EP2445360A1 - Hydrolysat de proteines de poissons pour son utilisation dans l'inhibition de la prise de poids et/ou la perte de poids - Google Patents

Hydrolysat de proteines de poissons pour son utilisation dans l'inhibition de la prise de poids et/ou la perte de poids

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EP2445360A1
EP2445360A1 EP10728651A EP10728651A EP2445360A1 EP 2445360 A1 EP2445360 A1 EP 2445360A1 EP 10728651 A EP10728651 A EP 10728651A EP 10728651 A EP10728651 A EP 10728651A EP 2445360 A1 EP2445360 A1 EP 2445360A1
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EP
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weight
fish
hydrolyzate
protein
mice
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Withdrawn
Application number
EP10728651A
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German (de)
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Inventor
Elisa Courois
Hubert Drieu La Rochelle
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PECHES SAINT MALO SANTE CIE
Original Assignee
PECHES SAINT MALO SANTE CIE
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Publication date
Application filed by PECHES SAINT MALO SANTE CIE filed Critical PECHES SAINT MALO SANTE CIE
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    • A61K2800/92—Oral administration

Definitions

  • the present invention relates to fish protein hydrolysates for use in the induction of weight loss, limitation and / or inhibition of weight gain.
  • the invention also relates to such hydrolysates in the prevention and / or treatment of excess weight and / or health disorders related to excess weight.
  • the hydrolysates of fish proteins can be obtained chemically or enzymatically.
  • the hydrolysis of the proteins is carried out using a strong acid or a strong base, under strict conditions of pH. These hydrolysis conditions considerably alter the quality of the hydrolysates obtained.
  • the hydrolysates are obtained by hydrolysis of the proteins using endogenous enzymes or exogenous enzymes. These hydrolysis conditions lead to hydrolysates of better quality, particularly with regard to hydrolysis using heterogeneous enzymes which makes it possible to control the degree of hydrolysis.
  • being overweight is a constant concern today. In fact, being overweight can not only be a source of pain for the individual who suffers from it, but can also lead to more serious health problems.
  • Obesity for example, is a risk factor for many health problems, such as cardiovascular diseases, metabolic disorders, hypertension or even cancers.
  • the origins of being overweight are very varied. This phenomenon can for example be of behavioral origin, that is to say linked to bad eating habits, or even hormonal, as during the menopause in women.
  • Several solutions are now proposed to help treat these problems of overweight. Conventionally, the treatment or prevention of overweight can be achieved by a diet. However, it is known that such a diet is difficult to follow for many subjects and can, when it is poorly adapted, lead to nutrient deficiencies essential for the functioning of the human body.
  • An alternative is therefore the use of active ingredients capable of intervening in the mechanisms for limiting weight gain and / or weight loss.
  • the invention thus relates to the non-therapeutic use of a fish protein hydrolyzate obtained by enzymatic hydrolysis of at least one protein source chosen from the group consisting of fish Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombus scombrus, Sardina pilchardus , Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, fish belonging to the order of siluriformes, said enzymatic hydrolysis being carried out by an endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis, for the induction of weight loss, limitation or inhibition of weight gain.
  • a protein source chosen from the group consisting of fish Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombus scombrus, Sardina pilchardus , Trisopterus esmarki
  • the induction of weight loss, the limitation or the inhibition of weight gain include a decrease in body weight, in particular a decrease in fat mass, an improvement in the ratio fat mass / lean body mass, a decrease in adiposity, an improvement in body composition, a regulation of lipid metabolism, more particularly, a stimulation of lipolysis and / or an inhibition of lipogenesis.
  • the hydrolyzate according to the invention can be used in a diet slimming or preventive weight gain.
  • said hydrolyzate does not induce limitation of food intake or satiety phenomenon.
  • the fish protein hydrolyzate has: - the distribution of the following molecular profile: from 33 to 39% of molecules with a molecular weight of less than 300 Da, from 34 to 37% of molecules of which the molecular weight is between 300 and 1000 Da, from 21 to 24% of molecules whose molecular weight is between 1000 and 3000 Da, from 3 to 4% of molecules whose molecular weight is between 3000 and 3000 Da, 5,000 Da and 1 to 2% of molecules with a molecular weight between 5,000 and 10,000 Da,
  • lipid content of less than 1%, as a percentage of crude product
  • - a protein content greater than 80%, as a percentage of gross product, - A mineral content of between 5 and 10%, as a percentage of raw product.
  • the source of fish protein comprises the pulp obtained from the fillet of the fish or fish.
  • the fish protein hydrolyzate is obtained by a production process comprising:
  • At least one protein source selected from the group consisting of the fish species Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombrus scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris of fish belonging to the order of siluriformes, in the presence of water, so as to recover the pulp of said fish or fish,
  • said enzymatic hydrolysis is carried out according to an enzyme / protein source ratio of between 0.01 and 2%, preferably equal to 0.75%, and at a hydrolysis temperature equal to 55 ° C.
  • the endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis is preferably a metalloendopeptidase, or bacillolysin, belonging to EC class 3.4.24.28 of the EC classification established by the Enzyme Commission and published by the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (IUBMB). in 1992.
  • a fish protein hydrolyzate obtained by enzymatic hydrolysis of at least one protein source selected from the group consisting of fish Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombrus scombrus , Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, fish belonging to the order of siluriformes, said enzymatic hydrolysis being carried out by an endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis for use in the treatment and / or prevention of excess weight and / or are linked to being overweight.
  • protein source selected from the group consisting of fish Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scombrus scombrus , Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp.
  • the treatment and / or prevention of excess weight comprises the induction of weight loss, the limitation and / or the inhibition of weight gain, in particular the reduction of weight.
  • fat mass improvement of fat / lean mass ratio
  • treatment of adiposity regulation of lipid metabolism
  • stimulation of lipolysis stimulation of lipolysis and / or inhibition of lipogenesis.
  • excess weight is linked to obesity, disorders of general metabolism, or weight problems symptomatic of menopause.
  • the fish protein hydrolyzate is still used in the treatment and / or prevention of any disease related to excess weight. This will include, for example, cardiovascular disease, hypertension, hypercholesterolemia or atherosclerosis.
  • the fish protein hydrolyzate is as previously defined.
  • the hydrolyzate also does not induce limitation of food intake or satiety phenomenon.
  • the fish protein hydrolyzate as defined above can thus be used for the manufacture of a food supplement, or a pharmaceutical or nutraceutical composition, intended for the treatment and / or prevention of excess weight and / or diseases related to excess weight as stated above.
  • the fish protein hydrolyzate according to the invention may be used in any cosmetic slimming or slimming process.
  • the invention thus also relates to a method, or method, of non-therapeutic treatment for the induction of weight loss, the limitation or the inhibition of weight gain, characterized in that it consists in administering orally a fish protein hydrolyzate as defined above.
  • the invention relates to a method of therapeutic treatment and / or prevention for the induction of weight loss, limitation or inhibition of weight gain which is characterized in that it consists in administering orally a fish protein hydrolyzate as defined above.
  • Fig. 1 illustrates the weight, in grams (not reported at 100 g), of the measured uterus of the mice at the beginning of the first study,
  • Fig. 2 illustrates the accumulated weight gain in grams for each group of mice in the first three months of the first study
  • FIG. 3 represents the adiposity index, that is to say, the ratio of fat to lean mass, read
  • FIG. 4 illustrates the weight of the uterus of mice in grams per 100 grams of body weight measured at the beginning of the second study
  • Fig. 5 illustrates the accumulated weight gain in grams for each group of mice during the three months of the second study
  • Fig. 6 illustrates the proportion of total subcutaneous adipose tissue per 100 g of body weight, for each group of mice, at the end of the three months of the second study,
  • Fig. 7 presents the result of measurements of average meal sizes, expressed in grams, according to groups, and according to the period studied:
  • Fig. 8 presents the result of the measurements of the meal sizes expressed in grams per 100 g of body weight, depending on the groups, and according to the period studied in the second study,
  • Fig. 9 indicates the number of meals made according to the groups and the period studied in the second study
  • Fig. 10 indicates the mean activity of the mice, expressed in arbitrary units, relative to 100 g of body weight depending on the groups and the period studied in the second study
  • Fig. 11 illustrates the weight gain in grams over time for each group of animals in the third study
  • Fig. 12 shows the averages of the weight in grams of subcutaneous tissues and visceral tissues and body fat, measured once a week, by MRI, of the mice of the NL group during the third study,
  • Fig. 13 shows the average grams of subcutaneous tissues and visceral tissues as well as body fat, measured once a week for 14 weeks by MRI, of the mice of group HL during the third study,
  • FIG. 14 shows the averages of the weight in grams of subcutaneous tissues and visceral tissues and fat mass, measured at the end of the study, of the mice of the NL group during the third study
  • FIG. 15 shows the averages of the weight in grams of the subcutaneous tissues and visceral tissues as well as the fat mass, measured at the end of the study, of the mice of group HL during the third study
  • Fig. 16 represents the adiposity indices, that is to say, the ratio of the fat mass on the mass of the carcass, recorded at the end of the study, of the mice of the group HL and NL during the third study,
  • Fig. 17 illustrates the cumulative weight gain in grams found for each group of rats in Example 5,
  • Fig. 18 illustrates the cumulative food intake reported for each group of rats in Example 5.
