período refractario).
El sarcoma de Kaposi se manifiesta clínicamente
por la aparición de nódulos vasculares que representan una
neoangiogénesis constituida a partir de células endoteliales. Estas
células activadas por procedimientos inflamatorios que engendran la
producción de citoquinas (interferón \gamma, IL1 e IL6) producen
BFGF (Basic Fibroblastic Growth Factor) y se multiplican. La
proliferación de células endoteliales activadas in vitro es
aumentada por la presencia en el medio de la proteína Tat. Los
anticuerpos anti-Tat bloquean in vitro los
efectos proliferantes de la proteína Tat. La acción de la Tat sobre
las células endoteliales portadoras en su superficie de la adhesina
de la familia de las integrinas se explica por la presencia de la
secuencia RGD reconocida por estas moléculas.
La neoangiogénesis que sustenta in vivo
el sarcoma de Kaposi será por consiguiente favorecida por la
proteína de regulación Tat en su configuración extracelular, que
podría ser reconocida, gracias a su fragmento en el extremo
C-terminal que contiene la secuencia RGD, por
integrinas de las células endoteliales. Además la Tat podrá
igualmente actuar por su región básica rica en residuos K y R, y por
consiguiente susceptible de estar unida a la
heparina-sulfato de la matriz extracelular que
concentra el factor de crecimiento BFGF. Así la proliferación de
células endoteliales inducida por el factor de crecimiento es
aumentada por la presencia de Tat y engendra neoangiogénesis. Este
efecto sobre el crecimiento de células endoteliales se reduce in
vitro por acción de anticuerpos anti-Tat.
\newpage
Por consiguiente parece deseable bloquear la
actividad nociva de las proteínas de regulación de los retrovirus,
principalmente del Tat que circula en los medios extracelulares
(sangre, linfa, medios intersticiales ...), verdaderas toxinas
virales.
En lo que se refiere a los virus VIH, hasta
ahora se han efectuado tentativas de vacunación con ayuda de
proteínas estructurales o fragmentos de proteína estructurales de
estos virus, pero jamás con ayuda de proteínas de regulación o
fragmentos de proteínas de regulación de estos virus.
Ahora bien, se ha encontrado con asombro que,
como las toxinas bacterianas (tetánica, diftérica o botúlica) cuya
actividad tóxica es neutralizada por anticuerpos específicos, los
efectos nocivos de las proteínas virales de regulación y
principalmente de Tat, verdadera toxina del VIH en su configuración
extracelular - que se ejerce por inmunosupresión de las células T,
por desregulación de la producción del interferón \alpha por los
APC o por la neoangiogénesis que sustenta el sarcoma de Kaposi - son
suprimidos en presencia de anticuerpos específicos
anti-Tat, como se verá a continuación en la parte
experimental.
Igualmente ocurre con otras proteínas de
regulación de virus, tales como VIH-1,
VIH-2, HTLV-1 o
HTLV-2. Por consiguiente será deseable disponer de
inmunógenos administrables al hombre capaces de producir dichos
anticuerpos, lo mismo que disponer de dichos anticuerpos, con fines
tanto curativos como preventivos. En efecto, los compuestos de la
técnica anterior utilizados como inmunógenos pueden ser tóxicos para
el hombre (véase por ejemplo el documento
WO-A9118454), principalmente los que comportan las
regiones básicas. Se trata de fragmentos no modificados de Tat, Nef
o Rev "naturales", contrariamente a la presente invención
basada en la inactivación de estas proteínas o fragmentos de
proteínas.
El documento
WO-A-93/22349 describe anticuerpos
naturales IgM de baja afinidad que están presentes de forma natural
en el suero de individuos no infectados por el VIH-1
y que reconocen epítopos sobre protaminas, sobre SP80 y sobre Tat y
sugiere purificarlos a partir de suero de sujetos seronegativos o de
líquidos sobrenadantes de las células de CD5+ clonadas para
utilizarlas en terapia.
El Journal of Virology, (1990,
64:962-5) describe anticuerpos mononucleares
producidos a partir de ratones inmunizados contra la proteína Tat
con coadyuvante de Freund. Algunos de estos anticuerpos monoclonales
pueden inhibir la actividad transactivadora de la proteína Tat
sobre la LTR, promotora de VIH-1.
El Journal of Cell Biology, 1990,
111:1275-81 y
WO-A-91/15224 describen la fijación
de la proteína Tat sobre células monocitarias, linfocitarias y
musculares gracias a los residuos RGD de su secuencia. Los
receptores de Tat sobre estas células pueden ser integrinas. La
solicitud PCT sugiere utilizar péptidos o anticuerpos específicos
de los sitios de enlace Tat-integrina para bloquear
la interacción RGD-integrina y limitar el efecto
extracelular de Tat.
Contrariamente a lo indicado en el artículo y la
patente anterior, el documento
WO-A-92 14755 identifica una región
de Tat que se une a las integrinas y que no depende de la secuencia
RGD, y propone utilizar en terapia inhibidores de la unión
Tat-integrina que son bien fragmentos peptídicos que
provienen de las integrinas o de Tat, o bien anticuerpos dirigidos
contra los sitios de unión Tat-integrina.
Cell, 1988, 55:1189-93 describe
la penetración de la proteína Tat extracelular en las células para
transactivar la transcripción del promotor del
VIH-1 (CAT assay). También describe la pérdida de
este efecto transactivador de la transcripción cuando se utiliza
una molécula Tat tratada por carboximetilación.
El Journal of Virology, 1994,
68:3343-53 describe la producción por síntesis de la
proteína Tat natural o de fragmentos por sus propiedades
transactivadoras sobre LTR del VIH-1, utilizando
como marcador el gen de la beta-galactosidasa.
Formas modificadas de Tat por adición de grupos acetamidometilo
también han sido ensayados en este sistema de transactivación.
