JPH07145078A - エイズワクチン - Google Patents
エイズワクチンInfo
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- JPH07145078A JPH07145078A JP29225793A JP29225793A JPH07145078A JP H07145078 A JPH07145078 A JP H07145078A JP 29225793 A JP29225793 A JP 29225793A JP 29225793 A JP29225793 A JP 29225793A JP H07145078 A JPH07145078 A JP H07145078A
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- JP
- Japan
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- peptide
- hiv
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 安全性が高く、かつ種々のＨＩＶの変異株に
対して高い抗体価を得ることができ、予防効果および治
療効果の高いエイズワクチンを提供する。 【構成】 ＨＩＶエンベロープのｇｐ１２０のＶ３領域
ペプチド、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトー
プのペプチドなどを合成し、これらのペプチドを、別途
合成した分枝リジンオリゴマーの各分枝のアミノ基末端
に共有結合させる。複数の株種由来のＶ３領域ペプチド
を用い、多価ワクチンとすることが特に望ましい。
対して高い抗体価を得ることができ、予防効果および治
療効果の高いエイズワクチンを提供する。 【構成】 ＨＩＶエンベロープのｇｐ１２０のＶ３領域
ペプチド、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトー
プのペプチドなどを合成し、これらのペプチドを、別途
合成した分枝リジンオリゴマーの各分枝のアミノ基末端
に共有結合させる。複数の株種由来のＶ３領域ペプチド
を用い、多価ワクチンとすることが特に望ましい。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、エイズ（ＡＩＤＳ：Ａ
cquired Ｉmmune Ｄeficiency Ｓyndrome 後天性免疫不
全症候群）ワクチンおよびその製造方法に関するもので
ある。詳しく述べると本発明は、エイズウィルス（以
下、ＨＩＶと記する。）感染症に対する、合成ペプチド
を用い巨大分子化した多価ワクチンに関するものであ
る。
cquired Ｉmmune Ｄeficiency Ｓyndrome 後天性免疫不
全症候群）ワクチンおよびその製造方法に関するもので
ある。詳しく述べると本発明は、エイズウィルス（以
下、ＨＩＶと記する。）感染症に対する、合成ペプチド
を用い巨大分子化した多価ワクチンに関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】レトロウィルスの一種とされるＨＩＶ
は、血液を媒介として、例えば感染者との性交渉あるい
は患者の血液輸血などによって感染する。そして感染に
より、血液中のＴ細胞が破壊され、免疫機能が著しく低
下し、カポシ肉腫、ニューモニスカリーニ肺炎等に罹患
して死に至る。ＨＩＶ感染者数は、近年、加速度的に増
加しており、特にタイ王国、アメリカ合衆国などの諸国
においては、エイズが国民の死亡原因の上位に位置する
といったような事態となっており、その対処策が全世界
的に極めて重要なものとなっている。
は、血液を媒介として、例えば感染者との性交渉あるい
は患者の血液輸血などによって感染する。そして感染に
より、血液中のＴ細胞が破壊され、免疫機能が著しく低
下し、カポシ肉腫、ニューモニスカリーニ肺炎等に罹患
して死に至る。ＨＩＶ感染者数は、近年、加速度的に増
加しており、特にタイ王国、アメリカ合衆国などの諸国
においては、エイズが国民の死亡原因の上位に位置する
といったような事態となっており、その対処策が全世界
的に極めて重要なものとなっている。
【０００３】このようなＨＩＶ感染に対する予防および
治療法については、現在、数多くの研究がなされてお
り、ＨＩＶに対するワクチンの開発についても、いくつ
かの報告がなされている（例えば、Ada G. (1989). Pro
spects for a vaccine againstHIV. Nature 339:331-33
2；Boucher C.A.B., Krone W.J., Goudsmit J., Meloen
R.H., Naylor P.H., Goldstein A.L., Sun D.K. and S
arin P.S. (1990). Immune response and epitope mapp
ing of a candidate HIV-1 p17 vaccine HGP130. J.Cli
n. Lab. Anal. 4:43-47；Doling R., Graham B.S.,Gree
nberg S.B., Tacket C.O., Belshe R.B., MidthunK., C
lements M.L., Gorse G.J., Horgan B.W., Atmar R.L.,
Karzon D.T., Bonnez W., Fernie B.F., Montefiori
D.C., Stablein D.M., Smith G.E. and Koff W.C. (199
1). The safety and immunogenicity a human immunode
ficiency virus type 1 (HIV-1) recombinant gp160 ca
ndidate vaccine in humans. Ann. Int. Med. 114:119-
127；Fultz P.N., Nara P., Bearre-Sinoussi F., Chap
ut A., Greenblerg ML., Muchmore E., Kieny M.P., an
d Girard M. (1992). Vaccine protection fo chimpanz
ees against challenge with HIV-1-infected peripher
al blood mononuclearcells. Science 256:1687-1690；
Girard M., Kieny M.-P., Pinter A., Barre-Sinoussi
F., Nara P., Kolve H.,Kusumi K., Chaput A., T. Rei
nhart T., Muchmore E., Ronoco J., KaczorekM., Goma
rd E., Gluckman J.-C., and Fultz P.N. (1991). Immu
nization of chimpanzees confers protection against
challenge with human immunodeficiency virus. Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA. 88: 542-546 ；Koff W.C. a
nd Hoth D.F. (1988). Development and testing of AI
DS vaccines. Science 241:426-432 ；Lasky L.A. (198
9). Current status of the development of an AIDS v
accine.Critical Rev. Immunol. 9:153-172 ；Neurath,
A.R., N. Strick, and E.S.Y.Lee. (1990). B cell ep
itope mappingof human immunodeficiency virus envel
ope glycoproteins with long (19-to-36-residue) syn
thetic peptides. J. Gen. Virol. 71:85-95 ；Palker
T.J., Clark M.E., Langlois A.J., Mattehews T.J., W
einhold K.J., Randal R.R., Bolognesi D.P. and Hayn
es B.F. (1988). Type-specific neutralization of th
e human immunodeficiency virus with antibodies to
env-encoded synthetic peptides. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA. 85:1932-1936 ；Palker T.J., Matthews T.
J., Langlois A., Tanner M.E., Martin M.E., Scearce
R.M., Kim J.E., Berzofsky J.A., Bolognesi D.P. an
d Haynes B.F. (1989). Polyvalent human immunodefic
iency virus synthetic immunogen comprisedof envelo
pe gp120 T helper cell sites and B cell neutraliza
tion epitopes. J. Immunol. 142:3612-3619 ；Takahas
hi H., Takehisa T., Morein B., Putney S., Germain
R.N. and Berzofsky J.A. (1990). Induction of CD8
+ cytotoxic T cells by immunization with purified
HIV-1 envelope protein in ISCOMS. Nature 344:873-
87；Wintsch J., Chaignat C.-L., Braun D.G., Jeanne
t M., Stalder H., Abrignani S., Montagna D., Clavi
jo F., Moret P., Dayer J. M., Staehelin T., Barbar
a D., Kathelyn S., Steimer K.S., Dina D. and Cruch
aua A. (1991). Safety and Immunogenicity of a gene
tically engineered human immunodeficiencyvirus vac
cine. J. Inf. Dis. 163:219-225 ；Wong, C.Y., Loone
y D.J., LiM.L., Walfield A.M., YEJ., Hoseim B., Ta
m J.P., and Wong-Staal F. (1991).Long-term high-ti
ter neutralizing activity induced by octameric syn
thetic HIV-1 antigen. Science 254:285-288；Zuckerm
an, A.J. (1988). Prospects for vaccines against HI
V. A vaccine for routine use is at least five to 1
0 years away. Brit.Med.J. 297:86-88）。
治療法については、現在、数多くの研究がなされてお
り、ＨＩＶに対するワクチンの開発についても、いくつ
かの報告がなされている（例えば、Ada G. (1989). Pro
spects for a vaccine againstHIV. Nature 339:331-33
2；Boucher C.A.B., Krone W.J., Goudsmit J., Meloen
R.H., Naylor P.H., Goldstein A.L., Sun D.K. and S
arin P.S. (1990). Immune response and epitope mapp
ing of a candidate HIV-1 p17 vaccine HGP130. J.Cli
n. Lab. Anal. 4:43-47；Doling R., Graham B.S.,Gree
nberg S.B., Tacket C.O., Belshe R.B., MidthunK., C
lements M.L., Gorse G.J., Horgan B.W., Atmar R.L.,
Karzon D.T., Bonnez W., Fernie B.F., Montefiori
D.C., Stablein D.M., Smith G.E. and Koff W.C. (199
1). The safety and immunogenicity a human immunode
ficiency virus type 1 (HIV-1) recombinant gp160 ca
ndidate vaccine in humans. Ann. Int. Med. 114:119-
127；Fultz P.N., Nara P., Bearre-Sinoussi F., Chap
ut A., Greenblerg ML., Muchmore E., Kieny M.P., an
d Girard M. (1992). Vaccine protection fo chimpanz
ees against challenge with HIV-1-infected peripher
al blood mononuclearcells. Science 256:1687-1690；
Girard M., Kieny M.-P., Pinter A., Barre-Sinoussi
F., Nara P., Kolve H.,Kusumi K., Chaput A., T. Rei
nhart T., Muchmore E., Ronoco J., KaczorekM., Goma
rd E., Gluckman J.-C., and Fultz P.N. (1991). Immu
nization of chimpanzees confers protection against
challenge with human immunodeficiency virus. Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA. 88: 542-546 ；Koff W.C. a
nd Hoth D.F. (1988). Development and testing of AI
DS vaccines. Science 241:426-432 ；Lasky L.A. (198
9). Current status of the development of an AIDS v
accine.Critical Rev. Immunol. 9:153-172 ；Neurath,
A.R., N. Strick, and E.S.Y.Lee. (1990). B cell ep
itope mappingof human immunodeficiency virus envel
ope glycoproteins with long (19-to-36-residue) syn
thetic peptides. J. Gen. Virol. 71:85-95 ；Palker
T.J., Clark M.E., Langlois A.J., Mattehews T.J., W
einhold K.J., Randal R.R., Bolognesi D.P. and Hayn
es B.F. (1988). Type-specific neutralization of th
e human immunodeficiency virus with antibodies to
env-encoded synthetic peptides. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA. 85:1932-1936 ；Palker T.J., Matthews T.
J., Langlois A., Tanner M.E., Martin M.E., Scearce
R.M., Kim J.E., Berzofsky J.A., Bolognesi D.P. an
d Haynes B.F. (1989). Polyvalent human immunodefic
iency virus synthetic immunogen comprisedof envelo
pe gp120 T helper cell sites and B cell neutraliza
tion epitopes. J. Immunol. 142:3612-3619 ；Takahas
hi H., Takehisa T., Morein B., Putney S., Germain
R.N. and Berzofsky J.A. (1990). Induction of CD8
+ cytotoxic T cells by immunization with purified
HIV-1 envelope protein in ISCOMS. Nature 344:873-
87；Wintsch J., Chaignat C.-L., Braun D.G., Jeanne
t M., Stalder H., Abrignani S., Montagna D., Clavi
jo F., Moret P., Dayer J. M., Staehelin T., Barbar
a D., Kathelyn S., Steimer K.S., Dina D. and Cruch
aua A. (1991). Safety and Immunogenicity of a gene
tically engineered human immunodeficiencyvirus vac
cine. J. Inf. Dis. 163:219-225 ；Wong, C.Y., Loone
y D.J., LiM.L., Walfield A.M., YEJ., Hoseim B., Ta
m J.P., and Wong-Staal F. (1991).Long-term high-ti
ter neutralizing activity induced by octameric syn
thetic HIV-1 antigen. Science 254:285-288；Zuckerm
an, A.J. (1988). Prospects for vaccines against HI
V. A vaccine for routine use is at least five to 1
0 years away. Brit.Med.J. 297:86-88）。
【０００４】また、近年の遺伝子工学の発達により、特
定配列のペプチド合成が可能となっており、このように
して合成されたペプチドを用いてワクチンを調製できる
ようになっている。合成ワクチンは、全ウィルスまたは
ウィルス蛋白より調製されたワクチンと比較してより安
全性が高く、また変更自在であるという利点を有してい
る。ＨＩＶワクチン用の合成ペプチドとしても、いくつ
かの研究所においてすでに調製されている（例えば、Bo
lognes D.P. (1989). Prospects for prevention of an
d early intervention against HIV. JAMA 261: 3007-3
013 ；Girard et al (1991) 前述；Nara P.L. and Fi
schinger. (1988-a). Quantitative infectively assay
for HIV-1 and -2. Nature 332:469-470 ；Profy A.