  • Example 1 Protein hydrolyzate obtained from blue whiting
  • Blue whiting (Micromesistius poutassou) is a sin in the North Atlantic off Newfoundland. The fish are cut into fillets which are then ground to obtain the pulp. This fish pulp is a source of protein for the production of the hydrolyzate. The pulp is stored at -20 ° C. until use. Three kilograms of the previously thawed blue whiting pulp are mixed with water in a weight ratio of 1.
  • the temperature is raised to 55 ° C and an endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis, marketed under the name Corolase N by the AB Enzyme Company (FeldbergstraBe 78, D-64293, Darmstadt, Germany) is then added to the reaction mixture in an enzyme / protein source ratio of 0.75%.
  • an endopeptidase enzyme derived from Bacillus subtilis marketed under the name Corolase N by the AB Enzyme Company (FeldbergstraBe 78, D-64293, Darmstadt, Germany) is then added to the reaction mixture in an enzyme / protein source ratio of 0.75%.
  • the hydrolysis reaction is conducted for 2 hours then the enzyme is inactivated by raising the temperature of the reaction medium to 85 ° C. This temperature is maintained for 15 minutes.
  • the obtained blue whiting protein hydrolyzate hereinafter referred to as H1
  • H1 is then filtered through a sieve (2mm / 2mm mesh size) so as to remove the solids and then recovered in a container.
  • the fraction recovered in the container is then centrifuged for more or less 5 minutes, at a speed between 4000 and 7000 RPM. After removal of the pellet, the supernatant is recovered, lyophilized and stored in a cool, dry place, protected from light. The supernatant can also be atomized.
  • a determination of the molecular weights of the constituent peptides of each hydrolyzate of H1 to HI1 proteins is carried out by steric exclusion chromatography (SEC-HPLC).
  • the protein hydrolyzate in powder form after lyophilization is suspended in ultrapure water at a rate of 20 mg / ml, then filtered through a 0.45 ⁇ m membrane and analyzed by gel filtration with a Superdex Peptide HR column. 10/30, marketed by the company Pharmacia.
  • the matrix of the column consists of a porous gel crosslinked (13-15 ⁇ m diameter) agarose and dextran with a total volume of 24 mL. Its fractionation domain is between 100 and 7000 Da.
  • the column is mounted on an HPLC chain, marketed by Dionex, which is equipped with a pump (Dionex P680 module).
  • the measurement is performed by a multi-wavelength ultraviolet detector (Dionex UVD 170 U module).
  • the H1 protein hydrolyzate is eluted with a mobile phase containing acetonitrile, water and TFA. The elution lasts approximately 1 h at a flow rate of 0.5 ml / min.
  • the molecular weight distribution is calculated from the parameters of a calibration line obtained after passing through the following known molecular weight markers: Cytochrome C (12,400 Da), aprotinin (6,51 Da), gastrin I (2146 Da), substance P fragment 1-7 (1348 Da), glycine (75 Da) and leupeptin (463 Da). Data is collected using Chromeleon software (Dionex). Percentages of molecular weights are calculated using software (GPC Cirrus from Polymer Laboratories). The acquisition wavelength is 214 nm. The distribution of molecular weights according to dW / logM is given by the software. The percentage of the area under the curve corresponds to the percentage of molecules. The distribution of molecular weights by size class is given in Table 1:
  • the amino acid composition of the H1 protein hydrolyzate is given in Table 2 and is obtained by following the indications of the European Directive 98/64 / CE and the standard NF EN ISO 13904-October 2005.
  • the protein content is greater than 80%, as a percentage of crude product (standard NF V18-120-March 1997 corrected KJELDAHL).
  • the lipid content is less than 1%, as a percentage of gross product (according to European Directive 98/64 / EC).
  • the energy value of the H1 protein hydrolyzate is about 350 Kcal / 100g.
  • the carbohydrate content is less than 4% (deduced from the protein and carbohydrate contents and the energy value).
  • the protein hydrolyzate HI has been tested for its activity on weight in a mammal.
  • an ovariectomized mouse model was used to induce estrogen deficiency and to mimic a menopausal phenomenon.
  • a diet containing 14% by weight of H1 fish protein hydrolysates was compared to a standard control diet containing 14% by weight of caseins.
  • mice 36 C3H mice, provided by the Harlan breeding center, were placed in cages in a thermostated room at 22 ° C in an inverted day-night cycle (night from 6 am to 6 pm). The animals were accustomed to their environment and their food in powder form for 2 weeks. Each animal received water and ad libitum food (5 grams per day and per mouse) during the three months of the study.
  • mice At twelve weeks, the mice underwent either ovariectomy or surgery without removal of the ovaries. Following the operation, the animals were divided into 3 groups of 12 individuals according to the diets they would receive:
  • mice undergo ovariectomy and receive the control diet.
  • mice are operated without undergoing ovarian ablation and receive the control diet, ie 14% of caseins.
  • mice undergo ovariectomy and receive a diet containing 14% H1 (same composition as the control diet but the milk proteins are substituted with the fish protein hydrolyzate obtained according to Example 1).
  • mice are anesthetized (injection of 0.1 ml per 10 grams of body weight of a solution of xylazine 1 mg / ml and ketamine 10 mg / ml) and are sacrificed.
  • the body composition is established by taking and weighing the various adipose tissues (peri-ovarian, mesenteric, perirenal, subcutaneous, brown). The weight of different organs (kidney, liver, uterus, spleen, intestine) is also evaluated.
  • Fig. Figure 2 shows the cumulative weight gain in grams for each group of mice over the three months of the study. The values are given as an average plus or minus the standard deviation values. Groups with different letters are statistically different (p ⁇ 0.05). Before removal of the ovaries or operation without removal of the ovaries, all groups had a comparable average weight. From a diet month, differences appear between groups, differences that increase over time. Thus, as shown in FIG. 2, after 3 months of diet, the cumulative weight gain observed for control group 1 is statistically higher than that reported for groups 2 and 3 (very significant result p ⁇ 0.001). An "ovariectomy" effect is observed since the group 1 mice statistically take more weight than the group 2 control mice. This effect is not found in the group 3 mice since they are statistically leaner than group 1 mice after 3 months of diet. This observation confirms that the diet received by group 3 is effective in limiting weight gain caused by ovariectomy.
  • the diet based on hydrolyzate H1 limits weight gain compared to the diet consisting of caseins.
  • the diet based on hydrolyzate H1 induces a decrease in fat mass and an increase in lean mass, significantly improving the adiposity index.
  • mice 48 C3H mice, provided by the Harlan breeding center, were placed in cages in a thermostated room at 22 ° C in an inverted day-night cycle (night from 6 am to 6 pm). The animals were accustomed to their environment and their food in powder form for 2 weeks. Each animal received water and ad libitum food (5 grams per day and per mouse) during the three months of the study.
  • mice underwent either ovariectomy or surgery without removal of the ovaries. Following the operation, the animals were divided into 4 groups of 12 individuals according to the diets they would receive:
  • mice undergo ovariectomy and receive the control diet.
  • Group 2 The mice are operated without undergoing ovarian ablation and receive the control diet, ie 14.6% of caseins.
  • Group 3 The mice undergo ovariectomy and receive a diet containing 7.5% H1 (same composition as the control diet but a portion of the milk proteins are substituted by the fish protein hydrolyzate obtained according to the example 1).
  • mice undergo ovariectomy and receive a diet containing 12.5% H1 (same composition as the control diet but the milk proteins are substituted by the fish protein hydrolyzate obtained according to Example 1) .
  • mice are anesthetized (injection of 0.1 ml per 10 grams of body weight of a solution of xylazine 1 mg / ml and ketamine 10 mg / ml) and are sacrificed.
  • the body composition is established by taking and weighing the various adipose tissues (peri-ovarian, mesenteric, perirenal, subcutaneous, brown). The weight of different organs (kidney, liver, uterus, spleen, intestine) is also evaluated.
  • Fig. Figure 5 shows the cumulative weight gain in grams for each group of mice over the three months of the study.
  • Times I, II and III respectively correspond to the measurements made after one, two and three months of diet. The values are given as an average plus or minus the standard deviation values. Groups with different letters are statistically different (p ⁇ 0.05). Before removal of the ovaries (groups 1, 3 and 4) or operation without removal of the ovaries (group 2), all groups had a comparable average weight. After three months of dieting, significant differences appear between the groups. Thus, the cumulative weight gain observed for the control group 1 of ovariectomized mice is statistically higher than that reported for groups 2, 3 and 4.
  • the diet based on the H1 hydrolyzate at 12.5% and 7.5% concentrations significantly reduces weight gain induced by oophorectomy and from two months of regimen.
  • mice Five group 1 mice, six group 2 mice and five group 4 mice are individualized for five whole days in metabolic cages.
  • Fig. 7 presents the result of measurements of average meal sizes, expressed in grams, according to groups, and according to the period studied: P1: overall period; P2: day; P3: night.