Por lo tanto la presente solicitud tiene por
objeto composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto
inmunógeno administrable al hombre, desprovisto de toxicidad,
caracterizadas porque dicho compuesto inmunógeno procede de una
proteína de regulación de un virus VIH-1,
VIH-2, o uno de sus fragmentos peptídicos por
tratamiento con ayuda de un agente químico o por acoplamiento con
una proteína portadora activada por un pretratamiento con ayuda de
un aldehído, lo que le permite ser reconocido por anticuerpos
dirigidos contra dicha proteína de regulación natural, y conservar
propiedades inmunógenas suficientes para crear anticuerpos que
neutralizan o bloquean dicha proteína natural, habiendo perdido al
menos 50% de las propiedades biológicas tóxicas de dicha proteína
natural, siendo dicha proteína de regulación la proteína Tat.
La presente solicitud tiene también por objeto
compuestos inmunógenos tales como los definidos anteriormente para
su utilización en un método de tratamiento del cuerpo humano o
animal, es decir medicamentos caracterizados porque están
constituidos por compuestos inmunógenos tales como se ha definido
antes.
La presente solicitud tiene más particularmente
por objeto compuestos inmunógenos tal como se describen en las
reivindicaciones a continuación.
\newpage
Estos compuestos, por analogía con los toxoides
bacterianos, tales como tétanos toxoide, serán calificados de aquí
en adelante "toxoides".
En efecto, como los toxoides bacterianos
clásicos, están desprovistos de toxicidad propia, pero sin embargo
son capaces de provocar inmunización por administración a un
sujeto.
El tratamiento químico siguiente puede
completarse por un tratamiento físico, como por ejemplo una
irradiación y más particularmente una irradiación U.V., con objeto
de disminuir la toxicidad residual de los compuestos inmunógenos
según la invención.
Los toxoides anteriores pueden prepararse, por
ejemplo, a partir de un péptido que tiene una secuencia idéntica o
similar a una secuencia peptídica de una proteína de regulación, tal
como Tat, y obtenerse por ejemplo por síntesis peptídica
convencional sobre resina o por ingeniería genética. Todos estos
procedimientos son muy conocidos en el estado de la técnica.
Con el fin de verificar que la proteína de
regulación modificada o su fragmento modificado según la invención
es bien reconocida por anticuerpos dirigidos contra dicha proteína
de regulación natural, se puede verificar, por ejemplo,
inmunológicamente por Elisa en presencia de anticuerpos específicos,
la formación de complejos antígenos-anticuerpos
como se verá más adelante en la parte experimental.
Con el fin de determinar si las propiedades
inmunógenas de la proteína de regulación Tat se han conservado
suficientemente para crear anticuerpos neutralizantes de dicha
proteína natural, se pueden inmunizar, por ejemplo, mamíferos
(conejos, ratas, ratones) con ayuda de un compuesto inmunógeno según
la invención y verificar que los anticuer-
pos producidos neutralizan las actividades tóxicas de la proteína de regulación, como se verá en la parte experimental.
pos producidos neutralizan las actividades tóxicas de la proteína de regulación, como se verá en la parte experimental.
Con el fin de determinar si la proteína de
regulación Tat modificada ha perdido al menos el 50% de sus
propiedades biológicas tóxicas, se puede estudiar el efecto de la
proteína de regulación Tat inactivada sobre la inmunosupresión de
células T o sobre la producción de interferón \alpha por células
mononucleadas de sangre periférica activadas o incluso sobre la
neoangiogénesis inducida por la proteína de regulación.
La inactivación de la proteína de regulación Tat
se verifica por ejemplo por "Tat Rescue Assay" utilizando un
mutante de VIH no infeccioso Tat deficiente cultivado en la línea
celular HLM-1 cuya replicación depende de un aporte
exógeno de Tat natural.
El compuesto inmunógeno procede de la proteína
de regulación Tat de los virus VIH-1,
VIH-2.
Igualmente se pueden citar más particularmente
las regiones exteriores a las regiones básicas de Tat, es decir
exteriores a las regiones 49 a 57 de Tat, o solapando estas regiones
a como máximo 4 aminoácidos, preferiblemente como máximo 2
aminoácidos, particularmente el péptido HQVSLSKQPTSQPRGD.
Por "procede" o "proceder" de una
proteína de regulación Tat de un virus VIH1, VIH2, se entiende que
el compuesto inmunógeno puede estar constituido por la totalidad o
un fragmento de la proteína de regulación y puede comprender una o
varias modificaciones en los aminoácidos de esta proteína o
fragmento, tales como deleciones, sustituciones, adiciones o
funcionalizaciones, tales como acilación de aminoácidos, en la
medida en la que estas modificaciones permanecen en el marco exacto
anterior (ausencia de toxicidad, caracteres inmunológicos). Por
ejemplo, en general la sustitución de un residuo de leucina por un
residuo de isoleucina no modifica dichas propiedades; las
modificaciones deben afectar generalmente a menos del 30% de
aminoácidos, preferiblemente a menos del 20% y más particularmente
a menos del 10% de los segmentos de homología de la proteína de
regulación de al menos 8 aminoácidos, principalmente al menos 12
aminoácidos. Un fragmento puede comprender de 8 a 60 aminoácidos,
por ejemplo, preferiblemente de 12 a 40 aminoácidos, y
particularmente de 25 a 40 aminoácidos. Se pueden citar, por
ejemplo, los residuos 65-80 en el extremo
C-terminal de Tat de VIH-1.
En condiciones preferidas, los compuestos
inmunógenos de la invención comprenden al menos 50% de la totalidad
de la proteína de regulación, preferiblemente al menos 70%,
particularmente al menos 90%, y más particularmente la totalidad o
casi la totalidad de dicha proteína.