T., Salinas P.A., Eekler L.I., Dunlop N.M., Nara
P.L. and PutneyS.D. (1990). Epitopes recognized by
the neutralizing antibodies of an HIV-1 infected
individual. J. Immunol. 144:4641-4647 ）。
定配列のペプチド合成が可能となっており、このように
して合成されたペプチドを用いてワクチンを調製できる
ようになっている。合成ワクチンは、全ウィルスまたは
ウィルス蛋白より調製されたワクチンと比較してより安
全性が高く、また変更自在であるという利点を有してい
る。ＨＩＶワクチン用の合成ペプチドとしても、いくつ
かの研究所においてすでに調製されている（例えば、Bo
lognes D.P. (1989). Prospects for prevention of an
d early intervention against HIV. JAMA 261: 3007-3
013 ；Girard et al (1991) 前述；Nara P.L. and Fi
schinger. (1988-a). Quantitative infectively assay
for HIV-1 and -2. Nature 332:469-470 ；Profy A.
T., Salinas P.A., Eekler L.I., Dunlop N.M., Nara
P.L. and PutneyS.D. (1990). Epitopes recognized by
the neutralizing antibodies of an HIV-1 infected
individual. J. Immunol. 144:4641-4647 ）。
【０００５】また、ＨＩＶの表面蛋白であるｇｐ１２０
のＶ３領域と呼ばれる部位の中で特にＰＮＤ（principa
l neutralizing determinant）と呼ばれる部位に対する
抗体が、強いウィルス中和能を持つことが知られている
（例えば、Goudsmit J., Debouck C., Meloen R.H., Sm
it L., Bakker M.A., Asher D.A., Wolff A.V., Gibbs
C.J., Jr. and Gajdusek D.C. (1988). Human immunode
ficiency virus type1 neutralization epitope with c
onserved architecture elicits early type-specific
antibodies in experimentally infected chimpanzees.
Proc. Natl.Acad. Sci.USA 85:4478-4482；Nara P.L.
and Fischinger. (1988-a) 前述；Robinson W.E.,Kawa
mura Jr. T., Lake D., Masuho Y., Mitchell W.M. and
Hersh E.M. (1990). Antibodies to the primary immu
nodominant domain of humanimmounodeficiency virus
type 1 (HIV-1) glycoprotein gp41 enhance HIV-1infe
ction invitro. J. Virol. 64:5301-5305 ；Takahashi
H., Cohen J., Hosmalin A., Cease K.B., Houghten
R., Cornette J.L., Delisi C., Moss B., Germain R.
N. and Berzofsky J.A. (1988). An immunodominant ep
itope of the human immunodeficiency virus envelope
glycoprotein gp160 recognized by class I major hi
stocompatibility complex molecule-restricted murin
e cytotoxic T lymphocytes. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA. 85:310,5-3109 ）。しかしながら、この部位のア
ミノ酸の配列は、ＨＩＶの種類により非常に変異が多
く、エイズワクチンの開発を非常に困難にしている。
のＶ３領域と呼ばれる部位の中で特にＰＮＤ（principa
l neutralizing determinant）と呼ばれる部位に対する
抗体が、強いウィルス中和能を持つことが知られている
（例えば、Goudsmit J., Debouck C., Meloen R.H., Sm
it L., Bakker M.A., Asher D.A., Wolff A.V., Gibbs
C.J., Jr. and Gajdusek D.C. (1988). Human immunode
ficiency virus type1 neutralization epitope with c
onserved architecture elicits early type-specific
antibodies in experimentally infected chimpanzees.
Proc. Natl.Acad. Sci.USA 85:4478-4482；Nara P.L.
and Fischinger. (1988-a) 前述；Robinson W.E.,Kawa
mura Jr. T., Lake D., Masuho Y., Mitchell W.M. and
Hersh E.M. (1990). Antibodies to the primary immu
nodominant domain of humanimmounodeficiency virus
type 1 (HIV-1) glycoprotein gp41 enhance HIV-1infe
ction invitro. J. Virol. 64:5301-5305 ；Takahashi
H., Cohen J., Hosmalin A., Cease K.B., Houghten
R., Cornette J.L., Delisi C., Moss B., Germain R.
N. and Berzofsky J.A. (1988). An immunodominant ep
itope of the human immunodeficiency virus envelope
glycoprotein gp160 recognized by class I major hi
stocompatibility complex molecule-restricted murin
e cytotoxic T lymphocytes. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA. 85:310,5-3109 ）。しかしながら、この部位のア
ミノ酸の配列は、ＨＩＶの種類により非常に変異が多
く、エイズワクチンの開発を非常に困難にしている。
【０００６】またラロッサ(LaRosa ）らや、パルカー(P
alker)らもＶ３ペプチドがワクチンとして重要であると
して、これを合成して種々検討している（LaRosa G.J.,
Davide J.P., Weinhold K., Waterbury J.A., Profy
A.T., Lewis J.A., LangloisA.J., Dressman G.R., Bos
well R.N., Shadduck P., Holley L.H., Kapplus M.,Bo
longensi D.P., Matthews T.J., Emini E.A. and Putne
y S.D. (1990). Conserved sequence and structural e
lements in the HIV-1 principal neutralizing determ
inant. Science 249:932-935 およびPalker et al. (19
89) 前述）。
alker)らもＶ３ペプチドがワクチンとして重要であると
して、これを合成して種々検討している（LaRosa G.J.,
Davide J.P., Weinhold K., Waterbury J.A., Profy
A.T., Lewis J.A., LangloisA.J., Dressman G.R., Bos
well R.N., Shadduck P., Holley L.H., Kapplus M.,Bo
longensi D.P., Matthews T.J., Emini E.A. and Putne
y S.D. (1990). Conserved sequence and structural e
lements in the HIV-1 principal neutralizing determ
inant. Science 249:932-935 およびPalker et al. (19
89) 前述）。
【０００７】ラロッサは、ＨＩＶにおける抗原性変異は
頻繁に起るが、アミノ酸配列はＰＣＲ（Polymerized ch
ain reaction）を用いて容易に決定できること、またこ
のＰＣＲ法を使用して北米の約２００例のＨＩＶ患者の
Ｖ３領域のアミノ酸配列を決定したところ、ＨＩＶの抗
原性変異にもある程度の規則性があり、それゆえ、ある
限られた地域のワクチンにはＶ３領域ペプチドが重要で
かつ有効であることを報告している。
頻繁に起るが、アミノ酸配列はＰＣＲ（Polymerized ch
ain reaction）を用いて容易に決定できること、またこ
のＰＣＲ法を使用して北米の約２００例のＨＩＶ患者の
Ｖ３領域のアミノ酸配列を決定したところ、ＨＩＶの抗
原性変異にもある程度の規則性があり、それゆえ、ある
限られた地域のワクチンにはＶ３領域ペプチドが重要で
かつ有効であることを報告している。
【０００８】またパルカーらは、Ｖ３領域ペプチドのＮ
末端部位のアミノ酸配列、例えば、ＨＩＶ IIIB 株のＶ
３領域ペプチドの例えばＣＴＲＰＮＮＮフラグメント
が、いくつかのＨＩＶに反応する交差反応性抗体を誘導
し得るだろうことを提唱している。
末端部位のアミノ酸配列、例えば、ＨＩＶ IIIB 株のＶ
３領域ペプチドの例えばＣＴＲＰＮＮＮフラグメント
が、いくつかのＨＩＶに反応する交差反応性抗体を誘導
し得るだろうことを提唱している。
【０００９】このようなＶ3 領域ペプチド以外について
も、ワクチンとしての有効性が検討されている。アカー
(Achour)らは、ＨＩＶの内部蛋白であるｇａｇと呼ばれ
る蛋白の一部のペプチド構造（ＨＧＰ−３０）がＨＩＶ
の中和抗体を産生することを見い出した（Achour, A.,
Picard O.,Zagury D., Sarin P.S., Gallo R.C., Naylo
r P.H., and Goldstein A.L. (1990). HGP-30 a, synth
etic analogue of human immunodeficiency virus (HI
V) p17, is a target for cytotoxic lymphocytes in H
IV-infected individuals. Proc. Nat. Acad. Sci. USA
87:7045-7049）。このペプチドの利点は、すべてのＨ
ＩＶにこの配列が変化せず存在することであり、この抗
原決定基（ＨＧＰ−３０）に対する抗体は全てのＨＩＶ
に対して有効であるということである。しかしながら、
前述したＧＰ１２０のＶ３ペプチドの免疫により得られ
た抗体よりも、ＨＩＶの中和能力が弱いという欠点があ
る。
も、ワクチンとしての有効性が検討されている。アカー
(Achour)らは、ＨＩＶの内部蛋白であるｇａｇと呼ばれ
る蛋白の一部のペプチド構造（ＨＧＰ−３０）がＨＩＶ
の中和抗体を産生することを見い出した（Achour, A.,
Picard O.,Zagury D., Sarin P.S., Gallo R.C., Naylo
r P.H., and Goldstein A.L. (1990). HGP-30 a, synth
etic analogue of human immunodeficiency virus (HI
V) p17, is a target for cytotoxic lymphocytes in H
IV-infected individuals. Proc. Nat. Acad. Sci. USA
87:7045-7049）。このペプチドの利点は、すべてのＨ
ＩＶにこの配列が変化せず存在することであり、この抗
原決定基（ＨＧＰ−３０）に対する抗体は全てのＨＩＶ
に対して有効であるということである。しかしながら、
前述したＧＰ１２０のＶ３ペプチドの免疫により得られ
た抗体よりも、ＨＩＶの中和能力が弱いという欠点があ
る。
【００１０】しかしながら、このような合成ペプチド
は、その分子量が５０００程度のために、免疫原性は、
多くの自然蛋白に比し弱いことが知られており、従来、
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）やヘモシアニン（ＫＬ
Ｈ）等の担体蛋白に結合させて複合体化されてきたが、
高い抗体価の抗体産生は得られなかった。。
は、その分子量が５０００程度のために、免疫原性は、
多くの自然蛋白に比し弱いことが知られており、従来、
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）やヘモシアニン（ＫＬ
Ｈ）等の担体蛋白に結合させて複合体化されてきたが、
高い抗体価の抗体産生は得られなかった。。
【００１１】ペプチドの免疫原性を高める方法としても
いくつかの方法が知られている。例えば、ナーデリイ
（Nardelly）らは、分枝リジンポリマー樹脂ビーズ上で
α−およびε−アミノ基を利用して、固相合成法によっ
てアミノ酸を連続的に接合することによって抗原性ペプ
チドを合成することができることを報告している（Nard
elly B.,Lu Y-A., Shiu DR., Delpierre-Defoort C., P
roty, A.T. and Tam J.P. (1992). A chemically defin
ed synthetic vaccine model for HIV-1. J. Immunol.
148:914-920 ) 。このＭＡＰ（multiple antigen pepti
de）法と呼ばれる方法は、分子量が１万以上の高密度の
抗原ペプチドを含む高分子のものになるため、従来ペプ
チドを免疫するときに必須であったＫＬＨ等の担体蛋白
を使用する必要がなく、かつ免疫原性が普通のペプチド
に比し著しく高いものとなるという利点を有している。
しかしながら、このＭＡＰ法においては、合成途中で精
製がほとんどできず、誤ってないしは不完全に合成され
たペプチド群も最終的に得られる製品中に含まれてしま
うという欠点を有している。加えて、この複合蛋白分子
における単一のペプチドのアミノ酸配列を決定すること
は非常に難しいものであった。
いくつかの方法が知られている。例えば、ナーデリイ
（Nardelly）らは、分枝リジンポリマー樹脂ビーズ上で
α−およびε−アミノ基を利用して、固相合成法によっ
てアミノ酸を連続的に接合することによって抗原性ペプ
チドを合成することができることを報告している（Nard
elly B.,Lu Y-A., Shiu DR., Delpierre-Defoort C., P
roty, A.T. and Tam J.P. (1992). A chemically defin
ed synthetic vaccine model for HIV-1. J. Immunol.
148:914-920 ) 。このＭＡＰ（multiple antigen pepti
de）法と呼ばれる方法は、分子量が１万以上の高密度の
抗原ペプチドを含む高分子のものになるため、従来ペプ
チドを免疫するときに必須であったＫＬＨ等の担体蛋白
を使用する必要がなく、かつ免疫原性が普通のペプチド
に比し著しく高いものとなるという利点を有している。
しかしながら、このＭＡＰ法においては、合成途中で精
製がほとんどできず、誤ってないしは不完全に合成され
たペプチド群も最終的に得られる製品中に含まれてしま
うという欠点を有している。加えて、この複合蛋白分子
における単一のペプチドのアミノ酸配列を決定すること
は非常に難しいものであった。
【００１２】またヘルパーＴ細胞を活性化するＨＩＶの
表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトープ（以下、Ｔ細胞エ
ピトープと記する。）を前記Ｖ３領域ペプチド（Ｂ細胞
エピトープ）と組合せて用いることも検討されている。
パルカー（Palker et al. (1989) 前述）らは、破傷風
毒素を担体とし、Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープ
とをＮ末端からＴＢの順に結合させた場合、ヤギにおい
て顕著な抗体価が得られたことを報告している。またレ
ブリーら(Levely ）らは、体液応答を刺激するにはＴＢ
配列がＢＴ配列よりもより効果的であることを報告して
いる（Levely,M.E., Mitchell M.A., and Nicholas J.
