EP4532665A1 - Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität - Google Patents

Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität

Info

Publication number
EP4532665A1
EP4532665A1 EP23731938.9A EP23731938A EP4532665A1 EP 4532665 A1 EP4532665 A1 EP 4532665A1 EP 23731938 A EP23731938 A EP 23731938A EP 4532665 A1 EP4532665 A1 EP 4532665A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
seq
amino acid
detergent
acid sequence
positions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP23731938.9A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Shoana ISLAM
Christian DEGERING
Susanne Wieland
Ayhan AYDEMIR
Claudia LINDNER
Sven BENSON
Philipp SCHELLENBERGER
Lenz LORENZ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henkel AG and Co KGaA
Original Assignee
Henkel AG and Co KGaA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henkel AG and Co KGaA filed Critical Henkel AG and Co KGaA
Publication of EP4532665A1 publication Critical patent/EP4532665A1/de
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38663—Stabilised liquid enzyme compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D7/00—Compositions of detergents based essentially on non-surface-active compounds
    • C11D7/22—Organic compounds
    • C11D7/40—Products in which the composition is not well defined
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase

Definitions

  • the invention lies in the field of enzyme technology.
  • the invention relates to detergents or cleaning agents comprising at least one protease and at least one peptidic inhibitor. Also part of the invention are the corresponding washing and cleaning processes, the use of the agents described herein and the use of a peptidic inhibitor to improve the stability of a protease in washing or cleaning agents.
  • enzymes in detergents have been established in the state of the art for decades. They serve to expand the range of services of the funds in question according to their specific activities. These include in particular hydrolytic enzymes such as proteases, amylases, lipases and cellulases. The first three mentioned hydrolyze proteins, starch and fats and thus contribute directly to removing dirt. Cellulases are used in particular because of their effect on tissue.
  • hydrolytic enzymes such as proteases, amylases, lipases and cellulases.
  • oxidative enzymes in particular oxidases, which, in combination with other components, preferably serve to bleach stains or to generate the bleaching agents in situ.
  • subtilisin-type proteases preferably used in detergents and cleaning agents are the subtilisins BPN' from Bacillus amyloliquefaciens and Carlsberg from Bacillus licheniformis, the protease PB92, the subtilisins 147 and 309, the protease from Bacillus lentus, in particular from Bacillus lentus DSM 5483, subtilisin DY and the enzymes thermitase, proteinase K and the proteases TW3 and TW7, which can be assigned to the subtilases but no longer to the subtilisins in the narrower sense, as well as variants of the proteases mentioned which have an amino acid sequence that is changed compared to the original protease.
  • Proteases are modified in a targeted or random manner using methods known from the prior art and are thus optimized, for example, for use in detergents and cleaning agents. These include point, deletion or insertion mutagenesis or fusion with other proteins or parts of proteins. Correspondingly optimized variants are known for most of the proteases known from the prior art.
  • EP 2016175 A1 for example, a protease from Bacillus pumilus intended for detergents and cleaning agents is disclosed.
  • a goal in the development of detergent and cleaning agent formulations is therefore to stabilize the enzymes contained, particularly during storage, and also to protect them from denaturation and/or cleavage or degradation and/or, particularly during storage and/or use of the detergent or cleaning agent To protect against decay caused by physical influences or oxidation etc.
  • One focus of these developments is the protection of the proteins and/or enzymes contained against (auto-)proteolytic cleavage. This can be done by building up physical barriers, for example by encapsulating the enzymes in special enzyme granules or by packaging the agents in two- or multi-chamber systems.
  • the other route that is often taken is to add chemical compounds that inhibit the proteases and thus act overall as stabilizers for proteases and the other proteins and enzymes they contain.
  • these must be reversible protease inhibitors, since the protease activity should only be prevented temporarily, especially during storage, but no longer during the cleaning process.
  • a further subject of the invention is a detergent and cleaning agent, in particular a liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably a liquid textile detergent, comprising a) at least one protease, preferably in an amount of 0.0001 to 1% by weight, based on the total weight of the detergent and cleaning agent, the protease having proteolytic activity and comprising an amino acid sequence that is at least 70% identical to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO: 1 over its entire length, and in each case based on the numbering according to SEQ ID NO :1 (i) at positions corresponding to positions 9, 130, 133, 144, 217, 252 and 271, the amino acid substitutions 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T and 271E, and (ii) at least one, preferably two, more preferably three, of the positions corresponding to positions 6, 89, 131, 166, 187, 189, 211 or 224, at least one further amino acid substitution selected from 6W/F, 89
  • a further subject of the invention relates to the use of a peptide (peptidic inhibitor) defined herein to improve the stability, in particular the storage stability, of proteases, in particular of proteases from Bacillus pumilus defined herein, in a detergent and cleaning agent, preferably in a temperature range of approximately 20°C to about 60°C, particularly preferably from about 20°C to about 40°C, most preferably at about 30°C, and the use of a peptide defined herein to prevent and/or reduce the autoproteolysis of a detergent and cleaning agents containing protease, in particular a protease from Bacillus pumilus defined herein.
  • a peptide peptidic inhibitor
  • the detergent according to the invention is preferably a liquid textile detergent. More preferably, the textile detergent according to the invention in 1% by weight solution in deionized water at 20 ° C has a pH in a range from about 6 to about 11, in particular from about 6.5 to about 10.5, more preferably from about 7 to about 10, particularly preferably from about 8 to about 9.
  • At least one means one or more, i.e., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 or more.
  • agent and cleaning agent or “washing or cleaning agent” as used herein is synonymous with the term “agent” and refers to a composition for cleaning textiles and / or hard surfaces, in particular dishes, as in the description explained.
  • “Substantially free of” means that the composition or agent contains less than 2% by weight, preferably less than 1% by weight, more preferably less than 0.5% by weight and particularly preferably less than 0. 1% by weight of the corresponding substance, based on the total weight of the composition/agent.
  • Liquid as used herein includes liquids and gels as well as pasty compositions. It is preferred that the liquid compositions be flowable and pourable at room temperature, but it is also possible that they have a yield point.
  • a substance for example a composition or an agent, is solid according to the definition of the invention if it is in the solid state at 25 ° C and 1013 mbar.
  • Liquid also includes gel form.
  • Variant refers to natural or artificially created variations of a native protease that have an amino acid sequence modified from the reference form.
  • the detergent or cleaning agent according to the invention therefore has a higher residual activity of the protease contained and/or possibly other enzymes contained in it compared to the control, with the detergent or cleaning agent according to the invention and the control having the same initial enzymatic activity at the start of storage, both agents treated in the same way, particularly as regards storage conditions and determination of enzyme activity.
  • Storage is increasingly preferred for at least 1 week, 2 weeks, 3 weeks or 4 weeks. Storage is further preferably carried out at a temperature of 20°C, 25°C, 30°C or 40°C.
  • the present invention is based on the inventors' surprising finding that the peptidic inhibitors described herein bring about improved storage stability of proteases in detergents and cleaning agents. This is particularly surprising since these peptic inhibitors have not previously been associated with reversible protease inhibition. In particular, they have not previously been associated with the proteases from Bacillus pumilus described herein and improved storage stability and/or reduced autoproteolysis. Furthermore, the peptidic inhibitors described herein have not been associated with reversible inhibition of the Bacillus pumilus protease described herein.
  • the present invention is based in particular on the surprising finding of the inventors that a Bacillus pumilus protease which comprises an amino acid sequence that is at least 70% identical to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its entire length, and in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i) at positions corresponding to positions 9, 130, 133, 144, 217, 252 and 271, the amino acid substitutions 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T and 271E, and ( ii) at least one, preferably two, more preferably three, of the positions corresponding to positions 6, 89, 131, 166, 187, 189, 211 or 224, at least one further amino acid substitution from that of 6W / F, 89A /G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q and 224A/G, preferably 6W,
  • the agents according to the invention may comprise one or more peptidic inhibitor(s).
  • the agents according to the invention can contain the peptide inhibitor(s) in a 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4 .0, 4.5, 5.0, 10, 15, 18, 20, 25, 27 or 30-fold molar excess based on the molarity of the protease used.
  • the protease contained in the agents according to the invention is a protease from Bacillus pumilus which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%.
  • the protease used according to the invention has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74% , 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90 .5%, 91%, 91 .5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5 %, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and points, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to the positions 9, 130, 133, 144, 217, 252 and 271 corresponding to amino acid substitutions P9T, N130D
  • the protease used according to the invention has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74% , 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90 .5%, 91%, 91 .5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5 %, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and points, in each case based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to the positions 9, 130, 133, 144, 217, 252 and 271 corresponding to amino acid substitutions P9T, N130D
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease with one of the following amino acid substitution variants: P9T-N130D-T133A-N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease with one of the following amino acid substitution variants: P9T-N130D-T133A-N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75% , 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5% , 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97 %, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and each based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 9, 130, 133 , 144, 217, 252 and 271, the amino acid substitutions P9T, N
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75% , 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5% , 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97 %, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and each based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 9, 130, 133 , 144, 217, 252 and 271, the amino acid substitutions P9T, N
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • the agent according to the invention comprises a) a protease with one of the following amino acid substitution variants: P9T-N130D-T133A-N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its total length to at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75% , 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5% , 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97 %, 97.5%, 98%, 98.5% and 98.8% is identical, and each based on the numbering according to SEQ ID NO:1, (i) at the positions corresponding to positions 9, 130, 133 , 144, 217, 252 and 271, the amino acid substitutions P9T, N
  • the agent according to the invention comprises a) a protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which is at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, over its total length, of the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1.
  • sequence comparison The identity of nucleic acid or amino acid sequences is determined by sequence comparison. This sequence comparison is based on the BLAST algorithm established and commonly used in the prior art (cf. e.g. Altschul et al. (1990) Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215:403-410, and Altschul et al (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402) and is basically done by similar sequences of nucleotides or amino acids in the nucleic acid or amino acid sequences be assigned. A tabular assignment of the relevant positions is called alignment. Another algorithm available in the art is the FASTA algorithm.
  • Advantageous positions for sequence changes, in particular substitutions, of the protease from Bacillus pumilus which are preferably of importance when transferred to homologous positions of the proteases according to the invention and give the protease advantageous functional properties, are therefore the positions which correspond in an alignment to the positions described herein, i.e. in the count according to SEQ ID NO:1.
  • the following amino acid residues are located at the positions mentioned in the wild-type molecule of the protease from Bacillus pumilus: P9, N130, T133, N144, Y217, N252 and Q271 as well as Y6, S89, G131, G166, N187, S189, S211 and S224.
  • the additional stabilizer compound used can be boric acid.
  • the protease used according to the invention is characterized in that its cleaning performance is not significantly reduced compared to that of a protease which comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1, i.e. has at least 80% of the reference washing performance , preferably at least 100%, more preferably at least 110% or more.
  • a detergent or cleaning agent is understood to mean all conceivable types of detergent or cleaning agent, both concentrates and undiluted agents, for use on a commercial scale, in the washing machine or for hand washing or cleaning.
  • detergents for textiles, carpets, or natural fibers, for which the term detergent is used.
  • dishwashing detergents for dishwashers (automatic dishwashing detergents) or manual dishwashing detergents or cleaners for hard surfaces such as metal, glass, porcelain, ceramics, tiles, stone, painted surfaces, plastics, wood or leather, for which the term cleaning agent is used
  • manual dishwashing detergents for example also scouring agents, glass cleaners, toilet fresheners, etc.
  • An agent according to the invention advantageously contains the protease according to the invention in an amount of 2 pg to 20 mg, preferably from 5 pg to 17.5 mg, particularly preferably from 20 pg to 15 mg and most preferably from 50 pg to 10 mg per g of the agent .
  • the concentration of the protease (active enzyme) described herein in the agent is >0 to 1% by weight, preferably 0.0001 or 0.001 to 0.1% by weight based on the total weight of the agent or composition.
  • the agents according to the invention can contain one or more surfactants, with anionic surfactants, nonionic surfactants and mixtures thereof being particularly suitable, but cationic, zwitterionic and/or amphoteric surfactants can also be included.
  • the agents preferably contain 5 to 70% by weight of surfactant, preferably 5 to 60% by weight and further preferably 5 to 50% by weight of surfactant.
  • Suitable anionic surfactants are in particular soaps and those which contain sulfate or sulfonate groups with preferably alkali metal ions as cations.
  • Soaps that can be used are preferably the alkali salts of saturated or unsaturated Ci2-18 fatty acids. Such fatty acids can also be used in a form that is not completely neutralized.
  • the useful surfactants of the sulfate type include the salts of the sulfuric acid half-esters of Ci2-18 fatty alcohols and the sulfation products of the nonionic surfactants mentioned with a low degree of ethoxylation.
  • Suitable alkylbenzene sulfonates are preferably selected from linear or branched alkylbenzene sulfonates of the formula in which R' and R" are independently H or alkyl and together contain 6 to 19, preferably 7 to 15 and in particular 9 to 13 carbon atoms.
  • R' and R" are independently H or alkyl and together contain 6 to 19, preferably 7 to 15 and in particular 9 to 13 carbon atoms.
  • a very particularly preferred representative is sodium dodecyl benzyl sulfonate.
  • sulfuric acid monoesters of the straight-chain or branched Cy-2i alcohols ethoxylated with 1 to 6 moles of ethylene oxide such as 2-methyl-branched Cg-n alcohols with an average of 3.5 moles of ethylene oxide (EO) or Ci2-18 fatty alcohols with 1 up to 4 EO are suitable.
  • Suitable alkyl ether sulfates are, for example, compounds of the formula
  • the stated degree of ethoxylation represents a statistical average, which can be a whole or a fractional number for a specific product.
  • the alkoxylation levels reported represent statistical averages, which may be a whole or a fractional number for a specific product.
  • Preferred alkoxylates/ethoxylates have a narrow homolog distribution (narrow range ethoxylates, NRE).
  • detergents also contain soap(s).
  • Preferred detergents are therefore characterized in that they contain soap(s).
  • Saturated fatty acid soaps such as the salts of lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, hydrogenated erucic acid and behenic acid, and in particular soap mixtures derived from natural fatty acids, e.g. coconut, palm kernel or tallow fatty acids, are suitable.
  • the nonionic surfactants used are preferably alkoxylated, advantageously ethoxylated, in particular primary alcohols with preferably 8 to 18 carbon atoms and an average of 1 to 12 moles of ethylene oxide (EO) per mole of alcohol, in which the alcohol residue can be linear or preferably methyl-branched in the 2-position or linear and methyl-branched residues in the mixture, as are usually present in oxo alcohol residues.
  • EO ethylene oxide
  • alcohol residue can be linear or preferably methyl-branched in the 2-position or linear and methyl-branched residues in the mixture, as are usually present in oxo alcohol residues.
  • alcohol ethoxylates with linear residues from alcohols of native origin with 12 to 18 carbon atoms for example from coconut, palm, tallow or oleyl alcohol, and an average of 2 to 8 EO per mole of alcohol are preferred.
  • the preferred ethoxylated alcohols include, for example, Ci2-14 alcohols with 3 EO or 4 EO, Cg-n-alcohol with 7 EO, C -is alcohols with 3 EO, 5 EO, 7 EO or 8 EO, Ci2-is- Alcohols with 3 EO, 5 EO or 7 EO and mixtures of these, such as mixtures of Ci2-14 alcohol with 3 EO and C12-18 alcohol with 5 EO.
  • the ethoxylation levels reported represent statistical averages, which may be a whole or a fractional number for a specific product.
  • Preferred alcohol ethoxylates have a narrow homolog distribution (narrow range ethoxylates, NRE).
  • fatty alcohols with more than 12 EO can also be used. Examples of this are tallow fatty alcohol with 14 EO, 25 EO, 30 EO or 40 EO.
  • alkyl polyglycosides APG
  • Alkyl polyglycosides that can be used satisfy the general formula
  • RO(G)z in which R represents a linear or branched, in particular methyl-branched, saturated or unsaturated, aliphatic radical with 8 to 22, preferably 12 to 18 C atoms and G is the symbol for a glycose unit with 5 or 6 C -atoms, preferably glucose.
  • the degree of glycosidation z is between 1 and 4, preferably between 1 and 2 and in particular between 1.1 and 1.4.
  • Linear alkyl polyglycosides, i.e. alkyl polyglycosides, in which the polyglycosyl residue is a glucose residue and the alkyl residue is an n-alkyl residue are preferred.
  • a detergent preferred in this application contains one or more phosphonate(s) from the group aminotrimethylenephosphonic acid (ATMP) and/or salts thereof; Ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (EDTMP) and/or their salts; Diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic acid) (DTPMP) and/or their salts; 1-Hydroxyethane-1,1-diphosphonic acid (HEDP) and/or its salts; 2-Phosphonobutane-1,2,4-tricarboxylic acid (PBTC) and/or its salts; Hexamethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid) (HDTMP) and/or their salts; Nitrilotri(methylenephosphonic acid) (NTMP) and/or their salts.
  • ATMP aminotrimethylenephosphonic acid
  • ETMP Ethylenediaminetetra(methylenephosphonic acid)
  • DTPMP Diethylenetriaminepenta(methylenephosphonic
  • the detergents according to the invention also preferably contain builders, preferably at least one water-soluble and/or water-insoluble, organic and/or inorganic builder.
  • the builders include in particular silicates, carbonates and organic cobuilders.
  • organic builder substances can be contained in amounts of up to 50% by weight, in particular up to 25% by weight, preferably from 10 to 20% by weight and particularly preferably from 1 to 5% by weight.
  • the free acids typically also have the property of an acidifying component and are therefore also used to set a lower and milder pH value of detergents.
  • citric acid, succinic acid, glutaric acid, adipic acid, gluconic acid and any mixtures of these should be mentioned.
  • Citric acid or salts of citric acid are particularly preferably used as a building substance.
  • Copolymers of acrylic acid with maleic acid which contain 50 to 90% by weight of acrylic acid and 50 to 10% by weight of maleic acid have proven to be particularly suitable.
  • Their relative molecular mass, based on free acids, is generally 2000 to 70,000 g/mol, preferably 20,000 to 50,000 g/mol and in particular 30,000 to 40,000 g/mol.
  • a solid agent according to the invention preferably contains at least one water-soluble and/or water-insoluble, organic and/or inorganic builder.
  • the water-soluble organic builder substances include the above-mentioned organic builders.
  • the compositions of the invention can also contain inorganic water-soluble builders. Suitable water-soluble inorganic builder materials are, in particular, alkali metal silicates, alkali metal carbonates, alkali metal hydrogen carbonates, alkali metal phosphates and/or sesquicarbonates, which can be present in the form of their alkaline, neutral or acidic sodium or potassium salts. Small amounts of calcium carbonates may also be contained in solid textile detergents.
  • alkali metal silicates that can be used as builders in the agents according to the invention preferably have a molar ratio of alkali metal oxide to SiO2 of less than 0.95, in particular from 1:1.1 to 1:12, and can be amorphous or crystalline.
  • Preferred alkali metal silicates are the sodium silicates, in particular the amorphous sodium silicates, with a molar ratio Na2O:SiO2 of 1:2 to 1:2.8.
  • the weight ratio of amorphous alkali metal silicate to crystalline alkali metal silicate is preferably 1:2 to 2:1 and in particular 1:1 to 2:1.
  • Crystalline layered silicates of the formula (I) given above are sold by Clariant GmbH under the trade name Na-SKS, e.g.
  • the agents according to the invention are preferably free of phosphate builders, ie contain less than 1% by weight, preferably no deliberately added phosphate builders.
  • the agents can also contain water-insoluble builder substances.
  • Water-insoluble inorganic builder materials are in particular crystalline or amorphous water-dispersible alkali alumosilicates, in amounts of up to 50% by weight, preferably not more than 40% by weight, in particular from 3 to 20% by weight and particularly preferably from 1 to 15% by weight. -%, used.
  • crystalline sodium aluminosilicates in detergent quality in particular zeolite A, zeolite P, zeolite MAP and possibly zeolite Condea Augusta SpA), preferred.
  • Amounts close to the upper limit mentioned are preferably used in solid, particulate agents.
  • Suitable aluminosilicates in particular have no particles with a grain size of over 30 pm and preferably consist of at least 80% by weight of particles with a size of under 10 pm.
  • Their calcium binding capacity which can be determined according to DE 2412837 A1, is usually in the range of 100 to 200 mg CaO per gram.
  • the detergents according to the invention can contain an organic solvent as a further component.
  • organic solvents have a beneficial effect on the enzyme stability and the cleaning performance of these agents.
  • Preferred organic solvents come from the group of mono- or polyhydric alcohols, alkanolamines or glycol ethers.
  • the detergents according to the invention preferably contain these amines in amounts of 0.1 to 10% by weight, preferably from 0.2 to 8.0% by weight and more preferably from 0.5 to 5.0% by weight, in each case based on their total weight.
  • a particularly preferred alkanolamine is ethanolamine.
  • Detergents or cleaning agents according to the invention can only contain a protease. Alternatively, they can also contain further hydrolytic enzymes or other enzymes in a concentration appropriate for the effectiveness of the agent. A further embodiment of the invention therefore represents agents which further comprise one or more further enzymes.
  • enzymes which can preferably be used are all enzymes which can develop a catalytic activity in the agent according to the invention, in particular a lipase, amylase, cellulase, hemicellulase, mannanase, tannase, xylanase, xanthanase, xyloglucanase, ß-glucosidase, pectinase, carrageenase, perhydrolase, Oxidase, oxidoreductase or other proteases - which can be distinguished from the proteases according to the invention - and mixtures thereof.
  • Further enzymes are advantageously contained in the agent in an amount of 1 x 10 -8 to 5 percent by weight based on active protein. Increasingly preferred is each further enzyme in an amount of 1 x 10 -7 to 3% by weight, from 0.00001 to 1% by weight, from 0.00005 to 0.5% by weight, from 0.0001 up to 0.1% by weight and particularly preferably from 0.0001 to 0.05% by weight in agents according to the invention, based on active protein.
  • the enzymes particularly preferably show synergistic cleaning performance against certain dirt or stains, ie the enzymes contained in the agent composition support each other in their cleaning performance.
  • such a synergism exists between the protease contained according to the invention and a further enzyme of an agent according to the invention, including in particular between the protease mentioned and an amylase and/or a lipase and/or a mannanase and/or a cellulase and/or a pectinase .
  • Synergistic effects can occur not only between different enzymes, but also between one or more enzymes and other ingredients of the agent according to the invention.
  • textile detergents have at least one protease, at least one amylase, at least one cellulase and at least one lipase.
  • Textile detergents which have 3 to 10 different enzymes are particularly preferred, with textile detergents which have 3 to 10 different types of enzymes being particularly preferred in terms of their cleaning performance against a very wide range of stains.
  • proteases that can be used are those that are naturally present in the microorganisms Stenotrophomonas maltophilia, in particular Stenotrophomonas maltophilia K279a, Bacillus intermedius and Bacillus sphaericus.
  • Amylases are preferably used which have an amino acid substitution at two, preferably three, of the positions mentioned above, in particular a substitution at position 202 selected from M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, a substitution at position 255, in particular S255N , and a substitution at position 172, particularly R172Q.
  • the M202L and M202T mutants are particularly preferred.
  • the amylase in the count according to SEQ ID NO:14 has amino acid substitutions at three or more of positions 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345 and optionally one or several, preferably all, of the substitutions and/or deletions at positions: 118, 183, 184, 195, 320 and 458, particularly preferably R118K, D183*, G184*, N195F, R320K and/or R458K.
  • the amylase in the count according to SEQ ID NO:14 has the following amino acid substitutions and/or deletions: M9L-M323T; M9L-M202L/T/V/I-M323T; M9L-N195F-M202L/T/V/I-M323T; M9L-R118K-D183*-G184*-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*- G184*-M202L/T/V/l-R320K-M323T-R458K; M9L-G149A-G182T-G186A-M202L-T257I-Y295F-N299Y-M323T-A339S-E345R; M9L-G149A-G182T-G186A-M202I-T257I-Y295F-N299Y-M323T-A339S-E345R; M9L
  • cellulase refers to an enzyme that catalyzes the hydrolysis of 1,4- ⁇ -D-glucoside bonds in cellulose (cellobiose), and/or lichenin and/or ⁇ -D-glucans. They are often also able to hydrolyze the 1,4 bonds in ß-D-glucans, which have 1,3 bonds in addition to the 1,4 bonds. Cellulases are able to break down cellulose into ß-glucose. Consequently, cellulases act in particular on residues containing cellulose or cellulose derivatives and catalyze their hydrolysis. In a preferred embodiment of the invention the Cellulase is an endoglucanase (EC 3.2.1.4).
  • Synonymous names can be used for cellulases, in particular endoglucanase, endo-1,4-ß-glucanase, carboxymethylcellulase, endo-1,4-ß-D-glucanase, ß-1,4-glucanase, ß-1,4-endoglucan hydrolase , celludextrinase or avicelase.
  • the determining factor as to whether an enzyme is a cellulase within the scope of the invention is its ability to hydrolyze 1,4-ß-D-glucoside bonds in cellulose.
  • Suitable cellulases include those of bacterial or fungal origin. Chemically modified or protein engineered mutants are included. Suitable cellulases are cellulases from the genera Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, e.g. B. the fungal cellulases from Humicola insolens, Myceliophthora thermophila and Fusarium oxysporum, which are disclosed in US 4435307, US 5648263, US 5691178, US 5776757 and WO 89/09259. Particularly suitable cellulases are the alkaline or neutral cellulases with color-care properties.
  • cellulases examples include cellulases described in EP 0495257, EP 0531372, WO 96/11262, WO 96/29397 and WO 98/08940.
  • Other examples are cellulase variants such as those in WO 94/07998, EP 0531315, EP 3212777, EP 3502243, EP 3653705, EP 3653706, US 5457046, US 5686593, US 5763254, WO 95/24471, WO 98 /12307 and WO 99/01544 and WO 2019/122520 are described.
  • cellulases with endo-1,4-glucanase activity are described in WO 2002/099091, e.g. those with a sequence of at least 97% identity to the amino acid sequence of positions 1 to 773 of SEQ ID NO:2 of WO 2002/099091.
  • a further example may include a GH44 xyloglucanase, e.g. a xyloglucanase enzyme with a sequence of at least 60% identity to positions 40 to 559 of SEQ ID NO:2 of WO 2001/062903.
  • the cutinases that were originally isolated from Fusarium solani pisi and Humicola insolens can be used.
  • Equally usable lipases are available from the company Amano under the names Lipase CE®, Lipase P®, Lipase B® or Lipase CES®, Lipase AKG®, Bacillus sp. Lipase®, Lipase AP®, Lipase M-AP® and Lipase AML® available.
  • the lipases or cutinases from the company Danisco/DuPont can be used, the starting enzymes of which were originally isolated from Pseudomonas mendocina and Fusarium solanii.
  • lipases which are also referred to as acyltransferases or perhydrolases, for example, acyltransferases with homology to Candida antarctica lipase A (WO 2010/111143), acyltransferase from Mycobacterium smegmatis (WO 2005/056782), perhydrolases from CE 7- Family (WO 2009/067279) and variants of the M. smegmatis perhydrolase, in particular the S54V variant used in the commercial product Gentle Power Bleach from Huntsman Textile Effects Pte Ltd (WO 2010/100028).
  • Preferred commercial lipase products include LipolaseTM, LipexTM, LipolexTM and LipocleanTM (Novozymes A/S), Lumafast (Genencor/DuPont) and Lipomax (Gist-Brocades).
  • 189T/L/I/R, 211 N/Q and 224A/G preferably 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N and 224A, existing group is selected, b) at least one peptide , which has an amino acid sequence leading to an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 , SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, and SEQ ID NO:11 and SEQ ID NO:12 is selected, preferably from SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 or SEQ ID NO:11, over their total length at least 90% and increasingly preferably at least 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or 100% is identical.
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising a) at least one protease which has proteolytic activity and one of the following amino acid substitution variants, each based on the numbering according to SEQ ID NO:1: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271E; (ii) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising a) at least one protease which has proteolytic activity and one of the following amino acid substitution variants, each based on the numbering according to SEQ ID NO:1: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271E; (ii) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271
  • 189T/L/I/R, 211 N/Q and 224A/G preferably 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N and 224A, existing group is selected, b) at least one peptidic Inhibitor that has an initial inhibitory power of at least 2.5 to 50, preferably 5 to 40, preferably 10 to 30, more preferably 12.5 to 20.
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising a) at least one protease which has proteolytic activity and one of the following amino acid substitution variants, each based on the numbering according to SEQ ID NO:1: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271E; (ii) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E
  • 189T/L/I/R, 211 N/Q and 224A/G preferably 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N and 224A, existing group is selected, b) at least one peptidic Inhibitor which has an initial inhibitory power of at least 2.5 to 50, preferably 5 to 40, preferably 10 to 30, more preferably 12.5 to 20, whereby the protease after storage (as described in Example 2) by a factor of at least 1.1 to 2.5, preferably 1.2 to 2.0, more preferably 1.3 to 1.9, has increased residual activity when the protease is stored together with the peptide.
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising a) at least one protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its entire length at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5% and 98% are identical, and each based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i).
  • 189T/L/I/R, 211 N/Q and 224A/G preferably 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N and 224A, existing group is selected, b) at least one peptidic Inhibitor which has an initial inhibitory power of at least 2.5 to 50, preferably 5 to 40, preferably 10 to 30, more preferably 12.5 to 20, whereby the protease after storage (as described in Example 2) by a factor of at least 1.1 to 2.5, preferably 1.2 to 2.0, more preferably 1.3 to 1.9, increased residual activity when the protease is stored together with the peptide, the detergent and cleaning agent being in the Is essentially free of boron-containing compounds, preferably free of boron-containing compounds.
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising a) at least one protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its entire length at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5% and 98% are identical, and each based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i).
  • Detergent and cleaning agent in particular liquid detergent and cleaning agent, particularly preferably liquid textile detergent, comprising a) at least one protease which has proteolytic activity and comprises an amino acid sequence which corresponds to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO:1 over its entire length at least 70% and increasingly preferably at least 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5% and 98% are identical, and each based on the numbering according to SEQ ID NO:1 (i).
  • peptidic Inhibitor which has an initial inhibitory power of at least 2.5 to 50, preferably 5 to 40, preferably 10 to 30, more preferably 12.5 to 20, wherein the protease after storage (as described in Example 2) has a residual activity increased by a factor of at least 1.1 to 2.5, preferably 1.2 to 2.0, more preferably 1.3 to 1.9, if the protease is stored together with the peptide, wherein the detergent and cleaning agent is essentially free of boron-containing compounds, preferably free of boron-containing compounds, and wherein the agent is in a 1% by weight solution in deionized water at 20 ° C pH in a range from about 6 to about 11, in particular from about 6.5 to about 10.5, more preferably from
  • Example 1 Determination of the activity of proteases in the presence of peptidic inhibitors

