EP2649448A2 - Verfahren zum nachweis von anti-nmda-rezeptor autoantikörpern zum einsatz in diagnoseverfahren - Google Patents

Verfahren zum nachweis von anti-nmda-rezeptor autoantikörpern zum einsatz in diagnoseverfahren

Info

Publication number
EP2649448A2
EP2649448A2 EP11846070.8A EP11846070A EP2649448A2 EP 2649448 A2 EP2649448 A2 EP 2649448A2 EP 11846070 A EP11846070 A EP 11846070A EP 2649448 A2 EP2649448 A2 EP 2649448A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
antibodies
nmda receptor
biological sample
iga
neuropathy
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP11846070.8A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Winfried STÖCKER
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG
Original Assignee
Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG filed Critical Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG
Publication of EP2649448A2 publication Critical patent/EP2649448A2/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G01N33/9406—Neurotransmitters
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/30—Psychoses; Psychiatry

Definitions

  • the present invention relates to methods for detecting anti-NMDA receptor antibodies and to kits for detecting these autoantibodies for diagnosing neuropathy, dementia, borderline personality disorder and / or primary psychoses.
  • Polyneuropathies are disorders of the peripheral nervous system. These diseases can be based on a variety of causes, which leads to a different classification of polyneuropathies.
  • the polyneuropathies are divided into toxic neuropathies, metabolic neuropathies, hereditary neuropathies and autoimmune neuropathies.
  • the prognosis and treatment depends on the cause of the polyneuropathy.
  • electrophysiological diagnostics neuroography, EMG
  • EMG electrophysiological diagnostics
  • CSF examination a nerve biopsy and molecular genetic studies available.
  • polyneuropathies in which immunological mechanisms or a malfunction of the immune system play a role. These include the actual autoimmune neuropathies, the paraneoplastic diseases of the peripheral nervous system and the vasculitic polyneuropathies. The exact assignment is extremely important for the therapeutic decision. The laboratory can provide substantial support with regard to the aetiology of polyneuropathy.
  • Gangliosides or the myelin-associated glycoprotein can give important differential diagnostic information.
  • Autoantibodies to gangliosides are considered marker antibodies for the diagnosis and differential diagnosis of peripheral autoimmune neuropathies.
  • autoimmune neuropathies has increased significantly in recent years. Accordingly, the classification has become more differentiated. Classification is based inter alia on the form of the disease, namely acute (up to 4 weeks after onset of symptoms), subacute (4-8 weeks after onset of symptoms), chronic (courses longer than 8 weeks).
  • the most important acute forms of the disease are Guillain-Barre syndrome (GBS) as well as various subtypes.
  • GGS Guillain-Barre syndrome
  • the Miller-Fisher syndrome Chronic, immune-mediated polyneuropathies (CIP) represent a heterogeneous group with predominantly motor, sensory or sensorimotor failures that can manifest symmetrically or asymmetrically.
  • CIP chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy
  • CIDP chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy
  • CIDP multifocal demyelinating sensory and motor neuropathy
  • DADS focal CIDP
  • CIAP axonal form
  • CIDP with monoclonal gammopathy of undetermined significance In the table below (taken from the homepage of the Institute for Medical Diagnostics IMD dated 12.06.2010) these syndromes are compiled with the corresponding laboratory diagnostic autoantibodies:
  • WO 2008/021408 has recently described methods of diagnosing autoimmune encephalitis or epilepsy.
  • the diagnosis of autoimmune encephalitis or epilepsy is based on the detection of autoantibodies.
  • the autoantibodies are directed against glutamate receptors (type NMDA).
  • NMDA receptors are tetrameric complexes composed of the glycine-binding NR1 subunits and the glutamate-binding NR2 subunits (NR2A-NR2D), which form receptor subtypes with different synaptic localization and different physiological and pharmacological properties ⁇ Dingledine et al., 1999, Pharmacol Rev 51, 7-61; Ishii et al., 1993, J Biol Chem 268, 2836-2843; Lynch et al., 1995, J Neurochem 64, 1462-1468; Qiu et al., 2005, J Biol Chem 280, 24923-24930).
  • anti-NMDA receptor antibodies can serve to diagnose diseases other than autoimmune anti-NMDA receptor encephalitis. While limbic encephalitis is a central nervous system (CNS) disorder, neuropathies are peripheral nervous system disorders. Thus, markers such as anti-NMDA receptor antibodies that act on the CNS would not have been suggested as markers of peripheral nervous system disease. The effects, d. H. the clinical symptoms are completely different.
  • the detection of anti-NMDA receptor antibodies class IgG is guided, the method provided in the context of this invention is directed to the detection of antibodies of the classes IgA and IgM. Because antibodies of these classes are found predominantly in patients, for example, with diseases of the peripheral nervous system. Specifically, the IgA and IgM anti-NMDA receptor antibodies are specific markers for various diseases other than anti-NMDA receptor encephalitis, and thus detection of these autoantibodies may serve to diagnose other diseases.
  • the present invention is directed to a method of detecting anti-NMDA receptor antibodies, which comprises contacting a biological sample with an antigenic polypeptide, namely NMDA receptor, or a fragment thereof, and binding IgA and / or IgM antibodies from the biological sample to the antigenic polypeptide are detected and detected.
  • the biological sample is from an individual suspected of having a peripheral nervous system disorder, particularly neuropathy, or suspected dementia suspected of having borderline personality disorder and / or a primary psychosis (a psychiatric disorder) psychotic symptoms).
  • the patients or individuals with suspected neuropathy have the following symptoms:
  • B Symptoms caused by sensitive peripheral nerves, such. B. neuropathic pain, such. Eg burning pain (causalgia), dysesthesias, tingling (paresthesia), allodynia, feeling of heat / cold on the extremities, spinal pain syndrome.
  • the symptoms A are probably caused by damage to the anterior horn cells, the symptoms B are probably caused by damage to the nerve endings.
  • Cognitive impairment include, for example, attention, memory, learning, creativity, planning and orientation.
  • the biological sample is a liquid sample. More preferably, the biological sample is serum, blood, plasma and / or cerebrospinal fluid.
  • the binding of antibodies from the biological sample to the presented antigenic polypeptide can be detected by methods known in the art.
  • Methods for detecting antibody-polypeptide complexes include, for example, immunofluorescence tests, protein microarray, ELISA, luminescence assays, blot, radioimmunoassay, Western blot or dot blot.
  • particularly preferred indirect immunofluorescence is used.
  • the biological sample is applied to cells which express the NMDA receptor. It is particularly preferred to use cells which have been transfected with eukaryotic expression vectors into which the cDNA coding for the glutamate receptor (type NM DA, subunits NR1 / NR1 and NR1 / NR2) has been inserted.
  • the glutamate receptor type NMDA, subunits NR1 and / or NR2
  • coding sequences are well known in the art and can be found in corresponding databases. Preferably, however, sequences are used which have been described in the following prior art: Dalmau et al., Ann Neural. 2007 January; 61 (1): 25-36 and EP 2057466.
  • cDNA is inserted into the expression vector comprising the following nucleotide sequence:
  • the expressed antigen has the following amino acid sequence:
  • antigens are expressed which have at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 98% homology to the disclosed expressed antigen.
  • an antigen is expressed that comprises the following amino acid sequence:
  • the last ten amino acids are missing.
  • cDNA is inserted into the expression vector comprising the following nucleotide sequence:
  • an antigen comprising the sequence:
  • the eukaryotic expression vectors are preferably selected from the group comprising: mammalian cell expression vectors from the family of pTriEx vectors (Merck) or pcDNA3 family (Invitrogen); Plasmid vectors containing functional promoters in mammalian cells, under the control of which the cDNA to be expressed is made (such promoters may be, for example, the chicken beta-actin or the viral CMV promoter.)
  • promoters may be, for example, the chicken beta-actin or the viral CMV promoter.
  • transfection cells are preferably used, selected from the group comprising: human or primate cells, but in principle also all mammalian cells and also other eukaryotic cells (insect cells, yeasts), such as CV1; FRhK4; COS 7; HeLa, CHO, Sf9; Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae.
  • eukaryotic cells insect cells, yeasts
  • CV1 FRhK4
  • COS 7 HeLa
  • HeLa CHO, Sf9
  • Pichia pastoris Saccharomyces cerevisiae.
  • HEK293 human embryonic kidney cells
  • the biological sample may also be contacted with tissue in which NMDA receptors are expressed.