  • Fig. Figure 8 presents the result of meal size measurements expressed in grams per 100 g body weight, depending on the groups, and depending on the period studied: P1: overall period; P2: day; P3: night.
  • Fig. 9 indicates the number of meals made according to the groups and the period studied: Pl: overall period; P2: day; P3: night. Groups with different letters are statistically different (p ⁇ 0.05).
  • FIG. 9 indicates significant differences between groups 4 and groups 1 or 2 with respect to the number of meals taken by the mice during the nocturnal period
  • mice whose diet food includes fish protein hydrolyzate, feed more often than mice whose diet does not include fish protein hydrolyzate.
  • Fig. 10 indicates the mean activity of the mice (arbitrary unit) relative to 100 g of body weight as a function of the groups and the period studied (P1, P2, P3).
  • Ovariectomy results in a significant decrease in total activity, as shown by the significant differences observed between group 1 (ovariectomized) and group 2 (non-ovariectomized) which shows a higher activity.
  • the H1 fish protein hydrolyzate obtained using an endopeptidase derived from Bacillus subtilis limited weight gain while it did not limit food intake.
  • the ingestion of this hydrolyzate was not accompanied by an increase in the physical activity of the mice. Its effect on the weight of the mice is therefore due to one or more physiological phenomena.
  • mice 72 male C3H mice were selected and divided into groups: - 3 groups receiving normo-lipid regimens (NL) including 0% (group named NL), 50% (group named NL 50%) or 80% (group named NL 80 %) of fish protein hydrolyzate H1, as a percentage of the total energy provided by the proteins.
  • - 3 groups receiving hyper-lipid diets (HL) including 0% (group named NL), 50% (group named HL 50%) or 80% (group named HL 80%) of fish protein hydrolyzate H1, in percentage compared to the total energy provided by the proteins.
  • the mice in each group are weighed weekly and their weight is noted. After fourteen weeks of diet, the mouse is sacrificed for analysis of the effect of hydrolyzate Hl on their body composition.
  • FIG. Figure 11 illustrates weight gain over time for each group of animals. The values are written as a mean in grams plus or minus the values of the standard deviation. Groups with different letters are statistically different (p ⁇ 0.05).
  • mice fed with the hydrolyzate H1 took up less weight than those who did not receive the hydrolyzate (groups NL and HL), in the case of a hyper-lipid diet as in that of a diet. with normal lipid.
  • the hydrolyzate according to the invention has made it possible to reduce or even significantly reduce weight gain.
  • the body composition of the mouse was analyzed during and at the end of the experiment.
  • the means, by group, of the weight in grams of the subcutaneous tissues, the visceral tissues, the fat mass as well as the mass of the carcasses are determined then noted.
  • mice The body composition of mice by magnetic resonance imaging (MRI) was performed immediately after metabolic cage once a week.
  • the mice were asleep with isoflurane using a mask (3% to sleep mice, reduced to 1% for the maintenance of sleep).
  • the rectal temperature of the mice was measured electronically (SA Instruments) and maintained at 37.0 ⁇ 0.5 ° C. by means of a heating mattress system.
  • the camera took 96 images that allowed a representation of the animal in 3 dimensions. These images being accurate only on 2cm, the animal had to be moved to have an image of the whole body.
  • the MIP AV® software used was then used to gather the photographs in order to reproduce an image of the whole body and process the data.
  • Figs. Figures 12 and 13 show the weights, in grams, of different adipose tissues of the NL and HL mice, respectively, determined once a week throughout the MRI study. Similarly, Figs. 14 and 15 illustrate the weights, in grams, of these different adipose tissues taken during the sacrifice of mice. Values are given as mean ⁇ SEM. Statistical differences: * p ⁇ 0.05; ** 0.000 Kp ⁇ 0.01; *** p ⁇ 0.0001.
  • hydrolyzate H1 into the mouse diet limited weight gain. This limitation of weight gain is related to body fat that is statistically lower in the groups that received the hydrolyzate compared to those that did not receive it.
  • adiposity index ratio of body fat to animal carcass weight
  • the adiposity index is significantly decreased in the mice ingesting the 80% NL and 80% HL diets compared to the respective control diets,
  • HL and NL that is to say without hydrolyzate H1.
  • the adiposity index tends to decrease in animals fed diets containing 50% Hl in protein energy intake.
  • liver of the animals that ingested the HL diet is larger than that of the control mice.
  • hydrolyzate Hl in diets results in a significant decrease in liver weight either when ingesting a NL control diet, or an HL diet.
  • Example 5 Biological activities of fish protein hydrolysates obtained using an enzyme derived from Bacillus licheniformis or a mixture of enzymes derived from Bacillus amyloliquefaciens and Bacillus licheniformis.
  • the rats were accustomed for one week to a normal protein diet P 14 lipid containing 14% of total milk protein (LRP), 56% of carbohydrates and 30% of lipids. They were fed ad libitum. After a week of habituation and once the desired weight reached, the rats were fed daily for 21 days with their experimental diet. The various groups received the scheme corresponding to their name.
  • LRP total milk protein
  • PLT Total Protein Milk Fish Protein: a natural marine source of protein from a lean, white-fleshed fish.
  • Peptide A Peptide obtained by an enzymatic hydrolysis process of blue whiting proteins using Alcalase® (enzyme derived from Bacillus licheniformis).
  • Peptide P peptide obtained by a process of enzymatic hydrolysis of blue whiting proteins using Protamex® (enzyme derived from Bacillus amyloliquefaciens and Bacillus licheniformis).
  • each group has the same food intake as the control diet (337 ⁇ 4 kJ).
  • the rats are then fed their experimental diet, a decrease in food intake is observed for the four groups compared to their period of habituation, but this decrease is not significant between the different Peptide and control groups (Fig. 18 ).
  • the groups that received hydrolysates of blue whiting protein obtained with Protamex® and Alcalase® enzymes did not ingest more food.
  • Peptide A and Peptide P groups and control groups Peptide A and Peptide P groups and control groups (PLT, Poisson Protein) for weight gain, it was concluded that Peptides A and P had no effect on the weight. Therefore, the research work was not continued with these two hydrolysates.

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Abstract

La présente invention concerne des hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids. L'invention concerne aussi de tels hydrolysats dans la prévention et/ou le traitement de l'excès de poids et/ou des troubles de la santé liés à l'excès de poids. Les hydrolysats de protéines selon l'invention sont obtenus par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis.

Description

Hydrolysat de protéines de poissons pour son utilisation dans l'inhibition de la prise de poids et/ou la perte de poids
La présente invention concerne des hydrolysats de protéines de poisson pour leur utilisation dans l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids. L'invention concerne aussi de tels hydrolysats dans la prévention et/ou le traitement de l'excès de poids et/ou des troubles de la santé liés à l'excès de poids.
Les hydrolysats de protéines de poisson peuvent être obtenus par voie chimique ou par voie enzymatique. Dans le premier cas, l'hydrolyse des protéines est réalisée à l'aide d'un acide fort ou d'une base forte, dans des conditions strictes de pH. Ces conditions d'hydrolyse altèrent considérablement la qualité des hydrolysats obtenus. Dans le second cas, les hydrolysats sont obtenus par hydrolyse des protéines à l'aide d'enzymes endogènes ou d'enzymes exogènes. Ces conditions d'hydrolyse aboutissent à des hydrolysats de meilleure qualité, notamment en ce qui concerne l'hydrolyse à l'aide d'enzymes hétérogènes qui permet de contrôler le degré d'hydrolyse.
De nombreuses études ont démontré que les hydrolysats issus des coproduits et produits de la pêche obtenus par voie enzymatique présentaient des propriétés nutritionnelles et fonctionnelles intéressantes (Quaglia et al. 1987; Shahidi et al. 1995; Liceaga-Gesualdo et al. 1999; Kristinsson et Rasco 2000; Liaset et al. 2003). En effet, la réaction d'hydrolyse enzymatique permet d'obtenir des peptides de poids moléculaire variés pouvant présenter des propriétés biologiques nouvelles par rapport à la protéine native. Par exemple, des études ont révélé que des hydrolysats de protéines de poissons, de crustacés et de mollusques, présentaient des propriétés anticoagulantes (Rajapakse et al. 2005), antiprolifératives de lignées cellulaires cancéreuses (Picot et al. 2006), réparatrices du tissu épithélial intestinal (Fitzgerald et al. 2005), antioxydantes (Chuang et al. 2000; Suetsuna et al. 2000; Kim et al. 2001; Suetsuna 2002; Wu et al. 2003; Jun et al. 2004; Suetsuna et al. 2004; Je et al. 2008; Raghavan et al. 2008), immunomodulatrices (Bogwald et al. 1996; Gildberg et al. 1996; Kotzamanis et al. 2007; Tang et al. 2008), et stimulatrices de la croissance de certaines lignées cellulaires (Ravallec-Plé ét al. 2000; Guerard ét al. 2001).
C'est ainsi que ces dernières années, de nombreuses industries pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires se sont intéressées aux propriétés fonctionnelles des hydrolysats de protéines de poisson ou de tout autre produit de la mer.