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels, b) mindestens ein Peptid (peptidischen Inhibitor), vorzugsweise in einem 0,5-, 1,0-, 1,5-, 2,0-, 2,5-, 3,0-, 3,5-, 4,0-, 4,5-, 5,0-, 10-, 15-, 18-, 20-, 25-, 27- oder 30-fachen molaren Überschuss bezogen auf der Molarität der eingesetzten Protease, bevorzugt in einem 15-, 18-, 20-, 25 oder 27-fachen molaren Überschuss, wobei das Peptid vorzugsweise eine Länge von 50 bis 200, bevorzugt 55 bis 190, weiter bevorzugt 60 bis 180, Aminosäureresten aufweist, und c) mindestens einen Wasch- und Reinigungsmittelinhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels. Ebenfalls Bestandteil der Erfindung sind die entsprechenden Wasch- und Reinigungsverfahren, die Verwendung der hierin beschriebenen Mittel sowie die Verwendung eines peptidischen Inhibitors zur Verbesserung der Stabilität einer Protease in Wasch- oder Reinigungsmittel.

Description

WASCH- UND REINIGUNGSMITTEL MIT VERBESSERTER ENZYMSTABILITÄT
Die Erfindung liegt auf dem Gebiet der Enzymtechnologie. Die Erfindung betrifft Wasch- oder Reinigungsmittel, umfassend mindestens eine Protease und mindestens einen peptidischen Inhibitor. Ebenfalls Bestandteil der Erfindung sind die entsprechenden Wasch- und Reinigungsverfahren, die Verwendung der hierin beschriebenen Mittel sowie die Verwendung eines peptidischen Inhibitors zur Verbesserung der Stabilität einer Protease in Wasch- oder Reinigungsmittel.
Der Einsatz von Enzymen in Waschmitteln ist seit Jahrzehnten im Stand der Technik etabliert. Sie dienen dazu, das Leistungsspektrum der betreffenden Mittel entsprechend ihren speziellen Aktivitäten zu erweitern. Hierzu gehören insbesondere hydrolytische Enzyme wie Proteasen, Amylasen, Lipasen und Cellulasen. Die ersten drei genannten hydrolysieren Proteine, Stärke und Fette und tragen somit unmittelbar zur Schmutzentfernung bei. Cellulasen werden insbesondere wegen ihrer Gewebewirkung eingesetzt. Eine weitere Gruppe von Waschmittelenzymen sind oxidative Enzyme, insbesondere Oxidasen, die ggf. im Zusammenspiel mit anderen Komponenten vorzugsweise dazu dienen, Anschmutzungen zu bleichen oder die bleichenden Agentien in situ zu erzeugen. Neben diesen Enzymen, die einer fortwährenden Optimierung unterworfen werden, werden laufend weitere Enzyme für den Einsatz in Waschmitteln bereitgestellt, um insbesondere spezielle Anschmutzungen optimal angehen zu können, wie z.B. Pektinasen, ß-Glucanasen, Mannanasen oder weitere Hemicellulasen (Glykosidasen) zur Hydrolyse insbesondere spezieller pflanzlicher Polymere.
Proteasen gehören zu den technisch bedeutendsten Enzymen. Für Wasch- und Reinigungsmittel sind sie die am längsten etablierten und in praktisch allen modernen, leistungsfähigen Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme. In Wasch- und Reinigungsmitteln dienen Proteasen dem Abbau proteinhaltiger Anschmutzungen auf dem Reinigungsgut. Allerdings hydrolysieren sie auch sich selbst (Autoproteolyse) und alle anderen in den betreffenden Mitteln enthaltenen Proteine, d.h. insbesondere weitere in den Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme. Dies geschieht besonders während des Reinigungsvorgangs, d.h. in der wässrigen Wasch- bzw. Reinigungsflotte, wenn vergleichsweise günstige Reaktionsbedingungen vorliegen. Dies geschieht in geringerem Ausmaß aber auch während der Lagerung der betreffenden Mittel, weshalb mit einer langen Lagerung immer auch ein gewisser Verlust der Proteaseaktivität sowie der Aktivität der weiteren Enzyme einhergeht. Durch das Einbüßen enzymatischer Aktivität zeigen sie keine optimale Reinigungsleistung mehr. Besonders problematisch ist dies in gelförmigen oder flüssigen und insbesondere in wasserhaltigen Rezepturen, weil in diesem mit dem enthaltenen Wasser sowohl das Reaktionsmedium als auch das Hydrolyse-Reagenz zur Verfügung stellen.
Generell sind nur ausgewählte Proteasen für den Einsatz in flüssigen tensidhaltigen Zubereitungen überhaupt geeignet. Viele Proteasen zeigen in derartigen Zubereitungen keine ausreichende katalytische Leistung oder aber sie sind nicht ausreichend stabil. Für die Anwendung von Proteasen in Reinigungsmitteln ist daher eine hohe katalytische Aktivität und Stabilität unter Bedingungen, wie sie sich während eines Waschvorgangs darstellen, besonders wünschenswert. Beispiele für die in Wasch- und Reinigungsmitteln bevorzugt eingesetzten Proteasen vom Subtilisin- Typ sind die Subtilisine BPN' aus Bacillus amyloliquefaciens und Carlsberg aus Bacillus licheniformis, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die Protease aus Bacillus lentus, insbesondere aus Bacillus lentus DSM 5483, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7, sowie Varianten der genannten Proteasen, die eine gegenüber der Ausgangsprotease veränderte Aminosäuresequenz aufweisen. Proteasen werden durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren gezielt oder zufallsbasiert verändert und so beispielsweise für den Einsatz in Wasch- und Reinigungsmitteln optimiert. Dazu gehören Punkt-, Deletions- oder Insertionsmutagenese oder Fusion mit anderen Proteinen oder Proteinteilen. So sind für die meisten aus dem Stand der Technik bekannten Proteasen entsprechend optimierte Varianten bekannt. In der europäischen Patentanmeldung EP 2016175 A1 ist beispielsweise eine für Wasch- und Reinigungsmittel vorgesehene Protease aus Bacillus pumilus offenbart.
Ein Ziel bei der Entwicklung von Wasch- und Reinigungsmittelrezepturen besteht daher darin, die enthaltenen Enzyme insbesondere während der Lagerung zu stabilisieren und sie zudem insbesondere während Lagerung und/oder Anwendung des Wasch- oder Reinigungsmittels vor Denaturierung und/oder Spaltung bzw. Abbau und/oder Zerfall durch physikalische Einflüsse oder Oxidation etc. zu schützen. Ein Schwerpunkt dieser Entwicklungen besteht im Schutz der enthaltenen Proteine und/oder Enzyme gegen (auto-)proteolytische Spaltung. Diese kann durch den Aufbau physikalischer Barrieren erfolgen, etwa durch Verkapselung der Enzyme in speziellen Enzymgranulaten oder durch Konfektionierung der Mittel in Zwei- oder Mehrkammersystemen. Der andere vielfach beschrittene Weg besteht darin, chemische Verbindungen zuzusetzen, die die Proteasen inhibieren und somit insgesamt als Stabilisatoren für Proteasen und die weiteren enthaltenen Proteine und Enzyme wirken. Es muss sich dabei jedoch um reversible Proteaseinhibitoren handeln, da die Proteaseaktivität nur vorübergehend, insbesondere während der Lagerung, nicht aber mehr während des Reinigungsprozesses unterbunden werden soll.
Im Stand der Technik sind verschiedene reversible Proteaseinhibitoren beschrieben, z.B. Polyole, insbesondere Glycerin und 1 ,2-Propylenglykol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester. Bekannt ist auch, Borsäurederivate zusammen mit Polyolen einzusetzen. Auch 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA) ist ein aus dem Stand der Technik bekannter Proteaseinhibitor. Ferner sind Peptidaldehyde, d.h. Oligopeptide mit reduziertem C- Terminus, insbesondere solche aus 2 bis 50 Monomeren, zu diesem Zweck beschrieben. Zu den peptidischen reversiblen Proteaseinhibitoren gehören unter anderem Ovomucoid und Leupeptin. Auch spezifische, reversible Peptidinhibitoren sowie Fusionsproteine aus Proteasen und spezifischen Peptidinhibitoren werden hierfür eingesetzt.
Es besteht jedoch weiterhin Bedarf, die Reinigungsleistung von enzymhaltigen Wasch- und Reinigungsmitteln zu verbessern sowie die in den Wasch- und Reinigungsmitteln enthaltenen Enzyme besser zu stabilisieren. Insbesondere ist es eine zunehmende Anforderung auf borsäurehaltige Verbindungen, d.h. insbesondere borhaltige Proteaseinhibitoren, in Wasch- und Reinigungsmittel zu verzichten. Überraschenderweise wurde nun festgestellt, dass bestimmte peptidische Inhibitoren eine Protease vorteilhaft stabilisieren und reversibel inhibieren können und daher besonders für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln geeignet sind. Insbesondere wurde überraschenderweise festgestellt, dass eine Protease aus Bacillus pumilus, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, durch bestimmte peptidische Inhibitoren vorteilhaft stabilisiert werden kann und diese Kombination daher besonders für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln geeignet ist.
Gegenstand der Erfindung ist daher in einem ersten Aspekt ein Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere ein flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt ein flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels, b) mindestens ein Peptid, vorzugsweise in einem 0,5-, 1 ,0-, 1 ,5-, 2,0-, 2,5-, 3,0-, 3,5-, 4,0-, 4,5-, 5,0-, 10-, 15-, 18-, 20-, 25-, 27- oder 30-fachen molaren Überschuss bezogen auf der Molarität der eingesetzten Protease, wobei das Peptid vorzugsweise eine Länge von 50 bis 200, bevorzugt 55 bis 190, weiter bevorzugt 60 bis 180, Aminosäureresten aufweist, und c) mindestens einen Wasch- und Reinigungsmittelinhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere ein flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt ein flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, vorzugsweise in einem 0,5-, 1 ,0-, 1 ,5-, 2,0-, 2,5-, 3,0-, 3,5-, 4,0-, 4,5-, 5,0-, 10-, 15-, 18-, 20-, 25-, 27- oder 30-fachen molaren Überschuss bezogen auf der Molarität der eingesetzten Protease, wobei das Peptid vorzugsweise eine Länge von 50 bis 200, bevorzugt 55 bis 190, weiter bevorzugt 60 bis 180, Aminosäureresten aufweist, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% identisch ist, und c) mindestens einen Wasch- und Reinigungsmittelinhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels.
Weitere Aspekte der Erfindung betreffen Verfahren zur Herstellung eines solchen Wasch- oder Reinigungsmittels, Verfahren zur Reinigung von Textilien und/oder harten Oberflächen, insbesondere Geschirr, unter Verwendung eines erfindungsgemäßen Mittels.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung betrifft die Verwendung eines hierin definierten Peptids (peptidischen Inhibitors) zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen, insbesondere von hierin definierten Proteasen aus Bacillus pumilus, in einem Wasch- und Reinigungsmittel, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C, sowie die Verwendung eines hierin definierten Peptids zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, insbesondere einer hierin definierten Protease aus Bacillus pumilus.
Bevorzugt ist das erfindungsgemäße Waschmittel ein flüssiges Textilwaschmittel. Weiter bevorzugt weist das erfindungsgemäße Textilwaschmittel in 1 Gew.-%-iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9, auf.
Erfindungsgemäße Textilwaschmittel zeigen insbesondere auch dann Leistungsvorteile gegenüber anderen Textilwaschmitteln, wenn die Textilwaschmittel mindestens ein zusätzliches Enzym derselben oder einer anderen Art, also z.B. Amylase, Cellulase, Lipase, Mannanase oder Pektinase enthalten, wobei die Auflistung der weiteren Enzyme nicht vollständig ist. Daher ist es bevorzugt, dass die erfindungsgemäßen Textilwaschmittel mindestens ein zusätzliches Enzym derselben Art (also eine weitere Protease) oder einer anderen Art enthalten.
Diese und weitere Aspekte, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden für den Fachmann aus dem Studium der folgenden detaillierten Beschreibung und Ansprüche ersichtlich. Dabei kann jedes Merkmal aus einem Aspekt der Erfindung in jedem anderen Aspekt der Erfindung eingesetzt werden. Ferner ist es selbstverständlich, dass die hierin enthaltenen Beispiele die Erfindung beschreiben und veranschaulichen sollen, diese aber nicht einschränken und insbesondere die Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt ist.
Alle Prozentangaben sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozent (Gew.-%). Numerische Bereiche, die in dem Format "von x bis y" angegeben sind, schließen die genannten Werte ein. Wenn mehrere bevorzugte numerische Bereiche in diesem Format angegeben sind, ist es selbstverständlich, dass alle Bereiche, die durch die Kombination der verschiedenen Endpunkte entstehen, ebenfalls erfasst werden.
"Mindestens eine", wie hierin verwendet, bedeutet eine oder mehrere, d.h. 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14 oder mehr.
Der Begriff "Wasch- und Reinigungsmittel" bzw. "Wasch- oder Reinigungsmittel", wie hierin verwendet, ist gleichbedeutend mit dem Begriff "Mittel" und bezeichnet eine Zusammensetzung zum Reinigen von Textilien und/oder harten Oberflächen, insbesondere Geschirr, wie in der Beschreibung erläutert.
"Etwa", "ca." oder "ungefähr", wie hierin in Bezug auf einen Zahlenwert verwendet, beziehen sich auf den entsprechenden Zahlenwert ±10%, vorzugsweise ±5%.
"Im Wesentlichen frei von" bedeutet, dass die Zusammensetzung bzw. das Mittel weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 1 Gew.-%, weiter bevorzugt weniger als 0,5 Gew.-% und besonders bevorzugt weniger als 0,1 Gew.-%, der entsprechenden Substanz, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung/des Mittels, enthält.
"Flüssig", wie hierin verwendet, schließt Flüssigkeiten und Gele sowie auch pastöse Zusammensetzungen ein. Es ist bevorzugt, dass die flüssigen Zusammensetzungen bei Raumtemperatur fließfähig und gießbar sind, es ist aber auch möglich, dass sie eine Fließgrenze aufweisen. Ein Stoff, z.B. eine Zusammensetzung oder ein Mittel ist gemäß Definition der Erfindung festförmig, wenn sie bei 25°C und 1013 mbar im festen Aggregatzustand vorliegt. Ein Stoff, z.B. eine Zusammensetzung oder ein Mittel ist gemäß Definition der Erfindung flüssig, wenn sie bei 25°C und 1013 mbar im flüssigen Aggregatzustand vorliegt. Dabei umfasst flüssig auch gelförmig.
"Variante", wie hierin verwendet, bezieht sich auf natürliche oder artifiziell erzeugte Variationen einer nativen Protease, die eine gegenüber der Referenzform abgewandelte Aminosäuresequenz aufweist.
Die Angabe "in einem 0,5-fachen molaren Überschuss eines Rohstoffs bezogen auf die Molarität der eingesetzten Protease" bedeutet, dass die Anzahl an Teilchen des Rohstoffs, die in der Zusammensetzung bzw. dem Mittel vorhanden sind, genau der Hälfte der Anzahl an Teilchen der Protease, die in der Zusammensetzung bzw. dem Mittel vorhanden sind, entspricht. Entsprechend bedeutet dann die Angabe "in einem 2,0-fachen molaren Überschuss eines Rohstoffs bezogen auf die Molarität der eingesetzten Protease", dass die doppelte Anzahl an Rohstoffteilchen im Vergleich zu Proteaseteilchen vorhanden ist.
Eine "Verbesserung der Stabilität eines Enzyms" im Sinne der Erfindung liegt vor, wenn die Anwesenheit eines peptidischen Inhibitors bewirkt, dass ein Wasch- oder Reinigungsmittel umfassend mindestens eine Protease und mindestens einen peptidischen Inhibitor (erfindungsgemäßes Waschoder Reinigungsmittel) nach einer Lagerung eine höhere enzymatische Aktivität der Protease und/oder ggf. weiterer in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme aufweist im Vergleich zu einer Kontrollzubereitung, die sich nur durch die Abwesenheit des peptidischen Inhibitors von dem erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel unterscheidet (Kontrolle). Nach Lagerung weist das erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel daher eine höhere Restaktivität der enthaltenen Protease und/oder ggf. weiterer enthaltener Enzyme auf im Vergleich zur Kontrolle, wobei das erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel und die Kontrolle die gleiche enzymatische Ausgangsaktivität bei Lagerbeginn aufweisen, beide Mittel auf die gleiche Art und Weise behandelt werden, insbesondere betreffend die Bedingungen der Lagerung und die Bestimmung der Enzymaktivität. Zunehmend bevorzugt erfolgt die Lagerung für mindestens 1 Woche, 2 Wochen, 3 Wochen oder 4 Wochen. Weiter bevorzugt erfolgt die Lagerung bei einer Temperatur von 20°C, 25°C, 30°C oder 40°C.
Die vorliegende Erfindung basiert auf der überraschenden Erkenntnis der Erfinder, dass die hierin beschriebenen peptidischen Inhibitoren eine verbesserte Lagerstabilität von Proteasen in Wasch- und Reinigungsmittel bewirken. Das ist insoweit besonders überraschend, da diese peptischen Inhibitoren bisher nicht in Zusammenhang mit einer reversiblen Proteasehemmung in Verbindung gebracht wurden. Insbesondere wurden sie bisher nicht in Zusammenhang mit den hierin beschriebenen Proteasen aus Bacillus pumilus und einer verbesserten Lagerstabilität und/oder verminderten Autoproteolyse gebracht. Ferner wurden die hierin beschriebenen peptidischen Inhibitoren nicht mit einer reversiblen Hemmung der hierin beschriebenen Bacillus pumilus Protease in Verbindung gebracht.
Die vorliegende Erfindung basiert insbesondere auf der überraschenden Erkenntnis der Erfinder, dass eine Bacillus pumilus Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, durch einen hierin definierten peptidischen Inhibitor vorteilhaft in Wasch- und Reinigungsmittel stabilisiert werden. Das ist insbesondere insoweit überraschend, als keine dieser hierin definierten peptidischen Inhibitoren bisher mit einer verbesserten Stabilität einer solchen Bacillus pumilus Protease in Wasch- oder Reinigungsmittel in Verbindung gebracht wurde. Ferner wurde ein solcher peptidischer Inhibitor bisher nicht mit einer verbesserten Stabilität weiterer in dem Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltenen Enzyme in Verbindung gebracht, wenn sie zusammen mit der genannten Bacillus pumilus Protease in dem Wasch- oder Reinigungsmittel vorliegen.
Erfindungsgemäß werden Peptide als peptidische Inhibitoren eingesetzt, die eine Länge von 50 bis 200, bevorzugt 55 bis 190, weiter bevorzugt 60 bis 180, Aminosäureresten aufweisen. Geeignete peptidische Inhibitoren können z.B. aus Streptomyces albogriseolus, Hordeum vulgare, Brachypodium distachyon, Populus trichocarpa, Triticum urartu, Setaria italica und Oryza sativa isoliert werden. Bevorzugte peptidische Inhibitoren sind ausgewählt aus Peptiden, die eine Aminosäuresequenz aufweisen, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist. Besonders bevorzugt sind peptidische Inhibitoren mit einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt sind. Ganz besonders bevorzugt sind peptidische Inhibitoren mit einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Die erfindungsgemäßen Mittel können einen oder mehrere peptidische(n) Inhibitor(en) umfassen.
Die erfindungsgemäßen Mittel können den/die peptidischen Inhibitor(en) in einem 0,5-, 1 ,0-, 1 ,5-, 2,0-, 2,5-, 3,0-, 3,5-, 4,0-, 4,5-, 5,0-, 10-, 15-, 18-, 20-, 25-, 27- oder 30-fachen molaren Überschuss bezogen auf die Molarität der eingesetzten Protease enthalten. Das bedeutet, wenn in einem erfindungsgemäßen Mittel 1 pmol Protease enthalten sind, können 0,5 pmol, 1 pmol, 1 ,5 pmol, 2,0 pmol, 2,5 pmol, 3,0 pmol, 3,5 pmol, 4,0 pmol, 4,5 pmol, 5,0 pmol, 10 pmol, 15 pmol, 18 pmol, 20 pmol, 25 pmol, 27 pmol oder 30 pmol eines entsprechenden peptidischen Inhibitors enthalten sein. Falls mehrere peptidische Inhibitoren enthalten sind, beziehen sich diese Angaben auf die Gesamtkonzentration.
In einer bevorzugten Ausführungsform erhöht ein erfindungsgemäßer peptidischer Inhibitor die Restaktivität einer Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird verglichen mit einer Lagerung ohne Peptid.
In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weist ein erfindungsgemäßer peptidischer Inhibitor eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 auf.
In bevorzugten Ausführungsformen ist die in den erfindungsgemäßen Mittel enthaltene Protease eine Protease aus Bacillus pumilus, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist. In weiter bevorzugten Ausführungsformen weist die erfindungsgemäß eingesetzte Protease proteolytische Aktivität auf, umfasst eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und weist, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, auf.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen weist die erfindungsgemäß eingesetzte Protease proteolytische Aktivität auf, umfasst eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und weist, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, auf.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen weist die erfindungsgemäß eingesetzte Protease proteolytische Aktivität auf, umfasst eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und weist, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, auf.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen weist die erfindungsgemäß eingesetzte Protease proteolytische Aktivität auf, umfasst eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91 %, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und weist, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A auf.
