EP2240471A1 - Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl) maleimide, et leur utilisation dans l'inhibition d'enzymes dde/ddd - Google Patents

Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl) maleimide, et leur utilisation dans l'inhibition d'enzymes dde/ddd

Info

Publication number
EP2240471A1
EP2240471A1 EP09708488A EP09708488A EP2240471A1 EP 2240471 A1 EP2240471 A1 EP 2240471A1 EP 09708488 A EP09708488 A EP 09708488A EP 09708488 A EP09708488 A EP 09708488A EP 2240471 A1 EP2240471 A1 EP 2240471A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
molecule
hiv
group
substituted
virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP09708488A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Marie-Claude Viaud-Massuard
Jérôme GUILLARD
Yves Bigot
Corinne Auge-Gouillou
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Tours
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite Francois Rabelais de Tours
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Universite Francois Rabelais de Tours filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP2240471A1 publication Critical patent/EP2240471A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the invention relates to the field of catalytic pocket enzyme inhibitors comprising invariant amino acids D, D and E or D, D and D, such as transposases or retroviral integrases, and the use of these enzymes. inhibitors in in vitro tests, or in the treatment of pathologies associated with these enzymes in an animal or human host.
  • the invention also relates to a system for screening such inhibitors, in particular in vitro in eukaryotic cells.
  • Transposases and retroviral integrases are enzymes that promote the displacement of DNA segments within the same genome or between genomes. These enzymes, although from different organisms, have structurally similar catalytic domains. Thus, crystallographic studies have shown that despite the absence of similarity of their polypeptide sequences, the structure of the catalytic core (or pocket), especially the location of a triad of invariant DDE / D residues, is largely superimposable. for at least three transposases (MuA, Tn5 and MOS1) (10, 12) and at least two integrases (HIV-1 and ASV) (12, 13).
  • Tn5 transposase can be used to identify inhibitors of HIV-1 integrase (14, 15).
  • DNA transposons are class II transposable elements that correspond to discrete DNA segments that are "naturally" capable of moving within the genomes (for synthesis, see (1)).
  • experience has shown that some of them have a high ability to move in species that are weakly related to the host within which they were initially isolated.
  • These properties have allowed develop transposon-based tools for insertional mutagenesis and germinal transgenesis in model organisms, and potentially for gene therapy.
  • the transposons Mos1 (2), Himari (3), Minos (4), PiggyBac (5), Sleeping Beauty (6) and Tol2 (7) were selected as main candidates for the development of such tools (transposons tools).
  • Mos1 is a 1286 bp element, terminated by inverted repeats (ITR) of 28 bp.
  • Mos1 contains a single open reading frame encoding MOS1 (a transposase of 345 amino acids) and moves within the genome of its hosts by a cut-and-paste mechanism. The entire mechanism consists of four main steps: [1 and 2] homodimerization of MOS1, and assembly of the synaptic complex, [3] excision of Mos1, and [4] recognition of the target and insertion of Mos1 into a new locus ( Figure 2). This activity is based on a triad of amino acids, DD34D, which chelate the cations necessary for catalysis (10).
  • the Mos1 transposase belongs to the large family of "DDE enzymes" (11). In this group, the mariner transposases are an exception because they have a DDD triad.
  • the retroviral integrase (encoded by the pol gene of a retrovirus) is an enzyme which ensures the integration of the viral genome (retrotranscription in the form of double-stranded DNA) into the genome of the infected cell (target DNA ). Indeed, integrase provides two enzymatic functions in the integration process: DNA cleavage and strand transfer. Thus, the integrase (IN) recognizes and fixes the att terminal viral site at the end of the retroviral long terminal repeat (LTR), and catalyzes the excision of two base pairs in the 3 'portion of these LTRs.
  • LTR retroviral long terminal repeat
  • the viral DNA is imported, via a protein / DNA complex (PIC or pre integration complex) into the nucleus of the host cell, where the integrase then cleaves the target DNA to form free 5 'ends which are linked to the free 3 'OH parts of the viral DNA.
  • PIC protein / DNA complex
  • the catalytic domain of the retroviral integrases contains the invariant triad of DD-35-E motif, comprising residues D64, D116 and E152 respectively in the case of HIV-1 integrase or D64, D121 and E157 in the case Roux sarcoma virus (RSV).
  • RSV Roux sarcoma virus
  • the present invention is directed to molecules which share a bis- (heteroaryl) maleimide structure and have the following Formula I:
  • the group R 1 is chosen from the group containing a hydrogen, a linear or branched alkyl, an alkenyl, an alkynyl, a cycloalkyl, a heterocyclyl, a heteroaryl, a heteroaralkyl, a heteroalkoxy, a carboxyl, alkoxycarbonyl, tetrazolyl, acyl, arylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, phenyl, hydroxyphenyl or a group
  • R 1 is H.
  • R 1 is an optionally substituted phenyl group such as 4-hydroxyphenyl.
  • R 1 has the following formula:
  • R 2 or R 3 is COOH.
  • Ar 1 and Ar 2 are chosen, independently of one another, and consist of a cycloalkyl (C5 or C6) substituted or not, a heteroaryl substituted or unsubstituted or substituted aryl, linear or branched heteroalkyl.
  • the cycloalkyl may also comprise one or more heteroatoms chosen from N, O and S.
  • Ar 1 and / or Ar 2 are chosen independently of each other from monocyclic heteroaryls, substituted or unsubstituted.
  • Ar 1 consists of a monocyclic heteroaryl bearing R 2 , selected from the group R 2 -pyridyl, R 2 -pyrazinyl, R 2 -furanyl, R 2 -thienyl,
  • Ar 2 is, independently of Ar 1 , consisting of a monocyclic heteroaryl bearing R 3 , selected from the group R 3 -pyridyl, R 3 -pyrazinyl, R 3 -furanyl, R 3 -thienyl, R 3 -pyrimidinyl, R 3 -isoxazolyl, R 3 -isothiazolyl, R 3 -oxazolyl, R 3 -thiazolyl, R 3 -pyrazolyl, R 3 -furazanyl, R 3 -pyrrolyl, R 3 -pyrazolyl, R 3 -triazolyl, R 3 -pyrazinyl and R 3 -pyhdazinyl, said monocyclic heteroaryl being substituted or not.
  • R 3 -pyridyl R 3 -pyrazinyl
  • R 3 -furanyl R 3 -thienyl
  • Ar 1 or Ar 2 is a furan.
  • Ar 1 and / or Ar 2 are respectively an R 2 -furanyl group and an R 3 -furanyl group.
  • Ar 1 and / or Ar 2 are, independently of one another, respectively R 2 -fur-2-yl, R 2 -fur-3-yl or R 2 -fur-4- and R 3 -fur-2-yl, R 3 -fur-3-yl or R 3 -fur-4-yl.
  • Ar 1 and Ar 2 are respectively R 2 -fur-2-yl and R 3 -fur-2-yl.
  • the groups R 2 and / or R 3 are carried in position 3, 4 or 5, in particular in position 5.
  • the application relates in particular to a molecule, comprising a bis (heteroaryl) maleimide structure, of formula (I):
  • R 1 is selected from the group consisting of hydrogen, linear or branched alkyl, alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, heterocyclyl, heteroaryl, heteroaralkyl, a heteroalkoxy, a carboxyl, an alkoxycarbonyl, a tetrazolyl, an acyl, an arylsulfonyl, a heteroarylsulfonyl, a phenyl, a hydroxyphenyl or a group
  • COOEt - R 2 and R 3 are chosen, independently of one another, in the group consisting of a hydrogen atom, a carboxylic acid, a cyano, an oxime, an ether of oxime, a tetrazole, an ester, a substituted or unsubstituted amide, an acid, a diacid, a cycloalkylcarboxylic acid, a substituted or unsubstituted aryl, a heteroaryl substituted or not, and the grouping
  • Ar 1 and Ar 2 are chosen, independently of one another, and consist of a substituted or unsubstituted cycloalkyl, of a substituted or unsubstituted heteroaryl, of a substituted or unsubstituted aryl, of a heteroalkyl linear or branched; and wherein it is excluded that R 1 , R 2 and R 3 are together H;
  • R 2 and R 3 are identical, and the molecule according to the invention has the following formula (Ia):
  • R 1 , R 2 , Ar 1 and Ar 2 are as defined above.
  • Ar 1 and Ar 2 are identical and the molecule according to the invention corresponds to the following formula (Ib): wherein R 1 , R 2 , R 3 and Ar 1 are as defined above.
  • R 2 and R 3 on the one hand, and Ar 1 and Ar 2 on the other hand, are identical, and the molecule according to the invention corresponds to the formula ( Ic) next
  • R 1 , R 2 and Ar 1 are as defined above.
  • a particular molecule of the invention is a molecule in which Ar 1 and Ar 2 are furan, and which has the following formula (II):
  • R ', R z and R 3 are as defined above.
  • the molecule of formula (II) has identical groups R 2 and R 3 , and corresponds to the following formula (Ma):
  • the molecule of the invention according to formula (I), (Ia), (Ib), (Ic), (II) or (Ma) is "N-substituted", c that is, the group R 1 , in the definition given above, is other than a hydrogen atom.
  • the nature of the groups R 2 and R 3 is chosen from the possibilities given above.
  • the molecule of the invention according to formula (I) (la), (Ib), (Ic), (II) or (Ma) is not N substituted (and is therefore qualified as a "non-N-substituted” molecule), that is to say that the group R 1 is a hydrogen atom.
  • the groups R 2 and R 3 independently of one another correspond to one of the possibilities given above, with the exception of the hydrogen atom (since R 1 , R 2 and R 3 can not together be a hydrogen atom).
  • FIG. 11 An example of synthesis of particular molecules according to the invention is shown in Figure 11.
  • the application also relates to any molecule corresponding to formula (I), and obtained according to a similar or identical synthesis.
  • the invention also relates to the molecules described in the present application, in the form of physiologically acceptable salts.
  • physiologically acceptable salts include basic salts such as alkali metal salts (e.g., sodium or potassium) or alkaline earth metal salts (e.g., calcium), organic basic salts and amino acid salts .
  • Embodiments defined or illustrated by reference to molecules (I), (Ia), (Ib), (Ic), (II) or (Ma) also apply to the physiologically acceptable salts of these molecules.
  • alkyl is meant a hydrocarbon chain, linear or branched, of 1 to 20 carbon atoms, preferably 1 to 12 carbon atoms, more preferably 1 to 6 carbon atoms.
  • alkenyl is meant a linear or branched aliphatic hydrocarbon group having at least one carbon-carbon double bond, and 2 to 20 carbon atoms, preferably 2 to 12 carbon atoms, more preferably 2 to 12 carbon atoms. 6 carbon atoms.
  • alkenyl groups are: ethenyl, propenyl, n-butenyl, n-pentenyl, octenyl and decenyl.
  • alkynyl is meant a linear or branched aliphatic hydrocarbon group having at least one carbon-carbon triple bond, and from 2 to 15 carbon atoms, preferably 2 to 12 carbon atoms, more preferably 2 to 12 carbon atoms. 4 carbon atoms.
  • alkynyl groups are: ethynyl, propynyl, 2-butynyl, 3-methylbutynyl, n-pentynyl, and decynyl.
  • aryl is meant a monocyclic or multicyclic aromatic group system comprising at least one aromatic ring comprising from 6 to 14 carbon atoms, and preferably from 6 to 10 carbon atoms.
  • a nonlimiting example of an aryl group is phenyl.
  • the aryl group may be unsubstituted or substituted with 1, 2 or 3 substituents independently selected from each other.
  • a non-limiting example of a substituted aryl group is hydroxyphenyl.
  • arylalkyl is meant an aryl group as defined above attached to an alkyl group as defined above, the link to the parent group is effected by the alkyl group.
  • a nonlimiting example of an arylalkyl group is benzyl.
  • cycloalkyl is meant a saturated carbocyclic system of 3 to 10 (for example 3 to 7) carbon atoms, preferably 5 to 10 carbon atoms, and more preferably 5 to 7 carbon atoms and having 1 to 10 carbon atoms. , 2 or 3 cycles.
  • Nonlimiting examples of a cycloalkyl group are cyclopropyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
  • Halogen means fluorine groups, chlorine, bromine or iodine.
  • heteroaryl is meant a system of 5 to 14, preferably 5 to 10, single or fused aromatic rings, these rings comprising 1, 2 or 3 heteroatoms independently selected from O, S and N , knowing that the nuclei do not have adjacent oxygen or sulfur atoms.
  • a preferred heteroaryl group contains from 5 to 6 atoms.
  • the heteroaryl is monocyclic.
  • the heteroaryl group may be unsubstituted or substituted with 1, 2 or 3 substituents independently selected from each other.
  • heteroaryl groups are: pyridyl, pyrazinyl, furanyl, thienyl, pyrimidinyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, thiazolyl, pyrazolyl, furazanyl, pyrrolyl, pyrazolyl, triazolyl, 1, 2, 4-thiadiazolyl, pyrazinyl, pyridazinyl, quinoxalinyl , phthalazinyl, imidazo [1,2-a] pyridinyl, imidazo [2,1-b] thiazolyl, benzofurazanyl, indolyl, azaindolyl, benzimidazolyl, benzothienyl, quinolinyl, imidazolyl, thienopyridyl, quinazolinyl, thienopyrimidyl, pyrrolopyridyl,
  • monocyclic heteroaryls are pyridyl, pyrazinyl, furanyl, thienyl, pyrimidinyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, thiazolyl, pyrazolyl, furazanyl, pyrrolyl, pyrazolyl, triazolyl, pyrazinyl and pyridazinyl.
  • the preferred monocyclic heteroaryl is furanyl.
  • the monocyclic heteroaryl may be unsubstituted or substituted with 1, 2 or 3 substituents independently selected from each other.
  • heterocyclyl or “heterocycloalkyl” is meant a saturated, monocyclic or multicylic non-aromatic system comprising from 3 to 10 (for example 3 to 7) carbon atoms, preferably 5 to 10 carbon atoms, and more preferably 5 to 7 carbon atoms and having 1, 2 or 3 rings, wherein one or more of the atoms of the system is an element other than a carbon atom, such as a sulfur, oxygen and / or or nitrogen.
  • arylsulfonyl is meant a group -S ⁇ 2-aryl, wherein the aryl group is as defined above.
  • heteroaryl or “heteroarylalkyl”, respectively “heteroarylsulfonyl” means a heteroaryl group as defined above bonded to an alkyl group as defined above, respectively to a sulphonyl group as defined above. above, the link to the parent group is effected by the alkyl group, respectively sulfonyl.
  • alkoxy is meant an -O-alkyl group, in which the alkyl group is as defined above, having from 1 to 20 carbon atoms, more preferably from 1 to 10 carbon atoms.
  • Carboxyl is meant a -C (O) OH functional group.
  • acyl is meant a -C (O) -alkyl group, in which the alkyl group is as defined above.
  • substituted or “substituent” is meant a halogen group, an ether, a hydroxyl, a carboxylic function, a carboxamide, an ester, a ketone, an aryl, a heteroaryl, a cycloalkyl, an amine, a substituted amine, linear or branched alkyl, especially C1-C6 alkyl, cyano, nitro, haloalkyl, alkoxy, carboxyalkyl, mercapto, sulfhydryl, alkylamino, dialkylamino, sulfonyl and sulfonamido .
  • a heteroaryl when a heteroaryl is substituted, in particular a monocyclic heteroaryl, the substitution takes place on the ring heteroatom (s).
  • a heteroaryl when a heteroaryl is substituted, especially a monocyclic heteroaryl, the substitution takes place on the carbon atom (s) of the ring.
  • the molecules of the invention have inhibitory properties of at least one DDE / DDD enzyme, in particular measured by an inhibitory activity observed in vitro.
  • Experimental modalities for verifying the inhibitory activity of the molecules of the invention on DDE / DDD enzymes, in particular on transposases and / or retroviral integrases, are given in the examples above.
  • DDE / DDD enzyme is meant in the context of the present application, any enzyme having a phosphatidyltransferase activity and which has a catalytic enzyme site formed by the three amino acids D, D and E (enzyme DDE) or D, D and D (DDD enzyme).
  • DDE / DDD enzymes are enzymes that promote the displacement of a DNA segment within a genome or between genomes. This term includes transposases (bacterial or eukaryotic) and / or retroviral integrases and / or RAG recombinases.
  • the enzyme DDE / DDD is a transposase of procaryotic origin, in particular of bacterial origin, such as MuA, Tn5 and Tn10.
  • the DDE / DDD enzyme is a transposase of eukaryotic origin such as a transposase of the Tc1 / mariner family (an example of which is the MOS1 transposase or the Sleeping Beauty transposase) or a transposase of the hAT family (an example of which is the Hermes transposase).
  • the DDE / DDD enzyme is an integrase of retroviral origin, in particular an integrase encoded by the pol gene of a retrovirus.
  • Retroviruses which can be targeted by the integrase inhibitory molecules of the invention, belong to the genus Alpharetrovirus,
  • Betaretrovirus Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Lentivirus, and Spumavirus.
  • Table I list of lentiviruses
  • the retroviral integrase targeted by the molecules of the invention comes from a retrovirus with animal or human tropism.
  • the retroviral integrase targeted by the molecules of the invention comes from a human tropism lentivirus, such as the HIV virus (human immunodeficiency virus), in particular the isolate. HIV-1 and / or HIV-2 isolate (cytopathic retrovirus).
  • HIV virus human immunodeficiency virus
  • HIV-1 and / or HIV-2 isolate cytopathic retrovirus
  • Particular molecules, inhibiting the enzymatic activity of DDE / DDD enzymes, in particular transposases or retroviral integrases, are the molecules having one of the following formulas (III) to (VI):
  • the invention also provides a composition comprising at least one molecule as defined in the context of the present application, and in particular at least one molecule corresponding to formula (I), (Ia), (Ib), ( Ic), (II), (Ma) above, or one of the formulas (III) to (VI) above.
  • the composition comprises at least 2 different molecules chosen from formulas (I) to (VI).
  • the composition is a therapeutic or pharmaceutical composition, that is to say that it is suitable for administration in an animal or a patient.
  • the composition of the invention also comprises a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • vehicle is meant any substance that allows the formulation of the molecules of the invention within a composition.
  • the vehicle is a substance or a combination of pharmaceutically acceptable substances, that is to say suitable for the use of the composition in contact with a living being (for example an animal, in particular a non-human mammal, and for example a human being), and is therefore preferentially nontoxic.
  • pharmaceutically acceptable vehicles are, for example, water, a saline solution, water-miscible solvents, sugars, linkers, excipients, pigments, vegetable or mineral oils, water-soluble polymers.
  • the composition of the invention in addition to comprising at least one molecule of the invention, and optionally a pharmaceutically acceptable carrier (s), further comprises an additional biologically active compound in the treatment of symptoms related to retrovirus infection, particularly a additional biologically active compound in the treatment of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) symptoms.