  • tissue in which NMDA receptors are expressed are in particular brain tissue from the hippocampus and the cerebellum. Tissue sections from rat brain are particularly preferably used for this purpose.
  • the biological sample may also be contacted with cultured hippocampal neurons expressing NMDA receptors.
  • the detection of binding of antibodies from the biological sample to the antigenic polypeptide is accomplished by methods known in the art.
  • labeled antibodies directed against human antibodies are used.
  • Evidence that they are antibodies of the classes IgA and / or IgM antibodies is also carried out by methods known from the prior art.
  • the labeled detection antibody is directed against IgA and / or IgM antibodies.
  • markers to the person skilled in the art, such as fluorophores, for example fluorescein or tetramethylrhodamine, haptens, for example biotin or his tag and enzymes, for example horseradish peroxidase or alkaline phosphatase.
  • markers such as fluorophores, for example fluorescein or tetramethylrhodamine, haptens, for example biotin or his tag and enzymes, for example horseradish peroxidase or alkaline phosphatase.
  • a number of different methods are known as chemical coupling methods, in particular those which initially provide the reporter molecules with a reactive group, for example pentafluorophenyl ester, N-hydroxysuccinimide or maleimide, and then the reporter molecules activated in this way with the target molecule to be labeled, for example an antigen or protein to bring in contact.
  • reporter molecule and target molecule After the reporter molecule and target molecule have been combined, excess reporter molecule can then be removed by chemical, biochemical or physical separation techniques, such as chromatography and filtration. To utilize the various coupling methods already activated reporter molecules are commercially available for this purpose. The person skilled in the art knows further reporter molecules and coupling methods for labeling proteins. The invention therefore also provides detection antibodies labeled with reporter molecules produced by such methods.
  • This detection method is also suitable for the diagnosis of neuropathies, dementia, a borderline personality disorder or a primary psychosis, wherein the detection of IgA and / or IgM anti-NMDA receptor antibodies indicative of any of the aforementioned diseases.
  • the invention provides a method for detecting anti-NMDA receptor antibodies in a biological sample of an individual, characterized in that the biological sample is contacted with an antibody which is anti-NMDA receptor Antibodies is directed, and this binding of antibodies to antibodies against NMDA receptors is detected.
  • the antibody is directed against IgA and / or IgM anti-NMDA receptor antibodies.
  • the biological sample comes from an individual suspected of neuropathy, dementia, borderline personality disorder or primary psychosis.
  • the detection of anti-NMDA receptor antibodies indicates one of the aforementioned diseases.
  • this method is also suitable as a diagnostic method for the diagnosis of the aforementioned diseases.
  • the invention provides a method of diagnosing neuropathy characterized by examining a patient's biological sample for the presence of antibodies to an NR heteromer of an NMDA receptor by co-administering the patient's biological sample NMDA receptors are contacted to detect binding of anti-NMDA receptor antibodies to an NR heteromer of a NMDA receptor, with detection of these anti-NMDA receptor antibodies to neuropathy points.
  • samples of a patient suspected of neuropathy having the symptoms already described above are used.
  • the sample is a liquid sample. Even more preferably, this liquid sample is serum, blood, plasma and / or cerebrospinal fluid.
  • the neuropathy to be diagnosed is an autoimmune neuropathy. However, this autoimmune neuropathy can not be classified in the previously known classification of autoimmune neuropathies. Therefore, it can be assumed that this is a new group of autoimmune neuropathy, which is referred to below as an anti-NMDA receptor neuropathy.
  • the antibodies to be detected are directed against the NR1 subunit of NMDA receptors.
  • Particularly preferred antibodies of the classes IgA, IgM and / or IgG are detected.
  • the detection method of anti-NMDA receptor antibodies of the classes IgA and / or IgM already described above is preferably used for this diagnosis method of neuropathy. Detection of these antibodies indicates anti-NMDA receptor neuropathy.
  • the invention provides a test system for in vitro determination of antibodies to NMDA receptors comprising an antigenic polypeptide and anti-IgA and / or anti-IgM antibodies.
  • This kit is suitable for diagnosing autoimmune neuropathies, dementia, borderline personality disorder or primary psychosis.
  • the test kit contains the antigenic polypeptide used in the detection method described above, ie the antigenic polypeptide in the test kit is recombinantly expressed in human cells (see above) and / or the antigenic polypeptide becomes NMDA receptor as already described above presented to expressing tissue.
  • These tissues are tissue sections from the hippocampus and / or the cerebellum. Particularly preferred are brain tissue from rats.
  • the antigenic polypeptide may be presented by the use of cultured hippocampal neurons.
  • the detection of antibodies against NMDA receptors is used for the diagnosis of cerebellar ataxia.
  • NMDA receptor antibodies of the subclasses IgA and IgM have already been found in two patients presenting with the clinical picture of idiopathic cerebellar degeneration. In one case the diagnosis of cerebellar type multisystem atrophy (MSA-C) was made and in the other case a cerebellopathy was diagnosed.
  • MSA-C cerebellar type multisystem atrophy
  • FIG. 1 glutamate receptors (type NMDA).
  • the receptors reside in postsynaptic membranes, forming a heteromeric ligand-gated anion channel composed of the subunits NR1 and NR2.
  • Anti-glutamate receptor (type NMDA) antibodies are directed against an epitope located in the extracellular domain of the NR1 subunit.
  • A Neuropathy detected by indirect immunofluorescence (A). Positive reactions with transfected HEK293 cells expressing the glutamate receptor (type NMDA: subunit NR1), (B) untransfected HEK293 cells (negative response).
  • B Neuropathy detected by indirect immunofluorescence
  • FIG. 3 serum reactivity from the patient with (A) dementia, (B) one
  • the positive response was surface fluorescence of the transfected cells.
  • the patient was positive for subclass IgA anti-NMDA receptor antibody at a titer of 1: 32,000
  • the patient's serum had antibodies of subclasses IgA (titer 1: 32) and IgM (titer 1: 100). These could also be detected in two further course samples.
  • IgA and IgM anti-NMDA receptor antibodies Detection of IgA and IgM anti-NMDA receptor antibodies in a biological sample of a patient with a primary psychosis (paranoid hallucinatory schizophrenia)
  • Anti-NMDA receptor antibodies of class IgA (titer 1: 320) and IgM (titer 1: 32) were detected in the patient's serum.
  • Anti-NMDA receptor antibodies of the various subclasses could also be detected in 8 other patients from this subgroup of schizophrenia patients. Seventeen percent of the 53 serums of paranoid hallucinatory schizophrenia patients examined here were positive. A total of 118 sera from patients from 7 clinically differentiated areas of schizophrenia were studied.
  • Anti-NMDA receptor antibodies of subclasses IgA (titer 1: 320) and IgM (titer 1: 1000) could be detected in the patient.
  • Another study is to demonstrate the prevalence of anti-NMDA receptor antibodies of class IgA and / or IgM in patients with cerebellar ataxia.
  • IgA and / or IgM type Disease and anti-NMDAR antibodies of IgA and / or IgM type can be identified.
  • This study aims to provide a systematic approach to testing such a clinically pre-characterized collective for anti-NMDAR antibodies. All patient sera are examined in the immunofluorescence test for antibodies against glutamate receptors (type NMDA) of the classes IgA, IgG and IgM.
  • the substrate used are the rat tissues hippocampus and cerebellum, as well as HEK cells transfected with the NMDAR subunits NR1 and NR1 + NR2.
  • the multiplex approach enables detection of diverse antibodies in just one Incubation step.
  • Prof. Dr. med. Stöcker also create secondary findings for other than the originally requested parameters.
  • the IgG detection described in the literature and relevant for the diagnosis of anti-NMDA receptor encephalitis was extended by the conjugates IgA and IgM. In this way, it was found that IgA and / or IgM antibodies against NMDA receptors are occasionally detected in the patient's serum, especially in the case of queries for the detection of MAG antibodies.
  • the study described above aims to provide more accurate characterization of the clinical phenotype associated with IgA and / or IgM antibodies to the NMDA (NRI) receptor in the serum of patients with neuromuscular disease. Furthermore, the prevalence should be estimated and compared with control groups.
  • Classification according to symptoms can be maintained, whether a correlation of Antibody titer and severity of the disease can be seen and whether a correlation of AnttShat and symptoms can be detected.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von IgA und/ oder IgM anti-NMDA-Rezeptor Antikörper, sowie ein Verfahren und ein Testkit zur Diagnose einer Autoimmun-Neuropathie, einer Demenz, der Borderline- Persönlichkeitsstörung oder einer primären Psychose.