En general, en lo que se refiere a las
modificaciones, la homología o la similitud entre el inmunógeno
modificado y la proteína o parte de la proteína natural, así como
las dimensiones del compuesto inmunógeno, igual que las modalidades
de utilización, o de acoplamiento del compuesto inmunógeno según la
invención a una proteína inmunógena tal como el toxoide tetánico,
se pueden referir en particular a los documentos
WO-A-86/06414 o
EP-A-0220273 o incluso
PCT/US/86/00831, equivalentes, cuyas enseñanzas se incorporan aquí
como referencia.
Los compuestos inmunógenos según la invención
pueden utilizarse como sigue:
Se administra a un paciente un compuesto
inmunógeno según la presente invención, por ejemplo por vía
subcutánea o intramuscular, en cantidad suficiente para ser eficaz
en el plano terapéutico, a un sujeto que tiene necesidad de dicho
tratamiento. La dosis administrada puede ir por ejemplo de 100 a
1000 \mug por vía subcutánea, una vez al mes durante tres meses,
y luego periódicamente en función del título de anticuerpos séricos
inducido, por ejemplo de 2 a 6 meses.
Una composición según la invención puede
administrarse por cualquier vía convencional de uso en el campo de
las vacunas, en particular por vía subcutánea, intramuscular,
intravenosa u oral. La administración puede realizarse en dosis
única o repetida, una o varias veces después de cierto intervalo de
tiempo.
Por tanto la presente solicitud tiene igualmente
por objeto una composición farmacéutica, curativa o preventiva,
caracterizada porque comprende como principio activo, un compuesto
inmunógeno tal como se ha definido antes. El compuesto inmunógeno
puede acondicionarse solo o mezclado con un excipiente
farmacéuticamente aceptable, tal como un coadyuvante.
La invención tiene también por objeto
medicamentos caracterizados porque están constituidos por compuestos
inmunógenos tales como se han definido antes, es decir los
compuestos inmunógenos anteriores para su utilización en un método
de tratamiento terapéutico de un ser humano o animal, así como la
utilización de dicho compuesto inmunógeno para la preparación de un
medicamento curativo o preventivo destinado al tratamiento o a la
prevención de efectos nocivos de la proteína de regulación Tat. En
efecto, los compuestos según la invención han perdido sus
propiedades tóxicas y pueden por consiguiente administrarse al
hombre como se verá a continuación en la parte experimental.
La administración de compuestos inmunógenos
según la invención corresponde a una inmunoterapia activa.
Igualmente puede ser interesante proceder a una inmunoterapia
pasiva, es decir proporcionar a un paciente directamente
anticuerpos que necesita para neutralizar los efectos nocivos de la
proteína de regulación Tat de los virus VIH-1,
\hbox{VIH-2.}
Estos anticuerpos anti-proteína
de regulación pueden obtenerse clásicamente y como ejemplos después
de la inmunización de un mamífero, ser humano o animal, con ayuda
de un compuesto inmunógeno tal como se ha definido antes, por
clonación de linfocitos B humanos transformados por el virus de
Epstein-Barr y luego recuperación de los
anticuerpos esperados y segregados por dichos linfocitos B
transformados, o incluso por recombinación genética a partir de una
genoteca de fagos.
Por tanto la presente solicitud describe
igualmente dichos procedimientos de preparación de anticuerpos
anti-proteína de regulación de un virus
VIH-1, VIH-2, y en particular
anticuerpos anti-Tat toxoide, y principalmente a un
procedimiento de preparación de un anticuerpo anterior caracterizado
porque se inmuniza un mamífero con ayuda de un compuesto inmunógeno
tal como se ha definido antes.
La presente solicitud describe también un
anticuerpo anti-proteína de regulación de un virus
VIH-1, VIH-2, y en particular
anticuerpos policlonales o monoclonales obtenidos a partir de seres
humanos o de mamíferos inmunizados por aplicación de los
procedimientos antes descritos, con excepción de un anticuerpo
anti-Tat.
Estos anticuerpos específicos podrán
proceder:
1. bien del sujeto propiamente dicho, inducidos
por una inmunización activa (vacunación) con una proteína de
regulación biológicamente inactivada pero inmunógena, principalmente
Tat. Dicho compuesto inmunógeno, en el caso por ejemplo de Tat se
denomina Tat-toxoide por analogía con los toxoides
bacterianos,
2. o bien un organismo extraño, alo- o
xenogénico, administrado al sujeto por inmunización pasiva
(seroterapia). Los anticuerpos alogénicos (en el hombre) podrán ser
engendrados en sujetos no infectados voluntarios después de
inmunización activa (vacunación) con una proteína inmunógena o sus
derivados según la invención, principalmente Tat
(Tat-toxoide o fragmentos peptídicos de Tat según la
invención). Estos anticuerpos administrados pasivamente, alogénicos
(humanos) o xenogénicos (animales), podrán ser anticuerpos
monoclonales o policlonales completos o fragmentos F(ab')2 o
Fab de los anticuerpos.
\vskip1.000000\baselineskip
Por "anticuerpos anti-proteína
de regulación", se entienden anticuerpos monoclonales o
policlonales o fragmentos F(ab')2 o Fab de estos anticuerpos
o incluso anticuerpos anti-proteína de regulación
obtenidos por construcción genética a partir de una genoteca de
fagos.
Los anticuerpos alogénicos de origen humano
son:
- policlonales - pueden obtenerse de sujetos
seronegativos voluntarios inmunizados con un compuesto inmunógeno
según la invención, principalmente Tat-toxoide o
fragmentos peptídicos de Tat,
- monoclonales a partir de clones específicos de
células B transformadas por el virus EBV de estos individuos
inmunizados (líneas B de EBV específicas).
