JPWO2010134305A1 - Hiv立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原、及びその合成方法 - Google Patents
Hiv立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原、及びその合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2010134305A1 JPWO2010134305A1 JP2011514322A JP2011514322A JPWO2010134305A1 JP WO2010134305 A1 JPWO2010134305 A1 JP WO2010134305A1 JP 2011514322 A JP2011514322 A JP 2011514322A JP 2011514322 A JP2011514322 A JP 2011514322A JP WO2010134305 A1 JPWO2010134305 A1 JP WO2010134305A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hiv
- peptide
- antibody
- derivative
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 142
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 129
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 129
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 129
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 69
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims description 45
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 32
- 108010062015 peptide N36 Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 86
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 36
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 65
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 34
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 claims description 22
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 20
- -1 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) group Chemical group 0.000 claims description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 27
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 18
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 16
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 8
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 138
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 63
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 59
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 53
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 48
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 42
- 238000009448 modified atmosphere packaging Methods 0.000 description 38
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 37
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 35
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 34
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 238000001425 electrospray ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 23
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 22
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 22
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 20
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 16
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 16
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine Chemical compound C1CSCN1 OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 14
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 13
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 11
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 9
- PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N enfuvirtide Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(C)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N 0.000 description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 8
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 7
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 6
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 6
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 6
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 6
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 6
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 6
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-carboxyethyl)phosphanyl]propanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PBVAJRFEEOIAGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 5
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 5
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 4
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000002259 anti human immunodeficiency virus agent Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 4
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 3
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Chemical group CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Chemical group 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N (2s)-2-[[(2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 VXGGBPQPMISJCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 2
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 2
- 230000002079 cooperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 2
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 2
- 229960002062 enfuvirtide Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000006462 rearrangement reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002653 sulfanylmethyl group Chemical group [H]SC([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 125000001984 thiazolidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 2