A. (1990). Synthetic immunogens constructed from T
-cell and B-cell stimulating peptides (T:B Chimera
s): Preferential stimulation of unique T-and B-cel
l specificities is influencedby immunogen configur
ation. Cell. Immunol. 125:65-78 ）。なお、ナーデ
リイ(Nardelly)らは、前記したようなＭＡＰ配座におけ
るＢＴ配列の有効性を示している（Nardelly et al (1
992) 前述）。
表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトープ（以下、Ｔ細胞エ
ピトープと記する。）を前記Ｖ３領域ペプチド（Ｂ細胞
エピトープ）と組合せて用いることも検討されている。
パルカー（Palker et al. (1989) 前述）らは、破傷風
毒素を担体とし、Ｔ細胞エピトープとＢ細胞エピトープ
とをＮ末端からＴＢの順に結合させた場合、ヤギにおい
て顕著な抗体価が得られたことを報告している。またレ
ブリーら(Levely ）らは、体液応答を刺激するにはＴＢ
配列がＢＴ配列よりもより効果的であることを報告して
いる（Levely,M.E., Mitchell M.A., and Nicholas J.
A. (1990). Synthetic immunogens constructed from T
-cell and B-cell stimulating peptides (T:B Chimera
s): Preferential stimulation of unique T-and B-cel
l specificities is influencedby immunogen configur
ation. Cell. Immunol. 125:65-78 ）。なお、ナーデ
リイ(Nardelly)らは、前記したようなＭＡＰ配座におけ
るＢＴ配列の有効性を示している（Nardelly et al (1
992) 前述）。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】このように従来エイズ
ワクチンとして各種の報告がなされているにもかかわら
ず、安全性が高くしかも予防効果の高い決定的なワクチ
ンは未だ報告されていない。
ワクチンとして各種の報告がなされているにもかかわら
ず、安全性が高くしかも予防効果の高い決定的なワクチ
ンは未だ報告されていない。
【００１４】従って本発明は、新規なエイズワクチンを
提供することを目的とする。本発明はまた、安全性が高
く、かつ種々のＨＩＶの変異株に対して高い抗体価を得
ることができ、予防効果および治療効果の高いエイズワ
クチンを提供することを目的とする。
提供することを目的とする。本発明はまた、安全性が高
く、かつ種々のＨＩＶの変異株に対して高い抗体価を得
ることができ、予防効果および治療効果の高いエイズワ
クチンを提供することを目的とする。
【００１５】
【課題を解決するための手段】上記諸目的は、ＨＩＶエ
ンベロープのｇｐ１２０のＶ３領域ペプチドを含有する
ワクチンであって、前記Ｖ３領域ペプチドは合成された
ものであり、かつそのＣ末端側において分枝リジンオリ
ゴマーよりなる核体の各分岐に接合されていることを特
徴とするエイズワクチンによって達成される。
ンベロープのｇｐ１２０のＶ３領域ペプチドを含有する
ワクチンであって、前記Ｖ３領域ペプチドは合成された
ものであり、かつそのＣ末端側において分枝リジンオリ
ゴマーよりなる核体の各分岐に接合されていることを特
徴とするエイズワクチンによって達成される。
【００１６】本発明はまた、前記Ｖ３領域ペプチドのＣ
末端には、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトー
プのペプチドが結合されているエイズワクチンを示すも
のである。本発明はさらに、前記Ｖ３領域ペプチドとし
て複数株由来のもの、例えば、ＨＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴ
ＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶタイＢ型の３株由来のもの
を用い、多価ワクチンとしているエイズワクチンを示す
ものである。本発明はさらに、分枝リジンオリゴマーよ
りなる核体の各分枝に接合された、ＨＩＶの内部蛋白の
ｇａｇ領域のペプチドをさらに含むエイズワクチンを示
すものである。本発明はまた、分枝リジンオリゴマー１
分子当り前記合成Ｖ３領域ペプチドが８〜１６つ接合し
てなるものエイズワクチンを提供するものである。本発
明はさらに、前記分枝リジンオリゴマーのペプチド接合
状態における平均分子量が４００００〜６００００であ
るエイズワクチンを示すものである。
末端には、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトー
プのペプチドが結合されているエイズワクチンを示すも
のである。本発明はさらに、前記Ｖ３領域ペプチドとし
て複数株由来のもの、例えば、ＨＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴ
ＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶタイＢ型の３株由来のもの
を用い、多価ワクチンとしているエイズワクチンを示す
ものである。本発明はさらに、分枝リジンオリゴマーよ
りなる核体の各分枝に接合された、ＨＩＶの内部蛋白の
ｇａｇ領域のペプチドをさらに含むエイズワクチンを示
すものである。本発明はまた、分枝リジンオリゴマー１
分子当り前記合成Ｖ３領域ペプチドが８〜１６つ接合し
てなるものエイズワクチンを提供するものである。本発
明はさらに、前記分枝リジンオリゴマーのペプチド接合
状態における平均分子量が４００００〜６００００であ
るエイズワクチンを示すものである。
【００１７】上記諸目的はまた、ＨＩＶエンベロープの
ｇｐ１２０のＶ３領域ペプチドを合成し、そのＣ末端部
位にシステインを導入した後、当該Ｃ末端を分枝リジン
オリゴマーの各分枝アミノ基末端に化学修飾試薬を用い
て共有結合させることを特徴とするエイズワクチンの製
造方法によっても達成される。
ｇｐ１２０のＶ３領域ペプチドを合成し、そのＣ末端部
位にシステインを導入した後、当該Ｃ末端を分枝リジン
オリゴマーの各分枝アミノ基末端に化学修飾試薬を用い
て共有結合させることを特徴とするエイズワクチンの製
造方法によっても達成される。
【００１８】本発明はまた、ＨＩＶエンベロープのｇｐ
１２０のＶ３領域ペプチドを合成し、そのＣ末端にＨＩ
Ｖの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトープのペプチドを
結合し、さらに得られたペプチドのＣ末端にシステイン
を導入した後、当該Ｃ末端を分枝リジンオリゴマーの各
分枝アミノ基末端に化学修飾試薬を用いて共有結合させ
ることを特徴とするエイズワクチンの製造方法を示すも
のである。本発明はさらに、Ｖ３領域ペプチドとして複
数株由来のＶ３領域ペプチドを混合して用いるものであ
るエイズワクチンの製造方法を示すものである。本発明
はさらに、Ｖ３領域ペプチドにＴ細胞抗原エピトープの
ペプチドを結合したものと共に、ＨＩＶの内部蛋白のｇ
ａｇ領域のペプチドを、分枝リジンオリゴマーの各分枝
アミノ基末端に化学修飾試薬を用いて共有結合させるエ
イズワクチンの製造方法を示すものである。本発明の製
造方法はまた、Ｖ３領域ペプチドとして複数株由来のＶ
３領域ペプチドを用い、それぞれ単独で分枝リジンオリ
ゴマーの各分枝アミノ基末端に化学修飾試薬を用いて共
有結合させたのち、得られた各株由来のＶ３領域ペプチ
ド結合リジンオリゴマーを混合するものであってもよ
い。本発明の製造方法はさらに、ＨＩＶの内部蛋白のｇ
ａｇ領域のペプチドを、分枝リジンオリゴマーの各分枝
アミノ基末端に共有結合させたものを、各株由来のＶ３
領域ペプチド結合リジンオリゴマーと混合するものであ
ってもよい。
１２０のＶ３領域ペプチドを合成し、そのＣ末端にＨＩ
Ｖの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトープのペプチドを
結合し、さらに得られたペプチドのＣ末端にシステイン
を導入した後、当該Ｃ末端を分枝リジンオリゴマーの各
分枝アミノ基末端に化学修飾試薬を用いて共有結合させ
ることを特徴とするエイズワクチンの製造方法を示すも
のである。本発明はさらに、Ｖ３領域ペプチドとして複
数株由来のＶ３領域ペプチドを混合して用いるものであ
るエイズワクチンの製造方法を示すものである。本発明
はさらに、Ｖ３領域ペプチドにＴ細胞抗原エピトープの
ペプチドを結合したものと共に、ＨＩＶの内部蛋白のｇ
ａｇ領域のペプチドを、分枝リジンオリゴマーの各分枝
アミノ基末端に化学修飾試薬を用いて共有結合させるエ
イズワクチンの製造方法を示すものである。本発明の製
造方法はまた、Ｖ３領域ペプチドとして複数株由来のＶ
３領域ペプチドを用い、それぞれ単独で分枝リジンオリ
ゴマーの各分枝アミノ基末端に化学修飾試薬を用いて共
有結合させたのち、得られた各株由来のＶ３領域ペプチ
ド結合リジンオリゴマーを混合するものであってもよ
い。本発明の製造方法はさらに、ＨＩＶの内部蛋白のｇ
ａｇ領域のペプチドを、分枝リジンオリゴマーの各分枝
アミノ基末端に共有結合させたものを、各株由来のＶ３
領域ペプチド結合リジンオリゴマーと混合するものであ
ってもよい。
【００１９】
【作用】本発明者らは、エイズワクチンとして安全性が
高くかつ抗体価の高いものを得るために、鋭意研究の結
果、ＨＩＶエンベロープのｇｐ１２０のＶ３領域ペプチ
ドを合成し、これを別途調製した分枝リジンオリゴマー
に接合させることで、分子量が４〜６万と巨大なペプチ
ドを形成する方法を開発したものである。このように巨
大分子化すること、また分枝構造のリジンオリゴマーを
核体として用い１分子当りに結合するＶ３領域ペプチド
の数を殖やしたことで、高い免疫原性が付与され高密度
のペプチドを含むことができるものである。また導入さ
れたペプチド数が定量できるため、ワクチン投与におい
て最も効果的な抗原量に容易に調製できる。また、この
ような方法によれば、ナーデレイ（Nardelly）らの提唱
したＭＡＰ法とは異なり、予めＶ３領域ペプチドを合成
するため、合成途中で生じる不完全ペプチドを精製工程
を設けて除去することができ、目的とする完全ペプチド
のみをリジンオリゴマーに結合させることができるた
め、得られる巨大ペプチドは均一性および有効性を高め
ることができる。
高くかつ抗体価の高いものを得るために、鋭意研究の結
果、ＨＩＶエンベロープのｇｐ１２０のＶ３領域ペプチ
ドを合成し、これを別途調製した分枝リジンオリゴマー
に接合させることで、分子量が４〜６万と巨大なペプチ
ドを形成する方法を開発したものである。このように巨
大分子化すること、また分枝構造のリジンオリゴマーを
核体として用い１分子当りに結合するＶ３領域ペプチド
の数を殖やしたことで、高い免疫原性が付与され高密度
のペプチドを含むことができるものである。また導入さ
れたペプチド数が定量できるため、ワクチン投与におい
て最も効果的な抗原量に容易に調製できる。また、この
ような方法によれば、ナーデレイ（Nardelly）らの提唱
したＭＡＰ法とは異なり、予めＶ３領域ペプチドを合成
するため、合成途中で生じる不完全ペプチドを精製工程
を設けて除去することができ、目的とする完全ペプチド
のみをリジンオリゴマーに結合させることができるた
め、得られる巨大ペプチドは均一性および有効性を高め
ることができる。
【００２０】また、本発明においては、前記Ｖ３領域ペ
プチドとして複数株由来のもの、特に、ＨＴＬＶ-IIIB
型、ＨＴＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶタイＢ型の３株由
来のものを用いること好ましいが、これは、このような
多価ワクチンで免疫して得られた抗体は、ＨＩＶの各種
の株種に対して増殖抑制効果が得られたという本発明者
の新たな知見に基づくものである。これは、従来、抗Ｖ
３抗体が型特異性が強いと言われてきた点に反する注目
すべき事実であり、おそらくは、複数種の抗Ｖ３抗体が
お互いに相乗効果を及しこのような広範な抑制効果が得
られたものと考えらえる。さらに前記したようなＶ３領
域ペプチドに加えてＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ領域のペ
プチドを分枝リジンオリゴマーに接合した場合には、広
範な株種に対するより高い増殖抑制効果が得られること
を見い出した。
プチドとして複数株由来のもの、特に、ＨＴＬＶ-IIIB
型、ＨＴＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶタイＢ型の３株由
来のものを用いること好ましいが、これは、このような
多価ワクチンで免疫して得られた抗体は、ＨＩＶの各種
の株種に対して増殖抑制効果が得られたという本発明者
の新たな知見に基づくものである。これは、従来、抗Ｖ
３抗体が型特異性が強いと言われてきた点に反する注目
すべき事実であり、おそらくは、複数種の抗Ｖ３抗体が
お互いに相乗効果を及しこのような広範な抑制効果が得
られたものと考えらえる。さらに前記したようなＶ３領
域ペプチドに加えてＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ領域のペ
プチドを分枝リジンオリゴマーに接合した場合には、広
範な株種に対するより高い増殖抑制効果が得られること
を見い出した。
【００２１】本発明においては、さらに、前記Ｖ３領域
ペプチドのＣ末端には、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞
抗原エピトープのペプチドが結合されていることが、免
疫原性を高める上から好ましいが、このようにＢＴの順
序で配列する方がＴＢの順序で配列するよりも高い効果
が得られるという事実は、前記したパルカーらやレブリ
ーらの報告とは相反するものであることは注目すべき点
である。
ペプチドのＣ末端には、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞
抗原エピトープのペプチドが結合されていることが、免
疫原性を高める上から好ましいが、このようにＢＴの順
序で配列する方がＴＢの順序で配列するよりも高い効果
が得られるという事実は、前記したパルカーらやレブリ
ーらの報告とは相反するものであることは注目すべき点
である。
【００２２】以下、本発明を実施態様に基づきより詳細
に説明する。本発明において、Ｖ３領域ペプチドとは、
ＨＩＶのエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）を構成する
分子量約１２万の糖蛋白ｇｐ１２０のアミノ酸位置の３
０３〜３２２の配列の全部又は一部に対応するペプチド
をいう。なお株種によって、そのアミノ酸番号は異なる
場合がある。このようなＶ３領域ペプチドの配列に関し
ては、多くの文献（例えば、Palker et al. (1989) 前
述； Rusche J.R., Javaherian K., Mcdanal C., Petr
o J., Lynn D.L., Grimalia R., Langlois A.,Gallo R.