Los anticuerpos xenógenos provienen de animales
hiperinmunizados con un compuesto inmunógeno según la invención,
Tat o sus derivados (Tat-toxoide, fragmentos
peptídicos de Tat destoxificados según la invención) y son
- policlonales que provienen de animales
hiperinmunizados,
- monoclonales, obtenidos después de hibridación
según la técnica de Kohler y Milstein de células esplénicas o de
adenocitos con una línea de mieloma, tipo x63, principalmente
x63AG3. En este caso se prefieren los anticuerpos equinos o de
conejo.
La presente solicitud describe también un
procedimiento de preparación de anticuerpos
anti-proteína de regulación de un virus
VIH-1, VIH-2, caracterizado porque
se inmuniza un mamífero, ser humano o animal, con un compuesto
inmunógeno tal como se ha definido antes.
La presente invención describe también un
procedimiento de preparación de anticuerpos monoclonales
anti-proteína de regulación de un virus
VIH-1, VIH-2, caracterizado porque
se utilizan células B que provienen de individuos inmunizados por
un compuesto inmunógeno según la presente invención, transformándose
dichas células B por el virus EBV y produciendo anticuerpos
específicos anti-proteína de regulación de un virus
VIH-1, VIH-2.
Las células EBV+ anteriores pueden cultivarse de
forma que produzcan los anticuerpos esperados. Estas células, como
se ha visto, provienen principalmente de enfermedades inmunizadas
por una proteína de regulación natural, o por un compuesto
inmunógeno según la invención.
La presente solicitud describe un procedimiento
de preparación de anticuerpos monoclonales según la invención,
dirigidos contra una proteína de regulación de un virus
VIH-1, VIH-2, inactivada o no,
caracterizado porque se preparan hibridomas de mamífero,
principalmente de ratón a partir de esplenocitos o adenocitos
principalmente ratones inmunizados por una proteína de regulación
natural o un compuesto inmunógeno según la invención, y células de
mieloma, preferiblemente de la línea x63, según los procedimientos
conocidos en el estado de la técnica (Kohler y Milstein).
La presente solicitud describe un procedimiento
de obtención de anticuerpos anti-proteína de
regulación de un virus VIH-1,
VIH-2, por tecnología de recombinación genética,
caracterizado porque se utiliza como inmunógeno un compuesto
inmunógeno, tal como se ha definido antes.
La presente solicitud describe los fragmentos
F(ab')2 o Fab de dichos anticuerpos; dichos fragmentos pueden
obtenerse por ejemplo por digestión enzimática.
La presente solicitud describe un procedimiento
de inmunización pasiva de sujetos contaminados con el virus VIH,
utilizando anticuerpos específicos anti-proteína de
regulación de la multiplicación del virus VIH y especialmente
anti-Tat que neutraliza o bloquea los efectos
nocivos de esta proteína en su configuración extracelular y
preparados como se ha indicado antes, o fragmentos F(ab')2 o
F(ab) de estos anticuerpos.
La presente solicitud describe un procedimiento
de inmunización activa anti-VIH o
anti-SIDA que utiliza un compuesto inmunógeno
descrito anteriormente, asociado a una proteína constitutiva (o
estructural) de un virus VIH, principalmente la glicoproteína de la
envolvente gp 120 o gp 160 o un fragmento peptídico modificado o no
de ellas, o al virus VIH inactivado, o al virus VIH al que se ha
empobrecido en su ARN genómico, por ejemplo por hidrólisis
alcalina.
La presente solicitud describe un procedimiento
de inmunización activa anti-VIH o
anti-SIDA que utiliza un compuesto inmunógeno antes
descrito, asociado a uno o varios inmunógenos a base de citoquinas
inactivadas y especialmente interferón \alpha, TGF\beta o TNF.
En efecto, como se verá a continuación en la parte experimental,
una combinación de los efectos de los anticuerpos según la invención
contra las proteínas de regulación y los anticuerpos
anti-interferón \alpha en particular, restaura
completamente la inmunosupresión inducida por el VIH.
Por tanto la presente solicitud tiene también
como objeto una composición que contiene dos componentes
inmunógenos, es decir un compuesto inmunógeno antes descrito, y un
compuesto inmunógeno capaz de inducir anticuerpos contra una
citoquina, como interferón \alpha o TNF \alpha, como ha sido
descrito, por ejemplo, en el documento
WO-A-9118454, así como una
composición que contiene anticuerpos dirigidos contra una citoquina
principalmente interferón \alpha y un anticuerpo anterior
dirigido contra una proteína de regulación.
La presente solicitud describe un procedimiento
de inmunización activa caracterizado porque se utiliza como
inmunógeno un compuesto inmunógeno tal como se ha descrito
anteriormente, asociado a un coadyuvante de inmunidad mineral,
oleoso o de síntesis, o incluso un compuesto inmunógeno tal como se
ha definido antes acoplado o asociado a una proteína que aumenta su
inmunogenicidad.
Estas inmunizaciones pueden realizarse tanto a
modo curativo como preventivo.
Como inmunógeno para todos los procedimientos
anteriores y siguientes, se utiliza preferiblemente un derivado de
la proteína Tat.
La presente solicitud describe un procedimiento
de hiperinmunización de sujetos seronegativos o seropositivos a
VIH-1, VIH-2, caracterizado porque
se utiliza un inmunógeno tal como se ha definido anteriormente, para
la producción de sueros humanos hiperinmunes, que pueden ser
destinados particularmente a la seroterapia pasiva para
administración de anticuerpos específicos purificados o de sus
fragmentos F(ab')2 o Fab.
La presente solicitud describe una composición
farmacéutica que comprende, como principio activo curativo o
preventivo, al menos un anticuerpo anti-proteína de
regulación de un virus, tal como se ha definido antes, u obtenido
según los procedimientos anteriores.
Por último la invención tiene como objeto la
utilización de un compuesto inmunógeno anterior para la preparación
de un medicamento destinado al tratamiento de los efectos nocivos de
una proteína de regulación de un virus VIH-1,
VIH-2.