  • additional indicates in the context of the present composition, that the compound is different from the molecules defined in the present application, in particular different from a molecule corresponding to the formula (I) above.
  • an additional biologically active compound in the treatment of the symptoms related to Acquired Immunodeficiency Syndrome mention will be made of (a) protease inhibitors, (b) nucleoside reverse transcriptase inhibitors, (c) non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors, (d) nucleotide reverse transcriptase inhibitors, (e) nucleotide and nucleoside inhibitors, (f) integrase inhibitors and (g) fusion inhibitors and (h) interleukins.
  • the invention also relates to the use of at least one molecule described in the present application to inhibit in vitro the activity of DDE / DDD enzymes, in particular transposases or retroviral integrases.
  • in vitro is meant an inhibition test performed outside of an entire living organism, that is to say both a test performed in a tube or a test performed on prokaryotic or eukaryotic cell culture.
  • the invention also relates to a molecule or a composition according to the invention for use as a medicament.
  • the molecules or compositions of the invention for inhibiting the enzymatic activity of DDE / DDD enzymes, in particular the activity of retroviral transposases or integrases according to the definition given in the present application. . Therefore, the invention is also directed to a molecule or composition described in the present application for use as DDE / DDD enzyme inhibitors.
  • the molecules, alone or used in the form of a composition are N-substituted or non-N-substituted.
  • the DDE / DDD enzymes are transposases or RAG recombinases.
  • the molecules or compositions of the invention are used to inhibit ex vivo the activity of RAG transposases or recombinases.
  • the DDE / DDD enzymes are integrases derived from retroviruses, in particular lentiviruses, with animal or human tropism. Because of their involvement in the spread of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), HIV-like retroviruses, such as those of the HIV-1 and / or HIV-2 types (whatever their subtype), integrases these retroviruses are particularly interesting targets for the use of the molecules of the invention.
  • AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome
  • HIV-like retroviruses such as those of the HIV-1 and / or HIV-2 types (whatever their subtype)
  • the invention also relates to a molecule or a composition according to the invention, for use in the treatment of pathologies or symptoms associated with and / or consecutive to infection by a retrovirus, in particular consecutive to a infection with an animal tropism retrovirus or human tropism such as HIV.
  • treatment means both the curative effect (disappearance of the retrovirus, for example) obtained with at least one molecule or a composition of the invention, that the improvement of symptoms observed in the animal or patient (and consecutive or related to the presence of a retrovirus) or improvement of the patient's condition.
  • treatment applies to infection with the retrovirus as well as the symptoms or pathologies resulting from the infection with this retrovirus.
  • a method comprising the administration of a compound or a composition of the invention to an animal or a patient in need thereof, for the treatment of pathologies or symptoms associated with or following infection by a retrovirus, is also part of the invention.
  • the application relates to a molecule or composition according to the invention for use in reducing or even suppressing retroviral replication.
  • the effect of the molecule or the composition according to the invention on the reduction or even the suppression of retrovirus replication can be demonstrated by the evolution of the plasma viral load in the infected host.
  • the application is directed to a molecule of the invention or a composition comprising it in the treatment of symptoms and / or infection following HIV infection, and in particular in the treatment of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS).
  • AIDS Acquired Immunodeficiency Syndrome
  • the treatment discussed in this application is suitable for HIV-1 and / or HIV-2 isolates.
  • the treatment applies to both O- and M-group isolates, and in particular for M-group, A-clad isolates. , B, C, D, E, F, G and H.
  • the effectiveness of the treatment of AIDS-related pathologies or symptoms by the molecule or composition of the invention can be determined by the evolution of the number of CD4 + T lymphocytes, main target cells of the HIV virus, optionally in combination with the calculation of the evolution of the plasma viral load.
  • the molecule or the composition according to the invention may be in solid form (cachet, powder, capsule, pill, suppository, accelerated release tablet, gastroresistant tablet, prolonged release) or liquid (syrup, solution for injection, eye drops).
  • the molecule or the composition of the invention can be administered orally, transmucosa-oral, vaginal, rectal, parenteral (intravenous, intramuscular or subcutaneous), transcutaneous (or transdermal or percutaneous) or skin.
  • a molecule or a composition according to the invention in the manufacture of a medicament for the treatment of symptoms and / or infection consecutive to a retrovirus infection, particularly HIV, and in particular for the treatment of Acquired Immunodeficiency Syndrome.
  • the invention also relates to the use of the MOS1 system (transposon Mos1) as a transposon tool, particularly in gene therapy.
  • MOS1 system transposon Mos1
  • MOS1 includes:
  • MOS1 protein amino acids 1 to 345
  • MBP Maltose-Binding protein
  • an advantageous mutant of the protein MOS1 amino acids 1 to 345
  • transposon optionally deleted from part of its sequence and / or carrying a transgene of interest.
  • the DNA transfer is carried out in eukaryotic cells; the cells resulting from this transfer may be used for ex-vivo applications, for example in gene therapy, or for obtaining plant cells (cells producing a protein of economic or medical interest).
  • the molecules according to the invention can therefore be used to stop the transfer reaction, caused by the bringing into contact of a system
  • MOS1 as described above with the cells to be transformed.
  • the advantage of the molecules of the invention is therefore to be able to control and to avoid the "cascade" reactions of the MOS1 system.
  • Figure 1 Structure of the compounds 1 to 10 selected.
  • Figure 2 Model of the Mos1 transposition mechanism.
  • Figure 3 Excision test on compound 9.
  • FIG 4 Assembly of transposase-ITR complexes by EMSA (electrophoretic-mobility shift assay).
  • EMSA was performed with MBP-MOS1, using NTR30 as a probe and the selected compounds (1-10 of Figure 1).
  • SEC1, SEC2, PEC1, PEC2 The various complexes (SEC1, SEC2, PEC1, PEC2), the target capture complex (TCC) and the unbound DNA (free probe) are indicated.
  • SEC1 was formed by a single transposase fixed on a single ITR. This complex is thought to result from the dissociation of higher molecular complexes ((18) and personal communications).
  • FIG. 6 Effect of compound 6 on the assembly of MOS1-ITR complexes.
  • EMSA was performed with MBP-MOS1, using NTR30 as probe and various concentrations of compound 6 as indicated at the top of the figure.
  • the different complexes (SEC1, SEC2, PEC1, PEC2) and unbound DNA (free probe) are indicated.
  • SEC1 was formed by a single transposase fixed on a single ITR. This complex is thought to result from the dissociation of higher molecular complexes.
  • SEC2 was formed by a transposase dimer attached to a single ITR
  • PEC1 was formed by a transposase dimer attached to a pair of ITRs
  • PEC2 was formed by a transposase tetramer attached to a pair of ITRs.
  • Figure 7 Strand transfer reactions of MOS1 in the presence of compound 1. Assays were performed using MBP-MOS1, labeled TITR30, pBC-SK as the target plasmid and various concentrations of compound 1 (in ⁇ M) as indicated at the top of the figure. No Tpase: no transposase; (D): DMSO. The integration products are indicated on the right: OC (open circle), L (linear).
  • FIG. 9 3 'maturation and strand transfer activities of HIV-1 integrase in the presence of compound 4; assays were performed using HIV-1 integrase, an oligonucleotide duplex mimicking the end of LTR U5 and various concentrations of compound 4 (in ⁇ M) as shown at the top of the figure.
  • Figure 10 3 'maturation and strand transfer activities of HIV-1 integrase in the presence of compound 4. Curve of IC50 value; percent inhibition of strand transfer (line) and inhibition of maturation
  • In vitro transposition reactions were performed using pBC-3T3 both as donor DNA and as target, as had been done previously for transposition assays in bacteria (16).
  • the rearrangement reaction mixtures contained 10 mM Tris-HCl (pH 9), 50 mM NaCl, 0.5 mM dithiothreitol, 20 mM MgCl 2 , 0.5 mM EDTA, 100 ng BSA, 80mM. nM of MBP-MOS1 and 600 ng of pBC-3T3 supercoiled in a volume of 20 .mu.l.
  • Inhibitors final concentration 80 ⁇ M
  • DMSO were added to the reaction mixtures before the transposase.
  • the reactions proceeded freely for 30 min at 30 ° C., then 10 ⁇ l of stop solution (SDS 0.4%, proteinase K 0.4 ⁇ g / ⁇ l) were added, and the reaction mixtures were incubated at 37 ° C for an additional 30 min, then at 65 ° C for 10 min.
  • the products were extracted with phenol-chloroform and precipitated in ethanol with 1 ⁇ g of yeast tRNA using standard techniques.
  • LB-chloramphenicol 80 ⁇ g / ml to evaluate the frequency of transposition.
  • the transposition frequency is the number of Tet R colonies divided by the number of Chloram R colonies. Transformation efficiency was monitored from the number of Amp R colonies.
  • ESA Electrophoretic Mobility Delay Tests
  • the ITR30 was prepared and labeled as previously described (8), with some minor modifications: after labeling, the DNA was further purified on a native polyacrylamide gel. Binding reactions were performed in 50 mM NaCl, 0.5 mM DTT, 10 mM Tris (pH 9), 5% glycerol and 100 ng BSA. Each 20 ⁇ l reaction contained 0.2 pmol of 32 P-labeled ITR30, 400 mM of purified MBP-MOS1, 5 mM of EDTA, and 1 ⁇ l of the tested compound (final concentration 400 ⁇ M) or DMSO. The mixtures were incubated at 30 ° C. for two hours.
  • the complexes were separated using batch gels of 4-6% native polyacrylamide-0.25x TBE (acrylamide / bisacrylamide 30: 0.93) containing 5% glycerol. The gels were changed to 200 V for 3 hours and then autoradiographed.
  • the reactions (40 .mu.l) were carried out in 50 mM Tris-HCl (pH 9), 0.1 mg / ml BSA and 5% glycerol in the presence of 10 nM previously cleaved ITR substrate and 80 nM of MBP-MOS1.
  • the previously cleaved ITR substrate was formed by hybridizing oligonucleotides NTS-3 and TS: NTS-3: ⁇ '-GGTGTACAAGTATGAAATGTCGTTTCG-S '; and
  • TS was radiolabeled at the 5 'position with T4 polynucleotide kinase (Promega) and ⁇ - [ 32 P] ATP.
  • MgCl 2 final concentration 5 mM
  • 200 ng of target plasmid pBC-KS Stratagene
  • Inhibitors diluted in DMSO at 5% were added during complex formation and before adding MgCb and the target plasmid. Reactions were stopped with 10 mM EDTA, and treated with 0.1 mg / ml Proteinase K, 0.1% SDS and 2 mM CaCl 2 at 45 ° C for 1 hour.
  • Strand transfer reactions were loaded and resolved on a 0.8% TBE 1x-agarose gel.
  • the gel was stained with ethidium bromide, then dried and exposed to a phosphor screen (phosphorimager, STORM Molecular Dynamics). Insertion products were quantified using Image Quant software.
  • HIV-1 integrase was purified as described in (32). 200 nM HIV-1 integrase were incubated in the presence of 6.25 nM radiolabeled oligonucleotide duplex mimicking the end of the U5 LTR in a buffer containing 20 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM NaCl , 4 mM DTT, 7.5 mM MgCl 2 , 10% DMSO and various drug concentrations. The reaction was carried out for 2 hours at 37 ° C, and the products were separated on an 18% urea-acrylamide gel. The gel was scanned with a phosphorimager, and analyzed with Image Quant software (Molecular Dynamics). Each experiment was performed in duplicate.
  • the transposition assay was performed using purified MOS1 protein fused to MBP and plasmid pBC-3T3 carrying a pseudo-Mos7 transposon.
  • pBC-3T3 was used as a pseudo-Mos1 donor, or as a target for integration of the transposon (16).
  • Transposition events were revealed by promoter tagging.
  • the concentration of the drugs used for the initial screening was 80 ⁇ M.
  • the best 10 compounds had an inhibition factor (IF) greater than 25 (greater than 96% inhibition) compared to the control experiment performed in the absence of inhibitor, but in the presence of DMSO (Table II).
  • transposition frequency and inhibitory factors are the average of at least five experiments.
  • the inhibition factors are the ratio between the transposition frequency obtained with DMSO and that obtained with each of the compounds 1 to 10.
  • the structures of these inhibitors are shown in FIG. 1.
  • the compounds 1 to 4 are derivatives of bis- (heteroaryl) maleimide, and constitute inhibitors of the DDE / D enzymes unknown hitherto.
  • Compounds 5 and 6 are ⁇ -methylpyrrole-polyamides known to interact with DNA (synthesis in (17)).
  • Compound 7 is a bis-coumarin derivative which has also been shown to be an inhibitor of Tn5 transposase and HIV-1 integrase (14).
  • Compounds 8, 9 and 10 are respectively a cinnamoyl derivative, a benzoic acid derivative and a carboxylic acid substituted thioxothiazolidine. These three compounds (8, 9 and 10) had already been identified as inhibitors of Tn5 transposase (14).
  • Table III Effect of each of the compounds on different stages of the Mos1 transposon; The IC 5 O values for the MOS1 -ITR binding and Mos1 excision are given in ⁇ M, unless otherwise indicated. The effects on the assembly of MOS1 -ITR complexes are indicated by (+): observed complexes, (-): absence of complexes and (+/-): traces of SEC1. ND: not determined.
  • the compounds 2 to 6 were the best inhibitors of excision, with Cl 5 o values of the order of 10 .mu.M.
  • bis-furyl maleimide (compound 1) the best inhibitor characterized in the initial transposition test, inhibited excision with a Cl 5 o of between 18 and 54 ⁇ M. This value o Cl 5 suggests that this compound might also affect the later stages of the transposition.
  • Inhibitors of the Tn5 transposase (compounds 7 and 10) block the formation of the synaptic complex of Tn5 (14), while the compounds 5 and 6 are potent inhibitors of the DNA binding protein (synthesis in (17) ).
  • the literature data and these results strongly suggest that these compounds may act at the level of transposase-RTI complex formation, a step that takes place prior to excision.
  • MOS1 -ITR complexes were formed with a radiolabeled 3 'ITR (ITR30) in the presence of a concentration of 400 ⁇ M of molecule. This concentration is at least 2.5 times higher than the highest Cl 5 o value that was measured for the ten compounds.
  • Compounds 5 and 6 are hairpin polyamides composed of a N-methylpyrrole polyamide connected by a ⁇ -aminobutyric acid linker (Y-turn) and attached to the minor groove of DNA (17).
  • the bis- (heteroaryl) maleimide derivatives constitute a new skeleton of DDE enzyme inhibitors.
  • the panel of compounds tested in the context of this application as MOS1 inhibitors consisted mainly of heterocyclic molecules substituted with hydroxyl groups. Small molecules of this type have been previously identified as effective inhibitors of HIV-1 integrase (20). Of all the molecules tested in the context of this application, 21 were derivatives of bis- (heteroaryl) maleimide. The most effective inhibitors found were all organized around a bis (heteroaryl) maleimide backbone (compounds 1 to 4 of Figure 1). It was put in evidence that unsubstituted backbones were ineffective, suggesting that the bis- (heteroaryl) maleinide backbone itself is not the pharmacophore (data not shown).
  • the catalytic pocket DDD of the MOS1 transposase constitutes an excellent candidate for explaining the major change in mechanism of inhibition and cross activity of these compounds against HIV-1 integrase, since it contains residues. Similar catalysts and binds to the intersection of the two DNA substrates involved in the reaction. Compounds with a backbone capable of binding to this region could exhibit different inhibitory phenotypes, becoming specific inhibitors of complex formation, excision, or strand transfer as a result of minor differences in skeletal substitution. .
  • Point mutations in the N-terminal domain of HIMAR1 illustrate how changes in transposase-RTI interactions may have pleiotropic consequences. Some mutations completely destabilize the transposase-ITR complexes, while others allow the complexes to form but inhibit the first or second strand cleavage reaction (22). This implies that compounds that target the N-terminal domain / ITR interaction might reflect the phenotype of N-terminal domain mutations.
  • the identification of the target (s) of this family of compounds is already underway, as it appears essential for future developments and understanding of the mechanism of action of these inhibitors on the transposition of Mos1 and the development process. integration of HIV-1.
  • the ability of a compound to inhibit mechanism-related (cross-activity) enzymes is exemplified by compounds that inhibit HIV-1 integrase, ASV, and other related retroviral integrases (23). ).
  • the diketoacid integrase inhibitors CITEP and L-708906 are also active against the weakly related RAG recombinases (24), although the activity of this inhibitor is greatly reduced (factor 100). More recently, screening of Tn5 transposase inhibitors has been used to identify compounds active against HIV-1 integrase (14).
  • the work presented in this application is a new demonstration of the cross activity between the Tn5 and MOS1 transposase inhibitors, and for the first time between MOS1 and the HIV-1 integrase.
  • the cross activity of the newly identified inhibitor family shows that MOS1 is an excellent substitute for inhibitor screening. This substitute is very interesting for the following reasons.
  • the MOS1 transposition operates in a eukaryotic environment, such as integrase, which opens the possibility of an inhibition test in eukaryotic cells.
  • the catalytic domain structure of MOS1 is very similar to that of the retroviral integrases of ASV and HIV-1 (9, 10).
  • the catalytic process of DNA cleavage in transposition is similar to the reaction reaction of a retroviral integrase, the second strand cleavage reaction mimicking the 3 'integrin maturation activity (n There is no intermediate inter-strand or hairpin in these two reactions). So far, the Tn5 transpososome has been used as a model for the retroviral integrasome, but the mariner transposome may be a new, probably better, model for the organization of the HIV-1 integrasome.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