In besonders bevorzugten Ausführungsformen enthält das erfindungsgemäße Waschmittel eine Protease mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten:
(i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E;
(ii) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E;
(vi) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 .
In bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166 M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:2 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:2 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:2 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:2 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:2 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:2 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:3 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:3 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:3 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:3 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:3 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:3 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:4 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:4 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:4 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:4 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:4 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:4 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:5 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:5 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:5 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:5 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:5 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:5 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:6 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:6 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:6 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus YQ\I\I, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:6 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:6 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:6 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:7 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:7 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:7 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:7 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:7 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:7 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:8 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:8 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:8 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:8 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:8 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:8 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:9 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\I\I, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:9 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:9 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:9 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:9 aufweist. In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:9 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NQ:10 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NQ:10 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NQ:10 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NQ:10 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NQ:10 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:10 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:11 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:11 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:11 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:11 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:11 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:11 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:12 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens einer der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine Aminosäuresubstitution, die aus der aus YQ\N, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:12 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens zwei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens zwei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus YQ\I\I, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:12 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an mindestens drei der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens drei Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus Y6W, S89A, G131 H, S166M, N187D, S189R, S189T, S211 N und S224A bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:12 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt mindestens 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% und 98,8% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen P9T, N130D, T133A, N144K, Y217M, N252T und Q271 E und (ii) an den Positionen, die den Positionen 89, 189 und 224 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen S89A, S189T und S224A aufweist, und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:12 aufweist.
In weiter bevorzugten Ausführungsformen umfasst das erfindungsgemäße Mittel a) eine Protease, mit einer der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten: P9T-N130D-T133A- N 144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-N 130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T- Q271 E; Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M- S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T- S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, wobei die Nummerierung jeweils bezogen ist auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , und b) einen peptidischen Inhibitor, der eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO:12 aufweist.
In erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln umfasst das Wasch- oder Reinigungsmittel, jeweils bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- oder Reinigungsmittel, das Enzym, d.h. die Protease, in einer Menge von 0,005 bis 5 Gew.-%, bevorzugt von 0,05 bis 2 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,01 bis 0,5 Gew.-% und noch weiter bevorzugt von 0,02 bis 0,2 Gew.-%, und den peptidischen Inhibitor in einer Menge von 0,01 bis 15 Gew.-%, bevorzugt von 0,05 bis 5 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,1 bis 1 Gew.-% und noch weiter bevorzugt von 0,2 bis 0,75 Gew.-%.
In verschiedenen Ausführungsformen können das Enzym und der peptidische Inhibitor in einer Enzymzusammensetzung vorformuliert vorliegen. Wie aus den vorherigen Ausführungen ersichtlich, bildet das Enzym-Protein nur einen Bruchteil des Gesamtgewichts üblicher Enzym-Zubereitungen. Bevorzugt eingesetzte Protease-Zubereitungen enthalten zwischen 0,1 und 40 Gew.-%, bevorzugt zwischen 0,2 und 30 Gew.-%, besonders bevorzugt zwischen 0,4 und 20 Gew.-% und insbesondere zwischen 0,8 und 10 Gew.-% des Enzymproteins. In solchen Zusammensetzungen kann der peptidische Inhibitor in einer Menge von 0,05 bis 35 Gew.-%, vorzugsweise von 0,05 bis 10 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht in der Enzymzusammensetzung, enthalten sein. Diese Enzymzusammensetzung, die ebenfalls ein Bestandteil der vorliegenden Erfindung ist, kann dann in erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmitteln eingesetzt werden, und zwar in Mengen, die zu den hierin angegebenen Endkonzentrationen im Wasch- oder Reinigungsmittel führen.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Proteasen weisen enzymatische Aktivität auf, d.h., sie sind zur Hydrolyse von Peptiden und Proteinen befähigt, insbesondere in Wasch- oder Reinigungsmittel. Eine erfindungsgemäß eingesetzte Protease ist daher ein Enzym, welches die Hydrolyse von Amid/Peptidbindungen in Protein/Peptid-Substraten katalysiert und dadurch in der Lage ist, Proteine oder Peptide zu spalten. Ferner handelt es sich bei einer erfindungsgemäß eingesetzten Protease vorzugsweise um eine reife (mature) Protease, d.h. um das katalytisch aktive Molekül ohne Signal- und/oder Propeptid(e). Soweit nicht anders angegeben beziehen sich auch die angegebenen Sequenzen auf jeweils reife (prozessierte) Enzyme.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung ist die Protease ein frei vorliegendes Enzym. Dies bedeutet, dass die Protease mit allen Komponenten eines Mittels direkt agieren kann und, falls es sich bei dem Mittel um ein Flüssigmittel handelt, dass die Protease direkt mit dem Lösungsmittel des Mittels (z.B. Wasser) in Kontakt steht. In anderen Ausführungsformen kann ein Mittel Proteasen enthalten, die einen Interaktionskomplex mit anderen Molekülen bilden oder die eine "Umhüllung" enthalten. Hierbei kann ein einzelnes oder mehrere Protease Moleküle durch eine sie umgebende Struktur von den anderen Bestandteilen des Mittels getrennt sein. Eine solche trennende Struktur kann entstehen durch, ist allerdings nicht beschränkt auf, Vesikel, wie etwa eine Micelle oder ein Liposom. Die umgebende Struktur kann aber auch ein Viruspartikel, eine bakterielle Zelle oder eine eukaryotische Zelle sein. In verschiedenen Ausführungsformen kann ein Mittel Zellen von Bacillus pumilus oder Bacillus subtilis, die die erfindungsgemäßen Proteasen exprimieren, oder Zellkulturüberstände solcher Zellen enthalten.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet das Merkmal, dass eine Protease die angegebenen Substitutionen aufweist, dass sie an der jeweiligen Position eine (der angegebenen) Substitution(en) enthält, d.h. zumindest die angegebenen Positionen nicht anderweitig mutiert oder, beispielsweise durch Fragmentierung der Protease, deletiert sind. In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen weisen die hierin beschriebenen Proteasen mit Ausnahme der explizit erwähnten Substitutionen die Sequenz von SEQ ID NO:1 auf, d.h. sind abgesehen von den substituierten Positionen 100% identisch zu der Sequenz gemäß SEQ ID NO:1.
Die Bestimmung der Identität von Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen erfolgt durch einen Sequenzvergleich. Dieser Sequenzvergleich basiert auf dem im Stand der Technik etablierten und üblicherweise genutzten BLAST-Algorithmus (vgl. z.B. Altschul et al. (1990) Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215:403-410, und Altschul et al. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402) und geschieht prinzipiell dadurch, dass ähnliche Abfolgen von Nukleotiden oder Aminosäuren in den Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen einander zugeordnet werden. Eine tabellarische Zuordnung der betreffenden Positionen wird als Alignment bezeichnet. Ein weiterer im Stand der Technik verfügbarer Algorithmus ist der FASTA-Algorithmus. Sequenzvergleiche (Alignments), insbesondere multiple Sequenzvergleiche, werden mit Computerprogrammen erstellt. Häufig genutzt werden beispielsweise die Clustal-Serie (vgl. z.B. Chenna et al. (2003) Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs, Nucleic Acid Res., 31 :3497-3500), T-Coffee (vgl. z.B. Notredame et al. (2000) T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments, J. Mol. Biol., 302:205-217) oder Programme, die auf diesen Programmen bzw. Algorithmen basieren. Ferner möglich sind Sequenzvergleiche (Alignments) mit dem Computer-Programm Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Kalifornien, USA) mit den vorgegebenen Standardparametern, dessen AlignX-Modul für die Sequenzvergleiche auf ClustalW basiert, oder Clone Manager 10 (Verwendung der Scoring Matrix BLOSUM 62 für Sequenz-Alignment auf Aminosäureebene). Soweit nicht anders angegeben, wird die hierin angegebene Sequenzidentität mit dem BLAST-Algorithmus bestimmt.
Solch ein Vergleich erlaubt auch eine Aussage über die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen zueinander. Sie wird üblicherweise in Prozent Identität, das heißt dem Anteil der identischen Nukleotide oder Aminosäurereste an denselben oder in einem Alignment einander entsprechenden Positionen angegeben. Der weiter gefasste Begriff der Homologie bezieht bei Aminosäuresequenzen konservierte Aminosäure-Austausche in die Betrachtung mit ein, also Aminosäuren mit ähnlicher chemischer Aktivität, da diese innerhalb des Proteins meist ähnliche chemische Aktivitäten ausüben. Daher kann die Ähnlichkeit der verglichenen Sequenzen auch Prozent Homologie oder Prozent Ähnlichkeit angegeben sein. Identitäts- und/oder Homologieangaben können über ganze Polypeptide oder Gene oder nur über einzelne Bereiche getroffen werden. Homologe oder identische Bereiche von verschiedenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresequenzen sind daher durch Übereinstimmungen in den Sequenzen definiert. Solche Bereiche weisen oftmals identische Funktionen auf. Sie können klein sein und nur wenige Nukleotide oder Aminosäuren umfassen. Oftmals üben solche kleinen Bereiche für die Gesamtaktivität des Proteins essenzielle Funktionen aus. Es kann daher sinnvoll sein, Sequenzübereinstimmungen nur auf einzelne, ggf. kleine Bereiche zu beziehen. Soweit nicht anders angegeben beziehen sich Identitäts- oder Homologieangaben in der vorliegenden Anmeldung aber auf die Gesamtlänge der jeweils angegebenen Nukleinsäure- oder Aminosäuresäuresequenz.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bedeutet die Angabe, dass eine Aminosäureposition einer numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 entspricht daher, dass die entsprechende Position der numerisch bezeichneten Position in SEQ ID NO:1 in einem wie oben definierten Alignment zugeordnet ist. Weiterhin richtet sich die Zuordnung der Positionen nach dem reifen (maturen) Protein. Diese Zuordnung ist insbesondere auch anzuwenden, wenn die Aminosäuresequenz einer erfindungsgemäßen Protease eine höhere Zahl von Aminosäureresten umfasst als die Protease aus Bacillus pumilus gemäß SEQ ID NO:1 . Ausgehend von den genannten Positionen in der Aminosäuresequenz der Protease aus Bacillus pumilus sind die Veränderungspositionen in einer erfindungsgemäßen Protease diejenigen, die eben diesen Positionen in einem Alignment zugeordnet sind.
Für die Beschreibung von Substitutionen, die genau eine Aminosäureposition betreffen (Aminosäureaustausche), wird hierin folgende Konvention angewendet: zunächst wird die natürlicherweise vorhandene Aminosäure in Form des international gebräuchlichen Einbuchstaben- Codes bezeichnet, dann folgt die zugehörige Sequenzposition und schließlich die eingefügte Aminosäure. Mehrere oder alternative Austausche innerhalb derselben Polypeptidkette werden durch Schrägstriche voneinander getrennt. "130DA/" bedeutet somit, dass die Position 130 zu D oder V mutiert ist. Bei Insertionen sind nach der Sequenzposition zusätzliche Aminosäuren benannt. Bei Deletionen ist die fehlende Aminosäure durch ein Symbol, beispielsweise einen Stern oder einen Strich, ersetzt oder vor der entsprechenden Position ein A angegeben. Beispielsweise beschreibt P9T die Substitution von Prolin an Position 9 durch Threonin, P9TH die Insertion von Histidin nach der Aminosäure Threonin an Position 9 und P9* oder AP9 die Deletion von Prolin an Position 9. Diese Nomenklatur ist dem Fachmann auf dem Gebiet der Enzymtechnologie bekannt.
Vorteilhafte Positionen für Sequenzveränderungen, insbesondere Substitutionen, der Protease aus Bacillus pumilus, die übertragen auf homologe Positionen der erfindungsgemäßen Proteasen bevorzugt von Bedeutung sind und der Protease vorteilhafte funktionelle Eigenschaften verleihen, sind demnach die Positionen, die in einem Alignment den hierin beschriebenen Positionen entsprechen, d.h. in der Zählung gemäß SEQ ID NO:1 . An den genannten Positionen liegen in dem Wildtypmolekül der Protease aus Bacillus pumilus folgende Aminosäurereste: P9, N130, T133, N144, Y217, N252 und Q271 sowie Y6, S89, G131 , G166, N187, S189, S211 und S224.
In einerweiteren Ausführungsform der Erfindung ist eine zuvor beschriebene Protease zusätzlich stabilisiert, insbesondere durch eine oder mehrere Mutationen, beispielsweise Substitutionen, oder durch Kopplung an ein Polymer. Eine Erhöhung der Stabilität bei der Lagerung und/oder während des Einsatzes, beispielsweise beim Waschprozess, führt dazu, dass die enzymatische Aktivität länger anhält und damit die Reinigungsleistung verbessert wird. Grundsätzlich kommen alle im Stand der Technik beschriebenen und/oder zweckmäßigen Stabilisierungsmöglichkeiten in Betracht. Bevorzugt sind solche Stabilisierungen, die über Mutationen des Enzyms selbst erreicht werden, da solche Stabilisierungen im Anschluss an die Gewinnung des Enzyms keine weiteren Arbeitsschritte erfordern. Beispiele für hierfür geeignete Sequenzveränderungen sind vorstehend genannt. Weitere geeignete Sequenzveränderungen sind aus dem Stand der Technik bekannt.
Weitere Möglichkeiten der Stabilisierung sind beispielsweise:
Veränderung der Bindung von Metallionen, insbesondere der Calcium-Bindungsstellen, beispielsweise durch Austauschen von einer oder mehreren der an der Calcium-Bindung beteiligten Aminosäure(n) gegen eine oder mehrere negativ geladene Aminosäuren und/oder durch Einführen von Sequenzveränderungen in mindestens einer der Folgen der beiden Aminosäuren Arginin/Glycin;
Schutz gegen den Einfluss von denaturierenden Agentien wie Tensiden durch Mutationen, die eine Veränderung der Aminosäuresequenz auf oder an der Oberfläche des Proteins bewirken;
Austausch von Aminosäuren, die nahe dem N-Terminus liegen, gegen solche, die vermutlich über nicht-kovalente Wechselwirkungen mit dem Rest des Moleküls in Kontakt treten und somit einen Beitrag zur Aufrechterhaltung der globulären Struktur leisten.
Bevorzugte Ausführungsformen sind solche, bei denen das Enzym auf mehrere Arten stabilisiert wird, da mehrere stabilisierende Mutationen additiv oder synergistisch wirken.
Ergänzend kann auch mindestens eine weitere Stabilisatorverbindung, die aus der aus Polyolen, insbesondere Glycerin und 1 ,2-Propylenglykol, Benzamidinhydrochlorid, Borax, Borsäuren, Boronsäuren oder deren Salze oder Ester oder Derivate, insbesondere Phenylboronsäurederivate oder 4-Formylphenylboronsäure (4-FPBA), und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, enthalten sein.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird unter "Phenylboronsäurederivat" eine Verbindung mit der Formel (I) verstanden. Die Verbindung der Formel (I) weist folgende Strukturformel auf: wobei R Wasserstoff, eine Hydroxyl-, eine C1-6 Alkyl-, eine substituierte C1-6 Alkyl-, eine C1-6 Alkenyl oder eine substituierte C1-6 Alkenyl-Gruppe ist. Bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat eine C1-6 Alkyl-Gruppe und hierunter weiter bevorzugt -CH3, -CH3CH2 oder - CH3CH2CH2 sein. Weiter bevorzugt ist der Rest R in dem Phenylboronsäurederivat Wasserstoff. Besonders bevorzugt ist das Phenylboronsäurederivat 4-Formyl-phenylboronsäure (4-FPBA).
Die eingesetzte weitere Stabilisatorverbindung kann Borsäure sein.
Vorzugsweise ist das erfindungsgemäße Mittel im Wesentlichen frei von weiteren Stabilisatorverbindungen. Ganz besonders bevorzugt umfasst das erfindungsgemäße Mittel neben den erfindungsgemäßen peptidischen Inhibitoren keine der genannten weiteren Stabilisatorverbindungen.
In besonders bevorzugten Ausführungsformen ist das erfindungsgemäße Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen. "Im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen" bedeutet in diesem Zusammenhang, dass die erfindungsgemäßen Mittel weniger als 2 Gew.-%, vorzugsweise weniger als 1 Gew.-%, weiter bevorzugt weniger als 0,5 Gew.-% und besonders bevorzugt weniger als 0,1 Gew.-%, borhaltige Verbindungen, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels, enthalten. In ganz besonders bevorzugten Ausführungsformen sind die erfindungsgemäßen Wasch- und Reinigungsmittel frei von borhaltigen Verbindungen, d.h. sie enthalten insbesondere keine Borsäure und/oder Phenylboronsäurederivate. Dem Fachmann ist es über heutzutage allgemein bekannte Methoden, wie beispielsweise die chemische Synthese oder die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in Verbindung mit molekularbiologischen und/oder proteinchemischen Standardmethoden möglich, anhand bekannter DNA- und/oder Aminosäuresequenzen die entsprechenden Nukleinsäuren bis hin zu vollständigen Genen herzustellen. Derartige Methoden sind beispielsweise aus Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. 2001. Molecular cloning: a laboratory manual, 3. Edition Cold Spring Laboratory Press, bekannt.