En resumen, y principalmente, la presente
solicitud describe el uso como preventivo, o curativo, en un sujeto
seropositivo o afectado de ARC/SIDA de anticuerpos específicos de
forma que bloquean la acción nociva de la proteína de regulación
Tat de un virus VIH-1, VIH-2. Estos
anticuerpos específicos podrán proceder: 1. del mismo sujeto,
inducidos por una inmunización activa (vacunación) con Tat
biológicamente inactivada pero inmunógena, denominados
Tat-toxoide por analogía como los toxoides
bacterianos o 2. un organismo extraño, alo- o xenógeno,
administrado al sujeto por inmunización pasiva (seroterapia). Los
anticuerpos alogénicos (en el hombre) podrán ser engendrados en
sujetos no infectados voluntarios después de inmunización activa
(vacunación) con una proteína de regulación, tal como Tat o sus
derivados (Tat-toxoide o fragmentos peptídicos de
Tat según la invención). Estos anticuerpos administrados
pasivamente, que son alogénicos (humanos) o xenogénicos (animales),
podrán ser anticuerpos monoclonales o policlonales completos o
fragmentos F(ab')2 o Fab de los anticuerpos.
Por Tat-toxoide, como se ha
indicado anteriormente se entiende un péptido o una proteína Tat
tratada por un agente químico. Este tratamiento ha hecho perder a
la molécula las propiedades biológicas tóxicas del Tat circulante
(inmunosupresión de células T; inducción de la producción de
interferón \alpha por las células productoras de interferón;
neoangiogénesis de células endoteliales; bloqueo del efecto
antiviral del interferón sobre los macrófagos) pero conservan las
propiedades susceptibles de inducir la formación de anticuerpos,
cuando se presenta y prepara de manera apropiada, acoplada o no a un
"vehículo", agregada o no, en presencia o no de un
coadyuvante.
Se ha ampliado la noción de
Tat-toxoide a los fragmentos peptídicos inmunógenos
de Tat, es decir una secuencia peptídica de Tat susceptible de
inducir la formación de anticuerpos anti-Tat cuando
se presenta de forma apropiada, acoplada a un vehículo o no, en
presencia o no de un coadyuvante.
La invención tiene igualmente por objeto
composiciones farmacéuticas.
a) Una composición farmacéutica que comprenda
como agente preventivo o curativo un toxoide viral o un fragmento o
análogo de proteína de regulación, Tat según la invención.
b) Una composición farmacéutica que comprenda
como agente preventivo o curativo anticuerpos
anti-Tat producidos a partir de organismos
inmunizados contra dicha proteína o sus fragmentos F(ab')2 o
Fab, según la invención.
Además la solicitud describe igualmente un
estuche (kit) que comprende una composición farmacéutica para vacuna
que además del principio activo (Tat-toxoide o sus
derivados o anticuerpos anti-Tat) pueda comprender
un coadyuvante y/u otro inmunógeno con propiedades
anti-retrovirus.
Por último la solicitud describe una composición
farmacéutica bajo una forma galénica convencional. En particular se
asocia el principio activo según la invención a una cantidad
suficiente para ser eficaz desde el punto de vista terapéutico con
un diluyente o un soporte aceptable desde el punto de vista
farmacéutico.
Experiencia
1
Se ha investigado el efecto del Tat sobre
linfocitos T activados de la sangre periférica. Células
mononucleadas (PMBC) y linfocitos T (HLA 35 DR-) aislados por
inmunomagnetismo se activaron por anticuerpos
anti-CD_{3} en presencia o en ausencia de la
molécula Tat. Después de 5 días de cultivo, se midió la
proliferación celular por incorporación de timidina H_{3}. Los
resultados mostraron que Tat inhibía la proliferación de células
THLA DR- (85% de inhibición a la concentración de 1,5 \mug por
ml). Esta inhibición desaparecía en presencia del anticuerpo
específico anti-Tat (Intracel, Reino Unido).
Experiencia
2
El efecto de la Tat sobre la acción antiviral
del interferón \alpha se midió por el ensayo biológico
convencional utilizando la medida del poder citopatógeno del virus
VSV sobre las células MDBK.
Dosis crecientes de Tat permitieron inhibir
desde bajas concentraciones según una curva
dosis-efecto para concentraciones de Tat de 1 a 20
\mug/ml, el poder anti-viral del interferón
exógeno. En una experiencia representativa, el efecto protector del
interferón \alpha aparente hasta la dilución 1/4800
(correspondiente a 150 U.I.) se redujo a la dilución 1/300 para
concentraciones de Tat de 10 \mug/ml. Así a la concentración de
10 \mug/ml de Tat, a la dilución de 4800 del interferón exógeno,
el título de VSV pasó de 10^{3,8} (muestras de interferón sin
Tat) a 10^{5,5} (muestras del interferón en presencia de Tat). En
estas experiencias, la inhibición del efecto
anti-viral del interferón \alpha por molécula Tat
se suprimió en presencia de anticuerpos específicos
anti-Tat (Intracel, U.K.), lo mismo que los
anticuerpos de caballo que se habían preparado (véanse ejemplos más
adelante).