L´invention concerne des molécules possédant une structure bis-(hétéroaryl)maléimide, et présentant des caractéristiques inhibitrices d´enzymes à poche catalytique comprenant des acides aminés invariants D, D et E ou D, D et D, telles que les transposases, les recombinases RAG ou les intégrases rétrovirales. L´invention concerne également l´utilisation de ces molécules pour l´inhibition in vitro, ex vivo ou in vivo de transposases, de recombinases RAG et d´intégrases rétrovirales, telles que l´intégrase du virus VIH, ainsi que l´utilisation de ces molécules dans le traitement des pathologies associées à ces enzymes chez un hôte animal ou humain, en particulier dans le traitement du SIDA.

Description

MOLECULES COMPRENANT UN SQUELETTE
BIS-(HETEROARYL) MALEIMIDE, ET LEUR UTILISATION DANS L'INHIBITION D'ENZYMES DDE/DDD.
DOMAINE TECHNIQUE
[001] L'invention concerne le domaine des inhibiteurs d'enzymes à poche catalytique comprenant des acides aminés invariants D, D et E ou D, D et D, telles que les transposases ou les intégrases rétrovirales, ainsi que l'utilisation de ces inhibiteurs dans des tests in vitro, ou dans le traitement des pathologies associées à ces enzymes chez un hôte animal ou humain. L'invention se rapporte également à un système de criblage de tels inhibiteurs, en particulier in vitro dans des cellules eucaryotes.
ART ANTERIEUR [002] Les transposases et les intégrases rétrovirales sont des enzymes qui favorisent le déplacement de segments d'ADN au sein d'un même génome ou entre des génomes. Ces enzymes, bien qu'elles proviennent d'organismes différents, possèdent des domaines catalytiques structurellement similaires. Ainsi, des études cristallographiques ont montré qu'en dépit de l'absence de similitude de leurs séquences polypeptidiques, la structure du cœur (ou poche) catalytique, notamment l'emplacement d'une triade de résidus DDE/D invariants, est largement superposable pour au moins trois transposases (MuA, Tn5 et MOS1 ) (10, 12) et au moins deux intégrases (VIH-1 et ASV) (12, 13). Dans toutes ces enzymes, le rôle de la triade catalytique est de faciliter la catalyse en coordonnant les ions métalliques nécessaires à celle-ci. Il a d'ailleurs été récemment démontré que la transposase Tn5 peut être utilisée pour identifier des inhibiteurs de l'intégrase du VIH-1 (14, 15).
[003] Les transposons à ADN sont des éléments transposables de classe II qui correspondent à des segments d'ADN discrets qui sont « naturellement » susceptibles de se déplacer à l'intérieur des génomes (pour une synthèse, voir (1 )). De plus, l'expérience a montré que certains d'entre eux présentent une grande capacité à se déplacer dans des espèces faiblement apparentées à l'hôte à l'intérieur duquel ils ont été initialement isolés. Ces propriétés ont permis de développer des outils basés sur des transposons pour la mutagenèse insertionnelle et la transgénèse germinale dans des organismes modèles, et potentiellement pour la thérapie génique. Les transposons Mos1 (2), Himari (3), Minos (4), PiggyBac (5), Sleeping Beauty (6) et Tol2 (7) ont été sélectionnés comme principaux candidats pour le développement de tels outils (transposons tools).
[004] Mos1 est un élément de 1286 pb, terminé par des répétitions inversées (ITR) de 28 pb. Mos1 contient un seul cadre de lecture ouvert codant pour MOS1 (une transposase de 345 acides aminés) et se déplace à l'intérieur du génome de ses hôtes par un mécanisme de type couper-coller. L'ensemble du mécanisme se compose de quatre étapes principales : [1 et 2] homodimérisation de MOS1 , et assemblage du complexe synaptique, [3] excision de Mos1, et [4] reconnaissance de la cible et insertion de Mos1 dans un nouveau locus (Figure 2). Cette activité repose sur une triade d'acides aminés, DD34D, qui chélatent les cations nécessaires à la catalyse (10). La transposase de Mos1 appartient à la grande famille des « enzymes DDE » (11 ). Dans ce groupe, les transposases mariner constituent une exception, car elles comportent une triade DDD.
[005] La compréhension de l'activité des transposases et le contrôle de l'efficacité de la transposition dans le cadre des « transposon tools » passent par l'identification de molécules capable d'inhiber l'activité de ces enzymes. Or, à ce jour, aucun de ces composés n'est disponible pour les transposases mariner.
[006] L'intégrase rétrovirale (codée par le gène pol d'un rétrovirus) est une enzyme qui assure l'intégration du génome viral (rétrotranscrit sous forme d'un ADN double brin) dans le génome de la cellule infectée (ADN cible). En effet, l'intégrase assure deux fonctions enzymatiques dans le processus d'intégration : le clivage de l'ADN et le transfert de brin. Ainsi, l'intégrase (IN) reconnaît et fixe le site viral att situé à l'extrémité des LTR (long terminal repeat) rétroviraux, et catalyse l'excision de deux paires de base dans la partie 3' de ces LTR. Une fois clivé, l'ADN viral est importé, via un complexe protéines/ADN (PIC ou pre intégration complex) dans le noyau de la cellule hôte, où l'intégrase clive alors l'ADN cible pour former des extrémités 5' libres qui sont liées aux parties 3' OH libres de l'ADN viral. Aucune spécificité, vis-à-vis de la séquence nucléotidique de l'ADN cible, où a lieu le clivage et l'intégration de l'ADN viral, n'a été identifiée. [007] Le domaine catalytique des intégrases rétrovirales contient la triade invariante de motif DD-35-E, comprenant respectivement les résidus D64, D116 et E152 dans le cas de l'intégrase de VIH-1 ou D64, D121 et E157 dans le cas du virus de sarcome de Roux (RSV). [008] Compte tenu de leur rôle dans les pathologies rétrovirales, la compréhension des mécanismes liés à l'activité des intégrases rétrovirales conduisant à l'intégration des rétrovirus dans les cellules infectées, qu'elles soient d'origine animale ou humaine, ainsi que l'identification de molécules capables d'inhiber in vivo, dans un but thérapeutique, reste une priorité de santé publique.
[009] II existe donc un réel besoin pour l'identification de molécules capables d'inhiber les transposases, mais également les intégrases rétrovirales. Ces molécules sont utilisables aussi bien pour la compréhension des mécanismes des étapes d'excision et d'intégration que dans le traitement des symptômes associés à l'infection d'animaux ou de patients par des rétrovirus. La recherche de ces molécules nécessite également la caractérisation d'un système de criblage d'inhibiteurs d'enzymes DDE/DDD capable de fonctionner aussi bien en milieu procaryote qu'en milieu eucaryote, afin de garantir que les molécules ainsi identifiées présentent des activités inhibitrices susceptibles d'être explorées en vue d'applications en thérapie.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
[01 O] La présente invention vise des molécules qui ont en commun une structure bis-(hétéroaryl)maléimide et répondent à la formule I suivante :
[011] Au sein de la formule (I), le groupe R1 est choisi dans le groupe contenant un hydrogène, un alkyle linéaire ou ramifié, un alkényle, un alcynyle, un cycloalkyle, un hétérocyclyle, un hétéroaryle, un hétéroaralkyle, un héteroalkoxy, un carboxyle, un alkoxycarbonyle, un tétrazolyle, un acyle, un arylsulfonyle, un hétéroarylsulfonyle, un phényle, un hydroxyphényle ou un groupement
COOEt
[012] Dans un mode de réalisation particulier, R1 est H. [013] Dans un autre mode de réalisation, R1 est un groupement phényle, éventuellement substitué tel que le 4-hydroxyphényle. [014] Dans un autre mode de réalisation, R1 a la formule suivante :
COOEt
[015] Au sein de cette formule (I), le groupe R2 et le groupe R3 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, dans le groupe constitué d'un atome d'hydrogène, d'un acide carboxylique (de préférence C1 à C5), d'un cyano, d'une oxime, d'un éther d'oxime, d'un tétrazole, d'un ester, d'un amide substitué ou non, d'un acide (de préférence C1 à C5), d'un diacide (de préférence C1 à C5), d'un acide cycloalkylcarboxylique (notamment C5 ou C6), d'un aryle substitué ou non, d'un hétéroaryle substitué ou non et du groupement -CH=CH-CHO.
[016] Dans un mode de réalisation particulier, R2 ou R3 est COOH. [017] Dans un autre mode de réalisation, R2 ou R3 est CH=CH-COH. [018] Au sein de cette formule (I), Ar1 et Ar2, sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, et sont constitués d'un cycloalkyle (C5 ou C6) substitué ou non, d'un hétéroaryle substitué ou non, d'un aryle substitué ou non, d'un héteroalkyle linéaire ou ramifié. Le cycloalkyle peut également comporter un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi N, O et S.
[019] Dans un mode de réalisation particulier, Ar1 et/ou Ar2 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi les hétéroaryles monocycliques, substitué ou non. En particulier, Ar1 est constitué d'un hétéroaryle monocyclique portant R2, choisi parmi le groupement R2-pyridyle, R2-pyrazinyle, R2-furanyle, R2-thiényle,
R2-pyrimidinyle, R2-isoxazolyle, R2-isothiazolyle, R2-oxazolyl, R2-thiazolyle, R2-pyrazolyle, R2-furazanyle, R2-pyrrolyle, R2-pyrazolyle, R2-triazolyle, R2-pyrazinyle et R2-pyridazinyle, ledit hétéroaryle monocyclique étant substitué ou non. De plus, dans un mode de réalisation particulier, Ar2 est, indépendamment de Ar1, constitué d'un hétéroaryle monocyclique portant R3, choisi parmi le groupement R3-pyridyle, R3-pyrazinyle, R3-furanyle, R3-thiényle, R3-pyrimidinyle, R3-isoxazolyle, R3-isothiazolyle, R3-oxazolyl, R3-thiazolyle, R3-pyrazolyle, R3-furazanyle, R3-pyrrolyle, R3-pyrazolyle, R3-triazolyle, R3-pyrazinyle et R3-pyhdazinyle, ledit hétéroaryle monocyclique étant substitué ou non.
[020] Dans un mode de réalisation particulier, Ar1 ou Ar2 est un furanne. Dans un autre mode de réalisation, Ar1 et/ou Ar2 sont respectivement un groupement R2-furanyle et un groupement R3-furanyle. En particulier, Ar1 et/ou Ar2 sont, indépendamment l'un de l'autre, respectivement le R2-fur-2-yl, le R2-fur-3-yl ou le R2-fur-4-yl et le R3-fur-2-yl, le R3-fur-3-yl ou le R3-fur-4-yl. Dans un mode préféré, Ar1 et Ar2 sont respectivement le R2-fur-2-yl et le R3-fur-2-yl. [021] Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, où les groupements Ar1 et Ar2 sont le furanne, en particulier le fur-2-yl, les groupements R2 et/ou R3, en particulier R2 et R3, sont portés en position 3, 4 ou 5, en particulier en position 5.
[022] La demande vise en particulier une molécule, comprenant une structure bis-(hétéroaryl)maléimide, de formule (I) :
dans laquelle:
- R1 est choisi dans le groupe constitué d'un hydrogène, d'un alkyle linéaire ou ramifié, d'un alkényle, d'un alcynyle, d'un cycloalkyle, d'un hétérocyclyl, d'un hétéroaryle, d'un hétéroaralkyle, d'un hétéroalkoxy, d'un carboxyle, d'un alkoxycarbonyle, d'un tétrazolyle, d'un acyle, d'un arylsulfonyl, d'un hétéroarylsulfonyle, d'un phényle, d'un hydroxyphényle ou d'un groupement
COOEt - R2 et R3 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, dans le groupe constitué d'un atome d'hydrogène, d'un acide carboxylique, d'un cyano, d'une oxime, d'un éther d'oxime, d'un tétrazole, d'un ester, d'un amide substitué ou non, d'un acide, d'un diacide, d'un acide cycloalkylcarboxylique, d'un aryle substitué ou non, d'un hétéroaryle substitué ou non, et du groupement
-CH=CH-CHO ;
- Ar1 et Ar2, sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, et sont constitués d'un cycloalkyle substitué ou non, d'un hétéroaryle substitué ou non, d'un aryle substitué ou non, d'un hétéroalkyle linéaire ou ramifié ; et dans laquelle il est exclu que R1, R2 et R3 soient ensemble H ;
[023] II est explicitement exclu dans le cadre de la présente invention que les groupements R1, et R2 et R3 soient ensemble un atome d'hydrogène (H) dans le composé de formule (I).
[024] Dans un mode de réalisation particulier, les composés suivants sont également explicitement exclus de la définition donnée des molécules de l'invention :
- une molécule de formule (I) dans laquelle lorsque R1 est un hydrogène et Ar1 et Ar2 sont des furannes, R2 et R3 sont CHO ; et
- une molécule de formule (I) dans laquelle lorsque R1 est un phényle et Ar1 et Ar2 sont des furannes, R2 et R3 sont CHO.
[025] Dans un mode de réalisation particulier, R2 et R3 sont identiques, et la molécule selon l'invention possède la formule (la) suivante :
dans laquelle R1, R2, Ar1 et Ar2 sont tels que définis ci-dessus.
[026] Dans un mode de réalisation particulier, Ar1 et Ar2 sont identiques et la molécule selon l'invention répond à la formule (Ib) suivante : dans laquelle R1, R2, R3 et Ar1 sont tels que définis ci-dessus.
[027] Dans un autre mode de réalisation de l'invention, R2 et R3 d'une part, et Ar1 et Ar2 d'autre part, sont identiques, et la molécule selon l'invention répond à la formule (Ic) suivante
dans laquelle R1, R2 et Ar1 sont tels que définis ci-dessus.
[028] Une molécule particulière de l'invention est une molécule dans laquelle Ar1 et Ar2 sont un furanne, et qui possède la formule (II) suivante :
dans laquelle R', Rz et R3 sont tels que définis ci-dessus.
[029] Dans un mode de réalisation particulier, la molécule de formule (II) possède des groupements R2 et R3 identiques, et répond à la formule (Ma) suivante :
dans laquelle R et R sont tels que définis ci-dessus. [030] Les modes de réalisation particulier définis dans la présente demande, en particulier en relation avec la formule (I) s'appliquent également de la même façon aux formules (la), (Ib), (Ic), (II) et (Ma).
[031] Dans un mode de réalisation particulier, la molécule de l'invention selon la formule (I), (la), (Ib), (Ic), (II) ou (Ma) est « N-substituée », c'est-à-dire que le groupement R1, dans la définition donnée ci-dessus, est autre qu'un atome d'hydrogène. Dans ce cas, la nature des groupements R2 et R3 est choisie parmi les possibilités données ci-dessus. [032] Dans un autre mode de réalisation, alternatif au précédent, la molécule de l'invention selon la formule (I) (la), (Ib), (Ic), (II) ou (Ma) n'est pas N- substituée (et est donc qualifiée de molécule « non-N-substituée »), c'est-à-dire que le groupement R1 est un atome d'hydrogène. Dans ce cas, les groupements R2 et R3 répondent, indépendamment l'un de l'autre, à l'une des possibilités données ci- dessus, à l'exception de l'atome d'hydrogène (dans la mesure où R1, R2 et R3 ne peuvent être ensemble un atome d'hydrogène).
