EP2611854A1 - Dendrimères à terminaison saccharide à visée anti-inflammatoire - Google Patents

Dendrimères à terminaison saccharide à visée anti-inflammatoire

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Publication number
EP2611854A1
EP2611854A1 EP11764827.9A EP11764827A EP2611854A1 EP 2611854 A1 EP2611854 A1 EP 2611854A1 EP 11764827 A EP11764827 A EP 11764827A EP 2611854 A1 EP2611854 A1 EP 2611854A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
group
dendrimer
formula
groups
generation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP11764827.9A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Jacques Prandi
Germain Puzo
Cédric-Olivier TURRIN
Emilyne BLATTES
Alain VERCELLONE
Jérôme NIGOU
Jean-Pierre Majoral
Anne-Marie Caminade
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Toulouse
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite Toulouse III Paul Sabatier
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Universite Toulouse III Paul Sabatier filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP2611854A1 publication Critical patent/EP2611854A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/207—Cyclohexane rings not substituted by nitrogen atoms, e.g. kasugamycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G79/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing atoms other than silicon, sulfur, nitrogen, oxygen, and carbon with or without the latter elements in the main chain of the macromolecule
    • C08G79/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing atoms other than silicon, sulfur, nitrogen, oxygen, and carbon with or without the latter elements in the main chain of the macromolecule a linkage containing phosphorus
    • C08G79/04—Phosphorus linked to oxygen or to oxygen and carbon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G83/00—Macromolecular compounds not provided for in groups C08G2/00 - C08G81/00
    • C08G83/002—Dendritic macromolecules
    • C08G83/003—Dendrimers

Definitions

  • the present application relates to novel saccharide-terminated dendrimers, as well as their method of preparation and their uses.
  • Dendrimers are macromolecules composed of monomers that associate in a tree process around a central multifunctional heart.
  • Dendrimers also called “cascade molecules" are highly branched functional polymers of defined structure. These macromolecules are actually polymers since they are based on the combination of repeating units. However, dendrimers differ fundamentally from conventional polymers in that they have their own properties due to their tree structure. The molecular weight and shape of the dendrimers can be precisely controlled and the functions are located at the termination of the trees, forming a surface, which makes them easily accessible.
  • the dendrimers are constructed step by step, by repeating a sequence of reactions allowing the multiplication of each repeating unit and the terminal functions. Each sequence of reactions forms what is called a "new generation".
  • the tree construction is carried out by the repetition of a sequence of reactions which makes it possible to obtain at the end of each reaction cycle a new generation and an increasing number of identical branches. After a few generations, the dendrimer takes on a highly branched and multifunctional globular form thanks to the numerous terminal functions present at the periphery.
  • Mannosylated lipoarabinomannan is a mycobacterial compound, derived from Mycobacterium tuberculosis, capable, via the DC-SIGN receptor, of modulating the production of pro and anti-inflammatory cytokines by human dendritic cells subjected to lipopolysaccharide stimulation. (LPS).
  • the binding of ManLAM to the DC-SIGN receptor leads to a decrease in the production of pro-inflammatory cytokines and an increase in the production of IL-10, an anti-inflammatory cytokine.
  • ManLAM is an amphiphilic macromolecule of approximately 18 kDa, the molecular structure of which comprises on the one hand lipophilic domains and on the other hand hydrophilic substituted with small oligomannosides (mono-, di- or trimannosides) linked to a- (1 ⁇ 2), called caps. These caps are crucial for observed biological activities of ManLAM and their hydrolysis by exo-mannosidase annihilates any biological activity of ManLAM.
  • the amphiphilic structure of ManLAM leads to its organization in aqueous solution in the form of supramolecular aggregates (particulate ManLAM) which have the shape of a sphere of about 30 nm in diameter.
  • the lipophilic domains are sequestered within the particle which has on the surface the hydrophilic oligomannoside caps.
  • CMC critical micellar concentration
  • the dendrimers Due to their structure, the dendrimers have a high density of terminations and therefore a high functional density at their periphery. It has therefore been envisaged to mimic the supramolecular structure of ManLAM by a dendrimer carrying on the surface the functions responsible for its biological activity, oligomannosides.
  • mannosylated dendrimers have already been described in a review (Roy et al., Curr Top Med Chem 2008, 1237-1288) and in articles (Roy et al., J. Org Chem 2008, 73, 9292 Wang et al., Proc Natl Acad Sci (USA) 2008, vol 105, No. 10, 3690-3695, Rojo et al., Fed Eur Eurom Biochem Soc Lett 2006, 580, 2402 -2048), but none of these mannosylated dendrimers is anti-inflammatory.
  • PAMAM polyamidoamine
  • the present invention thus relates to dendrimers with saccharide terminations at the end of the final tree.
  • the present invention also relates to the process for preparing such dendrimers.
  • the present invention also relates to the medicaments comprising the dendrimers according to the invention.
  • the present invention also relates to the use of the dendrimers according to the invention for the treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to g generation dendrimers comprising:
  • each identical or different ⁇ group independently represents a monosaccharide, oligosaccharide or polysaccharide group consisting of saccharide unit (s), and wherein:
  • g is an integer between 0 and 10
  • v is an integer between 1 and 10
  • - Y represents an alkyl group o CRC-2, optionally substituted by a group selected from the group consisting of: halogen, OH, O-alkyl, CF 3, aryl, CN; preferably, Y represents a linear alkyl group
  • A represents a bond or a grouping:
  • Ar represents an aromatic ring optionally substituted with a group chosen from the group consisting of: halogen, OH, O-alkyl, CF 3 , aryl, CN, preferably a divalent group -C 6 H 4 -;
  • R 1 represents a hydrogen atom or a C 1 -C 6 alkyl group, preferably a hydrogen atom
  • X represents a C 1 -C 6 alkyl group optionally substituted with a group selected from the group consisting of: halogen, OH, O-alkyl, CF 3 , aryl, CN; preferably, X represents a linear alkyl group
  • A represents a group -O-Ar-X-NPt ! in which Ar represents a divalent group -C 6 H 4 -, X represents a divalent group -CH 2 CH 2 - and R 1 represents H.
  • the term "monosaccharide, oligosaccharide or polysaccharide group” means a functional group selected from the group consisting of monosaccharide, oligosaccharide and polysaccharide.
  • oligosaccharide is meant a group consisting of 1 to 10 saccharide units.
  • polysaccharide is meant a group consisting of more than 10 saccharide units. The bonds between the saccharide units are of the glycosidic type and the linkages between the saccharide units are generally of linear or connected type.
  • saccharide unit is understood to mean a monomer chosen from the group of monosaccharides, of empirical formula C x (H 2 0) x .
  • Monosaccharides are divided into trioses, tetroses, pentoses, hexoses and heptoses according to their number x of carbon atoms, as well as their derivatives.
  • Mannose and glucose are examples of particularly advantageous monomers. Oligomannosides, polymannosides, oligoglucosides and polyglucosides are particularly interesting examples of groups.
  • glycosidic bond means a covalent chemical bond between a saccharide unit and another group, typically another saccharide unit.
  • the glycosidic linkages are formed between the alcohol moiety of the hemiacetalic carbon (or anomeric carbon) of a saccharide unit and the alcohol function of another organic compound, typically another saccharide unit.
  • the glycosidic linkages between saccharide units are of type a or ⁇ , depending on the configuration of the saccharide units, and are numbered according to the carbon atoms on either side of the oxygen atom linking the saccharide units. Examples of saccharide groups will be given in the description to illustrate these definitions.
  • saccharide-terminated dendrimer means a dendrimer bearing, as end groups, monosaccharide, oligosaccharide or polysaccharide groups.
  • the alkyl radicals represent saturated hydrocarbon radicals, in straight or branched chain, of 1 to 20 carbon atoms, preferably of 1 to 6 carbon atoms.
  • alkyl radicals When they are branched or substituted by one or more alkyl radicals, mention may be made especially of the isopropyl, tert-butyl, 2-ethylhexyl, 2-methylbutyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl and 3-methylheptyl radicals.
  • halogen atoms mention is made more particularly of fluorine, chlorine, bromine and iodine atoms, preferably fluorine.
  • Aryl denotes a hydrocarbon aromatic system, mono or bicyclic of 6 to 10 carbon atoms.
  • aryl radicals there may be mentioned the phenyl or naphthyl radical, more particularly substituted by at least one halogen atom.
  • alkylearyl radicals mention may be made of the benzyl or phenethyl radical.
  • the useful compounds of this invention contain asymmetric centers. These asymmetric centers may be independently in the R or S configuration. It will be apparent to those skilled in the art that certain compounds which are useful according to the invention may also exhibit geometrical isomerism. It should be understood that the present invention includes individual geometric isomers and stereoisomers and mixtures thereof, including racemic mixtures, of compounds described above. These isomers can be separated from their mixtures by the application or adaptation of known methods, for example chromatography techniques or recrystallization techniques, or they are prepared separately from the appropriate isomers of their intermediates.
  • the different generation layers are obtained in successive generations by various divergent (if starting from the heart) or convergent (if starting from one or more generation branches) processes at one or more stages.
  • the dendrimers obtained at each generation that is to say having a determined number of layers, can be isolated.
  • the different generation layers can be, like the heart, organic, inorganic, or consist of organic and inorganic elements.
  • a series of generation branches is attached to the core and forms a first generation layer (generation 1) with the same external functions at the periphery and, by repetition of the sequence of reactions used to construct the first generation, a second generation layer is fixed (generation 2) then a third, a fourth, etc.
  • the last generation layer (generation g) consists of generation chains g. It comprises a plurality of identical chemical functions distributed at the periphery, each function constituting or extending the free end of one of said generation branches of the last layer. At the end of these generation chains g are then grafted intermediate chains.
  • the number of these functions is an integer multiple, multiplying coefficient at least equal to 2, the number of generation branches of said last generation layer.
  • the shape of the molecule generally has a spherical shape from generations 4 or 5.
  • a dendrimer has a set of chemical functions and locations of the same chemical environment allowing the grafting of one or more functional group (s) distributed around the periphery of the dendrimer.
  • the dendrimers of the invention comprise intermediate chains terminated by a terminal group:
  • the dendrimers of the invention thus comprise, in general, v arms linked to the central core ⁇ , each of these arms being:
  • the dendrimers comprise only arms of type (a) linked to the central core ⁇ .
  • the dendrimers comprise only type arms (b) linked to the central core ⁇ .
  • the dendrimers according to the invention correspond to the commercial dendrimers to which the intermediate chains and the terminal groups have been grafted.
  • said commercial dendrimers are in particular chosen from DAB-AM, PAMAM (Starbust ® in particular), PPI, polylysines and polytriazines (also called polymelamines) dendrimers, preferably having terminal functions -NH 2 , dendrimers of PMMH type (phenoxymethyl (methylhrydazono)), such as for example cyclotriphosphazene-PMMH, thiophosphoryl-PMMH or hosphorus dendrimers such as:
  • dendrimers are commercially available, some of which are available from Aldrich.
  • the present invention relates in particular to dendrimers such that the intermediate chain is represented by the formula (CI '):
  • the generation chains are represented by the formula (CG):
  • Ar ' is defined as Ar
  • Z is defined as X
  • Ar ' is phenylene
  • Z is CH and R 2 is methyl.
  • the generation chains are represented by the formula (CG '):
  • the central core ⁇ is selected from the following groups:
  • the central core ⁇ is of formula:
  • v is an integer of 1 to 8, preferably 3, 6 or 8.
  • g is between 0 and 10, more preferably between 0 and 4.
  • the number g represents the number of generations of the dendrimer. It is generally advantageous to adapt the number of generations according to the functionalization density and the size of the desired dendrimer.
  • ⁇ is between 1 and 3.
  • the end groups ⁇ are thus independently constituted by at most three saccharide units, which are identical or different.
  • the end groups are for example monosaccharides chosen from trioses, tetroses, pentoses, hexoses or heptoses, or else di- or trisaccharides, formed by different types of linking between the saccharide units. They are typically di- or trisaccharides linked in ⁇ - (1 ⁇ 6), a- (1 ⁇ 3) or connected in ⁇ - (1 ⁇ 6), a- (1 ⁇ 3).
  • the saccharide units constituting the terminal groups ⁇ are chosen from the group of hexoses.
  • hexose means a monosaccharide having 6 carbon atoms. They all have a carbonyl group: either an aldehyde function in position 1 (we speak of aldohexoses), or a ketone function in position 2 (mainly), 3, 4 or 5 (we speak of ketohexoses).
  • ketohexose fructtose, psicose, sorbose, tagatose
  • aldohexose allose, altrose, galactose, glucose, gulose, idose, mannose, talose
  • deoxyose fuculose, pneumosis, quinovose
  • the saccharide units constituting the tribes end groups are more particularly chosen from the group of aldohexoses, namely allose, altrose, galactose, glucose, gulose, idose, mannose and talose.
  • the terminal groups ⁇ are independently constituted by the same saccharide unit. According to another particularly advantageous embodiment, the terminal groups ending in the intermediate chains are identical.
  • the terminal groups are identical and consist of mannose, preferably of D-mannose, and are more preferably dimannosides or trimannosides.
  • Terminal groups ⁇ are typically di
  • the terminal groups are identical and consist of glucose, preferably of D-glucose, and are more preferably diglucosides or triglucosides.
  • mycobacterial glucan derivatives composed of a sequence ⁇ - (1 ⁇ 4) of ⁇ -D-glucopyranoside units which may be substituted on the 6-position by another ⁇ -D-glucopyranoside unit.
  • the terminal groups are typically ⁇ - (1 ⁇ 6) or ⁇ - (1 ⁇ 4) -linked di- or triglucosides, or connected to ⁇ - (1 ⁇ 4), ⁇ - (1 ⁇ 6), such as as shown for illustration in the following diagram:
  • the dendrimers according to the invention may be represented by formula (1):
  • ⁇ , ⁇ , g, n, v and ⁇ are as defined above and ⁇ 9 denotes the tree structure of the generation chains of said dendrimer.
  • the radical -OC 6 H 4 -CH 2 -CH 2 -NH- is derived from tyramine.
  • the dendrimers according to the invention have a diameter of between 1 and 100 nm, preferably less than 50 nm, and more preferably between less than 30 nm.
  • the present invention also relates to the process for preparing the dendrimers mentioned above.
  • a first embodiment of the process for preparing a dendrimer according to the invention comprises the reaction of the generation dendrimer comprising:
  • N 3 - (C O) -Y-CH 2 -O- ⁇ (3)
  • g, ⁇ , v, R 1; Y and ⁇ are as defined above and where the groups -NHFÎ ! are optionally in the form of ammonium ions -NH 2 Ri + , in equilibrium with the conjugate base of a weak or strong acid.
  • an advantageous embodiment of the process for preparing a dendrimer according to the invention comprises the reaction of the dendrimer of formula (2):
  • N 3 - (C O) -Y-CH 2 -O- ⁇ (3)
  • ⁇ , Ar, Ar ', X, Y, Z, R 1, R 2 , ⁇ , g, v, ⁇ and ⁇ 9 are as defined above and where the -NHRi groups are optionally in the form of ammonium ions -NH 2 Ri + , in equilibrium with the conjugate base of a weak or strong acid. More specifically, according to this reaction, the -NHR 1 groups of the dendrimer of formula (2) are acylated by an acyl azide compound of formula (3).