L'excès de poids est aujourd'hui une préoccupation constante. En effet, un excès de poids peut non seulement être à l'origine d'un mal être chez l'individu qui en souffre mais il peut également être à l'origine de troubles de la santé plus sérieux.
L'obésité, par exemple, est un facteur de risque de nombreux problèmes de santé, tels que des maladies cardiovasculaires, des troubles du métabolisme, de l'hypertension ou encore des cancers.
Les origines d'un excès de poids sont très variées. Ce phénomène peut par exemple être d'origine comportementale, c'est-à-dire lié à de mauvaises habitudes alimentaires, ou encore hormonale, comme au cours de la ménopause chez la femme. Plusieurs solutions sont aujourd'hui proposées pour permettre de traiter ces problèmes de surpoids. Classiquement, le traitement ou la prévention de la surcharge pondérale peut être réalisé par un régime alimentaire. On sait toutefois qu'un tel régime est difficile à suivre pour bon nombre de sujets et peut, lorsqu'il est mal adapté, entraîner des carences en nutriments essentiels au fonctionnement du corps humain. Une alternative est donc l'utilisation de principes actifs capables d'intervenir dans les mécanismes de limitation de prise de poids et/ou de perte de poids.
Dans ce contexte, les recherches effectuées par la société demanderesse ont permis d'identifier des hydrolysats obtenus à partir de l'hydrolyse enzymatique d'une source de protéines composée de certains poissons présentant des propriétés permettant d'induire chez un consommateur une perte de poids, une limitation ou une inhibition de la prise de poids.
L'invention concerne ainsi l'utilisation, non thérapeutique, d'un hydrolysat de protéines de poisson obtenu par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subîilis, pour l'induction de la perte de poids, la limitation ou l'inhibition de la prise de poids.
Selon un mode de réalisation de l'invention l'induction de la perte de poids, la limitation ou l'inhibition de la prise de poids incluent une diminution de la masse corporelle, en particulier une diminution de la masse grasse, une amélioration du ratio masse grasse/masse maigre, une diminution de l'adiposité, une amélioration de la composition corporelle, une régulation du métabolisme lipidique, plus particulièrement encore, une stimulation de la lipolyse et/ou une inhibition de la lipogénèse.
L'hydrolysat selon l'invention peut être utilisé dans un régime amincissant ou préventif de la prise de poids.
Selon une caractéristique de l'invention, ledit hydrolysat n'induit pas de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété.
Selon un mode de réalisation de l'invention, l'hydrolysat de protéines de poisson présente: - la répartition du profil moléculaire suivant : de 33 à 39 % de molécules de poids moléculaire inférieur à 300 Da, de 34 à 37 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 300 et 1 000 Da, de 21 à 24 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 1 000 et 3 000 Da, de 3 à 4 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 3 000 et 5 000 Da et de 1 à 2 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 5 000 et 10 000 Da,
- une teneur en lipides inférieure à 1 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en glucides inférieure à 4 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en protéines supérieure à 80 %, en pourcentage de produit brut, - une teneur en matière minérale comprise entre 5 et 10 %, en pourcentage de produit brut.
Il présente également avantageusement la composition en acides aminés suivante : Acide glutamique 16,9 %, Acide aspartique 11,7 %, Lysine 10 %, Leucine 8,2 %, Arginine 6,3 %, Alanine 6,8 %, Valine 4,8 %, Isoleucine 4,4 %, Glycine 5 %, Thréonine 4,5 %, Serine 4,4 %, Tyrosine 3,2 %, Phénylalanine 3,9 %, Méthionine 2,6 %, Proline 3,4 %, Histidine 2 %, Cystine 1 %, Tryptophane 0,8 %, en pourcentage en poids par rapport au poids total d'acides aminés.
Un tel hydrolysat ainsi que son procédé d'obtention est décrit dans la demande de brevet n° 08 00753 déposée par la société demanderesse, publiée sous le n° FR 2 927 336.
Préférentiellement, la source de protéines de poisson comprend la pulpe obtenue à partir du filet du ou des poissons.
Préférentiellement encore, l'hydrolysat de protéines de poisson est obtenu par un procédé d'obtention comprenant:
- le broyage d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des espèces de poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, de poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, en présence d'eau, de manière à récupérer la pulpe dudit ou desdits poissons,
- l'hydrolyse enzymatique de ladite source de protéines à une température comprise entre 50 et 75°C, pendant 1 à 5 heures, après l'ajout d'une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis de manière à obtenir un mélange réactionnel,
- l'arrêt de ladite hydrolyse enzymatique par inactivation desdites enzymes après élévation de la température dudit mélange réactionnel à un niveau non inférieur à 700C, pendant 8 à 20 minutes,
- la séparation de l'hydrolysat de protéines obtenu du reste du mélange réactionnel.
Avantageusement ladite hydrolyse enzymatique est réalisée selon un ratio enzyme/source de protéines compris entre 0,01 et 2 %, préférentiellement égal à 0,75 %, et à une température d'hydrolyse égale à 55°C. L'enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis est préférentiellement une métalloendopeptidase, ou bacillolysine, appartenant à la classe EC 3.4.24.28 de la classification EC établie par la Commission des enzymes et publiée par l'Union internationale de biochimie et de biologie moléculaire (IUBMB) en 1992. Selon un autre aspect de l'invention, celle-ci concerne encore un hydrolysat de protéines de poisson obtenu par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Trisopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aeglefinus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention des excès de poids et/ou des maladies liées à un excès de poids.
Selon un mode de réalisation de l'invention, le traitement et/ou la prévention des excès de poids comprend l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids, en particulier, la diminution de la masse grasse, l'amélioration du ratio masse grasse/masse maigre, le traitement de l'adiposité, la régulation du métabolisme lipidique, la stimulation de la lipolyse et/ou l'inhibition de la lipogénèse. Selon un mode de réalisation de l'invention, l'excès de poids est lié à l'obésité, aux troubles du métabolisme général, ou aux troubles du poids symptomatiques de la ménopause.
Puisqu'il agit sur le poids, il est envisagé que l'hydrolysat de protéines de poisson soit encore utilisé dans le traitement et/ou la prévention de toute maladie liée à un excès de poids. Il s'agira, par exemple, des maladies cardiovasculaires, de l'hypertension, de l'hypercholestérolémie ou de l'athérosclérose.
Dans ces modes de réalisation de l'invention, l'hydrolysat de protéines de poisson est tel que défini précédemment. En particulier, selon cet aspect de l'invention, l'hydrolysat n'induit pas non plus de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété.
L'hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment peut ainsi être utilisé pour la fabrication d'un complément alimentaire, ou d'une composition pharmaceutique ou nutraceutique, destiné au traitement et/ou à la prévention des excès de poids et/ou des maladies liées à un excès de poids comme énoncé précédemment. L'hydrolysat de protéines de poisson selon l'invention encore peut être utilisé dans tout procédé cosmétique d'amincissement ou d'amaigrissement.
L'invention concerne encore ainsi un procédé, ou une méthode, de traitement non thérapeutique pour l'induction de la perte de poids, la limitation ou l'inhibition de la prise de poids caractérisé en ce qu'il consiste à administrer par voie orale un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment.
Enfin, l'invention concerne une méthode de traitement et/ou de prévention thérapeutique pour l'induction de la perte de poids, la limitation ou l'inhibition de la prise de poids qui se caractérise en ce qu'elle consiste à administrer par voie orale un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini précédemment.
Les caractéristiques de l'invention mentionnées ci-dessus, ainsi que d'autres, apparaîtront plus clairement à la lecture de la description suivante d'un exemple de réalisation, ledit exemple se voulant illustratif et non limitatif.