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Experiencia
3
a) Un estudio por Elisa de anticuerpos
anti-Tat séricos utilizando como antígeno la
molécula Tat natural se realizó en 50 sujetos seropositivos y 15
sujetos seronegativos. Todos los sueros de los sujetos seronegativos
y 20 sueros de seropositivos no revelaron la presencia de
anticuerpos anti-Tat con una densidad óptica
inferior al umbral (cut off) (D.O. = 0,250). Entre los 30 sueros de
sujetos infectados por VIH, que sobrepasaron el umbral, 6 tenían
una DO superior a 0,500. No se pudo demostrar ninguna correlación
aparente entre la presencia de anticuerpos anti-Tat
por una parte, el estado clínico y el número de células CD4 por
mm^{3} de sangre por otra.
b) Un estudio por Elisa de anticuerpos
anti-Tat séricos que utilizan como antígenos
diferentes péptidos de la Tat se realizó en sujetos seropositivos
en diferentes estados de evolución de su infección por VIH - sujetos
asintomáticos; pacientes que presentaban manifestaciones clínicas
pre-SIDA (ARC) y pacientes afectados de SIDA. Los
resultados de este estudio fueron los siguientes:
1) Las secuencias peptídicas de Tat
| MEPVDPRLEPWKHPG | (residuos 1 - 15 en el extremo N-terminal) | |
| HQVSLSKQPTSQPRGD | (residuos 65 - 80 en el extremo C-terminal) |
fueron reconocidas por la mayoría de los sueros
de seropositivos y por algún suero de seronegativos (testigos). Las
reacciones fueron muy positivas pero no se encontró ninguna
correlación con la evolución de la infección por VIH y el número de
CD4 de los sujetos.
2) Las otras secuencias estudiadas no fueron
reconocidas de manera notable por los sueros ya sean de individuos
seropositivos o testigos (véase Tabla 1). Sólo algunos sueros raros
para cada secuencia mostraron una densidad óptica superior al
umbral (2 veces la media de los sueros testigos.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
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* Los sujetos infectados por VIH estaban en
estadios variados; sujetos asintomáticos, pacientes afectados de
ARC y pacientes con SIDA.
** La reacción se considera positiva (umbral)
cuando la densidad óptica es 2 veces superior a la media de los
correspondientes a los seronegativos.
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3) Es interesante observar que la secuencia más
reactiva (AA 65 - 80) es la que contiene los residuos RGD
reconocidos por las integrinas.
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A una solución de Tat (1 mg/ml) en fosfato
disódico 70 mM, pH 8,0, se añadió formaldehído a la concentración
final 33 mM.
La mezcla se incubó a 371C durante 1, 3, 5, 7 y
9 días. Al final de cada uno de los períodos de incubación, se tomó
una muestra y la reacción con formaldehído se bloqueó por adición de
glicina a la concentración final 100 mM.
Cada muestra se dializó durante una noche a 41C
frente a 100 veces su volumen de PBS (solución salina tamponada con
fosfato).
A una solución de Tat (1 mg/ml) en fosfato
disódico 70 mM, pH 8,2, se añadió glutaraldehído a la concentración
final, bien 0,026 M, bien 0,0026 M. Se dejó proseguir la reacción
con el glutaraldehído durante diversos tiempos que variaban de 1
minuto a 3 horas. Después del tiempo de reacción elegido, a la
temperatura de laboratorio, se bloqueó la reacción por adición de
glicina a la concentración final de 100 mM. Las diferentes muestras
se dializaron, durante 16 horas, a 41C, frente a 100 veces su
volumen de PBS.
\vskip1.000000\baselineskip
A una mezcla de toxina tetánica y Tat en una
relación molar de 1 a 15, en un tampón de fosfato 70 mM - 100 mM
(pH variable de 6,8 a 8,2), se añadió glutaraldehído a la
concentración final (variable de 0,0026 M a 0,026 M) y se dejó que
se efectuara la reacción de inactivación y acoplamiento durante
tiempos variables (3 - 15 min) a la temperatura de laboratorio. La
reacción se bloqueó por adición de glicina a la concentración final
100 mM y las diferentes tomas se dializaron durante 16 horas, a 41C,
frente a 100 veces su volumen de PBS.
\vskip1.000000\baselineskip
Se determinó en el ratón el poder inmunógeno de
diferentes preparaciones de Tat inactivado, bien por formaldehído
(Tat-toxoide), bien por glutaraldehído
(Tat-polan), bien después de acoplamiento a la
toxina tetánica (conjugado Tat-toxina tetánica), es
decir compuestos inmunógenos de los ejemplos 1 a 3.
Ratones suizos de 18-20 g se
inmunizaron con 2 inyecciones subcutáneas del inmunógeno de los
ejemplos 1, 2 y 3 en presencia de coadyuvante completo de Freund,
la segunda practicada 3 semanas después de la primera con 20 \mug
de preparación en emulsión en presencia de coadyuvante incompleto de
Freund.
15 días después de la inyección de recuerdo, se
extrajo sangre por vía intracardíaca. Los anticuerpos
anti-Tat se determinaron en los sueros por Elisa.
Se midió la densidad óptica a 490 nm.
Los resultados obtenidos resumidos en la Tabla
2, muestran que todas las preparaciones de Tat son inmunógenas en
grados diversos, salvo el conjugado Tat-TT tratado
durante un tiempo corto (3 minutos) por glutaraldehído, que se
demostró tóxico y mató a los ratones en 24 horas (TT demasiado
débilmente inactivado). Hay que señalar que los sueros de ratones
no inmunizados responden por debajo de 0,200 (D.O.) al Tat natural
como al Tat-toxoide. Además estos resultados
muestran que el Tat natural es reconocido por los anticuerpos de la
misma forma que el toxoide, lo que confirma su antigenicidad
equivalente y justifica incluso la utilización de
Tat-toxoide para inmunizar.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
La toxicidad de las preparaciones de
Tat-toxoide y de Tat-polan se
determinaron por inyección subcutánea a ratones suizos de
18-20 g. Las preparaciones de
Tat-toxoide (7 días) y Tat-polan (15
min; 0,026 M) se administraron a dosis de 100 \mug por ratón. Se
observaron los animales durante 7 días.
No se observó ningún signo manifiesto de
toxicidad. El peso de los animales continuó creciendo. El examen
macroscópico de los órganos por autopsia no permitió revelar
anomalías.