  • the compound of formula (2) can be obtained by coupling between a dendrimer of formula (4):
  • the PG1 protecting groups of the dendrimer of formula (6) are removed in the presence of an acid, such as trifluoroacetic acid, to obtain a dendrimer comprising amino groups -NHR ! as surface functions.
  • the groups -NHR ! of this dendrimer are optionally obtained in the form of ammonium ions -NH 2 R 1 + , in equilibrium with the conjugate base of a strong acid, such as CF 3 COO " .
  • the process for the preparation of a dendrimer of formula (1) according to the invention comprises:
  • n and ⁇ are as defined previously.
  • corresponding dendrimer means the dendrimer of the same generation having the same nuclei, generation chains, intermediate chains and distinct terminal groups.
  • Coupling can be achieved by application or adaptation of the method described in Tet. Lett. 2009, 50, 2078.
  • the deprotection can be carried out by application or adaptation of the method described in Tet. Lett. 2009, 50, 2078.
  • step (i) is carried out using 1.1 molar equivalents of A / -PG1 tyramine and 2.2 molar equivalents of base per chlorine atom to be substituted. This reaction can be carried out at a temperature between -60 ° C and 65 ° C.
  • step (ii) the PG1 protecting groups of the dendrimer obtained according to step (i), via coupling with A / -PG1 tyramine, are removed, typically in an acid medium, to obtain a dendrimer comprising -NH 2 groups as surface functions.
  • step (ii) is carried out in a mixture (3: 1) of dichloromethane and trifluoroacetic acid.
  • the -NH 2 groups of this dendrimer are then optionally obtained in the form of ammonium salts, typically NH 3 + CF 3 COO - .
  • step (iii) the -NH 2 groups of the dendrimer obtained according to step (ii) are acylated with an acyl azide compound of formula (3 ').
  • step (iii) is carried out in an aqueous buffer and generally 3 to 4 molar equivalents of acyl azide compound of formula (3 ') are used per -NH 2 group to be acylated.
  • said method may also include the step of isolating the product obtained from steps (i), (ii) and / or (iii).
  • steps (i), (ii) and / or (iii) may also include the step of isolating the product obtained from steps (i), (ii) and / or (iii).
  • the process according to the invention can be carried out by applying the following reaction scheme:
  • the compounds of formula (3) are therefore also part of the present invention.
  • the present invention also relates to the compounds of formula (3):
  • the compounds of formula (3) have the formula (3 '):
  • n is an integer between 1 and 12.
  • the group ⁇ consists of at most three saccharide units, identical or different ( ⁇ is between 1 and 3).
  • the present invention relates in particular to the following compounds
  • ⁇ trimannoside ⁇ - (1 ⁇ 2) -a- (1 ⁇ 2)
  • the compounds of formula (3) can be obtained from the esters of formula (7) according to the process comprising:
  • R 3 represents a linear alkyl chain CC 6 , preferably a methyl.
  • an ester of formula (7) is treated with an excess of hydrazine hydrate, typically in ethanol, to give the corresponding hydrazide.
  • the hydrazide obtained according to step ( ⁇ ') is treated with sodium nitrite in an acid medium, typically in the presence of an acid solution in dioxane, such as a solution of hydrochloric acid in dioxane, to give an acyl azide of formula (3).
  • the group R 3 represents a methyl.
  • esters of formula (7') can be obtained from esters of formula (7') according to the process comprising:
  • n, ⁇ and R 3 are as defined above.
  • n 1 -12
  • esters of formula (7) can be obtained by application or adaptation of methods known per se and / or within the scope of those skilled in the art, in particular those described by Larock in Comprehensive Organic Transformations, VCH Pub., 1989, or by application or adaptation of the methods described in the examples which follow.
  • esters of formula (7) may in particular be obtained from compounds of formula (8):
  • Sac represents the carbon skeleton corresponding to a saccharide unit chosen from trioses, tetroses, pentoses, hexoses and heptoses,
  • LG represents a leaving group, typically a thioether, located on carbon No. 1 of the carbon skeleton Sac,
  • PG2 and PG3 represent different protecting groups and such that, under the PG2 deprotection conditions, the PG3 group is not deprotected, and conversely,
  • y represents an integer between 0 and 5 and z represents an integer between 1 and 6; y and z are such that all alcohol functions of the compounds of formula (8) are protected by either a PG2 group or a PG3 group.
  • R 3 represents a linear alkyl chain Ci-Ce.
  • the saccharide group is of the monosaccharide type.
  • the saccharide group obtained is of branched type.
  • step (i ') the leaving group LG of the compound of formula (8) is substituted by the oxygen atom of the alcohol function of the compound (9) (glycosylation reaction). is preferably carried out in anhydrous dichloromethane and in the presence of / V-iodosuccinimide (NIS) and a catalytic amount of trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (TMSOTf).
  • NIS V-iodosuccinimide
  • TMSOTf trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate
  • step (ii ') the PG2 group (s) are deprotected and the liberated alcohol function (s) then react with the compound of formula (8) under the same conditions as in step (i). ), forming glycosidic bonds.
  • This step is optionally repeated, and this, as many times as necessary to reach the number ⁇ of saccharide units desired for the group.
  • the PG3 groups are finally deprotected, as well as any PG2 groups, and the compound of formula (7), whose alcohol functions are free, is obtained.
  • the PG 2 group is typically an acetate, which can be removed by a solution of sodium methanolate in methanol.
  • the PG3 group is typically a benzyl ether, which can be removed by hydrogenolysis in the presence of a catalytic amount of palladium on carbon.
  • the saccharide derivatives of formula (8) can be obtained according to methods described in the literature and using the current knowledge of the chemistry of sugars. Thus, they can notably be synthesized by application or adaptation of Peters et al. Liebigs Ann. Chem. 1991, 135-141 which describes the synthesis starting from D-mannose of a mannoside comprising in position 1 a thioethyl group, in position 2 an acetate group and in position 3, 4 and 6 of the benzyl ethers, as represented on the following diagram:
  • Peters et al. also describes the coupling of this thiomannoside and the synthesis of a dimannoside a- (1 ⁇ 2).
  • b NIS, catalytic TMSOTf, CH 2 Cl 2 ; c: MeONa, MeOH, TA; d: H 2 , Pd (OH) 2 / C, MeOH / AcOEt.
  • the compounds thus prepared can be recovered from the reaction mixture by conventional means.
  • the compounds can be recovered by distilling the solvent from the reaction mixture or if necessary after distilling the solvent from the solution mixture, pouring the remainder into water followed by extraction with an organic solvent immiscible in the reaction mixture. water, and distilling the solvent from the extract.
  • the product may, if desired, be further purified by various techniques, such as recrystallization, reprecipitation or various chromatography techniques, including column chromatography or preparative thin layer chromatography.
  • the compounds according to the present invention can be easily prepared, or formed during the process of the invention, in the form of solvates (eg hydrates).
  • the hydrates of the compounds useful according to the present invention can be easily prepared by recrystallizing an aqueous / organic solvent mixture, using organic solvents such as dioxane, tetrahydrofuran or methanol.
  • the commodities or intermediates are commercially available and / or can be prepared by the application or adaptation of known methods, for example processes as described in the Reference Examples.
  • the inventors have discovered that the modified dendrimers according to the invention have particularly advantageous properties, especially anti-inflammatory properties.
  • the present invention also relates to a medicament comprising one of the dendrimers mentioned above and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • compositions according to the invention may be presented in forms intended for parenteral, oral, rectal, permucous or percutaneous administration, by application or adaptation of formulations generally used.
  • injectable solutes or suspensions or multi-dose vials in the form of naked or coated tablets, coated tablets, capsules, capsules, pills, cachets, powders, suppositories or rectal capsules. , solutions or suspensions, for percutaneous use in a polar solvent, for permselective use.
  • Suitable excipients for such administrations are derivatives of cellulose or microcrystalline cellulose, alkaline earth carbonates, magnesium phosphate, starches, modified starches, lactose for solid forms.
  • cocoa butter or polyethylene glycol stearates are the preferred excipients.
  • water, aqueous solutes, physiological saline, isotonic solutes are the most conveniently used vehicles.
  • the dosage may vary within the important limits (0.5 mg to 1000 mg) depending on the therapeutic indication and the route of administration, as well as the age and weight of the subject.
  • the present invention particularly relates to dendrimers as described above for their use for the treatment and / or prevention of inflammatory disorders.
  • the inventors have indeed shown that the dendrimers according to the invention have the capacity to lower the level of inflammatory cytokines (TNF- ⁇ ) secreted by human dendritic cells stimulated by LPS and thus to inhibit stimulation by LPS.
  • the present invention relates more particularly to the use of the dendrimers mentioned above for which said dendrimer has an affinity for the DC-SIGN receptor in its membrane form.
  • the dendrimers according to the invention have a better affinity than the ManLAM for the DC-SIGN in its membrane form.
  • Figure 1 shows EC50 (in nM) for the binding of mannodendrimers to the DC-SIGN receptor expressed in HEK cells.
  • Figure 2 represents the decrease in TNF- ⁇ secreted after co-incubation with LPS and mannodendrimers.
  • Figure 3 shows the restoration of TNF- ⁇ production by AZN-D1, DC-SIGN receptor antagonist antibody with Gc3TriM mannodendrimer.
  • Figure 4A shows the counting of bronchoalveolar lavage cells from mice previously treated by Gc3TriM mannodendrimer feeding and LPS nebulization.
  • Figure 4B shows the neutrophil count of bronchoalveolar lavages of mice previously treated by Gc3TriM mannodendrimer feeding and LPS nebulization.
  • n 1 - 1 2
  • reaction medium is neutralized with a few drops of triethylamine. After filtration on Celite 545, the medium is hydrolysed with a solution of saturated sodium thiosulphate. The aqueous phase is extracted twice with dichloromethane. The organic phase is dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated. Purification by chromatography column on silica gel ethyl acetate / petroleum ether (1: 3) makes it possible to obtain the desired product 3 separated or not from the ⁇ isomer.
  • the compound 3 to be deacetylated is dissolved in anhydrous methanol (at 0.08M) under an inert atmosphere. A small piece of solid sodium is added to form sodium methanolate in situ. The reaction medium is stirred overnight at room temperature. At the end of the reaction, the reaction medium is neutralized with resin proton exchange (pH paper monitoring, pH ⁇ 7), filtered and evaporated. Purification by silica gel chromatography column toluene / ethyl acetate (5: 1) gives the pure compound 4.
  • Compound 4 can then be reacted with a compound of the type of compound 1, to give, by formation of a new glycoside bond, a disaccharide-type compound.
  • the debenzyler compound 4 is dissolved in methanol (0.08M) in the presence of a catalytic amount of palladium hydroxide on activated carbon in a saturated dihydrogen atmosphere.
  • a control CCM makes it possible to check the end of the reaction.
  • the reaction medium is then filtered through Celite 545 and then evaporated. No chromatographic column purification step is necessary.
  • the pure debenzyl compound 5 is obtained.
  • the deprotection can be carried out by application or adaptation of the method described in Tet. Lett. 2009, 50, 2078. Preparation of ammonium-end dendrimers
  • the Gc n TyrBOC dendrimer to be deprotected is taken up in 5 ml of dichloromethane (2 mM) containing 25% trifluoroacetic acid (sigma) and is stirred for 30 minutes at room temperature. The reaction medium is then evaporated to dryness. The compound undergoes at least 3 times this step and until complete deprotection. 3 coevaporations with methanol allow later elimination of trifluoroacetic acid in excess (followed by 9 F NMR). The water-soluble Gc n Tyr dendrimer is then lyophilized and stored at -20 ° C under an inert atmosphere.
  • the ammonium end dendrimer (Gc n Tyr, prepared in step 6) to the concentration of 1 .10 2 M in anhydrous DMF.
  • the pH of the mixture is adjusted by dropwise addition of triethylamine to a basic pH (pH ⁇ 9).
  • the whole is stirred at 4 ⁇ ⁇ for 6 hours.
  • the reaction mixture is treated again by 6x2 "equivalent of a solution of acyl azide mannoside 4 ⁇ C. This step is repeated as many times as necessary to achieve full replacement of the dendrimer.
  • NMR 13 data 1 Hf (75.5 MHz, CD 3 OD, 25 ⁇ C): ⁇ 174.7 (Ci); 102.8 (C-1 '); 98.5 (C-1); 79.3 (C-2); 73.6 (C-5 '); 73.2 (C-5); 71.0 and 70.8 (C-3 and C-3 '); 70.5 (C-2 '); 67.6 (Ca); 67.4 and 67.3 (C-4 and C-4 '); 61.7 and 60.6 (C-6 and C-6 '); 50.7 (C-OMe); 33.4 (Ch); 29.2, 29.0,
  • HEK cells for the DC-SIGN receptor fused to Green Fluorescent Protein (GFP) and DsRed are labeled with succinimidyl carboxyfluorescein di-acetate ester (CFDA, SE) at 10 ⁇ l in 2mL PBS for 5 minutes at 37 ⁇ C. labeling was stopped by addition of 12mL of PBS CaCl 2 0.5% BSA (Buffer A).
  • the cells are taken up to 0.8 ⁇ 10 6 cells / ml in buffer A.
  • the inhibition is carried out by co-incubation of 50 ⁇ l of buffer A or of a solution of mannodendrimer at different concentrations and 50 ⁇ l of cell suspension (40,000 cells) in each well for 1 h at 37 ° C protected from light.
  • the interaction of the DC-SIGN receptor expressed by the cells with the mannan allows the retention of the cells in the wells.
  • Suspended cells bound to the mannodendrimer are gently removed by two washes with buffer A. The adherent cells are then lysed by adding ⁇ ⁇ per well of 25mM Tris buffer, pH 8.4, 0.1% SDS.
  • the calculation of the percentages and the drawing of the inhibition curves making it possible to determine the concentration for which 50% of the effect (EC50) is observed is done using the GraphPad Prism software.
  • PBMC Mononuclear circulating blood cells
  • EFS French Blood Establishment
  • PBMC Mononuclear circulating blood cells
  • EFS French Blood Establishment
  • monocytes are purified by positive column sorting using magnetic beads coupled to an anti-CD14 antibody (MACS System, CD14 Microbeads, human, 130-050-201, Miltenyi Biotec, Auburn, CA, USA). The cells were incubated with the beads for 30 minutes at 4 ⁇ stirring.
  • the suspension beads-cells is deposited on a column placed in front of a magnet (LS, Miltenyi Biotech). After 3 washes, the column is removed from the magnet and the CD14 positive cells are eluted. The purity level obtained at the end of the column is checked by flow cytometry (> 96%).
