EP4028554A1 - Verfahren zum nachweis der veranlagung zur ausbildung von blutkrebs - Google Patents

Verfahren zum nachweis der veranlagung zur ausbildung von blutkrebs

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EP4028554A1
EP4028554A1 EP19782476.6A EP19782476A EP4028554A1 EP 4028554 A1 EP4028554 A1 EP 4028554A1 EP 19782476 A EP19782476 A EP 19782476A EP 4028554 A1 EP4028554 A1 EP 4028554A1
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EP
European Patent Office
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dna sequence
allele
predisposition
blood
blood cancer
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Application number
EP19782476.6A
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English (en)
French (fr)
Inventor
Hassan Jumaa
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Sinabiosolution GmbH
Original Assignee
AVA Lifescience GmbH
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Publication date
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Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Definitions

  • Malignant B-cell neoplasms are generally used to describe malignant diseases of the blood-forming or lymphatic system. They include clinical pictures such as leukemia and, in a broader sense, are cancer diseases.
  • Leukemia is characterized by the increased formation of non-functional precursor cells of the white blood cells, which are also called leukemia cells. These cells spread in the bone marrow, suppress the usual blood formation there and, as a rule, also accumulate to a large extent in the peripheral blood. They can infiltrate the liver, spleen, lymph nodes and other organs and thereby impair their function.
  • the disruption of blood formation leads to a reduction in the normal blood components, which can lead to anemia due to a lack of oxygen-carrying red blood cells, a lack of blood platelets that stop bleeding, and a lack of mature, functional white blood cells.
  • Acute leukemias are life-threatening diseases which, if left untreated, can lead to death within a few weeks to months.
  • Chronic leukemia usually lasts for several years and is often asymptomatic in the early stages.
  • the main types of leukemia are:
  • AML acute myeloid leukemia
  • CML chronic myeloid leukemia
  • ALL acute lymphoblastic leukemia
  • CLL chronic lymphocytic leukemia
  • the object of the invention is to provide a method for determining a hereditary CLL disease risk.
  • This mutation is not expected in genomic analyzes either in healthy volunteers or in patients outside the B cell with the one Frequency found. In practice, the mutation is hardly found at all. In patients with CLL, however, it occurs at an unexpected frequency of around 10-15% in the CLL cells, but not in other body cells or non-malignant B cells.
  • the mutation (R110) enables a dimerization of the BCR, which leads to an autonomous activation of the receptor (ie a ligand that dimerizes these receptors by crosslinking is no longer necessary).
  • This allele 01 codes for the following amino acid sequence:
  • the increased (somatic) mutation frequency is explained by the genetic rearrangement that takes place during the development and maturation of the BCR.
  • a person with the risk allele has an increased risk of developing CLL.
  • regular preventive medical examinations can significantly reduce the risk of the disease, especially since antibodies against this mutated epitope of the BCR are available.
  • Such a preventive examination can take place, for example, with an antibody that binds to the R110 mutation of the BCR.
  • Such an antibody and its use is described in EP18162666.4.
  • Such tests can be carried out inexpensively from small amounts of blood by means of flow cytometry.
  • Another possibility is to use real-time PCR to detect the mutation in DNA or mRNA that was obtained from But or from cell fractions from blood.
  • VL3-21 The genomic presence of VL3-21 can be detected directly from the DNA via sequencing (eg whole genome sequencing, PCR or other methods). An analysis of whether VL2-21-01 is homozygous or heterozygous is not necessary, but can be carried out as a control (by detecting the other VL3-21 alleles). There are companies that offer genome analysis services (e.g. 23andme). A service offered by such a company would also fall under the invention described here. If the alleles are to be detected by PCR, it is possible to use a probe for real-time PCR analyzes that detects the risk allele and / or several probes that detect the other alleles. The alleles * 02 and * 03 can be detected with a probe.
  • Secondary prevention measures which consist of screening and preventive examinations, can be, for example, regular blood tests to determine the lymphocyte count or antibody-based analyzes to find the mutated cells.