In einerweiteren Ausführungsform der Erfindung ist die erfindungsgemäß eingesetzte Protease dadurch gekennzeichnet, dass ihre Reinigungsleistung gegenüber derjenigen einer Protease, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz entspricht, nicht signifikant verringert ist, d.h. mindestens 80% der Referenzwaschleistung besitzt, vorzugsweise mindestens 100%, weiter bevorzugt mindestens 110% oder mehr.
Unter wasch- bzw. Reinigungsleistung wird das Vermögen eines Wasch- oder Reinigungsmittels, eine vorhandene Anschmutzung teilweise oder vollständig zu entfernen, insbesondere die Aufhellungsleistung an einer oder mehreren Anschmutzungen auf Textilien, verstanden. Beispiele für solche Anschmutzungen sind Blut auf Baumwolle oder Schokolade-Milch/Ruß auf Baumwolle, Kakao auf Baumwolle oder Porridge auf Baumwolle. Im Rahmen der Erfindung weisen sowohl das Waschoder Reinigungsmittel, welches die Protease umfasst, bzw. die durch dieses Mittel gebildete Wasch- bzw. Reinigungsflotte, als auch die Protease selbst eine jeweilige Reinigungsleistung auf. Die Reinigungsleistung der Protease trägt somit zur Reinigungsleistung des Mittels bzw. der durch das Mittel gebildeten Wasch- bzw. Reinigungsflotte bei.
Unter wasch- bzw. Reinigungsflotte wird diejenige das Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltende Gebrauchslösung verstanden, die auf die Textilien bzw. harten Oberflächen einwirkt und damit mit den auf den Textilien bzw. harten Oberflächen vorhandenen Anschmutzungen in Kontakt kommt. Üblicherweise entsteht die Wasch- bzw. Reinigungsflotte, wenn der Wasch- bzw. Reinigungsvorgang beginnt und das Wasch- oder Reinigungsmittel z.B. in einer Wasch- oder Spülmaschine oder in einem anderen geeigneten Behältnis mit Wasser verdünnt wird.
Die Reinigungsleistung kann in einem Waschsystem bestimmt werden, das ein Waschmittel in einer Dosierung zwischen 2,0 und 8,0 Gramm pro Liter Waschflotte sowie das Enzym enthält. Die zu vergleichenden Enzyme werden konzentrationsgleich (bezogen auf aktives Protein) eingesetzt. Durch den aktivitätsgleichen Einsatz der jeweiligen Enzyme wird sichergestellt, dass auch bei einem etwaigen Auseinanderklaffen des Verhältnisses von Aktivsubstanz zu Gesamtprotein (die Werte der spezifischen Aktivität) die jeweiligen enzymatischen Eigenschaften, also z.B. die Reinigungsleistung an bestimmten Anschmutzungen, verglichen werden. Generell gilt, dass eine niedrige spezifische Aktivität durch Zugabe einer größeren Proteinmenge ausgeglichen werden kann. Ferner können die zu untersuchenden Enzyme auch in gleicher Stoffmenge oder Gewichtsmenge eingesetzt werden, falls die zu untersuchenden Enzyme in einem Aktivitätstest eine unterschiedliche Affinität an das Testsubstrat aufweisen. Der Ausdruck "gleiche Stoffmenge" bezieht sich in diesem Zusammenhang auf eine molgleiche Verwendung der zu untersuchenden Enzyme. Der Ausdruck "gleiche Gewichtsmenge" bezieht sich auf einen gewichtsgleichen Einsatz der zu untersuchenden Enzyme. Die Konzentration der Protease in dem für ein solches Waschsystem bestimmten Waschmittel beträgt 0,001 bis 0,1 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 0,06 Gew.-%, bezogen auf aktives Protein.
Ein flüssiges Referenzwaschmittel für ein solches Waschsystem kann z.B. wie folgt zusammengesetzt sein (alle Angaben in Gewichts-Prozent (Gew.-%)): 4,4% Alkylbenzolsulfonsäure, 5,6% weitere anionische Tenside, 2,4% C12-18 Na-Salze von Fettsäuren (Seifen), 4,4% nicht-ionische Tenside, 0,2% Phosphonate, 1 ,4% Zitronensäure, 0,95% NaOH, 0,01 % Entschäumer, 2% Glycerin, 0,08% Konservierungsstoffe, 1 % Ethanol, Rest demineralisiertes Wasser. Bevorzugt beträgt die Dosierung des flüssigen Waschmittels zwischen 4,5 und 6,0 Gramm pro Liter Waschflotte, beispielsweise 4,7, 4,9 oder 5,9 Gramm pro Liter Waschflotte. Bevorzugt wird gewaschen in einem pH-Wertebereich zwischen pH 7 und pH 10,5, bevorzugt zwischen pH 8 und pH 9.
Die Reinigungsleistung wird gegenüber einer Anschmutzung auf Baumwolle durch Messung des Reinigungsgrades der gewaschenen Textilien bestimmt. Beispielsweise kann der Waschvorgang für 60 Minuten bei einer Temperatur von 40°C erfolgen und das Wasser eine Wasserhärte zwischen 15,5°dH und 16,5°dH (deutsche Härte) aufweisen.
Der Weißegrad, d.h. die Aufhellung der Anschmutzungen, als Maß für die Reinigungsleistung wird mit optischen Messverfahren bestimmt, bevorzugt photometrisch. Ein hierfür geeignetes Gerät ist beispielsweise das Spektrometer Minolta CM508d. Üblicherweise werden die für die Messung eingesetzten Geräte zuvor mit einem Weißstandard, bevorzugt einem mitgelieferten Weißstandard, kalibriert.
Bevorzugte Ausführungsformen erfindungsgemäßer Proteasen erzielen solche vorteilhaften Reinigungsleistungen auch schon bei niedrigen Temperaturen, insbesondere in den Temperaturbereichen zwischen 10°C und 60°C, bevorzugt zwischen 15°C und 50°C und besonders bevorzugt zwischen 20°C und 40°C.
Die Proteinkonzentration kann mit Hilfe bekannter Methoden, zum Beispiel dem BCA-Verfahren (Bicinchoninsäure; 2,2‘-Bichinolyl-4,4‘-dicarbonsäure) oder dem Biuret-Verfahren (Gornall et al., 1948, J. Biol. Chem., 177:751 -766) bestimmt werden. Die Bestimmung der Aktivproteinkonzentration kann diesbezüglich über eine Titration der aktiven Zentren unter Verwendung eines geeigneten irreversiblen Inhibitors und Bestimmung der Restaktivität (Bender et al., 1966, J. Am. Chem. Soc. 88, 24:5890-5913) erfolgen.
Unter einem Wasch- oder Reinigungsmittel sind erfindungsgemäß alle denkbaren Wasch- oder Reinigungsmittelarten zu verstehen, sowohl Konzentrate als auch unverdünnt anzuwendende Mittel, zum Einsatz im kommerziellen Maßstab, in der Waschmaschine oder bei der Handwäsche bzw. -reinigung. Dazu gehören beispielsweise Waschmittel für Textilien, Teppiche, oder Naturfasern, für die die Bezeichnung Waschmittel verwendet wird. Dazu gehören beispielsweise auch Geschirrspülmittel für Geschirrspülmaschinen (maschinelle Geschirrspülmittel) oder manuelle Geschirrspülmittel oder Reiniger für harte Oberflächen wie Metall, Glas, Porzellan, Keramik, Kacheln, Stein, lackierte Oberflächen, Kunststoffe, Holz oder Leder, für die die Bezeichnung Reinigungsmittel verwendet wird, also neben manuellen und maschinellen Geschirrspülmitteln beispielsweise auch Scheuermittel, Glasreiniger, WC-Duftspüler, usw. Zu den Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung zählen ferner Waschhilfsmittel, die bei der manuellen oder maschinellen Textilwäsche zum eigentlichen Waschmittel hinzudosiert werden, um eine weitere Wirkung zu erzielen. Ferner zählen zu Wasch- und Reinigungsmittel im Rahmen der Erfindung auch Textilvor- und Nachbehandlungsmittel, also solche Mittel, mit denen das Wäschestück vor der eigentlichen Wäsche in Kontakt gebracht wird, beispielsweise zum Anlösen hartnäckiger Verschmutzungen, und auch solche Mittel, die in einem der eigentlichen Textilwäsche nachgeschalteten Schritt dem Waschgut weitere wünschenswerte Eigenschaften wie angenehmen Griff, Knitterfreiheit oder geringe statische Aufladung verleihen. Zu letztgenannten Mittel werden u.a. die Weichspüler gerechnet.
Die erfindungsgemäßen Wasch- oder Reinigungsmittel, die als pulverförmige oder granuläre Feststoffe, in verdichteter oder nachverdichteter Teilchenform, als homogene Lösungen oder Suspensionen vorliegen können, können neben einer erfindungsgemäßen Protease alle bekannten und in derartigen Mitteln üblichen Inhaltsstoffe enthalten, wobei bevorzugt mindestens ein weiterer Inhaltsstoff in dem Mittel vorhanden ist. Die erfindungsgemäßen Mittel können insbesondere Tenside, Builder (Gerüststoffe), Polymere, Glaskorrosionsinhibitoren, Korrosionsinhibitoren, Bleichmittel wie Persauerstoffverbindungen, Bleichaktivatoren oder Bleichkatalysatoren enthalten. Ferner können sie wassermischbare organische Lösungsmittel, weitere Enzyme, Enzymstabilisatoren, Sequestrierungsmittel, Elektrolyte, pH-Regulatoren und/oder weitere Hilfsstoffe wie optische Aufheller, Vergrauungsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Färb- und Duftstoffe sowie Kombinationen hiervon enthalten.
Vorteilhafte Inhaltsstoffe erfindungsgemäßer Mittel sind offenbart in der internationalen Patentanmeldung WO 2009/121725, dort beginnend auf Seite 5, vorletzter Absatz, und endend auf Seite 13 nach dem zweiten Absatz. Auf diese Offenbarung wird ausdrücklich Bezug genommen und der dortige Offenbarungsgehalt in die vorliegende Patentanmeldung einbezogen.
Ein erfindungsgemäßes Mittel enthält die erfindungsgemäße Protease vorteilhafterweise in einer Menge von 2 pg bis 20 mg, vorzugsweise von 5 pg bis 17,5 mg, besonders bevorzugt von 20 pg bis 15 mg und ganz besonders bevorzugt von 50 pg bis 10 mg pro g des Mittels. In verschiedenen Ausführungsformen beträgt die Konzentration der hierin beschriebenen Protease (aktives Enzym) in dem Mittel >0 bis 1 Gew.-%, vorzugsweise 0,0001 oder 0,001 bis 0,1 Gew.-% bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels oder der Zusammensetzung.
Ein erfindungsgemäßes Mittel enthält die Protease zunehmend bevorzugt in einer Menge von 1 x 10-8 bis 5 Gew.-%, von 0,0001 bis 1 Gew.-%, von 0,0005 bis 0,5 Gew.-%, von 0,001 bis 0,1 Gew.-%, jeweils bezogen auf aktives Protein und bezogen auf das Gesamtgewicht des Waschmittels.
Ein erfindungsgemäßes Mittel enthält die Protease zunehmend bevorzugt in einer Menge von 0,1 pmol bis 2 pmol, vorzugsweise 0,2 pmol bis 1 ,5 pmol, weiter bevorzugt 0,5 pmol bis 1 pmol.
Die Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung umfassen alle festen, pulverförmigen, flüssigen, gelförmigen oder pastösen Darreichungsformen erfindungsgemäßer Mittel, die ggf. auch aus mehreren Phasen bestehen können sowie in komprimierter oder nicht komprimierter Form vorliegen können. Das Mittel kann als rieselfähiges Pulver vorliegen, insbesondere mit einem Schüttgewicht von 300 g/l bis 1200 g/l, insbesondere 500 g/l bis 900 g/l oder 600 g/l bis 850 g/l. Zu den festen Darreichungsformen des Mittels zählen ferner Extrudate, Granulate, Tabletten oder Pouches. Alternativ kann das Mittel auch flüssig, gelförmig oder pastös sein, beispielsweise in Form eines nicht-wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer nicht-wässrigen Paste oder in Form eines wässrigen Flüssigwaschmittels oder einer wasserhaltigen Paste. Flüssige Mittel sind generell bevorzugt. Weiterhin kann das Mittel als Einkomponentensystem vorliegen. Solche Mittel bestehen aus einer Phase. Alternativ kann ein Mittel auch aus mehreren Phasen bestehen. Ein solches Mittel ist demnach in mehrere Komponenten aufgeteilt.
Wenn die erfindungsgemäßen Waschmittel in flüssiger Form vorliegen, enthalten sie vorzugsweise bezogen auf ihr Gesamtgewicht mehr als 40 Gew.-%, vorzugsweise 50 bis 90 Gew.-% und besonders bevorzugt 60 bis 80 Gew.-% Wasser.
Die erfindungsgemäßen Mittel können ein oder mehrere Tenside enthalten, wobei insbesondere anionische Tenside, nichtionische Tenside und deren Gemische in Frage kommen, aber auch kationische, zwitterionische und/oder amphotere Tenside können enthalten sein. Die Mittel enthalten vorzugsweise 5 bis 70 Gew.-% Tensid, bevorzugt 5 bis 60 Gew.-% und weiter bevorzugt 5 bis 50 Gew.-% Tensid.
Geeignete anionische Tenside sind insbesondere Seifen und solche, die Sulfat- oder Sulfonat- Gruppen mit bevorzugt Alkaliionen als Kationen enthalten. Verwendbare Seifen sind bevorzugt die Alkalisalze der gesättigten oder ungesättigten Ci2-18-Fettsäuren. Derartige Fettsäuren können auch in nicht vollständig neutralisierter Form eingesetzt werden. Zu den brauchbaren Tensiden des Sulfat- Typs gehören die Salze der Schwefelsäurehalbester von Ci2-18-Fettalkoholen und die Sulfatierungsprodukte der genannten nichtionischen Tenside mit niedrigem Ethoxylierungsgrad. Zu den verwendbaren Tensiden vom Sulfonat-Typ gehören z.B. Cg-u-Alkylbenzolsulfonate, Alkansulfonate, die aus Ci2-is-Alkanen z.B. durch Sulfochlorierung oder Sulfoxidation mit anschließender Hydrolyse bzw. Neutralisation gewonnen werden, Ci2-18-Olefinsulfonate, die bei der Umsetzung entsprechender Monoolefine mit Schwefeltrioxid entstehen, Gemische aus Alken- und Hydroxyalkansulfonaten, Disulfonaten, wie man sie z.B. aus Ci2-18-Monoolefinen mit end- oder innenständigen Doppelbindung durch Sulfonieren mit gasförmigem Schwefeltrioxid und anschließende alkalische oder saure Hydrolyse der Sulfonierungsprodukte erhält, sowie a-Sulfofettsäureester (Estersulfonate), die bei der Sulfonierung von Fettsäuremethyl- oder -ethylestern entstehen, z.B. a- sulfonierte Methylester der hydrierten Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren.
Vorzugsweise weist das Mittel 2 bis 55 Gew.-%, vorzugsweise 3 bis 35 Gew.-%, Aniontensid auf. Ganz besonders bevorzugt weist das Mittel 3 bis 25 Gew.-% Alkylbenzolsulfonat auf. Darüber hinaus kann das Mittel vorzugsweise noch weitere anionische Tenside, insbesondere Alkylethersulfate, sowie nichtionische Tenside, insbesondere Fettalkoholalkoxylate, enthalten. Diese können dann den Rest der Tenside ausmachen.
Geeignete Alkylbenzolsulfonate sind vorzugsweise ausgewählt aus linearen oder verzweigten Alkylbenzolsulfonaten der Formel in der R' und R" unabhängig H oder Alkyl sind und zusammen 6 bis 19, vorzugsweise 7 bis 15 und insbesondere 9 bis 13 C-Atome enthalten. Ein ganz besonders bevorzugter Vertreter ist Natriumdodecylbenzylsulfonat.
Als Alk(en)ylsulfate werden die Alkali- und insbesondere die Natriumsalze der Schwefelsäurehalbester der Ci2-18-Fettalkohole, z.B. aus Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder der Cw-20-Oxoalkohole und diejenigen Halbester sekundärer Alkohole dieser Kettenlängen bevorzugt. Weiterhin bevorzugt sind Alk(en)ylsulfate der genannten Kettenlänge, welche einen synthetischen, auf petrochemischer Basis hergestellten geradkettigen Alkylrest enthalten, die ein analoges Abbauverhalten besitzen wie die adäquaten Verbindungen auf der Basis von fettchemischen Rohstoffen. Aus waschtechnischem Interesse sind die Ci2-ie-Alkylsulfate und Ci2-15-Alkylsulfate sowie Cu-is-Alkylsulfate bevorzugt.
Auch die Schwefelsäuremonoester der mit 1 bis 6 Mol Ethylenoxid ethoxylierten geradkettigen oder verzweigten Cy-2i-Alkohole, wie 2-Methyl-verzweigte Cg-n-Alkohole mit im Durchschnitt 3,5 Mol Ethylenoxid (EO) oder Ci2-18-Fettalkohole mit 1 bis 4 EO, sind geeignet.
Geeignete Alkylethersulfate sind z.B. Verbindungen der Formel
R1-O-(AO)n-SO3- X+.
In dieser Formel steht R1 für einen linearen oder verzweigten, substituierten oder unsubstituierten Alkylrest, vorzugsweise für einen linearen, unsubstituierten Alkylrest, besonders bevorzugt für einen Fettalkoholrest. Bevorzugte Reste R1 sind ausgewählt aus Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl-, Pentadecyl-, Hexadecyl-, Heptadecyl-, Octadecyl-, Nonadecyl-, Eicosylresten und deren Mischungen, wobei die Vertreter mit gerader Anzahl an C-Atomen bevorzugt sind. Besonders bevorzugte Reste R1 sind abgeleitet von Ci2-is-Fettalkoholen, z.B. von Kokosfettalkohol, Talgfettalkohol, Lauryl-, Myristyl-, Cetyl- oder Stearylalkohol oder von Cw-20-Oxoalkoholen. AO steht für eine Ethylenoxid-(EO) oder Propylenoxid-(PO)-Gruppierung, vorzugsweise für eine Ethylenoxidgruppierung. Der Index n steht für eine ganze Zahl von 1 bis 50, vorzugsweise von 1 bis 20 und insbesondere von 2 bis 10. Ganz besonders bevorzugt steht n für die Zahlen 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. X+ steht für ein einwertiges Kation oder den n-ten Teil eines n-wertigen Kations, bevorzugt sind dabei die Alkalimetallionen und darunter Na+ oder K+, wobei Na+ äußerst bevorzugt ist. Weitere Kationen X+ können ausgewählt sein aus NH4+, % Zn2+, % Mg2+, % Ca2+, % Mn2+ und deren Mischungen.
In verschiedenen Ausführungsformen kann das Alkylethersulfat ausgewählt sein aus Fettalkoholethersulfaten der Formel so; Na mit k = 11 bis 19, n = 2, 3, 4, 5, 6, 7 oder 8. Ganz besonders bevorzugte Vertreter sind Na-Ci2-14- Fettalkoholethersulfate mit 2 EO (k = 11-13, n = 2). Der angegebenen Ethoxylierungsgrad stellt einen statistischen Mittelwert dar, der für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein kann. Die angegebenen Alkoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. Bevorzugte Alkoxylate/Ethoxylate weisen eine eingeengte Homologenverteilung auf (narrow range ethoxylates, NRE).
Es hat sich für die Kaltwaschleistung als vorteilhaft erwiesen, wenn die Waschmittel zusätzlich Seife(n) enthalten. Bevorzugte Waschmittel sind daher dadurch gekennzeichnet, dass sie Seife(n) enthalten. Geeignet sind gesättigte Fettsäureseifen, wie die Salze der Laurinsäure, Myristinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, hydrierte Erucasäure und Behensäure sowie insbesondere aus natürlichen Fettsäuren, z.B. Kokos-, Palmkern- oder Talgfettsäuren, abgeleitete Seifengemische.
Geeignete nichtionische Tenside sind insbesondere Alkylglykoside und Ethoxylierungs- und/oder Propoxylierungsprodukte von Alkylglykosiden oder linearen oder verzweigten Alkoholen mit jeweils 8 bis etwa 18 C-Atomen im Alkylteil und 3 bis 20, vorzugsweise 4 bis 10 Alkylethergruppen. Weiterhin sind entsprechende Ethoxylierungs- und/oder Propoxylierungsprodukte von N-Alkylaminen, vicinalen Diolen, Fettsäureestern und Fettsäureamiden, die hinsichtlich des Alkylteils den genannten langkettigen Alkoholderivaten entsprechen, sowie von Alkylphenolen mit 5 bis 12 C-Atomen im Alkylrest brauchbar.
Als nichtionische Tenside werden vorzugsweise alkoxylierte, vorteilhafterweise ethoxylierte, insbesondere primäre Alkohole mit vorzugsweise 8 bis 18 C-Atomen und durchschnittlich 1 bis 12 Mol Ethylenoxid (EO) pro Mol Alkohol eingesetzt, in denen der Alkoholrest linear oder bevorzugt in 2- Stellung methylverzweigt sein kann bzw. lineare und methylverzweigte Reste im Gemisch enthalten kann, so wie sie üblicherweise in Oxoalkoholresten vorliegen. Insbesondere sind jedoch Alkoholethoxylate mit linearen Resten aus Alkoholen nativen Ursprungs mit 12 bis 18 C-Atomen, z.B. aus Kokos-, Palm-, Talgfett- oder Oleylalkohol, und durchschnittlich 2 bis 8 EO pro Mol Alkohol bevorzugt. Zu den bevorzugten ethoxylierten Alkoholen gehören z.B. Ci2-14-Alkohole mit 3 EO oder 4 EO, Cg-n-Alkohol mit 7 EO, C -is-Alkohole mit 3 EO, 5 EO, 7 EO oder 8 EO, Ci2-is-Alkohole mit 3 EO, 5 EO oder 7 EO und Mischungen aus diesen, wie Mischungen aus Ci2-14-Alkohol mit 3 EO und C12-18- Alkohol mit 5 EO. Die angegebenen Ethoxylierungsgrade stellen statistische Mittelwerte dar, die für ein spezielles Produkt eine ganze oder eine gebrochene Zahl sein können. Bevorzugte Alkoholethoxylate weisen eine eingeengte Homologenverteilung auf (narrow range ethoxylates, NRE). Zusätzlich zu diesen nichtionischen Tensiden können auch Fettalkohole mit mehr als 12 EO eingesetzt werden. Beispiele hierfür sind Talgfettalkohol mit 14 EO, 25 EO, 30 EO oder 40 EO.
Eine weitere Klasse bevorzugt eingesetzter nichtionischer Tenside, die entweder als alleiniges nichtionisches Tensid oder in Kombination mit anderen nichtionischen Tensiden eingesetzt werden, sind alkoxylierte, vorzugsweise ethoxylierte oder ethoxylierte und propoxylierte Fettsäurealkylester, vorzugsweise mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette, insbesondere Fettsäuremethylester.
Eine weitere Klasse von nichtionischen Tensiden, die vorteilhaft eingesetzt werden kann, sind die Alkylpolyglycoside (APG). Einsetzbare Alkylpolyglycoside genügen der allgemeinen Formel
RO(G)z, in der R für einen linearen oder verzweigten, insbesondere in 2-Stellung methylverzweigten, gesättigten oder ungesättigten, aliphatischen Rest mit 8 bis 22, vorzugsweise 12 bis 18 C-Atomen bedeutet und G das Symbol ist, das für eine Glykoseeinheit mit 5 oder 6 C-Atomen, vorzugsweise für Glucose, steht. Der Glycosidierungsgrad z liegt dabei zwischen 1 und 4, vorzugsweise zwischen 1 und 2 und insbesondere zwischen 1 ,1 und 1 ,4. Bevorzugt eingesetzt werden lineare Alkylpolyglycoside, also Alkylpolyglycoside, in denen der Polyglycosylrest ein Glucoserest und der Alkylrest ein n-Alkylrest ist.
Auch nichtionische Tenside vom Typ der Aminoxide, z.B. N-Kokosalkyl-N,N-dimethylaminoxid und N-Talgalkyl-N,N-dihydroxyethylaminoxid, und der Fettsäurealkanolamide können geeignet sein. Die Menge dieser nichtionischen Tenside beträgt vorzugsweise nicht mehr als die der ethoxylierten Fettalkohole, insbesondere nicht mehr als die Hälfte davon.