  • the monocytes are then seeded in a 6-well plate at a concentration of 3.10 6 cells / well (2 mL) in RPMI Ultraglutamine, 10% decomplemented FCS, 5 mM ⁇ -mercaptoethanol (sigma), 5.10 5 U / mL of GM-CSF. and 1 .10 5 U / mL of IL-4 for 5 days of differentiation. Every two days, ⁇ / ⁇ of RPMI medium 10% FCS decomplemented, 50 ⁇ ⁇ -mercaptoethanol are added containing the total dose of cytokines for the volume of each well. b) Activation of dendritic cells
  • Immature dendritic cells 5 th or 6 th day of culture were stimulated 18 hours by 20ng / ml LPS of E. ultra-pure E. coli (K12 fraction, Invivogen) in co-incubation with ⁇ g / ml of ManLAM bovis BCG (0.6 ⁇ ) or 0.3 and 0.6 ⁇ l of mannodendrimers prepared according to the invention or of culture medium (RPMI Ultraglutamine, 10% SVF decomplemented, 50 ⁇ ⁇ -mercaptoethanol) in a final volume of 200 ⁇ , in microplate.
  • E. ultra-pure E. coli K12 fraction, Invivogen
  • ManLAM or mannodendrimers prepared according to the invention on the activation of dendritic cells by LPS via DC-SIGN is confirmed by preincubation (30 min at 37 ° C.) of the immature cells with an anti-DC-antagonist antibody.
  • SIGN previously dialyzed (AZN-D1, 20 ⁇ g / mL, Beckman Coulter).
  • the cell culture medium is harvested after 18 hours and is stored at -20 ° C.
  • the determination of the amount of cytokines (TNF- ⁇ ) produced and secreted by the cells is measured using an ELISA kit (Diaclone), according to the manufacturer's instructions.
  • mice Balb / c genetic background mice were force-fed for 15 days with a dose of mannodendrimer (1 mg / kg / day) and the animals were then subjected to nebulization of bacterial lipopolysaccharide (Pseudomonas aeruginosa LPS, 30 minutes, 1 mg LPS / kg of mouse) so as to trigger pulmonary inflammation. After 24 hours, the mice are subjected to bronchoalveolar lavage and the recovered cells are identified and counted.
  • mannodendrimer 1 mg / kg / day
  • stimulation with LPS induces in the lungs a recruitment of leukocyte cells, mainly macrophages, neutrophils and to a lesser extent eosinophilic cells (see FIGS. 4A and 4B, comparison of saline control NaCl with the LPS).
  • Gc3TriM mannodendrimer preemptively inhibits the recruitment of leukocyte cells into LPS-stimulated lungs (FIG. 4A, LPS / LPS + Gc3TriM), and that this inhibitory effect is also observed on neutrophil recruitment (FIG. 4B, FIG. LPS / LPS + Gc3TriM).
  • Gc3TriM alone induces cellular recruitment into the lungs (FIG. 4A, NaCl / Gc3TriM control), but that the recruited cells are essentially macrophages, the neutrophil count not being significantly different from that of the control (FIG. 4B NaCI / Gc3TriM control).
  • Histological sections of the lungs of the mice after bronchoalveolar lavage were performed, and stained with hematoxylin and eosin. These sections show a thickening of the bronchial epithelium, signature of inflammation in the case of treatment with LPS. This thickening is significantly less in the case of LPS + Gc3TriM treatment which confirms the control of the inflammatory process by the mannodendrimer. Finally, the histological sections in the case of treatment with Gc3TriM alone show no difference with the saline control, the recruitment of leukocyte cells observed does not correspond to an inflammatory process of the epithelium, but to a recruitment of non-activated macrophages .

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Abstract

Dendrimères à terminaison saccharide à visée anti-inflammatoire La présente invention concerne des dendrimères à terminaison monosaccharide, oligosaccharide ou polysaccharide, leur procédé de préparation et leurs utilisations thérapeutiques, notamment anti-inflammatoires.

Description

Dendrimères à terminaison saccharide à visée anti-inflammatoire
La présente demande concerne de nouveaux dendrimères à terminaisons saccharide, ainsi que leur procédé de préparation et leurs utilisations.
Les dendrimères sont des macromolécules constituées de monomères qui s'associent selon un processus arborescent autour d'un cœur central plurifonctionnel.
Les dendrimères, appelés aussi « molécules cascade », sont des polymères fonctionnels hautement ramifiés de structure définie. Ces macromolécules sont effectivement des polymères puisqu'elles sont basées sur l'association d'unités répétitives. Cependant, les dendrimères diffèrent fondamentalement des polymères classiques dans la mesure où ils ont des propriétés propres dues à leur construction en arborescence. Le poids moléculaire et la forme des dendrimères peuvent être précisément contrôlés et les fonctions sont situées à la terminaison des arborescences, formant une surface, ce qui les rend facilement accessibles.
Les dendrimères sont construits étape par étape, par la répétition d'une séquence de réactions permettant la multiplication de chaque unité répétitive et des fonctions terminales. Chaque séquence de réactions forme ce qui est appelé une « nouvelle génération ». La construction arborescente s'effectue par la répétition d'une séquence de réactions qui permet l'obtention à la fin de chaque cycle réactionnel d'une nouvelle génération et d'un nombre croissant de branches identiques. Après quelques générations, le dendrimère prend une forme globulaire hautement ramifiée et plurifonctionnalisée grâce aux nombreuses fonctions terminales présentes en périphérie.
De tels polymères ont notamment été décrits par Launay et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1994, 33, 15/16, 1590-1592, ou encore Launay et al., Journal of Organometallic Chemistry, 1997, 529, 51 -58.
Le lipoarabinomannane mannosylé (ou ManLAM) est un composé mycobactérien, issu de Mycobacterium tuberculosis, capable, via le récepteur DC-SIGN, de moduler la production de cytokines pro- et anti-inflammatoires par des cellules dendritiques humaines soumises à une stimulation par le lipopolysaccharide (LPS). La liaison du ManLAM sur le récepteur DC-SIGN conduit à la diminution de la production des cytokines pro-inflammatoires et à l'augmentation de la production d'IL-10, une cytokine antiinflammatoire.
Le ManLAM est une macromolécule amphiphile d'environ 18 kDa dont la structure moléculaire comprend d'une part des domaines lipophiles, et d'autre part des extrémités hydrophiles substituées par des petits oligomannosides (mono-, di- ou trimannosides) liés en a-(1→2), appelées coiffes. Ces coiffes sont cruciales pour les activités biologiques observées des ManLAM et leur hydrolyse par une exo-mannosidase annihile toute activité biologique du ManLAM.
La structure amphiphile du ManLAM conduit à son organisation en solution aqueuse sous forme d'agrégats supramoléculaires (ManLAM particulaire) qui ont la forme d'une sphère d'environ 30 nm de diamètre. Les domaines lipophiles sont séquestrés à l'intérieur de la particule qui présente en surface les coiffes oligomannosidiques hydrophiles. Après détermination de la concentration micellaire critique (CMC) du ManLAM en solution, il a été observé que ce ne sont que pour des valeurs de la concentration en ManLAM supérieures à la CMC que les propriétés immunomodulatrices du ManLAM étaient observées, confirmant que la structure biologiquement active du ManLAM est le ManLAM particulaire. Du fait de leur structure, les dendrimères présentent une forte densité de terminaisons et donc une forte densité fonctionnelle à leur périphérie. Il a donc été envisagé de mimer la structure supramoléculaire du ManLAM par un dendrimère portant en surface les fonctions responsables de son activité biologique, les oligomannosides.
Des dendrimères mannosylés ont notamment déjà été décrits dans une revue (Roy et al. Curr. Top. Med. Chem. 2008, 1237-1288) et dans des articles (Roy et al. J. Org. Chem. 2008, 73, 9292-9302 ; Wang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 2008, vol 105, n °10, 3690-3695 ; Rojo et al. Fed. Eur. Biochem. Soc. Lett. 2006, 580, 2402-2048), mais aucun de ces dendrimères mannosylés n'est à visée anti-inflammatoire.
Des dendrimères possédant des propriétés anti-inflammatoires ont également été décrits :
- des composés de type polyamidoamine (PAMAM) substitués en surface par de la glucosamine (Shaunak et al. Nat. Biotechnol. 2004, 22, 977-984), ou non fonctionnalisés (Chauhan et al. Biomacromolecules 2009, 10, 1 195-1202),
- un dendrimère phosphoré de deuxième génération dont la surface porte des fonctions acide phosphonique (Fruchon et al. J. Leukoc. Biol. 2009, 85, 553-562).
Toutefois, aucun dendrimère à terminaisons mannoside et présentant un caractère anti-inflammatoire n'est décrit. Les inventeurs ont désormais mis au point un procédé permettant d'accéder à ce type de fonctionnalisation terminale saccharide sur les dendrimères, dans le but de mimer la structure particulaire biologiquement active du ManLAM. Ces dendrimères sont d'excellents ligands du récepteur DC-SIGN et montrent des propriétés immunomodulatrices in vitro, ce qui en fait de très bons candidats pour de nouveaux composés anti-inflammatoires.
Selon un premier objet, la présente invention concerne donc des dendrimères à terminaisons saccharide à la terminaison de l'arborescence finale.
Selon un second objet, la présente invention concerne également le procédé de préparation de tels dendrimères.
Selon un autre objet, la présente invention concerne également les médicaments comprenant les dendrimères selon l'invention.
Selon un autre objet, la présente invention concerne également l'utilisation des dendrimères selon l'invention pour le traitement de maladies inflammatoires.
La présente invention concerne des dendrimères de génération g comprenant :
- un noyau central Φ de valence v ;
- des chaînes de génération en arborescence autour du noyau ;
- une chaîne intermédiaire à l'extrémité de chaque chaîne de génération g ou à l'extrémité de chaque liaison autour du noyau lorsque g = 0; et
- un groupe terminal∑ à l'extrémité de chaque chaîne intermédiaire, caractérisés en ce que chaque groupe ∑, identique ou différent, représente indépendamment un groupe monosaccharide, oligosaccharide ou polysaccharide constitué de σ unité(s) saccharide, et où:
- g est un entier compris entre 0 et 10,
- v est un entier compris entre 1 et 10,
- σ est un entier compris entre 1 et 10,
- ladite chaîne intermédiaire est représentée par la formule (Cl) :
-A-(C=0)-Y-CH2-0- (Cl)
dans laquelle :
- Y représente un groupe alkyle en CrC-2o, éventuellement substitué par un groupement choisi parmi le groupe consistant en : halogène, OH, O-alkyle, CF3, aryle, CN ; de préférence, Y représente un groupe alkyle linéaire en
- A représente une liaison ou bien un groupement :
dans lequel : - Ar représente un cycle aromatique éventuellement substitué par un groupement choisi parmi le groupe consistant en : halogène, OH, O-alkyle, CF3, aryle, CN, de préférence un groupe divalent -C6H4- ;
- Ri représente un atome d'hydrogène ou groupe alkyle en Ci-Ce, de préférence un atome d'hydrogène, et
- X représente un groupe alkyle en CrC6, éventuellement substitué par un groupement choisi parmi le groupe consistant en : halogène, OH, O-alkyle, CF3, aryle, CN ; de préférence, X représente un groupe alkyle linéaire en
De préférence, A représente un groupement -O-Ar-X-NPt!-, dans lequel Ar représente un groupe divalent -C6H4-, X représente un groupe divalent -CH2CH2- et Ri représente H.
Dans le cadre de la présente description, on entend par « groupe monosaccharide, oligosaccharide ou polysaccharide » un groupe fonctionnel choisi parmi le groupe consistant en monosaccharide, oligosaccharide et polysaccharide. Par « oligosaccharide », on entend un groupe constitué de 1 à 10 unités saccharide. Par « polysaccharide », on entend un groupe constitué de plus de 10 unités saccharide. Les liaisons entre les unités saccharide sont de type glycosidique et les enchaînements entre les unités saccharide sont généralement de type linéaire ou branché.
Dans le cadre de la présente description, on entend par « unité saccharide » un monomère choisi parmi le groupe des monosaccharides, de formule brute Cx(H20)x. Les monosaccharides sont divisés en trioses, tétroses, pentoses, hexoses et heptoses selon leur nombre x d'atomes de carbone, ainsi que leurs dérivés.
Le mannose et le glucose sont des exemples de monomères particulièrement avantageux. Les oligomannosides, les polymannosides, les oligoglucosides et les polyglucosides sont des exemples de groupe∑ particulièrement intéressants.
Dans le cadre de la présente description, on entend par « liaison glycosidique » une liaison chimique covalente entre une unité saccharide et un autre groupe, typiquement une autre unité saccharide. Les liaisons glycosidiques sont formées entre la fonction alcool du carbone hémiacétalique (ou carbone anomère) d'une unité saccharide et la fonction alcool d'un autre composé organique, typiquement une autre unité saccharide. Les liaisons glycosidiques entre unités saccharide sont de type a ou β, selon la configuration des unités saccharide, et sont numérotées suivant les atomes de carbone de part et d'autre de l'atome d'oxygène reliant les unités saccharide. Des exemples de groupes saccharide seront donnés dans la description pour illustrer ces définitions.
Dans le cadre de la présente description, on entend par « dendrimère à terminaisons saccharide », un dendrimère portant comme groupes terminaux des groupes monosaccharide, oligosaccharide ou polysaccharide.
Selon la présente invention, les radicaux alkyle représentent des radicaux hydrocarbonés saturés, en chaîne droite ou ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbone, de préférence de 1 à 6 atomes de carbone.
On peut notamment citer, lorsqu'ils sont linéaires, les radicaux méthyle, éthyle, propyle, butyle, pentyle, hexyle, octyle, nonyle, décyle, dodécyle, hexadécyle, et octadécyle.
On peut notamment citer, lorsqu'ils sont ramifiés ou substitués par un ou plusieurs radicaux alkyles, les radicaux isopropyle, tert-butyl, 2-éthylhexyle, 2-méthylbutyle, 2- méthylpentyle, 1 -méthylpentyle et 3-méthylheptyle.
Parmi les atomes d'halogène, on cite plus particulièrement les atomes de fluor, de chlore, de brome et d'iode, de préférence le fluor.
Aryle désigne un système aromatique hydrocarboné, mono ou bicyclique de 6 à 10 atomes de carbone.
Parmi les radicaux aryle, on peut notamment citer le radical phényle ou naphtyle, plus particulièrement substitué par au moins un atome d'halogène.
Parmi les radicaux alkylearyle, on peut notamment citer le radical benzyle ou phénéthyle.
Il sera apprécié que les composés utiles selon la présente invention contiennent des centres asymétriques. Ces centres asymétriques peuvent être indépendamment en configuration R ou S. Il apparaîtra à l'homme du métier que certains composés utiles selon l'invention peuvent également présenter une isomérie géométrique. On doit comprendre que la présente invention comprend des isomères géométriques individuels et des stéréoisomères et des mélanges de ceux-ci, incluant des mélanges racémiques, de composés décrits ci-dessus. Ces isomères peuvent être séparés de leurs mélanges, par l'application ou l'adaptation de procédés connus, par exemple des techniques de chromatographie ou des techniques de recristallisation, ou ils sont préparés séparément à partir des isomères appropriés de leurs intermédiaires.