- BMJRTKDVFXYEFS-XIFFEERXSA-N (2s)-2,6-bis(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(=O)O)CCCCNC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 BMJRTKDVFXYEFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N (R)-flurbiprofen Chemical compound FC1=CC([C@H](C(O)=O)C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 SYTBZMRGLBWNTM-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZHGNHOOVYPHPNJ-UHFFFAOYSA-N Amigdalin Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OCC1OC(OCC2OC(OC(C#N)C3=CC=CC=C3)C(OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C2OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C(OC(=O)C(F)(F)F)C1OC(=O)C(F)(F)F ZHGNHOOVYPHPNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031658 C-X-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 1
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001429175 Colitis phage Species 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 1
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000008265 DNA repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 108010039334 HIV Envelope Protein gp120 Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000922405 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000969594 Homo sapiens Modulator of apoptosis 1 Proteins 0.000 description 1
- 101900082162 Human immunodeficiency virus type 1 group M subtype B Surface protein gp120 Proteins 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100021440 Modulator of apoptosis 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 241000872931 Myoporum sandwicense Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710149136 Protein Vpr Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101800000483 Surface protein gp120 Proteins 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N abts Chemical compound S/1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N\N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009352 congenital transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N dicarbon monoxide Chemical group [C]=C=O VILAVOFMIJHSJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- ZINJLDJMHCUBIP-UHFFFAOYSA-N ethametsulfuron-methyl Chemical compound CCOC1=NC(NC)=NC(NC(=O)NS(=O)(=O)C=2C(=CC=CC=2)C(=O)OC)=N1 ZINJLDJMHCUBIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002169 ethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229940125777 fusion inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229940099052 fuzeon Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002835 hiv fusion inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- QOSATHPSBFQAML-UHFFFAOYSA-N hydrogen peroxide;hydrate Chemical compound O.OO QOSATHPSBFQAML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003548 thiazolidines Chemical class 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009966 trimming Methods 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/641—Branched, dendritic or hypercomb peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
HIVのRNAゲノムは、約9000bpであり、その遺伝子群は末端反復配列(long terminal repeat;LTR)と呼ばれる構造にはさまれて存在している。この遺伝子にコードされる十数種類のウイルスタンパク質が複雑な複製を制御している(非特許文献4及び5参照)。
(式中、Xは正の整数を示す)。
(式中、Xは正の整数を示す)
すなわち、チアゾリジンライゲーション反応は、無保護のペプチド断片同士をプロリン様の構造で結合させる方法で、その反応は、まず、C末端がペプチジルグリコールアルデヒドエステルのペプチドに対して、N末端Cysのアミノ基がカルボニル炭素を求核攻撃することによって、イミンを形成し、次いで分子内においてシステイン側鎖のチオール基が分子求核攻撃によりチアゾリジン環形成が起こる。この反応によって、チアゾリジンエステルが形成され、そして、O,N,−アシル転位反応が起こることによって、安定なプロリン様の結合を形成することができる。
[参考例1]
(1)N36ペプチド誘導体と抗原分子の合成スキームの概略
N36ペプチド誘導体の3量体の合成及びその抗原性を確認する前に、まず、N36ペプチド誘導体の抗原性の有無を確認することとした。N36ペプチド誘導体が単量体の状態で抗原性を全く示さなかった場合、それを3量体の状態にしても、抗原性が大きく上昇するとは考えにくいためである。そこで、N36ペプチド誘導体を合成してマウスに免疫することで、抗原性を確認することとした。ペプチドを抗原分子として用いる際には従来から用いられている方法として、ヘモシアニン(keyhole limpet hemocyanin;KLH)もしくは多価抗原ペプチド(multi antigen peptide;MAP)などのキャリアータンパク質に結合させることによって、分子量を大きくして抗原性を高める方法が知られている。今回は従来からの方法に準じて、合成及び同定が簡便なMAPをキャリアーとすることとし、MAPについても合成をおこなった。このMAPに、合成したN36ペプチド誘導体(抗原分子)を結合させ、マウスへの免疫に用いることとした。なお、本願参考例や実施例で用いているマウスは、すべて雄のBALB/cマウスである。これらのマウスは、日本クレア株式会社から購入した後、東京医科歯科大学の動物施設にて育成し、各実験の開始時に6〜8週齢で使用した。
合成するNP101の構造としては、後にMAPに結合させるときの反応基として、天然のN36ペプチドのN末端側にシステイン残基を導入し、また、立体障害による反応性の軽減を抑制するために、天然のN36ペプチドとシステイン(Cys)残基の間にスペーサーとしてグリシン(Gly)残基を導入した(図9(a))。NP101の合成は、前述のFmoc−SPPSにより行った。得られた反応液を、脱樹脂、脱保護した後に、HPLC(high performance liquid chromatography)で精製を行った。このHPLCでは、カラムとして、5C18−AR−II Waters 4.6×250 mmを用い、溶出溶媒として、35〜65質量% アセトニトリル/水(0.1質量% TFA)を30分間、流速1.0mL/分で流し、検出波長220nmにて検出を行った(図9(b))。このHPLCで精製したものを、MALDI−TOF MS(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometer)により同定した(図9(c))。
MALDI−TOF MSによるNP101の分析データを以下に示す。
NP101; m/z calcd for C191H322N38O53S [M+H+]: 4325.0, found: 4326.6.
後述の抗体誘導実験におけるポジティブコントロール抗原としては、高い抗体誘導能が既に報告されており、かつ、HIVの持つ表面タンパク質gp120の部分ペプチドであるV3領域ペプチド(図10(a))を採用した。このV3領域ペプチドは、HIVが膜融合する際に第2受容体として結合するCXCR4との結合部位のペプチドである。また、このV3領域ペプチドは、C末端側にシステイン残基を持つペプチドであり、MAPに導入する(結合させる)際にシステイン残基のチオール基をそのまま使えるといった利点もある。さらに、このV3領域ペプチドから誘導される抗体は、HIVの特定の株に限られるものの、抗HIV活性も有することも報告されている。V3領域ペプチドの合成は、前述のFmoc−SPPSにより行った。得られた反応液を、脱樹脂、脱保護した後、HPLCで精製を行った。このHPLCでは、カラムとして5C18−AR−II Waters 4.6×250 mmを用い、溶出溶媒として、17〜22質量% アセトニトリル/水(0.1質量% TFA)を30分間、流速1.0mL/分で流し、検出波長220nmにて検出を行った(図10(b))。このHPLCで精製したものを、ESI−TOF MSにより同定した(図10(c)、(d))。ESI−TOF MSによるポジティブコントロールの分析データを以下に示す。
ポジティブコントロール; m/z calcd for C112H180N38O27S [M+H+]: 2523.9, found: 2524.1.
MAP(図11(a))も、V3領域ペプチドと同様の手法を利用して合成・精製・同定を行った。具体的には、樹脂上でFmoc−Lys(Fmoc)−OHを縮合することにより放射状に分岐したリシン残基のデンドリマーとして合成した。その後、結合パートナーのシステイン残基との反応に用いるクロロアセチル基をMAPに導入するため、N末端と側鎖のアミノ基を保護しているFmoc基を除去し、クロロ酢酸、1-hydroxybenzotriazole(HOBt)、N,N'-diisopropylcarbodiimide(DIPCI)を用いて脱水縮合反応によりクロロアセチル基を導入した。その反応液を、脱樹脂、脱保護及びHPLCによる精製を行った。このHPLCでは、カラムとして5C18−AR−II Waters 4.6×250 mmを用い、溶出溶媒として、25〜28質量% アセトニトリル/水(0.1質量% TFA)を30分間、流速1.0mL/分で流し、検出波長220nmにて検出を行った(図11(b))。このHPLCで精製したものを、ESI−TOF−MSで同定して(図11(c))、目的物を得た。ESI−TOF MSによるMAPの分析データを以下に示す。MAP; m/z calcd for m/z calcd for C112H18N38O27S [M+H+]: 2097.7, found 2097.0.