Description

Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Autoantikörpern zum Einsatz in Diagnoseverfahren
Die vorliegende Erfindung betrifft Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor- Antikörpern sowie Testkits zum Nachweis dieser Autoantikörper zur Diagnose einer Neuropathie, einer Demenz, einer Borderline-Persönlichkeitsstörung und/oder primären Psychosen.
Hintergrund der Erfindung
Polyneuropathien sind Erkrankungen des peripheren Nervensystems. Diesen Erkrankungen kann eine Vielzahl von Ursachen zugrunde liegen, was zu einer unterschiedlichen Einteilung der Polyneuropathien führt. Unterteilt werden die Polyneuropathien bislang in toxische Neuropathien, metabolische Neuropathien, hereditäre Neuropathien und autoimmune Neuropathien. Die Prognose und Behandlung ist abhängig von der Ursache der Polyneuropathie. Neben einer ausführlichen Anamnese und dem neurologischen Befund kommt der elektrophysiologischen Diagnostik (Neurographie, EMG) eine erhebliche Bedeutung zu. An weiterer Diagnostik stehen noch die Liquoruntersuchung, eine Nervenbiopsie und molekulargenetische Untersuchungen zur Verfügung.
Von besonderem Interesse sind Polyneuropathien, bei denen immunologische Mechanismen bzw. eine Fehlfunktion des Immunsystems eine Rolle spielen. Hierzu gehören die eigentlichen autoimmunen Neuropathien, die paraneoplastischen Erkrankungen des peripheren Nervensystems sowie die vaskulitischen Polyneuropathien. Die genaue Zuordnung ist für die therapeutische Entscheidung außerordentlich wichtig. Das Labor kann eine wesentliche Hilfestellung hinsichtlich der Ätiologie der Polyneuropathie geben.
Insbesondere bei den autoimmunen Neuropathien ist es möglich, dass die
Labordiagnostik speziell durch den Nachweis von Autoantikörpern gegen bestimmte
Ganglioside oder das Myelin-assoziierte Glycoprotein (MAG) wichtige differentialdiagnostische Hinweise geben kann. Autoantikörper gegen Ganglioside gelten als Markerantikörper für die Diagnostik und Differentialdiagnostik von peripheren autoimmunen Neuropathien. Weitere Antikörper sind gegen ein Glycoprotein der Zellmembran der Myelinscheiden gerichtet (Myelin-assoziiertes Glycoprotein = MAG).
Die Kenntnis über die autoimmunen Neuropathien hat in den letzten Jahren erheblich zugenommen. Entsprechend ist die Klassifikation differenzierter geworden. Eine Einteilung erfolgt u. a. aufgrund der Verlaufsform, nämlich akut (bis zu 4 Wochen nach Auftreten der Symptome), subakut (4 - 8 Wochen nach Auftreten der Symptome), chronisch (Verläufe länger als 8 Wochen). Die wichtigsten akuten Verlaufsformen sind das Guillain-Barre-Syndrom (GBS) sowie verschiedene Subtypen, z. B. das Miller-Fisher-Syndrom. Die chronischen, immunvermittelten Polyneuropathien (CIP) stellen eine heterogene Gruppe dar, mit schwerpunktmäßig motorischen, sensorischen oder sensomotorischen Ausfällen, die sich symmetrisch oder auch asymmetrisch manifestieren können. Die häufigste Form ist die chronisch- inflammatorisch-demyelinisierende Polyneuropathie (CIDP). Verschiedene Varianten der CIDP werden beschrieben: ataktische Form, multifokale CIDP (multifocal acquired demyelinating sensory and motor neuropathy = MADSAM), fokale CIDP (distal acquired demyelinating Symmetrie neuropathy = DADS), axonale Form (CIAP) sowie die CIDP mit monoklonaler Gammopathie unbestimmter Signifikanz. In der untenstehenden Tabelle (entnommen der Homepage des Instituts für Medizinische Diagnostik IMD vom 12.06.2010) sind diese Krankheitsbilder mit den entsprechenden labordiagnostisch relevanten Autoantikörpern zusammen gestellt:
Weitere Autoantikörper spielen für die Differentialdiagnose gegenwärtig keine Rolle.
Es ist somit eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, mögliche weitere Autoantikörper, die in der Differentialdiagnose der autoimmunen Neuropathien eine Rolle spielen könnten, bereitzustellen.
In der WO 2008/021408 sind kürzlich Verfahren zur Diagnose der autoimmunen Enzephalitis oder Epilepsie beschrieben worden. Die Diagnose der autoimmunen Enzephalitis oder Epilepsie basiert dabei auf der Detektion von Autoantikörpern. In diesem Fall sind die Autoantikörper gegen Glutamat-Rezeptoren (Typ NMDA) gerichtet. Die bislang bekannten NMDA-Rezeptoren sind tetramere Komplexe, die zusammengesetzt sind aus den Glycin-bindenden NR1 Untereinheiten und den Glutamat-bindenden NR2 Untereinheiten (NR2A-NR2D), welche Rezeptor-Subtypen mit unterschiedlicher synaptischer Lokalisierung und unterschiedlichen physiologischen und pharmakologischen Eigenschaften bilden {Dingledine et al., 1999, Pharmacol Rev 51 , 7-61 ; Ishii et al., 1993, J Biol Chem 268, 2836-2843; Lynch et al., 1995, J Neurochem 64, 1462-1468; Qiu et al., 2005, J Biol Chem 280, 24923- 24930). Es ist gezeigt worden, dass Autoantikörper im Serum oder im Liquor von Patienten mit einer Autoimmun-Enzephalitis spezifisch an Epitope binden, die in der extrazellulären Domäne der NR1 Untereinheit lokalisiert sind (Dalmau et al., 2008, Lancet Neurol. 7, 1091-1098). Derweilen spricht man von einer Anti-NMDA-Rezeptor Enzephalitis. Das Vorhandensein der anti-Glutamat-Rezeptor (Typ NMDA) Autoantikörper im Serum oder im Liquor ist sehr spezifisch für diese neue und weitgehend unterdiagnostizierte Erkrankung. Die endgültige Diagnose dieser Erkrankung basiert auf dem Vorhandensein der Autoantikörper gegen den Glutamat- Rezeptor (Typ NMDA, Untereinheit NR 1) im Serum oder im Liquor.
Es ist somit eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung einen markanten Marker zur Diagnose anderer Erkrankungen und ein Nachweisverfahren zur Detektion solch eines Marker bereitzustellen. Es ist weiterhin eine Aufgabe der Erfindung ein Testkit zur Durchführung solcher Verfahren bereitzustellen.
Diese Aufgaben werden durch das in den Patentansprüchen definierte Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern gemäß Anspruch 1 und einem Verfahren zur Diagnose einer Neuropathie gemäß Anspruch 9 gelöst. Ein Testsystem zum Einsatz in diesem Verfahren ist in Anspruch 16 angegeben. Vorteilhafte Weiterbildungen der Erfindung sind Gegenstand der abhängigen Ansprüche und werden in der Beschreibung näher erläutert.
Beschreibung der Erfindung
Überraschenderweise ist im Rahmen dieser Erfindung gefunden worden, dass anti- NMDA-Rezeptor Antikörper der Diagnose anderer Erkrankungen als der autoimmunen Anti-NMDA-Rezeptor-Enzephalitis dienen können. Während die limbische Enzephalitis eine Erkankung des Zentralnervensystems (ZNS) ist, sind Neuropathien Erkrankungen des peripheren Nervensystems. Somit hätte man Marker, wie anti-NMDA-Rezeptor Antikörper, die auf das ZNS wirken, nicht als Marker von Erkrankungen des peripheren Nervensystems vermutet. Die Auswirkungen, d. h. die klinischen Symptome sind gänzlich unterschiedlich.
Darüber hinaus liegen bei den unterschiedlichen Erkrankungen Antikörper unterschiedlicher Klassen vor. Während bei der Diagnose der Autoimmun- Enzephalitis der Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern der Klasse IgG geführt wird, ist das im Rahmen dieser Erfindung bereitgestellte Verfahren auf den Nachweis von Antikörpern der Klassen IgA und IgM gerichtet. Denn Antikörper dieser Klassen findet man vorwiegend bei Patienten z.B. mit Erkrankungen des peripheren Nervensystems. Speziell die anti-NMDA-Rezeptor Antikörper der Klassen IgA und IgM sind spezifische Marker für verschiedene andere Erkrankungen als der Anti- NMDA-Rezeptor Enzephalitis und somit kann der Nachweis dieser Autoantikörper der Diagnose anderer Erkrankungen dienen.
Daher richtet sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass eine biologische Probe mit einem antigenen Polypeptid, nämlich NMDA-Rezeptor, oder einem Fragment davon, in Kontakt gebracht wird und die Bindung von IgA und/ oder IgM Antikörpern aus der biologischen Probe an das antigene Polypeptid detektiert wird und nachgewiesen werden. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung stammt die biologische Probe aus einem Individuum mit Verdacht auf eine Erkrankung des peripheren Nervensystems, insbesondere einer Neuropathie, oder mit Verdacht auf Demenz, mit Verdacht auf eine Borderline-Persönlichkeitsstörung und/ oder einer primären Psychose (eine psychiatrische Erkrankung mit psychotischen Symptomen).
Bevorzugt weisen die Patienten oder die Individuen mit Verdacht auf eine Neuropathie folgende Symptome auf:
A. Symptome, hervorgerufen durch motorisch-periphere Nerven, wie z. B. Lähmungen, Lähmungen vorübergehender Natur (schlaffe Paresen, motorische Ausfälle), Schwächeanfälle, wobei die Verteilungsmuster symmetrisch oder polyradikulär sind; Muskelkrämpfe (crampi), Faszikulationen, Bewegungsunruhe der Beine; und/oder