Se prepararon anticuerpos
anti-Tat como sigue: se aisló la fracción IgG sobre
una columna de proteína G a partir de sueros de ratón inmunizados
con Tat-polan. Los fragmentos F(ab')2 se
prepararon igualmente a partir de la fracción IgG aislada por
digestión pépsica. La reactividad inmunológica de estas fracciones
se verificó por Elisa.
Los diferentes Tat-toxoides
inactivados 1, 3, 5 y 9 días del ejemplo 1 se ensayaron en un ensayo
de actividad de expresión del gen denominado
cloranfenicol-acetil-transferasa
(CAT) dependientes de "Long Terminal Repeat" (LTR) de
VIH-1.
El principio de este ensayo es el siguiente:
células de la línea Hela que contienen el gen CAT bajo control de
LTR del VIH, se pusieron en contacto con Tat natural o toxoides
durante 6 horas. Después de 24 horas de cultivo, se lisaron las
células y la cantidad de CAT producida se midió por un ensayo de
actividad de CAT que medía el porcentaje de
acetil-CoA unido al cloranfenicol. Si la molécula
Tat es activa, habrá un fuerte porcentaje de cloranfenicol
acetilado, si no este porcentaje será pequeño. El cultivo de estas
células adherentes se realizó de manera estándar en el medio RPMI,
10% de FCS. La concentración de Tat añadida para tener un
efecto-dosis está entre 1 \mug a 10 \mug por ml
de líquido sobrenadante.
Los resultados presentes muestran aquí que
Tat-toxoide está totalmente inactivado después de 3
días, con una actividad residual baja el día 1.
\vskip1.000000\baselineskip
a) Ausencia de inmunosupresión de células T en
presencia de Tat-toxoide (contrariamente a las
experiencias
1 y 2).
1 y 2).
Se investigó el efecto de
Tat-toxoide (5 días) sobre linfocitos T activados de
sangre periférica. Células mononucleadas (PMBC) y linfocitos T (HLA
35 DR-) aislados por inmunomagnetismo se activaron con anticuerpos
anti-CD_{3} en presencia o ausencia de los
compuestos inmunógenos del ejemplo 1. Después de 5 días de cultivo,
se midió la proliferación celular por incorporación de timidina
H_{3}. Los resultados mostraron que, al contrario de Tat natural,
Tat-toxoide no inhibía la proliferación de células T
HLA DR-. Así, a la dosis de 5 \mug/ml en el cultivo, en presencia
de Tat-toxoide, la proliferación de células era
idéntica a la del testigo.
b) Ausencia de inhibición del efecto del
interferón \alpha sobre macrófagos en presencia de
Tat-toxoide:
El efecto de Tat-toxoide sobre
la acción antiviral del interferón \alpha se midió por el ensayo
biológico convencional utilizando la medida del poder citopatógeno
del virus VSV sobre las células MDBK.
\vskip1.000000\baselineskip
Contrariamente al Tat natural, dosis
equivalentes de Tat-toxoide el ejemplo 1 no
permitieron inhibir el poder anti-viral del
interferón exógeno. En una experiencia representativa, el efecto
protector del interferón \alpha aparente hasta la dilución 1/4800
(correspondiente a 150 U.I.) se mantuvo en presencia de 50 \mug de
Tat-toxoide, mientras que disminuyó hasta 1/300 con
Tat natural. A la dilución 4800 del interferón exógeno, el título de
VSV se mantuvo al nivel del testigo a 10^{3,8} (muestras de
interferón con Tat-toxoide) mientras que pasó a
10^{5,5} (muestras de interferón en presencia
de Tat).
de Tat).
Se prepararon anticuerpos
anti-Tat-toxoides de la experiencia
1 (tratamiento con formaldehído 3 días) en caballos
hiperinmunizados. A partir de los anticuerpos se prepararon también
fragmentos F(ab')2 según el procedimiento descrito en el
ejemplo 6.
Los anticuerpos, así como los fragmentos
F(ab')2, inhiben las diferentes actividades biológicas de Tat
natural en los diferentes ensayos: transactivación de LTR del VIH
(ensayo CAT) (véase ejemplo 7), inmunosupresión (véase experiencia
1), inhibición del efecto del interferón \alpha exógeno sobre el
cultivo (véase experiencia 2). Las experiencias 1, 2 y el ejemplo 7
se volvieron a realizar con Tat natural y preincubando o no Tat
natural 1 hora a 371C con los anticuerpos o fragmentos
F(ab')2, a la dosis de 40 \mug de anticuerpo por 1 \mug
de Tat natural. Los resultados mostraron que los anticuerpos inhiben
la acción de Tat natural.
Se observó que las PBL (células mononucleadas de
sangre periférica) de sujetos sanos infectadas in vitro con
VIH-1 y cultivadas 6 días ejercían una actividad
inmunosupresora.
En efecto, si se añadían dichas células
infectadas después de 6 días, (o no infectadas) irradiadas en
proporción de 1 a 5 a células autólogas activadas por la proteína
Staphylococcus Enterotoxin B (SEB), se observa después de 4
días que la proliferación de células autólogas disminuyó en un 80%
con relación a los testigos (células no infectadas).
En este modelo, si se añadía al cultivo de
células infectadas in vitro anticuerpos
anti-interferón \alpha, estas células perdían
entonces su efecto supresor, en el 50% de los sujetos. En el 20% de
los casos, las células supresoras perdían 60% de su efecto supresor
y en el 30% este efecto supresor se mantenía significativamente.
Si se añadían a los anticuerpos
anti-interferón \alpha anticuerpos
anti-Tat (monoclonales descritos en la experiencia
1, o policlonales de caballo del ejemplo 9), en el 100% de los casos
las células infectadas in vitro perdían su efecto supresor.
Estas experiencias muestran el papel combinado
tóxico de Tat e interferón \alpha en la inmunosupresión inducida
por VIH1 y que una asociación de anticuerpos
anti-interferón y anti-Tat restaura
una inmunidad normal.