参考例1の上記(2)で合成したNP101を、参考例1の上記(4)で合成したMAPに結合させた。より詳細には、まずMAPにクロロアセチル基を導入し、そのMAPに対して、N末端側にシステイン(Cys)残基を導入したN36のチオール基が求核攻撃して、共有結合を形成する反応を利用して、NP101をMAPに結合させた。この反応は塩基性に調整した緩衝液という温和な条件で進行するためペプチド性の化合物の反応に多く用いられている。MAPとNP101の結合は具体的には以下の方法で行なった。
参考例1の上記(3)で合成したポジティブコントロール抗原を、参考例1の上記(5)と同様の方法により、MAPに結合させた。具体的には、6MのGu・HClを含む100mM リン酸ナトリウムバッファー(pH8.5)500μLに、窒素条件下で、MAP(500μg、0.21μmol)及びポジティブコントロール(6.36mg、2.52μmol)を溶解し、この溶液を室温で6時間撹拌した。これにより生じる反応をHPLC及びESI−TOF−MSでモニターした。多置換体が確認でき、かつ、HPLCチャートに変化がなくなった時点で反応終了として、反応液をsephadex G-10で10質量%酢酸水溶液にてろ過して脱塩した後に、そのろ液を凍結乾燥して後述の抗体誘導実験におけるサンプル抗原分子(以下、「ポジティブコントロール−MAP抗原分子」とも言う)とした。
[参考例2]
(1)抗体誘導実験のスキームの概略
抗体誘導能を評価するにあたっては、従来から一般的に用いられている実験系として、マウスを用いた抗体誘導の実験系を用いることとした。かかるマウスとしては、BALB/c系統の6週齢のマウスを用いることとした。かかる系統のマウスを用いることとした理由は、モノクローナル抗体を作成する際にBALB/cマウス由来のミエローマ細胞を用いると、同種間での融合が可能でありハイブリドーマ作成法として一般的に使われているためである(Lidqvist, M., Nilsson, O., Holmgren, J., Hall, C., Fermer, C. Phage display for site-specific immunization and characterization of high-risk human papillomavirus specific E7 monoclonal antibodies. J. Immune. Meth. 337, 88-96 (2008)参照)。
参考例2の上記(1)で得られた血清の抗体価を評価するための系として、ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)法(Godefroy, S., Peyre, M., Garcia, N., Muller, S., Sesardic, D., Partidos, C. D.Effect of skin barrier disruption on immune responses to topically applied cross-reacting material, CRM197, of diphtheria toxin Infect. Immin. 73, 4803-4809 (2005); Albu, D. I., Trower, A. J., Woron, A. M., Stellrecht, K., Broder, C. C., Metzger, D. W. Intranasal vaccination using interleukin-12 and cholera toxin subunit B as adjuvants to enhance mucosal and systemic immunity to human immunodeficiency virus type 1 glycoproteins. J. Virol. 77, 5589-5597 (2003))を採用した。具体的には、以下の方法で行なった。
(1)抗原分子の設計
前述の参考例2の実験によって、N36ペプチドの抗原性の確認、並びに、抗体誘導実験系及びELISAが正常に機能することが確認できた。そこで、当初の目的として、gp41を模倣したN36ペプチド誘導体を三量体にしたペプチド(以下、「NP104」ともいう)の合成を試みた。しかしながら、NP101−MAPの合成過程から塩基性条件下でNP101の溶解性が低いこと、ジスルフィド形成が進行することなどの原因により目的とするNP104の合成および精製が困難になることが予測された。そこで、3量体の形成には、ジスルフィド結合を形成しにくく、溶解性が上昇すると考えられる酸性条件下で共有結合が形成できる反応としてこれまでに報告されているチアゾリジンライゲーション反応を用いることとした(Tam, J. P., Yu, Q., Lu, Y-A. Tandem peptide ligation for synthetic and natural biological. Biologicals 29, 189-196 (2001); Tam, J. P., Xu, J., Eom, K. D. Methods and strategies of peptide ligation. Biopolymers 60, 194-205 (2001); Liu, C.-A., Tam, J. P. Peptide segment ligation strategy without use of protecting groups. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 91, 6584-6588 (1994); Tam, J. P., Yu, Q., Yang, J. -L. Tandem ligation of unprotected peptides through thiaprolyl and cysteinyl bonds in water. J. Am. Chem. Soc. 123, 2487-2494 (2001); Sadler, K., Zhang, Y., Xu, J., Yu, Q., Tam, J. P. Quaternary protein mimetics of gp41 elicit newtralizing antibodies against HIV fusion-active intermediate state. Biopolymers 90, 320-329 (2008); Miao, Z., Tam, J. P. Bidirectional tandem pseudoproline ligations of proline-rich helical peptides. J. Am. Chem. Soc. 122, 4253-4260 (2000); Eom, K. D., Miao, Z., Yang, J. -L., Tam, J. P. Tandem ligation multipartite peptide with cell-permeable activity. J. Am. Chem. Soc. 125, 73-82 (2002); Tam, J. P., Miao, Z. Stereospecific pseudoproline ligation of N-terminal serine, threonine, or cysteine-containing unprotected peptides.J. Am. Chem. Soc. 121, 9013-9022 (1999))。
N36単量体ペプチド誘導体の再設計及び合成を行った。目的であるNP104を構成するためのN36単量体ペプチドとして、その水溶性を増強するために、天然配列のN末端側に親水性アミノ酸であるアルギニン(Arg;R)とグルタミン酸(Glu;E)を合計で6残基付与したペプチド(以下、「NP102」ともいう)を、上記参考例1記載の方法と同様の方法で合成した(図19)。図19(a)にはNP102のアミノ酸配列を示し、図19(b)にはNP102を精製した後のHPLCチャートを示す。このHPLCでは、カラムとして5C18−AR−II Waters 4.6×250 mmを用い、溶出溶媒として、37〜47質量% アセトニトリル/水(0.1質量% TFA)を30分間、流速1.0mL/分で流し、検出波長220nmにて検出を行った。このHPLCで精製したものを、ESI−TOF−MSで同定した結果を図19(c)及び(d)に示す。なお、ESI−TOF MSによるNP102の分析データを以下に示す。
NP102; m/z calcd for C217H370N72O62[M+H+]: 4978.7, found 4977.1.