La Fig. 1 illustre le poids, en gramme (non rapporté à 100 g), de l'utérus mesuré des souris au début de la première étude,
La Fig. 2 illustre le gain de poids cumulé en grammes relevé pour chaque groupe de souris au cours des trois mois de la première étude,
La Fig. 3 représente les index d'adiposité, c'est-à-dire, le rapport de la masse grasse sur la masse maigre, relevés, La Fig. 4 illustre le poids de l'utérus des souris en gramme pour 100 grammes de poids corporel mesuré au début de la seconde étude,
La Fig. 5 illustre le gain de poids cumulé en grammes relevé pour chaque groupe de souris au cours des trois mois de la seconde étude,
La Fig. 6 illustre la proportion de tissu adipeux sous-cutané total pour 100 g de poids corporel, pour chaque groupe de souris, à la fin des trois mois de la seconde étude,
La Fig. 7 présente le résultat des mesures des tailles moyennes des repas, exprimées en grammes, en fonction des groupes, et en fonction de la période étudiée:
La Fig. 8 présente le résultat des mesures des tailles des repas exprimées en grammes pour 100 g de poids corporel, en fonction des groupes, et en fonction de la période étudiée lors de la seconde étude,
La Fig. 9 indique le nombre de repas effectués en fonction des groupes et de la période étudiée lors de la seconde étude, et La Fig. 10 indique l'activité moyenne des souris, exprimée en unité arbitraire, rapportée à 100 g de poids corporel en fonction des groupes et de la période étudiée lors de la seconde étude,
La Fig. 11 illustre le gain de poids en gramme au cours du temps pour chaque groupe d'animaux au cours de la troisième étude,
La Fig. 12 illustre les moyennes des poids en grammes des tissus sous-cutanés et des tissus viscéraux ainsi que de la masse grasse, mesurés une fois par semaine, par IRM, des souris du groupe NL au cours de la troisième étude,
La Fig. 13 illustre les moyennes des poids en grammes des tissus sous-cutanés et des tissus viscéraux ainsi que de la masse grasse, mesurés une fois par semaine durant 14 semaines par IRM, des souris du groupe HL au cours de la troisième étude,
La Fig. 14 illustre les moyennes des poids en grammes des tissus sous-cutanés et des tissus viscéraux ainsi que de la masse grasse, mesurés à la fin de l'étude, des souris du groupe NL au cours de la troisième étude, La Fig. 15 illustre les moyennes des poids en grammes des tissus sous-cutanés et des tissus viscéraux ainsi que de la masse grasse, mesurés à la fin de l'étude, des souris du groupe HL au cours de la troisième étude,
La Fig. 16 représente les index d'adiposité, c'est-à-dire, le rapport de la masse grasse sur la masse de la carcasse, relevés à la fin de l'étude, des souris du groupe HL et NL au cours de la troisième étude,
La Fig. 17 illustre le gain de poids cumulé en grammes relevé pour chaque groupe de rats au cours de l'exemple 5,
La Fig. 18 illustre la prise alimentaire cumulée relevé pour chaque groupe de rats au cours de l'exemple 5.
Exemple 1: Hydrolysat de protéines obtenu à partir de merlan bleu
Le merlan bleu (Micromesistius poutassou) est péché en Atlantique Nord au large de Terre-Neuve. Les poissons sont débités en filets qui sont ensuite broyés de manière à en obtenir la pulpe. Cette pulpe de poisson constitue une source de protéines pour la production de l'hydrolysat. La pulpe est conservée à -200C jusqu'à utilisation. Trois kilos de la pulpe de merlan bleu préalablement décongelée sont mélangés à de l'eau selon un rapport massique de 1. La température est portée à 55°C et une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis, commercialisée sous le nom de Corolase N par la société AB Enzyme (FeldbergstraBe 78, D-64293, Darmstadt, Germany) est alors ajoutée dans le mélange réactionnel selon un ratio enzyme/source de protéines de 0,75 %.
La réaction d'hydrolyse est menée pendant 2 heures puis l'enzyme est inactivée par élévation de la température du milieu réactionnel à 85°C. Cette température est maintenue durant 15 minutes. L'hydrolysat de protéines de merlan bleu obtenu, dénommé par la suite Hl, est ensuite filtré sur un tamis (grillage de 2mm/2mm) de manière à éliminer les matières solides, puis récupéré dans un récipient. La fraction récupérée dans le récipient est alors centrifugée pendant 30 plus ou moins 5 minutes, à une vitesse comprise entre 4000 et 7000 RPM. Après élimination du culot, le surnageant est récupéré, lyophilisé et conservé dans un endroit frais et sec, à l'abri de la lumière. Le surnageant peut également être atomisé.
Exemple 2: Hydrolysat de protéines obtenu à partir d'autres espèces de poisson selon l'invention
Des hydrolysats de protéines de maquereau (H2) (scomber scombrus), chinchard (H3) (Trachurus spp.), grenadier (H4) (Coryphaenoides rupestris), tacaud (H5) {Tήsopterus esmarki), sardine (H6) (Sardina pilchardus), hareng (H7) (Clupea harengus), panga (H8) (poissons appartenant à l'ordre des siluriformes), lieu noir (HlO) (Pollachius virens), cabillaud (H9) (Gadus morhua) et églefin (H l 1) (Melanogrammus aeglefinus) ont été préparés selon le procédé de l'exemple 1.
Exemple 3: Analyses physico-chimiques des hydrolysats de protéines obtenus selon les exemples 1 et 2
Une détermination des poids moléculaires des peptides constitutifs de chaque hydrolysat de protéines Hl à HI l est réalisée par chromato graphie d'exclusion stérique (SEC-HPLC). L'hydrolysat de protéines sous forme de poudre après lyophilisation est suspendu dans de l'eau ultra pure à raison de 20 mg/mL, puis filtré sur une membrane de 0,45 μm et analysé par filtration sur gel avec une colonne Superdex Peptide HR 10/30, commercialisée par la société Pharmacia. La matrice de la colonne est composée d'un gel poreux réticulé (diamètre 13-15μm) d'agarose et de dextrane d'un volume total de 24 mL. Son domaine de fractionnement est compris entre 100 et 7000 Da. La colonne est montée sur une chaîne HPLC, commercialisée par la société Dionex, qui est équipée d'une pompe (module Dionex P680). La mesure est réalisée par un détecteur d'ultra violets multi longueur d'ondes (module Dionex UVD 170 U). L'hydrolysat de protéines Hl est élue par une phase mobile contenant de Pacétonitrile, de l'eau et du TFA. L'élution dure environ IH à un débit de 0.5mL/min.
La répartition des poids moléculaires est calculée à partir des paramètres d'une droite de calibration obtenue après le passage dans la colonne de marqueurs de poids moléculaires connus suivants: Cytochrome C (12 400 Da), aprotinine (6 51 1 Da), gastrine I (2 126 Da), substance P fragment 1-7 (1 348 Da), glycine (75 Da) et leupeptine (463 Da). Les données sont collectées grâce au logiciel Chromeleon (Dionex). Les pourcentages des poids moléculaires sont calculés à l'aide d'un logiciel (GPC Cirrus de chez Polymer Laboratories). La longueur d'onde d'acquisition est de 214 nm. La répartition des poids moléculaires en fonction dW/logM est donnée par le logiciel. Le pourcentage de l'aire sous la courbe correspond au pourcentage de molécules. La répartition des poids moléculaires par classe de taille est donnée dans le Tableau 1 :
La répartition des poids moléculaires par classe de taille est donnée dans le Tableau 1 suivant. Le pourcentage de l'aire sous la courbe correspond au pourcentage de molécules peptidiques.
Tous les hydrolysats montrent un profil de répartition des poids moléculaires identique.
Tableau 1
La composition en acides aminés de l'hydrolysat de protéines Hl est donnée dans le Tableau 2 et est obtenue en suivant les indications de la Directive Européenne 98/64/CE et de la norme NF EN ISO 13904-octobre 2005.
Tableau 2
La teneur en protéines est supérieure à 80 %, en pourcentage de produit brut (norme NF V18-120-Mars 1997 corrigée KJELDAHL). La teneur en lipides est inférieure à 1%, en pourcentage de produit brut (selon la directive européenne 98/64/CE).
La valeur énergétique de l'hydrolysat de protéines Hl est d'environ 350 Kcal/lOOg.
La teneur en glucides est inférieure à 4 % (déduite à partir des teneurs en protéines et glucides et de la valeur énergétique).
Exemple 4: Activités biologiques d'un hydrolysat de protéines de merlan bleu Hl
L'hydrolysat de protéines HI a été testé vis-à-vis de son activité sur le poids chez un mammifère. Lors des études qui suivent, un modèle de souris ovariectomisée a été utilisé afin d'induire une déficience en œstrogènes et de mimer un phénomène de ménopause.
Etude n°l:
Un régime contenant 14% en poids d'hydrolysats de protéines de poisson Hl a été comparé à un régime standard témoin contenant 14% en poids de caséines.
36 souris C3H, fournies par le centre d'élevage Harlan, ont été placées dans des cages au sein d'une pièce thermostatée à 22°C en cycle jour-nuit inversé (nuit de 6h à 18h). Les animaux ont été habitués à leur environnement et à leur nourriture sous forme de poudre pendant 2 semaines. Chaque animal a reçu de l'eau et de la nourriture ad libitum (5 grammes par jour et par souris) pendant les trois mois de l'étude.
A douze semaines, les souris ont subi soit une ovariectomie, soit une chirurgie sans ablation des ovaires. Suite à l'opération, les animaux ont été répartis en 3 groupes de 12 individus selon les régimes qu'ils allaient recevoir :
- Groupe 1 : Les souris subissent l'ovariectomie et reçoivent le régime contrôle.
- Groupe 2: Les souris sont opérées sans subir d'ablation des ovaires et reçoivent le régime contrôle, soit 14% de caséines.
- Groupe 3: Les souris subissent l'ovariectomie et reçoivent un régime contenant 14% de Hl (même composition que le régime contrôle mais les protéines de lait sont substituées par l'hydrolysat de protéines de poisson obtenu selon l'exemple 1).
Tous les régimes fournis contiennent 14% de protéines et sont de compositions énergétiques proches comme l'indique le tableau 3 ci-dessous.
Tableau 3
A l'issue de 3 mois de régime, les souris sont anesthésiées (injection de 0,1 ml pour 10 grammes de poids corporel d'une solution de xylazine lmg/ml et kétamine lOmg/ml) puis sont sacrifiées. La composition corporelle est établie par prélèvement et pesée des différents tissus adipeux (péri-ovarien, mésentérique, péri-rénal, sous- cutané, brun). Le poids de différents organes (rein, foie, utérus, rate, intestin) est également évalué.