C., Arthour L.O., Fischinger P.J., Bolognesi D.P.,
Putney S.D.and Matthews T.J. (1988). Antibodies t
hat inhibit fusion of human immunodeficiency virus
-infected cells bind a 24-amino acid sequence of t
he viral envelope, gp120. Proc. Acad. Sci. USA. 8
5:3198-3202）があり、また前述したようなラロッサら
によるＰＣＲ法により容易に決定できる。
に説明する。本発明において、Ｖ３領域ペプチドとは、
ＨＩＶのエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）を構成する
分子量約１２万の糖蛋白ｇｐ１２０のアミノ酸位置の３
０３〜３２２の配列の全部又は一部に対応するペプチド
をいう。なお株種によって、そのアミノ酸番号は異なる
場合がある。このようなＶ３領域ペプチドの配列に関し
ては、多くの文献（例えば、Palker et al. (1989) 前
述； Rusche J.R., Javaherian K., Mcdanal C., Petr
o J., Lynn D.L., Grimalia R., Langlois A.,Gallo R.
C., Arthour L.O., Fischinger P.J., Bolognesi D.P.,
Putney S.D.and Matthews T.J. (1988). Antibodies t
hat inhibit fusion of human immunodeficiency virus
-infected cells bind a 24-amino acid sequence of t
he viral envelope, gp120. Proc. Acad. Sci. USA. 8
5:3198-3202）があり、また前述したようなラロッサら
によるＰＣＲ法により容易に決定できる。
【００２３】具体的には、例えば、下記の配列表におけ
る配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチド（ＨＴＬ
Ｖ-IIIB 型株由来）、配列番号２のアミノ酸配列を有す
るペプチド（タイＡ型株由来）、配列番号３のアミノ酸
配列を有するペプチド（タイＢ型株由来）などといった
アミノ酸残基数２３〜２６程度のペプチドが用いられ
る。もちろん、ある株種のＶ３領域由来のものであれ
ば、ここに例示する以外の配列を用いることは可能であ
る。
る配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチド（ＨＴＬ
Ｖ-IIIB 型株由来）、配列番号２のアミノ酸配列を有す
るペプチド（タイＡ型株由来）、配列番号３のアミノ酸
配列を有するペプチド（タイＢ型株由来）などといった
アミノ酸残基数２３〜２６程度のペプチドが用いられ
る。もちろん、ある株種のＶ３領域由来のものであれ
ば、ここに例示する以外の配列を用いることは可能であ
る。
【００２４】そして本発明において使用するペプチド
は、このようなペプチド配列に基づき、例えば、固相合
成法等の公知のペプチド合成方法、好ましくは自動ペプ
チド合成装置を用いた合成方法により合成したものを用
いる。
は、このようなペプチド配列に基づき、例えば、固相合
成法等の公知のペプチド合成方法、好ましくは自動ペプ
チド合成装置を用いた合成方法により合成したものを用
いる。
【００２５】本発明のエイズワクチンにおいて、上記し
たような各種の合成Ｖ３領域ペプチドをそれぞれ単独で
使用することも可能であるが、複数の株種由来のものを
組合せて用いることが、ＨＩＶの種々の変異に対して防
御効果が認められ、複数種のＨＩＶに対する予防効果を
高める上から望ましい。その組合せとしては、例えば、
ＨＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶ
タイＢ型由来のＶ３領域ペプチド、ＨＴＬＶタイＡ型
およびＨＴＬＶタイＢ型由来のＶ３領域ペプチド、Ｈ
ＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴＬＶ-IIIRF型およびＨＴＬＶ-III
MN型由来のＶ３領域ペプチド、あるいはＨＴＬＶタイ
Ａ型および日本型由来のＶ３領域ペプチド、ＨＴＬＶ
-IIIB 型、ＨＴＬＶ-IIIMN型および日本型由来のＶ３領
域ペプチドなどが考えられるが、好ましくは、上記の
組合せである。これは、本発明者の実際の研究におい
て、多くの株種に対して防御効果が認められたためであ
り、また前記ラロッサらが、Ｖ３領域のアミノ酸配列が
これらの間で変異するとの報告していることとも一致す
る。さらに、本発明者の検討によれば、タイにおいて
は、タイＡ型およびタイＢ型の２つのＶ３アミノ酸配列
しか見られず、このような地域において使用するワクチ
ンとしては前記あるいはの組合せが極めて有効であ
ることが期待できる。
たような各種の合成Ｖ３領域ペプチドをそれぞれ単独で
使用することも可能であるが、複数の株種由来のものを
組合せて用いることが、ＨＩＶの種々の変異に対して防
御効果が認められ、複数種のＨＩＶに対する予防効果を
高める上から望ましい。その組合せとしては、例えば、
ＨＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶ
タイＢ型由来のＶ３領域ペプチド、ＨＴＬＶタイＡ型
およびＨＴＬＶタイＢ型由来のＶ３領域ペプチド、Ｈ
ＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴＬＶ-IIIRF型およびＨＴＬＶ-III
MN型由来のＶ３領域ペプチド、あるいはＨＴＬＶタイ
Ａ型および日本型由来のＶ３領域ペプチド、ＨＴＬＶ
-IIIB 型、ＨＴＬＶ-IIIMN型および日本型由来のＶ３領
域ペプチドなどが考えられるが、好ましくは、上記の
組合せである。これは、本発明者の実際の研究におい
て、多くの株種に対して防御効果が認められたためであ
り、また前記ラロッサらが、Ｖ３領域のアミノ酸配列が
これらの間で変異するとの報告していることとも一致す
る。さらに、本発明者の検討によれば、タイにおいて
は、タイＡ型およびタイＢ型の２つのＶ３アミノ酸配列
しか見られず、このような地域において使用するワクチ
ンとしては前記あるいはの組合せが極めて有効であ
ることが期待できる。
【００２６】このようにＶ３領域ペプチドを複数種組合
せて用いる場合、これらのうちで最もモル数の多いペプ
チドのモル数を１とした際に、最もモル数の小さいペプ
チドのモル数は１／３以上であることが好ましく、更に
１／２以上、特に４／５以上であることが好ましい。通
常は、各ペプチドをほぼ等モル数で使用する。
せて用いる場合、これらのうちで最もモル数の多いペプ
チドのモル数を１とした際に、最もモル数の小さいペプ
チドのモル数は１／３以上であることが好ましく、更に
１／２以上、特に４／５以上であることが好ましい。通
常は、各ペプチドをほぼ等モル数で使用する。
【００２７】本発明において、このような前記Ｖ３領域
ペプチド（Ｂ細胞エピトープペプチド）のみを後述する
ような分枝リジンオリゴマーに共有結合させることもで
きるが、好ましくはこのＢ細胞エピトープペプチドのＣ
末端に、さらにＴ細胞エピトープのペプチドを結合させ
ることが免疫原性を高める上から好ましい。
ペプチド（Ｂ細胞エピトープペプチド）のみを後述する
ような分枝リジンオリゴマーに共有結合させることもで
きるが、好ましくはこのＢ細胞エピトープペプチドのＣ
末端に、さらにＴ細胞エピトープのペプチドを結合させ
ることが免疫原性を高める上から好ましい。
【００２８】ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピト
ープ（Ｔ細胞エピトープ）とは、ＨＩＶのエンベロープ
蛋白を構成するｇｐ１２０のアミノ酸位置４３０〜４４
５の配列の全部又は一部に対応するペプチドをいい、例
えば、シーセ(Cease）らによって述べられているもので
ある（Cease. B., Margalit H., Cornette J.L., Putne
y S.D., Robey W.G., Ouyang C., Streicher H.Z., Fic
hinger P.J., Gallo R.C., Charles D., and Berzofsky
J.A. (1987). Helper T-cell antigenic siteindentif
ication in the acquired immunodeficiency syndrome
virus gp120 envelope protein and induction of immu
nity in mice to the native proteinusing a 16-resid
ue synthetic peptide. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 8
4:4249-4253）。
ープ（Ｔ細胞エピトープ）とは、ＨＩＶのエンベロープ
蛋白を構成するｇｐ１２０のアミノ酸位置４３０〜４４
５の配列の全部又は一部に対応するペプチドをいい、例
えば、シーセ(Cease）らによって述べられているもので
ある（Cease. B., Margalit H., Cornette J.L., Putne
y S.D., Robey W.G., Ouyang C., Streicher H.Z., Fic
hinger P.J., Gallo R.C., Charles D., and Berzofsky
J.A. (1987). Helper T-cell antigenic siteindentif
ication in the acquired immunodeficiency syndrome
virus gp120 envelope protein and induction of immu
nity in mice to the native proteinusing a 16-resid
ue synthetic peptide. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 8
4:4249-4253）。
【００２９】具体的には、以下の配列表の配列番号７に
示されるような配列を有するアミノ酸残基数１５程度の
ペプチドが用いられる。もちろん、ある株種のＴ細胞エ
ピトープ由来のものであれば、ここに例示する以外の配
列を用いることは可能である。
示されるような配列を有するアミノ酸残基数１５程度の
ペプチドが用いられる。もちろん、ある株種のＴ細胞エ
ピトープ由来のものであれば、ここに例示する以外の配
列を用いることは可能である。
【００３０】さらに本発明においては、上記したような
Ｖ３領域ペプチドに加えて、ＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ
領域のペプチドを、後述するような分枝状リジンオリゴ
マーに結合させることが好ましい。このペプチドは、さ
らに詳しくはｇａｇを構成する分子量約１万７千のタン
パク質（ｐ１７）の一部と同一又は類似の配列を有する
不変部位ペプチドであり（Achour et al (1990) 前述）
あり、具体的には、例えば、以下のような配列表におけ
る配列番号８に示されるようなアミノ酸配列をを有する
アミノ酸残基数２５〜３０程度のペプチドが用いられ
る。もちろん、ここに例示する以外の配列を用いること
は可能である。
Ｖ３領域ペプチドに加えて、ＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ
領域のペプチドを、後述するような分枝状リジンオリゴ
マーに結合させることが好ましい。このペプチドは、さ
らに詳しくはｇａｇを構成する分子量約１万７千のタン
パク質（ｐ１７）の一部と同一又は類似の配列を有する
不変部位ペプチドであり（Achour et al (1990) 前述）
あり、具体的には、例えば、以下のような配列表におけ
る配列番号８に示されるようなアミノ酸配列をを有する
アミノ酸残基数２５〜３０程度のペプチドが用いられ
る。もちろん、ここに例示する以外の配列を用いること
は可能である。