Aux fins de ce texte, il est entendu que les formes tautomériques sont comprises dans la citation d'un groupe donné, par exemple thio/mercapto ou oxo/hydroxy. Dans le cadre de la présente description, on entend par « en arborescence » la structure divergente particulière des chaînes de générations en couches de génération autour du noyau central Φ de valence v.
Les différentes couches de génération sont obtenues en générations successives par des procédés divers de type divergent (si l'on part du cœur) ou convergent (si l'on part d'une ou plusieurs branches de génération) à une ou plusieurs étapes. Les dendrimères obtenus à chaque génération, c'est-à-dire ayant un nombre déterminé de couches, peuvent être isolés. Les différentes couches de génération (internes ou externes) peuvent être, comme le cœur, organiques, inorganiques, ou être constituées d'éléments organiques et inorganiques.
La construction de ces dendrimères peut être contrôlée de façon rigoureuse. Par exemple, pour construire un dendrimère, une série de branches de génération est fixée au cœur et forme une première couche de génération (génération 1 ) comportant en périphérie les mêmes fonctions externes et, par répétition de la séquence de réactions utilisées pour construire la première génération, une deuxième couche de génération est fixée (génération 2) puis une troisième, une quatrième, etc..
La dernière couche de génération (génération g) est constituée de chaînes de génération g. Elle comprend une pluralité de fonctions chimiques identiques réparties en périphérie, chaque fonction constituant ou prolongeant l'extrémité libre d'une desdites branches de génération de la dernière couche. A l'extrémité de ces chaînes de génération g sont ensuite greffées des chaînes intermédiaires.
Le nombre de ces fonctions est un multiple entier, de coefficient multiplicateur au moins égal à 2, du nombre de branches de génération de ladite dernière couche de génération.
Le plus souvent les branches de génération de toutes les couches internes du dendrimère sont identiques et constituent donc des unités répétitives.
La forme de la molécule présente généralement une forme sphérique à partir des générations 4 ou 5. Un dendrimère présente un ensemble de fonctions chimiques et d'emplacements de même environnement chimique permettant le greffage d'un ou plusieurs groupe(s) fonctionnel(s) réparti(s) à la périphérie du dendrimère.
Le plus souvent, les dendrimères de l'invention comportent des chaînes intermédiaires terminées par un groupe terminal :
- à l'extrémité de chaque chaîne de génération, lorsque g est supérieur ou égal à 1 ; ou
- à l'extrémité de chaque liaison autour du noyau non reliée à une chaîne de génération, lorsque g est égal à 0. Les dendrimères de l'invention comprennent ainsi, en général, v bras liés au noyau central Φ, chacun de ces bras étant :
- un bras de type (a), à savoir un bras constitué par une ou plusieurs chaînes de génération en arborescence comportant à chacune de ses extrémités une chaîne intermédiaire terminée par un groupe terminal∑, lorsque g est supérieur ou égal à 1 ; ou
- un bras de type (b), à savoir un bras constitué par une chaîne intermédiaire terminée par un groupe terminal∑, lorsque g est égal à 0.
Selon un mode de réalisation particulier, les dendrimères comportent uniquement des bras de type (a) liés au noyau central Φ.
Selon un mode de réalisation particulier, les dendrimères comportent uniquement des bras de type (b) liés au noyau central Φ.
De préférence, les dendrimères selon l'invention correspondent aux dendrimères commerciaux auxquels ont été greffés les chaînes intermédiaires et les groupes terminaux∑.
Selon l'invention, lesdits dendrimères commerciaux sont notamment choisis parmi les dendrimères de type DAB-AM, PAMAM (Starbust® notamment), PPI, polylysines et polytriazines (aussi appelées polymélamines), présentant préférentiellement des fonctions terminales -NH2, les dendrimères de type PMMH (phénoxyméthyl(méthylhrydazono)), comme par exemple le cyclotriphosphazène-PMMH, le thiophosphoryl-PMMH ou les dendrimères hosphorés tels que :
ainsi que les générations ultérieures.
Tous ces dendrimères sont commercialisés, certains d'entre eux étant disponibles chez Aldrich. La présente invention concerne en particulier des dendrimères tels que la chaîne intermédiaire est représentée par la formule (CI') :
-0-C6H4-CH2-CH2-NH-(C=0)-(CH2)n-CH2-0- (Cl') où n est un entier compris entre 1 et 12, et -C6H4- représente un groupe phénylène divalent.
De préférence, les chaînes de génération sont représentées par la formule (CG) :
-0-Ar'-Z=N-NR2-(P=S)< (CG)
où :
- Ar' est défini comme Ar,
- Z est défini comme X,
- R2 est défini comme Ri , et
- < représente deux liaisons situées sur l'atome de phosphore.
De préférence, Ar' représente un groupe phénylène, Z représente CH et R2 représente un méthyle.
De préférence, les chaînes de génération sont représentées par la formule (CG') :
-0-C6H4-(CH)=N-N(CH3)-(P=S)< (CG')
De préférence, le noyau central Φ est choisi armi les groupes suivants :
De préférence, le noyau central Φ est de formule :
\ /
N'P*N
\ " '
P ' P—
De préférence, v est un entier compris entre 1 et 8, de préférence 3, 6 ou 8.
De préférence, g est compris entre 0 et 10, plus préférentiellement compris entre 0 et 4. Le nombre g représente le nombre de générations du dendrimère. Il est généralement avantageux d'adapter le nombre de générations en fonction de la densité de fonctionnalisation et de la taille du dendrimère souhaité. De préférence, σ est compris entre 1 et 3.
Les groupes terminaux ∑ sont ainsi indépendamment constitués d'au plus trois unités saccharide, identiques ou différentes.
Les groupes terminaux∑ sont par exemple des monosaccharides choisis parmi les trioses, les tétroses, les pentoses, les hexoses ou les heptoses, ou encore des di- ou trisaccharides, formés par différents types d'enchaînement entre les unités saccharide. Ce sont typiquement des di- ou trisaccharides liés en α-(1→6), a-(1→3) ou branchés en α-(1→6), a-(1→3).
De préférence, les unités saccharide constituant les groupes terminaux ∑ sont choisies parmi le groupe des hexoses.
Dans le cadre de la présente description, on entend par « hexose » un monosaccharide comportant 6 atomes de carbone. Ils possèdent tous un groupement carbonyle : soit une fonction aldéhyde en position 1 (on parle des aldohexoses), soit une fonction cétone en position 2 (principalement), 3, 4 ou 5 (on parle des cétohexoses). Parmi les hexose, on peut notamment citer les cétohexose (fructose, psicose, sorbose, tagatose), les aldohexose (allose, altrose, galactose, glucose, gulose, idose, mannose, talose) et les désoxyose (fucose, fuculose, pneumose, quinovose, le rhamnose).
Les unités saccharide constituant les groupes terminaux ∑ sont plus particulièrement choisies parmi le groupe des aldohexoses, à savoir allose, altrose, galactose, glucose, gulose, idose, mannose et talose.
Selon un mode de réalisation avantageux, les groupes terminaux ∑ sont indépendamment constitués de la même unité saccharide. Selon un autre mode de réalisation particulièrement avantageux, les groupes terminaux∑ en terminaison des chaînes intermédiaires sont identiques.
Selon un premier aspect de ce mode de réalisation, les groupes terminaux∑ sont identiques et constitués de mannose, de préférence de D-mannose, et sont plus préférentiellement des dimannosides ou des trimannosides. Les groupes terminaux ∑ sont typiquement des di
α-(1→2), a-(1→3) ou a-(1→6), ou branchés en α-(1→6), a-(1
titre illustratif sur le schéma suivant :
Selon un deuxième aspect de ce mode de réalisation, les groupes terminaux∑ sont identiques et constitués de glucose, de préférence de D-glucose, et sont plus préférentiellement des diglucosides ou des triglucosides.
Parmi les polyglucosides, on peut notamment citer les dérivés de glucane mycobactérien, composé d'un enchaînement a-(1→4) d'unités α-D-glucopyranoside qui peuvent être substituées sur la position 6 par une autre unité a-D-glucopyranoside.
Les groupes terminaux∑ sont typiquement des di- ou triglucosides liés en a-(1→6) ou en a-(1→4), ou branchés en α-(1→4), a-(1→6), tels que représentés à titre illustratif sur le schéma suivant :
a-(1→6) a-(1→4)
α-(1→6)-α-(1→6) α-(1→4), α-(1→6)
De préférence, les dendrimères selon l'invention peuvent être représentés par la formule (1 ) :
-{{0-C6H4-(CH)=N-N(CH3)-(P=S)<}9[0-C6H4-CH2-CH2-NH-(C=0)-(CH2)n-CH2-0-∑]2}v (1 ) dans laquelle :
Φ,∑, g, n, v et < sont tels que définis précédemment et { }9 désigne la structure en arborescence des chaînes de génération dudit dendrimère. Le radical -O-C6H4-CH2-CH2-NH- est issu de la tyramine.
De préférence, les dendrimères selon l'invention présentent un diamètre compris entre 1 et 100 nm, de préférence inférieur à 50 nm, et plus préférentiellement entre inférieur à 30 nm.
Selon un autre objet, la présente invention concerne également le procédé de préparation des dendrimères cités ci-dessus.
Dans les réactions décrites ci-après, il peut être nécessaire de protéger les groupes fonctionnels réactifs, par exemple les groupes hydroxy, amino, imino, thio, carboxy, lorsqu'ils sont souhaités dans le produit final, pour éviter leur participation indésirable dans les réactions. Les groupes de protection traditionnels peuvent être utilisés conformément à la pratique standard, pour des exemples voir T.W. Green et P. G. M. Wuts dans Protective Groups in Organic Chemistry , John Wiley and Sons, 1991 ; J.F.W. McOmie in Protective Groups in Organic Chemistry, Plénum Press, 1973. Selon l'invention, un premier mode de réalisation du procédé de préparation d'un dendrimère selon l'invention comprend la réaction du dendrimère de génération g comprenant :
- un noyau central Φ de valence v ;
- des chaînes de génération en arborescence autour du noyau ;
- des terminaisons -NHRi ;
avec un composé acyl-azide de formule (3) :
N3-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (3) où: g, Φ, v, R1 ; Y et∑ sont tels que définis précédemment et où les groupes -NHFÎ! sont éventuellement sous forme d'ions ammoniums -NH2Ri+, en équilibre avec la base conjuguée d'un acide faible ou fort.
Selon l'invention, un mode de réalisation avantageux du procédé de préparation d'un dendrimère selon l'invention comprend la réaction du dendrimère de formule (2) :
0-{{O-Ar'-Z=N-NR2-(P=S)<}9[O-Ar-X-NHR1]2}v (2) avec un composé acyl-azide de formule (3) :
N3-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (3) où: Φ, Ar, Ar', X, Y, Z, Ri , R2,∑, g, v, < et { }9 sont tels que définis précédemment et où les groupes -NHRi sont éventuellement sous forme d'ions ammoniums -NH2Ri+, en équilibre avec la base conjuguée d'un acide faible ou fort. Plus précisément, selon cette réaction, les groupes -NHRi du dendrimère de formule (2) sont acylés par un composé acyl-azide de formule (3).
Selon l'invention, le composé de formule (2) peut être obtenu par couplage entre un dendrimère de formule (4) :
0-{{O-Ar'-Z=N-NR2-(P=S)<CI2}9}v (4) et un composé de formule (5) :
où PG1 représente un groupe protecteur, typiquement un groupement Boc, suivi de la déprotection des groupes protecteurs PG1 du dendrimère de formule (6) ainsi formé : 0-{{O-Ar'-Z=N-NR2-(P=S)<}9[O-Ar-X-NR1-PG1 ]2}v (6)
Plus précisément, selon la réaction de couplage, les atomes de chlore de la fonction (P=S)<CI2 du dendrimère de formule (4) sont substitués par l'atome d'oxygène de la fonction alcool du composé de formule (5).
Plus précisément, selon la réaction de déprotection, les groupes protecteurs PG1 du dendrimère de formule (6) sont enlevés en présence d'un acide, tel que l'acide trifluoroacétique, pour obtenir un dendrimère comportant des groupes amino -NHR! comme fonctions de surface. Les groupes -NHR! de ce dendrimère sont éventuellement obtenus sous forme d'ions ammoniums -NH2Ri+, en équilibre avec la base conjuguée d'un acide fort, telle que CF3COO". Selon un mode de réalisation avantageux, le procédé de préparation d'un dendrimère de formule (1 ) selon l'invention comprend :
(i) la réaction de couplage entre le dendrimère correspondant présentant une fonction terminale -(P=S)<CI2 et la tyramine dont l'atome d'azote est protégé par un groupement protecteur PG1 (A/-PG1 tyramine), typiquement un groupement Boc,
(ii) suivie de la réaction de déprotection des groupes protecteurs PG1 du dendrimère obtenu en (i),
(iii) suivie de la réaction du dendrimère obtenu en (ii) avec un composé acyl-azide de formule (3') :
N3-(C=0)-(CH2)n-CH2-0-∑ (3')
où n et∑ sont tels que définis précédemment.
Selon l'invention, on entend par « dendrimère correspondant » le dendrimère de même génération possédant les mêmes noyaux, chaînes de génération, chaînes intermédiaires et des groupes terminaux distincts.
Les dendrimères correspondants de départ sont disponibles commercialement (AIdrich) ou peuvent être préparés selon des méthodes connues en soi. Ces dendrimères comportent des fonctions de surface -(P=S)<CI2 et sont de préférence choisis parmi :
Le couplage peut être réalisé par application ou adaptation de la méthode décrite dans Tet. Lett. 2009, 50, 2078.
La déprotection peut être réalisée par application ou adaptation de la méthode décrite dans Tet. Lett. 2009, 50, 2078.
Plus précisément, selon l'étape (i), les atomes de chlore des fonctions -(P=S)<CI2 sont substitués par l'atome d'oxygène de la fonction phénol de la tyramine protégée A/-PG1 tyramine, de préférence dans le THF à température ambiante et en présence d'une base inorganique, typiquement un carbonate de métal alcalin, par exemple Cs2C03. Typiquement, l'étape (i) est réalisée en utilisant 1 ,1 équivalent molaire de A/-PG1 tyramine et 2,2 équivalents molaires de base par atome de chlore à substituer. Cette réaction peut être réalisée à une température comprise entre - 60 °C et 65 °C.
Plus précisément, selon l'étape (ii), les groupes protecteurs PG1 du dendrimère obtenu selon l'étape (i), via le couplage avec la A/-PG1 tyramine, sont enlevés, typiquement en milieu acide, pour obtenir un dendrimère comportant des groupes -NH2 comme fonctions de surface. Typiquement, l'étape (ii) est réalisée dans un mélange (3:1 ) de dichlorométhane et d'acide trifluoroacétique. Les groupes -NH2 de ce dendrimère sont alors éventuellement obtenus sous forme de sels ammonium, typiquement NH3 +CF3COO".