B. Symptome, hervorgerufen durch sensible periphere Nerven, wie z. B. neuropathische Schmerzen, wie z. B. brennende Schmerzen (Kausalgien), Missempfindungen (Dysästhesien), Kribbeln (Parästhesien), Allodynie, Hitze- /Kältegefühl an den Extremitäten, Wirbelsäulenschmerzsyndrom. Die Symptome A werden vermutlich durch eine Schädigung der Vorderhornzellen hervorgerufen, die Symptome B werden vermutlich durch eine Schädigung an den Nervenendigungen hervorgerufen.
Die Patienten oder Individuen mit Verdacht einer primären Psychose leiden unter Wahn und/oder Halluzinationen.
Die Patienten mit Verdacht auf eine Demenz leiden unter einer Störung der kognitiven Fähigkeiten. Diese umfassen zum Beispiel die Aufmerksamkeit, die Erinnerung, das Lernen, die Kreativität, das Planen und die Orientierung.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist die biologische Probe eine flüssige Probe. Noch bevorzugter handelt es sich bei der biologischen Probe um Serum, Blut, Plasma und/ oder Liquor.
Die Bindung von Antikörpern aus der biologischen Probe an das dargebotene antigene Polypeptid kann durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren nachgewiesen werden. Verfahren zum Nachweis von Antikörper-Polypeptid- Komplexe umfassen zum Beispiel Immunfluoreszenztests, Protein Microarray, ELISA, Lumineszenstests, Blot, Radioimmuntest, Westernblot oder Dotblot. Besonders bevorzugt wird jedoch die indirekte Immunfluoreszenz eingesetzt.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die biologische Probe auf Zellen aufgebracht, die den NMDA-Rezeptor exprimieren. Besonders bevorzugt werden Zellen genutzt, welche mit eukaryotischen Expressionsvektoren, in die cDNA codierend für den Glutamat-Rezeptor (Typ NM DA; Untereinheiten NR1/NR1 und NR1/NR2) insertiert worden ist, transfiziert worden sind. Für den Glutamat-Rezeptor (Typ NMDA; Untereinheiten NR1 und/oder NR2) codierende Sequenzen sind im Stand der Technik hinreichend bekannt und in entsprechenden Datenbanken zu finden. Bevorzugt werden jedoch Sequenzen genutzt, die in folgendem Stand der Technik beschrieben worden sind: Dalmau et al., Ann Neural. 2007 January; 61 (1): 25-36 und EP 2057466. ln einer noch spezielleren Ausführungsform wird cDNA in den Expressionsvektor insertiert, die die folgende Nukleotid-Sequenz umfasst:
In einer weiteren Ausführungsform weist das exprimierte Antigen folgende Aminosäure-Sequenz auf:
ln einer weiteren Ausführungsform werden Antigene exprimiert, die mindestens 80%, mindestens 85%, mindestens 90%, mindestens 95%, mindestens 98% Homologie zu dem offenbarten exprimierten Antigen aufweisen.
In einer noch weiteren Ausführungsform wird ein Antigen exprimiert, dass folgende Aminosäure-Sequenz umfasst:
In einer noch spezielleren Ausführungsform fehlen die letzten zehn Aminosäuren.
In einer noch spezielleren Ausführungsform wird cDNA in den Expressionsvektor insertiert, die die folgende Nukleotid-Sequenz umfasst:
In einer noch weiteren Ausführungsform wird ein Antigen exprimiert, das folgende Sequenz umfasst:
Die eukaryotischen Expressionsvektoren werden bevorzugt ausgewählt aus der Gruppe umfassend: Säugerzell-Expressionsvektoren aus der Familie der pTriEx- Vektoren (Merck) bzw. pcDNA3-Familie (Invitrogen); Plasmid-Vektoren, die in Säugerzellen funktionelle Promotoren enthalten, unter deren Kontrolle die zu exprimierende cDNA gestellt wird (solche Promotoren können z.B. der„Chicken Beta-Actin" oder der virale CMV-Promotor sein). Es gibt eine Vielzahl kommerzieller Expressionssysteme, die dem Fachmann bekannt sind, die sich für die Herstellung des rekombinanten Proteins einsetzen lassen. So ist auch eine Virus-vermittelte Antigendarstellung oder die Herstellung stabil transformierter Zelllinien möglich.
Für die Transfektion werden vorzugsweise Zellen genutzt, ausgewählt aus der Gruppe umfassend: Humane- bzw. Primaten-Zellen, aber grundsätzlich auch alle Säugerzellen sowie auch weitere eukaryotische Zellen (Insektenzellen, Hefen), wie z.B. CV1 ; FRhK4; COS7; HeLa, CHO, Sf9; Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae. Besonders bevorzugt werden jedoch humane embryonale Nierenzellen (HEK293) für die Transfektion genutzt. Die transfizierten Zellen sind bevorzugt auf Deckgläschen ausgesät.
Wahlweise kann die biologische Probe aber auch mit Gewebe in Kontakt gebracht werden, in welchem NMDA-Rezeptoren exprimiert vorliegen. Dies sind insbesondere Hirngewebe aus dem Hippocampus und dem Cerebellum. Besonders bevorzugt werden Gewebeschnitte aus Rattengehirn hierfür genutzt.
Wahlweise kann die biologische Probe aber auch mit kultivierten Neuronen aus dem Hippocampus in Kontakt gebracht werden, welche NMDA-Rezeptoren exprimieren.
Die Detektion der Bindung von Antikörpern aus der biologischen Probe an das antigene Polypeptid erfolgt durch aus dem Stand der Technik bekannte Verfahren. Zum Beispiel werden in den Detektionsschritt markierte Antikörper eingesetzt, die gegen humane Antikörper gerichtet sind. Der Nachweis, dass es sich um Antikörper der Klassen IgA und/ oder IgM Antikörper handelt, erfolgt auch durch aus den Stand der Technik bekannte Verfahren. Zum Beispiel ist der markierte Detektionsantikörper gegen Antikörper der Klassen IgA und/ oder IgM gerichtet.
Als Marker sind dem Fachmann eine Reihe unterschiedlicher Verbindungen bekannt, wie Fluorophore, beispielsweise Fluorescein oder Tetramethylrhodamin, Haptene, beispielsweise Biotin oder His-Tag und Enzyme, beispielsweise Meerrettich- Peroxidase oder alkalische Phosphatase. Als chemische Kopplungsverfahren sind eine Reihe unterschiedlicher Verfahren bekannt, insbesondere solche, die die Reportermoleküle zunächst mit einer reaktiven Gruppe, beispielsweise Pentafluorophenyl Ester, N-Hydroxysuccinimid oder Maleimid, versehen und die so aktivierten Reportermoleküle dann mit dem zu markierenden Zielmolekül, beispielsweise einem Antigen oder Protein, in Kontakt bringen. Nach der Verbindung von Reportermolekül und Zielmolekül kann überschüssiges Reportermolekül anschließend durch chemische, biochemische oder physikalische Trenntechniken, beispielsweise Chromatographie und Filtration, entfernt werden. Zur Nutzung der verschiedenen Kopplungsverfahren sind zu diesem Zweck bereits aktivierte Reportermoleküle, kommerziell erhältlich. Der Fachmann kennt weitere Reportermoleküle und Kopplungsverfahren zur Markierung von Proteinen. Gegenstand der Erfindung sind deshalb auch mit solchen Verfahren hergestellte mit Reportermolekülen markierte Detektionsantikörper.
Dieses Nachweisverfahren eignet sich auch zur Diagnose von Neuropathien, Demenz, einer Borderline-Persönlichkeitsstörung oder einer primären Psychose, wobei der Nachweis von IgA und/ oder IgM anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern auf eine der vorgenannten Erkrankungen hinweist.
In einem weiteren Aspekt sieht die Erfindung ein Verfahren zum Nachweis von anti- NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe eines Individuums vor, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass die biologische Probe mit einem Antikörper in Kontakt gebracht wird, welcher gegen anti-NMDA-Rezeptor Antikörper gerichtet ist, und diese Bindung von Antikörper an Antikörper gegen NMDA- Rezeptoren detektiert wird. Bevorzugt ist der Antikörper gegen IgA und/ oder IgM anti-NMDA-Rezeptor-Antikörper gerichtet. Die biologische Probe entstammt aus einem Individuum mit Verdacht auf eine Neuropathie, eine Demenz, eine Borderline- Persönlichkeitsstörung oder eine primäre Psychose. Der Nachweis von anti-NMDA- Rezeptor Antikörpern weist auf eine der vorgenannten Erkrankungen hin. Somit eignet sich dieses Verfahren auch als Diagnoseverfahren zur Diagnose der vorgenannten Erkrankungen.
Die obigen Ausführungen und Definitionen zu der erfindungsgemäß verwendeten biologischen Probe, dem verwendeten antigenen Polypeptid und/ oder dem verwendeten Detektionsantikörper gelten auch im Zusammenhang mit den folgenden weiteren Aspekten der Erfindung, insbesondere dem Verfahren zur Diagnose einer Neuropathie und dem Testsystem/ Testkit zum Einsatz in einem dieser Verfahren.