Geeignete Amphotenside sind z.B. Betaine der Formel
(Riii)(Riv)(Rv)N+CH2COO-, in der R'" einen ggf. durch Heteroatome oder Heteroatomgruppen unterbrochenen Alkylrest mit 8 bis 25, vorzugsweise 10 bis 21 Kohlenstoffatomen und Riv sowie Rv gleichartige oder verschiedene Alkylreste mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen bedeuten, insbesondere C10-18- Alkyldimethylcarboxymethylbetain und Cn-17-Alkylamidopropyldimethylcarboxymethylbetain.
Geeignete kationische Tenside sind u.a. die quartären Ammoniumverbindungen der Formel (Rvi)(Rvii)(Rviii)(Rix)N+X-, in der Rvi bis Rix für vier gleich- oder verschiedenartige, insbesondere zwei lang- und zwei kurzkettige, Alkylreste und X- für ein Anion, insbesondere ein Halogenidion, stehen, z.B. Didecyldimethylammoniumchlorid, Alkylbenzyldidecylammoniumchlorid und deren Mischungen. Weitere geeignete kationische Tenside sind die quaternären oberflächenaktiven Verbindungen, insbesondere mit einer Sulfonium-, Phosphonium-, Jodonium- oder Arsoniumgruppe, die auch als antimikrobielle Wirkstoffe bekannt sind. Durch den Einsatz von quaternären oberflächenaktiven Verbindungen mit antimikrobieller Wirkung kann das Mittel mit einer antimikrobiellen Wirkung ausgestaltet werden bzw. dessen ggf. aufgrund anderer Inhaltsstoffe bereits vorhandene antimikrobielle Wirkung verbessert werden.
Ein weiterer bevorzugter Bestandteil erfindungsgemäßer Waschmittel sind Komplexbildner. Besonders bevorzugte Komplexbildner sind die Phosphonate, sofern ihr Einsatz regulatorisch zulässig ist. Die komplexbildenden Phosphonate umfassen neben der 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure eine Reihe unterschiedlicher Verbindungen, wie z.B. Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP). In dieser Anmeldung bevorzugt sind insbesondere Hydroxyalkan- bzw. Aminoalkanphosphonate. Unter den Hydroxyalkanphosphonaten ist das 1-Hydroxyethan-1 ,1- diphosphonat (HEDP) von besonderer Bedeutung als Cobuilder. Es wird vorzugsweise als Natriumsalz eingesetzt, wobei das Dinatriumsalz neutral und das Tetranatriumsalz alkalisch (pH 9) reagiert. Als Aminoalkanphosphonate kommen vorzugsweise Ethylendiamintetramethylenphosphonat (EDTMP), Diethylentriaminpentamethylenphosphonat (DTPMP) sowie deren höhere Homologe in Frage. Sie werden vorzugsweise in Form der neutral reagierenden Natriumsalze, z.B. als Hexanatriumsalz der EDTMP bzw. als Hepta- und Octa-Natriumsalz der DTPMP, eingesetzt. Als Builder wird dabei aus der Klasse der Phosphonate bevorzugt HEDP verwendet. Die Aminoalkanphosphonate besitzen zudem ein ausgeprägtes Schwermetallbindevermögen. Dementsprechend kann es, insbesondere wenn die Mittel auch Bleiche enthalten, bevorzugt sein, Aminoalkanphosphonate, insbesondere DTPMP, einzusetzen, oder Mischungen aus den genannten Phosphonaten zu verwenden. Ein im Rahmen dieser Anmeldung bevorzugtes Waschmittel enthält ein oder mehrere Phosphonat(e) aus der Gruppe Aminotrimethylenphosphonsäure (ATMP) und/oder deren Salze; Ethylendiamintetra(methylenphosphonsäure) (EDTMP) und/oder deren Salze; Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP) und/oder deren Salze; 1-Hydroxyethan-1 ,1- diphosphonsäure (HEDP) und/oder deren Salze; 2-Phosphonobutan-1 ,2,4-tricarbonsäure (PBTC) und/oder deren Salze; Hexamethylendiamintetra(methylenphosphonsäure) (HDTMP) und/oder deren Salze; Nitrilotri(methylenphosphonsäure) (NTMP) und/oder deren Salze. Besonders bevorzugt sind Waschmittel, welche als Phosphonate 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure (HEDP) oder Diethylentriaminpenta(methylenphosphonsäure) (DTPMP) enthalten. Selbstverständlich können die erfindungsgemäßen Waschmittel zwei oder mehr unterschiedliche Phosphonate enthalten. Bevorzugte erfindungsgemäße Waschmittel sind dadurch gekennzeichnet, dass das Waschmittel mindestens einen Komplexbildner aus der Gruppe der Phosphonate, vorzugsweise 1-Hydroxyethan- 1 ,1-diphosphonat, enthält, wobei der Gewichtsanteil des Phosphonat am Gesamtgewicht des Waschmittels vorzugsweise 0,1 und 8,0 Gew.-%, bevorzugt 0,2 und 5,0 Gew.-%, weiter bevorzugt 0,3 und 3,0 Gew.-% und besonders bevorzugt 0, 5-2,0 Gew.-% beträgt.
Die erfindungsgemäßen Waschmittel enthalten weiterhin vorzugsweise Gerüststoff (Builder), vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder. Zu den Gerüststoffe zählen dabei insbesondere die Silikate, Carbonate und organische Cobuilder.
Als organische Cobuilder sind insbesondere Polycarboxylate/Polycarbonsäuren, polymere Polycarboxylate, Asparaginsäure, Polyacetale, Dextrine, weitere organische Cobuilder sowie Phosphonate zu nennen. Diese Stoffklassen werden nachfolgend beschrieben. Organische Cobuildersubstanzen können gewünschtenfalls in Mengen bis zu 40 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-% und vorzugsweise von 1 bis 8 Gew.-% enthalten sein. Brauchbare organische Gerüstsubstanzen sind z.B. die in Form der freien Säure und/oder ihrer Natriumsalze einsetzbaren Polycarbonsäuren, wobei unter Polycarbonsäuren solche Carbonsäuren verstanden werden, die mehr als eine Säurefunktion tragen. Beispielsweise sind dies Citronensäure, Adipinsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Zuckersäuren und Carboxymethylinuline, monomere und polymere Aminopolycarbonsäuren, insbesondere Glycindiessigsäure, Methylglycindiessigsäure, Glutamindiessigsäure, Nitrilotriessigsäure (NTA), Iminodisuccinat wie Ethylendiamin-N,N'-dibernsteinsäure und Hydroxyiminodisuccinate, Ethylendiamintetraessigsäure sowie Polyasparaginsäure, Polyphosphonsäuren, insbesondere Aminotris(methylenphosphonsäure), Ethylendiamintetrakis(methylenphosphonsäure), Lysintetra(methylenphosphosäure) und 1-Hydroxyethan-1 ,1-diphosphonsäure, polymere Hydroxyverbindungen wie Dextrin sowie polymere (Poly)carbonsäuren, insbesondere durch Oxidation von Polysacchariden bzw. Dextrinen zugängliche Polycarboxylate, und/oder polymere Acrylsäuren, Methacrylsäuren, Maleinsäuren und Mischpolymere aus diesen, die auch geringe Anteile polymerisierbarer Substanzen ohne Carbonsäurefunktionalität einpolymerisiert enthalten können. Derartige organische Buildersubstanzen können gewünschtenfalls in Mengen bis zu 50 Gew.-%, insbesondere bis zu 25 Gew.-%, vorzugsweise von 10 bis 20 Gew.-% und besonders bevorzugt von 1 bis 5 Gew.-% enthalten sein. Die freien Säuren besitzen neben ihrer Builderwirkung typischerweise auch die Eigenschaft einer Säuerungskomponente und dienen somit auch zur Einstellung eines niedrigeren und milderen pH-Wertes von Waschmitteln. Insbesondere sind hierbei Citronensäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Gluconsäure und beliebige Mischungen aus diesen zu nennen. Mit besonderem Vorzug wird als Gerüstsubstanz die Citronensäure oder Salze der Citronensäure eingesetzt. Weitere besonders bevorzugte Gerüstsubstanzen sind ausgewählt unter Methylglycindiessidsäure (MGDA), Glutaminsäurediacetat (GLDA), Asparaginsäurediacetat (ASDA), Hydroxyethyliminodiacetat (HEIDA), Iminodisuccinat (IDS) und Ethylendiamindisuccinat (EDDS), Carboxymethylinulin und Polyaspartat. In bevorzugten Ausführungsformen wird als wasserlöslicher, organischer Builder Citronensäure und/oder Citrat eingesetzt. Besonders bevorzugt ist der Einsatz von 0,5 bis 25 Gew.-%, vorzugsweise 0,75 bis 12,5 Gew.-%, weiter bevorzugt 1 bis 4 Gew.-% Citronensäure und/oder 0,5 bis 25 Gew.-%, vorzugsweise 0,75 bis 12,5 Gew.-%, weiter bevorzugt 1 bis 4 Gew.-% Citrat, vorzugsweise Alkalicitrat, noch bevorzugter Natriumcitrat. Citronensäure/Citrat können jeweils in Form ihrer Hydrate eingesetzt werden, so kann z.B. Citronensäure in Form des Monohydrats, Citrat in Form des Trinatriumcitratdihydrats eingesetzt werden.
Als Gerüststoffe sind weiter polymere Polycarboxylate geeignet, dies sind z.B. die Alkalimetallsalze der Polyacrylsäure oder der Polymethacrylsäure, z.B. solche mit einer relativen Molekülmasse von 500 bis 70000 g/mol. Bei den für polymere Polycarboxylate angegebenen Molmassen handelt es sich im Sinne dieser Anmeldung um gewichtsmittlere Molmassen Mw der jeweiligen Säureform, die grundsätzlich mittels Gelpermeationschromatographie (GPC) bestimmt wurden, wobei ein UV-Detektor eingesetzt wurde. Die Messung erfolgte dabei gegen einen externen Polyacrylsäure-Standard, der aufgrund seiner strukturellen Verwandtschaft mit den untersuchten Polymeren realistische Molgewichtswerte liefert. Diese Angaben weichen deutlich von den Molgewichtsangaben ab, bei denen Polystyrolsulfonsäuren als Standard eingesetzt werden. Die gegen Polystyrolsulfonsäuren gemessenen Molmassen sind in der Regel deutlich höher als die in dieser Anmeldung angegebenen Molmassen. Geeignete Polymere sind insbesondere Polyacrylate, die bevorzugt eine Molekülmasse von 2000 bis 20000 g/mol aufweisen. Aufgrund ihrer überlegenen Löslichkeit können aus dieser Gruppe wiederum die kurzkettigen Polyacrylate, die Molmassen von 2000 bis 10000 g/mol, und besonders bevorzugt von 3000 bis 5000 g/mol, aufweisen, bevorzugt sein. Geeignet sind weiterhin Copolymere Polycarboxylate, insbesondere solche der Acrylsäure mit Methacrylsäure und der Acrylsäure oder Methacrylsäure mit Maleinsäure. Als besonders geeignet haben sich Copolymere der Acrylsäure mit Maleinsäure erwiesen, die 50 bis 90 Gew.-% Acrylsäure und 50 bis 10 Gew.-% Maleinsäure enthalten. Ihre relative Molekülmasse, bezogen auf freie Säuren, beträgt im Allgemeinen 2000 bis 70000 g/mol, vorzugsweise 20000 bis 50000 g/mol und insbesondere 30000 bis 40000 g/mol.
Ein erfindungsgemäßes festes Mittel enthält vorzugsweise mindestens einen wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen, organischen und/oder anorganischen Builder. Zu den wasserlöslichen organischen Buildersubstanzen gehören die oben genannten organischen Gerüstsubstanzen. Zusätzlich zu den vorstehend genannten wasserlöslichen organischen Buildern, können die Mittel der Erfindung weiterhin auch anorganische wasserlösliche Builder enthalten. Als wasserlösliche anorganische Buildermaterialien kommen insbesondere Alkalisilikate, Alkalicarbonate, Alkalihydrogenbarbonate, Alkaliphosphate und/oder Sesquicarbonate, die in Form ihrer alkalischen, neutralen oder sauren Natrium- oder Kaliumsalze vorliegen können, in Betracht. Ggf. können auch geringe Mengen an Calciumcarbonate in festen Textilwaschmitteln enthalten sein. Geeignet sind z.B. wasserlöslichen kristalline und/oder amorphe Alkalisilikate. Die in den erfindungsgemäßen Mitteln als Gerüststoffe brauchbaren Alkalisilikate weisen vorzugsweise ein molares Verhältnis von Alkalioxid zu SiO2 unter 0,95, insbesondere von 1 :1 ,1 bis 1 :12 auf und können amorph oder kristallin vorliegen. Bevorzugte Alkalisilikate sind die Natriumsilikate, insbesondere die amorphen Natriumsilikate, mit einem molaren Verhältnis Na2O:SiO2 von 1 :2 bis 1 :2,8. Als kristalline Silikate, die allein oder im Gemisch mit amorphen Silikaten vorliegen können, werden vorzugsweise kristalline Schichtsilikate der allgemeinen Formel Na2SixO2x+i • y H2O eingesetzt, in der x, das sogenannte Modul, eine Zahl von 1 ,9 bis 22, insbesondere 1 ,9 bis 4 und y eine Zahl von 0 bis 33 ist und bevorzugte Werte für x 2, 3 oder 4 sind. Bevorzugte kristalline Schichtsilikate sind solche, bei denen x in der genannten allgemeinen Formel die Werte 2 oder 3 annimmt. Insbesondere sind sowohl ß- als auch ö-Natriumdisilikate (Na2Si2Os • y H2O) bevorzugt. Auch aus amorphen Alkalisilikaten hergestellte, praktisch wasserfreie kristalline Alkalisilikate der oben genannten allgemeinen Formel, in der x eine Zahl von 1 ,9 bis 2,1 bedeutet, können in erfindungsgemäßen Mitteln eingesetzt werden. In einer weiteren Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel wird ein kristallines Natriumschichtsilikat mit einem Modul von 2 bis 3 eingesetzt, wie es aus Sand und Soda hergestellt werden kann. Kristalline Natriumsilikate mit einem Modul im Bereich von 1 ,9 bis 3,5 werden in einer weiteren Ausführungsform erfindungsgemäßer Mittel eingesetzt. In Mitteln, die sowohl amorphe als auch kristalline Alkalisilikate enthalten, beträgt das Gewichtsverhältnis von amorphem Alkalisilikat zu kristallinem Alkalisilikat vorzugsweise 1 :2 bis 2:1 und insbesondere 1 :1 bis 2:1 . Kristalline schichtförmige Silikate der oben angegebenen Formel (I) werden von der Fa. Clariant GmbH unter dem Handelsnamen Na-SKS vertrieben, z.B. Na-SKS-1 (Na2Si22O45 • x H2O, Kenyait), Na-SKS-2 (Na2Sii4O29 • x H2O, Magadiit), Na- SKS-3 (Na2SisOi7 • x H2O) oder Na-SKS-4 (Na2Si4Og • x H2O, Makatit). Von diesen eignen sich vor allem Na-SKS-5 (a-Na2Si2O5), Na-SKS-7 (ß-Na2Si2O5, Natrosilit), Na-SKS-9 (NaHSi2O5 • 3 H2O), Na- SKS-10 (NaHSi2O5 • 3 H2O, Kanemit), Na-SKS-11 (t-Na2Si2O5) und Na-SKS-13 (NaHSi2O5), insbesondere aber Na-SKS-6 (ö-Na2Si2Os). In einer Ausgestaltung erfindungsgemäßer Mittel setzt man ein granuläres Compound aus kristallinem Schichtsilikat und Citrat, aus kristallinem Schichtsilikat und oben genannter (co-)polymerer Polycarbonsäure, oder aus Alkalisilikat und Alkalicarbonat ein, wie es z.B. unter dem Namen Nabion® 15 im Handel erhältlich ist. Derartige wasserlösliche anorganischen Buildermaterialien sind in den erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise in Mengen von 1 bis 20 Gew.-%, insbesondere 5 bis 15 Gew.-%, enthalten. Des Weiteren sind als wasserlösliche anorganische Buildersubstanzen noch die Carbonate (und Hyodrogencarbonate), insbesondere Natriumcarbonat, und die Phosphonsäuren/Phosphonate von Bedeutung.
Die erfindungsgemäßen Mittel sind vorzugsweise frei von Phosphat-Builder, d.h. enthalten weniger als 1 Gew.-%, bevorzugt keinen bewusst zugegebenen Phosphat-Builder. Die Mittel können ferner auch wasserunlösliche Buildersubstanzen enthalten. Als wasserunlösliche anorganische Buildermaterialien werden insbesondere kristalline oder amorphe wasserdispergierbare Alkalialumosilikate, in Mengen von bis zu 50 Gew.-%, vorzugsweise nicht über 40 Gew.-%, insbesondere von 3 bis 20 Gew.-% und besonders bevorzugt von 1 bis 15 Gew.-%, eingesetzt. Unter diesen sind die kristallinen Natriumalumosilikate in Waschmittelqualität, insbesondere Zeolith A, Zeolith P, Zeolith MAP und ggf. Zeolith X, allein oder in Mischungen, z.B. in Form eines Co-Kristallisats aus den Zeolithen A und X (Vegobond® AX, ein Handelsprodukt der Condea Augusta S.p.A.), bevorzugt. Mengen nahe der genannten Obergrenze werden vorzugsweise in festen, teilchenförmigen Mitteln eingesetzt. Geeignete Alumosilikate weisen insbesondere keine Teilchen mit einer Korngröße über 30 pm auf und bestehen vorzugsweise zu wenigstens 80 Gew.-% aus Teilchen mit einer Größe unter 10 pm. Ihr Calciumbindevermögen, das gemäß DE 2412837 A1 bestimmt werden kann, liegt in der Regel im Bereich von 100 bis 200 mg CaO pro Gramm.
In Ergänzung zu den zuvor beschriebenen Gerüststoffen können in dem Waschmittel reinigungsaktive Polymere enthalten sein. Der Gewichtsanteil der reinigungsaktiven Polymere am Gesamtgewicht erfindungsgemäßer Waschmittel beträgt vorzugsweise 0,1 bis 20 Gew.-%, vorzugsweise 1 ,0 bis 15 Gew.-% und weiter bevorzugt 2,0 bis 12 Gew.-%.
Als für den Einsatz in erfindungsgemäßen Mitteln geeignete Persauerstoffverbindungen kommen insbesondere organische Persäuren bzw. persaure Salze organischer Säuren, wie Phthalimidopercapronsäure, Perbenzoesäure oder Salze der Diperdodecandisäure, Wasserstoffperoxid und unter den Waschbedingungen Wasserstoffperoxid abgebende anorganische Salze, zu denen Perborat, Percarbonat, Persilikat und/oder Persulfat wie Caroat gehören, sowie Wasserstoffperoxid-Einschlussverbindungen, wie H2G2-Harnstoffaddukte, in Betracht. Wasserstoffperoxid kann dabei auch mit Hilfe eines enzymatischen Systems, d.h. einer Oxidase und ihres Substrates, erzeugt werden. Sofern feste Persauerstoffverbindungen eingesetzt werden sollen, können diese in Form von Pulvern oder Granulaten verwendet werden, die auch in im Prinzip bekannter Weise umhüllt sein können. Die Persauerstoffverbindungen können als solche oder in Form diese enthaltender Mittel, die prinzipiell alle üblichen Wasch-, Reinigungs- oder Desinfektionsmittelbestandteile enthalten können, zu der Waschlauge zugegeben werden. Besonders bevorzugt wird Alkalipercarbonat oder Alkaliperborat-Monohydrat eingesetzt. Falls ein erfindungsgemäßes Mittel Persauerstoffverbindungen enthält, sind diese in Mengen von vorzugsweise bis zu 50 Gew.-%, insbesondere von 5 bis 30 Gew.-%, weiter bevorzugt von 0,1 bis 20 Gew.-% vorhanden.
Als Bleichaktivatoren können in den Mitteln Verbindungen, die unter Perhydrolysebedingungen aliphatische Peroxocarbonsäuren mit vorzugsweise 1 bis 10 C-Atomen, insbesondere 2 bis 4 C- Atomen, und/oder ggf. substituierte Perbenzoesäure ergeben, eingesetzt werden. Geeignet sind Substanzen, die O- und/oder N-Acylgruppen der genannten C-Atomzahl und/oder ggf. substituierte Benzoylgruppen tragen. Bevorzugt sind mehrfach acylierte Alkylendiamine, insbesondere Tetraacetylethylendiamin (TAED), acylierte Triazinderivate, insbesondere 1 ,5-Diacetyl-2,4- dioxohexahydro-1 ,3,5-triazin (DADHT), acylierte Glykolurile, insbesondere Tetraacetylglykoluril (TAGU), N-Acylimide, insbesondere N-Nonanoylsuccinimid (NOSI), acylierte Phenolsulfonate oder - carboxylate bzw. die Sulfon- oder Carbonsäuren von diesen, insbesondere Nonanoyl- oder Isononanoyloxybenzolsulfonat oder Laroyloxybenzolsulfonat (NOBS bzw. iso-NOBS bzw. LOBS), 4- (2-Decanoyloxyethoxycarbonyloxy)-benzolsulfonat (DECOBS) oder Decanoyloxybenzoat (DOBA), Carbonsäureanhydride, insbesondere Phthalsäureanhydrid, acylierte mehrwertige Alkohole, insbesondere Triacetin, Ethylenglykoldiacetat, 2,5-Diacetoxy-2,5-dihydrofuran und Enolester sowie acetyliertes Sorbitol und Mannitol bzw. deren beschriebene Mischungen (SORMAN), acylierte Zuckerderivate, insbesondere Pentaacetylglukose (PAG), Pentaacetylfruktose, Tetraacetylxylose und Octaacetyllactose, acetyliertes, ggf. N-alkyliertes Glucamin und Gluconolacton, N-acylierte Lactame, z.B. N-Benzoylcaprolactam, Nitrile, aus denen sich Perimidsäuren bilden, insbesondere Aminoacetonitrilderivate mit quaterniertem Stickstoffatom, und/oder sauerstoffübertragende Sulfonimine und/oder Acylhydrazone. Die hydrophil substituierten Acylacetale und die Acyllactame werden ebenfalls bevorzugt eingesetzt. Auch Kombinationen konventioneller Bleichaktivatoren können eingesetzt werden. Derartige Bleichaktivatoren können, insbesondere bei Anwesenheit obengenannter Wasserstoffperoxid-Iiefernder Bleichmittel, im üblichen Mengenbereich, vorzugsweise in Mengen von 0,5 bis 10 Gew.-%, insbesondere 1 bis 8 Gew.-%, bezogen auf gesamtes Mittel, enthalten sein, fehlen bei Einsatz von Percarbonsäure als alleinigem Bleichmittel jedoch vorzugsweise ganz.
Zusätzlich zu den konventionellen Bleichaktivatoren oder an deren Stelle können in festen Mitteln auch Sulfonimine und/oder bleichverstärkende Übergangsmetallsalze bzw. Übergangsmetallkomplexe als sogenannte Bleichkatalysatoren enthalten sein.
Geeignete Vergrauungsinhibitoren bzw. soil-release-Wirkstoffe (soil release polymer) sind Celluloseether, wie Carboxymethylcellulose, Methylcellulose, Hydroxyalkylcellulosen und Cellulosemischether, wie Methylhydroxyethylcellulose, Methylhydroxypropylcellulose und Methylcarboxymethylcellulose. Vorzugsweise werden Natriumcarboxymethylcellulose, Hydroxyporpylmethylcellulose und deren Gemische und ggf. deren Gemische mit Methylcellulose eingesetzt. Zu den üblicherweise eingesetzten Soil-release-Wirkstoffen gehören Copolyester, die Dicarbonsäureeinheiten, Alkylenglykoleinheiten und Polyalkylenglykoleinheiten enthalten. Der Anteil an Vergrauungsinhibitoren und/oder soil-release-Wirkstoffen in erfindungsgemäßen Mitteln liegt im Allgemeinen nicht über 2 Gew.-% und beträgt vorzugsweise 0,5 bis 1 ,5 Gew.-%, besonders bevorzugt 0,5 bis 2 Gew.-%.
Als optische Aufheller für insbesondere Textilien aus Cellulosefasern (z.B. Baumwolle) können z.B. Derivate der Diaminostilbendisulfonsäure bzw. deren Alkalimetallsalze enthalten sein. Geeignet sind z.B. Salze der 4,4’-Bis(2-anilino-4-morpholino-1 ,3,5-triazin-6-yl-amino)-stilben-2,2’-disulfonsäure oder gleichartig aufgebaute Verbindungen, die anstelle der Morpholinogruppe eine Diethanolaminogruppe, eine Methylaminogruppe oder eine 2-Methoxyethylaminogruppe tragen. Weiterhin können Aufheller vom Typ des substituierten 4,4’-Distyryl-diphenyl anwesend sein, z.B. 4,4’- Bis-(4-chlor-3-sulfostyryl)-diphenyl. Auch Gemische von Aufhellern können verwendet werden. Für Polyamidfasern eignen sich besonders gut Aufheller vom Typ der 1 ,3-Diaryl-2-pyrazoline, z.B. 1-(p- Sulfoamoylphenyl)-3-(p-chlorphenyl)-2-pyrazolin sowie gleichartig aufgebaute Verbindungen. Der Gehalt des Mittels an optischen Aufhellern bzw. Aufhellergemischen liegt im Allgemeinen nicht über 1 Gew.-%, vorzugsweise 0,05 bis 0,5 Gew.-%. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Mittel frei von derartigen Wirkstoffen.