[033] Un exemple de synthèse de molécules particulières selon l'invention est présenté à la Figure 11. Ainsi, la demande vise également toute molécule répondant à la formule (I), et obtenue selon une synthèse similaire ou identique. [034] L'invention vise également les molécules, décrites dans la présente demande, sous forme de sels physiologiquement acceptables. Des exemples de sels physiologiquement acceptables incluent des sels basiques tels que des sels de métaux alcalins (par exemple sodium ou potassium) ou des sels de métaux alcalino-terreux (par exemple, calcium), des sels basiques organiques et des sels d'acides aminés. Les modes de réalisation définis ou illustrés par référence aux molécules (I), (la), (Ib), (Ic), (II) ou (Ma) s'appliquent également aux sels physiologiquement acceptables de ces molécules.
[035] Dans le cadre de la présente invention, les définitions suivantes s'appliquent aussi bien à la description qu'aux revendications.
[036] Par « alkyle », on entend une chaîne hydrocarbonée, linéaire ou ramifiée, de 1 à 20 atomes de carbone, de préférence 1 à 12 atomes de carbone, plus préférablement de 1 à 6 atomes de carbone. [037] Par « alkényle », on entend un groupe hydrocarboné aliphatique linéaire ou ramifié ayant au moins une double liaison carbone-carbone, et de 2 à 20 atomes de carbone, de préférence 2 à 12 atomes de carbone, plus préférablement de 2 à 6 atomes de carbone. Des exemples, non limitatifs, de groupes alkényles sont : l'éthényle, le propényle, le n-butényle, le n-pentényle, l'octényle et le décényle.
[038] Par « alcynyle », on entend un groupe hydrocarboné aliphatique linéaire ou ramifié ayant au moins une triple liaison carbone-carbone, et de 2 à 15 atomes de carbone, de préférence 2 à 12 atomes de carbone, plus préférablement de 2 à 4 atomes de carbone. Des exemples, non limitatifs, de groupes alcynyles sont : l'éthynyle, le propynyle, le 2-butynyle, le 3-méthylbutynyle, le n-pentynyle, et le décynyle.
[039] Par « aryle », on entend, un système de groupement aromatique monocyclique ou multicyclique, comprenant au moins un noyau aromatique comprenant de 6 à 14 atomes de carbone, et de préférence de 6 à 10 atomes de carbone. Un exemple, non limitatif, de groupement aryle est le phényle. Le groupement aryle peut être non substitué ou substitué avec 1 , 2 ou 3 substituants choisis indépendamment les unes des autres. Un exemple, non limitatif, de groupement aryle substitué est l'hydroxyphényle. [040] Par « arylalkyle », on entend un groupement aryle tel que défini ci- dessus fixé à un groupement alkyle tel que défini ci-dessus, le lien au groupement parent s'effectuant par le groupe alkyle. Un exemple, non limitatif, de groupement arylalkyle est le benzyle.
[041] Par « cycloalkyle », on entend un système carbocyclique saturé de 3 à 10 (par exemple 3 à 7) atomes de carbone, de préférence 5 à 10 atomes de carbone, et plus préférablement 5 à 7 atomes de carbone et ayant 1 , 2 ou 3 cycles.
Des exemples, non limitatifs, de groupement cycloalkyle sont le cyclopropyle, le cyclopentyle, le cyclohéxyle et le cycloheptyle.
[042] Par « halogène », on entend les groupements fluor, chlore, brome ou iode.
[043] Par « hétéroaryle », on entend un système de 5 à 14, de préférence 5 à 10, noyaux aromatiques simple ou fusionnés, ces noyaux comprenant 1 , 2 ou 3 hétéroatomes choisis indépendamment les uns des autres parmi O, S et N, sachant que les noyaux ne possèdent pas d'atomes d'oxygène ou de soufre adjacents. Un groupement hétéroaryle préféré contient de 5 à 6 atomes. Dans un autre mode de réalisation préféré, l 'hétéroaryle est monocyclique. Le groupement hétéroaryle peut être non substitué ou substitué avec 1 , 2 ou 3 substituants choisis indépendamment les uns des autres. Des exemples non limitatifs de groupements hétéroaryles sont : pyridyle, pyrazinyle, furanyle, thienyle, pyrimidinyle, isoxazolyle, isothiazolyle, oxazolyle, thiazolyle, pyrazolyle, furazanyle, pyrrolyle, pyrazolyle, triazolyle, 1 ,2, 4-thiadiazolyle, pyrazinyle, pyridazinyle, quinoxalinyle, phthalazinyle, imidazo [1 ,2- a] pyridinyle, imidazo [2, 1-b] thiazolyle, benzofurazanyle, indolyle, azaindolyle, benzimidazolyle, benzothienyle, quinolinyle, imidazolyle, thienopyridyle, quinazolinyle, thienopyrimidyle, pyrrolopyridyle, imidazopyridyle, isoquinolinyle, benzoazaindolyle, and benzothiazolyle. Des exemples préférés d'hétéroaryles monocycliques sont pyridyle, pyrazinyle, furanyle, thienyle, pyrimidinyle, isoxazolyle, isothiazolyle, oxazolyl, thiazolyle, pyrazolyle, furazanyle, pyrrolyle, pyrazolyle, triazolyle, pyrazinyle et pyridazinyle. En particulier, dans le cadre de l'invention, l'hétéroaryle monocyclique préféré est le furanyle. L'hétéroaryle monocyclique peut être non substitué ou substitué avec 1 , 2 ou 3 substituants choisis indépendamment les uns des autres.
[044] Par « hétérocyclyle » ou « hétérocycloalkyle », on entend un système non-aromatique saturé, monocyclique ou multicyliques, comprenant de 3 à 10 (par exemple 3 à 7) atomes de carbone, de préférence 5 à 10 atomes de carbone, et plus préférablement 5 à 7 atomes de carbone et ayant 1 , 2 ou 3 cycles, dans lequel un ou plusieurs des atomes du système est un élément autre qu'un atome de carbone, tel que un atome de soufre, d'oxygène et/ou d'azote. [045] Par « arylsulfonyle », on entend un groupement -Sθ2-aryle, dans lequel le groupement aryle est tel que défini ci-dessus.
[046] Par « hétéroaralkyle » ou « hétéroarylalkyle », respectivement « hétéroarylsulfonyle », on entend un groupe hétéroaryle tel que défini ci-dessus lié à un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, respectivement à un groupe sulfonyle tel que défini ci-dessus, le lien au groupement parent s'effectuant par le groupe alkyle, respectivement sulfonyle. [047] Par « alkoxy », on entend un groupement -O-alkyle, dans lequel le groupement alkyle est tel que défini ci-dessus, ayant de 1 à 20 atomes de carbone, plus préférablement de 1 à 10 atomes de carbone.
[048] Par « carboxyle », on entend un groupe fonctionnel -C(O)OH. [049] Par « acyle », on entend un groupement -C(O)-alkyle, dans lequel le groupement alkyle est tel que défini ci-dessus.
[050] Par « substitué » ou « substituant », on entend un groupement halogène, un éther, un hydroxyle, une fonction carboxylique, un carboxamide, un ester, une cétone, un aryle, un hétéroaryle, un cycloalkyle, une aminé, une aminé substituée, un alkyle linéaire ou ramifié, en particulier un alkyle de C1 à C6, un cyano, un nitro, un haloalkyle, un alkoxy, un carboxyalkyle, un mercapto, un sulfhydryle, un alkylamino, un dialkylamino, un sulfonyle et un sulfonamido. Dans un mode de réalisation particulier, lorsque un hétéroaryle est substitué, en particulier un hétéroaryle monocyclique, la substitution a lieu sur le ou les hétéroatome(s) du cycle. Alternativement ou en combinaison avec le mode de réalisation précédent, lorsque un hétéroaryle est substitué, en particulier un hétéroaryle monocyclique, la substitution a lieu sur le ou les atomes de carbone du cycle.
[051] Les molécules de l'invention, répondant à la définition donnée ci- dessus, présentent des propriétés inhibitrices d'au moins une enzyme DDE/DDD, en particulier mesurées par une activité inhibitrice observée in vitro. Des modalités d'expériences permettant de vérifier l'activité inhibitrice des molécules de l'invention sur des enzymes DDE/DDD, en particulier sur des transposases et/ou des intégrases rétrovirales, sont données dans les exemples ci-dessus.
[052] Par l'expression « enzyme DDE/DDD », on entend dans le cadre de la présente demande, toute enzyme ayant une activité phosphatidyltransférase et qui possède un site enzymatique catalytique formé par les trois acides aminés D, D et E (enzyme DDE) ou D, D et D (enzyme DDD). Dans un mode de réalisation particulier, les enzymes DDE/DDD sont des enzymes qui favorisent le déplacement d'un segment d'ADN au sein d'un génome ou entre des génomes. Cette expression englobe les transposases (bactériennes ou eucaryotes) et/ou les intégrases rétrovirales et/ou les recombinases RAG. [053] Dans un mode de réalisation particulier, l'enzyme DDE/DDD est une transposase d'origine procaryote, en particulier d'origine bactérienne, telle que MuA, Tn5 et Tn10. Dans un autre mode de réalisation, l'enzyme DDE/DDD est une transposase d'origine eucaryote telle qu'une transposase de la famille des Tc1/mariner (dont un exemple est la transposase MOS1 ou la transposase Sleeping Beauty) ou une transposase de la famille hAT (dont un exemple est la transposase Hermès).
[054] Dans un autre mode de réalisation de l'invention, l'enzyme DDE/DDD est une intégrase d'origine rétrovirale, en particulier une intégrase codée par le gène pol d'un retrovirus. Des rétrovirus, pouvant être ciblés par les molécules inhibitrices de l'intégrase de l'invention, appartiennent au genre Alpharetrovirus,
Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Lentivirus, et Spumavirus.
[055] Des lentivirus particulièrement intéressants sont listés dans le tableau I suivant :
Tableau I : liste de lentivirus
[056] Dans un mode de réalisation particulier, l'intégrase rétrovirale ciblée par les molécules de l'invention provient d'un rétrovirus à tropisme animal ou humain.
[057] Dans un mode de réalisation particulier, l'intégrase rétrovirale ciblée par les molécules de l'invention provient d'un lentivirus à tropisme humain, tels que le virus VIH (Virus de l'immunodeficience Humaine), en particulier l'isolât VIH-1 et/ou l'isolât VIH-2 (rétrovirus cytopathogènes).
[058] Des molécules particulières, inhibant l'activité enzymatique d'enzymes DDE/DDD, en particulier de transposases ou d'intégrases rétrovirales, sont les molécules ayant l'une des formules (III) à (Vl) suivantes :
[059] L'invention vise également une composition comprenant au moins une molécule telle que définie dans le cadre de la présente demande, et en particulier au moins une molécule répondant à la formule (I), (la), (Ib), (Ic), (II), (Ma) ci-dessus, ou à l'une des formules (III) à (Vl) ci-dessus. [060] Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la composition comprend au moins 2 molécules différentes choisies parmi les formules (I) à (Vl).
[061] Dans un mode de réalisation particulier, la composition est une composition thérapeutique ou pharmaceutique, c'est-à-dire qu'elle est adaptée à une administration chez un animal ou un patient.
[062] Dans un mode de réalisation particulier, la composition de l'invention comprend également un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Par « véhicule», on entend toute substance qui permet la formulation des molécules de l'invention au sein d'une composition. Dans un mode de réalisation particulier, le véhicule est une substance ou une combinaison de substances pharmaceutiquement acceptable(s), c'est-à-dire approprié pour l'utilisation de la composition en contact avec un être vivant (par exemple un animal, en particulier un mammifère non-humain, et par exemple un être humain), et est donc préférentiellement non toxique. De tels véhicules pharmaceutiquement acceptables sont par exemple de l'eau, une solution saline, des solvants miscibles dans l'eau, des sucres, des lieurs, des excipients, des pigments, des huiles végétales ou minérales, des polymères solubles dans l'eau, des agents tensio-actifs, des agents épaississants ou gélifiants, des agents cosmétiques, des agents conservateurs, des agents alcalinisants ou acidifiants .... [063] Dans un mode de réalisation particulier, la composition de l'invention, en plus de comprendre au moins une molécule de l'invention, et optionnellement un ou des véhicule(s) pharmaceutiquement acceptable(s), comprend en outre un composé additionnel biologiquement actif dans le traitement des symptômes liés à l'infection par un rétrovirus, en particulier un composé additionnel biologiquement actif dans le traitement des symptômes liés au Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise (SIDA). Le terme « additionnel » indique dans le cadre de la présente composition, que le composé est différent des molécules définies dans la présente demande, en particulier différent d'une molécule répondant à la formule (I) ci- dessus. [064] A titre d'exemple de composé additionnel biologiquement actif dans le traitement des symptômes liés au Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise, on citera (a) les inhibiteurs de protéases, (b) les inhibiteurs nucléosidiques de reverse transcriptase, (c) les inhibiteurs non-nucléosidiques de reverse transcriptase, (d) les inhibiteurs nucléotidiques de reverse transcriptase, (e) les inhibiteurs nucléotidiques et nucléosidiques, (f) les inhibiteurs d'intégrase et (g) les inhibiteurs de fusion et (h) les interleukines.
[065] L'invention concerne également l'utilisation d'au moins une molécule décrite dans la présente demande pour inhiber in vitro l'activité des enzymes DDE/DDD, en particulier les transposases ou les intégrases rétrovirales. Par « in vitro », on entend un test d'inhibition réalisé en dehors d'un organisme vivant entier, c'est-à-dire aussi bien un test réalisé en tube qu'un test réalisé sur culture de cellules procaryotes ou eucaryotes.
[066] L'invention concerne également une molécule ou une composition selon l'invention pour l'utilisation comme médicament.
[067] Ainsi, on peut envisager l'utilisation des molécules ou compositions de l'invention pour inhiber l'activité enzymatique des enzymes DDE/DDD, en particulier l'activité des transposases ou des intégrases rétrovirales selon la définition donnée dans la présente demande. C'est pourquoi l'invention vise également une molécule ou une composition décrite dans la présente demande, pour utilisation en tant qu'inhibiteurs d'enzymes DDE/DDD. Dans ce cadre thérapeutique, les molécules, seules ou utilisées sous forme d'une composition, sont N-substituées ou non-N-substituées.