In einem weiteren Aspekt sieht die Erfindung ein Verfahren zur Diagnose einer Neuropathie vor, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine biologische Probe eines Patienten auf das Vorhandensein von Antikörpern gegen ein NR-Heteromer eines NMDA-Rezeptors untersucht wird, indem die biologische Probe des Patienten mit NMDA-Rezeptoren in Kontakt gebracht wird, die Bindung von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern an ein NR-Heteromer eines NMDA-Rezeptors nachgewiesen werden, wobei der Nachweis dieser anti-NMDA-Rezeptor Antikörper auf eine Neuropathie hinweist. Bevorzugt werden Proben eines Patienten mit Verdacht auf eine Neuropathie eingesetzt, der die bereits oben beschriebenen Symptome aufweist. Besonders bevorzugt handelt es sich bei der Probe um eine flüssige Probe. Noch weiter bevorzugt handelt es sich bei dieser flüssigen Probe um Serum, Blut, Plasma und/ oder Liquor. Bei der zu diagnostizierenden Neuropathie handelt es sich um eine Autoimmun-Neuropathie. Diese Autoimmun-Neuropathie lässt sich jedoch nicht in die bislang bekannte Klassifikation der autoimmunen Neuropathien einordnen. Daher kann vermutet werden, dass es sich um eine neue Gruppe einer Autoimmun- Neuropathie handelt, es wird im Folgenden von einer Anti-NMDA-Rezeptor Neuropathie gesprochen.
In einer noch spezielleren Ausführungsform der Erfindung sind die nachzuweisenden Antikörper gegen die NR1-Untereinheit von NMDA-Rezeptoren gerichtet. Besonders bevorzugt werden Antikörper der Klassen IgA, IgM und/ oder IgG nachgewiesen. Bevorzugt wird für dieses Diagnoseverfahren einer Neuropathie das bereits oben beschriebene Nachweisverfahren von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern der Klassen IgA und/ oder IgM eingesetzt. Der Nachweis dieser Antikörper deutet auf eine Anti- NMDA-Rezeptor Neuropathie hin.
In einem noch weiteren Aspekt sieht die Erfindung ein Testsystem zur in vitro- Bestimmung von Antikörpern gegen NMDA-Rezeptoren vor, welches ein antigenes Polypeptid umfasst und anti-lgA und/ oder anti-lgM Antikörper. Dieses Testkit ist zur Diagnose von Autoimmun-Neuropathien, einer Demenz, der Borderline- Persönlichkeitsstörung oder einer primären Psychose geeignet. Vorzugsweise enthält das Testkit das in das oben beschriebene Nachweisverfahren eingesetzte antigene Polypetid, d.h., das antigene Polypeptid in dem Testkit wird in humanen Zellen rekombinant exprimiert (s.o.), und/ oder das antigene Polypeptid wird, wie bereits oben schon beschrieben, in NMDA-Rezeptor exprimierendem Gewebe dargeboten. Bei diesen Geweben handelt es sich um Gewebeschnitte aus dem Hippocampus und/ oder dem Cerebellum. Besonders bevorzugt handelt es sich um Gehirngewebe aus Ratten. Des Weiteren kann das antigene Polypeptid durch die Verwendung von kultivierten Neuronen aus dem Hippocampus dargeboten werden. ln einer speziellen Weiterbildung der Erfindung wird der Nachweis von Antikörper gegen NMDA-Rezeptoren zur Diagnose einer cerebellären Ataxie verwendet.
Bei der Durchführung von Laboruntersuchungen sind bereits bei zwei Patienten, die das Krankheitsbild einer idiopathischen cerebellären Degeneration aufweisen, NMDA-Rezeptor Antikörper der Subklassen IgA und IgM gefunden worden. In einem Fall wurde die Diagnose einer Multisystematrophie vom cerebellären Typ (MSA-C) gestellt und im anderen Fall eine Cerebellopathie diagnostiziert.
Im Folgenden wird die Erfindung unter Bezugnahme auf die Figuren ohne Beschränkung des allgemeinen Erfindungsgedankens näher erläutert. Es zeigen:
Figur 1 : Glutamatrezeptoren (Typ NMDA). Die Rezeptoren befinden sich in postsynaptischen Membranen, bilden einen heteromeren liganden- gesteuerten Anionenkanal, der aus den Untereinheiten NR1 und NR2 zusammengesetzt ist. Anti-Glutamatrezeptor (Typ NMDA) Antikörper sind gegen ein Epitop gerichtet, welches in der extra zellulären Domäne der NR1 Untereinheit lokalisiert ist.
Figur 2: Serum Reaktivität vom Patienten mit einer Anti-NMDA-Rezeptor
Neuropathie, detektiert durch indirekte Immunfluoreszenz (A). Positive Reaktionen mit transfizierten HEK293-Zellen, welche den Glutamatrezeptor (Typ NMDA: Untereinheit NR1) exprimieren, (B) Nicht-transfizierte HEK293-Zellen (Negativreaktion).
Figur 3: Serum Reaktivität vom Patienten mit einer (A) Demenz, (B) einer
Borderline-Persönlichkeitsstörung.
Beispiele:
Beispiel 1:
Nachweis von IgA anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe eines Patienten mit Verdacht auf eine Neuropathie. Material und Methoden:
1. Kultivierung von HEK293 Zellen auf Glas- Deckgläsern
2. Insertion von cDNA codierend für die NR1/ NR1 bzw. NR1/ NR2B Untereinheit des NMDA-Rezeptors in ein Plasmid und anschließende Transfektion der HEK293 Zellen mit dem Vektorkonstrukt
3. Zunächst weitere Kultivierung der HEK293 Zellen auf Deckgläsern, dann Kulturabbruch durch Fixierung mit Aceton und anschließende Fragmentierung der Deckgläser in Biochips
4. Zusammenstellung verschiedener Biochips zu einem Mosaik. Verwendung von transfizierten Zellen zusammen mit untransfizierten Zellen, Gefrierschnitten aus Ratten-Hippocampus und Ratten-Cerebellum als Substrate für die indirekte Immunfluoreszenz
5. Patientenwahl: Im März 2010 wurde bei einem 44-jährigen Patienten mit dem Verdacht auf autoimmun bedingte Polyneuropathie das angeforderte Antikörpernachweisspektrum von MAG- und Gangliosid-Antikörpern um anti- NMDA-Rezeptor Antikörper aller Subklassen erweitert
6. Verfahren der indirekten Immunfluoreszenz. Inkubation der Mosaik-tragenden Objektträger mit Patientenserum. Nachweis der Patientenantikörper der einzelnen Subklassen mittels Fluoreszenzfarbstoff-markierter anti-lgA oder anti-lgM Antikörper. Verdünnungsreihe (mit Ausgangsverdünnug 1 :10) zur Bestimmung des Antikörpertiters
7. Im Patientenserum wurden Antikörper der Klasse IgA mit einem Titer von 1 :100 detektiert. Auch die 3 Folgeproben wiesen ausschließlich anti-NMDA- Rezeptor Antikörper der Subklasse IgA auf.
8. Die positive Reaktion stellte sich als Oberflächen-Fluoreszenz der transfizierten Zellen dar.
9. Von Anfang Januar bis Ende Juni 2010 wurden bei 33 Patienten mit Symptomen einer Neuropathie (Durchschnittsalter 70 Jahre, Altersspanne: 44 - 88 Jahre) Antikörper gegen NMDA-Rezeptoren nachgewiesen. Bei 79% der Proben konnten Antikörper der Klasse IgA (33%), IgM (21 %) und IgA+lgM (25%) nachgewiesen werden. Beispiel 2:
Nachweis von IgA anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe einer Patientin mit Demenz
1. Kultivierung von HEK293 Zellen auf Glas-Deckgläsern
2. Insertion von cDNA codierend für die NR1/ NR1 bzw. NR1/ NR2B Untereinheit des NMDA-Rezeptors in ein Plasmid und anschließende Transfektion der HEK293 Zellen mit dem Vektorkonstrukt
3. Zunächst weitere Kultivierung der HEK293 Zellen auf Deckgläsern, dann Kulturabbruch durch Fixierung mit Aceton und anschließende Fragmentierung der Deckgläser in Biochips
4. Zusammenstellung verschiedener Biochips zu einem Mosaik. Verwendung von transfizierten Zellen zusammen mit untransfizierten Zellen, Gefrierschnitten aus Ratten-Hippocampus und Ratten-Cerebellum als Substrate für die indirekte Immunfluoreszenz
5. Bei einer 64-jährigen Patientin mit Symptomen einer Demenz wurde im Januar 2010 ein Globaltest zum Nachweis anti-neuronaler Antikörper aller Subklassen durchgeführt.
6. Verfahren der indirekten Immunfluoreszenz, siehe oben.
7. Die Patientin zeigte sich positiv für anti-NMDA-Rezeptor Antikörper der Subklasse IgA mit einem Titer von 1 :32.000
8. Von Januar bis August 2010 wurden regelmäßig Serum- und/oder Liquor- Verlaufproben dieser Patientin analysiert. In allen 10 Proben wies die Patientin ausschließlich Antikörper der Subklasse IgA auf, der Antikörpertiter im Serum liegt derzeit bei 1 :1000.
9. Bei 3 weiteren Patienten, deren klinische Symptomatik der einer Frontotemporalen Demenz entsprach, wurden seit Februar 2010 anti-NMDA- Rezeptor Antikörper der Klasse IgA nachgewiesen. In einer Studie im September 2010 wurde daher Serum und Liquor von 22 Patienten mit Frontotemporaler Demenz (Durchschnittsalter: 66 Jahre, Altersspanne: 48 - 85 Jahre) auf anti-NMDA-Rezeptor Antikörper getestet. 19 Patienten wiesen positives Serum und/ oder Liquor auf (86%), dabei konnte man bei 10 Patienten IgA Antikörper (53%) und bei 7 IgA und IgM Antikörper (37%) detektieren. Beispiel 3:
Nachweis von IqA und IgM anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe einer Patientin mit einer Borderline-Persönlichkeitsstörung
1. Kultivierung von HEK293 Zellen auf Glas-Deckgläsern
2. Insertion von cDNA codierend für die NR1/ NR1 bzw. NR1/ NR2B Untereinheit des NMDA-Rezeptors in ein Plasmid und anschließende Transfektion der HEK293 Zellen mit dem Vektorkonstrukt
3. Zunächst weitere Kultivierung der HEK293 Zellen auf Deckgläsern, dann Kulturabbruch durch Fixierung mit Aceton und anschließende Fragmentierung der Deckgläser in Biochips
4. Zusammenstellung verschiedener Biochips zu einem Mosaik. Verwendung von transfizierten Zellen zusammen mit untransfizierten Zellen, Gefrierschnitten aus Ratten-Hippocampus und Ratten-Cerebellum als Substrate für die indirekte Immunfluoreszenz