Zu den in den erfindungsgemäßen Mitteln einsetzbaren üblichen Schaumregulatoren gehören z.B. Polysiloxan-Kieselsäure-Gemische, wobei die darin enthaltene feinteilige Kieselsäure vorzugsweise silaniert oder anderweitig hydrophobiert ist. Die Polysiloxane können sowohl aus linearen Verbindungen wie auch aus vernetzten Polysiloxan-Harzen sowie aus deren Gemischen bestehen. Weitere Entschäumer sind Paraffinkohlenwasserstoffe, insbesondere Mikro paraffine und Paraffinwachse, deren Schmelzpunkt oberhalb 40°C liegt, gesättigte Fettsäuren bzw. Seifen mit insbesondere 20 bis 22 C-Atomen, z.B. Natriumbehenat, und Alkalisalze von Phosphorsäuremono- und/oder -dialkylestern, in denen die Alkylketten jeweils 12 bis 22 C-Atome aufweisen. Unter diesen wird bevorzugt Natriummonoalkylphosphat und/oder -dialkylphosphat mit Cis-is-Alkylgruppen eingesetzt. Der Anteil der Schaumregulatoren kann vorzugsweise 0,2 bis 2 Gew.-%, besonders bevorzugt nicht mehr als 1 Gew.-% betragen.
Zur Einstellung des gewünschten pH-Werts können die erfindungsgemäßen Mittel system- und umweltverträgliche Säuren, insbesondere Citronensäure, Essigsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Milchsäure, Glykolsäure, Bernsteinsäure, Glutarsäure und/oder Adipinsäure, aber auch Mineralsäuren, insbesondere Schwefelsäure oder Alkalihydrogensulfate, oder Basen, insbesondere Ammonium- oder Alkalihydroxide, vorzugsweise Natriumhydroxid, enthalten. Derartige pH- Regulatoren sind in den erfindungsgemäßen Mitteln vorzugsweise nicht über 10 Gew.-%, insbesondere von 0,5 bis 6 Gew.-%, besonders bevorzugt von 0,3 bis 2 Gew.-% enthalten.
Als einen weiteren Bestandteil können die erfindungsgemäßen Waschmittel ein organisches Lösungsmittel enthalten. Der Zusatz organischer Lösungsmittel wirkt sich vorteilhaft auf die Enzymstabilität und die Reinigungsleistung dieser Mittel aus. Bevorzugte organische Lösungsmittel stammen aus der Gruppe ein- oder mehrwertigen Alkohole, Alkanolamine oder Glykolether. Vorzugsweise werden die Lösungsmittel ausgewählt aus Ethanol, n- oder i-Propanol, Butanol, Glykol, Propandiol, Butandiol, Glycerin, Diglykol, Propyldiglykol, Butyldiglykol, Hexylenglycol, Ethylenglykolmethylether, Ethylenglykolethylether, Ethylenglykolpropylether, Etheylenglykolmono-n- butylether, Diethylenglykolmethylether, Di-ethylenglykolethylether, Propylenglykolmethylether, Propylenglykolethylether, Propylenglykolpropylether, Dipropylenglykolmethylether, Dipropylenglykolethylether, Methoxytriglykol, Ethoxytriglykol, Butoxytriglykol, 1-Butoxyethoxy-2- propanol, 3-Methyl-3-methoxybutanol, Propylenglykol-t-butylether sowie Mischungen dieser Lösungsmittel. Der Gewichtsanteil dieser organischen Lösungsmittel am Gesamtgewicht erfindungsgemäßer Waschmittel beträgt vorzugsweise 0,1 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,2 bis 8,0 Gew.-% und weiter bevorzugt 0,5 bis 5,0 Gew.-%. Ein besonders bevorzugtes und in Bezug auf die Stabilisierung der Waschmittel besonders wirksames organisches Lösungsmittel ist das Glycerin sowie das 1 ,2 Propylenglykol. Flüssige Waschmittel umfassen vorzugsweise mindestens ein Polyol, vorzugsweise aus der Gruppe Glycerin und 1 ,2-Propylenglycol, bezogen auf das Gesamtgewicht des Waschmittels, vorzugsweise zu 0,1 bis 10 Gew.-%, bevorzugt 0,2 bis 8,0 Gew.-% und weiter bevorzugt 0,5 bis 5,0 Gew.-%. Weitere bevorzugte organische Lösungsmittel sind die organischen Amine und Alkanolamine. Die erfindungsgemäßen Waschmittel enthalten diese Amine vorzugsweise in Mengen von 0,1 bis 10 Gew.-%, bevorzugt von 0,2 bis 8,0 Gew.-% und weiter bevorzugt von 0,5 bis 5,0 Gew.-%, jeweils bezogen auf ihr Gesamtgewicht. Ein besonders bevorzugtes Alkanolamin ist das Ethanolamin.
Erfindungsgemäße Wasch- oder Reinigungsmittel können ausschließlich eine Protease enthalten. Alternativ können sie auch weitere hydrolytische Enzyme oder andere Enzyme in einer für die Wirksamkeit des Mittels zweckmäßigen Konzentration enthalten. Eine weitere Ausführungsform der Erfindung stellen somit Mittel dar, die ferner eines oder mehrere weitere Enzyme umfassen. Als weitere Enzyme bevorzugt einsetzbar sind alle Enzyme, die in dem erfindungsgemäßen Mittel eine katalytische Aktivität entfalten können, insbesondere eine Lipase, Amylase, Cellulase, Hemicellulase, Mannanase, Tannase, Xylanase, Xanthanase, Xyloglucanase, ß-Glucosidase, Pektinase, Carrageenase, Perhydrolase, Oxidase, Oxidoreduktase oder andere - von den erfindungsgemäßen Proteasen unterscheidbare - Protease, sowie deren Gemische. Weitere Enzyme sind in dem Mittel vorteilhafterweise jeweils in einer Menge von 1 x 10-8 bis 5 Gewichts-Prozent bezogen auf aktives Protein enthalten. Zunehmend bevorzugt ist jedes weitere Enzym in einer Menge von 1 x 10-7 bis 3 Gew.-%, von 0,00001 bis 1 Gew.-%, von 0,00005 bis 0,5 Gew.-%, von 0,0001 bis 0,1 Gew.-% und besonders bevorzugt von 0,0001 bis 0,05 Gew.-% in erfindungsgemäßen Mitteln enthalten, bezogen auf aktives Protein. Besonders bevorzugt zeigen die Enzyme synergistische Reinigungsleistungen gegenüber bestimmten Anschmutzungen oder Flecken, d.h. die in der Mittelzusammensetzung enthaltenen Enzyme unterstützen sich in ihrer Reinigungsleistung gegenseitig. Ganz besonders bevorzugt liegt ein solcher Synergismus vor zwischen der erfindungsgemäß enthaltenen Protease und einem weiteren Enzym eines erfindungsgemäßen Mittels, darunter insbesondere zwischen der genannten Protease und einer Amylase und/oder einer Lipase und/oder einer Mannanase und/oder einer Cellulase und/oder einer Pektinase. Synergistische Effekte können nicht nur zwischen verschiedenen Enzymen, sondern auch zwischen einem oder mehreren Enzymen und weiteren Inhaltsstoffen des erfindungsgemäßen Mittels auftreten.
Erfindungsgemäß bevorzugte Textilwaschmittel weisen mindestens eine Protease und mindestens eine Amylase auf. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease und mindestens eine Cellulase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease und mindestens eine Lipase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease, mindestens eine Amylase und mindestens eine Lipase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease, mindestens eine Amylase und mindestens eine Cellulase auf. In einerweiteren bevorzugten Ausführungsform weisen Textilwaschmittel mindestens eine Protease, mindestens eine Amylase, mindestens eine Cellulase und mindestens eine Lipase auf. Besonders bevorzugt sind Textilwaschmittel, welche 3 bis 10 verschiedene Enzyme aufweisen, wobei Textilwaschmittel, welche 3 bis 10 unterschiedliche Enzymarten aufweisen, im Hinblick auf die Reinigungsleistung gegenüber einem sehr großen Fleckenspektrum von besonderer Bevorzugung sein können.
Beispiele für Proteasen sind die Subtilisine BPN' aus Bacillus amyloliquefaciens und Carlsberg aus Bacillus liehen! formis, die Protease PB92, die Subtilisine 147 und 309, die Protease aus Bacillus lentus, Subtilisin DY und die den Subtilasen, nicht mehr jedoch den Subtilisinen im engeren Sinne zuzuordnenden Enzyme Thermitase, Proteinase K und die Proteasen TW3 und TW7. Subtilisin Carlsberg ist in weiterentwickelter Form unter dem Handelsnamen Alcalase® von dem Unternehmen Novozymes erhältlich. Die Subtilisine 147 und 309 werden unter den Handelsnamen Esperase® bzw. Savinase® von dem Unternehmen Novozymes vertrieben. Von der Protease aus Bacillus lentus DSM 5483 leiten sich Proteasevarianten ab. Weitere brauchbare Proteasen sind z.B. die unter den Handelsnamen Durazym®, Relase®, Everlase®, Nafizym®, Natalase®, Kannase®, Progress Uno 101 L® und Ovozyme® von dem Unternehmen Novozymes, die unter den Handelsnamen, Purafect®, Purafect® OxP, Purafect® Prime, Excellase®, Properase®, Preferenz P100® und Preferenz P300® von dem Unternehmen Danisco/DuPont, das unter dem Handelsnamen Lavergy pro 104 LS® von dem Unternehmen BASF, das unter dem Handelsnamen Protosol® von dem Unternehmen Advanced Biochemicals Ltd., das unter dem Handelsnamen Wuxi® von dem Unternehmen Wuxi Snyder Bioproducts Ltd., die unter den Handelsnamen Proleather® und Protease P® von dem Unternehmen Amano Pharmaceuticals Ltd., und das unter der Bezeichnung Proteinase K-16 von dem Unternehmen Kao Corp, erhältlichen Enzyme. Besonders bevorzugt eingesetzt werden auch die Proteasen aus Bacillus gibsonii und Bacillus pumilus, die offenbart sind in WO 2008/086916, WO 2007/131656, WO 2017/215925, WO 2021/175696 und WO 2021/175697. Weitere vorteilhaft einsetzbare Proteasen sind offenbart in z.B. WO 91/02792, WO 2008/007319, WO 93/18140, WO 01/44452, GB 1243784 A, WO 96/34946, WO 02/029024 und WO 03/057246. Weitere verwendbare Proteasen sind diejenigen, die in den Mikroorganismen Stenotrophomonas maltophilia, insbesondere Stenotrophomonas maltophilia K279a, Bacillus intermedius sowie Bacillus sphaericus natürlicherweise vorhanden sind.
Beispiele für Amylasen sind die a-Amylasen aus Bacillus liehen! formis, Bacillus amyloliquefaciens oder Bacillus stearothermophilus sowie insbesondere auch deren für den Einsatz in Wasch- oder Reinigungsmitteln verbesserte Weiterentwicklungen. Das Enzym aus Bacillus licheniformis ist von dem Unternehmen Novozymes unter dem Namen Termamyl® und von dem Unternehmen Danisco/DuPont unter dem Namen Purastar® ST erhältlich. Weiterentwicklungsprodukte dieser a- Amylase sind unter den Handelsnamen Duramyl® und Termamyl® ultra (beide von Novozymes), Purastar® OxAm (Danisco/DuPont) und Keistase® (Daiwa Seiko Inc.) erhältlich. Die a-Amylase von Bacillus amyloliquefaciens wird von dem Unternehmen Novozymes unter dem Namen BAN® vertrieben, und abgeleitete Varianten von der a-Amylase aus Bacillus stearothermophilus unter den Namen BSG® und Novamyl®, ebenfalls von dem Unternehmen Novozymes. Des Weiteren sind für diesen Zweck die a-Amylase aus Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368) und die Cyclodextrin- Glucanotransferase (CGTase) aus Bacillus agaradherens (DSM 9948) hervorzuheben. Ferner sind die amylolytischen Enzyme einsetzbar, die in WO 95/26397, WO 96/23873, WO 99/23211 , WO 00/60060, WO 2003/002711 , WO 2003/054177, WO 2006/002643, WO 2007/079938, WO 2011/100410 und WO 2013/003659 offenbart sind. Ebenso sind Fusionsprodukte aller genannten Moleküle einsetzbar. Darüber hinaus sind die unter den Handelsnamen Fungamyl® von dem Unternehmen Novozymes erhältlichen Weiterentwicklungen der a-Amylase aus Aspergillus niger und A. oryzae geeignet. Weitere vorteilhaft einsetzbare Handelsprodukte sind z.B. die Amylase-LT® und Stainzyme® oder Stainzyme® ultra bzw. Stainzyme® plus sowie Amplify™ 12L oder Amplify Prime™ 100L, letztere ebenfalls von dem Unternehmen Novozymes, sowie die PREFERENZ S® Serie von dem Unternehmen Danisco/DuPont, umfassend z.B. PREFERENZ S100®, PREFERENZ S1000® oder PREFERENZ S210®. Auch durch Punktmutationen erhältliche Varianten dieser Enzyme können erfindungsgemäß eingesetzt werden.
Bevorzugte Amylasen umfassen a) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:13 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:13 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe; und/oder b) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:14 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378, 383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:14 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, und/oder besonders bevorzugt mindestens eine Aminosäuresubstitution oder -deletion, die aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist; und/oder c) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:15 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 116, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:15, aufweist, vorzugsweise Aminosäuredeletionen an den Positionen 183 und 184; und/oder d) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:16 angegeben Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und mindestens eine Deletion an einer der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16 aufweist, vorzugsweise Deletionen an mindestens zwei Positionen ausgewählt aus den Positionen 180+181 , 181+182, 182+183 und 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16, besonders bevorzugt an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16, und/oder mindestens eine Substitution an einer der Positionen 405, 421 , 422 und 428 in der Zählung gemäße SEQ ID NO:16 aufweist, die aus der aus I405L, A421 H, A422P, A428T und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:13 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:13 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe. Bevorzugt werden Amylasen eingesetzt, die an zwei, bevorzugt drei, der vorstehend genannten Positionen eine Aminosäuresubstitution aufweisen, insbesondere eine Substitution an Position 202 ausgewählt aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, eine Substitution an Position 255, insbesondere S255N, und eine Substitution an Position 172, insbesondere R172Q. Ganz besonders bevorzugt sind die M202L und M202T Mutanten.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:14 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378, 383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:14 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, besonders bevorzugt aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt. In verschiedenen bevorzugten Ausführungsformen weist die Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:14 Aminosäuresubstitutionen an drei oder mehr der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345 und optional eine oder mehrere, vorzugsweise alle, der Substitutionen und/oder Deletionen an den Positionen: 118, 183, 184, 195, 320 und 458, besonders bevorzugt R118K, D183*, G184*, N195F, R320K und/oder R458K, auf. In besonders bevorzugten Ausführungsformen weist die Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:14 folgende Aminosäuresubstitutionen und/oder Deletionen auf: M9L-M323T; M9L-M202L/T/V/I-M323T; M9L- N195F-M202L/T/V/I-M323T; M9L-R118K-D183*-G184*-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*- G184*-M202L/T/V/l-R320K-M323T-R458K; M9L-G149A-G182T-G186A-M202L-T257I-Y295F-N299Y- M323T-A339S-E345R; M9L-G149A-G182T-G186A-M202I-T257I-Y295F-N299Y-M323T-A339S- E345R; M9L-R118K-G149A-G182T-D183*-G184*-G186A-M202L-T257I-Y295F-N299Y-R320K- M323T-A339S-E345R-R458K; M9L-R118K-G149A-G182T-D183*-G184*-G186A-N195F-M202L- T257I-Y295F-N299Y-R320K-M323T-A339S-E345R-R458K; M9L-R118K-G149A-G182T-D183*- G184*-G186A-M202I-T257I-Y295F-N299Y-R320K-M323T-A339S-E345R-R458K; M9L-R118K-D183*- D184*-N195F-M202L-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*-D184*-N195F-M202T-R320K- M323T-R458K; M9L-R118K-D183*-D184*-N195F-M202I-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-D183*- D184*-N195F-M202V-R320K-M323T-R458K; M9L-R118K-N150H-D183*-D184*-N195F-M202L- V214T-R320K-M323T-R458K; oder M9L-R118K-D183*-D184*-N195F-M202L-V214T-R320K-M323T- E345N-R458K.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:15 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71 %, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 116, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:15, aufweist. Diesbezüglich bevorzugte Aminosäuresubstitutionen umfassen: E260A/D/C/Q/L/M/F/P/S/W/V/G/H/I/K/N/R/T/Y, G304R/K/E/Q, W140Y/F, W189E/G/T, D134E, F262G/P, W284D/H/F/Y/R, W347H/F/Y, W439R/G, G476E/Q/R/K, G477E/Q/K/M/R, N195F/Y, N197F/L, Y198N, Y200F, Y203F, I206H/L/N/F/Y, H210Y, E212V/G, V213A, M116T, Q129L, G133E, E134Y, K142R, P146S, G147E, G149R, N151 R, Y152H, Q169E, N174R, A186R, Y243F, S244Q, G303V, R320N, R359I, N418D und A447V.
In verschiedenen Ausführungsformen der Erfindung umfasst die Amylase eine Aminosäuresequenz, die zu der in SEQ ID NO:16 angegebenen Sequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% oder 99% identisch ist und in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16 an einer oder mehreren der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 eine Deletion aufweist. Besonders bevorzugt ist eine Deletion von zwei Positionen ausgewählt aus 180+181 , 181+182, 182+183 und 183+184, ganz besonders bevorzugt sind Deletionen an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16, insbesondere bevorzugt die Deletionen H183*+G184*. Vorzugsweise weist eine solche a-Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16 weiterhin eine Aminosäuresubstitution an einer oder mehreren der Positionen 405, 421 , 422 und 428 auf. Besonders bevorzugt sind dabei eine oder mehrere der Substitutionen I405L, A421 H, A422P und A428T. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform weist die a- Amylase in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16 die Deletionen H183*+G184* und zusätzlich die Substitutionen I405L, A421 H, A422P und A428T auf.
Der Begriff "Cellulase", wie hierin verwendet, bezeichnet ein Enzym, das die Hydrolyse von 1 ,4-ß- D-Glucosidbindungen in Cellulose (Cellobiose), und/oder Lichenin und/oder ß-D-Glucanen katalysiert. Sie sind oft auch in der Lage, die 1 ,4-Bindungen in ß-D-Glucanen zu hydrolysieren, die neben den 1 ,4-Bindungen auch 1 ,3-Bindungen besitzen. Cellulasen sind in der Lage, Cellulose zu ß-Glucose zu spalten. Folglich wirken Cellulasen insbesondere auf cellulosehaltige oder cellulosederivathaltige Reste und katalysieren deren Hydrolyse. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist die Cellulase eine Endoglucanase (EC 3.2.1.4). Für Cellulasen können synonyme Bezeichnungen verwendet werden, insbesondere Endoglucanase, Endo-1 ,4-ß-Glucanase, Carboxymethylcellulase, Endo-1 ,4-ß-D-Glucanase, ß-1 ,4-Glucanase, ß-1 ,4-Endoglucanhydrolase, Celludextrinase oder Avicelase. Der entscheidende Faktor, ob ein Enzym eine Cellulase im Rahmen der Erfindung ist, ist seine Fähigkeit, 1 ,4-ß-D-Glucosidbindungen in Cellulose zu hydrolysieren.
Der Begriff "Cellulase-Aktivität" ist hier definiert als ein Enzym, das die Hydrolyse von 1 ,4-ß-D- Glucosidbindungen in ß-1 ,4-Glucan (Cellulose) katalysiert. Die Celluloseaktivität wird mit einer Standardmethode gemessen, z. B. wie folgt: Cellulasen setzen Glucose aus CMC (Carboxymethylcellulose) frei. Die Proben werden unter definierten Reaktionsbedingungen (100 mM Natriumphosphatpuffer pH 7,5, 40°C, 15 min) mit einem Substrat (1 ,25% CMC) inkubiert. Bei der Reaktion mit p-Hydroxybenzoesäurehydrazid (PAHBAH) in Gegenwart von Wismut entsteht ein gelber Farbstoff, der photometrisch bei 410 nm bestimmt werden kann. Voraussetzung ist ein alkalischer pH- Wert während der Farbreaktion. Die der Färbung entsprechende Menge an freigesetztem Zucker ist ein Maß für die Enzymaktivität (Lever, Anal. Biochem., 1972, 47 & 1977, 81).
Geeignete Cellulasen umfassen solche bakterieller oder pilzlicher Herkunft. Chemisch modifizierte oder proteintechnisch veränderte Mutanten sind eingeschlossen. Geeignete Cellulasen sind Cellulasen aus den Gattungen Bacillus, Pseudomonas, Humicola, Fusarium, Thielavia, Acremonium, z. B. die Pilzcellulasen aus Humicola insolens, Myceliophthora thermophila und Fusarium oxysporum, die in US 4435307, US 5648263, US 5691178, US 5776757 und WO 89/09259 offenbart sind. Besonders geeignete Cellulasen sind die alkalischen oder neutralen Cellulasen mit farbpflegenden Eigenschaften. Beispiele für solche Cellulasen sind Cellulasen, die in EP 0495257, EP 0531372, WO 96/11262, WO 96/29397 und WO 98/08940 beschrieben sind. Andere Beispiele sind Cellulase- Varianten, wie sie in WO 94/07998, EP 0531315, EP 3212777, EP 3502243, EP 3653705, EP 3653706, US 5457046, US 5686593, US 5763254, WO 95/24471 , WO 98/12307 und WO 99/01544 und WO 2019/122520 beschrieben sind.
Beispiele für Cellulasen mit Endo-1 ,4-Glucanase-Aktivität (EC 3.2.1 .4) sind in WO 2002/099091 beschrieben, z.B. solche mit einer Sequenz von mindestens 97% Identität zu der Aminosäuresequenz der Positionen 1 bis 773 von SEQ ID NO:2 der WO 2002/099091 . Ein weiteres Beispiel kann eine GH44-Xyloglucanase umfassen, z.B. ein Xyloglucanase-Enzym mit einer Sequenz von mindestens 60% Identität zu den Positionen 40 bis 559 der SEQ ID NO:2 der WO 2001/062903.