[068] Dans un mode de réalisation particulier, les enzymes DDE/DDD sont des transposases ou des recombinases RAG. Dans un mode de réalisation particulier, les molécules ou compositions de l'invention sont utilisées pour inhiber ex vivo l'activité des transposases ou recombinases RAG.
[069] Dans un autre mode de réalisation, les enzymes DDE/DDD sont des intégrases provenant de rétrovirus, en particulier de lentivirus, à tropisme animal ou humain. Du fait de leur implication dans la propagation du Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise (SIDA), les rétrovirus de type VIH, tels que ceux des types VIH-1 et/ou VIH-2 (quel que soit leur sous-type), les intégrases de ces rétrovirus sont des cibles particulièrement intéressantes pour l'utilisation des molécules de l'invention. [070] L'invention se rapporte également à une molécule ou à une composition selon l'invention, pour l'utilisation dans le traitement des pathologies ou des symptômes associés et/ou consécutifs à une infection par un rétrovirus, en particulier consécutifs à une infection par un rétrovirus à tropisme animal ou à tropisme humain tel que VIH.
[071] Dans le cadre de la présente demande, par « traitement », on entend aussi bien l'effet curatif (disparition du rétrovirus par exemple) obtenu avec au moins une molécule ou une composition de l'invention, que l'amélioration des symptômes observés chez l'animal ou le patient (et consécutifs ou liés à la présence d'un rétrovirus) ou l'amélioration de l'état du patient. Ainsi, le terme « traitement » s'applique à l'infection par le rétrovirus tout comme aux symptômes ou aux pathologies découlant de l'infection par ce rétrovirus. Ainsi, une méthode, comprenant l'administration d'un composé ou d'une composition de l'invention à un animal ou un patient en ayant besoin, pour le traitement des pathologies ou des symptômes associés ou consécutifs à une infection par un rétrovirus, fait également partie de l'invention.
[072] Par « animal », on entend en particulier un mammifère non-humain. [073] Dans un mode de réalisation particulier, la demande concerne une molécule ou composition selon l'invention pour une utilisation dans la diminution, voire la suppression, de la réplication rétrovirale. L'effet de la molécule ou de la composition selon l'invention sur la diminution, voire la suppression, de la réplication du rétrovirus peut être mis en évidence par l'évolution de la charge virale plasmatique, chez l'hôte infecté.
[074] Dans un autre mode de réalisation, la demande vise une molécule de l'invention ou une composition la comprenant dans le traitement des symptômes et/ou de l'infection consécutifs à une infection par le VIH, et en particulier dans le traitement du Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise (SIDA). Avantageusement, le traitement discuté dans cette demande est approprié aux isolats VIH-1 et/ou VIH-2. Dans le cas du traitement d'une infection par l'isolât VIH-1 , le traitement s'applique aussi bien aux isolats du groupe O qu'aux isolats du groupe M, et en particulier pour les isolats du groupe M, aux clades A, B, C, D, E, F, G et H. L'efficacité du traitement des pathologies ou des symptômes liés au SIDA par la molécule ou la composition de l'invention peut être déterminée par l'évolution du nombre de Lymphocytes T CD4+, cellules cibles principales du virus VIH, optionnellement en combinaison avec le calcul de l'évolution de la charge virale plasmatique.
[075] Dans les utilisations thérapeutiques ou méthodes thérapeutiques décrites ci-dessus, la molécule ou la composition selon l'invention peut être sous forme solide (cachet, poudre, gélule, pilule, suppositoire, comprimé à libération accélérée, comprimé gastrorésistants, comprimé à libération prolongée) ou liquide (sirop, solution injectable, collyre). Ainsi, suivant sa forme galénique, la molécule ou la composition de l'invention peut être administrée par voie orale, transmuqueuse- buccale, vaginale, rectale, parentérale (intraveineuse, intramusculaire ou sous- cutanée), transcutanée (ou transdermique ou percutanée) ou cutanée.
[076] Fait également partie de l'invention, l'utilisation d'une molécule ou d'une composition selon l'invention, dans la fabrication d'un médicament pour le traitement des symptômes et/ou de l'infection consécutifs à une infection par un rétrovirus, en particulier le VIH, et en particulier pour le traitement du Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise.
[077] Dans un autre aspect, l'invention porte également sur l'utilisation du système MOS1 (transposon Mos1) en tant qu'outil de transfert d'ADN (« transposon tool »), en particulier en thérapie génique.
[078] Dans le cadre de la présente demande, le système MOS1 comprend les éléments suivants :
(a) la protéine MOS1 (acides aminés de 1 à 345), en particulier fusionnée à la Maltose-Binding protein ou MBP (afin d'en accroître la stabilité, mais sans en modifier l'activité) ou un mutant avantageux de la protéine MOS1.
(b) le transposon, éventuellement délété d'une partie de sa séquence et/ou porteur d'un transgène d'intérêt.
[079] Dans un mode de réalisation particulier, le transfert d'ADN est réalisé dans des cellules eucaryotes ; les cellules issues de ce transfert pourront être utilisées pour des applications ex-vivo, comme par exemple en thérapie génique, ou pour l'obtention de cellules usines (cellules productrices d'une protéine d'intérêt économique ou médical). [080] Les molécules selon l'invention peuvent donc être utilisées pour arrêter la réaction de transfert, provoquée par la mise en contact d'un système
MOS1 tel que décrit ci-dessus avec les cellules à transformer. L'avantage des molécules de l'invention est par conséquent de pouvoir contrôler et d'éviter les réactions « en cascade » du système MOS1.
DESCRIPTION DES DESSINS
[0811 Figure 1 : Structure des composés 1 à 10 sélectionnés. [082] Figure 2: Modèle du mécanisme de transposition de Mos1. [083] Figure 3: Essai d'excision sur le composé 9.
(a) Des essais d'excision in vitro ont été réalisés en utilisant pBC-3T3 surenroulé (SC) et diverses concentrations du composé 9 comme indiqué en haut de la figure. (-) : absence de transposase ; (D) : DMSO. Les marqueurs de poids moléculaire de l'ADN (MW) sont indiqués dans la marge de gauche en kbp. Les différents produits sont indiqués à droite : OC (cercle ouvert), L (linéaire = 4,6 kb), SC (surenroulé). Le transposon excisé (3T3 = 1 ,2 kb) et le squelette plasmidique (pBC = 3,4 kb) sont également indiqués.
(b) Courbe de la valeur d'IC50 ; les pourcentages d'inhibition de l'excision (ordonnés) ont été déterminés en fonction de la concentration (en M) du composé 9 (abscisse).
[084] Figure 4: Assemblage des complexes transposase-ITR par EMSA (Electrophoretic-mobility shift assay). Un EMSA a été réalisé avec MBP-MOS1 , en utilisant NTR30 comme sonde et les 10 composés (1 à 10 de la Figure 1 ) sélectionnés. (-) : absence de transposase ; (0) sans composé ; (D) : DMSO Les différents complexes (SEC1 , SEC2, PEC1 , PEC2), le complexe de capture de la cible (TCC) et l'ADN non lié (sonde libre) sont indiqués. SEC1 a été formé par une seule transposase fixée sur une seule ITR. Ce complexe passe pour résulter de la dissociation des complexes moléculaires supérieurs ((18) et communications personnelles). SEC2 a été formé par un dimère de transposase fixé sur une seule ITR, PEC1 a été formé par un dimère de transposase fixé sur une paire d'ITR, et PEC2 a été formé par un tétramère de transposase fixé sur une paire d'ITR. [0851 Figure 5: Essai du composé 6 sur l'excision. Des essais d'excision in vitro ont été réalisés en utilisant pBC-3T3 surenroulé (SC) et diverses concentrations du composé 6 comme indiqué en haut de la figure; (D) : DMSO. Les marqueurs de poids moléculaire de l'ADN (MW) sont indiqués dans la marge de gauche en kbp. Les différents produits sont indiqués à droite : OC (cercle ouvert), L (linéaire = 4,6 kb), SC (surenroulé). Le transposon excisé (3T3 = 1 ,2 kb) et le squelette plasmidique (pBC = 3,4 kb) sont également indiqués.
[086] Figure 6: Effet du composé 6 sur l'assemblage de complexes MOS1 - ITR. Un EMSA a été réalisé avec MBP-MOS1 , en utilisant NTR30 comme sonde et diverses concentrations du composé 6 comme indiqué en haut de la figure. (-) : absence de transposase ; (0) sans composé. Les différents complexes (SEC1 , SEC2, PEC1 , PEC2) et l'ADN non lié (sonde libre) sont indiqués. SEC1 a été formé par une seule transposase fixée sur une seule ITR. Ce complexe passe pour résulter de la dissociation des complexes moléculaires supérieurs. SEC2 a été formé par un dimère de transposase fixé sur une seule ITR, PEC1 a été formé par un dimère de transposase fixé sur une paire d'ITR, et PEC2 a été formé par un tétramère de transposase fixé sur une paire d'ITR.
[087] Figure 7: Réactions de transfert de brin de MOS1 en présence du composé 1. Des essais ont été effectués en utilisant MBP-MOS1 , TITR30 marquée, pBC-SK comme plasmide cible et diverses concentrations du composé 1 (en μM) comme indiqué en haut de la figure. No Tpase : absence de transposase ; (D) : DMSO. Les produits d'intégration sont indiqués à droite : OC (cercle ouvert), L (linéaire).
[0881 Figure 8: Réactions de transfert de brin de MOS1. Courbe de la valeur d'IC50 ; les pourcentages d'inhibition de l'excision (ordonnés) ont été déterminés en fonction de la concentration (en M) du composé 1 (abscisse). La valeur IC50 obtenue est reprise dans le tableau III.
[0891 Figure 9: Activités de maturation en 3' et de transfert de brin de l'intégrase du VIH-1 en présence du composé 4 ; des essais ont été effectués en utilisant l'intégrase du VIH-1 , un duplex oligonucléotidique imitant l'extrémité de la LTR U5 et diverses concentrations du composé 4 (en μM) comme indiqué en haut de la figure. No Int : absence d'intégrase ; (D) : DMSO ; (21 -mer) : brin transféré ; (19-mer) : produit de maturation en 3'. Les produits de transfert de brin sont indiqués à droite.
[0901 Figure 10: Activités de maturation en 3' et de transfert de brin de l'intégrase du VIH-1 en présence du composé 4. Courbe de la valeur d'IC50 ; les pourcentages d'inhibition du transfert de brin (ligne) et d'inhibition de la maturation
(pointillés) ont été déterminés en fonction de la concentration (en M) du composé 4
(abscisse).
[0911 Figure 11 : Exemple simplifié d'une méthode de synthèse des molécules de l'invention.
EXEMPLES
[092] A. Matériel et Méthodes [093] Composés [094] Pour cette étude, cent huit composés ont été fournis par le laboratoire
SPOT EA 3857 (Laboratoire de synthèse et physicochimie organique et thérapeutique) de l'Université François Rabelais de Tours, France. Les dérivés de bis-(hétéroaryl)maléimide (1 -4 de la Figure 1) ont été synthétisés par le laboratoire du professeur Marie-Claude Viaud-Massuard comme décrit dans la littérature (25). Vingt composés ont été achetés auprès de ChemBridge ou d'InterBioscreen, et ont été décrits antérieurement comme des inhibiteurs de la transposase Tn5 (14). Vingt-sept composés ont été décrits comme des inhibiteurs de l'intégrase du VIH- 1 : seize sont des intercalateurs d'ADN, gracieusement offerts par le Dr Vladimir Ryabinin (Institut de biologie moléculaire, Koltsovo, Russie), cinq sont de nouvelles thiazolothiazépines (26), quatre sont des G-quartets (27-30), et les deux derniers sont l'acide 3,5-dicaféoylquinique (31 ) et « l'inhibiteur d'intégrase 3 » (Merck). Les composés actifs sont représentés sur la figure 1. Tous les composés ont été remis en suspension dans du DMSO.
[095] Protéines
[096] La transposase MOS1 pleine longueur [acides aminés 1 à 345] et le domaine de dimérisation de MOS1 [acides aminés 1 à 85] ont été produits et purifiés sous la forme d'une protéine de fusion liée à la protéine de liaison au maltose (MBP) comme décrit antérieurement (8). Les termes « transposase », « MOS1 » et « Tnp » utilisés ici désignent une seule sous-unité de la protéine Mos1.
[097] Essais de transposition in vitro
[098] Les réactions de transposition in vitro ont été réalisées en utilisant pBC-3T3 à la fois comme ADN donneur et comme cible, comme cela avait été fait antérieurement pour des essais de transposition dans des bactéries (16). Les mélanges réactionnels de transposition contenaient 1 O mM de Tris-HCI (pH 9), 5O mM de NaCI, 0,5 mM de dithiothréitol, 2O mM de MgCI2, 0,5 mM d'EDTA, 100 ng de BSA, 80 nM de MBP-MOS1 et 600 ng de pBC-3T3 surenroulé dans un volume de 20 μl. Des inhibiteurs (concentration finale 80 μM) ou du DMSO ont été ajoutés aux mélanges réactionnels avant la transposase. Les réactions se sont déroulées librement pendant 30 min à 300C, puis 10 μl de solution d'arrêt (SDS 0,4 %, protéinase K 0,4 μg/μl) ont été ajoutés, et les mélanges réactionnels ont été incubés à 37°C pendant 30 min supplémentaires, puis à 65°C pendant 10 mn. Les produits ont été extraits au phénol-chloroforme, et précipités dans l'éthanol avec 1 μg d'ARNt de levure à l'aide de techniques classiques. 10 % du mélange réactionnel a été cotransformé avec 0,01 ng de pBS-SK(-), utilisé comme contrôle positif de la transformation (Stratagene) dans 45 μl de cellules électrocompétentes ύ'Escherichia coli JM109 (cuvette de 2 mm, 1 ,5 kV dans un MicroPulser™ de BioRad). Les bactéries ont été cultivées à 37°C pendant 1 heure dans du milieu SOC. Des dilutions appropriées de chaque réaction ont été étalées sur de la gélose LB-ampicilline (100 μg/ml) pour évaluer l'efficacité de transformation, et sur de la gélose LB-tétracycline (12,5 μg/ml) et de la gélose LB-chloramphénicol (80 μg/ml) pour évaluer la fréquence de transposition. La fréquence de transposition est le nombre de colonies TetR divisé par le nombre de colonies ChloramR. L'efficacité de transformation a été suivie à partir du nombre de colonies AmpR. L'effet des divers composés a été exprimé en calculant un facteur d'inhibition (IF) tel que IF = fréquence de transposition de contrôle (dans du DMSO) divisée par la fréquence de transposition obtenue avec le composé. Pour les dix médicaments les plus efficaces, chaque expérience a été répétée cinq fois. [099] Essais de retard de mobilité électrophorétique (EMSA)