Plus précisément, selon l'étape (iii), les groupes -NH2 du dendrimère obtenu selon l'étape (ii) sont acylés par un composé acyl-azide de formule (3'). Typiquement, l'étape (iii) est réalisée dans un tampon aqueux et on utilise généralement 3 à 4 équivalents molaires de composé acyl-azide de formule (3') par groupe -NH2 à acyler.
Eventuellement, ledit procédé peut également comprendre l'étape consistant à isoler le produit obtenu à l'issu des étapes (i), (ii) et/ou (iii). A titre illustratif, le procédé selon l'invention peut être réalisé par application du schéma réactionnel suivant :
Les composés de formule (3) font donc également partie de la présente invention. La présente invention concerne également les composés de formule (3) :
N3-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (3)
dans laquelle∑ et Y sont tels que définis précédemment.
De préférence, les composés de formule (3) répondent à la formule (3') :
N3-(C=0)-(CH2)n-CH2-0-∑ (3')
dans laquelle :
- ∑ est tel que défini précédemment,
n est un entier compris entre 1 et 12.
De préférence, dans les formules (3) et (3'), le groupe∑ est constitué d'au plus trois unités saccharide, identiques ou différentes (σ est compris entre 1 et 3).
La présente invention concerne en particulier les composés suivants
n = 1 n = 7 n = 7
∑ = mannoside ∑ = dimannoside α-(1→2) ∑ = trimannoside α-(1→2)-a-(1→2)
Les composés de formule (3) peuvent être obtenus à partir des esters de formule (7) selon le procédé comprenant :
(i') la réaction de l'ester de formule (7) :
R30-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (7)
avec de l'hydrate d'hydrazine,
(ϋ') suivie de la réaction du composé obtenu en (i') avec du nitrite de sodium en milieu acide,
où∑ et Y sont tels que définis précédemment et R3 représente une chaîne alkyle linéaire C C6, de préférence un méthyle.
Plus précisément, selon l'étape (i'), un ester de formule (7) est traité par un excès d'hydrate d'hydrazine, typiquement dans l'éthanol, pour donner l'hydrazide correspondant. Plus précisément, selon l'étape (ϋ'), l'hydrazide obtenu selon l'étape (ί') est traité par du nitrite de sodium en milieu acide, typiquement en présence d'une solution acide dans le dioxane, telle qu'une solution d'acide chlorhydrique dans le dioxane, pour donner un acyl-azide de formule (3).
De préférence, le groupe R3 représente un méthyle.
En particulier, les composés de formule (3') peuvent être obtenus à partir des esters de formule (7') selon le procédé comprenant :
(i") la réaction de l'ester de formule (7') :
R30-(C=0)-(CH2)n-CH2-0-∑ (7')
avec de l'hydrate d'hydrazine,
(ii")suivie de la réaction du composé obtenu en (i") avec du nitrite de sodium en milieu acide,
où n,∑ et R3 sont tels que définis précédemment.
A titre illustratif, les composés de formule (3) peuvent être obtenus par application du schéma réactionnel suivant :
n=1 -12
p=0-9
a : NH2NH2:H20, EtOH; b : NaN02, HCI
Les esters de formule (7) peuvent être obtenus par application ou adaptation de méthodes connues en soi de et/ou à la portée de l'homme du métier, notamment celles décrites par Larock dans Comprehensive Organic Transformations, VCH Pub., 1989, ou par application ou adaptation des procédés décrits dans les exemples qui suivent.
Les esters de formule (7) peuvent être notamment obtenus à partir de composés de formule (8) :
Sac(LG)(OPG2)y(OPG3)z (8)
où : - Sac représente le squelette carboné correspondant à une unité saccharide choisie parmi les trioses, tétroses, pentoses, hexoses et heptoses,
- LG représente un groupe partant, typiquement un thioéther, situé sur le carbone n °1 du squelette carboné Sac,
- PG2 et PG3 représentent des groupes protecteurs différents et tels que, dans les conditions de déprotection de PG2, le groupe PG3 n'est pas déprotégé, et réciproquement,
- y représente un entier compris entre 0 et 5 et z représente un entier compris entre 1 et 6 ; y et z sont tels que toutes les fonctions alcool des composés de formule (8) sont protégées, soit par un groupe PG2, soit par un groupe PG3.
Ainsi, les composés de formule (7) peuvent être obtenus à partir de composés de formule (8), suivant le procédé comprenant :
(i'") la réaction d'un composé de formule (8) avec l'ester de formule (9) :
R30-(C=0)-Y-CH2-OH (9)
(ii'") éventuellement, la réaction de déprotection des groupes protecteurs PG2 et de la réaction du produit déprotégé obtenu avec un composé de formule (8), cette séquence étant répétée autant de fois que nécessaire pour obtenir le nombre σ d'unités saccharide,
(Ni"') la réaction de déprotection de tous les groupes protecteurs (PG2 et PG3) pour donner le composé de formule (7) :
R30-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (7)
où Y et∑ sont tels que définis précédemment et R3 représente une chaîne alkyle linéaire Ci-Ce.
Lorsque y est égal à 0, c'est-à-dire lorsqu'aucune fonction alcool n'est protégée par un groupe PG2, le groupe saccharide∑ est de type monosaccharide.
Lorsque y est égal à 1 , c'est-à-dire lorsqu'une seule fonction alcool est protégée par un groupe PG2, le groupe saccharide∑ obtenu est de type linéaire.
Lorsque y est supérieur strictement à 1 , c'est-à-dire lorsque plusieurs fonctions alcools sont protégées par un groupe PG2, le groupe saccharide∑ obtenu est de type ramifié.
Plus précisément, selon l'étape (i'"), le groupe partant LG du composé de formule (8) est substitué par l'atome d'oxygène de la fonction alcool du composé (9) (réaction de glycosylation). Cette réaction est de préférence réalisée dans le dichlorométhane anhydre et en présence de /V-iodosuccinimide (NIS) et d'une quantité catalytique de trifluorométhanesulfonate de triméthylsilyle (TMSOTf).
Plus précisément, selon l'étape (ii'"), le ou les groupes PG2 sont déprotégés et la ou les fonctions alcools libérées réagissent ensuite avec le composé de formule (8) dans les mêmes conditions que dans l'étape (i'"), en formant des liaisons glycosidiques. Cette étape est éventuellement répétée, et ce, autant de fois que nécessaire pour atteindre le nombre σ d'unités saccharide voulu pour le groupe∑.
Plus précisément, selon l'étape (Ni"'), les groupes PG3 sont finalement déprotégés, ainsi que les éventuels groupes PG2, et on obtient le composé de formule (7) dont les fonctions alcools sont libres.
Le groupe PG2 est typiquement un acétate, pouvant être retiré par une solution de méthanolate de sodium dans le méthanol.
Le groupe PG3 est typiquement un éther de benzyle, pouvant être retiré par hydrogénolyse en présence d'une quantité catalytique de palladium sur charbon.
Les dérivés saccharide de formule (8) peuvent être obtenus selon des procédés décrits dans la littérature et en utilisant les connaissances courantes de la chimie des sucres. Ainsi, ils peuvent notamment être synthétisés par application ou adaptation de Peters et al. Liebigs Ann. Chem. 1991 , 135-141 qui décrit la synthèse à partir du D-mannose d'un mannoside comportant en position 1 un groupement thioéthyle, en position 2 un groupement acétate et en position 3, 4 et 6 des éthers de benzyle, tel que représenté sur le schéma suivant :
5 étapes
annose
a : EtSH, HgBr2 catalytique, acétonitrile, TA.
Peters et al. décrit également le couplage de ce thiomannoside et la synthèse d'un dimannoside a-(1→2).
A titre illustratif, le procédé selon l'invention peut être réalisé par application du schéma réactionnel suivant :
b : NIS, TMSOTf catalytique, CH2CI2 ; c : MeONa, MeOH , TA ; d : H2, Pd(OH)2/C, MeOH/AcOEt.
Les composés ainsi préparés peuvent être récupérés à partir du mélange de la réaction par les moyens traditionnels. Par exemple, les composés peuvent être récupérés en distillant le solvant du mélange de la réaction ou si nécessaire après distillation du solvant du mélange de la solution, en versant le reste dans de l'eau suivi par une extraction avec un solvant organique immiscible dans l'eau, et en distillant le solvant de l'extrait. En outre, le produit peut, si on le souhaite, être encore purifié par diverses techniques, telles que la recristallisation, la reprécipitation ou les diverses techniques de chromatographie, notamment la chromatographie sur colonne ou la chromatographie en couche mince préparative. Les composés selon la présente invention peuvent être facilement préparés, ou formés pendant le processus de l'invention, sous forme de solvates (par exemple hydrates). Les hydrates des composés utiles selon la présente invention peuvent être facilement préparés par la recristallisation d'un mélange de solvant aqueux/organique, en utilisant des solvants organiques tels que dioxane, tétrahydrofuranne ou méthanol.
Les produits de base ou les intermédiaires sont disponibles commercialement et/ou peuvent être préparés par l'application ou l'adaptation de procédés connus, par exemple des procédés tels que décrits dans les Exemples de Référence. Les inventeurs ont découvert que les dendrimères modifiés selon l'invention présentent des propriétés particulièrement avantageuses, notamment anti-inflammatoires.
Selon un autre objet, la présente invention concerne également un médicament comprenant un des dendrimères cités ci-dessus et un excipient pharmaceutiquement acceptable.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être présentées sous des formes destinées à l'administration par voie parentérale, orale, rectale, permuqueuse ou percutanée, par application ou adaptation de formulations généralement utilisées.
Elles seront donc présentées sous forme de solutés ou de suspensions injectables ou flacons multi-doses, sous forme de comprimés nus ou enrobés, de dragées, de capsules, de gélules, de pilules, de cachets, de poudres, de suppositoires ou de capsules rectales, de solutions ou de suspensions, pour l'usage percutané dans un solvant polaire, pour l'usage permuqueux.
Les excipients qui conviennent pour de telles administrations sont les dérivés de la cellulose ou de la cellulose microcristalline, les carbonates alcalino-terreux, le phosphate de magnésium, les amidons, les amidons modifiés, le lactose pour les formes solides.
Pour l'usage rectal, le beurre de cacao ou les stéarates de polyéthylèneglycol sont les excipients préférés.
Pour l'usage parentéral, l'eau, les solutés aqueux, le sérum physiologique, les solutés isotoniques sont les véhicules les plus commodément utilisés.
La posologie peut varier dans les limites importantes (0,5 mg à 1000 mg) en fonction de l'indication thérapeutique et de la voie d'administration, ainsi que de l'âge et du poids du sujet. La présente invention concerne particulièrement des dendrimères tels que décrits précédemment pour leur utilisation pour le traitement et/ou la prévention des désordres inflammatoires. Les inventeurs ont en effet montré que les dendrimères selon l'invention ont la capacité d'abaisser le taux de cytokines inflammatoires (TNF-α) sécrétées par des cellules dendritiques humaines stimulées par du LPS et d'inhiber ainsi la stimulation par le LPS. La présente invention concerne plus particulièrement l'utilisation des dendrimères cités ci-dessus pour laquelle ledit dendrimère possède une affinité pour le récepteur DC-SIGN sous sa forme membranaire.
Les inventeurs ont en effet montré que les dendrimères selon l'invention possèdent une meilleure affinité que le ManLAM pour le DC-SIGN sous sa forme membranaire.
FIGURES
La Figure 1 représente l'EC50 (en nM) pour la liaison des mannodendrimères au récepteur DC-SIGN exprimé dans des cellules HEK.
La Figure 2 représente la diminution du taux TNF-α sécrété après co-incubation avec le LPS et les mannodendrimères.
La Figure 3 représente la restauration de la production de TNF-α par AZN-D1 , anticorps antagoniste du récepteur DC-SIGN avec le mannodendrimère Gc3TriM.
La Figure 4A représente le comptage des cellules de lavages bronchoalvéolaires de souris préalablement traitées par un gavage de mannodendrimère Gc3TriM et une nébulisation de LPS.
La Figure 4B représente le comptage des cellules neutrophiles de lavages bronchoalvéolaires de souris préalablement traitées par un gavage de mannodendrimère Gc3TriM et une nébulisation de LPS. EXEMPLES
La présente invention sera mieux comprise à la lecture des exemples suivants.
I. Méthodes générales
1 . g-qlvcosylation par le thiomannoside 2
n = 1 - 1 2
1 .0 équivalent du composé 1 et 1 .1 équivalent de l'alcool à glycosyler (soit les composés 2 soit l'hydroxyle en position 2 du mannose en cours de synthèse) sont dissous dans du dichlorométhane anhydre (0.4M) en présence de tamis moléculaire 3À activé. Le milieu réactionnel, sous atmosphère inerte, est refroidi dans la glace. Une fois à température, 1 .3 équivalent de N-iodosuccinimide sont ajoutés. Après 20 minutes d'agitation, 0.08 équivalent d'une solution molaire de trifluorométhanesulfonate de triméthylsilyle dans le dichlorométhane sont ajoutés et la réaction est laissée à 0°C pendant 2 heures. Le milieu réactionnel est neutralisé par quelques gouttes de triéthylamine. Après filtration sur Célite 545, le milieu est hydrolysé par une solution de thiosulfate de sodium saturée. La phase aqueuse est extraite deux fois au dichlorométhane. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis évaporée. Une purification par colonne chromatographique sur gel de silice acétate d'éthyle / éther de pétrole (1 :3) permet d'obtenir le produit voulu 3 séparé ou non de l'isomère β.
2. Déacétylation
Le composé 3 à déacétyler est dissous dans du méthanol anhydre (à 0.08M) sous atmosphère inerte. Un petit morceau de sodium solide est ajouté formant ainsi du méthanolate de sodium in situ. Le milieu réactionnel est agité une nuit à température ambiante. En fin de réaction, le milieu réactionnel est neutralisé par de la résine échangeuse de proton (suivi papier pH, pH ~ 7), filtré puis évaporé. Une purification par colonne chromatographique sur gel de silice toluène / acétate d'éthyle (5:1 ) permet d'obtenir le composé pur 4.
Le composé 4 peut alors être mis en réaction avec un composé du type du composé 1 , pour donner, par formation d'une nouvelle liaison glycosidique, un composé de type disaccharide.
3. Débenzylation par hydrogénation catalvtique
4 n = 1 - 1 2 5
Le composé à débenzyler 4 est dissous dans du méthanol (0.08M) en présence d'une quantité catalytique d'hydroxyde de palladium sur charbon activé, en atmosphère saturée en dihydrogène. Une CCM de contrôle permet de vérifier la fin de la réaction. Le milieu réactionnel est alors filtré sur célite 545 puis évaporé. Aucune étape de purification sur colonne chromatographique n'est nécessaire. On obtient le composé débenzylé pur 5.