【００３１】なお、上記したようなＶ３領域ペプチドに
加えて、このようなｇａｇ領域ペプチドを用いる場合、
ワクチンにおけるＶ３領域ペプチドとｇａｇ領域ペプチ
ドとのモル比は、等比が望ましく、全体としてはＶ3 領
域ペプチドを４種類使用した場合は４：１となる。
加えて、このようなｇａｇ領域ペプチドを用いる場合、
ワクチンにおけるＶ３領域ペプチドとｇａｇ領域ペプチ
ドとのモル比は、等比が望ましく、全体としてはＶ3 領
域ペプチドを４種類使用した場合は４：１となる。
【００３２】しかして、本発明においては、上記したよ
うな少なくともＶ３領域ペプチドを含むペプチド群を、
それぞれ合成し精製単離した後、別途調製された分枝状
リジンオリゴマーよりなる核体の各分枝末端に結合させ
ることで巨大分子ペプチドを設計することができる。分
子量は、大きければ大きい方が好ましいが、本発明者の
行なった実験によれば、例えば分子量４００００〜６０
０００程度で十分な効果が確認された。もちろんこれ以
上の分子量として設計することは可能である。
うな少なくともＶ３領域ペプチドを含むペプチド群を、
それぞれ合成し精製単離した後、別途調製された分枝状
リジンオリゴマーよりなる核体の各分枝末端に結合させ
ることで巨大分子ペプチドを設計することができる。分
子量は、大きければ大きい方が好ましいが、本発明者の
行なった実験によれば、例えば分子量４００００〜６０
０００程度で十分な効果が確認された。もちろんこれ以
上の分子量として設計することは可能である。
【００３３】この際用いられる分枝状リジンオリゴマー
は、８個以上、例えば１５個を、リジン分子中の２つの
アミノ基を結合に供して複数のアミノ基末端を有するよ
うに分枝状に合成したものであり、従来公知の固相合成
法を用いて調製することができる。図１は、その分子構
造の一例を示すものであり、１５個のリジンを結合させ
て１６のアミノ基末端を形成したものである。なお、こ
の分岐リジンオリゴマー中には、その分枝構造を疎外し
ない範囲で他のアミノ酸残基を含むことは可能である。
なお、このような分岐リジンオリゴマーよりなる核体を
ポリリジン抗原（以下、ＰＫＡと記する。）と呼ぶこと
とする。なお、分子リジンオリゴマーのアミノ基末端の
数を、より多いもの、例えば３２個ないしそれ以上のも
のとしてより大分子量の巨大分子ペプチドを設計するこ
とも可能である。
は、８個以上、例えば１５個を、リジン分子中の２つの
アミノ基を結合に供して複数のアミノ基末端を有するよ
うに分枝状に合成したものであり、従来公知の固相合成
法を用いて調製することができる。図１は、その分子構
造の一例を示すものであり、１５個のリジンを結合させ
て１６のアミノ基末端を形成したものである。なお、こ
の分岐リジンオリゴマー中には、その分枝構造を疎外し
ない範囲で他のアミノ酸残基を含むことは可能である。
なお、このような分岐リジンオリゴマーよりなる核体を
ポリリジン抗原（以下、ＰＫＡと記する。）と呼ぶこと
とする。なお、分子リジンオリゴマーのアミノ基末端の
数を、より多いもの、例えば３２個ないしそれ以上のも
のとしてより大分子量の巨大分子ペプチドを設計するこ
とも可能である。
【００３４】ＰＫＡに対して、上記のごときＶ３領域ペ
プチドなどのＨＩＶ由来のペプチド鎖を結合させるに
は、まずＨＩＶ由来ペプチドのＣ末端側にシステインを
導入し、Ｎ−ヒドロキシサクシイミドエステル等の適当
な化学修飾試薬を用いて結合することができる。
プチドなどのＨＩＶ由来のペプチド鎖を結合させるに
は、まずＨＩＶ由来ペプチドのＣ末端側にシステインを
導入し、Ｎ−ヒドロキシサクシイミドエステル等の適当
な化学修飾試薬を用いて結合することができる。
【００３５】本発明に係わるエイズワクチンとして、複
数の株種由来のＶ３領域ペプチド（もしくはこれにＴ細
胞エピトープペプチドを結合したもの）、あるいはさら
にＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ領域のペプチドを組合せて
多価ワクチンを設計しようとする場合、これらの複数種
のＨＩＶ由来のペプチド鎖をあらかじめ混合して、ＰＫ
Ａに結合させても、あるいはそれぞれ別個にＰＫＡに結
合させ、得られた各ＨＩＶ由来ペプチド結合ＰＫＡを混
合してもよく、さらにこれら２通りの方法を適宜組合せ
てもよい。
数の株種由来のＶ３領域ペプチド（もしくはこれにＴ細
胞エピトープペプチドを結合したもの）、あるいはさら
にＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ領域のペプチドを組合せて
多価ワクチンを設計しようとする場合、これらの複数種
のＨＩＶ由来のペプチド鎖をあらかじめ混合して、ＰＫ
Ａに結合させても、あるいはそれぞれ別個にＰＫＡに結
合させ、得られた各ＨＩＶ由来ペプチド結合ＰＫＡを混
合してもよく、さらにこれら２通りの方法を適宜組合せ
てもよい。
【００３６】本発明に係わるエイズワクチンは、その有
効成分として、上記したようにＶ３領域ペプチド（もし
くはこれにＴ細胞エピトープペプチドを結合したも
の）、あるいはさらにＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ領域の
ペプチドをＰＫＡに結合させた状態で含有するものであ
るが、必要に応じて、公知のアジュバンド等を添加する
ことは任意である。
効成分として、上記したようにＶ３領域ペプチド（もし
くはこれにＴ細胞エピトープペプチドを結合したも
の）、あるいはさらにＨＩＶの内部蛋白のｇａｇ領域の
ペプチドをＰＫＡに結合させた状態で含有するものであ
るが、必要に応じて、公知のアジュバンド等を添加する
ことは任意である。
【００３７】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明する。 実施例１ ペプチドの合成 アプライド バイオシステムス（Applied Biosystems I
nc. ) 製自動ペプチド合成装置を用いて、まず図１に示
すような１６のアミノ基末端を有するＰＫＡを合成し、
樹脂上から切り出して、精製したものを調製した。この
ＰＫＡの理論上の分子量は約５０００である。また同様
のＰＫＡを別途、ペプチド インスティチュート イン
コーポレーテッド社(Peptide Institute Inc.)より購入
し用意した。
説明する。 実施例１ ペプチドの合成 アプライド バイオシステムス（Applied Biosystems I
nc. ) 製自動ペプチド合成装置を用いて、まず図１に示
すような１６のアミノ基末端を有するＰＫＡを合成し、
樹脂上から切り出して、精製したものを調製した。この
ＰＫＡの理論上の分子量は約５０００である。また同様
のＰＫＡを別途、ペプチド インスティチュート イン
コーポレーテッド社(Peptide Institute Inc.)より購入
し用意した。
【００３８】次に、配列表の配列番号１〜３に示される
アミノ酸配列を有する各株種由来のＶ３領域ペプチド、
配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＴ細胞エピ
トープペプチド、配列番号８に示されるアミノ酸配列を
有するｇａｇ領域ペプチドをそれぞれ合成し、ＨＰＬＣ
を用いて精製した。なおこれらのペプチドのＣ末端に
は、上記ＰＫＡとの結合のためにシステインを添加し
た。
アミノ酸配列を有する各株種由来のＶ３領域ペプチド、
配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＴ細胞エピ
トープペプチド、配列番号８に示されるアミノ酸配列を
有するｇａｇ領域ペプチドをそれぞれ合成し、ＨＰＬＣ
を用いて精製した。なおこれらのペプチドのＣ末端に
は、上記ＰＫＡとの結合のためにシステインを添加し
た。
【００３９】これらの合成ペプチドをＰＫＡに結合させ
るための化学修飾試薬としては、Ｎ−サクシンイミジル
マレイミドカルボキシレートを使用した。上記ＰＫＡ
は、この化学修飾試薬によって修飾されることにより、
１分子当りにマレイミド基を１６個有することとなるの
で、このマレイミド基と反応性を有するチオール基を有
する上記ペプチドは、ＰＫＡ１モルに対し１６当量以上
使用した。なお、これらの結合反応を図２に示した。
るための化学修飾試薬としては、Ｎ−サクシンイミジル
マレイミドカルボキシレートを使用した。上記ＰＫＡ
は、この化学修飾試薬によって修飾されることにより、
１分子当りにマレイミド基を１６個有することとなるの
で、このマレイミド基と反応性を有するチオール基を有
する上記ペプチドは、ＰＫＡ１モルに対し１６当量以上
使用した。なお、これらの結合反応を図２に示した。
【００４０】まず、１ｍｇ（０．２×１０-6ｍｏｌ）の
ＰＫＡを、８Ｍ尿素を含んだリン酸バッファ（ｐＨ７．
０）０．５ｍｌに懸濁させる。この際、できるだけ細か
い均質な懸濁液とすることが望ましい。次いでこの懸濁
液に目的とするペプチドを上記と同じバッファ０．５ｍ
ｌに溶かして加え、室温で５時間あるいは冷蔵庫（４
℃）で一晩ＰＫＡと反応させた。反応混液を８Ｍ尿素水
溶液に対して５〜６時間透析した後、分子量８０００〜
１００００以下カット・オフの透析膜（5000-Daポアサ
イズ チュービング フィッシャー サイエンティフィ
ック カンパニー(Fisher Scientific Co.) 製）を使用
し、６リットルのＰＢＳまたは生理食塩水に対して４℃
で透析した。そして、得られた透析内液を乾燥凍結し
た。なお、一部の試料を、接合(conjugation）の度合を
調べるために、アミノ酸分析およびＳＤＳゲル電気泳動
にかけた。
ＰＫＡを、８Ｍ尿素を含んだリン酸バッファ（ｐＨ７．
０）０．５ｍｌに懸濁させる。この際、できるだけ細か
い均質な懸濁液とすることが望ましい。次いでこの懸濁
液に目的とするペプチドを上記と同じバッファ０．５ｍ
ｌに溶かして加え、室温で５時間あるいは冷蔵庫（４
℃）で一晩ＰＫＡと反応させた。反応混液を８Ｍ尿素水
溶液に対して５〜６時間透析した後、分子量８０００〜
１００００以下カット・オフの透析膜（5000-Daポアサ
イズ チュービング フィッシャー サイエンティフィ
ック カンパニー(Fisher Scientific Co.) 製）を使用
し、６リットルのＰＢＳまたは生理食塩水に対して４℃
で透析した。そして、得られた透析内液を乾燥凍結し
た。なお、一部の試料を、接合(conjugation）の度合を
調べるために、アミノ酸分析およびＳＤＳゲル電気泳動
にかけた。
【００４１】コントロールとしては、配列表の配列番号
９のアミノ酸配列を有するマッコウ鯨ミオグロビン抗原
決定基を使用した。
９のアミノ酸配列を有するマッコウ鯨ミオグロビン抗原
決定基を使用した。
【００４２】実施例２ ウサギを用いての免疫原性の検
討 日本ＳＬＣより購入した１０週齢以上のＳＴＤウサギに
対し、上記実施例１により調製したタイＡ型Ｂ細胞エピ
トープペプチド結合ＰＫＡ（以下、ＢＬＯ抗原と記す
る。）を、最初に５０μｇ／Ｋｇ（体重）の割合でフロ
インドの完全アジュバンドと共に免疫した。次に１５、
４０、７０日後に再び同様の免疫を２０μｇ／Ｋｇ（体
重）の割合でフロインドの不完全アジュバンドと共に免
疫した。そして第３回接種後、および第４回接種後に血
清を採取し、以下に述べるようなＥＬＩＳＡ法によって
産生された抗体価を評価した。結果を表１に示す。
討 日本ＳＬＣより購入した１０週齢以上のＳＴＤウサギに
対し、上記実施例１により調製したタイＡ型Ｂ細胞エピ
トープペプチド結合ＰＫＡ（以下、ＢＬＯ抗原と記す
る。）を、最初に５０μｇ／Ｋｇ（体重）の割合でフロ
インドの完全アジュバンドと共に免疫した。次に１５、
４０、７０日後に再び同様の免疫を２０μｇ／Ｋｇ（体
重）の割合でフロインドの不完全アジュバンドと共に免
疫した。そして第３回接種後、および第４回接種後に血
清を採取し、以下に述べるようなＥＬＩＳＡ法によって
産生された抗体価を評価した。結果を表１に示す。
【００４３】一方、比較のために、同じタイＡ型Ｂ細胞
エピトープペプチドを、担体蛋白としてのＫＬＨに結合
させたもの（以下、ＫＬＨ抗原と記する。）、およびＭ
ＡＰ法により合成したもの（以下、ＭＡＰ抗原と記す
る。）を別途用意し、上記と同様の方法でウサギに免疫
し、抗体価を評価した。これらの結果も表１に合せて示
す。
エピトープペプチドを、担体蛋白としてのＫＬＨに結合
させたもの（以下、ＫＬＨ抗原と記する。）、およびＭ
ＡＰ法により合成したもの（以下、ＭＡＰ抗原と記す