[0100] L'ITR30 a été préparée et marquée comme décrit antérieurement (8), avec certaines modifications mineures : après marquage, l'ADN a encore été purifié sur un gel de polyacrylamide natif. Les réactions de liaison ont été réalisées dans 50 mM de NaCI, 0,5 mM de DTT, 10 mM de Tris (pH 9), 5 % de glycérol et 100 ng de BSA. Chaque réaction de 20 μl contenait 0,2 pmol d'ITR30 marquée au 32P, 400 mM de MBP-MOS1 purifié, 5 mM d'EDTA, et 1 μl du composé testé (concentration finale 400 μM) ou de DMSO. Les mélanges ont été incubés à 300C pendant deux heures. Les complexes ont été séparés en utilisant des gels discontinus de polyacrylamide natif à 4 à 6 %-TBE 0,25x (acrylamide/bisacrylamide 30 : 0,93) contenant 5 % de glycérol. Les gels ont été passés à 200 V pendant 3 heures, puis autoradiographiés.
[0101] Essais d'excision in vitro et détermination de la Cl50 [0102] Ces essais ont été effectués dans les mêmes conditions que les essais de transposition in vitro, à l'exception du fait que l'incubation a été réalisée à 37°C au lieu de 300C. Pour déterminer la Cl5o, une gamme de concentration de composé de 1000 à 0,8 μM a été utilisée comme indiqué dans le texte. Après incubation, la réaction a été interrompue en ajoutant 2 μl de tampon de chargement 10x, et les produits ont été directement chargés sur un gel de TAE 1x- agarose à 0,8 % contenant du bromure d'éthidium. La quantité de squelette libéré a été évaluée en utilisant le système GeneSnap (SynGene). Le pourcentage d'inhibition de l'excision a été tracé en fonction de la concentration de composé. Les données expérimentales ont été ajustées sur une courbe dose-réponse sigmoïde en utilisant le logiciel Prism. Chaque expérience a été répétée au moins deux fois.
[0103] Réactions de transfert de brin de Mos1
[0104] Les réactions (40 μl) ont été réalisées dans 50 mM de Tris-HCI (pH 9), 0,1 mg/ml de BSA et 5 % de glycérol en présence de 10 nM de substrat ITR préalablement clivé et 80 nM de MBP-MOS1. Le substrat ITR préalablement clivé a été formé en hybridant les oligonucléotides NTS-3 et TS : - NTS-3 : δ'-GGTGTACAAGTATGAAATGTCGTTTCG-S' ; et
- TS : δ'-AATTCGAAACGACATTTCATACTTGTACACCTGA-S'.
TS a été radiomarqué à la position 5' avec la polynucléotide kinase T4 (Promega) et du α-[32P]ATP. Après 20 min à température ambiante, du MgCI2 (concentration finale 5 mM) et 200 ng de plasmide cible pBC-KS (Stratagene) par réaction ont été ajoutés pendant 1 heure à 300C. Des inhibiteurs dilués dans du DMSO à 5 % ont été ajoutés lors de la formation des complexes et avant d'ajouter MgCb et le plasmide cible. Les réactions ont été interrompues avec 10 mM d'EDTA, et traitées avec 0,1 mg/ml de protéinase K, 0,1 % de SDS et 2 mM de CaCI2 à 45°C pendant 1 heure. Les réactions de transfert de brin ont été chargées et résolues sur un gel de TBE 1x-agarose à 0,8 %. Le gel a été coloré avec du bromure d'éthidium, puis séché et exposé à un écran au phosphore (phosphorimageur, STORM Molecular Dynamics). Les produits d'insertion ont été quantifiés en utilisant le logiciel Image Quant.
[0105] Essais de maturation en 3' et de transfert de brin du VIH-1 [0106] L'intégrase du VIH-1 a été purifiée comme décrit dans (32). 200 nM d'intégrase du VIH-1 ont été incubés en présence de 6,25 nM de duplex oligonucléotidique radiomarqué imitant l'extrémité de la LTR U5 dans un tampon contenant 20 mM de HEPES (pH 7,5), 10 mM de NaCI, 4 mM de DTT, 7,5 mM de MgCI2, 10 % de DMSO et diverses concentrations de médicaments. La réaction a été réalisée pendant 2 heures à 37°C, et les produits ont été séparés sur un gel d'urée à 18 %-acrylamide. Le gel a été balayé à l'aide d'un phosphorimageur, et analysé avec le logiciel Image Quant (Molecular Dynamics). Chaque expérience a été réalisée en double.
[0107] B. Résultats
[0108] Identification d'inhibiteurs de MOS1 [0109] Lors d'un premier essai d'identification d'inhibiteurs de la transposase de Mos1, une collection de 170 molécules a été criblée, en utilisant un essai de transposition in vitro. La première partie du panel testé était constituée d'inhibiteurs de la transposase Tn5 et de l'intégrase du VIH-1. Les autres composés, qui n'avaient jamais été testés comme inhibiteurs d'intégrase ou de transposase, étaient des dérivés hétérocycliques substitués.
[0110] L'essai de transposition a été réalisé en utilisant une protéine MOS1 purifiée fusionnée à la MBP et le plasmide pBC-3T3 portant un transposon pseudo-Mos7. Dans cet essai, pBC-3T3 a été utilisé comme donneur de pseudo- Mos1, ou comme cible pour l'intégration du transposon (16). Les événements de transposition ont été révélés par marquage par promoteur. La concentration des médicaments utilisés pour le criblage initial était de 80 μ M. Les 10 meilleurs composés présentaient un facteur d'inhibition (IF) supérieur à 25 (plus de 96 % d'inhibition) à comparer à l'expérience de contrôle effectuée en l'absence d'inhibiteur, mais en présence de DMSO (Tableau II).
Composés Facteurs d'inhibition
DMSO 4x1 Q-4 1
1 1 ,09x10"6 367
2 1 ,2x10"6 33
3 4,01 x10"6 100
4 5,37x1 Q-6 75
5 8,38x10"6 48
6 1 ,01 x1 Q'5 40
7 4,85x10"6 82,5
8 5,04x10"6 79
9 1 ,64x10"5 25
10 2,76x1 Q'6 145
Tableau II : Fréquence de transposition et facteur d'inhibition des 10 meilleurs composés (1 à 10 de la Figure 1 ) ; les valeurs de la fréquence de transposition et des facteurs d'inhibition sont la moyenne d'au moins cinq expériences. Les facteurs d'inhibition sont le rapport entre la fréquence de transposition obtenue avec du DMSO et celle obtenue avec chacun des composés 1 à 10.
[0111] Les structures de ces inhibiteurs sont représentées sur la Figure 1. Les composés 1 à 4 sont des dérivés de bis-(hétéroaryl)maléimide, et constituent des inhibiteurs des enzymes DDE/D inconnus jusqu'ici. Les composés 5 et 6 sont des /V-méthylpyrrole-polyamides, connus pour interagir avec l'ADN (synthèse dans (17)). Le composé 7 est un dérivé de bis-coumarine qui s'est également révélé être un inhibiteur de la transposase Tn5 et de l'intégrase du VIH- 1 (14). Les composés 8, 9 et 10 sont respectivement un dérivé de cinnamoyle, un dérivé d'acide benzoïque et une thioxothiazolidine substituée par un acide carboxylique. Ces trois composés (8, 9 et 10) avaient déjà été identifiés comme inhibiteurs de la transposase Tn5 (14).
[0112] Activité des inhibiteurs sur l'excision du transposon [0113] Pour mieux caractériser l'activité inhibitrice de ces dix composés et leurs mécanismes d'action sur la transposition de Mos1, la capacité des composés chimiques à inhiber l'excision du transposon a été testée in vitro, en utilisant le transposon pBC-3T3 comme plasmide donneur. MOS1 déclenche l'excision du transposon à partir du plasmide donneur, générant deux fragments d'ADN linéaire, le transposon (1 ,2 kb) et le squelette plasmidique (3,4 kb). Après excision, le transposon peut être réinséré dans une cible. L'activité d'excision du médicament a été mesurée en quantifiant le squelette plasmidique, car il s'agit d'un produit final de la réaction. L'activité du composé 9 est présentée sur la figure 3a. En l'absence de médicament, la transposase libérait le transposon du plasmide donneur (ligne 8). À la concentration la plus élevée de médicament (1 mM), l'excision du transposon était totalement supprimée (ligne 2).
[0114] Pour déterminer la concentration de médicament nécessaire pour inhiber 50 % de la réaction (Cl5o), les pourcentages d'inhibition mesurés à partir de deux expériences indépendantes ont été tracés en fonction de la concentration de médicament (figure 3b). Des expériences similaires ont été réalisées avec les neuf autres composés chimiques, et les valeurs Cl5o correspondantes sont reprises dans le tableau III.
Tableau III : Effet de chacun des composés sur différentes étapes du transposon Mos1 ; Les valeurs IC5O pour la liaison MOS1 -ITR et pour l'excision de Mos1 sont indiquées en μM, sauf indication contraire. Les effets sur l'assemblage de complexes MOS1 -ITR sont indiqués par (+) : complexes observés, (-) : absence de complexes et (+/-) : traces de SEC1. ND : non déterminé.
[0115] Les composés 2 à 6 étaient les meilleurs inhibiteurs de l'excision, avec des valeurs Cl5o de l'ordre de 10 μM. Un deuxième ensemble de médicaments, avec des valeurs Cl50 allant de 35 μM (composé 10) à 150 μM (composé 9), comprenait les inhibiteurs de Tn5. Enfin, le bis-furyl-maléimide (composé 1 ), le meilleur inhibiteur caractérisé dans l'essai de transposition initial, inhibait l'excision avec une Cl5o comprise entre 18 et 54 μM. Cette valeur Cl5o suggère que ce composé pourrait également agir sur des étapes ultérieures de la transposition. [0116] Ces résultats indiquent que les composés 1 à 10 ont un impact sensible sur l'excision du transposon. Les inhibiteurs de la transposase Tn5 (composés 7 et 10) bloquent la formation du complexe synaptique de Tn5 (14), tandis que les composés 5 et 6 sont de puissants inhibiteurs de la protéine de liaison à l'ADN (synthèse dans (17)). Les données de la littérature et ces résultats suggèrent fortement que ces composés pourraient agir au niveau de la formation de complexes transposase-ITR, une étape qui se déroule avant l'excision. [0117] Activité des inhibiteurs sur l'assemblage de complexes MOS-ITR
[0118] La capacité des dix molécules à inhiber l'apparition de complexes formés in vitro entre MOS1 et NTR 3' (8) a été testée, en utilisant la technique de retard de mobilité sur gel (EMSA). Des complexes MOS1 -ITR ont été formés avec une ITR 3' radiomarquée (ITR30) en présence d'une concentration de 400 μM de molécule. Cette concentration est au moins 2,5 fois plus élevée que la valeur Cl5o la plus haute qui a été mesurée pour les dix composés.
[0119] Ces données initiales indiquent que des complexes étaient toujours observés en présence du composé 1 (figure 4, ligne 4), mais que le motif était modifié, ce qui suggère que le médicament interagit avec les complexes. Par opposition, les complexes étaient totalement déstabilisés en présence des composés 2, 3, 4, 7, 8 et 10, et presque entièrement supprimés (90 % d'inhibition) en présence du composé 9, qui présentait la valeur Cl5o la plus élevée pour l'activité d'excision. Seules des traces du complexe abortif SEC1 ont été détectées. Les données observées ici pour les composés 7 à 10 sont tout à fait conformes avec le mode d'action de ces molécules sur l'assemblage des complexes de la transposase Tn5 et de l'intégrase du VIH-1 (14). Enfin, une concentration de 400 μM des composés 5 et 6 induisait une précipitation des substrats ITR et des complexes de transposase dans les puits, probablement par agglomération ou neutralisation de la charge de l'ADN. Une précipitation similaire du substrat ITR seul a également été observée à des concentrations élevées des médicaments 5 et 6 en PAGE native (non présenté).
[0120] Des interactions entre l'ADN et les composés 5 et 6 ont aussi été constatées avec le substrat plasmidique lors de l'essai d'excision (Figure 5). Pour confirmer le mécanisme d'action des médicaments 5 et 6, les expériences ont été répétées en réduisant leur concentration. Ces composés bloquaient totalement la formation des complexes spécifiques transposase-ITR à de faibles concentrations (40 nM, Figure 6). Conformément à ce que l'on sait des N-méthylpyrrole- polyamides (17), ces données indiquent donc que les composés 5 et 6 se lient à NTR, agissant ainsi comme concurrents de MOS1.
[0121] Des expériences similaires ont été réalisées en utilisant les nouveaux inhibiteurs de transposase (composés 2 à 4), et celles-ci ont montré que ces inhibiteurs bloquent la formation des complexes spécifiques transposase-ITR avec une valeur CI50 similaire à celle de l'excision (Tableau III).
[0122] II a donc été décidé de confirmer que les molécules, qui inhibent la formation de complexes, n'inhibent pas la formation de dimères de MOS1 , étape qui est supposée se former avant liaison à NTR (18). En utilisant une forme tronquée de MOS1 (Tnp[1 -85]), la dimérisation a été mesurée par des expériences de fixation de glutaraldéhyde, comme décrit antérieurement (18). Tous les composés testés n'ont pas pu inhiber la formation de dimères de Tnp[1 -85] à la concentration de 500 μM (non présenté), ce qui exclut l'hypothèse selon laquelle ces composés peuvent inhiber la formation de complexes en déstabilisant le domaine de dimérisation N-terminal. Ces résultats suggèrent que ces inhibiteurs agissent plus vraisemblablement au niveau de l'interaction ITR-MOS1. Les données pour les composés 5 à 10 étant conformes au mécanisme d'action de ces composés sur la transposase Tn5 et l'intégrase du VIH-1 , l'étude a été concentrée sur les nouveaux composés 1 à 4.
[0123] Effet des composés 1 à 4 de la Figure 1 sur les réactions de transfert de brin
[0124] Nous avons préalablement montré que trois des nouveaux composés (composés 2 à 4) empêchent l'assemblage de complexes MOS-ITR, alors que le composé 1 agit au niveau de l'excision de Mos1. Les réactions d'excision et de transfert de brin sont étroitement apparentées.
[0125] Le composé 1 a donc été testé pour vérifier s'il inhibait également la réaction de transfert de brin. Des ITR préalablement clivées ont été marquées sur l'extrémité 5' du brin de transfert, et utilisées pour former les complexes de transfert de brin. L'inhibiteur a été ajouté avant la formation de complexes MOS1 -ITR. Les événements de transposition dans un plasmide cible ont été détectés après résolution des produits de la réaction sur un gel d'agarose (Figure 7). Le pourcentage d'inhibition a été déterminé pour quatre expériences indépendantes, et tracé en fonction de la concentration de médicament (Figure 8). Le composé 1 inhibait la réaction de transfert de brin avec une valeur Cl5o comprise entre 19 et