4. Hvdrazidation de la fonction ester de méthyle
Le composé 5 ainsi déprotégé est traité à température ambiante pendant une nuit par 53.0 équivalents d'hydrate d'hydrazine dissous dans de l'éthanol absolu (125.0 équivalents). Une CCM de contrôle (AE/MeOH/H20) (8:3:1 ) permet de vérifier la disparition du composé de départ. Le milieu réactionnel est alors évaporé puis lyophilisé plusieurs fois avec de l'eau. Le produit obtenu 6 ne subit aucune étape de purification et est engagé directement dans la réaction de substitution des dendrimères à extrémité ammonium. 5. Fixation de la tyramine sur les dendrimères Gc,
Dendrimère N-BOC tyramine
Gc ',n
Ce couplage peut être réalisé par application ou adaptation de la méthode décrite dans Tet. Lett. 2009, 50, 2078.
1 .0 équivalent de dendrimère Gcn est dissous dans du THF anhydre à la concentration de 1 à 2 mM en présence de 7,5x2" équivalents de carbonate de césium solide. On ajoute par la suite, 6.3x2" équivalents de /V-BOC-tyramine et le milieu réactionnel est agité 12 heures à température ambiante. La réaction est suivie par RMN du phosphore (3 P) du milieu réactionnel brut (référence à l'aide d'un capillaire de C6D6). En fin de réaction, le milieu réactionnel est centrifugé 10 minutes à 10 000g à température ambiante (rotor 25.50, Jouan), puis le surnageant est récupéré et évaporé. Une purification par colonne chromatographique sur gel de silice permet d'obtenir le composé GcnTyrBOC pur acétate d'éthyle / éther de pétrole (1 :2 à 1 :1 ).
6. Déprotection du groupement BOC des dendrimères GcnTyrBOC
La déprotection peut être réalisée par application ou adaptation de la méthode décrite dans Tet. Lett. 2009, 50, 2078. Préparation des dendrimères à extrémité ammonium
Le dendrimère GcnTyrBOC à déprotéger est repris dans 5 mL de dichlorométhane (2mM) à 25% d'acide trifluoroacétique (sigma) et est agité 30 minutes à température ambiante. Le milieu réactionnel est ensuite évaporé à sec. Le composé subit au minimum 3 fois cette étape et ce jusqu'à déprotection complète. 3 co-évaporations au méthanol permettent par la suite d'éliminer l'acide trifluoroacétique en excès (suivi RMN 9F). Le dendrimère GcnTyr soluble dans l'eau est ensuite lyophilisé et conservé à -20°C sous atmosphère inerte.
7. Couplage des oliqomannosides sur le dendrimère GCnTyr à extrémité ammonium 'acyl-azide :
Le composé 6 (6x2n équivalents où n est la génération du dendrimère Gcn à substituer) est dissous à concentration de 6.10"2 M dans du DMF anhydre. La solution est refroidie à -25/-30 qC, et 36x2" équivalents d' HCI (solution 4M dans le dioxane) sont ajoutés, suivis de 12x2" équivalents de nitrite de sodium (NaN02) solide. Le mélange est agité 30 minutes à -25/-30°C, puis une CCM de contrôle (AE/MeOH/H20 (8:3:1 )) permet de vérifier la disparition de l'hydrazide de départ et la formation d'un nouveau composé 7 moins polaire (RF = 0.7 pour le monomannoside). 9x2" équivalents d'acide sulfamique (solution 70mg.ml_"1 dans le DMF) sont ajoutés, la réaction agitée pendant 15 minutes à - 25/-30°C et la solution obtenue de composé 7 est utilisée telle quelle pour l'étape suivante.
Substitution des dendrimères :
Au milieu réactionnel précédent est ajouté le dendrimère à extrémité ammonium (GcnTyr, préparé à l'étape 6.) à la concentration de 1 .10 2 M dans le DMF anhydre. On ajuste le pH du mélange par ajout goutte à goutte de triéthylamine jusqu'à un pH basique (pH≥ 9). L'ensemble est agité à 4<Ό pendant 6 heures. Après 6 heures, le milieu réactionnel est à nouveau traité par 6x2" équivalents d'une solution d'acyl azide mannoside à 4<C. Cette étape est répétée autant de fois qu'il est nécessaire pour obtenir une substitution totale du dendrimère.
(c) Purification du dendrimère mannosylé :
Le mélange réactionnel est évaporé et le résidu est repris dans un volume minimum d'H20 pour être déposé sur une colonne de chromatographie d'exclusion de taille (Biogel P-2 fine, 60ml_, 0.16ml_.min"1). Chaque fraction est analysée sur CCM (AE/MeOH/H20 (8:3:1 )) et celles contenant le mannodendrimère GcnTyrMan pur (RF = 0, révélation UV et H2S04 5% EtOH) sont lyophilisées formant un solide jaune-orangé.
II. Molécules préparées
La voie de synthèse des intermédiaires décrite ci-dessus a permis l'obtention des molécules suivantes :
2-Méthoxycarbonyléthyl-a-D-mannopyranoside
[a]D 25 = + 55 (c = 1 .0, MeOH)
Aspect: huile incolore
Données RMN 1H: (250 MHz, CD3OD, 25°C) δ = 4.74 (1 H, d, 3 -2 = 1 .5 Hz, H-1 ), 4.02 (1 H, td, 2Ja-a = 10.0 Hz, 3Ja_b = 6 Hz, H-a), 3.86 (1 H, dd, 2J6.6 = 12.0 Hz, 3J5.6 = 2.5 Hz, H- 6), 3.78 (1 H, dd, 3J2-3 = 2.5 Hz, 3J,.2 = 1 .5 Hz, H-2), 3.74 (1 H, dd, 2J6.6 = 12.0 Hz, 3J5.6 = 5.0 Hz, H-6), 3.71 (1 H, td, 2Ja.a = 10 Hz, 3Ja.b = 6 Hz, H-a), 3.71 (3H, s, H-O/We), 3.67-3.60 (2H, m, H-3 et H-4), 3.55 (1 H, ddd, 3 5-4 = 10.0 Hz, 3J5.6 = 5.0 Hz, 3J5.6 = 2.5 Hz, H-5), 2.64 (2H, t, 3Ja-b = 6 Hz, H-b) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (62.9 MHz, CD3OD, 25 <C) δ = 174.2 (C-i); 101 .3 (C-1 ); 74.4 (C- 5); 72.4 (C-3); 71 .8 (C-a); 68.2 (C-2); 64.3 (C-4); 62.5 (C-6); 51 .4 (C-O/We); 35.4 (C-b) ppm. ol 2-Hydrazinocarbonyléthyl-a-D-mannopyranoside
Aspect: huile incolore
Propriétés: soluble H20, MeOH, DMF
Données RMN 1H: (250 MHz, CD3OD, 25°C) δ = 4.74 (1 H, d, 3J,.2 = 1 .5 Hz, H-1 ), 3.98 (1 H, td, 2Ja_a = 10 Hz, 3Ja.b = 6 Hz, H-a), 3.83 (1 H, dd, 2J6_6 = 1 1 .5 Hz, 3J5.6 = 2.5 Hz, H-6), 3.74 (1 H, dd, 3J2.3 = 2.5 Hz, 3J2-1 = 1 .5 Hz, H-2), 3.69 (1 H, dd, 2J6.6 = 1 1 .5 Hz, 3J5.6 = 5.5 Hz, H-6), 3.69 (1 H, td, 2Ja.a = 10 Hz, 3Ja.b = 6 Hz, H-a), 3.62-3.55 (2H, m, H-3, H-4), 3.5 (1 H, m, 3J4-5 = 10.0 Hz, 3J5.6 = 5.5 Hz, 3J5.6 = 2.5 Hz, H-5), 2.42 (2H, t, 3Ja.b = 6 Hz, H-b) ppm.
Données RMN 13C( 1Hk (62.9 MHz, CD3OD, 25<C) δ = 172.9 (C-i); 101 .3 (C-1 ); 74.4 (C- -3); 71 .8 (C-a); 68.2 (C-2); 64.3 (C-4); 62.5 (C-6); 35.4 (C-b) ppm.
8-Méthoxycarbonyloctyl-a-D-mannopyranoside
[a]D 2b = + 91 (c = 0.16, MeOH)
Aspect: huile incolore
Données RMN 1H: (300 MHz, CDCI3, 25 °C): δ = 4.76 (1 H, d, 3 _2 = 1 .5 Hz, H-1 ), 3.81 (1 H, dd, 3J2.3 = 4.0 Hz, 3J_2 = 1 .5 Hz, H-2), 3.80-3.65 (4H, m, H-3, H-6, H-6 et H-a), 3.66 (3H, s, Η-ΟΛ fe), 3.65 (1 H, t, 3J3-4 = 9-5 Hz, 3J4-5 = 9.5 Hz, H-4), 3.53 (1 H, m, H-5), 3.42 (1 H, td, 2Ja.a = 9.5 Hz, 3Ja_b = 6.0 Hz, H-a), 2.32 (2H, t, 3Jh-g = 7.5 Hz, H-h), 1 .60 (4H, m, H- b et H-g), 1 .34 (8H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C( 1Hk (75.5 MHz, D20, 25 ¾): δ = 174.6 (C-i); 100.1 (C-1 ); 73.1 (C-5); 71 .3 (C-3); 70.8 (C-2); 67.2 (C-4 et C-a); 61 .5 (C-6); 50.7 (C-O/We); 33.4 (C-h); 29.2, 29.0,
-b/c/d/e/f/g) ppm.
8-Hydrazinocarbonyloctyl-a-D-mannopyranoside
[a]D 25 = + 49 (c = 1 .0, MeOH)
Aspect: poudre blanche Données RMN 1H: (300 MHz, CDCI3, 25 <C): δ = 4.76 (1 H, d, 3 -2 = 1 .5 Hz, H-1 ), 3.81 (1 H, dd, 3J2-3 = 4.0 Hz, 3 _2 = 1 .5 Hz, H-2), 3.77-3.68 (4H, m, H-3, H-6, H-6 et H-a), 3.64 (1 H, t, 3 3-4 = 9-5 Hz, 3J4-5 = 9-5 Hz, H-4), 3.53 (1 H, m, H-5), 3.42 (1 H, td, 2Ja.a = 9.5 Hz, 3Ja-b = 6.0 Hz, H-a), 2.32 (2H, t, 3Jh-g = 7.5 Hz, H-h), 1 .60 (4H, m, H-b et H-g), 1 .34 (8H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (75.5 MHz, D20, 25 <C): δ = 173.9 (C-i); 100.2 (C-1 ); 73.2 (C-5);
71 .3 (C-3); 70.8 (C-2); 67.1 (C-4 et C-a); 61 .4 (C-6); 33.6 (C-h); 29.2, 28.9 (2), 28.7, 25.8, -b/c/d/e/f/g) ppm.
8-Méthoxycarbonyloctyl 2-O-a-D-mannopyranosyl-a-D-mannopyranoside
[CI]D = + 64 (c = 1 .0, MeOH)
Aspect: huile incolore
Données RMN 1H: (300 MHz, CD3OD, 25 <C): δ = 5.06 (1 H, s, H-1 ); 4.98 (1 H, d, 3Jr-2 = 1 .0 Hz, H-1 '); 4.00 (1 H, m, H-2'); 3.87-3.65 (6H, m, H-2, H-3, H-3', H-5' H-6, H-6'et H-a); 3.67 (3H, s, H-OMe); 3.52 (1 H, m, H-5); 3.60 (2H, m, H-4' et H-4); 3.44 (1 H, td, 2Ja.a = 9.5 Hz, 3Ja_b = 6.0 Hz, H-a); 2.33 (2H, t, 3Jh-g = 7.5 Hz, H-h); 1 .30 (4H, m, H-b et H-g); 1 .34 (8H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13Cf 1H}\ (75.5 MHz, CD3OD, 25 <C): δ = 174.7 (C-i); 102.8 (C-1 '); 98.5 (C- 1 ); 79.3 (C-2); 73.6 (C-5'); 73.2 (C-5); 71 .0 et 70.8 (C-3 et C-3'); 70.5 (C-2'); 67.6 (C-a); 67.4 et 67.3 (C-4 et C-4'); 61 .7 et 60.6 (C-6 et C-6'); 50.7 (C-OMe); 33.4 (C-h); 29.2, 29.0,
-b/c/d/e/f/g) ppm.
ol 8-Hydrazinocarbonyloctyl 2-O-a-D-mannopyranosyl-a-D-mannopyranoside
[a]D 25 = + 59 (c = 1 .0, MeOH)
Aspect: huile incolore
Propriétés: soluble H20, MeOH, DMF
Données RMN 1H: (500 MHz, D20, 25 <C): δ = 5.02 (1 H, d, 3 _2 = 2.0 Hz, H-1 ); 4.95 (1 H, d, 3Jy.2 = 1 .5 Hz, H-1 '); 4.00 (1 H, dd, 3Jr.2 = 1 .5 Hz, 3J2_3 = 3.0 Hz, H-2'); 3.87 (1 H, m, 3J,.
2 = 2.0 Hz, H-2); 3.82 (1 H, m, H-3); 3.81 (2H, m, H-6'); 3.77 (1 H, dd, 3J3 _4 = 10.0 Hz, 3 J2_3
= 3.0 Hz, H-3'); 3.68 (1 H, m, H-6); 3.67 (1 H, m, H-5'); 3.63 (1 H, m, 2Ja.a = 9.5 Hz, H-a);
3.61 (1 H, dd, 3 3-4 = 9-5 Hz, 3 4_5 = 9.5 Hz, H-4); 3.56 (1 H, m, H-5); 3.55 (1 H, t, 3J3.4 = 10.0 Hz, 3J4_5 = 10.0 Hz, H-4'); 3.47 (1 H, dt, 2Ja.a = 9.5 Hz, 3Ja.b = 6.0 Hz, H-a); 2.13 (2H, t, 3Jh-g
= 7.5 Hz, H-h); 1 .51 (4H, m, H-b et H-g); 1 .23 (8H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (125.8 MHz, D20, 25 <C): δ = 175.9 (C-i); 102.2 (C-1 '); 97.9 (C-1 );
78.6 (C-2); 73.2 (C-5'); 72.6 (C-5); 70.2 et 70.1 (C-3 et C-3'); 69.8 (C-2'); 67.8 (C-a); 66.8 et 66.7 (C-4 etC-4'); 60.9 et 60.7 (C-6 et C-6'); 33.5 (C-h); 28.3, 28.1 , 28.0, 27.9, 25.1 , -b/c/d/e/f/g) ppm.