Los siguientes ejemplos no forman parte de la
invención.
A una solución de proteína Nef (1 g/ml) en
fosfato disódico 70 mM, pH 8,0, se añadió formaldehído a la
concentración final de 33 mM.
La mezcla se incubó a 371C durante 1, 3, 5, 7 y
9 días. Al final de cada uno de los períodos de incubación, se tomó
una muestra y se bloqueó la reacción con formaldehído por adición de
glicina a la concentración final 100 mM.
Cada toma se dializó durante 1 noche a 41C
frente a 100 veces su volumen de PBS (solución salina tamponada con
fosfato), y se aisló Nef-toxoide.
A una solución de Nef (1 mg/mlm) en fosfato
disódico 70 mM, pH 8,2, se añadió glutaraldehído a la concentración
final, bien 0,026 M, bien 0,0026 M. Se dejó que prosiguiera la
reacción con glutaraldehído durante diversos tiempos que variaban
de 1 minuto hasta 3 horas. Después del tiempo de reacción elegido, a
la temperatura de laboratorio, se bloqueó la reacción por adición
de glicina a la concentración final de 100 mM. Las diferentes tomas
se dializaron, durante 16 horas, a 41C, frente a 100 veces su
volumen de PBS, y se aisló Nef-polan.
Se determinó en ratones el poder inmunógeno de
diferentes preparaciones de Nef inactivado, bien con formaldehído
(Nef-toxoide), bien con glutaraldehído
(Nef-polan), es decir los compuestos inmunógenos de
los ejemplos 12 y 13.
Se inmunizaron ratones Swiss de
18-20 g con 2 inyecciones subcutáneas del inmunógeno
de los ejemplos 12 y 13 en presencia de coadyuvante de Freund, la
segunda realizada 3 semanas después de la primera, con 20 \mug de
preparación en emulsión en presencia de coadyuvante incompleto de
Freund.
15 días después de la inyección de recuerdo, se
realizó por vía intracardíaca tomas de sangre. Los anticuerpos
anti-Nef se determinaron en los sueros por Elisa. Se
midió la densidad óptica a 490 nm.
Los resultados obtenidos, resumidos en la tabla
siguiente, muestran que todas las preparaciones de Nef son
inmunógenas en diversos grados. Es preciso señalar que los sueros de
ratón no inmunizados dan un nivel de respuesta inferior a 0,2 (en
D.O) en estos ensayos Elisa.
Estos resultados muestran que la proteína Nef
natural es reconocida por los anticuerpos de la misma forma que el
toxoide, lo que confirma su antigenicidad equivalente y justifica
incluso la utilización del Nef-toxoide para
inmunizar.
(1) INFORMACIÓN GENERAL
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: NEOVACS
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 117, rue Vieille du Temple
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: PARÍS
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: FRANCIA
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 75003
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Nuevos inmunógenos, nuevos anticuerpos, su procedimiento de preparación y composiciones farmacéuticas que los contienen.
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NÚMERO DE SECUENCIAS: 1
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- FORMA LEGIBLE POR ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE SOPORTE: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- PROGRAMA: PatentIn Release # 1.0, Versión # 1.25 (OEB)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SECUENCIA ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- NÚMERO DE CADENAS: sencillo
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (9)
1. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto inmunógeno administrable al hombre, desprovisto de
toxicidad, caracterizada porque dicho compuesto inmunógeno
procede de una proteína de regulación de un virus
VIH-1 o VIH-2, o uno de sus
fragmentos peptídicos por tratamiento con ayuda de un agente químico
o por acoplamiento con una proteína portadora activada por un
pretratamiento con ayuda de un aldehído, lo que le permite ser
reconocido por anticuerpos dirigidos contra dicha proteína de
regulación natural, y conservar propiedades inmunógenas suficientes
para crear anticuerpos que neutralizan o bloquean dicha proteína
natural, habiendo perdido al menos 50% de las propiedades
biológicas tóxicas de dicha proteína natural, siendo dicha proteína
de regulación la proteína Tat.
2. Un compuesto inmunógeno tal como se ha
definido en la reivindicación 1, para su utilización en un método
de tratamiento del cuerpo humano o animal.
3. Un compuesto inmunógeno según la
reivindicación 2, caracterizado porque procede de la proteína
Tat, por tratamiento con ayuda de un agente químico.
4. Un compuesto inmunógeno según la
reivindicación 3, caracterizado porque el tratamiento con
ayuda de un agente químico es un tratamiento con ayuda de un
aldehído.
5. Una composición farmacéutica,
caracterizada porque comprende un compuesto inmunógeno tal
como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 4, asociado
a una proteína Gag, Pol o Env de un virus VIH-1,
VIH-2, HTLV-1 o
HTLV-2.
6. Una composición farmacéutica,
caracterizada porque comprende un compuesto inmunógeno, tal
como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 4, asociada
a una proteína gp120/gp160, natural o inactivada por tratamiento
físico, químico, genético o inmunológico o a una fracción peptídica
de esta proteína, modificada o no.
7. Una composición de vacuna que contiene:
- -
- un compuesto inmunógeno tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 4, y
- -
- un compuesto inmunógeno que es una citoquina en una forma diferente de su forma natural e inactivada o un análogo inactivo o un fragmento inactivo o inactivado de citoquina.
8. Una vacuna que contiene, como inmunógeno, un
compuesto tal como se ha definido en una de las reivindicaciones 1
a 4, asociado a un coadyuvante de inmunidad mineral, oleoso o de
síntesis, o a una proteína que aumenta su inmunogenicidad.
9. Utilización de un compuesto inmunógeno, tal
como se ha definido en una de las reivindicaciones 1 a 4, para la
preparación de un medicamento curativo o preventivo destinado al
tratamiento o a la prevención de los efectos nocivos de las
proteínas de regulación de un virus VIH-1 o
VIH-2.
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