45 μM. Il présentait également les propriétés d'un inhibiteur catalytique ; il ne pouvait pas empêcher l'assemblage de complexes MOS1 -ITR à des concentrations qui inhibaient à la fois la réaction d'excision et la réaction de transfert de brin.
[0126] Effet des inhibiteurs sur les activités de maturation en 3' et de transfert de brin de l'intégrase du VIH-1
[0127] Les précédents résultats ont démontré que les inhibiteurs de Tn5 et de l'intégrase du VIH-1 peuvent également inhiber MOS1. Pour vérifier si le nouveau groupe d'inhibiteurs (composés 1 à 4) est également susceptible de bloquer l'intégrase du VIH-1 , l'activité du composé 4 a été testée contre les activités de maturation en 3' et de transfert de brin de l'intégrase du VIH-1. L'essai a été réalisé comme décrit antérieurement (19) ; les résultats sont présentés à la Figure 9. Les pourcentages d'inhibition mesurés dans deux expériences indépendantes ont été tracés en fonction de la concentration de composé 4 (Figure 10). Le composé 4 inhibait la maturation en 3' avec une Cl5o de 70 μM, et l'activité de transfert de brin avec une Cl5o de 7 μM, autrement dit ce composé était 10 fois plus actif contre l'activité de transfert de brin. Il s'agissait également d'un excellent inhibiteur de l'intégrase du VIH-1. Ceci démontre que les dérivés de bis-(furanyl)-N- maléimide constituent un nouveau groupe d'inhibiteurs avec une activité croisée contre la transposase de Mos1 et l'intégrase du VIH-1. En conséquence, MOS1 peut être considéré comme un nouveau substitut pour l'identification d'inhibiteurs de l'intégrase du VIH-1.
Discussion
[0128] Identification d'inhibiteurs de MOS1 [0129] La disponibilité d'inhibiteurs spécifiques est très importante pour l'analyse et le contrôle de mécanismes élaborés tels que la transposition. Pour la première fois, la présente demande caractérise des composés chimiques qui inhibent la transposition de mariner, l'élément transposable le plus répandu chez les eucaryotes. Le mécanisme d'action des inhibiteurs les plus efficaces, identifiés en détail en criblant un panel de 170 composés, a été étudié. Un premier groupe était constitué de composés qui avaient déjà été identifiés comme inhibiteurs de transposase (Tn5) ou d'intégrase (VIH-1 ) (composés 5 à 10 de la Figure 1 ). Tous ces inhibiteurs bloquaient la formation de complexes MOS1 -ITR. Le deuxième groupe se composait d'une nouvelle famille de molécules présentant d'excellentes activités inhibitrices à la fois contre la transposase MOS1 et l'intégrase du VIH-1 (composés 1 à 4 de la Figure 1 ).
[0130] La cible des composés permet d'établir une distinction entre les composés 5 et 6, qui se lient à l'ADN, et les autres composés, qui sont privés de la capacité de liaison à l'ADN. Les composés 7 à 10 présentaient un mécanisme d'action similaire sur MOS1 et la transposase Tn5. Ils inhibaient la formation des complexes, probablement en perturbant l'un des domaines de reconnaissance d'ADN de la transposase. Les inhibiteurs de Tn5 étaient moins efficaces contre la transposition de Mos1, ce qui peut refléter des différences entre les mécanismes de reconnaissance de l'ADN et d'organisation des complexes. Les composés 5 et 6 sont des polyamides en épingle à cheveux composés d'un /V-méthylpyrrole- polyamide raccordé par un lieur acide γ-aminobutyrique (tour Y) et lié au sillon mineur d'ADN (17). Ils sont spécifiques d'une courte séquence constituée de trois (composé 6) ou quatre (composé 5) paires A/T. Ces séquences sont présentes à l'extréminté mais également à l'intérieur du substrat ITR. Un seul /V-méthylpyrrole sans tour Y de liaison était également actif contre la transposition de MOS1 (IF ~ 20). Il s'agissait également d'excellents inhibiteurs de la formation de complexes (CI5O de la liaison < 40 nM), mais ils étaient moins efficaces en présence d'ADN non spécifique. Dans l'essai d'excision, la quantité d'ADN était 160 fois plus élevée que dans l'essai de retard sur gel, et l'activité des composés chutait d'un facteur 250 (Cl50 de l'excision = 10 μM).
[0131] Les dérivés de bis-(hétéroaryl)maléimide constituent un nouveau squelette d'inhibiteurs des enzymes DDE
[0132] Le panel des composés testés dans le cadre de cette demande en tant qu'inhibiteurs de MOS1 était principalement constitué de molécules hétérocycliques substituées par des groupes hydroxyle. Des petites molécules de ce type ont d'ailleurs été identifiées antérieurement comme d'efficaces inhibiteurs de l'intégrase du VIH-1 (20). Parmi l'ensemble des molécules testées dans le cadre de cette demande, 21 étaient des dérivés de bis-(hétéroaryl)maléimide. Les inhibiteurs les plus efficaces mis en évidence étaient tous organisés autour d'un squelette bis-(hétéroaryl)maléimide (composés 1 à 4 de la Figure 1 ). Il a été mis en évidence que les squelettes non substitués étaient inefficaces, ce qui suggère que le squelette bis-(hétéroaryl)maléinnide lui-même n'est pas le pharmacophore (données non présentées). La /V-substitution du groupe maléimide et/ou la substitution du groupe hétéroaryle avaient toutes deux un impact majeur sur le mécanisme d'action et l'efficacité des composés. Les composés 2, 3 et 4, qui sont tous /V-substitués, inhibaient l'assemblage de complexes MOS1 -ITR avec des valeurs Cl5o très similaires à celles de l'excision. Par opposition, le composé 1 , qui n'est pas N-substitué, n'inhibait pas l'assemblage de complexes MOS1 -ITR, même si les différences de motif de migration suggèrent que le composé 1 peut modifier la structure des complexes. Ce composé était tout à la fois actif contre les activités d'excision et de transfert de brin, et affichait des valeurs Cl5o légèrement supérieures à celles des composés 2, 3 et 4. Les composés de cette famille ne se lient pas à l'ADN (21 ), mais ils ciblent probablement la transposase ou les complexes transposase-ADN. Il existe deux explications possibles à la différence radicale de mécanisme d'inhibition entre le composé 1 et les autres dérivés de maléimide. Premièrement, la cible du médicament peut être différente, à cause de la substitution par un groupe aromatique du N-maléimide (composés 2 à 4), ce qui pourrait expliquer la différence de mécanisme d'inhibition. Deuxièmement, les quatre composés pourraient tous avoir une cible similaire, mais la substitution aromatique volumineuse du N-maléimide perturbe la liaison à l'ADN, alors que le composé non-N-substitué tolère la présence d'ADN.
[0133] Comme cible, la poche catalytique DDD de la transposase MOS1 constitue un excellent candidat pour expliquer le changement majeur de mécanisme d'inhibition et d'activité croisée de ces composés contre l'intégrase du VIH-1 , car elle renferme des résidus catalytiques similaires et se lie à l'intersection des deux substrats d'ADN impliqués dans la réaction. Les composés dotés d'un squelette susceptible de se lier à cette région pourraient présenter des phénotypes inhibiteurs différents, devenant des inhibiteurs spécifiques de la formation de complexes, de l'excision ou du transfert de brin en conséquence de différences mineures de substitution de leur squelette.
[0134] Des cibles différentes des composés pourraient également expliquer les différents phénotypes de cette famille de composés. Des mutations ponctuelles dans le domaine N-terminal de HIMAR1 (une transposase mariner apparentée à MOS1 ) illustrent la façon dont des changements dans les interactions transposase-ITR peuvent avoir des conséquences pléiotropiques. Certaines mutations déstabilisent complètement les complexes transposase-ITR, alors que d'autres permettent aux complexes de se former, mais inhibent la première ou la deuxième réaction de clivage de brin (22). Ceci implique que les composés qui ciblent l'interaction domaine N-terminal/ITR pourraient refléter le phénotype des mutations du domaine N-terminal. L'identification de la/des cible(s) de cette famille de composés est déjà en cours, car elle apparaît comme essentielle aux futurs développements et à la compréhension du mécanisme d'action de ces inhibiteurs sur la transposition de Mos1 et le processus d'intégration du VIH-1.
[0135] Activité croisée des inhibiteurs des enzymes DDE
[0136] La capacité d'un composé à inhiber des enzymes apparentées sur le plan des mécanismes (activité croisée) est illustrée par les composés qui inhibent l'intégrase du VIH-1 , l'ASV et d'autres intégrases rétrovirales apparentées (23). En outre, les inhibiteurs d'intégrase de type dicétoacide (5 CITEP et L- 708 906) sont également actifs contre les recombinases RAG faiblement apparentées (24), bien que l'activité de cet inhibiteur soit fortement réduite (facteur 100). Plus récemment, un criblage d'inhibiteurs de la transposase Tn5 a été utilisé pour identifier des composés actifs contre l'intégrase du VIH-1 (14).
[0137] Les travaux présentés dans la présente demande constituent une nouvelle démonstration de l'activité croisée entre les inhibiteurs des transposases Tn5 et MOS1 , et pour la première fois entre MOS1 et l'intégrase du VIH-1. L'activité croisée de la nouvelle famille d'inhibiteurs identifiée montre que MOS1 constitue un excellent substitut pour un criblage d'inhibiteurs. Ce substitut est très intéressant pour les raisons suivantes. Premièrement, la transposition de MOS1 fonctionne dans un environnement eucaryote, comme l'intégrase, ce qui ouvre la possibilité d'un test d'inhibition dans des cellules eucaryotes. Deuxièmement, la structure du domaine catalytique de MOS1 est très similaire à celle des intégrases rétrovirales de l'ASV et du VIH-1 (9, 10). Troisièmement, le processus catalytique de clivage de l'ADN dans la transposition est similaire à la réaction de maturation d'une intégrase rétrovirale, la réaction du clivage du deuxième brin imitant l'activité de maturation en 3' de l'intégrase (il n'y a pas d'intermédiaire inter-brin ou en épingle à cheveux dans ces deux réactions). Jusqu'ici, le transpososome de Tn5 a été utilisé comme modèle de l'intégrasome rétroviral, mais le transposome mariner pourrait constituer un nouveau modèle, probablement meilleur, de l'organisation de l'intégrasome du VIH-1. Néanmoins, il faut garder à l'esprit que ces deux modèles (Mos1 et VIH-1 ) affichent des différences sensibles, telles la structure et la configuration de leur domaine de liaison à l'ADN, la nature du substrat d'ADN donneur, et la réaction de clivage de l'ADN (réaction de clivage des deux brins contre réaction de clivage d'un seul brin), ce qui signifie que les deux systèmes ne sont pas totalement interchangeables. Dans cette perspective, l'utilisation de médicaments d'activité croisée offrira un outil intéressant pour détecter les similitudes et les différences entre ces deux enzymes.
BIBLIOGRAPHIE
1. Craig NL CR, Gellert M, Lambowitz AM (2002) Mobile DNA II (ASM Press, Washington DC. ).
2. Duverger Y, Belougne J, Scaglione S, Brandli D, Beclin C, & Ewbank JJ (2007) Nucleic Acids Res 35, e11. 3. Keravala A, Liu D, Lechman ER, Wolfe D, Nash JA, Lampe DJ, & Robbins PD (2006) Hum Gène Ther W, 1006-1018.
4. Kapetanaki MG, Loukeris TG, Livadaras I, & Savakis C (2002) Nucleic Acids Res 30, 3333-3340.
5. Kuwayama H, Yaginuma T, Yamashita O, & Niimi T (2006) Insect Mol Biol 15, 507-512.
6. Yant SR, Huang Y, Akache B, & Kay MA (2007) Nucleic Acids Res.
7. Koga A & Hori H (2001 ) Gènes Genêt Syst 76, 1 -8.
8. Auge-Gouillou C, Brillet B, Hamelin MH, & Bigot Y (2005) Mol CeII Biol 25, 2861 - 2870. 9. Richardson JM, Finnegan DJ, & Walkinshaw MD (2007) Acta Crystallograph Sect F Struct Biol Cryst Commun 63, 434-437.
10. Richardson JM, Dawson A, O'Hagan N, Taylor P, Finnegan DJ, & Walkinshaw MD (2006) Embo J 25, 1324-1334.
11. Curcio MJ & Derbyshire KM (2003) Nat Rev Mol CeII Biol 4, 865-877. 12. Rice PA & Baker TA (2001 ) Nat Struct Biol 8, 302-307.
13. Dyda F, Hickman AB, Jenkins TM, Engelman A, Craigie R, & Davies DR (1994) Science 266, 1981 -1986. 14. Ason B, Knauss DJ, Balke AM, Merkel G, Skalka AM, & Reznikoff WS (2005) Antimicrob Agents Chemother 49, 2035-2043.
15. Barreca ML, De Luca L, lraci N, & Chimirri A (2006) J Med Chem 49, 3994- 3997. 16. Auge-Gouillou C, Hamelin MH, Demattei MV, Periquet M, & Bigot Y (2001 ) Mol Genêt Genomics 265, 51-57.
17. Dervan PB EB (2003) Curr Opin Struct Biol 13, 284-299.
18. Auge-Gouillou C, Brillet B, Germon S, Hamelin MH, & Bigot Y (2005) J Mol Biol 351, 117-130. 19. Craigie R, Mizuuchi K, Bushman FD, & Engelman A (1991 ) Nucleic Acids Res
19. 2729-2734.
20. Dayam R & Neamati N (2003) Curr Pharm Des 9, 1789-1802.
21. Dubernet M (2004) in UFR sciences pharmaceutiques (University François Rabelais, Tours). 22. Butler MG, Chakraborty SA, & Lampe DJ (2006) Genetica 127, 351 -366.
23. Lubkowski J, Yang F, Alexandratos J, Wlodawer A, Zhao H, Burke TR, Jr., Neamati N, Pommier Y, Merkel G, & Skalka AM (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95, 4831-4836.
24. Paull TT & Gellert M (2000) Proc Natl Acad Sci U S A 97, 6409-6414. 25. Dubernet M CV, Guillard J and Viaud-Massuard MC (2005) tetrahedron 61, 4585-4593.
26. Aiello F, Brizzi A, Garofalo A, Grande F, Ragno G, Dayam R, & Neamati N (2004) Bioorg Med Chem 12, 4459-4466.
27. Jing N (2000) Expert Opin Investig Drugs 9, 1777-1785. 28. Jing N, De Clercq E, Rando RF, Pallansch L, Lackman-Smith C, Lee S, & Hogan ME (2000) J Biol Chem 275, 3421 -3430.
29. Jing N, Marchand C, Liu J, Mitra R, Hogan ME, & Pommier Y (2000) J Biol Chem 275, 21460-21467.
30. de Soultrait VR, Lozach PY, Altmeyer R, Tarrago-Litvak L, Litvak S, & Andreola ML (2002) J Mol Biol 324, 195-203.
31. Islam MS YM, Yahara S, Okuno S, lshiguro K, Yamakawa O (2002). J Agric Food Chem 50, 3718-3722.
32. Leh H, Brodin P, Bischerour J, Deprez E, Tauc P, Brochon JC, LeCam E, Coulaud D, Auclair C, & Mouscadet JF (2000) Biochemistry 39, 9285-9294.