Andere Beispiele für Cellulasen umfassen die in WO 96/29397 beschriebenen GH45-Cellulasen und insbesondere Varianten davon mit Substitution, Insertion und/oder Deletion an einer oder mehreren der Positionen, die den folgenden Positionen in SEQ ID NO:8 der WO 2002/099091 entsprechen: 2, 4, 7, 8, 10, 13, 15, 19, 20, 21 , 25, 26, 29, 32, 33, 34, 35, 37, 40, 42, 42a, 43, 44, 48, 53, 54, 55, 58, 59, 63, 64, 65, 66, 67, 70, 72, 76, 79, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 91 , 93, 95, 95d, 95h, 95j, 97, 100, 101 , 102, 103, 113, 114, 117, 119, 121 , 133, 136, 137, 138, 139, 140a, 141 , 143a, 145, 146, 147, 150e, 150j, 151 , 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160c, 160e, 160k, 161 , 162, 164, 165, 168, 170, 171 , 172, 173, 175, 176, 178, 181 , 183, 184, 185, 186, 188, 191 , 192, 195, 196, 200, und/oder 20, vorzugsweise ausgewählt aus P19A, G20K, Q44K, N48E, Q119H oder Q146R. Zu den kommerziell verfügbaren Cellulasen gehören Celluzyme™, Carezyme™, Carezyme Premium™, Celluclean™ (z.B. Celluclean™ 5000L ans Celluclean™ 4000T), Celluclean Classic™, Cellusoft™, Endolase®, Renozyme® und Whitezyme™ (Novozymes A/S), Clazinase™ und Puradax HA™ (Genencor International Inc.), KAC-500(B)™ (Kao Corporation), Revitalenz™ 1000, Revitalenz™ 2000 und Revitalenz™ 3000 (DuPont), sowie Ecostone® und Biotouch® (AB Enzymes).
Als weitere Enzyme einsetzbar sind z.B. Lipasen oder Cutinasen, insbesondere wegen ihrer Triglycerid-spaltenden Aktivitäten, aber auch, um aus geeigneten Vorstufen in situ Persäuren zu erzeugen.
Geeignete Lipasen und Cutinasen sind solche bakteriellen oder pilzlichen Ursprungs. Chemisch modifizierte oder durch Proteinengineering erzeugte mutierte Enzyme sind eingeschlossen. Beispiele sind Lipase aus Thermomyces, z.B. aus T. lanuginosus (früher Humicola lanuginosa genannt), wie in EP 0258068 und EP 0305216 beschrieben, Cutinase aus Humicola, z.B. H. insolens (WO 96/13580), Lipase aus Stämmen von Pseudomonas (einige davon jetzt umbenannt in Burkholderia), z.B. P. alcaligenes oder P. pseudoalcaligenes (EP 0218272), P. cepacia (EP 0331376), P. sp. Stamm SD705 (WO 95/06720 & WO 96/27002), P. wisconsinensis (WO 96/12012), Streptomyces-Lipasen vom GDSL-Typ (WO 2010/065455), Cutinase aus Magnaporthe grisea (WO 2010/107560), Cutinase aus Pseudomonas mendocina (US 5389536), Lipase aus Thermobifida fusca (WO 2011/084412), Lipase aus Geobacillus stearothermophilus (WO 2011/084417), Lipase aus Bacillus subtilis (WO 2011/084599), und Lipase aus Streptomyces griseus (WO 2011/150157) und S. pristinaespiralis (WO 2012/137147).
Zu bevorzugten Lipasen gehören z.B. die ursprünglich aus Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus) erhältlichen bzw. daraus weiterentwickelten Lipasen, insbesondere solche mit einem oder mehreren der folgenden Aminosäureaustausche ausgehend von der genannten Lipase in den Positionen D96L, T213R und/oder N233R, besonders bevorzugt T213R und N233R. Lipasen werden z.B. von dem Unternehmen Novozymes unter den Handelsnamen Lipolase®, Lipolase® Ultra, LipoPrime®, Lipozyme® und Lipex® vertrieben. Eine weitere vorteilhaft einsetzbare Lipase ist unter dem Handelsnamen Lipoclean® von dem Unternehmen Novozymes erhältlich.
Des Weiteren sind z.B. die Cutinasen einsetzbar, die ursprünglich aus Fusarium solani pisi und Humicola insolens isoliert worden sind. Ebenso brauchbare Lipasen sind von dem Unternehmen Amano unter den Bezeichnungen Lipase CE®, Lipase P®, Lipase B® bzw. Lipase CES®, Lipase AKG®, Bacillus sp. Lipase®, Lipase AP®, Lipase M-AP® und Lipase AML® erhältlich. Von dem Unternehmen Danisco/DuPont sind z.B. die Lipasen bzw. Cutinasen einsetzbar, deren Ausgangsenzyme ursprünglich aus Pseudomonas mendocina und Fusarium solanii isoliert worden sind. Als weitere wichtige Handelsprodukte sind die von dem Unternehmen Danisco/DuPont vertriebenen Präparationen M1 Lipase® und Lipomax® und die von dem Unternehmen Meito Sangyo KK unter den Namen Lipase MY-30®, Lipase OF® und Lipase PL® vertriebenen Enzyme zu erwähnen, ferner das Produkt Lumafast® von dem Unternehmen Danisco/DuPont.
Weitere Beispiele sind Lipasen, die auch als Acyltransferasen oder Perhydrolasen bezeichnet werden, z.B., Acyltransferasen mit Homologie zu Candida antarctica Lipase A (WO 2010/111143), Acyltransferase aus Mycobacterium smegmatis (WO 2005/056782), Perhydrolasen aus der CE 7- Familie (WO 2009/067279) und Varianten der M. smegmatis Perhydrolase, insbesondere die S54V- Variante, die in dem kommerziellen Produkt Gentle Power Bleach von Huntsman Textile Effects Pte Ltd (WO 2010/100028) verwendet wird. Weitere Beispiele sind Lipase-Varianten, wie sie in EP 0407225, WO 92/05249, WO 94/01541 , WO 94/25578, WO 95/14783, WO 95/30744, WO 95/35381 , WO 95/22615, WO 96/00292, WO 97/04079, WO 97/07202, WO 2000/034450, WO 2000/060063, WO 2001/092502, WO 2007/087508 und WO 2009/109500 beschrieben sind.
Zu den bevorzugten kommerziellen Lipaseprodukten gehören Lipolase™, Lipex™, Lipolex™ und Lipoclean™ (Novozymes A/S), Lumafast (Genencor/ DuPont) und Lipomax (Gist-Brocades).
Zur Erhöhung der bleichenden Wirkung können erfindungsgemäß Oxidoreduktasen, z.B. Oxidasen, Oxygenasen, Katalasen, Peroxidasen, wie Halo-, Chloro-, Bromo-, Lignin-, Glucose- oder Manganperoxidasen, Dioxygenasen oder Laccasen (Phenoloxidasen, Polyphenoloxidasen) eingesetzt werden. Vorteilhafterweise werden zusätzlich vorzugsweise organische, besonders bevorzugt aromatische, mit den Enzymen wechselwirkende Verbindungen zugegeben, um die Aktivität der betreffenden Oxidoreduktasen zu verstärken (Enhancer) oder um bei stark unterschiedlichen Redoxpotentialen zwischen den oxidierenden Enzymen und den Anschmutzungen den Elektronenfluss zu gewährleisten (Mediatoren).
In den hierin beschriebenen Reinigungsmitteln können die einzusetzenden Enzyme ferner zusammen mit Begleitstoffen, etwa aus der Fermentation, konfektioniert sein. In flüssigen Formulierungen werden die Enzyme bevorzugt als Enzymflüssigformulierung(en) eingesetzt.
Die Enzyme werden in der Regel nicht in Form des reinen Proteins, sondern vielmehr in Form stabilisierter, lager- und transportfähiger Zubereitungen bereitgestellt. Zu diesen vorkonfektionierten Zubereitungen zählen beispielsweise die durch Granulation, Extrusion oder Lyophilisierung erhaltenen festen Präparationen oder, insbesondere bei flüssigen oder gelförmigen Mitteln, Lösungen der Enzyme, vorteilhafterweise möglichst konzentriert, wasserarm und/oder mit Stabilisatoren oder weiteren Hilfsmitteln versetzt.
Alternativ können die Enzyme sowohl für die feste als auch für die flüssige Darreichungsform verkapselt werden, beispielsweise durch Sprühtrocknung oder Extrusion der Enzymlösung zusammen mit einem vorzugsweise natürlichen Polymer oder in Form von Kapseln, beispielsweise solchen, bei denen die Enzyme wie in einem erstarrten Gel eingeschlossen sind oder in solchen vom Kern-Schale- Typ, bei dem ein enzymhaltiger Kern mit einer Wasser-, Luft- und/oder Chemikalien-undurchlässigen Schutzschicht überzogen ist. In aufgelagerten Schichten können zusätzlich weitere Wirkstoffe, beispielsweise Stabilisatoren, Emulgatoren, Pigmente, Bleich- oder Farbstoffe aufgebracht werden. Derartige Kapseln werden nach an sich bekannten Methoden, beispielsweise durch Schüttel- oder Rollgranulation oder in Fluid-bed-Prozessen aufgebracht. Vorteilhafterweise sind derartige Granulate, beispielsweise durch Aufbringen polymerer Filmbildner, staubarm und aufgrund der Beschichtung lagerstabil.
Weiterhin ist es möglich, zwei oder mehrere Enzyme zusammen zu konfektionieren, so dass ein einzelnes Granulat mehrere Enzymaktivitäten aufweist. Die Enzyme können auch in wasserlösliche Filme, wie sie beispielsweise bei der Konfektionierung von Wasch- und Reinigungsmitteln in Einheitsdosisform verwendet werden, eingebracht werden. Ein derartiger Film ermöglicht die Freisetzung der Enzyme nach Kontakt mit Wasser. Wie hierin verwendet, bezieht sich „wasserlöslich“ auf eine Filmstruktur, die vorzugsweise vollständig wasserlöslich ist. Bevorzugt besteht ein solcher Film aus (vollständig oder teilweise hydrolysiertem) Polyvinylalkohol (PVA).
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist ein Verfahren zur Reinigung von Textilien oder harten Oberflächen, das dadurch gekennzeichnet ist, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein erfindungsgemäßes Mittel angewendet wird. In verschiedenen Ausführungsformen zeichnet sich das oben beschriebene Verfahren dadurch aus, dass die Protease bei einer Temperatur von 0°C bis 100°C, bevorzugt 20°C bis 60°C, weiter bevorzugt 20°C bis 40°C und am meisten bevorzugt bei 30°C eingesetzt wird.
Hierunter fallen sowohl manuelle als auch maschinelle Verfahren, wobei maschinelle Verfahren aufgrund ihrer präziseren Steuerbarkeit, was z.B. die eingesetzten Mengen und Einwirkzeiten angeht, bevorzugt sind. Verfahren zur Reinigung von Textilien zeichnen sich im Allgemeinen dadurch aus, dass in mehreren Verfahrensschritten verschiedene reinigungsaktive Substanzen auf das Reinigungsgut aufgebracht und nach der Einwirkzeit abgewaschen werden, oder dass das Reinigungsgut in sonstiger Weise mit einem Waschmittel oder einer Lösung oder Verdünnung dieses Mittels behandelt wird.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Protease und sie enthaltende Mittel beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehenden erfindungsgemäßen Verfahren gilt.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung eines Peptids (peptidischen Inhibitors) zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen in einem Wasch- und Reinigungsmittel, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist die Verwendung eines Peptids (peptidischen Inhibitors) zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
Alle Sachverhalte, Gegenstände und Ausführungsformen, die für erfindungsgemäße Protease und sie enthaltende Mittel beschrieben sind, sind auch auf diesen Erfindungsgegenstand anwendbar. Daher wird an dieser Stelle ausdrücklich auf die Offenbarung an entsprechender Stelle verwiesen mit dem Hinweis, dass diese Offenbarung auch für die vorstehende erfindungsgemäße Verwendung gilt.
BEVORZUGTE AUSFÜHRUNGSFORMEN
1. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
2. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
3. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
4. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
5. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
6. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S21 1 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
7. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S21 1 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist. 8. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
9. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird.
10. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
11. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
12. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens ein Peptid, das eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
13. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist.
14. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
15. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
16. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
17. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist.
18. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist. 19. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
20. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist: (i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E; (ii) P9T-N130D-T133A- N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K- S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E; (vi) P9T-S89A- N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K- N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E; (viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A- N252T-Q271 E; (ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E, und b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
21. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird.
22. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist. 23. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird, wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
24. Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, die proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D,
189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, b) mindestens einen peptidischen Inhibitor, der eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Mittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
25. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Punktei bis 24, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel mindestens ein weiteres Enzym umfasst, wobei das Enzym aus der aus Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, Xyloglucanasen, ß- Glucosidasen, Pektinasen, Carrageenasen, Perhydrolasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen, Lipasen, Proteasen und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise mindestens eine Amylase und/oder mindestens eine Cellulase.
26. Wasch- und Reinigungsmittel nach Punkt 25, wobei das mindestens eine weitere Enzym eine Amylase ist, wobei die Amylase amylolytische Aktivität aufweist und ausgewählt ist aus a) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:13 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 80% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 172, 202, 208, 255 und 261 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:13 aufweist, vorzugsweise ausgewählt aus der aus M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N, R172Q und Kombinationen davon bestehenden Gruppe; und/oder b) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:14 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 60% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 195, 202, 203, 214, 231 , 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311 , 314, 315, 318, 319, 320, 323, 339, 345, 361 , 378, 383, 419, 421 , 437, 441 , 444, 445, 446, 447, 450, 458, 461 , 471 , 482 und 484 und/oder eine Deletion an einer der Positionen 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:14 aufweist, vorzugsweise mindestens eine Aminosäuresubstitution an einer der Positionen 9, 26, 149, 182, 186, 202, 257, 295, 299, 323, 339 and 345, und/oder besonders bevorzugt mindestens eine Aminosäuresubstitution oder -deletion, die aus der aus R118K, D183*, G184*, N195F, R320K, R458K und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist; und/oder c) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:15 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 65% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 66%, 67%, 68%, 69%, 79%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81 %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und optional mindestens eine Substitution und/oder Deletion an einer der Positionen 93, 116, 118, 129, 133, 134, 140, 142, 146, 147, 149, 151 , 152, 169, 174, 183, 184, 186, 189, 193, 195, 197, 198, 200, 203, 206, 210, 212, 213, 235, 243, 244, 260, 262, 284, 303, 304, 320, 338, 347, 359, 418, 431 , 434, 439, 447, 458, 469, 476 und 477 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:15, aufweist, vorzugsweise Aminosäuredeletionen an den Positionen 183 und 184; und/oder d) eine a-Amylase, die eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:16 angegeben Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 89% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% oder 99% identisch ist und mindestens eine Deletion an einer der Positionen 180, 181 , 182, 183 und 184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16 aufweist, vorzugsweise Deletionen an mindestens zwei Positionen ausgewählt aus den Positionen 180+181 , 181+182, 182+183 und 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16, besonders bevorzugt an den Positionen 183+184 in der Zählung gemäß SEQ ID NO:16, und/oder mindestens eine Substitution an einer der Positionen 405, 421 , 422 und 428 in der Zählung gemäße SEQ ID NO:16 aufweist, die aus der aus I405L, A421 H, A422P, A428T und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
27. Verwendung eines Peptids zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen in einem Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
28. Verwendung eines Peptids zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen in einem Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
29. Verwendung eines Peptids zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
30. Verwendung eines Peptids zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C. 31. Verwendung eines peptidischen Inhibitors zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen in einem Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei der peptidische Inhibitor eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
32. Verwendung eines Peptids zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen in einem Wasch- und Reinigungsmittel, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei der peptidische Inhibitor eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
33. Verwendung eines Peptids zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei der peptidische Inhibitor eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
34. Verwendung eines Peptids zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Autoproteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitution, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211 N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt ist, aufweist, wobei der peptidische Inhibitor eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist, und wobei das Wasch- und Reinigungsmittel in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
35. Verwendung nach einem der Punkte 27 bis 34, wobei das Peptid zu einer um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhten Restaktivität der Protease führt (wie in Beispiel 2 beschrieben).
BEISPIELE
Beispiel 1 : Bestimmung der Aktivität von Proteasen in Gegenwart von peptidischen Inhibitoren
Die Aktivität einer erfindungsgemäßen Protease in Gegenwart von peptidischen Inhibitoren (PI) wurde in einer handelsüblichen Waschmittematrix (Tabelle 1) mittels eines gängigen Proteaseaktivitätsassays bestimmt.
Tabelle 1 : Verwendete Waschmittelmatrizes:
Tabelle 2: Peptidische Inhibitoren
Die Aktivität der Protease wird durch die Freisetzung des Chromophors para-Nitroanilin aus dem Substrat Succinyl Alanin-Alanin-Prolin-Phenylalanin-para-Nitroanilid (AAPF-pNA; Bachem L-1400) bestimmt. Die Freisetzung des pNA verursacht eine Zunahme der Extinktion bei 410 nm, deren zeitlicher Verlauf ein Maß für die enzymatische Aktivität ist.
Die Messung erfolgte bei einer Temperatur von 25°C, bei pH 8,6 und einer Wellenlänge von 410 nm. Die Messzeit betrug 15 h bei einem Messintervall von 3 Minuten.
Messansatz:
10 pl Inhibitor (Endkonzentration: 0,2 pg)
10 pL AAPF-Lösung (Endkonzentration: 1 ,25 pg)
10 pL verdünnte Proteaselösung (Endkonzentration: 0,014 U)
170 pL Tris/HCI (0,1 M; pH 8,6)
Verwendete Protease:
SEQ ID NO:1 -P9T-N130D-Q271 E-N144K-N252T-Y217M-T133A-S224A-S189T-S89A
Die wie oben beschrieben ermittelte Aktivität der Protease ohne Inhibitor wurde auf 100% normiert und die Aktivität der Protease in Gegenwart der peptidischen Inhibitoren wurde in Relation dazu bestimmt.
Tabelle 3: Ergebnisse der Aktivitätsmessung (Bestimmung der initialen inhibitorischen Leistung der peptidischen Inhibitoren) Beispiel 2: Bestimmung der Laqerstabilität einer erfindunqsqemäßen Protease:
Die Restaktivität (d.h. Aktivität nach Lagerung) einer erfindungsgemäßen Protease in Gegenwart von peptidischen Inhibitoren (PI) wurde in einer handelsüblichen Waschmittematrix (Tabelle 1) mittels eines gängigen Proteaseaktivitätsassays bestimmt.
Die genannte Protease Variante wurde in der Waschmittelmatrix gemäß Tabelle 1 bei 30°C für 4 Wochen und bei 40°C für 1 Woche gelagert. Die Restaktivität der Protease nach Lagerung wurde mittels der AAPF-pNA-Methode bestimmt.
Die Messung erfolgte bei einer Temperatur von 25°C, bei pH 8,6 und einer Wellenlänge von 410 nm. Die Messzeit betrug 5 min bei einem Messintervall von 20 bis 60 Sekunden.
Messansatz:
10 pL AAPF-Lösung (70 mg/mL)
1000 pL Tris/HCI (0,1 M; pH 8,6 mit 0,1% Brij 35)
10 pL verdünnte Proteaselösung aus Waschmittelmatrix
Kinetik erstellt über 5 min bei 25°C (410 nm)
Die wie oben beschrieben ermittelte Aktivität der Protease vor Lagerung (t = 0) wurde auf 100% normiert und die Aktivität der Protease nach Lagerung wurde in Relation dazu bestimmt.
Tabelle 4: Ergebnisse der Restaktivität:

Claims

PATENTANSPRÜCHE
1 . Wasch- und Reinigungsmittel, insbesondere flüssiges Wasch- und Reinigungsmittel, besonders bevorzugt flüssiges Textilwaschmittel, umfassend a) mindestens eine Protease, vorzugsweise in einer Menge von 0,0001 bis 1 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels, b) mindestens ein Peptid, vorzugsweise in einem 0,5-, 1 ,0-, 1 ,5-, 2,0-, 2,5-, 3,0-, 3,5-, 4,0-, 4,5-, 5,0-, 10-, 15-, 18-, 20-, 25-, 27- oder 30-fachen molaren Überschuss bezogen auf der Molarität der eingesetzten Protease, bevorzugt in einem 15-, 18-, 20-, 25 oder 27-fachen molaren Überschuss, wobei das Peptid vorzugsweise eine Länge von 50 bis 200, bevorzugt 55 bis 190, weiter bevorzugt 60 bis 180, Aminosäureresten aufweist, und c) mindestens einen Wasch- und Reinigungsmittelinhaltsstoff, vorzugsweise in einer Menge von 0,01 bis 99,9 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht des Wasch- und Reinigungsmittels.
2. Wasch- und Reinigungsmittel nach Anspruch 1 , wobei die Protease nach Lagerung (wie in Beispiel 2 beschrieben) eine um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhte Restaktivität aufweist, wenn die Protease zusammen mit dem Peptid gelagert wird.
3. Wasch- und Reinigungsmittel nach Anspruch 1 , wobei das Peptid eine initiale inhibitorische Leistung von mindestens 2,5 bis 50, vorzugsweise 5 bis 40, bevorzugt 10 bis 30, weiter bevorzugt 12,5 bis 20 aufweist.
4. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
5. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Protease proteolytische Aktivität aufweist und eine Aminosäuresequenz umfasst, die zu der in SEQ ID NO:1 angegebenen Aminosäuresequenz über deren Gesamtlänge zu mindestens 70% und zunehmend bevorzugt zu mindestens 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91 ,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5% und 98% identisch ist, und jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 (i) an den Positionen, die den Positionen 9, 130, 133, 144, 217, 252 und 271 entsprechen, die Aminosäuresubstitutionen 9T, 130D/V, 133A, 144K, 217M, 252T und 271 E, und (ii) an mindestens einer, vorzugsweise zwei, weiter bevorzugt drei, der Positionen, die den Positionen 6, 89, 131 , 166, 187, 189, 211 oder 224 entsprechen, mindestens eine weitere Aminosäuresubstitutionen, die aus der aus 6W/F, 89A/G, 131 H/Y/F, 166M/L/I, 187D, 189T/L/I/R, 211 N/Q und 224A/G, vorzugsweise 6W, 89A, 131 H, 166M, 187D, 189R, 189T, 211N und 224A, bestehenden Gruppe ausgewählt sind, aufweist.
6. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Protease eine der folgenden Aminosäuresubstitutionsvarianten, jeweils bezogen auf die Nummerierung gemäß SEQ ID NO:1 , aufweist:
(i) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-N252T-Q271 E;
(ii) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(iii) P9T-S89A-N130D-G131 H-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(iv) Y6W-P9T-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(v) P9T-N130D-T133A-N144K-G166M-S211 N-Y217M-N252T-Q271 E;
(vi) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189T-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(vii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(viii) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E;
(ix) P9T-S89A-N130D-T133A-N144K-N187D-S189R-Y217M-S224A-N252T-Q271 E.
7. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel mindestens ein weiteres Enzym umfasst, wobei das Enzym aus der aus Amylasen, Cellulasen, Hemicellulasen, Mannanasen, Tannasen, Xylanasen, Xanthanasen, Xyloglucanasen, ß-Glucosidasen, Pektinasen, Carrageenasen, Perhydrolasen, Oxidasen, Oxidoreduktasen, Lipasen, Proteasen und Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist, vorzugsweise mindestens eine Amylase und/oder mindestens eine Cellulase und/oder mindestens eine Lipase und/oder mindestens eine Mannanase.
8. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Wasch- und Reinigungsmittelinhaltsstoff aus der aus Tensiden, Buildern, Komplexbildnern, Polymeren, Glaskorrosionsinhibitoren, Korrosionsinhibitoren, Bleichmitteln wie Persauerstoffverbindungen, Bleichaktivatoren oder Bleichkatalysatoren, wassermischbaren organischen Lösungsmitteln, Enzymstabilisatoren, Sequestrierungsmitteln, Elektrolyten, pH- Regulatoren und/oder weiteren Hilfsstoffen wie optischen Aufhellern, Vergrauungsinhibitoren, Farbübertragungsinhibitoren, Schaumregulatoren sowie Färb- und Duftstoffen sowie Kombinationen davon bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
9. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel im Wesentlichen frei von borhaltigen Verbindungen ist, vorzugsweise frei von borhaltigen Verbindungen ist.
10. Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei es in 1 Gew.-%iger Lösung in entionisiertem Wasser bei 20°C einen pH-Wert in einem Bereich von etwa 6 bis etwa 11 , insbesondere von etwa 6,5 bis etwa 10,5, weiter bevorzugt von etwa 7 bis etwa 10, besonders bevorzugt von etwa 8 bis etwa 9 aufweist.
11 . Verfahren zur Reinigung von Textilien und/oder harten Oberflächen, dadurch gekennzeichnet, dass in mindestens einem Verfahrensschritt ein Wasch- oder Reinigungsmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 9 angewendet wird, wobei das Verfahren vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt von etwa 30°C, durchgeführt wird.
12. Verwendung eines Wasch- oder Reinigungsmittels nach einem der Ansprüche 1 bis 10 zur Reinigung von Textilien und/oder harten Oberflächen, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt von etwa 30°C.
13. Verwendung eines Peptids zur Verbesserung der Stabilität, insbesondere der Lagerstabilität, von Proteasen in einem Wasch- und Reinigungsmittel, vorzugsweise in einem Wasch- oder Reinigungsmittels nach einem der Ansprüche 1 bis 10, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist, vorzugsweise in einem Temperaturbereich von etwa 20°C bis etwa 60°C, besonders bevorzugt von etwa 20°C bis etwa 40°C, ganz besonders bevorzugt bei etwa 30°C.
14. Verwendung nach Anspruch 13, wobei das Peptid zu einer um einen Faktor von mindestens 1 ,1 bis 2,5, bevorzugt 1 ,2 bis 2,0, weiter bevorzugt 1 ,3 bis 1 ,9, erhöhten Restaktivität der Protease führt (wie in Beispiel 2 beschrieben).
15. Verwendung eines Peptids zur Verhinderung und/oder Reduzierung der Auto proteolyse einer im Wasch- und Reinigungsmittel enthaltenen Protease, wobei das Wasch- und Reinigungsmittel vorzugsweise ein Wasch- und Reinigungsmittel nach einem der Ansprüche 1 bis 10 ist, wobei das Peptid eine Aminosäuresequenz aufweist, die zu einer Aminosäuresequenz, die aus der aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NQ:10, und SEQ ID NO:11 und SEQ ID NO:12 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, bevorzugt aus SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:8 oder SEQ ID NO:11 , über deren Gesamtlänge zu mindestens 90% und zunehmend bevorzugt mindestens 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% oder 100% identisch ist.
16. Verwendung nach einem der Ansprüche 11 bis 15, wobei die Protease eine Protease wie in einem der Ansprüche 5 bis 6 definiert ist.
EP23731938.9A 2022-06-01 2023-05-24 Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität Pending EP4532665A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102022205593.4A DE102022205593A1 (de) 2022-06-01 2022-06-01 Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität
PCT/DE2023/100388 WO2023232192A1 (de) 2022-06-01 2023-05-24 Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP4532665A1 true EP4532665A1 (de) 2025-04-09

Family

ID=86861884

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP23731938.9A Pending EP4532665A1 (de) 2022-06-01 2023-05-24 Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20250346835A1 (de)
EP (1) EP4532665A1 (de)
DE (2) DE102022205593A1 (de)
WO (1) WO2023232192A1 (de)

Family Cites Families (89)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1234445A (de) 1967-10-03 1971-06-03
AT330930B (de) 1973-04-13 1976-07-26 Henkel & Cie Gmbh Verfahren zur herstellung von festen, schuttfahigen wasch- oder reinigungsmitteln mit einem gehalt an calcium bindenden substanzen
DK187280A (da) 1980-04-30 1981-10-31 Novo Industri As Ruhedsreducerende middel til et fuldvaskemiddel fuldvaskemiddel og fuldvaskemetode
JPH0697997B2 (ja) 1985-08-09 1994-12-07 ギスト ブロカデス ナ−ムロ−ゼ フエンノ−トチヤツプ 新規の酵素的洗浄剤添加物
DE3750450T2 (de) 1986-08-29 1995-01-05 Novo Industri As Enzymhaltiger Reinigungsmittelzusatz.
US5389536A (en) 1986-11-19 1995-02-14 Genencor, Inc. Lipase from Pseudomonas mendocina having cutinase activity
EP0305216B1 (de) 1987-08-28 1995-08-02 Novo Nordisk A/S Rekombinante Humicola-Lipase und Verfahren zur Herstellung von rekombinanten Humicola-Lipasen
JP3079276B2 (ja) 1988-02-28 2000-08-21 天野製薬株式会社 組換え体ｄｎａ、それを含むシュードモナス属菌及びそれを用いたリパーゼの製造法
JP2728531B2 (ja) 1988-03-24 1998-03-18 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ セルラーゼ調製品
US5648263A (en) 1988-03-24 1997-07-15 Novo Nordisk A/S Methods for reducing the harshness of a cotton-containing fabric
GB8915658D0 (en) 1989-07-07 1989-08-23 Unilever Plc Enzymes,their production and use
DK0493398T3 (da) 1989-08-25 2000-05-22 Henkel Research Corp Alkalisk, proteolytisk enzym og fremgangsmåde til fremstilling deraf
DK115890D0 (da) 1990-05-09 1990-05-09 Novo Nordisk As Enzym
DK0531372T4 (da) 1990-05-09 2004-08-09 Novozymes As Cellulasepræparat omfattende et endoglucanaseenzym
AU657278B2 (en) 1990-09-13 1995-03-09 Novo Nordisk A/S Lipase variants
US5674833A (en) 1990-09-18 1997-10-07 Novo Nordisk A/S Detergent compositions containing protease and novel inhibitors for use therein
ES2174820T3 (es) 1991-01-16 2002-11-16 Procter & Gamble Composiciones detergentes compactas con celulasa de alta actividad.
DK28792D0 (da) 1992-03-04 1992-03-04 Novo Nordisk As Nyt enzym
DK88892D0 (da) 1992-07-06 1992-07-06 Novo Nordisk As Forbindelse
ATE262035T1 (de) 1992-10-06 2004-04-15 Novozymes As Zellulosevarianten
KR950702240A (ko) 1993-04-27 1995-06-19 한스 발터 라벤 세제로의 이용을 위한 새로운 리파제 변형체
JP2859520B2 (ja) 1993-08-30 1999-02-17 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ リパーゼ及びそれを生産する微生物及びリパーゼ製造方法及びリパーゼ含有洗剤組成物
JPH07143883A (ja) 1993-11-24 1995-06-06 Showa Denko Kk リパーゼ遺伝子及び変異体リパーゼ
DE69527835T2 (de) 1994-02-22 2003-04-10 Novozymes A/S, Bagsvaerd Methode zur herstellung einer variante eines lipolytischen enzymes
DE69536145D1 (de) 1994-03-08 2011-04-07 Novozymes As Neuartige alkalische Zellulasen
US5824531A (en) 1994-03-29 1998-10-20 Novid Nordisk Alkaline bacilus amylase
WO1995030744A2 (en) 1994-05-04 1995-11-16 Genencor International Inc. Lipases with improved surfactant resistance
WO1995035381A1 (en) 1994-06-20 1995-12-28 Unilever N.V. Modified pseudomonas lipases and their use
AU2884695A (en) 1994-06-23 1996-01-19 Unilever Plc Modified pseudomonas lipases and their use
DE69535733T2 (de) 1994-10-06 2009-04-23 Novozymes A/S Ein enzympräparat mit endoglucanase aktivität
BE1008998A3 (fr) 1994-10-14 1996-10-01 Solvay Lipase, microorganisme la produisant, procede de preparation de cette lipase et utilisations de celle-ci.
US5827719A (en) 1994-10-26 1998-10-27 Novo Nordisk A/S Enzyme with lipolytic activity
AR000862A1 (es) 1995-02-03 1997-08-06 Novozymes As Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del
JPH08228778A (ja) 1995-02-27 1996-09-10 Showa Denko Kk 新規なリパーゼ遺伝子及びそれを用いたリパーゼの製造方法
CN102080070B (zh) 1995-03-17 2016-01-20 诺沃奇梅兹有限公司 新的内切葡聚糖酶
ATE429490T1 (de) 1995-05-05 2009-05-15 Novozymes As Protease-varianten und verbindungen
EP0839186B1 (de) 1995-07-14 2004-11-10 Novozymes A/S Modifiziertes enzym mit lipolytischer aktivität
AU6655196A (en) 1995-08-11 1997-03-12 Novo Nordisk A/S Novel lipolytic enzymes
AU3938997A (en) 1996-08-26 1998-03-19 Novo Nordisk A/S A novel endoglucanase
EP1726644A1 (de) 1996-09-17 2006-11-29 Novozymes A/S Zellulase Varianten
US6579698B1 (en) 1996-09-24 2003-06-17 The Procter & Gamble Company Stabilized proteinaceous protease inhibitors and variants thereof
EP1002061A1 (de) 1997-07-04 2000-05-24 Novo Nordisk A/S Varianten der 6 endo-1,4-beta-glukanase und diese enthaldende reinigungszusammensetzungen
US6204232B1 (en) 1997-10-30 2001-03-20 Novo Nordisk A/S α-amlase mutants
WO2000034450A1 (en) 1998-12-04 2000-06-15 Novozymes A/S Cutinase variants
BR9912519A (pt) * 1998-06-26 2001-05-02 Procter & Gamble Variantes estabilizadas de inibidor de subtilisina de streptomyces
AU3420100A (en) 1999-03-31 2000-10-23 Novozymes A/S Lipase variant
JP4745503B2 (ja) 1999-03-31 2011-08-10 ノボザイムス アクティーゼルスカブ アルカリα−アミラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれらをコードする核酸
EP1244779B1 (de) 1999-12-15 2014-05-07 Novozymes A/S Subtilasevarianten mit verbesserter waschleistung bei eierflecken
ES2322690T3 (es) 2000-02-24 2009-06-25 Novozymes A/S Xiloglucanasas de la familia 44.
MXPA02011911A (es) 2000-06-02 2003-05-27 Novozymes As Variantes de cutinasa.
AU2001291649A1 (en) 2000-10-02 2002-04-15 Novozymes A/S Nucleic acids encoding polypeptides having proteolytic activity
ES2521615T3 (es) 2001-06-06 2014-11-13 Novozymes A/S Endo-beta-1,4-glucanasa
DE10131441A1 (de) 2001-06-29 2003-01-30 Henkel Kgaa Eine neue Gruppe von alpha-Amylasen sowie ein Verfahren zur Identifizierung und Gewinnung neuer alpha-Amylasen
DE10163748A1 (de) 2001-12-21 2003-07-17 Henkel Kgaa Neue Glykosylhydrolasen
US20050054843A1 (en) 2001-12-31 2005-03-10 Estell David A Proteases producing an altered immunological response and methods of making and using the same
CN103333870A (zh) 2003-12-03 2013-10-02 丹尼斯科美国公司 过水解酶
ES2554635T3 (es) 2004-07-05 2015-12-22 Novozymes A/S Variantes de alfa-amilasa con propiedades alteradas
US8518675B2 (en) 2005-12-13 2013-08-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Production of peracids using an enzyme having perhydrolysis activity
DE102006038448A1 (de) 2005-12-28 2008-02-21 Henkel Kgaa Enzym-haltiges Reinigungsmittel
CN101370933B (zh) 2006-01-23 2015-11-25 诺维信公司 脂肪酶变体
DE102006022224A1 (de) 2006-05-11 2007-11-15 Henkel Kgaa Subtilisin aus Bacillus pumilus und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend dieses neue Subtilisin
JP2009540859A (ja) 2006-07-07 2009-11-26 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー セルラーゼ及び漂白触媒を含む組成物
US20080090745A1 (en) * 2006-10-13 2008-04-17 Fox Bryan P Expression of Streptomyces subtilism inhibitor (SSI) proteins in Bacillus and Streptomyces sp.
DE102007003143A1 (de) 2007-01-16 2008-07-17 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
MX2010009072A (es) 2008-02-29 2010-09-24 Novozymes As Polipeptidos que tienen actividad de lipasa y polinucleotidos que codifican para los mismos.
DE102008017103A1 (de) 2008-04-02 2009-10-08 Henkel Ag & Co. Kgaa Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend Proteasen aus Xanthomonas
EP2367923A2 (de) 2008-12-01 2011-09-28 Danisco US Inc. Enzyme mit lipaseaktivität
BRPI1013219A2 (pt) 2009-03-06 2016-03-29 Huntsman Adv Mat Switzerland método para o alvejamento-branqueamento enzimático têxtil
WO2010107560A2 (en) 2009-03-18 2010-09-23 Danisco Us Inc. Fungal cutinase from magnaporthe grisea
WO2010111143A2 (en) 2009-03-23 2010-09-30 Danisco Us Inc. Cal a-related acyltransferases and methods of use, thereof
US20120258507A1 (en) 2009-12-21 2012-10-11 Danisco Us Inc. Detergent compositions containing thermobifida fusca lipase and methods of use thereof
BR112012017056A2 (pt) 2009-12-21 2016-11-22 Danisco Us Inc "composições detergentes contendo lipase de bacillus subtilis e métodos para uso das mesmas"
EP2516611A1 (de) 2009-12-21 2012-10-31 Danisco US Inc. Waschmittelzusammensetzungen mit geobacillus stearothermophilus-lipase und verfahren zu ihrer verwendung
EP2357220A1 (de) 2010-02-10 2011-08-17 The Procter & Gamble Company Reinigungszusammensetzungen mit Amylasevarianten mit hoher Stabilität in Gegenwart eines Chelatwirkstoffs
WO2011150157A2 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Danisco Us Inc. Detergent compositions containing streptomyces griseus lipase and methods of use thereof
JP2012180514A (ja) * 2011-02-10 2012-09-20 Sanyo Chem Ind Ltd 液体洗剤組成物
JP2012196205A (ja) * 2011-03-08 2012-10-18 Sanyo Chem Ind Ltd 洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物
CA2830579A1 (en) 2011-04-08 2012-10-11 Danisco Us Inc. Compositions
EP2540824A1 (de) 2011-06-30 2013-01-02 The Procter & Gamble Company Reinigungszusammensetzungen mit Amylasevariantenreferenz zu einem Sequenzprotokoll
FI127093B (en) 2014-10-27 2017-11-15 Ab Enzymes Oy Fungal-derived endoglucanase variants, their production and use
DE102016210628A1 (de) 2016-06-15 2017-12-21 Henkel Ag & Co. Kgaa Bacillus gibsonii Protease und Varianten davon
CN111670250B (zh) 2017-12-21 2024-02-13 生化酶股份有限公司 真菌纤维素酶的变体
EP3502243B1 (de) 2017-12-21 2024-10-09 AB Enzymes Oy Varianten von pilzcellulase
EP3653706A1 (de) 2018-11-13 2020-05-20 AB Enzymes Oy Fusionsprotein
EP3653705A1 (de) 2018-11-13 2020-05-20 AB Enzymes Oy Pilzcellulasevarianten mit verbesserter stabilität
DE102019111057A1 (de) * 2019-04-29 2020-10-29 Henkel Ag & Co. Kgaa Proteasen mit verbesserter Enzymstabilität in Wasch- und Reinigungsmitteln III
DE102020105721A1 (de) * 2020-03-03 2021-09-09 Henkel Ag & Co. Kgaa Leistungsverbesserte Proteasevarianten VII
DE102020105720A1 (de) 2020-03-03 2021-09-09 Henkel Ag & Co. Kgaa Stabilitätsverbesserte Proteasevarianten VI
DE102020205400A1 (de) * 2020-04-29 2021-11-04 Henkel Ag & Co. Kgaa Hochalkalisches Textilwaschmittel mit Protease

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023232192A1 (de) 2023-12-07
US20250346835A1 (en) 2025-11-13
DE102022205593A1 (de) 2023-12-07
DE112023002521A5 (de) 2025-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP4143289B1 (de) Hochalkalisches textilwaschmittel mit protease
EP2478097B1 (de) Lagerstabiles flüssiges wasch- oder reinigungsmittel mit proteasen
WO2012080202A1 (de) Lagerstabiles flüssiges wasch- oder reinigungsmittel enthaltend protease und amylase
EP4532660A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität
EP4143290A1 (de) Hochalkalisches textilwaschmittel mit protease
EP3770238A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit protease und amylase
EP2655587B1 (de) Flüssige tensidzubereitung enthaltend lipase und phosphonat
WO2024149552A1 (de) Enzymhaltiges wasch- und reinigungsmittel
DE102019210806A1 (de) Textilwaschmittel mit einer Bacillus gibsonii Protease
WO2023232192A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität
WO2023232193A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzymstabilität
EP4626907A1 (de) Verbesserte waschleistung durch den einsatz einer protease fusioniert mit speziellem adhäsionsvermittlerpeptid
DE102023201696A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit dispersin
WO2024175294A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit dispersin
DE102023204055A1 (de) Leistungsverbesserte protease-varianten
DE102024208234A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter reinigungsleistung an fetthaltigen anschmutzungen
DE102024208233A1 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter reinigungsleistung an fetthaltigen anschmutzungen
WO2025186246A2 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter reinigungsleistung an fetthaltigen anschmutzungen
WO2024256090A1 (de) Peptide mit schmutzablösender wirkung für wasch- und reinigungsmittel
EP4588933A2 (de) Wasch- und reinigungsmittel mit verbesserter enzym-stabilität

Legal Events

Date Code Title Description
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: UNKNOWN

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE INTERNATIONAL PUBLICATION HAS BEEN MADE

PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: REQUEST FOR EXAMINATION WAS MADE

17P Request for examination filed

Effective date: 20241029

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC ME MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR

DAV Request for validation of the european patent (deleted)
DAX Request for extension of the european patent (deleted)