る。）を別途用意し、上記と同様の方法でウサギに免疫
し、抗体価を評価した。これらの結果も表１に合せて示
す。
【００４４】なお、ＭＡＰ抗原は、前記ナーデリイらの
文献の記載に基づき４分枝ペプチドとして合成した。ま
たＫＬＨ抗原は、ボーチャー(Boucher) らの記載に基づ
き、ＭＢＳを用いて調製した。
文献の記載に基づき４分枝ペプチドとして合成した。ま
たＫＬＨ抗原は、ボーチャー(Boucher) らの記載に基づ
き、ＭＢＳを用いて調製した。
【００４５】表１に示す結果から明らかなように、本発
明に係わるＢＬＯ抗原で免疫したウサギから得られた血
清中の抗体が最も高い抗体価を示した。次いで、ＭＡＰ
抗原、ＫＬＨ抗原の順であった。このことから、大分子
化したペプチドは抗原性が高くなることがわかる。
明に係わるＢＬＯ抗原で免疫したウサギから得られた血
清中の抗体が最も高い抗体価を示した。次いで、ＭＡＰ
抗原、ＫＬＨ抗原の順であった。このことから、大分子
化したペプチドは抗原性が高くなることがわかる。
【００４６】・ＥＬＩＳＡ法による抗体検査法 矢野間らが述べた方法により抗体価を検討した（Yanoma
S., Aoki I., IshiiN., Tani K., David C.S. and Oku
da K. (1988). The role of autoreactive T-cell hybr
idomas from autoimmune model mice. Immunology 64:1
13-119 ）。概略すると、種々のペプチドを９６穴マイ
クロプレートにコートし、蛋白によりマスクした後、希
釈した抗血清を反応させた後、ＰＢＳで９６穴マイクロ
プレートを洗浄する。その後、ペルオキシターゼ標識抗
免疫グロブリン抗体を使用し、各ペプチドに結合した抗
体を測定するものである。
S., Aoki I., IshiiN., Tani K., David C.S. and Oku
da K. (1988). The role of autoreactive T-cell hybr
idomas from autoimmune model mice. Immunology 64:1
13-119 ）。概略すると、種々のペプチドを９６穴マイ
クロプレートにコートし、蛋白によりマスクした後、希
釈した抗血清を反応させた後、ＰＢＳで９６穴マイクロ
プレートを洗浄する。その後、ペルオキシターゼ標識抗
免疫グロブリン抗体を使用し、各ペプチドに結合した抗
体を測定するものである。
【００４７】実施例３ マウスを用いての免疫原性の検
討 次に、本発明に係わるペプチドワクチンにおける、Ｔ細
胞エピトープのＢ細胞エピトープへの結合による免疫原
性の変化を調べるため、前記実施例１において合成した
タイＡ型Ｂ細胞エピトープペプチドとＴ細胞エピトープ
ペプチドをＮ末端からＴＢの順序、すなわちＴ細胞エピ
トープペプチドのＣ末端にＢ細胞エピトープペプチドを
結合しそのＣ末端をＰＫＡに結合したペプチド抗原（以
下、ＴＢ−ＢＬＯ抗原と記す。）、およびＢＴの順序で
ＰＫＡに結合したペプチド抗原（以下、ＢＴ−ＢＬＯ抗
原と記す。）を準備した。合せてＢ細胞エピトープペプ
チドのみをＰＫＡに結合したもの（以下、Ｂ−ＢＬＯ抗
原と記す。）も準備した。
討 次に、本発明に係わるペプチドワクチンにおける、Ｔ細
胞エピトープのＢ細胞エピトープへの結合による免疫原
性の変化を調べるため、前記実施例１において合成した
タイＡ型Ｂ細胞エピトープペプチドとＴ細胞エピトープ
ペプチドをＮ末端からＴＢの順序、すなわちＴ細胞エピ
トープペプチドのＣ末端にＢ細胞エピトープペプチドを
結合しそのＣ末端をＰＫＡに結合したペプチド抗原（以
下、ＴＢ−ＢＬＯ抗原と記す。）、およびＢＴの順序で
ＰＫＡに結合したペプチド抗原（以下、ＢＴ−ＢＬＯ抗
原と記す。）を準備した。合せてＢ細胞エピトープペプ
チドのみをＰＫＡに結合したもの（以下、Ｂ−ＢＬＯ抗
原と記す。）も準備した。
【００４８】これらのペプチド抗原を、日本ＳＬＣより
購入した６〜１０週齢のＢＡＬＢ／Ｃマウスに対し、最
初に２０μｇ／Ｋｇ（体重）の割合でフロインドの完全
アジュバンドと共に免疫した。次に１０、２０、および
３０日後に再び同様の免疫を２０μｇ／Ｋｇ（体重）の
割合でフロインドの不完全アジュバンドと共に免疫し
た。そして最後の接種の４日後に血清を採取し、前述し
たようなＥＬＩＳＡ法によって産生された抗体価を評価
した。また実施例２におけるものと同様の様式およびス
ケジュールでＳＴＤウサギに対しても、マウスと同様に
これらのペプチド抗原を免疫し、最後の接種の４日後に
血清を採取し、上記と同様のＥＬＩＳＡ法により抗体価
を評価した。これらの結果を表２に示す。
購入した６〜１０週齢のＢＡＬＢ／Ｃマウスに対し、最
初に２０μｇ／Ｋｇ（体重）の割合でフロインドの完全
アジュバンドと共に免疫した。次に１０、２０、および
３０日後に再び同様の免疫を２０μｇ／Ｋｇ（体重）の
割合でフロインドの不完全アジュバンドと共に免疫し
た。そして最後の接種の４日後に血清を採取し、前述し
たようなＥＬＩＳＡ法によって産生された抗体価を評価
した。また実施例２におけるものと同様の様式およびス
ケジュールでＳＴＤウサギに対しても、マウスと同様に
これらのペプチド抗原を免疫し、最後の接種の４日後に
血清を採取し、上記と同様のＥＬＩＳＡ法により抗体価
を評価した。これらの結果を表２に示す。
【００４９】表２に示す結果から明らかなように、ＢＴ
−ＢＬＯ抗原を免疫した時が、タイＡ型Ｂ細胞エピトー
プペプチドに対して最も強い抗体が得られることがわか
った。もちろんＢ−ＢＬＯ抗原を免疫した場合は、Ｂ細
胞エピトープおよびＴ細胞エピトープを組合せた場合と
比べると、抗体価がかなり低いものであった。
−ＢＬＯ抗原を免疫した時が、タイＡ型Ｂ細胞エピトー
プペプチドに対して最も強い抗体が得られることがわか
った。もちろんＢ−ＢＬＯ抗原を免疫した場合は、Ｂ細
胞エピトープおよびＴ細胞エピトープを組合せた場合と
比べると、抗体価がかなり低いものであった。
【００５０】実施例４ ウサギを用いての多価ワクチン
の免疫原性の検討 次に、ウサギに対し、ＨＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴＬＶタイ
Ａ型およびＨＴＬＶタイＢ型由来のＢ細胞エピトープペ
プチドおよびｇａｇ領域ペプチド（ＨＧＰ−３０）を本
発明に基づき大分子化したペプチド抗原を免疫すること
により、抗ペプチド抗体の抗体価がどのように上昇する
か検討した。
の免疫原性の検討 次に、ウサギに対し、ＨＴＬＶ-IIIB 型、ＨＴＬＶタイ
Ａ型およびＨＴＬＶタイＢ型由来のＢ細胞エピトープペ
プチドおよびｇａｇ領域ペプチド（ＨＧＰ−３０）を本
発明に基づき大分子化したペプチド抗原を免疫すること
により、抗ペプチド抗体の抗体価がどのように上昇する
か検討した。
【００５１】まず、実施例３の結果に基づき、各Ｂ細胞
エピトープペプチドのＣ末端にはＴ細胞エピトープペプ
チドを結合させることした。すなわち、実施例１の合成
法によりＨＴＬＶ-IIIB 型由来のＢ細胞エピトープペプ
チドのＣ末端にＴ細胞エピトープペプチドを結合させ
（配列表の配列番号１０）、そのＣ末端をＰＫＡに結合
したペプチド抗原（以下、 IIIB 抗原と記す。）、ＨＴ
ＬＶタイＡ型由来のＢ細胞エピトープペプチドのＣ末端
にＴ細胞エピトープペプチドを結合させ（配列表の配列
番号１１）、そのＣ末端をＰＫＡに結合したペプチド抗
原（以下、Thai A抗原と記す。）、およびＨＴＬＶタイ
Ｂ型由来のＢ細胞エピトープペプチドのＣ末端にＴ細胞
エピトープペプチドを結合させ（配列表の配列番号１
２）、そのＣ末端をＰＫＡに結合したペプチド抗原（以
下、Thai B抗原と記す。）を合成した。さらに、ＨＧＰ
−３０をＰＫＡに結合させたペプチド抗原（以下、HGP-
30抗原と記す。）を実施例１の合成法により準備した。
エピトープペプチドのＣ末端にはＴ細胞エピトープペプ
チドを結合させることした。すなわち、実施例１の合成
法によりＨＴＬＶ-IIIB 型由来のＢ細胞エピトープペプ
チドのＣ末端にＴ細胞エピトープペプチドを結合させ
（配列表の配列番号１０）、そのＣ末端をＰＫＡに結合
したペプチド抗原（以下、 IIIB 抗原と記す。）、ＨＴ
ＬＶタイＡ型由来のＢ細胞エピトープペプチドのＣ末端
にＴ細胞エピトープペプチドを結合させ（配列表の配列
番号１１）、そのＣ末端をＰＫＡに結合したペプチド抗
原（以下、Thai A抗原と記す。）、およびＨＴＬＶタイ
Ｂ型由来のＢ細胞エピトープペプチドのＣ末端にＴ細胞
エピトープペプチドを結合させ（配列表の配列番号１
２）、そのＣ末端をＰＫＡに結合したペプチド抗原（以
下、Thai B抗原と記す。）を合成した。さらに、ＨＧＰ
−３０をＰＫＡに結合させたペプチド抗原（以下、HGP-
30抗原と記す。）を実施例１の合成法により準備した。
【００５２】そして、ウサギに対して、実施例２におけ
るものと同様の様式およびスケジュールでＳＴＤウサギ
に対して、上記の４種の単価ペプチドの当量混合物（以
下、多価ワクチンと記する。）、単価の IIIB 抗原、単
価のThai A抗原、単価のThaiB抗原、および単価のHGP-3
0抗原を免疫し、最後の接種後に血清を採取し、各ペプ
チド抗原に対する抗体価を上記と同様のＥＬＩＳＡ法に
より評価した。結果を表３に示す。表３において、ウサ
ギＲ１〜Ｒ３は多価ワクチンを、Ｒ４〜Ｒ５は単価の I
IIB 抗原を、Ｒ６〜Ｒ７は単価のThai A抗原を、Ｒ８〜
Ｒ９は単価のThai B抗原を、そしてＲ１０〜Ｒ１１は単
価のHGP-30抗原を免疫したものをそれぞれ示す。
るものと同様の様式およびスケジュールでＳＴＤウサギ
に対して、上記の４種の単価ペプチドの当量混合物（以
下、多価ワクチンと記する。）、単価の IIIB 抗原、単
価のThai A抗原、単価のThaiB抗原、および単価のHGP-3
0抗原を免疫し、最後の接種後に血清を採取し、各ペプ
チド抗原に対する抗体価を上記と同様のＥＬＩＳＡ法に
より評価した。結果を表３に示す。表３において、ウサ
ギＲ１〜Ｒ３は多価ワクチンを、Ｒ４〜Ｒ５は単価の I
IIB 抗原を、Ｒ６〜Ｒ７は単価のThai A抗原を、Ｒ８〜
Ｒ９は単価のThai B抗原を、そしてＲ１０〜Ｒ１１は単
価のHGP-30抗原を免疫したものをそれぞれ示す。
【００５３】この結果から明らかなように、多価ワクチ
ンを接種されたＲ１〜Ｒ３においては、いずれのペプチ
ド抗原に対しても非常に強い抗体が得られていることが
分かる。Ｒ４およびＲ５は、ＨＴＬＶ-IIIB 型のＶ３領
域ペプチドを、実質的にはＲ１〜Ｒ３のＨＴＬＶ-IIIB
型のＶ３領域ペプチドの４倍量免疫しているにもかかわ
らず、多価ワクチンの形で免疫されたＲ１〜Ｒ３よりも
該 IIIB 型ペプチドに対する抗体価がやや低いものであ
った。同様の傾向が他のペプチド抗体に関しても表われ
ていた。さらに、この免疫法によりどのように抗体が産
生又は持続しているかを時間経過を追って検討した。２
回免疫後その抗体価は上昇してきた。４回免疫後にその
抗体価は顕著に上昇したが、４回免疫後徐々に抗体価が
低下して行き、１５週経つと最初の１／５くらいになっ
たので追加免疫したところ、４回目の免疫直後の抗体価
レベルよりも更に高い抗体価が認められた。
ンを接種されたＲ１〜Ｒ３においては、いずれのペプチ
ド抗原に対しても非常に強い抗体が得られていることが
分かる。Ｒ４およびＲ５は、ＨＴＬＶ-IIIB 型のＶ３領
域ペプチドを、実質的にはＲ１〜Ｒ３のＨＴＬＶ-IIIB
型のＶ３領域ペプチドの４倍量免疫しているにもかかわ
らず、多価ワクチンの形で免疫されたＲ１〜Ｒ３よりも
該 IIIB 型ペプチドに対する抗体価がやや低いものであ
った。同様の傾向が他のペプチド抗体に関しても表われ
ていた。さらに、この免疫法によりどのように抗体が産
生又は持続しているかを時間経過を追って検討した。２
回免疫後その抗体価は上昇してきた。４回免疫後にその
抗体価は顕著に上昇したが、４回免疫後徐々に抗体価が
低下して行き、１５週経つと最初の１／５くらいになっ
たので追加免疫したところ、４回目の免疫直後の抗体価
レベルよりも更に高い抗体価が認められた。
【００５４】実施例５ 抗血清を使用しての巨大細胞出
現抑制試験 次に免疫抗血清がＨＩＶ特異的巨大細胞出現を抑制する
か否かの検討を行なった。試験方法としては、ハオ（H
o）らやラロッサらが述べた方法に基づき行なった（Ho
D.D., Kaplan J.C., Rackauskas I.E. and Gurney M.E.