NP103; m/z calcd for C222H377N74O64S [M+H+]: 5138.89, found 5138.68.
作製の最終的な目的である抗原分子は、gp41のN末端側ヘリックス領域であるN36ペプチドを、共有結合で固定化して3量体構造をとらせたものである。そこで、N36ペプチド誘導体を3量体化する足場となるテンプレート化合物の構造としては、3本の等価なリンカーを持ち、C3対照性を有するものとした(図21)。そのため、窒素原子を中心として対称な結合の手が3本伸びている「化合物5」(図22参照)の化合物を出発原料として、等価なリンカーをさらに伸ばすこととした。3本のリンカー部分には、炭素鎖ではなく、アミド結合及びエステル結合を採用した。アミド結合は、合成が容易なこと、親水性を高められること、N36由来のペプチドとの結合の際にHPLCでペプチドと同じ波長により検出できることといった利点を有している。リンカー部分におけるエステル結合及び末端のアルデヒドは、N36ペプチドとテンプレート化合物との結合の際のチアゾリジンライゲーション環形成に必要である。また、窒素原子を中心とすることにより、ライゲーション反応の条件であるacetate buffer(pH5.2、弱酸性)中において4級アンモニウム塩となり、水溶性が上昇することを期待した。また、リンカーの長さについてはgp41の3量体構造のX線結晶構造解析による情報が得られているため、その情報を参考に適当だと思われる長さに設定した(図21及び23)。テンプレート化合物の合成は、図22に沿って、具体的に以下の方法で行なった。以下、化合物を図22記載の標記にしたがって記載することもある。
20mLアセトン中に1,2,3−プロパントリオール(1.84g、20mmol)を含む溶液に、触媒量のヨウ素を添加し、その溶液を室温で15時間撹拌した。飽和硫酸及び塩水で反応を停止させた。次いで、亜ジチオン酸ナトリウム(Na2S2O4)を用いて、ヨウ素を除去した。減圧濃縮により、油状の残留物が得られ、トリクロロメタン・メタノール(40:1(体積比))を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、前述の残留物を精製し、1.88g(14.23mmol)の化合物2を得た(収率71%)。この化合物2の同定データは以下のとおりである。
1H-NMR(400MHz; CD3OD)δ=1.37(3H,s), 1.44(1H,s), 3.58-3.63(1H,m), 3.71-3.82(2H,m), 4.03-4.06(1H,m), 4.22-4.27(1H,m)
150mLのトルエン中に8.91g(100mmol)のβアラニン(化合物3)を懸濁した懸濁液に、50mLのベンジルアルコール及び22.83mg(120mmol;1.2倍等量)のp−トルエンスルホン酸一水和物を添加し、その溶液を125℃で24時間、ディーン・スターク管にて撹拌した。この溶液を室温にまで冷却し、減圧下で濃縮した。残留物に400mLのジエチルエーテルを添加し、その溶液をろ過することによって、析出したものを収集し、その析出物をジエチルエーテルで洗浄した。真空下で乾燥したのち、化合物4を35gの白色固体として得、さらなる精製は行なわずに用いた。
233mg(1mmol)の化合物5を含む20mLの乾燥DMFに、522mg(3.6mmol)のHOBt・H2O、688mg(3.6mmol)のEDCI・HCl、1.315g(3.6mmol)の化合物4、2.1mL(15mmol)のトリエチルアミン(NEt3)を添加し、その溶液を室温で15時間撹拌した。その溶液を酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム及び塩水で洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液を減圧下で濃縮し、残留物を得た。この化合物6の同定データは以下のとおりである。
1H-NMR(400 MHz; CD3OD)δ=2.24(6H,t,J = 6.0Hz), 2.55(6H,t,J = 6.23Hz), 2.59-2.62(6H,m), 3.43-3.48(6H,m), 5.11(6H,s), 6.81(3H,t,J = 5.79Hz), 7.30-7.38(15H,m). FABLRMS, m/z calcd for C39H49N4O9S [M+H+]: 717.83, found: 717.