  • a real-time PCR test which records the genetic differences between the alleles, is sufficient to determine the alleles of IGLV3-21.
  • a probe is suitable for this, which comprises the regions 129-157 of the IGLV3-21 gene: IGLV3-21 * 01 probe: TGTGCTGGTCATCTATTATGATAGCGACC (SEQ ID 02)
  • IGLV3-21 * 02/03 probe TGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACC (SEQ ID 03)
  • IGLV3-21 RW198 AGAGTTGGAGCCAGAGAATC (SEQ ID 05)
  • the probes are modified at their 5 'end with a reporter dye and at the 3' end with a quencher.
  • the IGLV3-21 * 01 probe is labeled with the dye FAM
  • the IGLV3-21 * 02/03 probe is labeled with the dye TAMRA.
  • the quenchers are selected to match the dyes (BHQ-1 for FAM and BHQ-2 for TAMRA) -
  • These modified DNA probes can be obtained with the dyes / quenchers from biomers.net in Ulm.
  • extracted genomic DNA e.g. from blood, saliva or other tissues
  • primers and probes For the detection, extracted genomic DNA (e.g. from blood, saliva or other tissues) is analyzed using the primers and probes.
  • the evaluation is based on the CT values of the individual color channels, with CT values below 32 ( ⁇ 32) being interpreted as a positive signal for the allele. If fewer copies of genomic DNA are used, the limits of the CT values can be lower.
  • a small amount of peripheral blood was drawn from a patient.
  • 100 ml of blood were transferred to a reaction vessel and made up with 2 ml of PBS-BSA buffer solution.
  • the sample was then centrifuged in an Eppendorf centrifuge 5804 at 1500 rpm for a period of five minutes. The supernatant was discarded and the sediment was mixed well.
  • the antibody was then added.
  • the following surface parameters were used for staining: 1) CD19-FITC, 2) CD5-PE, and 3) der CLL SubSet-2 specific antibodies (APC) before incubating the mixtures for 15 minutes at room temperature in the dark. Lysis was then initiated and the erythrocytes were lysed. As previously described, it was washed twice with PBS-BSA buffer solution, and the cells were dissolved in 500 ml of 0.1% PBS-BSA
  • Buffer solution taken up and resuspended.
  • the cells were stored in the dark at 2-8 ° C. until the measurement on the flow cytometer.
  • the analysis at the FACS was carried out on a BDCalibur.
  • the individual laser and detection parameters were set according to the instructions of the device manufacturer and are well known to those skilled in the art.
  • the raw data from the analysis were then evaluated using FlowJo analysis software. First, the lymphocyte population was im
  • FSC / SSC blot selected and marked. For this selection, the focus was then on the CD19-positive B cells and analyzed for the binding of the subset-2-specific antibody.
  • Figure 1 shows such an analysis using the example of the use of the subset-2-specific antibody.
  • the CD19 positive B cells were selected for further analysis (left panel). These were then examined for the binding of the specific antibody (right panel).

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet des Nachweises und der Prophylaxe einer Veranlagung zur Ausbildung des Krankheitsbildes einer CLL, die auf einer Mutation eines spezifischen Gens, das zur Ausbildung des B-Zell Rezeptors (BCR) gebraucht wird, basiert. Zum Nachweis dieser Veranlagung wird ein Allel des IGVL3-21 Gens, das Allel IGVL3-21*01, durch Sequenzieren oder PCR oder eine andere geeignete Methode nachgewiesen.

Description

Verfahren zum Nachweis der Veranlagung zur Ausbildung von Blutkrebs
Mit malignen B-Zell Neoplasien werden allgemein maligne Erkrankungen des blutbildenden oder des lymphatischen Systems bezeichnet. Sie umfassen Krankheitsbilder wie beispielsweise die Leukämie und zählen im weiteren Sinne zu den Krebserkrankungen. Leukämien zeichnen sich durch eine stark vermehrte Bildung von funktionsuntüchtigen Vorläuferzeilen der weißen Blutzellen aus, welche auch Leukämiezellen genannt werden. Diese Zellen breiten sich im Knochenmark aus, verdrängen dort die übliche Blutbildung und akkumulieren in der Regel auch stark vermehrt im peripheren Blut. Sie können Leber, Milz, Lymphknoten und weitere Organe infiltrieren und dadurch deren Funktion beeinträchtigen. Die Störung der Blutbildung führt zu einer Verminderung der normalen Blutbestandteile, wodurch eine Anämie durch Mangel an Sauerstoff transportierenden roten Blutkörperchen, ein Mangel an blutungsstillenden Blutplättchen, und ein Mangel an reifen funktionstüchtigen weißen Blutzellen entstehen können.