5. Ende März 2010 wurde bei einer Patientin mit einer Borderline- Persönlichkeitsstörung ein umfangreiches Screening auf anti-neuronale Antikörper durchgeführt, darunter auch anti-NMDA-Rezeptor Antikörper.
6. Verfahren der indirekten Immunfluoreszenz, siehe oben.
7. Das Serum der Patientin wies Antikörper der Subklassen IgA (Titer 1 :32) und IgM (Titer 1:100) auf. Diese konnten auch in zwei weiteren Verlaufsproben nachgewiesen werden.
Beispiel 4:
Nachweis von IgA und IgM anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe eines Patienten mit einer primären Psychose (paranoid-halluzinatorische Schizophrenie)
1. Kultivierung von HEK293 Zellen auf Glas-Deckgläsern 2. Insertion von cDNA codierend für die NR1/ NR1 bzw. NR1/ NR2B Untereinheit des NMDA-Rezeptors in ein Plasmid und anschließende Transfektion der HE 293 Zellen mit dem Vektorkonstrukt
3. Zunächst weitere Kultivierung der HEK293 Zellen auf Deckgläsern, dann Kulturabbruch durch Fixierung mit Aceton und anschließende Fragmentierung der Deckgläser in Biochips
4. Zusammenstellung verschiedener Biochips zu einem Mosaik. Verwendung von transfizierten Zellen zusammen mit untransfizierten Zellen, Gefrierschnitten aus Ratten-Hippocampus und Ratten-Cerebellum als Substrate für die indirekte Immunfluoreszenz
5. Ende August 2010 wurde im Rahmen einer Studie bei einem 45-jährigen männlichen Patienten mit paranoid-halluzinatorischer Schizophrenie ein Nachweis auf anti-NMDA-Rezeptor Antikörper durchgeführt
6. Verfahren der indirekten Immunfluoreszenz, siehe oben.
7. Im Serum des Patienten konnten anti-NMDA-Rezeptor Antikörper der Klasse IgA (Titer 1 :320) und IgM (Titer 1 :32) nachgewiesen werden.
8. Auch bei 8 weiteren Patienten aus dieser Untergruppe Schizophrenie- Erkrankter konnten anti-NMDA-Rezeptor Antikörper der verschiedenen Subklassen detektiert werden. 17% der hier untersuchten 53 Seren von paranoid-halluzinatorischen Schizophrenie-Patienten erwiesen sich als positiv. Insgesamt wurden 118 Seren von Patienten aus 7 klinisch differenzierten Teilbereichen der Schizophrenie untersucht.
Beispiel 5:
Nachweis von IqA und IqM anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe eines Patienten mit einer cerebellären Ataxie
1. Kultivierung von HEK293 Zellen auf Glas-Deckgläsern
2. Insertion von cDNA codierend für die NR1/ NR1 bzw. NR1/ NR2B Untereinheit des NMDA-Rezeptors in ein Plasmid und anschließende Transfektion der HEK293 Zellen mit dem Vektorkonstrukt 3. Zunächst weitere Kultivierung der HEK293 Zellen auf Deckgläsern, dann Kulturabbruch durch Fixierung mit Aceton und anschließende Fragmentierung der Deckgläser in Biochips
4. Zusammenstellung verschiedener Biochips zu einem Mosaik. Verwendung von transfizierten Zellen zusammen mit untransfizierten Zellen, Gefrierschnitten aus Ratten-Hippocampus und Ratten-Cerebellum als Substrate für die indirekte Immunfluoreszenz.
5. Bei einem 47-jährigen Patienten mit Symptomen einer Multisystematrophie vom cerebellären Typ (MSA-C) wurde im September 2010 ein umfassender Test zum Nachweis anti-neuronaler Antikörper aller Subklassen durchgeführt.
6. Verfahren der indirekten Immunfluoreszenz, siehe oben.
7. Bei dem Patienten konnten anti-NMDA-Rezeptor Antikörper der Subklassen IgA (Titer 1 :320) und IgM (Titer 1 :1000) detektiert werden.
8. Bereits im Oktober 2010 ging eine weitere Serumprobe eines 68-jährigen Patienten mit einer idiopathischen cerebellären degenerativen Erkrankung ein, die ebenfalls NMDA-Rezeptor Antikörper der Subklassen IgA und IgM mit gleichem Titer aufwies.
Beispiel 6:
Mit Hilfe einer weiteren Untersuchung soll die Prävalenz von Anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern der Klasse IgA- und/oder IgM bei Patienten mit cerebellärer Ataxie nachgewiesen werden.
Hierzu werden insgesamt 88 Proben von Patienten, die Auffälligkeiten in Bezug auf das Vorhandensein einer cerebellären Ataxie aufweisen, untersucht. Die folgenden verschiedenen Subtypen einer cerebellären Ataxie sind in den Proben vorhanden:
1. genetisch bedingte Ataxie: 37 Patienten
2. Sporadische cerebelläre Ataxie: 31 Patienten
3. Multisystematrophie vom cerebellären Typ: 20 Patienten
Bislang konnten 3 Patienten mit einer idiopathischen cerebellär degenerativen
Erkrankung und Anti-NMDAR-Antikörper vom IgA und/oder IgM-Typ identifiziert werden. Diese Studie soll den systematischen Ansatz zur Austestung eines solchen klinisch vorcharakterisierten Kollektivs auf Anti-NMDAR-Antikörper bieten. Sämtliche Patientenseren werden im Immunfluoreszenztest auf Antikörper gegen Glutamatrezeptoren (Typ NMDA) der Klassen IgA, IgG und IgM untersucht. Als Substrat dienen die Rattengewebe Hippocampus und Kleinhirn, sowie mit den NMDAR-Untereinheiten NR1 , sowie NR1+ NR2 transfizierte HEK-Zellen.
Untersucht wird die Prävalenz von Anti-NMDAR-Antikörpern im gesamten Kollektiv, ob eine Korrelation von Antikörperklasse und Symptomatik erkennbar ist und ob eine Korrelation von Antikörpertiter und Schwere der Erkrankung nachgewiesen werden kann.
Beispiel 7:
Mit Hilfe einer weiteren Untersuchung soll die Prävalenz von Anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern der Klasse IgA- und/oder IgM bei Patienten mit Neuropathie
nachgewiesen werden.
Im Rahmen der Untersuchung findet retrospektiv eine Datenanalyse von
Serumproben statt, die seit Einführung des Testsystems ,Anti-Glutamat-Rezeptor (Typ NMDA) UFT" im klinisch-immunologischen Labor Prof. Dr. Stöcker eingegangen sind. In die Datenabfrage werden Proben einbezogen, die
(1) mit dem Analyseauftrag zum Nachweis von Antikörpern gegen MAG und/oder Ganglioside eingeschickt wurden und
(2) in Form eines multiparametrischen Ansatzes auf verschiedenen Substraten im Immunofluoreszenztest inkubiert wurden.
Aufgrund der Analysenanfrage kann von dem klinischen Hintergrund einer
Neuropathie ausgegangen werden. Sobald Anti-NMDA-Rezeptor Antikörper der Klasse IgA und/oder IgM als Nebenbefund nachweisen werden, erfolgt eine
Nachfrage beim Einsender respektive beim behandelnden Arzt zur Klinik des
Patienten durch einen Neurologen.
Der Multiplex-Ansatz ermöglicht durch die Kombination verschiedener IIFT-Substrate auf einem Reaktionsfeld den Nachweis diverser Antikörper in nur einem Inkubationsschritt. Dadurch lassen sich in der standardisierten Abarbeitung von Analyseaufträgen im Labor Prof. Dr. Stöcker auch Nebenbefunde für andere als den ursprünglich angeforderten Parameter erstellen. Aus wissenschaftlichem Interesse wurde dort bei den neurologischen Parametern der in der Literatur beschriebene und für die Diagnostik einer Anti-NMDA-Rezeptor-Enzephalitis relevante IgG-Nachweis zusätzlich um die Konjugate IgA und IgM erweitert. Auf diese Weise zeigte sich, dass vor allem bei Anfragen zum Nachweis von MAG-Antikörpern gelegentlich IgA und/oder IgM-Antikörper gegen NMDA-Rezeptoren im Patientenserum detektiert werden. Im Zeitraum von Januar - Juni 2010 konnten bereits 33 Patienten mit Verdacht auf die Symptomatik einer Neuropathie (Durchschnittsalter 70 Jahre, Altersspanne: 44 - 88 Jahre) und Antikörpern gegen NMDA-Rezeptoren identifiziert werden. Bei 79% der Proben konnten Antikörper der Klasse IgA (33%), IgM (21%) und IgA+lgM (25%) nachgewiesen werden. Klinische Informationen wurden von den behandelnden Ärzten für 15 Patienten erteilt. Anhand des klinischen Syndroms und elektrophysiologischer Befunde ist eine Einteilung dieser Patienten in die folgenden 5 Gruppen möglich:
1. Polyradikulitis/-pathie und/oder distal demyelinisierende Polyneuropathie
2. distal-symmetrische axonale sensomotorische Neuropathie
3. rein motorische Neuropathie axonal oder demyelinisierend
4. Crampus-Faszikulations-Syndrom (ohne neurographische Auffälligkeiten)
5. Sonstiges Syndrom
Mit der zuvor beschriebenen Studie soll die genauere Charakterisierung des klinischen Phänotyps einhergehend mit IgA und/oder IgM-Antikörpern gegen NMDA- (NRI)-Rezeptor im Serum von Patienten mit neuromuskulären Erkrankungen erfolgen. Desweiteren soll die Prävalenz abgeschätzt und mit Kontrollgruppen verglichen werden.
Analysiert werden die epidemiologischen und klinischen Charakteristika der
Patienten, Unterschiede der Antikörper-Titer und-Isotypen zwischen den Gruppen.
Anhand der Versuche soll insbesondere geklärt werden, wieviele Anti-NMDAR- Antikörper positive Nebenbefunde sich unter den Anfragen zum Nachweis von MAG- und/oder Gangliosid-Antikörpern ermitteln lassen, ob sich die Hypothese der
Einteilung nach Symptomatik aufrecht erhalten lässt, ob eine Korrelation von Antikörpertiter und Schwere der Erkrankung zu erkennen ist und ob eine Korrelation von Anttkörperklasse und Symptomatik nachgewiesen werden kann.