129mg(0.17mmol)の化合物6を含む2mLのメタノール中に、触媒量の10質量%のPd/Cを水素条件下で室温にて添加した。この溶液を、5時間後にセリット上でろ過した。ろ過した液体を減圧下で濃縮し、残留物を4mLのジクロロメタンで溶解した。その溶液に、101.1mg(0.765mmol)の化合物2、146.7mg(0.765mmol)のEDCI(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)・HCl、及び、触媒量のDMAPを添加し、その溶液を室温で撹拌した。30分後に、その溶液を減圧下で濃縮し残留物を得た。トリクロロメタン・メタノール(17:1(体積比))を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、前述の残留物を精製し、90.1mg(0.114mmol)の化合物7を得た(収率67%)。この化合物7の同定データは以下のとおりである。
1H-NMR(400MHz; CD3OD)δ=1.36(9H,s), 1.44(9H,s), 2.28-2.31(12H,t,J = 5.94Hz), 2.53-2.60(6H,m), 2.65-2.68(6H,t,J = 5.97Hz), 3.46-3.5(6H,m), 3.7(6H,s), 3.74-3.78(3H,m), 4.07-4.20(6H,m), 4.31-4.35(3H,m). FABLRMS, m/z calcd for C36H61N4O15[M+H+]: 789.89, found: 789.
26.3mg(0.033mmol)の化合物7を含む1mLのメタノール:TFA(1:4(体積比))溶液を室温で2時間撹拌した。この溶液を蒸発させて濃縮し、その残留物を1mLの水:メタノール(1:3(体積比))溶液で溶解した。この溶液に、42.78mg(0.2mmol)のNaIO4を添加し、その溶液を室温で1時間撹拌した。この溶液を蒸発によって濃縮した後、その残留物をRP−HPLC (column, YMC-Pack ODS-A, 10φ×250 mm)にて精製した。HPLC溶媒としては、0.1質量%のTFAを含む水(溶媒A)と、0.1質量%のTFAを含むアセトニトリル(溶媒B)を用いた。精製した化合物8は、ESI−TOF−MSで同定した。化合物8を、溶媒B中で30分間以上、0〜15質量%の直線勾配を用いてさらに精製した。精製した化合物8を凍結乾燥し、7.9mg(0.014mmol)の化合物8(本発明のテンプレート化合物:一般式(1)においてXが1である化合物)を得た(収率42%)。この化合物8の同定データは以下のとおりである。
1H-NMR(400MHz;D2O)δ=2.54-2.54(6H,m), 2.66(6H,m), 3.32-3.36(12H,m), 3.95-3.96(4H,m), 5.10-5.11(2H,m). m/z calcd for C24H43N4O15(M+3H2O+): 627.6, found: 627.8.
N36ペプチド誘導体であるNP103と、前述のテンプレート化合物とを用いて、N36ペプチドの3量体(トリマー)の合成を試みた。すなわち、実施例1の上記(2)で合成したNP103と、実施例1の上記(3)で合成したテンプレート化合物とを、20%の2,2,2-トリフルオロエタノール(TFE)を含む200mMのacetate buffer(pH5.2)中で攪拌することによって、テンプレート化合物に3分子のNP103が結合したトリマー(以下、「NP104」ともいう)を構築した(図24)。具体的には以下のような方法で合成を行なった。
ESI-TOF-MS, m/z calcd for C690H1160N226O201S315933.1, found 15933.8.
N36は、2次構造としてαヘリックスをとることが既に報告されている。今回合成したNP102(モノマー)とNP104(トリマー)がそれぞれαヘリックス構造をとっているかどうか、また、それらの構造の違いを確認するために、円偏光二色性(circular dichroism; CD)スペクトルの測定を行なった。CDスペクトルを測定すると、タンパク質の2次構造の有無や、種類、含量を簡便に推定することができるからである。具体的には、αヘリックスを多く含むタンパク質の場合、190nm付近に正のピーク、並びに、208及び222nmに負のピークを示すことが知られ、β構造を多く含むタンパク質の場合、195〜200nmに正のピーク、並びに、215nm付近に負のピークを持つことが多いことが知られ、ランダムコイル構造を含む場合は、200nm付近に負のピークをもつことが知られている。
[θ]max= [θ]∞(1−k/n)
へリックス含量(%)=[θ]222/[θ]max×100
(1)NP102(モノマー)とNP104(トリマー)の免疫
マウスを用いた動物実験系及び血清の評価系が機能することが前述の参考例2の実験により確認できた。そこで、実施例1の上記(2)で合成したNP102(モノマー)と、実施例1の上記(4)で合成したNP104(トリマー)について、前述の参考例2の抗体誘導実験を行うこととした。
参考例2において構築したELISA法を用いて、NP102又はNP104を免疫したマウスの血清中に含まれる抗体を評価した。まず初めに、ネガティブコントロールのマウスの血清中に含まれる抗体が、NP102とNP104を認識しないことの確認を行った。その結果を図31に示す。図31に示されるように、ネガティブコントロールを投与したマウスの血清は、NP102(図31(a))やNP104(図31(b))を認識しないことが分かった。次いで、ポジティブコントロール、NP102又はNP104を免疫したマウスの血清中の抗体がそれぞれの抗原分子を認識することの確認を行なった。その結果を図32に示す。図32に示されるように、日数の経過に伴い、抗体価が徐々に上昇していく様子がそれぞれ確認された。すなわち、NP102を免疫したマウスの血清中には、NP102を認識する抗体が誘導され(図32(a))、NP104を免疫したマウスの血清中には、NP104を認識する抗体が誘導され(図32(b))、ポジティブコントロールを免疫したマウスの血清中には、ポジティブコントロールを認識する抗体が誘導された(図32(c))。
NP102(N36ペプチド誘導体の単量体)やNP104(N36ペプチド誘導体の3量体)を免疫したマウスの血清中に含まれる抗体が、それぞれの抗原分子を特異的に認識していることを確認するために、免疫した抗原分子とは異なる抗原分子をマイクロプレート上に固定化して、血清中の抗体の抗体価を評価した。具体的には以下のような方法で実験を行なった。
(1)HIV−1ウイルス溶液の調製
NP104が抗HIV活性を有しているかどうかを確認するために、p24アッセイを行なうこととした。p24はHIV−1のコアを構成するカプシドタンパク質であり、HIVに感染した生物中でHIVが増殖すると、その生物の血清中のp24濃度が上昇することが知られている。p24アッセイを行なうに際し、まずHIV−1ウイルスの調製を行なった。具体的には以下のような方法を用いた。