(1988). Secondconserved domain of gp120 is import
ant for HIV infectivity and antibodyneutralizatio
n. Science 239:1021-1023； およびLaRosa et al (19
90) 前述）。まず実施例４における各被験ウサギから採
取された抗血清を、３７℃にて、IIIB 型株、タイＡ型
株、タイＢ型株又は２つの日本国内患者より分離された
株（ＹＳＪおよびＡＴＪ）と別々に反応させ、３０分後
にあらかじめＰＨＡにより幼弱化させておいた末梢リン
パ球に感染させた。感染時も持続的に２．５％の割合で
抗血清を添加させ反応させておく。３７℃で７〜１０日
間培養させた後、リンパ細胞がＨＩＶ感染により巨大細
胞になったか否かを、顕微鏡にて観察し巨大細胞の出現
が阻止された血清の希釈倍数をもって感染阻止価とし
た。得られた結果を表４に示す。この結果より明らかな
ように、多価ワクチンの形で免疫されたグループ（Ｒ１
〜Ｒ３）より得られた抗血清は、高い力価の巨大細胞出
現抑制能が検出された。しかしながら単価の形で免疫さ
れたグループより得られた抗血清は、その免疫した型特
異的な抑制作用しか示さなかった。このことから多価ワ
クチンは、いくつかの抗体を誘導し、そのうちのあるも
のがＨＩＶのいくつかのタイプに共通する抗原性エピト
ープに結合するのではないかと推測された。
現抑制試験 次に免疫抗血清がＨＩＶ特異的巨大細胞出現を抑制する
か否かの検討を行なった。試験方法としては、ハオ（H
o）らやラロッサらが述べた方法に基づき行なった（Ho
D.D., Kaplan J.C., Rackauskas I.E. and Gurney M.E.
(1988). Secondconserved domain of gp120 is import
ant for HIV infectivity and antibodyneutralizatio
n. Science 239:1021-1023； およびLaRosa et al (19
90) 前述）。まず実施例４における各被験ウサギから採
取された抗血清を、３７℃にて、IIIB 型株、タイＡ型
株、タイＢ型株又は２つの日本国内患者より分離された
株（ＹＳＪおよびＡＴＪ）と別々に反応させ、３０分後
にあらかじめＰＨＡにより幼弱化させておいた末梢リン
パ球に感染させた。感染時も持続的に２．５％の割合で
抗血清を添加させ反応させておく。３７℃で７〜１０日
間培養させた後、リンパ細胞がＨＩＶ感染により巨大細
胞になったか否かを、顕微鏡にて観察し巨大細胞の出現
が阻止された血清の希釈倍数をもって感染阻止価とし
た。得られた結果を表４に示す。この結果より明らかな
ように、多価ワクチンの形で免疫されたグループ（Ｒ１
〜Ｒ３）より得られた抗血清は、高い力価の巨大細胞出
現抑制能が検出された。しかしながら単価の形で免疫さ
れたグループより得られた抗血清は、その免疫した型特
異的な抑制作用しか示さなかった。このことから多価ワ
クチンは、いくつかの抗体を誘導し、そのうちのあるも
のがＨＩＶのいくつかのタイプに共通する抗原性エピト
ープに結合するのではないかと推測された。
【００５５】実施例６ ｐ２４の産生抑制試験 この試験は、ＨＩＶが増殖する場合にはウィルスの内層
の蛋白であるｐ２４が産生されるが、ワクチンを免疫す
ることで抗血清がｐ２４産生をどれくらい抑制するかを
測定するものであり、奈良ら、ライ(Lai) らおよび田村
らがすでに報告している方法を用いた（Nara P.L., Rob
ey W.G., Pyle S.W., Hatch W.C., Dunlop N.M., Bess,
J.W. Jr., Kelliher J.C., Arthur L.O. and Fisching
er P.J.(1988-b). Purified envelope glycoproteins f
rom human immunodeficiency virus type 1 variants i
nduce individual, type-specific neutralizing antib
odies. J. Virol 62:2622-2628 ；Lai P.K., Donovan
J., Takayama H., Sakagami H., Tanaka A., Konno K.a
nd Nonoyama M. (1990). Modification of human immun
odeficiency viral replication by pine cone extract
s. AiDS Res. Hum. Retroviruses. 6:205-217 ；Tamura
Y., Lai P.K., Bradley W.G., Konno K., Tanaka A. a
nd Nonoyama M. (1991). A soluble factor induced by
an extract from Pinus parviflora Siebet Zucc can
inhibit the replication of human immunodeficiency
virus invitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88:2249
-2253 ）。概略は、ＨＩＶを２．５％の濃度で抗血清と
共に３７℃で２時間インキュベートした後、このインキ
ュベートしたＨＩＶを５％ＣＯ2 雰囲気中において３７
℃でＣＥＭ細胞に感染させる。そして、４時間後にＨＩ
Ｖ感染ＣＥＭ細胞を５％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培
地で一度洗浄し、洗浄されたＣＥＭ細胞を、最終濃度
２．５％の抗血清および５％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ
１６４０培地で再び培養する。５日間のインキュベーシ
ョンの後、培地上澄液が採集され、ｐ２４蛋白濃度を市
販のｐ２４捕捉検定キット（Abbott HIV AG-1 、アボッ
ト ラボラトリーズ社(Abbott Laboratories) 製）を用
いて測定するものである。
の蛋白であるｐ２４が産生されるが、ワクチンを免疫す
ることで抗血清がｐ２４産生をどれくらい抑制するかを
測定するものであり、奈良ら、ライ(Lai) らおよび田村
らがすでに報告している方法を用いた（Nara P.L., Rob
ey W.G., Pyle S.W., Hatch W.C., Dunlop N.M., Bess,
J.W. Jr., Kelliher J.C., Arthur L.O. and Fisching
er P.J.(1988-b). Purified envelope glycoproteins f
rom human immunodeficiency virus type 1 variants i
nduce individual, type-specific neutralizing antib
odies. J. Virol 62:2622-2628 ；Lai P.K., Donovan
J., Takayama H., Sakagami H., Tanaka A., Konno K.a
nd Nonoyama M. (1990). Modification of human immun
odeficiency viral replication by pine cone extract
s. AiDS Res. Hum. Retroviruses. 6:205-217 ；Tamura
Y., Lai P.K., Bradley W.G., Konno K., Tanaka A. a
nd Nonoyama M. (1991). A soluble factor induced by
an extract from Pinus parviflora Siebet Zucc can
inhibit the replication of human immunodeficiency
virus invitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88:2249
-2253 ）。概略は、ＨＩＶを２．５％の濃度で抗血清と
共に３７℃で２時間インキュベートした後、このインキ
ュベートしたＨＩＶを５％ＣＯ2 雰囲気中において３７
℃でＣＥＭ細胞に感染させる。そして、４時間後にＨＩ
Ｖ感染ＣＥＭ細胞を５％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培
地で一度洗浄し、洗浄されたＣＥＭ細胞を、最終濃度
２．５％の抗血清および５％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ
１６４０培地で再び培養する。５日間のインキュベーシ
ョンの後、培地上澄液が採集され、ｐ２４蛋白濃度を市
販のｐ２４捕捉検定キット（Abbott HIV AG-1 、アボッ
ト ラボラトリーズ社(Abbott Laboratories) 製）を用
いて測定するものである。
【００５６】このような測定法により、実施例４におけ
るウサギＲ１〜３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０から
得られた抗血清のｐ２４の産生抑制の度合を検討した。
得らえた結果を表５に示す。表５から明らかなように、
多価ワクチンで免疫されたＲ１〜Ｒ３よりの抗血清は、
IIIB 型株、タイＡ型株およびタイＢ型株のいずれにお
いてもｐ２４産生の顕著な抑制が見られた。一方、単価
のＶ３領域ペプチドで免疫されたＲ４、Ｒ６およびＲ８
は、それぞれ免疫された株に特異的なｐ２４の産生抑制
を示した。またＲ１０に示されるように抗ＨＧＰ−３０
抗血清は、上記の３株種にほぼ等しい抑制効果を示し
た。これらのことから多価ワクチンの形で免疫した場合
に相乗効果が見られることが明らかである。
るウサギＲ１〜３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０から
得られた抗血清のｐ２４の産生抑制の度合を検討した。
得らえた結果を表５に示す。表５から明らかなように、
多価ワクチンで免疫されたＲ１〜Ｒ３よりの抗血清は、
IIIB 型株、タイＡ型株およびタイＢ型株のいずれにお
いてもｐ２４産生の顕著な抑制が見られた。一方、単価
のＶ３領域ペプチドで免疫されたＲ４、Ｒ６およびＲ８
は、それぞれ免疫された株に特異的なｐ２４の産生抑制
を示した。またＲ１０に示されるように抗ＨＧＰ−３０
抗血清は、上記の３株種にほぼ等しい抑制効果を示し
た。これらのことから多価ワクチンの形で免疫した場合
に相乗効果が見られることが明らかである。
【００５７】実施例７ ペプチドによる抗血清の吸収実
験 次に、これらのペプチドのどの部位が、抗ＨＩＶ抗体を
誘導するのかを検討した。実施例４において単価のThai
A抗原で免疫されたＲ６から得られた抗血清に対し、タ
イＡ型株のＶ３領域ペプチドの前半部位であるペプチド
（配列表の配列番号４のアミノ酸配列）（以下、タイＡ
−（ａ）と記する。）、後半部位であるペプチド（配列
表の配列番号５のアミノ酸配列）（以下、タイＡ−
（ｂ）と記する。）又は中間部位であるペプチド（配列
表の配列番号６のアミノ酸配列）（以下、タイＡ−
（ｃ）と記する。）の３つのペプチドを、それぞれ吸収
源として使用した。そして吸収した後のタイＡ血清を使
用し、その血清のタイＢ型ＨＩＶの増殖阻止能がどれぐ
らい残っているかを検討し、各々のウィルス中和エピト
ープとしての重要性を検討した。得られた結果を表６に
示すが、対照のｐ２４は１５１０であったのが、吸収後
タイＡ血清では４６２とｐ２４の産生が抑制された。し
かしながら、タイＡで吸収すると抑制能がほとんど消失
し、さらにタイＡ−（ｂ）、タイＡ−（ｃ）でも顕著な
抑制能の消失が認められた。しかしながらＥＬＩＳＡに
より測定された抗体価の低下はあまり認められなかっ
た。このことからウィルスの中和抗体を生じさせる強い
エピトープはタイＡ−（ｂ）、タイＡ−（ｃ）の部位で
あると思われる。
験 次に、これらのペプチドのどの部位が、抗ＨＩＶ抗体を
誘導するのかを検討した。実施例４において単価のThai
A抗原で免疫されたＲ６から得られた抗血清に対し、タ
イＡ型株のＶ３領域ペプチドの前半部位であるペプチド
（配列表の配列番号４のアミノ酸配列）（以下、タイＡ
−（ａ）と記する。）、後半部位であるペプチド（配列
表の配列番号５のアミノ酸配列）（以下、タイＡ−
（ｂ）と記する。）又は中間部位であるペプチド（配列
表の配列番号６のアミノ酸配列）（以下、タイＡ−
（ｃ）と記する。）の３つのペプチドを、それぞれ吸収
源として使用した。そして吸収した後のタイＡ血清を使
用し、その血清のタイＢ型ＨＩＶの増殖阻止能がどれぐ
らい残っているかを検討し、各々のウィルス中和エピト
ープとしての重要性を検討した。得られた結果を表６に
示すが、対照のｐ２４は１５１０であったのが、吸収後
タイＡ血清では４６２とｐ２４の産生が抑制された。し
かしながら、タイＡで吸収すると抑制能がほとんど消失
し、さらにタイＡ−（ｂ）、タイＡ−（ｃ）でも顕著な
抑制能の消失が認められた。しかしながらＥＬＩＳＡに
より測定された抗体価の低下はあまり認められなかっ
た。このことからウィルスの中和抗体を生じさせる強い
エピトープはタイＡ−（ｂ）、タイＡ−（ｃ）の部位で
あると思われる。
【００５８】実施例８ 抗原特異的ＩＬ−２産性能試験 ＨＩＶ特異的細胞性免疫が、前記の多価ワクチンを投与
することにより生じるかどうかを検討するために、実施
例１において用いられた３つの異なる方法によって合成
されたタイＡ型Ｂ細胞エピトープペプチド抗原で免疫さ
れた動物のリンパ球によるＩＬ−２産生の度合を比較し
た。
することにより生じるかどうかを検討するために、実施
例１において用いられた３つの異なる方法によって合成
されたタイＡ型Ｂ細胞エピトープペプチド抗原で免疫さ
れた動物のリンパ球によるＩＬ−２産生の度合を比較し
た。
【００５９】ＩＬ−２測定法については前述の矢野間ら
に述べられる方法に従った。すなわち、まず６〜８週齢
のＢＡＬＢ／Ｃマウスの尾部の皮下組織にアジュバント
としてのアラムを含む４０μｇの多価ワクチンを接種し
免疫する。７日後に再び同部位に同様にして多価ワクチ
ンを免疫し、その４日後に局所リンパ節を取り出し、
２．５×１０5 個／ｍｌの細胞浮遊液にした後、５〜３
０μｇ／ｍｌの割合で各種ペプチド抗原と培養し、４８