Validation du modèle
Lors du sacrifice, le poids des utérus a été mesuré précisément afin de vérifier que l'ovariectomie avait été effectuée correctement. Dans un tel cas, l'utérus doit apparaître atrophié. Dans le cas contraire, les souris ont été exclues de l'étude. Ces résultats représentés sur la Fig. 1, laquelle rapporte le poids, en gramme (non rapporté à 100 g), de l'utérus mesuré des souris. Les résultats ont montré que les souris du groupe 2, qui n'ont pas subit d'ablation des ovaires, possédaient un utérus significativement plus gros que celui des souris de tous les autres groupes. Sur la
Fig. 1, les valeurs sont données sous forme de moyenne plus ou moins les valeurs d'écart-type. Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents
(p<0.05).
Aussi, aucun problème n'a été détecté lors de la vérification de l'efficacité de l'ovariectomie.
Gain de poids au cours du temps:
La Fig. 2 illustre le gain de poids cumulé en grammes relevé pour chaque groupe de souris au cours des trois mois de l'étude. Les valeurs sont données sous forme de moyenne plus ou moins les valeurs d'écart-type. Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents (p<0.05). Avant l'ablation des ovaires ou l'opération sans ablation des ovaires, tous les groupes avaient un poids moyen comparable. Dès un mois de régime, des différences apparaissent entre les groupes, différences qui s'accentuent au cours du temps. Ainsi, comme le montre la Fig. 2, après 3 mois de régime, le gain de poids cumulé observé pour le groupe témoin 1 est statistiquement plus élevé que celui rapporté pour les groupes 2 et 3 (résultat très significatif p<0, 001). Un effet « ovariectomie » est observé puisque les souris du groupe 1 prennent statistiquement plus de poids que les souris témoins du groupe 2. Cet effet n'est pas retrouvé chez les souris du groupe 3 puisqu'elles sont statistiquement plus maigres que les souris du groupe 1 après 3 mois de régime. Cette observation confirme que le régime reçu par le groupe 3 est efficace pour limiter la prise de poids engendrée par l'ovariectomie.
Le régime à base de l'hydrolysat Hl limite la prise de poids par rapport au régime constitué de caséines.
Index d'adiposité:
On a mesuré pour chacun des groupes à la fin des trois mois de l'étude les poids des carcasses, c'est-à-dire la masse maigre, ainsi que les masses adipeuses. Ces deux paramètres ont permis de calculer les index d'adiposité (rapport de la masse grasse sur la masse maigre) représentés sur la Fig. 3. Les index d'adiposité sont identiques en ce qui concerne les groupes 1 et 2 alors que celui du groupe 3 est statistiquement plus faible.
Le régime à base de l'hydrolysat Hl induit une diminution de la masse grasse et une augmentation de la masse maigre, améliorant significativement l'indice d'adiposité.
Etude n°2:
Des régimes contenant 7,5% ou 12,5 %, en poids, d'hydrolysats de protéines de poisson Hl ont été comparés à un régime standard témoin contenant 14,6%, en poids de caséines.
48 souris C3H, fournies par le centre d'élevage Harlan, ont été placées dans des cages au sein d'une pièce thermostatée à 22°C en cycle jour-nuit inversé (nuit de 6h à 18h). Les animaux ont été habitués à leur environnement et à leur nourriture sous forme de poudre pendant 2 semaines. Chaque animal a reçu de l'eau et de la nourriture ad libitum (5 grammes par jour et par souris) pendant les trois mois de l'étude.
A huit semaines, les souris ont subi soit une ovariectomie, soit une chirurgie sans ablation des ovaires. Suite à l'opération, les animaux ont été répartis en 4 groupes de 12 individus selon les régimes qu'ils allaient recevoir :
- Groupe 1 : Les souris subissent l'ovariectomie et reçoivent le régime contrôle.
- Groupe 2: Les souris sont opérées sans subir d'ablation des ovaires et reçoivent le régime contrôle, soit 14,6% de caséines. - Groupe 3: Les souris subissent l'ovariectomie et reçoivent un régime contenant 7,5 % de Hl (même composition que le régime contrôle mais une partie des protéines de lait sont substituées par l'hydrolysat de protéines de poisson obtenu selon l'exemple 1).
- Groupe 4: Les souris subissent l'ovariectomie et reçoivent un régime contenant 12,5 % de Hl (même composition que le régime contrôle mais les protéines de lait sont substituées par l'hydrolysat de protéines de poisson obtenu selon l'exemple 1).
La composition énergétique des régimes fournis est indiquée dans le tableau 4 ci-dessous.
Tableau 4
A l'issue de 3 mois de régime, les souris sont anesthésiées (injection de 0,1 ml pour 10 grammes de poids corporel d'une solution de xylazine lmg/ml et kétamine lOmg/ml) puis sont sacrifiées. La composition corporelle est établie par prélèvement et pesée des différents tissus adipeux (péri-ovarien, mésentérique, péri-rénal, sous- cutané, brun). Le poids de différents organes (rein, foie, utérus, rate, intestin) est également évalué.
Validation du modèle
Lors du sacrifice, le poids des utérus a été mesuré précisément afin de vérifier que l'ovariectomie avait été effectuée correctement (utérus atrophié) comme lors de l'étude n°l. Ces résultats représentés sur la Fig. 4 (poids de l'utérus en gramme pour 100 grammes de poids corporel) ont montré que les souris du groupe 2, qui n'ont pas subi d'ablation des ovaires, possédaient un utérus signifïcativement plus gros que celui des souris de tous les autres groupes. Sur la Fig. 4, les valeurs sont données sous forme de moyenne plus ou moins les valeurs d'écart-type. Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents (p<0.05).
Aucun problème n'a été détecté lors de la vérification de la validité du modèle.
Gain de poids au cours du temps:
La Fig. 5 illustre le gain de poids cumulé en grammes relevé pour chaque groupe de souris au cours des trois mois de l'étude. Les temps I, II et III correspondent respectivement aux mesures réalisées après un, deux et trois mois de régime. Les valeurs sont données sous forme de moyenne plus ou moins les valeurs d'écart-type. Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents (p<0.05). Avant l'ablation des ovaires (groupes 1, 3 et 4) ou l'opération sans ablation des ovaires (groupe 2), tous les groupes présentaient un poids moyen comparable. Après trois mois de régime, des différences significatives apparaissent entre les groupes. Ainsi, le gain de poids cumulé observé pour le groupe témoin 1 de souris ovariectomisées est statistiquement plus élevé que celui rapporté pour les groupes 2, 3 et 4. De plus, le gain de poids cumulé observé pour le groupe 4 qui a reçu la quantité la plus élevée d'hydrolysat de protéines de poisson est inférieur de manière significative au gain de poids cumulé observé pour le groupe 3. Il n'y a pas de différence significative entre les gains de poids cumulés relevés pour le groupe témoin 2 et le groupe 4. Ces observations démontrent que les hydrolysats de protéines de poisson reçus par les groupes 3 et 4 ont permis de limiter une prise de poids au cours du temps qui serait due à l'ovariectomie.
Aussi, le régime alimentaire à base de l'hydrolysat Hl aux concentrations 12,5 % et 7,5 % permet de diminuer signifïcativement la prise de poids induite par l'ovariectomie et ce dès deux mois de régime.
Proportion des tissus adipeux pour IQOg de poids corporel:
On a représenté sur la Fig. 6 la proportion des tissus adipeux sous-cutanés totaux pour 100 g de poids corporel, pour chaque groupe de souris, à la fin des trois mois de l'étude. On observe encore une différence significative entre les souris du groupe 4 et les souris ovariectomisées du groupe 1 qui n'ont pas reçu l'hydrolysat de protéines de poisson. Ces dernières présentent une proportion de tissu adipeux sous-cutané supérieure à celle mesurée pour les souris du groupe 4. Les régimes à base de l'hydrolysat Hl ont donc un effet positif sur la diminution du tissu adipeux.
Mesure de la prise alimentaire: Une étude sur la prise alimentaire par les souris a été réalisée afin de vérifier que l'effet observé sur le poids de l'hydrolysat de protéines de poisson n'est pas le résultat d'une aversion pour le régime, entraînant ainsi une perte de poids, ou bien encore le résultat d'un effet satiétogène de l'hydrolysat qui minimiserait la prise alimentaire.
Pour ce faire, cinq souris du groupe 1, six souris du groupe 2 et cinq souris du groupe 4 sont individualisées durant cinq jours entiers dans des cages métaboliques.
Ces cages métaboliques permettent d'enregistrer la quantité d'aliments ingérée en fonction du temps ainsi que de l'activité des souris. Les trois premiers jours sont des jours d'adaptation pour les souris à cet environnement. Les prises alimentaires et les activités sont mesurées les deux derniers jours. La nourriture est fournie sous forme semi- liquide durant les cinq jours.