8-méthoxycarbonyloctyl 2-0-(2-0-a-D-mannopyranosyl)-a-D-mannopyranosyl-a-D- mannopyranoside
[a]D 25 = + 70 (c = 1 .0, MeOH)
Aspect: huile incolore
Données RMN 1H: (500 MHz, CDCI3, 25 °C): δ = 5.28 (1 H, d, 3Jr-2 = 1 .5 Hz, H-1 '); 5.07 (1 H, d, H-1 ); 5.00 (1 H, d, 3Jr-2- = 1 .5 Hz, H-1 "); 4.06 (1 H, dd, 3J3.2 = 3.5 Hz, 3Jr-2 = 1 .5 Hz, H-2'); 3.99 (1 H, dd, 3J3~.2~ = 3.5 Hz, 3Jr.2~ = 1 .5 Hz, H-2"); 3.91 à 3.80 (5H, m, H-2, H- 3', H-6, H-6', H-6"); 3.78 à 3.54 (14H, m, H-3, H-3", H-4, H-4', H-4", H-5', H-5", H-6, H-6', H-6", H-a et H-O/We); 3.52 (1 H, m, H-5); 3.44 (1 H, td, 2Ja.a = 9.5 Hz, 3Ja_b = 6.5 Hz, H-a); 2.34 (2H, t, 3Jh-g = 7.5 Hz, H-h); 1.66-1.55 (4H, m, H-b et H-g); 1.43-1.30 (8H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C{ 1H}\ (125.8 MHz, D20, 25 <C): δ = 174.5 (C-i); 102.6 (C-1"); 101.0 (C- 1'); 98.4 (C-1); 79.4 (C-2); 78.8 (C-5"); 73.4 (C-4" etC-5'); 73.1 (C-5); 70.9 (C-2"); 70.7 (C- 3); 70.4 (C-2" et C-4V4); 67.7 (C-3'); 67.5 (C-4/4'); 67.3 (C-3"); 67.1 (C-a); 61.8, 61.7 et 61.5 (3C, C-6/6V6"); 50.5 (C-OMe); 33.3 (C-h); 29.1, 28.9, 28.8, 28.6, 25.8, 24.5 (C- b/c/d/e/f/g) ppm.
8-Hydrazinocarbonyloctyl 2-0-(2-0-a-D-mannopyranosyl)-a-D-mannopyranosyl-a-D- mannopyranoside
[a]D 25 = + 59 (c = 1.0, MeOH)
Aspect: huile incolore
Propriétés: soluble H20, MeOH, DMF
Données RMN 1H: (500 MHz, CDCI3, 25 <C): δ = 5.28 (1H, d, 3JV-z = 1.5 Hz, H-1'); 5.07 (1H, d, H-1); 5.00 (1H, d, 3Jv.y = 1.5 Hz, H-1"); 4.06 (1H, dd, 3J3_2 = 3.5 Hz, 3Jr_2 = 1.5 Hz, H-2'); 3.99 (1H, dd, 3J3 _2 = 3.5 Hz, 3 r_2» = 1.5 Hz, H-2"); 3.90 à 3.81 (5 H, m, H-2, H- 3', H-6, H-6' et H-6"); 3.76 à 3.56 (14H, m, H-3, H-3", H-4, Η-4', H-4", Η-5', H-5", H-6, H-6', H-6", H-a et H-O/We)); 3.52 (1H, m, H-5'); 3.44 (1H, td, 2Ja_a = 9.5 Hz, 3Ja_b = 6.5 Hz, H-a); 2.17 (2H, t, 3Jh-g = 7.5 Hz, H-h); 1.66-1.55 (4H, m, H-b et H-g); 1.42-1.32 (8H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13 Ci 1HY. (125.8 MHz, D20, 25 <C): δ = 173.8 (C-i); 102.6 (C-1"); 101.0 (C- 1'); 98.4 (C-1); 79.3 (C-2); 78.7 (C-5"); 73.5 (C-4" et C-5'); 73.1 (C-5); 70.9 (C-2"); 70.7 (C- 3); 70.4 et 70.3 (C-2' et C-474); 67.6 (C-3'); 67.4 (C-4/4'); 67.2 (C-3"); 67.1 (C-a); 61.6, 61.5 et 61.4 (C-6, C-6', C-6"); 50.5 (C-OMe); 33.5 (C-h); 29.0, 28.8, 28.8, 28.6, 25.7, 25.2 (C-b/c/d/e/f/g) ppm. La voie de synthèse de dendrimères mannosylés décrite ci-dessus a permis l'obtention des molécules suivantes :
GcI MonoM C252H336O102 27P9S6
M = 5846.697 g/mol
Aspect: poudre jaune
Données RMN 1H: (500 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 42 <C): δ = 7.91 (6H, s, H-i); 7. 74 (12H, d, 3JH-H = 7.5 Hz, H-C0 3) ; 7.24 et 7.16 (48H, d, 10 Hz, H-d2 et H-d3); 6.94 (12H, d, 3JH-H = 7.5 Hz, H- Co2); 4.97 (12H, d, H-1 ); 4.06 (12H, m, H-a); 3.99 (12H, dd, 2J6-6 = 12.5 Hz, 3J6_5 = 4.0 Hz, H-6); 3.92-3.79 (60H, m, H-a, H-2, H-3, H-4 et H-6); 3.71 (12H, m, H-5); 3.44 (24H, t, CHP-CHP-NH); 3.33 (18H, d, 3JH-p = 10.0 Hz, H-m); 2.83 (24H, t, CH?-CH?- NH); 2.60 (24H, t, 3Jb_a = 7.5 Hz, H-b) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (125 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 42 <C): δ = 172.9 (C-c); 151 .1 (C- Co ); 149.2 (C-d 1); 139.3 (C-i); 136.9 (C-d4); 132.9 (C-C0 4); 130.3 (C-d2 / d3); 128.4 (C-Co3); 121 .3 (C-C0 2) ; 121 .1 (C-d2 / C-d3); 100.1 (C-1 ); 73.1 (C-5); 71 .1 (C-3); 70.5 (C- 2); 63.8 (C-a); 61 .2 (C-6); 40.8 (CH2-ÇH2-NH); 36.3 (C-b); 34.6 (Ç_H2-CH2-NH); 32.8 (3JC-p = 1 1 .5 Hz, C-m) ppm.
Données RMN 31 Pi 1H): (202 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 42 <C): δ = 63.2 (s, P1 =S); 9.3 (s,
C552H720O210 63P21 S18
Gc2MonoM M = 12825.67 g/mol
Aspect: poudre jaune
Données RMN 1H: (500 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 42<C): δ = 7.94 (18H, large s, H-i et H-j); 7. 89-6.86 (168H, m, H-C0 2, H-C0 3 , H-d2, H-d3, H-C2 2 et H-C2 3); 4.99 (24H, d, H-1 ); 4.09 (24H, m, H-a); 3.99 (24H, dd, 2J6.6 = 13.0 Hz, H-6); 3.94-3.82 (120H, m, H-a, H-2, H-3, H-4 et H-6); 3.75 (24H, m, H-5); 3.48 (48H, large m, CH?-CH?-NH); 3.41 (54H, large m, H-m et H-n); 2.88 (48H, large t, CH?-CH?-NH); 2.62 (48H, large t, H-b) ppm.
Données RMN 13C{ 1H} (125 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 42<C): δ = 172.8 (C-c); 151 .3-149.2 (C-Co1 , C-d 1 et C-C2 1); 139.8 et 139.4 (C-i et C-j); 139.8-121 .2 (C-C0 2, C-C0 3, C-C0 4, C- d2, C-d3, C-d4, C-C2 2, C-C2 3 et C-C2 4); 100.1 (C-1 ); 73.2 (C-5); 71 .2 (C-3); 70.5 (C-2); 63.8 (C-a); 61 .3 (C-6); 40.8 (CH2-Ç_H2-NH); 36.3 (C-b); 34.6 (Ç_H2-CH2-NH); 32.7 (C-m et C-n) ppm.
Données RMN 31 P{ 1HY. (202 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 42 <C): δ = 63.2 (s, P2=S); 62.2 (s, P1 =S); 9.2 (s, N3P3) ppm.
Ci 140H 1488θ426Νι 35P45S42
Gc3MonoM
M = 26639,33 g/mol
Aspect: poudre jaune
Données RMN 1H: (500 MHz, D20/THF-cf8 (1 :1 ), 37°C): δ = 8.09 (42H, large s, H-i, H-j et H-k); 7.98-7.18 (360H, m, H-C0 2, H-C0 3 H-d2, H-d3, H-C2 2, H-C2 3, H-C3 2 et H-C3 3); 5.06 (48H, d, H-1 ); 4.17 (48H, m, H-a); 4.06 (48H, dd, 2J6-6 = 10.0 Hz, H-6); 4.01 -3.89 (240H, m, H-a, H-2, H-3, H-4 et H-6); 3.80 (48H, m, H-5); 3.58 (222H, large m, CH?-CH?-NH, H- m, H-n et H-o); 2.99 (96H, large t, CH2-CH?-NH); 2.71 (96H, large t, H-b) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (125 MHz, D20/THF-cf8 (1 :1 ), 37<C): δ = 172.7 (C-c); 151 .6-149.3 (C-Co , C-d 1 , C-C2 1 et C-C31 ) ; 139.6-121 .2 (C-i, C-j, C-k, C-C0 2, C-C0 3, C-C0 4, C-d2, C- d3, C-d4, C-C2 2, C-C2 3 C-C2 4 et C-C32, C-C33 C-C34) ; 100.2 (C-1 ); 73.3 (C-5); 71 .3 (C-3); 70.6 (C-2); 63.8 (C-a); 61 .4 (C-6); 40.9 (CH2-Ç_H2-NH); 36.3 (C-b); 34.8 (Ç_H2-CH2-NH); 32.8 (C-m C-n et C-o) ppm.
Données RMN 31 Pi 1H): (202 MHz, D20/THF-cf8 (1 :1 ), 37<C): δ = 63.1 (s, P3=S); 62.5 (s, P1 =S et P2=S); 9.1 (s, N3P3) ppm.
Aspect: poudre jaune
Données RMN 1H: (500 MHz, D20/THF-ciS (2:1 ), 42 <C): δ = 7.88 (6H, s, H-j); 7. 73 (12H, d, 3JH-H = 7.5 Hz, H-C0 3) ; 7.20 et 7.15 (48H, d, 10 Hz, H-d2 et H-d3); 6.99 (12H, d, 3JH-H = 7.5 Hz, H- Co2); 5.18 (12H, d, H-1 ); 5.15 (12H, d, H-1 '); 4.22 (12H, dd, H-2'); 4.01 - 3.78 (108H, m, H-a, H-2, H-3, Η-3', H-4, H-4', H-5', H-6 et H-6'); 3.66 (12H, m, H-5); 3.58 (12H, m, H-a) 3.43 (24H, large t, CH2-Ç_H2-NH); 3.31 (18H, d, 3 H-p = 8.0 Hz, H-n); 2.82 (24H, large t, CH£-CHp-NH): 2.23 (24H, t, 3Jh.g = 5.0 Hz, H-h); 1.67 (48H, m, H-b et H-g); 1.38 (96H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (125 MHz, D20/THF-cf8 (2:1), 42<C): δ = 174.9 (C-i); 151.2 (C- Co ); 149.1 (C-d1); 139.3 (C-j); 136.9 (C-d4); 132.8 (C-C0 4); 130.0 (C-d2 / d3); 128.4 (C-C0 3); 121.1 (C-C0 2); 121.0 (C-d2 / C-d3); 102.7 (C-1'); 98.7 (C-1); 79.2 (C-2); 70.3 (C- 2'); 67.9 (C-a); 73.5, 73.2, 70.9, 67.7-66.6, 61.4, 61.2 (C-3, C-3', C-4, C-4', C-5, C-5', C-6 et C-6'); 40.5 (CH2-Ç_H2-NH); 36.1 (C-h); 34.7 (Ç_H2-CH2-NH); 32.8 (3 JC-p = 11.5 Hz, C-n); 29.3-25.9 (C-c, C-d, C-e, C-f et C-g) ppm.
Données RMN 31 P{ 1H} (202 MHz, D20/THF-cf8 (2:1), 42<C): δ = 62.9 (s, P1=S); 9.1 (s, N3P3) ppm.
C816Hi248033oN63 2lSi8
Gc2DiM
M = 18448,55 g/mol
Aspect: poudre jaune
Données RMN 1H: (500 MHz. D20/THF-cf8 (2:1), 44 <C): δ = 8.10 (18H, larges, H-j et H-k); 7.97-7.22 (168H, m, H-C0 2, H-C0 3 , H-d2, H-d3, H-C2 2 et H-C2 3); 5.32 (24H, d, H-1); 5.30 (24H, d, H-1'); 4.35 (24H, dd, H-2'); 4.14-3.95 (216H, m, H-a, H-2, H-3, H-3', H-4, H-4', H- 5', H-6 et H-6'); 3.80 (24H, m, H-5); 3.72 (24H, m, H-a); 3.61 (102H, large t, CHp-CHp-NH. H-n et H-o); 3.01 (48H, large t, ÇHg-CH^NH); 2.40 (24H, large t, H-h); 1.83 (96H, m, H-b et H-g); 1.56 (192H, m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C{ 1H} (125 MHz, D20/THF-cf8 (2:1), 44 <C): δ = 174.7 (C-i); 151.5-149.4 (C-Co , C-d1 etC-C2 1); 139.5 (C-j etC-k); 137.1-121.2 (C-C0 2, C-C0 3, C-C0 4, C-d2, C-d3, C-d4, C-C2 2, C-C2 3et C-C2 4); 102.9 (C-1'); 98.9 (C-1); 79.3 (C-2); 70.5 (C-2'); 67.9 (C-a); 73.7, 73.4, 71.1, 67.9-66.8, 61.6, 61.4 (C-3, C-3', C-4, C-4', C-5, C-5', C-6 et C-6'); 40.7 (CH2-Ç_H2-NH); 36.2 (C-h); 34.9 (Ç_H2-CH2-NH); 32.9 (C-n et C-o); 29.5-24.9 (C-c, C-d, C- e, C-f et C-g) ppm.
Données RMN 31 Pi 1H): (202 MHz, D20/THF-cf8 (2:1), 44 <C): δ = 63.1 (s, P2=S); 62.5 (s, P1=S);9.0 (s, N3P3) ppm.
Aspect: poudre jaune
Données RMN 1H: (500 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 44 <C): δ = 7.84 (48H, large s, H-j, H-k et H-l); 7.76-7.18 (360H, m, H-C0 2, H-C0 3 , H-d2, H-d3, H-C2 2, H-C2 3, H-C3 2 et H-C3 3); 5.19 (48H, d, H-1 ); 5.17 (48H, d, H-1 '); 4.23 (48H, dd, H-2'); 4.02-3.81 (432H, m, H-a, H-2, H-3, H-3', H-4, Η-4', Η-5', H-6 et H-6'); 3.66 (48H, m, H-5); 3.58 (48H, m, H-a); 3.44-3.32 (222H, large m, CH?-CH?-NH. H-n, H-o et H-p); 2.82 (48H, large m, CH?-CH?-NH); 2.23 (48H, large t, H-h); 1 .69-1 .65 (192H, large m, H-b et H-g); 1 .39 (384H, large m, H-c, H-d, H-e et H-f) ppm.