Je nach Krankheitsverlauf unterscheidet man zwischen akuter und chronischer Leukämie. Akute Leukämien sind lebensbedrohliche Erkrankungen, die unbehandelt in wenigen Wochen bis Monaten zum Tode führen. Chronische Leukämien hingegen verlaufen meist über mehrere Jahre und sind im Anfangsstadium häufig symptomarm.
Die wichtigsten Leukämieformen sind:
• akute myeloische Leukämie (AML)
• chronische myeloische Leukämie (CML)
• akute lymphatische Leukämie (ALL)
• chronische lymphatische Leukämie (CLL). Eine familiäre Häufung der Erkrankung an CLL ist bekannt, jedoch so selten, dass es keine genetischen Korrelationen für Risikofaktoren gibt (Cerhan JR, Slager SL: Familial predisposition and risk factors for lymphoma; Blood 125:2265-2273, 2015; DOI:10.1182/blood-2015-04-537498).
Somit gibt es im Stand der Technik keinen genetischen Marker für ein Erkrankungsrisiko an CLL, und das obwohl eine erbliche Komponente der Erkrankung bekannt ist.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Verfügung zu stellen, um ein erblich bedingtes CLL-Erkrankungsrisiko zu bestimmen.
Die Lösung dieser Aufgabe liegt in der Erkenntnis, dass eine somatische Mutation, die zur CLL führt, nur bei einem Allel des IGVL3-21 Gens zur autonomen Aktivierung des BCR und damit zur Erkrankung führt, nicht aber bei den anderen beiden bekannten Allelen. Somit ermöglicht ein Nachweis dieses Allels ein erhöhtes Risiko an CLL zu erkranken festzustellen .
In neueren Untersuchungen zeigte sich jedoch, dass eine spezielle Abfolge in der leichten Kette des B-Zell Rezeptors (BCR) in sog. autonom aktiven CLL-Formen besonders häufig vorkommt ((IGVL3-21) Stamatopoulos, Basile, et al., "The light chain IGLV3-21 defines a new poor prognostic subgroup in Chronic Lymphocytic Leukemia: results of a multicenter study" Clinical Cancer Research (2018): clincanres-0133). Hierbei liegt in dieser leichten Kette eine Mutation vor (R110), die zur dauerhaften Aktivierung des BCR führt (Minici, Claudia, et al., "Distinct homotypic B-cell receptor interactions shape the outcome of chronic lymphocytic leukaemia", Nature Communications 8 (2017): 15746). Diese Mutation wird bei genomischen Analysen weder bei gesunden Probanden noch bei den Patienten außerhalb der B-Zelle mit der erwarteten Häufigkeit gefunden. In der Praxis wird die Mutation so gut wie gar nicht gefunden. Bei Patienten mit CLL tritt sie jedoch in einer unerwarteten Häufigkeit von etwa 10-15% in den CLL-Zellen auf, nicht jedoch in anderen Körperzellen oder nicht malignen B-Zellen. Die Mutation (R110) ermöglicht eine Dimerisierung der BCR, die zu einer autonomen Aktivierung des Rezeptors führt (d.h. ein Ligand, der diese Rezeptoren durch Vernetzung dimerisiert, ist nicht mehr notwendig). Von IGVL3-21 gibt es drei bekannte Allele, die mit 01, 02 und 03 benannt sind. Überraschender- weise ist bei CLL Patienten das Allel 01 überrepräsentiert.