Claims

REVENDICATIONS
1. Molécule, comprenant une structure bis-(hétéroaryl)maléimide, de formule (I) :
dans laquelle:
- R1 est choisi dans le groupe constitué d'un hydrogène, d'un alkyle linéaire ou ramifié, d'un alkényle, d'un alcynyle, d'un cycloalkyle, d'un hétérocyclyl, d'un hétéroaryle, d'un hétéroaralkyle, d'un hétéroalkoxy, d'un carboxyle, d'un alkoxycarbonyle, d'un tétrazolyle, d'un acyle, d'un arylsulfonyl, d'un hétéroarylsulfonyle, d'un phényle, d'un hydroxyphényle ou d'un groupement
COOEt
- R2 et R3 sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, dans le groupe constitué d'un atome d'hydrogène, d'un acide carboxylique, d'un cyano, d'une oxime, d'un éther d'oxime, d'un tétrazole, d'un ester, d'un amide substitué ou non, d'un acide, d'un diacide, d'un acide cycloalkylcarboxylique, d'un aryle substitué ou non, d'un hétéroaryle substitué ou non, et du groupement -CH=CH-CHO.
- Ar1 et Ar2, sont choisis, indépendamment l'un de l'autre, et sont constitués d'un cycloalkyle substitué ou non, d'un hétéroaryle substitué ou non, d'un aryle substitué ou non, d'un hétéroalkyle linéaire ou ramifié ; et dans laquelle il est exclu que R1, R2 et R3 soient ensemble H ;
2. Molécule selon la revendication 1 , dans laquelle R2 et R3 sont identiques, de formule (la) :
R2
3. Molécule selon la revendication 1 , dans laquelle Ar1 et Ar2 sont identiques, de formule (Ib) :
4. Molécule selon la revendication 1 , dans laquelle R2 et R3 d'une part, et Ar1 et Ar2 d'autre part, sont identiques, de formule (Ic)
5. Molécule selon la revendication 1 , dans laquelle :
- Ar1 est constitué d'un hétéroaryle monocyclique portant R2, choisi parmi le groupement R2-pyridyle, R2-pyrazinyle, R2-furanyle, R2-thienyle, R2-pyhmidinyle, R2-isoxazolyle, R2-isothiazolyle, R2-oxazolyle, R2-thiazolyle, R2-pyrazolyle, R2-furazanyle, R2-pyrrolyle, R2-pyrazolyle, R2-triazolyle, R2-pyrazinyle et R2-pyridazinyle, ledit hétéroaryle monocyclique étant substitué ou non ; et
- Ar2 est, indépendamment de Ar1, constitué d'un hétéroaryle monocyclique portant R3, choisi parmi le groupement R3-pyridyle, R3-pyrazinyle, R3-furanyle, R3-thienyle, R3-pyhmidinyle, R3-isoxazolyle, R3-isothiazolyle, R3-oxazolyle, R3-thiazolyle, R3-pyrazolyle, R3-furazanyle, R3-pyrrolyle, R3-pyrazolyle, R3- triazolyle, R3-pyrazinyle et R3-pyridazinyle, ledit hétéroaryle monocyclique étant substitué ou non.
6. Molécule selon la revendication 1 , dans laquelle Ar1 et/ou Ar2 est un groupement furanne.
7. Molécule selon la revendication 5, dans laquelle Ar1 et Ar2 sont un groupement furanne, de
8. Molécule selon la revendication 5, dans laquelle Ar1 et Ar2 sont respectivement
R2-furanyle et R3-furanyle.
9. Molécule selon la revendication 7 ou 8, dans laquelle R2 et R3 sont identiques, de formule (Ma) :
10. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle R2 et/ou R3 est COOH.
11. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans laquelle R2 et/ou R3 est CH=CH-CHO.
12. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 , dans laquelle R1 est un groupement phényle, éventuellement substitué.
13. Molécule selon la revendication 12, dans laquelle R1 est le 4- hydroxyphényle.
14. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 , dans laquelle R1 est
15. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 , dans laquelle R1 est H.
16. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, qui n'est pas :
- une molécule de formule (I) dans laquelle lorsque R1 est un hydrogène et Ar1 et Ar2 sont des furannes, R2 et R3 sont CHO ; et
- une molécule de formule (I) dans laquelle lorsque R1 est un phényle et Ar1 et Ar2 sont des furannes, R2 et R3 sont CHO.
17. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 et 16, caractérisée en ce qu'elle est N-substituée.
18. Molécule selon la revendication 15 ou 16, caractérisée en ce qu'elle n'est pas N-substituée.
19. Molécule selon l'une quelconque des revendications ci-dessus choisie dans le groupe constitué des formules (III) à (Vl) suivantes :
et
20. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, possédant in vitro une activité inhibitrice des enzymes DDE/DDD.
21. Composition caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une molécule inhibitrice selon l'une quelconque des revendications 1 à 20.
22. Composition selon la revendication 21 , caractérisée en ce qu'elle comprend de plus un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
23. Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 22, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un composé additionnel biologiquement actif dans le traitement des symptômes liés au Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise.
24. Utilisation d'une molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20 pour l'inhibition in vitro de l'activité des enzymes DDE/DDD.
25. Utilisation selon la revendication 24, dans laquelle les enzymes DDE/DDD sont des transposases, telles que MuA, Tn5 et MOS1.
26. Utilisation selon la revendication 24, dans laquelle les enzymes DDE/DDD sont des intégrases rétrovirales, telle que celle du virus VIH-1.
27. Utilisation d'une molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20 pour l'inhibition ex vivo de transposases.
28. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20, pour utilisation en tant qu'inhibiteur d'enzymes DDE/DDD.
29. Molécule selon la revendication 28, pour utilisation en tant qu'inhibiteur d'intégrases rétrovirales.
30. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20, pour utilisation comme médicament.
31. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20, pour utilisation dans la diminution, voire la suppression, de la réplication rétrovirale.
32. Molécule selon la revendication 31 dans laquelle le rétrovirus est un lentivirus.
33. Molécule selon la revendication 32, dans laquelle le lentivirus est un lentivirus à tropisme humain, tel que le virus VIH (Human Immunodeficiency Virus).
34. Molécule selon la revendication 33, dans laquelle le virus VIH est un isolât VIH-1 ou un isolât VIH-2.
35. Molécule selon la revendication 32, dans laquelle le lentivirus est un lentivirus à tropisme animal, tel qu'un lentivirus choisi dans le groupe constitué d'un virus CAEV (Caprine Arthritis Encephalitis Virus), d'un virus EIAV (Equine Infectious Anaemia Virus), d'un virus VISNA, d'un virus SIV (Simian Immunodeficiency Virus) ou d'un virus FIV (Féline Immunodeficiency Virus).
36. Molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20, pour utilisation dans le traitement des symptômes et/ou de l'infection consécutifs à une infection par le VIH.
37. Molécule selon la revendication 36, pour utilisation dans le traitement du Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise.
38. Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 23, pour utilisation comme médicament.
39. Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 23, pour utilisation dans la diminution, voire la suppression, de la réplication rétrovirale.
40. Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 23, pour utilisation en tant qu'inhibiteur de l'intégrase d'un rétrovirus, en particulier d'un lentivirus.
41. Composition selon la revendication 39 ou 40, dans laquelle le rétrovirus est le virus VIH, en particulier l'isolât VIH-1 ou l'isolât VIH-2.
42. Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 23, pour utilisation dans le traitement du Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise.
43. Composition selon l'une quelconque des revendications 38 à 42, pour administration sous forme de solide (cachet, poudre, gélule, pilule, suppositoire, comprimé à libération accélérée, comprimé gastrorésistants, comprimé à libération prolongée) ou liquide (sirop, solution injectable, collyre).
44. Composition selon l'une quelconque des revendications 38 à 42, pour administration par voie orale, transmuqueuse-buccale, vaginale, rectale, parentérale (intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée), transcutanée (ou transdermique ou percutanée) ou cutané.
45. Utilisation d'une molécule selon l'une quelconque des revendications 1 à 20 ou d'une composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 23, dans la fabrication d'un médicament pour le traitement des symptômes et/ou de l'infection consécutifs à une infection par le VIH, en particulier pour le traitement du Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise.
46. Utilisation du système MOS1 pour le criblage d'inhibiteur d'intégrases rétrovirales.
47. Utilisation selon la revendication 46, caractérisée en ce qu'elle est effectuée dans des cellules eucaryotes.
48. Utilisation selon la revendication 46 ou 47, caractérisée en ce ladite intégrase rétrovirale est l'intégrase d'un virus VIH, en particulier d'un isolât VIH-1 ou d'un isolât VIH-2.
EP09708488A 2008-02-04 2009-02-03 Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl) maleimide, et leur utilisation dans l'inhibition d'enzymes dde/ddd Withdrawn EP2240471A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0800569A FR2927075A1 (fr) 2008-02-04 2008-02-04 Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl)maleimide, et leur utilisation dans l'inhibition d'enzymes
PCT/EP2009/051210 WO2009098206A1 (fr) 2008-02-04 2009-02-03 Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl) maleimide, et leur utilisation dans l'inhibition d'enzymes dde/ddd

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP2240471A1 true EP2240471A1 (fr) 2010-10-20

Family

ID=39712702

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP09708488A Withdrawn EP2240471A1 (fr) 2008-02-04 2009-02-03 Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl) maleimide, et leur utilisation dans l'inhibition d'enzymes dde/ddd

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20110124703A1 (fr)
EP (1) EP2240471A1 (fr)
JP (1) JP2011510958A (fr)
CA (1) CA2715483A1 (fr)
FR (1) FR2927075A1 (fr)
WO (1) WO2009098206A1 (fr)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150284768A1 (en) * 2012-05-29 2015-10-08 The Johns Hopkins University Eukaryotic transposase mutants and transposon end compositions for modifying nucleic acids and methods for production and use in the generation of sequencing libraries

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ227850A (en) * 1988-02-10 1991-11-26 Hoffmann La Roche Indole substituted pyrrole derivatives; preparatory process and medicaments for use against inflammatory immunological, bronchopulmonary or vascular disorders
US5380746A (en) * 1989-05-05 1995-01-10 Goedecke Aktiengesellschaft Bis-(1H-indol-3-YL)-maleinimide derivatives, processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them
JPH0619039A (ja) * 1992-07-01 1994-01-28 Mitsubishi Kasei Corp 有機光記録媒体及びその光記録再生方法
PE91698A1 (es) * 1996-07-29 1998-12-24 Hoffmann La Roche Pirroles sustituidos
US5990319A (en) * 1996-08-23 1999-11-23 Eli Lilly And Company Synthesis of bisindolylmaleimides
JP2005505595A (ja) * 2001-10-12 2005-02-24 シェーリング　コーポレイション Ｃｘｃ−ケモカインレセプターアンタゴニストとしての３，４−二置換マレイミド化合物
JP2005531607A (ja) * 2002-06-05 2005-10-20 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ キナーゼ阻害剤として置換ピロリン
EP1513830A1 (fr) * 2002-06-05 2005-03-16 Janssen Pharmaceutica N.V. Derives de bisindolyl-maleimide utilises en tant qu'inhibiteurs de kinase
WO2006004959A2 (fr) * 2004-06-30 2006-01-12 Egen Corporation Peg-interferon alpha-1b
MX2008000463A (es) * 2005-07-11 2008-03-11 Novartis Ag Derivados de indolil-maleimida.

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2009098206A1 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2009098206A1 (fr) 2009-08-13
CA2715483A1 (fr) 2009-08-13
US20110124703A1 (en) 2011-05-26
FR2927075A1 (fr) 2009-08-07
JP2011510958A (ja) 2011-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Di Santo Inhibiting the HIV integration process: past, present, and the future
Nair HIV integrase as a target for antiviral chemotherapy
Mazumder et al. Effects of tyrphostins, protein kinase inhibitors, on human immunodeficiency virus type 1 integrase
Meadows et al. Current developments in HIV chemotherapy
ES2974541T3 (es) Derivados de pirido[2,3-d]pirimidina como inhibidores de la replicación del virus de la inmunodeficiencia humana
Crosby et al. Design, synthesis, and biological evaluation of novel hybrid dicaffeoyltartaric/diketo acid and tetrazole-substituted L-chicoric acid analogue inhibitors of human immunodeficiency virus type 1 integrase
US20200281880A1 (en) Inactivators of toxoplasma gondii ornithine aminotransferase for treating toxoplasmosis and malaria
JP2013540767A (ja) 免疫不全ウイルス転写を調節するための組成物および方法
Ohata Friedel–Crafts reactions for biomolecular chemistry
Zhou et al. Recent advances in inhibitors of sirtuin1/2: an update and perspective
Patel et al. Sketching the historical development of pyrimidones as the inhibitors of the HIV integrase
Farjallah et al. A coumarin-based analogue of thiacetazone as dual covalent inhibitor and potential fluorescent label of HadA in Mycobacterium tuberculosis
Nair et al. β-Diketo acids with purine nucleobase scaffolds: Novel, selective inhibitors of the strand transfer step of HIV intégrase
WO1999048371A1 (fr) Nouveaux inhibiteurs de vih integrase et traitement du vih fonde sur des combinaisons de medicaments contenant des inhibiteurs d&#39;integrase
US20120083498A1 (en) Modulators of Viral Transcription, and Methods and Compositions Therewith
EP2240471A1 (fr) Molecules comprenant un squelette bis-(heteroaryl) maleimide, et leur utilisation dans l&#39;inhibition d&#39;enzymes dde/ddd
Barik et al. Structural aspects of HIV-1 integrase inhibitors: SAR studies and synthetic strategies
Lin et al. Structural Optimization of 2, 3-Dihydro-1H-cyclopenta [b] quinolines targeting the noncatalytic RVxF site of protein phosphatase 1 for HIV-1 inhibition
Nair Novel inhibitors of HIV integrase: the discovery of potential anti-HIV therapeutic agents
WO2007065007A2 (fr) Traitement d&#39;infections virales
CA2579089A1 (fr) Methodes et compositions ayant trait a l&#39;inhibition de virus utilisant des inhibiteurs de rnase h
US11389455B2 (en) Inhibitors of HIV-1 integrase multimerization
WO2013060980A1 (fr) Analogues de nucleosides pour le traitement d&#39;une infection virale, et methode d&#39;evaluation de la sensibilite audit traitement
Nair Novel inhibitors of HIV integrase: the discovery of potential anti-HIV therapeutic agents
US20230121031A1 (en) Masked fluorogenic compounds and methods of using the same

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20100804

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A1

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO SE SI SK TR

AX Request for extension of the european patent

Extension state: AL BA RS

17Q First examination report despatched

Effective date: 20110121

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20130529