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe gekennzeichnet durch die Verfahrensschritte
a) Kontaktieren der biologischen Probe mit einem antigenen Polypeptid, nämlich NMDA-Rezeptor, oder einem Fragment davon, b) Detektieren der Bindung von IgA und/ oder IgM Antikörpern aus der biologischen Probe an das antigene Polypeptid.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , wobei die biologische Probe aus einem Individuum mit Verdacht auf einer Erkrankung des peripheren Nervensystems, insbesondere einer Neuropathie, oder mit Verdacht auf Demenz, oder mit Verdacht auf eine Borderline-Persönlichkeitsstörung und/ oder primären Psychosen (psychatrischen Erkrankungen mit psychotischen Symptomen) stammt.
3. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüchen, wobei das Individuum, aus dem die biologische Probe stammt, Symptome aufweist ausgewählt aus der Gruppe umfassend:
i) Lähmungen, Lähmungen vorübergehender Natur, Schwäche- Anfälle, Taubheitsgefühle, Muskelkrämpfe (Crampi), Faszikulationen, Bewegungsunruhe der Beine, Neuropathische Schmerzen: brennende Schmerzen (Kausalgien), Mißempfindungen (Dysästhesien), Kribbeln (Parästhesien), Allodynie, Hitze/ Kältegefühl an den Extremitäten, Wirbelsäulen Schmerzsyndrom, und/ oder
ii) Wahn, Halluzinationen; und/ oder
iii) Störung der kognitiven Fähigkeiten.
4. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die biologische Probe eine flüssige Probe ist.
5. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei die Probe Serum, Blut, Plasma und/ oder Liquor ist.
6. Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei das antigene Polypeptid, nämlich NMDA-Rezeptor,
i) als antigenes Substrat in Zellen rekombinant exprimiert wird, und/ oder
ii) in Gewebe vorliegt, nämlich Hippocampus und Cerebellum Gewebe, und/ oder
iii) in kultivierten Hippocampus-Neuronen vorliegt.
7. Verfahren nach Anspruch 6, wobei für die rekombinante Expression in Zellen die cDNAs kodierend für den NMDA-Rezeptor, nämlich kodierend für die Untereinheiten NR1/NR1 und NR1/NR2, in einen eukaryotischen Expressions- Vektor insertiert wurden und in HEK293 Zellen exprimiert wurden.
8. Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern in einer biologischen Probe eines Individuums mit Verdacht auf einer Erkrankung des peripheren Nervensystems, insbesondere einer Neuropathie, oder mit Verdacht auf Demenz, oder mit Verdacht auf eine Borderline- Persönlichkeitsstörung und/ oder primären Psychosen (psychiatrischen Erkrankungen mit psychotischen Symptomen), gekennzeichnet durch die Verf a h ren ssch ritte
a) Kontaktieren der biologischen Probe mit einem Antikörper gerichtet gegen IgA und/ oder IgM anti-NMDA-Rezeptor Antikörper, b) Detektieren der Bindung von Antikörpern an das antigene Polypeptid, nämlich den Antikörpern gegen NMDA-Rezeptoren, wobei der Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Antikörper auf eine der vorgenannten Erkrankungen hinweist.
9. Verfahren zur Diagnose einer Neuropathie, gekennzeichnet durch die Verfa h renssch ritte
a) Untersuchung einer biolog. Probe auf das Vorhandensein von Antikörpern gegen ein NR-Heteromer eines NMDA-Rezeptors, b) Nachweis der Bindung der anti-NMDA-Rezeptor Antikörper an ein NR-Heteromer eines NMDA-Rezeptors, wobei der Nachweis dieser anti-NMDA-Rezeptor Antikörper auf eine Neuropathie hinweist.
10. Verfahren nach Anspruch 9, wobei die biologische Probe eine Probe ist, die aus einem Patienten mit Symptomen erhalten wurde, ausgewählt aus der Gruppe umfassend: Lähmungen, Lähmungen vorübergehender Natur, Schwäche-Anfälle, Taubheitsgefühle, Muskelkrämpfe (Crampi), Faszikulationen, Bewegungsunruhe der Beine, Neuropathische Schmerzen: brennende Schmerzen (Kausalgien), Mißempfindungen (Dysästhesien), Kribbeln (Parästhesien), Allodynie, Hitze/ Kältegefühl an den Extremitäten und/ oder Wirbelsäulen Schmerzsyndrom.
11. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 oder 10, wobei es sich bei der biologischen Probe um eine flüssige Probe handelt.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 11 , wobei die biologische Probe Serum, Blut, Plasma und/ oder Liquor ist.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 12, wobei die Antikörper gegen die NR1 -Untereinheit von NMDA-Rezeptoren gerichtet sind.
14. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 13, wobei Antikörper der Klasse IgA und/ oder IgM nachgewiesen werden.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 14, wobei die Neuropathie eine Autoimmun-Neuropathie ist.
16. Testkit zur Untersuchung biologischen Materials auf das Vorhandensein von IgA und/ oder IgM anti-NMDA-Rezeptor Antikörpern, umfassend
a) antigenes Polypeptid, nämlich NMDA-Rezeptor, wobei das Polypeptid rekombinant in mit für NMDA-Rezeptoren codierenden cDNAs transfizierten Zellen exprimiert wird, und/ oder das antigene Polypeptid in Gewebe vorliegt
b) anti-human IgA und/ oder IgM-Antikörper.
17. Testkit nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass es ein Testkit zur Diagnose von Autoimmun Neuropathien, Demenz, der Borderline- Persönlichkeitsstörung und primärer Psychosen ist.
EP11846070.8A 2010-12-06 2011-12-05 Verfahren zum nachweis von anti-nmda-rezeptor autoantikörpern zum einsatz in diagnoseverfahren Withdrawn EP2649448A2 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE201010053432 DE102010053432A1 (de) 2010-12-06 2010-12-06 Verfahren zum Nachweis von anti-NMDA-Rezeptor Autoantikörpern zum Einsatz in Diagnoseverfahren
PCT/DE2011/002078 WO2012076000A2 (de) 2010-12-06 2011-12-05 Verfahren zum nachweis von anti-nmda-rezeptor autoantikörpern zum einsatz in diagnoseverfahren