Die DNA Sequenz der Allele ist dem Fachmann bekannt und z.B. bei IMGT (www.imgt.org) unter folgender Accession Number zu finden
IGVL3-21*01: X71966
IGVL3-21*02: D97007
IGVL3-21*03 : M94115
Dieses Allel 01 kodiert für folgende Aminosäuresequenz:
SEQ ID 01:
SYVLTQPPSVSVAPGKTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVIYYDSDRPSGIPE
RFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDH
Hier zeigte sich, dass nur der mutierte BCR autonom aktiv ist und dass der Rezeptor zur Selbst-Aktivierung die Mutation R110 benötigt. Diese Mutation führt aber nur bei dem Allel 01 zur autonomen Aktivierung. Diese Mutation führt dazu, dass die Residuen K16 und R110 auf einer leichten Kette mit den Residuen D50 und D52 auf der benachbarten leichten Kette eines zweiten BCR interagieren. Die Residuen D50 und D52 müssen dabei als Y49D50S51D52 vorliegen. Wird die Mutation R110 durch genetische Manipulation in die Wildtypvariante G110 umgewandelt, findet keine autonome Aktivierung mehr statt (Minici et al. 2017). Somit stellt Allel VGLV3-21*01 ein Risikofaktor für die CLL Erkrankung dar. Die erhöhte (somatische) Mutationshäufigkeit erklärt sich mit dem genetischen Rearrangement , das bei der Entstehung und Reifung des BCR stattfindet. Somit hat eine Person mit dem Risikoallel ein erhöhtes Risiko an CLL zu erkranken. D. h. bei einer Person, die das Allel 01 von VL3-21 aufweist, kann eine regelmäßige Vorsorgeuntersuchung das Krankheitsrisiko deutlich verringern, insbesondere seit Antikörper gegen dieses mutierte Epitop des BCR zur Verfügung stehen. Eine solche Vorsorgeuntersuchung kann z.B. mit einem Antikörper stattfinden, der an die R110 Mutation des BCR bindet. Ein solcher Antikörper und seine Verwendung ist in der EP18162666.4 beschrieben. Solche Tests lassen sich mittels Durchflusszytometrie kostengünstig aus geringen Mengen an Blut durchführen. Eine weitere Möglichkeit ist es, mittels Real-Time PCR die Mutation in DNA oder mRNA, die aus But oder aus Zellfraktionen aus Blut gewonnen wurde, nachzuweisen.
Der Nachweis des genomischen Vorhandensein von VL3-21 kann über Sequenzieren (z.B. whole genome sequencing, PCR oder andere Methoden) aus der DNA direkt erfolgen. Eine Analyse, ob VL2-21-01 homozygot oder heterozygot vorliegt, ist dabei nicht notwendig, kann aber zur Kontrolle erfolgen (durch den Nachweis der anderen VL3-21 Allele). Es gibt Firmen, die Genom-Analyse Dienste anbieten (z.B. 23andme). Auch eine von einer derartigen Firma angebotene Dienstleistung würde unter die hier beschriebene Erfindung fallen. Wenn die Allele per PCR nachgewiesen werden sollen ist es möglich, eine Sonde für Real-Time PCR Analysen zu verwenden, die das Risikoallel nachweist, und oder mehrere Sonden zu verwenden, die die anderen Allele nachweisen. Die Allele *02 und *03 lassen sich mit einer Sonde nachweisen. Somit ist ein positiver Nachweis für Allel *01 und ein negativer Nachweis für die Allele *02 und *03 ein Nachweis für das Homozygote Risikoallel. Ein positiver Nachweis von Allel *01 und von einem weiteren Allel, ein Nachweis für den heterozygoten Fall. Geeignete Sonden und deren
Verwendung für Real-Time PCR und andere Verfahren, die DNA- Sonden verwenden, sind dem Fachmann bekannt (Beacons, Scorpions, FRET-Sonden, Light-Cycler Sonden etc. https://de.wikipedia.org/wiki/Real Time Quantitative PCR). Weitere molekularbiologische Methoden zum Nachweis der Allele sind dem Fachmann geläufig und umfassen z.B. Allel- spezifische PCR, In-Situ Hybridisierung, NASBA.