Taille des repas pris par les souris:
La Fig. 7 présente le résultat des mesures des tailles moyennes des repas, exprimées en grammes, en fonction des groupes, et en fonction de la période étudiée: Pl : période globale; P2: jour; P3: nuit.
La Fig. 8 présente le résultat des mesures des tailles des repas exprimées en grammes pour 100 g de poids corporel, en fonction des groupes, et en fonction de la période étudiée: Pl : période globale; P2: jour; P3: nuit.
Nombre de repas effectués en fonction des groupes et de la période étudiée:
La Fig. 9 indique le nombre de repas effectués en fonction des groupes et de la période étudiée: Pl : période globale; P2: jour; P3: nuit. Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents (p<0.05).
Comme cela ressort des Figs. 7 et 8, aucune différence significative n'est observée entre les différents groupes en ce qui concerne la taille des repas. Par contre, la Fig. 9 indique des différences significatives entre les groupes 4 et les groupes 1 ou 2 en ce qui concerne le nombre de repas pris par les souris durant la période nocturne
(P3) ainsi que durant la période globale (Pl). Les souris du groupe 4, dont le régime alimentaire inclut l'hydrolysat de protéines de poisson, se nourrissent plus souvent que les souris dont le régime alimentaire n'inclut pas l'hydrolysat de protéines de poisson.
Cette étude démontre que l'hydrolysat de protéines de poisson n'a pas d'effet satiétogène et n'induit pas, de plus, d'aversion pour le régime alimentaire. Ainsi, le groupe recevant le régime contenant HI a une taille de repas identique aux autres groupes témoins, mais le nombre de repas est signifîcativement plus élevé. Donc le groupe recevant Hl ingère significativement plus de nourriture, mais il est significativement plus maigre que le groupe témoin recevant des caséines, et ce dès deux mois de régime.
Mesure de l'activité des animaux:
La Fig. 10 indique l'activité moyenne des souris (unité arbitraire) rapportée à 100 g de poids corporel en fonction des groupes et de la période étudiée (Pl, P2, P3).
L'ovariectomie entraîne une diminution significative de l'activité totale, comme le montrent les différences significatives observées entre le groupe 1 (ovariectomisé) et le groupe 2 (non ovariectomisé) lequel montre une activité supérieure.
L'ovariectomie des souris entraîne chez ces dernières une diminution significative de la dépense énergétique.
Conclusions
Ainsi, l'hydrolysat de protéines de poisson Hl obtenu à l'aide d'une endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis, a limité la prise de poids alors qu'il n'a pas limité la prise alimentaire. De plus, l'ingestion de cet hydrolysat ne s'est pas accompagnée d'une augmentation de l'activité physique des souris. Son effet sur le poids des souris est donc du à un ou plusieurs phénomènes physiologiques.
Etude n°3
72 souris C3H mâles ont été sélectionnées et réparties en groupes: - 3 groupes recevant des régimes normo-lipidiques (NL) incluant 0% (groupe nommé NL), 50 % (groupe nommé NL 50%) ou 80% (groupe nommé NL 80%) d'hydrolysat de protéines de poisson Hl, en pourcentage par rapport à l'énergie totale apportée par les protéines. - 3 groupes recevant des régimes hyper-lipidiques (HL) incluant 0% (groupe nommé NL), 50% (groupe nommé HL 50%) ou 80% (groupe nommé HL 80%) d'hydrolysat de protéines de poisson Hl, en pourcentage par rapport à l'énergie totale apportée par les protéines. Les souris de chaque groupe sont pesées toutes les semaines et leur poids est noté. Au bout de quatorze semaines de régime, les souries sont sacrifiées pour analyse de l'effet de l'hydrolysat Hl sur leur composition corporelle.
La Fig. 11 illustre le gain de poids au cours du temps pour chaque groupe d'animaux. Les valeurs sont notées sous forme de moyenne en grammes plus ou moins les valeurs de l'écart type. Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents (p<0,05).
On observe que les souris nourries avec l'hydrolysat Hl ont pris moins de poids que celle n'ayant pas reçu l'hydrolysat (groupes NL et HL), dans le cas d'un régime hyper-lipidique comme dans celui d'un régime normo-lipidique. L'hydrolysat selon l'invention a permis de réduire, ou encore de limiter, de manière significative la prise de poids.
La composition corporelle des souries a été analysée pendant ainsi qu'à la fin de l'expérience. Les moyennes, par groupe, des poids en grammes des tissus sous- cutanés, des tissus viscéraux, de la masse grasse ainsi que de la masse des carcasses sont déterminés puis notés.
La composition corporelle des souris par Imagerie à résonance magnétique (IRM) a été réalisée immédiatement après passage en cage métabolique une fois par semaine. Les souris ont été endormies à l'isoflurane à l'aide d'un masque (3% pour endormir les souris, réduit à 1% pour le maintien de l'endormissement). La température rectal des souris a été mesurée électroniquement (SA Instruments) et maintenue à 37,0 ± 0,5 0C grâce à un système de matelas chauffant. L'appareil prenait 96 images qui ont permis une représentation de l'animal en 3 dimensions. Ces images n'étant précises que sur 2cm, l'animal a du être déplacé pour avoir une image du corps entier. Le logiciel MIP AV® utilisé a permis ensuite de réunir les photographies afin de reproduire une image du corps entier et de traiter les données. Le tissu adipeux, qui apparaissait en blanc sur les photographies, a été délimité, et les tissus adipeux sous- cutané et viscéral ont été séparés. Ce traitement a été effectué sur toutes les images une par une. Les Fig. 12 et 13 représentent les poids, en grammes, de différents tissus adipeux des souris des groupes NL et HL, respectivement, déterminés une fois par semaine tout au long de l'étude par IRM. De même, les Fig. 14 et 15 illustrent les poids, en grammes, de ces différents tissus adipeux prélevés lors du sacrifice des souris. Les valeurs sont données sous forme de moyenne ± SEM. Différences statistiques : * p<0.05 ; ** 0.000 Kp<0.01 ; *** p< 0.0001.
L'ingestion de régimes enrichis en hydrolysat Hl entraîne une diminution significative de la masse grasse corporelle des souris par rapport au témoin n'ayant pas ingéré l'hydrolysat Hl. Cette différence est associée à une diminution du tissu adipeux sous-cutané (Fig. 12, 13, 14, 15).
Les analyses des images obtenues en IRM montrent qu'une diminution significative du poids de la masse grasse est observée chez les souris nourries avec les régimes enrichis hydrolysat en Hl (Fig. 12, 13). Dans le groupe HL, cette diminution significative s'observe seulement chez les animaux nourris avec le régime HL 80%. Cette différence est due uniquement à une diminution de la masse du tissu adipeux sous-cutané. En effet, l'enrichissement des régimes en hydrolysat Hl n'a pas d'effet sur le tissu adipeux viscéral des souris.
L'incorporation de l'hydrolysat Hl dans le régime des souries à limité la prise de poids. Cette limitation de la prise de poids est liée à la masse grasse qui est statistiquement inférieure chez les groupes qui ont reçus l'hydrolysat par rapport à ceux qui ne l'ont pas reçu.
Une diminution significative du poids de la masse grasse a également été observée à partir des compositions corporelles réalisées par dissections lors du sacrifice. Cette diminution est observée chez les souris ingérant le régime à 50% d'hydrolysat Hl mais est plus marquée chez les souris nourries avec le régime à 80%, par rapport à celles ingérant les régimes sans hydrolysat Hl. Cette diminution significative de poids se retrouve au niveau du tissu adipeux sous-cutané pour les deux groupes de souris (NL, HL) nourries avec les régimes enrichis en hydrolysat Hl.
Chez les animaux ayant ingéré le régime HL 50% l'ingestion n'a pas provoqué de diminution significative du poids de la masse grasse totale, seule une tendance est observée. Cependant, le poids du tissu adipeux sous-cutané est lui diminué de manière significative par rapport au régime HL contrôle. Par contre, une forte diminution de la masse grasse totale est observée chez les souris nourries avec le régime HL 80%. Les tissus adipeux sous-cutanés et viscéraux des souris sous ce régime sont aussi signifîcativement diminués.
Il a également été observé que l'ingestion de l'hydrolysat Hl diminuait la taille des adipocytes des tissus adipeux sous-cutané et épydidimaire. Cet effet n'a pas été observé sur le tissu adipeux viscéral.
L'indice d'adiposité (rapport entre la masse grasse et le poids de la carcasse des animaux) a également été calculé (Fig 16). Celui-ci augmente de manière significative après l'ingestion d'un régime HL par rapport à l'ingestion d'un régime contrôle.
L'indice d'adiposité est diminué de manière significative chez les souris ingérant les régimes NL 80% et HL 80% par rapport aux régimes contrôles respectifs,
HL et NL, c'est-à-dire sans hydrolysat Hl. L'indice d'adiposité tend à diminuer chez les animaux nourris avec les régimes à 50% de Hl dans l'apport énergétique protéique.
Au cours de cette étude, il a encore été observé que le foie des animaux qui ont ingéré le régime HL est plus gros que celui des souris contrôles. L'ajout de hydrolysat Hl dans les régimes engendre une diminution significative du poids du foie que ce soit lors de l'ingestion d'un régime contrôle NL, ou d'un régime HL.