実施例3の上記(1)で調製したウイルス溶液の感染価の測定を行なった。具体的には以下の方法により行なった。まず、実施例3の上記(1)で調製したウイルス溶液を、10%FBS/RPMI1640で10倍希釈した。希釈したウイルス溶液を96ウェルプレートのウェルに添加し、さらに2倍又は3倍の段階希釈系列(横向き11ウェル分、12ウェル目はブランク)を作製した。なお、この希釈系列の体積はすべて100μLになるように調整した。一方、10%FBS/RPMI1640で培養したMT−4細胞(T細胞系列)を、前述の希釈系列の各ウェルに、104cells/100μLとなるように添加し、培養を行なった。培養から3日目に、各ウェル中の細胞数を変化させないようにゆっくりと培養溶液(100μL)を交換した。交換後4日間培養した後に培養液の培養上清を回収し、HIV−1 p24量を測定し、p24値が0になる希釈倍率からウイルス価(ウイルス数/mL)を求めた。なお、その際、バックグラウンドとして、MT−4細胞を添加せずに、前述のウイルス液の希釈系列をそのまま培養して得られた培養溶液のHIV−1 p24量の測定値を用いて、数値を補正した。
NP104抗原特異的なIgGが誘導された血清が、HIV感染抑制効果を持つかどうか確認を行うために、以下の操作をいった。まず、実施例2で得られた各血清を、各24ウェルプレートのウェルに一定量添加した。それらのウェルに、MT−4細胞を5x104cells/ウェル(体積比では血清の4倍量又は9倍量)播種して、1時間前処理した。前処理後に、参考例2の上記(1)及び(2)で調製したpNL4−3ウイルス溶液を、M.O.I.=0.05〜0.01で添加しウイルスを感染させた。なお、バックグラウンドとして、血清を添加せずに、MT−4細胞とpNL4−3ウイルス溶液のみとしたウェルも作製した。ウイルス感染から3日経過後、5日経過後及び7日経過後にウェルの上清を回収し、HIV−1 p24に関するELISAにて、p24の発現量を測定したところ、NP104を免疫して得られた血清にHIV感染抑制効果があることが確認された。また、ウイルス感染から3日経過後の前述のウェルの溶液を遠心して細胞を回収し、p24に関するウエスタンブロット解析を行なった。また、ネガティブコントロール(nega)として、血清を添加せずに、MT−4細胞とpNL4−3ウイルス溶液のみとしたウェルから採取したものについても、同様にウエスタンブロット解析を行なった。これらのウエスタンブロット解析の結果を図34に示す。図34から分かるように、N36単量体であるNP102を免疫して得られた血清を用いた場合は、いずれもp24量の低下は見られず、HIV感染抑制効果は示されなかった(「M−3」及び「M−2」参照)。それに対し、N36ペプチドの3量体であるNP104を免疫して得られた血清を用いた場合、NP104に対する抗体価がより低かった「T−3」については、p24量の低下は見られなかったが、NP104に対する抗体価がより高かった「T−2」については、p24量が著しく低下しており、HIV感染抑制効果を示すことが判明した。
NP102(単量体)、NP104(3量体)、公知のHIV薬であるAZT(3'-azido-3'-deoxythymidine)について、公知の方法であるMTTアッセイ(Org. Biomol. Chem., 2008, 6, 4374-4377)を用いて抗HIV活性の評価を行なった。その結果を図35の左パネルに示す。また、前述の3種類のサンプルについて、細胞毒性を評価した。その結果を図35の右パネルに示す。これらの結果に基づいて、抗HIV活性のEC50(μM)及びCC50(μM)を算出した結果を、図35の下パネルに示す。この結果から分かるように、NP104(3量体)はNP102(単量体)の3分の1程度の濃度で同等の抗HIV活性を発揮すること、及び、NP104の細胞毒性はNP102の10分の1程度であることが示された。このことから、本発明のテンプレート化合物を用いて3量体化したNP104が、天然のgp41タンパク質におけるN36の3量体の構造に類似した構造を有していること、NP104を認識する抗体が実際に抗HIV活性を有していることが示された。
Claims (14)
- 抗原ペプチドとして、HIV粒子の膜貫通タンパク質gp41のN末端側のヘリックス領域N36ペプチドの誘導体を合成する工程、及び、3本の等価なリンカー構造を持つC3対称性を有するテンプレート化合物と、前述のN36ペプチドの誘導体とを結合することにより、N36ペプチドの誘導体の3量体を合成する工程からなることを特徴とするN36の3量体領域を認識するHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- N36ペプチドの誘導体を、9−fluorenylmethoxycarbonyl(Fmoc)基の選択的脱保護と縮合反応による固相合成法により合成することを特徴とする請求項1記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- 抗原ペプチドとして、HIV粒子の膜貫通タンパク質gp41のN末端側のヘリックス領域N36ペプチドの誘導体を合成する工程におけるN36ペプチドの誘導体が、N36の天然の配列であるN36ペプチドのN末端側に、テンプレート化合物と結合するために必要なCysを導入し、該N36ペプチドの配列と該Cysの間には立体障害による反応性の軽減を防ぐためにスペーサーとしてGlyを1残基導入したものであることを特徴とする請求項1〜2のいずれか記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- 3本の等価なリンカー構造を持つC3対称性を有するテンプレート化合物として、下記一般式(1)で表される化合物又はその塩を用いることを特徴とする請求項1〜3のいずれか記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
(式中、Xは正の整数を示す)。 - 3本の等価なリンカー構造を持つC3対称性を有するテンプレート化合物として、下記一般式(2)で表される化合物又はその塩を用いることを特徴とする請求項4記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- 抗原ペプチドとして、HIV粒子の膜貫通タンパク質gp41のN末端側のヘリックス領域N36ペプチドの誘導体を合成する工程におけるN36ペプチドの誘導体が、N36ペプチドのN末端側に親水性アミノ酸Arg及びGluを計6残基付与し、更に、そのN末端側にCysを配置し、CysとArgとの間にスペーサーとしてGlyを配置したものであることを特徴とする請求項1記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- 抗原ペプチドとして、HIV粒子の膜貫通タンパク質gp41のN末端側のヘリックス領域N36ペプチドの誘導体を合成する工程におけるN36ペプチドの誘導体が、下記一般式(3)で表される化合物であることを特徴とする請求項6記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- 3本の等価なリンカー構造を持つC3対称性を有するテンプレート化合物と、前述のN36ペプチドの誘導体とを結合することにより、N36ペプチドの誘導体の3量体を合成する工程が、3本の等価なリンカー構造を持つC3対称性を有するテンプレート化合物と、N36ペプチドの誘導体とを、acetate buffer中で攪拌することにより、3本の等価なリンカー構造を持つC3対称性を有するテンプレート化合物と、前述のN36ペプチドの誘導体とを結合させて、N36ペプチドの誘導体の3量体を合成することを特徴とする請求項1〜7のいずれか記載のHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原の合成方法。