Wenn bei Probanden das Risikoallel VL3-21*01 gefunden wurde, bietet es sich an, Maßnahmen der primären Prävention zu treffen. Solche Maßnahmen dienen der Vermeidung eines Krankheitsausbruches. Dazu zählt z.B. die Vermeidung unnötiger Strahlenbelastung (ionisierende Strahlung) und eine ausgewogene Ernährung.
Maßnahmen der sekundären Prävention, die aus Screening und Vorsorgeuntersuchungen bestehen, können z.B. regelmäßige Blutuntersuchungen zur Bestimmung der Lymphozytenzahl oder auch Antikörper basierte Analysen zur Auffindung der mutierten Zellen sein.
Die vorliegende Erfindung wird nachfolgend anhand von Beispielen näher erläutert.
Beispiel 1:
Real Time PCR für den Nachweis von IGLV3-21*01
Um die Allele von IGLV3-21 zu erfassen, genügt ein Real- Time PCR Test, der die genetischen Unterschiede der Allele erfasst. Dazu ist eine Sonde geeignet, die die Bereiche 129-157 des IGLV3-21 Gens umfasst: IGLV3-21*01-Sonde : TGTGCTGGTCATCTATTATGATAGCGACC (SEQ ID 02)
IGLV3-21*02/ 03-Sonde: TGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACC (SEQ ID 03)
IGLV3-2 1 FW47: AGACGGCCAGGATTACCT (SEQ ID 04)
IGLV3-21 RW198: AGAGTTGGAGCCAGAGAATC (SEQ ID 05)
Die Sonden sind dabei an ihrem 5'-Ende mit einem Reporterfarbstof f und am 3'-Ende mit einem Quencher modifiziert. Dabei ist die IGLV3-21*01-Sonde mit dem Farbstoff FAM markiert, und die IGLV3-21*02/03-Sonde ist mit dem Farbstoff TAMRA markiert. Die Quencher werden passend zu den Farbstoffen gewählt (BHQ-1 für FAM und BHQ-2 für TAMRA) - Diese modifizierten DNA Sonden können mit den Farbstoffen / Quenchern von biomers.net in Ulm bezogen werden.
Für den Nachweis wird extrahierte genomische DNA (z.B. aus Blut, Speichel oder anderen Geweben) mittels der Primer und Sonden analysiert.
Das genaue Vorgehen ist dem Fachmann bekannt, zur Vollständigkeit wird aber eine Ausführungsform benannt. a) Standardprotokoll:
H2O Bidest (ad 25 ml)
20 % Glycerin: 8%
10x TaqMan Puffer A: 1x
25 mM MgC12-Lösung: 5,0 mM dATP: 200mM dCTP: 200mM dGTP : 200mM dUTP : 400mM Primer 1: 200 nM
Primer 2: 200 nM
Sonde Allel 1: 100 nM
Sonde Allel 2/3: 100 nM
AmpliTaq Gold (5 U/ml): 1,25U
AmpErase UNG: 0,25 U
DNA: ca. 10.000 Startkopien
PCR Programm
UNG-Verdau: 50°C für 2 min
AmpliTaq Gold-Aktivierung: 95°C für 10 Minuten
40 Zyklen: 95°C, 15 sec
60°C, 1 min
Die Auswertung erfolgt anhand der CT-Werte der einzelnen Farbkanäle, wobei CT Werte unterhalb von 32 (< 32) als positives Signal für das Allel gedeutet werden. Werden weniger Kopien genomische DNA eingesetzt, so können die Grenzen der CT-Werte geringer liegen.