Exemple 5: Activités biologiques d'hydrolysats de protéines de poissons obtenus à l'aide d'une enzyme dérivée de Bacillus licheniformis ou d'un mélange d'enzymes dérivées de Bacillus amyloliquefaciens et de Bacillus licheniformis.
Dans le but d'enrichir sa collection de peptides fonctionnels possédant une activité sur poids, la société demanderesse a poursuivi ses recherches en testant pour une telle activité des peptides obtenus par digestion enzymatique à l'aide d'autres enzymes que celle dérivée de Bacillus subtilis.
32 rats Wistar mâles pesant 344 ± 4 g ont été répartis en 4 groupes de 8 rats dénommés PLT, Protéine de Poisson, Peptide A, Peptide P. L'apport énergétique de chaque régime a été réalisé par 55 % de protéines, 30% de lipides et 15% de glucides. Ils ont été logés individuellement dans des cages grillagées, et placés dans une pièce thermostatée (22 ± 1°C) en cycle jour-nuit en sachant que les rats se nourrissent la nuit.
Les rats ont été habitués pendant une semaine à un régime normo -protéique P 14 lipidique contenant 14 % de protéines totales de lait (PLT), 56% de glucides et 30% de lipides. Ils ont été nourris ad libitum. Après une semaine d'habituation et une fois le poids voulu atteint, les rats ont été quotidiennement nourris pendant 21 jours avec leur régime expérimental. Les divers groupes ont reçu le régime correspondant à leur nom.
PLT : protéines totales de lait Protéine de Poisson : source naturelle marine de protéines issues d'un poisson maigre, à chair blanche.
Peptide A : peptide obtenu par un procédé d'hydrolyse enzymatique de protéines de merlan bleu à l'aide de l'Alcalase® (enzyme dérivée de Bacillus licheniformis).
Peptide P : peptide obtenu par un procédé d'hydrolyse enzymatique de protéines de merlan bleu à l'aide de la Protamex® (enzyme dérivée de Bacillus amyloliquefaciens et de Bacillus licheniformis).
Une pesée ainsi qu'une évaluation de leur consommation en grammes de poudre sont quotidiennement effectuées.
Evolution du poids
La Fig. 17 illustre le gain de poids cumulé au jour 21 des rats nourris ad libitum avec les régimes testés (les valeurs correspondent à la moyenne ± l'écart type, n=8). Les groupes n'ayant pas les mêmes lettres sont statistiquement différents (p<0.05). Après une semaine d'habituation aux conditions expérimentales, le poids des groupes n'est pas différent alors qu'ils sont nourris avec le régime témoin P14 (348 ± 5 g). A l'issue de l'expérience, la prise de poids cumulée ne fait pas apparaître de différence significative entre les groupes Peptide (Peptide A et Peptide P) et les groupes témoins PLT et Protéine de Poisson.
Prise alimentaire
Au cours de la période d'habituation, chaque groupe présente la même prise alimentaire qu'avec le régime témoin (337 ± 4 kJ). Lorsque les rats sont ensuite nourris avec leur régime expérimental, une diminution de la prise alimentaire est observée pour les quatre groupes par rapport à leur période d'habituation mais cette diminution n'est pas significative entre les différents groupes Peptide et témoins (Fig. 18). Les groupes ayant reçu les hydrolysats de protéines de merlan bleu obtenus à l'aide des enzymes Protamex® et Alcalase® n'ont pas ingéré plus de nourriture. A la vue d'aucune différence entre les groupes Peptide A et Peptide P et les groupes témoins (PLT, Protéine de Poisson ) concernant le gain de poids, il a été conclu que les Peptides A et P n'avait pas d'effet sur le poids. Par conséquent, les travaux de recherche n'ont pas été poursuivis avec ces deux hydrolysats.

Claims

REVENDICATIONS
1) Utilisation non thérapeutique d'un hydrolysat de protéines de poisson obtenu par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Tήsopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aegleβnus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis, pour l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids.
2) Utilisation selon la revendication 1 , dans laquelle l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids comprend la diminution de la masse grasse, l'amélioration du ratio masse grasse/masse maigre, la diminution de l'adiposité, la régulation du métabolisme lipidique, plus particulièrement, la stimulation de la lipolyse et/ou l'inhibition de la lipogénèse.
3) Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'hydrolysat de protéines de poisson présente:
- la répartition du profil moléculaire suivant : de 33 à 39 % de molécules de poids moléculaire inférieur à 300 Da, de 34 à 37 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 300 et 1 000 Da, de 21 à 24 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 1 000 et 3 000 Da, de 3 à 4 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 3 000 et 5 000 Da et de 1 à 2 % de molécules dont le poids moléculaire est compris entre 5 000 et 10 000 Da, - une teneur en lipides inférieure à 1 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en glucides inférieure à 4 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en protéines supérieure à 80 %, en pourcentage de produit brut,
- une teneur en matière minérale comprise entre 5 et 10 %, en pourcentage de produit brut. 4) Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle l'hydrolysat de protéines de poisson est obtenu par un procédé d'obtention comprenant:
- le broyage d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des espèces de poissons Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Tήsopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aegleβnus, Coryphaenoides rupestris, de poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, en présence d'eau, de manière à récupérer la pulpe dudit ou desdits poissons, - l'hydrolyse enzymatique de ladite source de protéines à une température comprise entre 50 et 75°C, pendant 1 à 5 heures, après l'ajout d'une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis de manière à obtenir un mélange réactionnel,
- l'arrêt de ladite hydrolyse enzymatique par inactivation desdites enzymes après élévation de la température dudit mélange réactionnel à un niveau non inférieur à
700C, pendant 8 à 20 minutes,
- la séparation de l'hydrolysat de protéines obtenu du reste du mélange réactionnel.
5) Utilisation selon l'une des revendications précédentes, dans laquelle ladite hydrolyse enzymatique est réalisée selon un ratio enzyme/source de protéines compris entre 0,01 et 2 %, préférentiellement égal à 0,75 %, et à une température d'hydrolyse égale à 55°C.
6) Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5 dans laquelle ledit hydrolysat n'induit pas de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété. 7) Utilisation d'un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini dans l'une des revendications 1 à 5 pour la fabrication d'un complément alimentaire, ou d'une composition pharmaceutique ou nutraceutique, destiné traitement et/ou la prévention des excès de poids et/ou des maladies liées à un excès de poids.
8) Utilisation selon la revendication 7, dans laquelle le traitement ou la prévention des excès de poids comprend l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids, en particulier la diminution de la masse grasse, l'amélioration du ratio masse grasse/masse maigre, le traitement de l'adiposité, la régulation du métabolisme lipidique, la stimulation de la lipolyse et/ou l'inhibition de la lipogénèse. 9) Utilisation selon la revendication 7 ou 8, dans laquelle l'excès de poids est lié à l'obésité, aux troubles du métabolisme général, ou aux troubles du poids symptomatiques de la ménopause. 10) Utilisation selon l'une des revendications 7 à 9, dans laquelle ledit hydrolysat n'induit pas de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété.
11) Hydrolysat de protéines de poisson obtenu par hydrolyse enzymatique d'au moins une source de protéines choisie parmi le groupe composé des poissons
Micromesistius poutassou, Clupea harengus, Scomber scombrus, Sardina pilchardus, Tήsopterus esmarki, Trachurus spp., Gadus morhua, Pollachius virens, Melanogrammus aegleβnus, Coryphaenoides rupestris, des poissons appartenant à l'ordre des siluriformes, ladite hydrolyse enzymatique étant réalisée par une enzyme endopeptidase dérivée de Bacillus subtilis pour son utilisation dans le traitement et/ou la prévention des excès de poids et/ou des maladies liées à un excès de poids.
12) Hydrolysat de protéines de poisson selon la revendication 11, caractérisé en ce que le traitement et/ou la prévention des excès de poids comprend l'induction de la perte de poids, la limitation et/ou l'inhibition de la prise de poids, en particulier la diminution de la masse grasse, l'amélioration du ratio masse grasse/masse maigre, le traitement de l'adiposité, la régulation du métabolisme lipidique, la stimulation de la lipolyse et/ou l'inhibition de la lipogénèse.
13) Hydrolysat de protéines de poisson selon la revendication 1 1 ou 12, caractérisé en ce que l'excès de poids est liée à l'obésité, au troubles du métabolisme général, ou au troubles du poids symptomatiques de la ménopause.
14) Hydrolysat de protéines de poisson selon la revendication l i a 13, caractérisé en ce qu'il est tel que défini dans les revendications 1 à 5.
15) Hydrolysat de protéines de poisson selon la revendication 11 à 13, caractérisé en ce qu'il n'induit pas de limitation de la prise alimentaire ou de phénomène de satiété.
16) Procédé de traitement non thérapeutique pour l'induction de la perte de poids, la limitation ou l'inhibition de la prise de poids caractérisé en ce qu'il consiste à administrer par voie orale un hydrolysat de protéines de poisson tel que défini dans les revendications 1 à 5.
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