- 下記一般式(1)で表される化合物又はその塩からなるテンプレート化合物。
(式中、Xは正の整数を示す)。 - 請求項1〜8のいずれか記載の合成方法によって合成されることを特徴とするHIV粒子の膜貫通タンパク質gp41のN末端側のヘリックス領域N36の3量体領域を認識するHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原。
- 請求項10記載のN36の3量体領域を認識するHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原を用いて宿主動物を感作し、該抗原に対する抗体を誘導することを特徴とするN36の3量体領域を認識するHIV立体構造認識抗体の誘導方法。
- 請求項10記載のN36の3量体領域を認識するHIV立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原を用いることを特徴とするHIVワクチンの製造方法。
- 請求項10記載のペプチド抗原、又は、請求項10記載のペプチド抗原のN36の3量体領域を認識するHIV立体構造認識抗体を有効成分とする、HIV感染予防及び/又は治療剤。
- HIV感染予防及び/又は治療が、HIV立体構造認識抗体の、HIV粒子の膜貫通タンパク質gp41のN末端側のヘリックス領域N36の3量体領域への作用により、gp41のN36とC34による6量体形成を阻害して、HIVの標的細胞への侵入を阻止するものであることを特徴とする請求項13記載のHIV感染予防及び/又は治療剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009120352 | 2009-05-18 | ||
JP2009120352 | 2009-05-18 | ||
PCT/JP2010/003280 WO2010134305A1 (ja) | 2009-05-18 | 2010-05-14 | Hiv立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原、及びその合成方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2010134305A1 true JPWO2010134305A1 (ja) | 2012-11-08 |
Family
ID=43125998
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011514322A Pending JPWO2010134305A1 (ja) | 2009-05-18 | 2010-05-14 | Hiv立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原、及びその合成方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9066983B2 (ja) |
EP (1) | EP2444414A4 (ja) |
JP (1) | JPWO2010134305A1 (ja) |
WO (1) | WO2010134305A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103347892B (zh) * | 2011-01-06 | 2016-11-02 | 比奥诺尔免疫有限公司 | 单体和多聚体免疫原性肽 |
CN103502264A (zh) * | 2011-04-04 | 2014-01-08 | 国立大学法人东京医科齿科大学 | Hiv立体结构识别抗体诱导肽 |
CN104069504B (zh) * | 2014-05-11 | 2019-09-24 | 江苏康泰生物医学技术有限公司 | 一种增强多糖蛋白结合物免疫原性的方法 |
CN106146624B (zh) * | 2015-04-28 | 2020-03-31 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 定点共价交联的天然n肽类的hiv-1抑制剂 |
EP3423091A4 (en) * | 2016-03-03 | 2019-10-30 | Duke University | COMPOSITIONS AND METHODS OF INDUCING HIV-1 ANTIBODIES |
US11318197B2 (en) | 2016-03-03 | 2022-05-03 | Duke University | Compositions and methods for inducing HIV-1 antibodies |
EP3519428A4 (en) | 2016-10-03 | 2020-07-08 | Duke University | METHOD FOR IDENTIFYING IMMUNOGENIC BY TARGETING UNLIKIBLE MUTATIONS |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008501028A (ja) * | 2004-06-01 | 2008-01-17 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | HIVgp41融合中間物質の安定したペプチド模倣薬 |
JP2008534640A (ja) * | 2005-04-05 | 2008-08-28 | イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー | タンパク質の機能部位またはエピトープの遮蔽方法 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6043347A (en) | 1996-10-10 | 2000-03-28 | Probe International Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
US6150088A (en) * | 1997-04-17 | 2000-11-21 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Core structure of gp41 from the HIV envelope glycoprotein |
-
2010
- 2010-05-14 JP JP2011514322A patent/JPWO2010134305A1/ja active Pending
- 2010-05-14 US US13/319,813 patent/US9066983B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-05-14 EP EP10777543.9A patent/EP2444414A4/en not_active Withdrawn