Données RMN 13C{ 1HY. (125 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 44 <C): δ = 174.7 (C-i); 149.2 (C- Co , C-Ci1, C-C2 1 et C-C3 1); 136.8-121 .1 (C-j, C-k, C-l, C-C0 2, C-C0 3, C-C0 4, C-d2, C-d3, C-d4, C-C2 2, C-C2 3 C-C2 4 et C-C32, C-C3 3 C-C3 4), 102.7 (C-1 '); 98.7 (C-1 ); 79.2 (C-2); 70.4 (C-2'); 67.9 (C-a); 73.6, 73.2, 70.9, 67.9, 67.7, 67.1 , 61 .4, 61 .2 (C-3, C-3', C-4, C-4', C-5, C-5', C-6 et C-6'); 40.5 (CH2-Ç_H2-NH); 36.2 (C-h); 34.7 (Ç_H2-CH2-NH); 32.8 (C-n C-o et C-p); 29.4-25.9 (C-c, C-d, C-e, C-f et C-g) ppm.
Données RMN 31 Pi 1H): (202 MHz, D20/THF-cf8 (2:1 ), 44 <C): δ = 62.9 (s, P3=S); 62.0 (s, P1 =S et P2=S); 9.0 (s, N3P3) ppm.
Gc4DiM
Aspect: poudre jau
Données RMN 1H 8.22 (48H, large C0 2, H-Co3 , H-d2, (48H, d, H-1 '); 5.2 4.28 (48H, large H-2", H-3, Η-3', H- H-6"); 3.71 (48H, large m, CH?-CH?- CHP-CHP-NH): 2.3 H-b et H-g); 1 .45 ( Données RMN 13 δ = 174.1 (C-i); 1
121 .1 (C-j, C-k, C- C-C2 2, C-C2 3 C-C
101 .2 (C-1 '); 98.8 73.6, 73.3, 71 .5, 7 C-3', C-3", C-4, C- 40.6 (CH2-Ç_H2-NH n C-o et C-p); 29.4
Données RMN 31 δ = 63.0 (s, P3=S);
III. Mise en évidence des propriétés anti-inflammatoires des mannodendrimères in vitro 1 . Inhibition de la liaison des cellules HEK : DC-SIGN au Mannane (Borrok, M. et al.
J Am Chem Soc 129. 12780-12785 (2007))
50 μΙ_ de mannane de Saccharomyces cerevisiae à 200 μg/mL en solution dans un mélange éthanol / eau (1 :1 ) sont déposés dans des puits de microplaque puis le solvant est évaporé. Les puits sont saturés 2 heures à température ambiante avec 200μί de PBS CaCI2 5% BSA. Pendant ce temps, des cellules HEK transfectées pour le récepteur DC-SIGN fusionné à la Green Fluorescent Protein (GFP) et à la DsRed sont marquées par du succinimidyl ester de carboxyfluorescéine di-acétate (CFDA, SE) à 10 μΜ dans 2mL de PBS, pendant 5 minutes à 37 <C. Le marquage est arrêté par ajout de 12mL de PBS CaCI2 0.5% BSA (Tampon A). Après centrifugation les cellules sont reprises à hauteur de 0.8.106 cellules / mL dans du tampon A. L'inhibition se déroule par co-incubation de 50 μΐ de tampon A ou d'une solution de mannodendrimère à différentes concentrations et 50 μΐ de suspension cellulaire (40 000 cellules) dans chaque puits pendant 1 h à 37°C à l'abri de la lumière. L'interaction du récepteur DC-SIGN exprimé par les cellules avec le mannane permet la rétention des cellules dans les puits. Les cellules en suspension liées au mannodendrimère sont délicatement éliminées par deux lavages avec du tampon A. Les cellules adhérentes sont ensuite lysées par ajout de Ι ΟΟμΙ par puits de tampon Tris 25mM, pH 8.4, 0.1 % SDS. L'intensité de fluorescence de chaque puits est quantifiée par un spectrofluorimètre à Âem= 530nm (Âex= 488nm). Le calcul des pourcentages et le tracé des courbes d'inhibition permettant de déterminer la concentration pour laquelle on observe 50% de l'effet (EC50) se fait à l'aide du logiciel GraphPad Prism.
Ce protocole est mis en œuvre avec des dendrimères préparés selon l'invention. Les résultats sont rassemblés sur la Figure 1 . 2. Inhibition de la production de cvtokine par des cellules dendritiques a) Purification de monocvtes issus de sang de donneur sain
Les cellules mononuclées du sang circulant (PBMC) sont obtenues à partir d'un buffy coat délivré par l'Etablissement Français du Sang (EFS). Elles sont isolées à l'aide d'un gradient de densité MSL (Eurobio) par centrifugation (300g, 30min à température ambiante). Après trois étapes de déplaquettation (reprise du culot en PBS, centrifugation à 120g, 10min à température ambiante), les monocytes sont purifiés par tri positif sur colonne à l'aide de billes magnétiques couplées à un anticorps anti-CD14 (MACS System, CD14 Microbeads, human, 130-050-201 , Miltenyi Biotec, Auburn, CA, USA). Les cellules sont incubées avec les billes pendant 30 minutes à 4<Ό, sous agitation. Après un lavage en PBS 0.5% SVF (Sérum de Veau Fœtal) décomplémenté (Lonza Bioscience) 2mM EDTA (sigma), la suspension billes-cellules est déposée sur une colonne placée devant un aimant (LS, Miltenyi Biotech). Après 3 lavages, la colonne est enlevée de l'aimant et les cellules CD14 positives sont éluées. Le taux de pureté obtenu en fin de colonne est vérifié par cytométrie en flux (>96%). Les monocytes sont ensuite ensemencés, en plaque 6 puits, à la concentration de 3.106 cellules/puits (2 mL) en RPMI Ultraglutamine, 10% SVF décomplémenté, 5mM β-mercaptoéthanol (sigma), 5.105 U/mL de GM-CSF et 1 .105U/mL d'IL-4, pendant 5 jours de différenciation. Tous les deux jours, δθθμί/ρυίίε de milieu RPMI 10% SVF décomplémenté, 50μΜ β-mercaptoéthanol sont ajoutés contenant la dose totale de cytokines pour le volume de chaque puits. b) Activation des cellules dendritiques
Les cellules dendritiques immatures au 5eme ou 6eme jour de culture sont stimulées 18 heures par 20ng/mL de LPS d'E. coli ultra-pur (fraction K12, Invivogen) en co- incubation avec ^g/mL de ManLAM bovis BCG (0.6μΜ) ou 0.3 et 0.6 μΜ de mannodendrimères préparés selon l'invention ou du milieu de culture (RPMI Ultraglutamine, 10% SVF décomplémenté, 50μΜ β-mercaptoéthanol) dans un volume final de 200μί, en microplaque.
Les résultats de ces expériences sont représentés sur la Figure 2.
L'effet du ManLAM ou des mannodendrimères préparés selon l'invention sur l'activation des cellules dendritiques par le LPS via DC-SIGN est confirmé par préincubation (30 min à 37 °C) des cellules immatures avec un anticorps antagoniste anti-DC- SIGN préalablement dialysé (AZN-D1 , 20μg/mL, Beckman Coulter). Le milieu de culture des cellules est récolté après 18 heures et est conservé à -20 °C. La détermination de la quantité de cytokines (TNF-α) produite et sécrétée par les cellules est mesurée à l'aide d'un kit ELISA (Diaclone), suivant les consignes du fabricant.
Les résultats de ces expériences sont représentés sur la Figure 3. IV. Mise en évidence des propriétés anti-inflammatoires des mannodendrimères in vivo
Des souris de fond génétique Balb/c ont été gavées pendant quinze jours avec une dose de mannodendrimère (1 mg/kg/jour) puis les animaux ont été soumis à une nébulisation de lipopolysaccharide bactérien (LPS de Pseudomonas aeruginosa, 30 minutes, 1 mg LPS/kg de souris) de façon à déclencher une inflammation pulmonaire. Après 24h, les souris sont soumises à un lavage broncho-alvéolaire et les cellules récupérées sont identifiées et comptées.
Les résultats de ces expériences sont représentés sur les Figures 4A et 4B.
D'une façon générale, la stimulation par le LPS induit au niveau des poumons un recrutement de cellules leucocytaires, principalement des macrophages, des cellules polynucléaires neutrophiles et dans une moindre mesure éosinophiles (cf. Figures 4A et 4B, comparaison du témoin salin NaCI avec le LPS).
On remarque que le mannodendrimère Gc3TriM inhibe de façon préventive le recrutement de cellules leucocytaires dans les poumons stimulés par le LPS (Figure 4A, LPS/LPS + Gc3TriM), et que cet effet inhibiteur est aussi observé sur le recrutement des neutrophiles (Figure 4B, LPS/LPS + Gc3TriM).
On remarque aussi que Gc3TriM seul induit un recrutement cellulaire dans les poumons (Figure 4A, témoin NaCI/Gc3TriM), mais que les cellules recrutées sont essentiellement des macrophages, le taux de neutrophiles n'étant pas significativement différent de celui du contrôle (Figure 4B, témoin NaCI/Gc3TriM).
Des coupes histologiques de poumons des souris, après lavage broncho-alvéolaires ont été réalisées, et colorées à l'hématoxyline et à l'éosine. Ces coupes montrent un épaississement de l'épithélium bronchique, signature d'une inflammation dans le cas du traitement par le LPS. Cet épaississement est nettement moindre dans le cas du traitement LPS + Gc3TriM ce qui confirme le contrôle du processus inflammatoire par le mannodendrimère. Enfin, les coupes histologiques dans le cas du traitement par Gc3TriM seul ne montrent aucune différence avec le contrôle salin, le recrutement de cellules leucocytaires observé ne correspond donc pas à un processus inflammatoire de l'épithélium, mais à un recrutement de macrophages non-activés.

Claims

REVENDICATIONS
1 . Dendrimère de génération g comprenant :
- un noyau central Φ de valence v ;
- des chaînes de génération en arborescence autour du noyau ;
- une chaîne intermédiaire à l'extrémité de chaque chaîne de génération g ou à l'extrémité de chaque liaison autour du noyau lorsque g = 0; et
- un groupe terminal∑ à l'extrémité de chaque chaîne intermédiaire, caractérisé en ce que chaque groupe ∑, identique ou différent, représente indépendamment un groupe monosaccharide, oligosaccharide ou polysaccharide, constitué de σ unité(s) saccharide, et où:
- g est un entier compris entre 0 et 10,
- v est un entier compris entre 1 et 10,
- σ est un entier compris entre 1 et 10,
- ladite chaîne intermédiaire est représentée par la formule (Cl) :
-A-(C=0)-Y-CH2-0- (Cl)
dans laquelle :
- Y représente un groupe alkyle en CrC2o, éventuellement substitué par un groupement choisi parmi le groupe consistant en : halogène, OH, O-alkyle, CF3, aryle, CN ; de préférence, Y représente un groupe alkyle linéaire en
- A représente une liaison ou un groupement :
dans lequel :
- Ar représente un cycle aromatique éventuellement substitué par un groupement choisi parmi le groupe consistant en : halogène, OH, O-alkyle, CF3, aryle, CN, de préférence un groupe phénylène,
- Ri représente un atome d'hydrogène ou groupe alkyle en CrC6, de préférence un atome d'hydrogène, et
- X représente un groupe alkyle en CrC6, éventuellement substitué par un groupement choisi parmi le groupe consistant en : halogène, OH, O-alkyle, CF3, aryle, CN ; de préférence, X représente un groupe alkyle linéaire en
2. Dendrimère selon la revendication 1 , tel que la chaîne intermédiaire est représentée par la formule (CI') : -0-C6H4-CH2-CH2-NH-(C=0)-(CH2)n-CH2-0- (Cl') où n est un entier compris entre 1 et 12, et -C6H4- représente un groupe phénylène clivaient.
Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, tel qu'il présente une structure de type PMMH, DAB-AM, PAMAM, PPI, polylysine ou polytriazine.
Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, tel que les chaînes de génération sont représentées par la formule (CG) :
-0-Ar'-Z=N-NR2-(P=S)< (CG)
Ar' est défini comme Ar, et représente de préférence un phénylène, Z est défini comme X, et représente de préférence CH, R2 est défini comme Ri , et représente de préférence un méthyle, et < représente deux liaisons situées sur l'atome de phosphore.
Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, tel que le noyau central Φ est choisi parmi les groupes suivants :
\ /
/ N N
I l I -P . N
S=P— / ' N-P.
\ N \ /
6. Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, tel que g est un entier compris entre 0 et 10, de préférence entre 0 et 4.
7. Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, tel que les groupes ∑ sont constitués d'au plus 3 unités saccharide, identiques ou différentes.
8. Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, tel que les unités saccharide constituant les groupes∑ sont choisies parmi le groupe des hexoses, et plus particulièrement des aldohéxoses.
9. Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, tel que les groupes ∑ sont identiques et sont constitués de mannose, et sont de préférence des dimannosides ou des trimannosides.
10. Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, tel que les groupes ∑ sont identiques et sont constitués de glucose, et sont de préférence des diglucosides ou des triglucosides.
1 1 . Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, tel qu'il est représenté selon la formule (1 ) suivante : -{{0-C6H4-(CH)=N-N(CH3)-(P=S)<}9[0-C6H4-CH2-CH2-NH-(C=0)-(CH2)n-CH2-0-∑]2}v (1 ) dans laquelle :
Φ,∑, g, n, v et < sont définis comme dans les revendications précédentes et { }9 désigne la structure en arborescence des chaînes de génération dudit dendrimère.
12. Procédé de préparation d'un dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1 , comprenant la réaction du dendrimère de génération g comprenant :
- un noyau central Φ de valence v ;
- des chaînes de génération en arborescence autour du noyau ; des terminaisons -NHRi ;
avec un composé acyl-azide de formule (3) :
N3-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (3)
où: g, Φ, v, Ri , Y et ∑ sont tels que définis précédemment et où les groupes -NHPt! sont éventuellement sous forme d'ions ammoniums - NH2Ri+, en équilibre avec la base conjuguée d'un acide faible ou fort.
13. Procédé de préparation d'un dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1 , comprenant la réaction du dendrimère de formule (2) :
0-{{O-Ar'-Z=N-NR2-(P=S)<}9[O-Ar-X-NHR1]2}v (2) avec un composé acyl-azide de formule (3) : N3-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (3) où: Φ, Ar, Ar', X, Y, Z, Ri , R2,∑, g, v, < et { }9 sont tels que définis selon l'une quelconque des revendications précédentes et où les groupes -NHRi sont éventuellement sous forme d'ions ammoniums -NH2Ri+, en équilibre avec la base conjuguée d'un acide faible ou fort.
14. Composés de formule (3) :
N3-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (3)
dans laquelle :
- ∑ et Y sont tels que définis selon l'une quelconque des revendications précédentes,
- σ est un entier compris entre 1 et 10. 15. Procédé de préparation d'un composé de formule (3) selon la revendication
14, comprenant :
(i") la réaction de l'ester de formule (7) :
R30-(C=0)-Y-CH2-0-∑ (7)
avec de l'hydrate d'hydrazine,
(ii")suivie de la réaction du composé obtenu en (i') avec du nitrite de sodium en milieu acide,
où R3 représente une chaîne alkyle linéaire Ci-Ce.
16. Médicament comprenant un dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1 et un excipient pharmaceutiquement acceptable.
17. Dendrimère selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1 pour son utilisation pour le traitement et/ou la prévention des désordres inflammatoires.
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