Beispiel 2:
FACS Test auf den autonom aktiven IGLV3-21*01 R110
Einem Patienten wurde eine geringe Menge peripheres Blut entnommen. Für die Analyse wurden 100 mΐ Blut in ein Reaktionsgefäß überführt und mit 2 ml PBS-BSA Pufferlösung aufgefüllt. Anschließend wurde die Probe in einer Eppendorf Zentrifuge 5804 bei 1500 U/Min für eine Zeitdauer von fünf Minuten zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen, und das Sediment wurde gut durchgemischt. Anschließend wurde der Antikörper hinzugegeben. Gegen folgende Oberflächenpa- rameter wurde gefärbt: 1) CD19-FITC, 2) CD5-PE, und 3) der CLL SubSet-2 spezifische Antikörper (APC), bevor die Ansätze 15 Minuten lang bei Raumtemperatur im Dunkeln inkubiert wurden. Danach wurde die Lyse eingeleitet, und die Erythrozyten wurden lysiert. Wie zuvor schon beschrieben, wurde zwei mal mit PBS-BSA Pufferlösung gewaschen, und die Zellen wurden in 500 ml 0,1% PBS-BSA
Pufferlösung aufgenommen und resuspendiert . Die Zellen wurden bis zur Messung am Durchflusszytometer bei 2-8°C im Dunkeln aufbewahrt. Die Analyse am FACS erfolgte auf einem BDCalibur. Die
Einstellung der einzelnen Laser- und Detektionsparameter erfolgte nach Anweisung des Geräteherstellers und ist dem Fachmann hinreichend bekannt. Die Rohdaten der Analyse wurden anschließend mittels FlowJo-Analyse Software ausgewertet. Zunächst wurde die Lymphozytenpopulation im
FSC/SSC-Blot ausgewählt und markiert. Für diese Auswahl wurde sich dann auf die CD19-positiven B-Zellen fokussiert und nach der Bindung des Subset-2 spezifischen Antikörpers hin analysiert. In Abbildung 1 ist exemplarisch eine solche Analyse am Beispiel der Verwendung des Subset-2 spezifischen Antikörpers dargestellt. In einem ersten
Schritt wurden die CD19 positiven B-Zellen für die weitere Analyse ausgewählt (linkes Panel). Diese wurden dann auf die Bindung des spezifischen Antikörpers hin untersucht (rechtes Panel).

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zum Diagnostizieren einer Prädisposition für
Blutkrebs beim Menschen, welches das Bestimmen in einer
DNA-Probe eines Menschen umfasst, ob eine DNA-Sequenz vorliegt, die für ein Polypeptid gemäß SEQ.ID.Nr. 1 kodiert, wobei das Vorhandensein dieser DNA-Sequenz eine Prädisposition für Blutkrebs anzeigt.
2. Verfahren zum Diagnostizieren einer Prädisposition für
Blutkrebs beim Menschen, welches das Bestimmen in einer
DNA-Probe eines Menschen umfasst, ob eine DNA-Sequenz vorliegt, die für ein Polypeptid kodiert, das folgende Aminosäuren an folgenden Positionen aufweist: Y49, D50,
S51 und D52, wobei das Vorhandensein dieser DNA-Sequenz eine Prädisposition für Blutkrebs anzeigt.
3. Verfahren zum Diagnostizieren einer Prädisposition für
Blutkrebs beim Menschen, welches das Bestimmen in einer
DNA-Probe eines Menschen umfasst, ob eine DNA-Sequenz vorliegt, die für ein Polypeptid kodiert, das folgende Aminosäuren an folgenden Positionen aufweist: K16, Y49,
D50, S51 und D52, wobei das Vorhandensein dieser DNA-
Sequenz eine Prädisposition für Blutkrebs anzeigt.
4. Verfahren nach einem der vorgehenden Ansprüche, wobei die DNA-Sequenz durch Sequenzieren ermittelt wird.
5. Verfahren nach Anspruch 1, 2 oder 3, wobei die DNA-
Sequenz durch PCR ermittelt wird.
6. Verfahren nach Anspruch 5, wobei die DNA-Sequenz durch eine Reportersonde ermittelt wird.
7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei ermittelt wird, ob das Allel IGVL3-21*01 homozygot oder heterozygot vorliegt.
8. Verfahren nach Anspruch 1, 2 oder 3, wobei die DNA-
Sequenz durch Hybridisieren ermittelt wird.
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