- 2010-05-14 WO PCT/JP2010/003280 patent/WO2010134305A1/ja active Application Filing
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008501028A (ja) * | 2004-06-01 | 2008-01-17 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | HIVgp41融合中間物質の安定したペプチド模倣薬 |
JP2008534640A (ja) * | 2005-04-05 | 2008-08-28 | イステイチユート・デイ・リチエルケ・デイ・ビオロジア・モレコラーレ・ピ・アンジエレツテイ・エツセ・ピー・アー | タンパク質の機能部位またはエピトープの遮蔽方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6010032582; 玉村啓和: 'HIV侵入の動的超分子機構を認識する特異的抗体作製に関する研究' 平成18年度 HIVの感染予防に関する研究 総括・分担研究報告書 , 2007, p.37-43 * |
JPN6014034333; Journal of Organic Chemistry Vol.72, No.18, 2007, p.6776-6785 * |
JPN6014034335; Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Vol.98, No.20, 2001, p.11187-11192 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2444414A4 (en) | 2013-06-12 |
US20120052090A1 (en) | 2012-03-01 |
WO2010134305A1 (ja) | 2010-11-25 |
US9066983B2 (en) | 2015-06-30 |
EP2444414A1 (en) | 2012-04-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2268372C (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
US5166050A (en) | Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections | |
WO2010134305A1 (ja) | Hiv立体構造認識抗体誘導ペプチド抗原、及びその合成方法 | |
US5869624A (en) | HIV-1 vaccines, antibody compositions related thereto, and therapeutic and prophylactic uses thereof | |
JP2003529319A (ja) | HIV−1gp41を標的化する広範に中和する抗体を誘発する方法 | |
KR920008744B1 (ko) | Hiv 감염의 치료 및 진단용 모노클로날항체 및 펩티드 | |
US20110076298A1 (en) | Soluble stabilized trimeric hiv env proteins and uses thereof | |
McGaughey et al. | Progress towards the development of a HIV-1 gp41-directed vaccine | |
CA2602654A1 (en) | Method for shielding functional sites or epitopes on proteins | |
WO2012137479A1 (ja) | Hiv立体構造認識抗体誘導ペプチド | |
US20120121633A1 (en) | Hiv cd4 binding site based covalent immunogen compositions | |
US6200575B1 (en) | Non-toxic immunogens derived from a retroviral regulatory protein antibodies preparation process and pharmaceutical compositions comprising them | |
AP502A (en) | Multiple branch peptide constructions for use against HIV. | |
JP2010509340A (ja) | バイナリエピトープ抗体およびb細胞スーパー抗原免疫刺激物質 | |
US9796773B2 (en) | Neutralizing antibodies that bind to the HIV-1 Env V2 critical neutralization domain | |
AU2007249937B2 (en) | HIV-1 immunogenic compositions | |
AU2015215643B2 (en) | A new non-HIV vaccine antigen from the vaginal microbiota capable of inducing a mucosal neutralizing protective antibody response against HIV infection | |
Garsky et al. | Progress Towards the Development of a HIV-1 gp41-Directed Vaccine | |
AU2004201321A1 (en) | Compositions and methods for treating viral infections | |
AU2006200455A1 (en) | Compositions and methods for treating viral infections |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130411 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20130809 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140813 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141001 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150331 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150512 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150817 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20151217 |