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP2649448A2 true EP2649448A2 (de) 2013-10-16

Family

ID=45815454

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP11846070.8A Withdrawn EP2649448A2 (de) 2010-12-06 2011-12-05 Verfahren zum nachweis von anti-nmda-rezeptor autoantikörpern zum einsatz in diagnoseverfahren

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP2649448A2 (de)
CN (1) CN103282776A (de)
DE (1) DE102010053432A1 (de)
WO (1) WO2012076000A2 (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3026434A1 (de) 2014-11-25 2016-06-01 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG Neuartiger, diagnostisch relevanter Autoantikörper

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014160431A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Health Diagnostic Laboratory, Inc. Method of determining prior history of ischemic stroke for current risk evaluation and therapy guidance
CN111320684B (zh) * 2018-12-13 2022-10-14 中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心 人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的GluN1/GluN2A四聚体的表达及其应用
EP3999850A1 (de) 2019-07-16 2022-05-25 Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen e.V. (DZNE) Nmda-rezeptor-konstrukte zum nachweisen und isolieren von nmdar-autoantikörpern
CN110606887A (zh) * 2019-08-12 2019-12-24 陕西脉元生物科技有限公司 人体液中抗nmdar自身抗体的检测材料、制备方法及应用
CN114375396B (zh) * 2019-09-13 2026-03-10 欧蒙医学实验诊断股份公司 改进的nmda受体自身抗体检测
CN113755443B (zh) * 2020-06-05 2025-07-15 陈向军 自身免疫性脑炎抗体瞬转与稳转检测方法及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5529898A (en) * 1993-08-19 1996-06-25 Duke University Methods of detecting disorders of the central nervous system by detecting autoantibodies which specifically bind ionotropic glutamate receptors
ATE481096T1 (de) * 2005-04-06 2010-10-15 Adamas Pharmaceuticals Inc Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von zns-erkrankungen
ES2443490T3 (es) * 2006-08-15 2014-02-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Métodos y composiciones para el diagnóstico y tratamiento de la encefalitis autoinmune o la epilepsia

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2012076000A3 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3026434A1 (de) 2014-11-25 2016-06-01 Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG Neuartiger, diagnostisch relevanter Autoantikörper

Also Published As

Publication number Publication date
WO2012076000A2 (de) 2012-06-14
DE102010053432A1 (de) 2012-06-06
CN103282776A (zh) 2013-09-04
WO2012076000A3 (de) 2013-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE60200615T2 (de) Prozess und mittel für die differentialdiagnose der demenz vom alzheimer typ
EP2649448A2 (de) Verfahren zum nachweis von anti-nmda-rezeptor autoantikörpern zum einsatz in diagnoseverfahren
US20140370531A1 (en) Method of diagnosing mild traumatic brain injury
DE202020105116U1 (de) Reagenzien und Verwendungen zur Diagnose einer SARS-CoV-2-Infektion
EP3505935B1 (de) Verfahren zur diagnose einer bornavirus-infektion
DE69133393T2 (de) Verfahren zur diagnose und behandlung von diabetes
DE102018004759A1 (de) Diagnose einer Neuroautoimmunkrankheit
TW202136297A (zh) Tau蛋白病變及失智症相關疾病之判定藥及判定方法
EP3644060A1 (de) Diagnose blasenbildender autoimmunkrankheiten
EP2884278A2 (de) Markersequenzen für rheumatoide Arthritis und deren Verwendung
DE102014226663A1 (de) Brückenassays zum Nachweis von Antikörpern gegen Mitglieder der kardialen Rezeptorfamilie
DE202022104518U1 (de) Autoantikörper und Mittel zum Nachweis eines Autoantikörpers
US10408829B2 (en) Diagnostic reagent kit for detecting chronic brain pathologies of ischemic genesis
DE102007022669A1 (de) Verwendung von CRMP1 als Marker für chronisch psychiatrische Erkrankungen
EP2979094B1 (de) Verfahren zur diagnose von neuromyelitis optica
KR101873971B1 (ko) 뉴레귤린-1 단백질을 이용한 알츠하이머 병 진단용 조성물 및 이를 이용한 알츠하이머 병의 진단방법
DE102008016064A1 (de) Verfahren zur Diagnose und Behandlung von chronisch psychiatrischen Erkrankungen sowie Marker und Targets für solche Verfahren
EP3671212A2 (de) Verfahren zur diagnose von autoimmungastritis
WO2013110121A1 (en) Assay for a biomarker of a central nervous system disorder
US20220276264A1 (en) DARPin REAGENTS THAT DISTINGUISH ALZHEIMER'S DISEASE AND PARKINSON'S DISEASE SAMPLES
DE102017204268A1 (de) Biomarker für endokrine, autoimmun-bezogene Funktionsstörung
DE102007041657A1 (de) Markersequenzen für Multiple Sklerose und deren Verwendung
HK1187099A (en) Method for detecting anti-nmda receptor autoantibodies for use in diagnostic procedures
EP1780287A1 (de) In vitro Verfahren zur Diagnose von neurodegenerativen Erkrankungen
Dambinova et al. Autoantibodies Against Human Brain AMPA/Quisqualate Receptor Capable of Determining Persons with Brain Paroxysmal Activity and Epilepsy

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20130621

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20140516