時間後に培養上澄を取り出し、ＣＴＬＬ（cytoxic T-ly
mphocyte 細胞障害性Ｔリンパ球）細胞を使用して、Ｉ
Ｌ−２の活性を測定するものである。このように試験管
内でＩＬ−２産生が生じた場合は、ＨＩＶ特異的細胞性
免疫も活性化することを意味するものである。表７に示
す結果から明らかなように、本発明に係わるＢＬＯ抗原
においては著名なＩＬ−２産生が認められた。これらの
結果より本発明に係わる多価ワクチンは、ＨＩＶ特異的
細胞性免疫をも活性化させ得ることが証明された。
に述べられる方法に従った。すなわち、まず６〜８週齢
のＢＡＬＢ／Ｃマウスの尾部の皮下組織にアジュバント
としてのアラムを含む４０μｇの多価ワクチンを接種し
免疫する。７日後に再び同部位に同様にして多価ワクチ
ンを免疫し、その４日後に局所リンパ節を取り出し、
２．５×１０5 個／ｍｌの細胞浮遊液にした後、５〜３
０μｇ／ｍｌの割合で各種ペプチド抗原と培養し、４８
時間後に培養上澄を取り出し、ＣＴＬＬ（cytoxic T-ly
mphocyte 細胞障害性Ｔリンパ球）細胞を使用して、Ｉ
Ｌ−２の活性を測定するものである。このように試験管
内でＩＬ−２産生が生じた場合は、ＨＩＶ特異的細胞性
免疫も活性化することを意味するものである。表７に示
す結果から明らかなように、本発明に係わるＢＬＯ抗原
においては著名なＩＬ−２産生が認められた。これらの
結果より本発明に係わる多価ワクチンは、ＨＩＶ特異的
細胞性免疫をも活性化させ得ることが証明された。
【００６０】
【表１】
【００６１】
【表２】
【００６２】
【表３】
【００６３】
【表４】
【００６４】
【表５】
【００６５】
【表６】
【００６６】
【表７】
【００６７】
【発明の効果】以上述べたように、本発明によれば、複
雑な遺伝子組換え操作等を必要とすることなく簡単な手
法で、強いＨＩＶ活性の低下やＨＩＶ特異的細胞免疫の
活性化をもたらすことのできる安全なエイズワクチンを
提供することができる。また本発明において、Ｖ３領域
ペプチドとして複数株由来のものを用い、さらにｇａｇ
領域のペプチドを組合せて分枝リジンオリゴマーに結合
させることで、相乗作用が期待でき、広範な株種のＨＩ
Ｖに対して有効な予防および治療効果が望めるものであ
る。
雑な遺伝子組換え操作等を必要とすることなく簡単な手
法で、強いＨＩＶ活性の低下やＨＩＶ特異的細胞免疫の
活性化をもたらすことのできる安全なエイズワクチンを
提供することができる。また本発明において、Ｖ３領域
ペプチドとして複数株由来のものを用い、さらにｇａｇ
領域のペプチドを組合せて分枝リジンオリゴマーに結合
させることで、相乗作用が期待でき、広範な株種のＨＩ
Ｖに対して有効な予防および治療効果が望めるものであ
る。
【００６８】
配列番号：１ 配列の長さ：２８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 1 5 10 15 Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Gly 20 25 配列番号：２ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Ser Asn Asn Thr Arg Thr Ser Ile Thr Ile Gly Pro Gly 1 5 10 15 Gln Val Phe Tyr Arg Thr Gly Asp Ile Ile 20 25 配列番号：３ 配列の長さ：２６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile His Leu Gly Pro Gly 1 5 10 15 Gln Ala Trp Tyr Thr Thr Gly Gln Ile Ile 20 25 配列番号：４ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Ser Asn Asn Thr Arg Thr Ser Ile Thr 1 5 10 配列番号：５ 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ile Gly Pro Gly Gln Val Phe Tyr Arg Thr Gly Asp Ile Ile 1 5 10 配列番号：６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列番号：７ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｇｌｎ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ｍｅｔ Ｔｒｐ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｔｙｒ Ａｌａ １ 5 10 15 配列番号：８ 配列の長さ：３０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Ser Val His Gln Arg Ile Glu Val Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu 1 5 10 15 Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala 20 25 30 配列番号：９ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列番号：１０ 配列の長さ：４３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 1 5 10 15 Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Gly Gln Phe Ile Asn 20 25 30 Met Trp Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala 35 40 配列番号：１１ 配列の長さ：４１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Ser Asn Asn Thr Arg Thr Ser Ile Thr Ile Gly Pro Gly 1 5 10 15 Gln Val Phe Tyr Arg Thr Gly Asp Ile Ile Gln Phe Ile Asn Met Trp 20 25 30 Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala 35 40 配列番号：１２ 配列の長さ：４１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile His Leu Gly Pro Gly 1 5 10 15 Gln Ala Trp Tyr Thr Thr Gly Gln Ile Ile Gln Phe Ile Asn Met Trp 20 25 30 Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala 35 40
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｔｙｒ Ａｌａ １ 5 10 15 配列番号：８ 配列の長さ：３０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Tyr Ser Val His Gln Arg Ile Glu Val Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu 1 5 10 15 Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala 20 25 30 配列番号：９ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列番号：１０ 配列の長さ：４３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile Arg Ile Gln Arg Gly 1 5 10 15 Pro Gly Arg Ala Phe Val Thr Ile Gly Lys Ile Gly Gln Phe Ile Asn 20 25 30 Met Trp Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala 35 40 配列番号：１１ 配列の長さ：４１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Ser Asn Asn Thr Arg Thr Ser Ile Thr Ile Gly Pro Gly 1 5 10 15 Gln Val Phe Tyr Arg Thr Gly Asp Ile Ile Gln Phe Ile Asn Met Trp 20 25 30 Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala 35 40 配列番号：１２ 配列の長さ：４１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Ile His Leu Gly Pro Gly 1 5 10 15 Gln Ala Trp Tyr Thr Thr Gly Gln Ile Ile Gln Phe Ile Asn Met Trp 20 25 30 Gln Glu Val Gly Lys Ala Met Tyr Ala 35 40
【図１】は、本発明において用いられる分枝リジンオリ
ゴマーの一例の構造を表わす図、
ゴマーの一例の構造を表わす図、
【図２】は、本発明におけるＨＩＶ由来ペプチドと分枝
リジンオリゴマーとの結合反応方法の一例を示す図であ
る。
リジンオリゴマーとの結合反応方法の一例を示す図であ
る。
Claims (7)
- 【請求項１】 ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウィルス）エンベ
ロープのｇｐ１２０のＶ３領域ペプチドを含有するワク
チンであって、前記Ｖ３領域ペプチドは合成されたもの
であり、かつそのＣ末端側において分枝リジンオリゴマ
ーよりなる核体の各分枝に接合されていることを特徴と
するエイズワクチン。 - 【請求項２】 前記Ｖ３領域ペプチドのＣ末端部位に
は、ＨＩＶの表面蛋白由来のＴ細胞抗原エピトープのペ
プチドが結合されているものである請求項１に記載のエ
イズワクチン。 - 【請求項３】 前記Ｖ３領域ペプチドとして複数株由来
のものを用い、多価ワクチンとしている請求項１または
２に記載のエイズワクチン。 - 【請求項４】 前記Ｖ３領域ペプチドが、ＨＴＬＶ-III
B 型、ＨＴＬＶタイＡ型およびＨＴＬＶタイＢ型の３株
由来のものである請求項３に記載のエイズワクチン。 - 【請求項５】 Ｃ末端側において分枝リジンオリゴマー
よりなる核体の分枝に接合された、ＨＩＶの内部蛋白の
ｇａｇ領域のペプチドをさらに含むものである請求項１
〜４のいずれかに記載のエイズワクチン。 - 【請求項６】 分枝リジンオリゴマー１分子当り前記合
成Ｖ３領域ペプチドが８〜１６つ接合してなるものであ
る請求項１〜５のいずれかに記載のエイズワクチン。 - 【請求項７】 前記分枝リジンオリゴマーのペプチド接
合状態における平均分子量が４００００〜６００００で
ある請求項１〜５のいずれかに記載のエイズワクチン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29225793A JPH07145078A (ja) | 1993-11-22 | 1993-11-22 | エイズワクチン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29225793A JPH07145078A (ja) | 1993-11-22 | 1993-11-22 | エイズワクチン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07145078A true JPH07145078A (ja) | 1995-06-06 |
Family
ID=17779460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29225793A Pending JPH07145078A (ja) | 1993-11-22 | 1993-11-22 | エイズワクチン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07145078A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009511640A (ja) * | 2005-10-17 | 2009-03-19 | ノバルティス アーゲー | マルチクレードｈｉｖワクチン |
| JP2013540432A (ja) * | 2010-09-10 | 2013-11-07 | ワイス・エルエルシー | 髄膜炎菌ｏｒｆ２０８６抗原の非脂質化変異体 |
-
1993
- 1993-11-22 JP JP29225793A patent/JPH07145078A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009511640A (ja) * | 2005-10-17 | 2009-03-19 | ノバルティス アーゲー | マルチクレードｈｉｖワクチン |
| JP2013540432A (ja) * | 2010-09-10 | 2013-11-07 | ワイス・エルエルシー | 髄膜炎菌ｏｒｆ２０８６抗原の非脂質化変異体 |
| US11077180B2 (en) | 2010-09-10 | 2021-08-03 | Wyeth Llc | Non-lipidated variants of Neisseria meningitidis ORF2086 antigens |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040629 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20041102 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |