JP2011510958A - ビス（ヘテロアリール）マレイミド骨格を含む分子、及びｄｄｅ／ｄｄｄ酵素の阻害におけるそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、ビス-(ヘテロアリール)マレイミド構造をもち、不変アミノ酸Ｄ、Ｄ、及びＥ、又はＤ、Ｄ、及びＤを含む触媒ポケットをもつ酵素、例えば、トランスポサーゼ、ＲＡＧリコンビナーゼ、又はレトロウイルス・インテグラーゼに関して阻害特性を有する分子に関する。本発明はまた、トランスポサーゼ、ＲＡＧリコンビナーゼ、及びレトロウイルス・インテグラーゼ、例えばＨＩＶインテグラーゼのインビトロ、エクスビボ、又はインビボでの阻害のための前記の分子の使用、並びに、動物又はヒト宿主におけるこれらの酵素に関連する疾患の治療、特にＡＩＤＳの治療に前記の分子を用いることにも関する。

Description

本発明は、不変（インバリアント）アミノ酸Ｄ、Ｄ、及びＥ、又はＤ、Ｄ及びＤを含む触媒ポケットをもつ酵素阻害剤の分野（例えば、トランスポサーゼ、レトロウイルス・インテグラーゼなど）、並びにビトロ試験における、又は動物又はヒト宿主におけるこれらの酵素に関連する疾患の治療におけるこれらの阻害剤の使用に関する。本発明は、前記の阻害剤をスクリーニングするためのシステム、特に、インビトロにおける、真核細胞におけるシステムにも関する。

トランスポサーゼ（転移酵素）及びレトロウイルス・インテグラーゼ（レトロウイルス組込み酵素）は、同じゲノム又はゲノム間でのＤＮＡセグメントの置換を促す酵素である。そのような酵素は、それらが様々な生物に由来するとしても、構造的に類似した触媒ドメインを持っている。したがって、結晶学的研究は、それらのペプチド配列に類似性がないにも関わらず、触媒コア（又はポケット）の構造、特に不変ＤＤＥ／Ｄ残基の三連構造の位置は、少なくとも３つのトランスポサーゼ（ＭｕＡ、Ｔｎ５、及びＭＯＳ１）（１０、１２）及び少なくとも２つのインテグラーゼ（ＨＩＶ−１及びＡＳＶ）（１２、１３）については概略重なることを示している。これらの酵素の全てにおいて、この触媒三連構造の役割は、それらに必要な金属イオンを配位させることによって触媒を手助けすることである。また、Ｔｎ５トランスポサーゼは、ＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤を同定するために用いることができることも最近実証されている（１４、１５）。

ＤＮＡトランスポゾンは、ゲノム内での移動をもともと受けやすい分離したＤＮＡセグメントに対応するクラスＩＩ転移性エレメントである（概説については（１）を参照されたい）。さらに、それらのいくつかは、それらが初めはその中で孤立しているホストにわずかしか関連していない種の中で移動できる大きな能力を有していることを経験は示している。それらの特性は、モデル生物における挿入突然変異誘発及び胚遺伝子組み換えのための、及び潜在的には遺伝子治療のための、トランスポゾンに基づくツールの開発へと導いている。トランスポゾンＭｏｓ１（２）、Ｍｉｍａｒ１（３）、Ｍｉｎｏｓ（４）、ＰｉｇｇｙＢａｃ（５）、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ（６）、及びＴｏｌ２（７）は、そのようなツール（トランスポゾンツール）の開発のための主要な候補として選択されている。

Ｍｏｓ１は、２８ｂｐの末端逆位配列（ＩＴＲ）を末端に有する１２８６ｂｐのエレメントである。Ｍｏｓ１は、ＭＯＳ１（３４５アミノ酸のトランスポサーゼ）をコードする単一のオープンリーディングフレームを含み、カット・アンド・ペースト機構によってそのホストのゲノムに沿って動く。それ全体の機構は、４つの主な段階からなっている：［１及び２］ＭＯＳ１のホモ二量体化、及びシナプス複合体の構築、［３］Ｍｏｓ１の切除、及び［４］新しい遺伝子座における標的認識及びＭｏｓ１の挿入（図２）。この活性は、アミノ酸の三連構造、ＤＤ３４Ｄに基づき、これは触媒に必要なカチオンにキレートする（１０）。Ｍｏｓ１トランスポサーゼは、大きな「ＤＤＥ酵素」ファミリーに属する（１１）。このグループでは、マリナー・トランスポサーゼは例外を構成し、なぜならそれらはＤＤＤ三連構造を含むからである。

トランスポサーゼの活性を理解し、「トランスポゾンツール」との関連での転位（transposition）の効率をモニターすることには、これらの酵素の活性を阻害できる分子を特定することが含まれる。しかし、現在まで、いかなるそのような化合物も、マリナー・トランスポサーゼに対しては得られていない。

レトロウイルス・インテグラーゼ（レトロウイルスのｐｏｌ遺伝子によってコードされる）は、感染した細胞のゲノム（標的ＤＮＡ）中へのウイルスゲノム（二重鎖ＤＮＡの形態に逆転写されたもの）の組み込みを確実にする酵素である。インテグラーゼは、実際、組込み過程において２つの酵素的機能、ＤＮＡの切断と鎖（ストランド）の転移を行う。したがって、インテグラーゼ（ＩＮ）は、レトロウイルスＬＴＲ（長い末端反復配列）の末端に位置するウイルスサイトａｔｔを認識し且つ結合し、これらＬＴＲの３’位の２つの塩基対の切除を触媒する。ひとたび切断されると、ウイルスＤＮＡは、タンパク質／ＤＮＡ複合体を介してホスト細胞の核の中に移入され、そこで次にインテグラーゼが標的ＤＮＡを切断してフリーの５’末端を形成し、これがウイルスＤＮＡのフリー３’ＯＨ部分に結合される。ウイルスＤＮＡの切断及び組込みが起こる標的ＤＮＡのヌクレオチド配列に対するいかなる特異性も確認されていない。

レトロウイルス・インテグラーゼの触媒ドメインは、モチーフＤＤ−３５−Ｅをもつ不変三連構造を含み、それぞれ、ＨＩＶインテグラーゼの場合のＤ６４、Ｄ１１６、及びＥ１５２残基、又はルー・サルコーマ・ウイルス（Roux sarcoma virus、ＲＳＶ）の場合のＤ６４、Ｄ１２１、及びＥ１５７残基を含む。

レトロウイルス疾患におけるそれらの役割のせいで、それらが動物起源であろうとヒト起源であろうと感染した細胞へのレトロウイルスの組み込みをもたらすレトロウイルス・インテグラーゼの活性に結びつく機構を理解することと並んで、インビトロで阻害することができる分子を特定することは、治療目的のために、ヒトの健康の優先事項である。

非特許文献は本明細書の最後の一覧表に示す。

したがって、トランスポサーゼだけでなく、レトロウイルス・インテグラーゼも阻害することができる分子の特定に対する真の必要性が存在する。それらの分子は、切除及び組込み過程の機構を理解することと、レトロウイルスによる動物及びヒトの感染に関連する症状の治療との両方に用いることができる。その分子の探索もまた、原核生物環境中及び真核生物環境中の両方で機能しうるＤＤＥ／ＤＤＤ酵素阻害剤スクリーニングシステムの特徴付けを必要としており、それは、そのスクリーニングシステムによって特定される分子が、治療における応用の目的で検討されやすい阻害活性を有することを確実にするためである。

［発明の詳細な説明］
本発明は、普通のビス(ヘテロアリール)マレイミド構造を有し、且つ下記式Ｉを有する分子を意図している。

式（Ｉ）中、Ｒ^１基は、水素、直鎖状又は分枝状アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルコキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、テトラゾリル、アシル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、フェニル、ヒドロキシフェニル、又は以下の基：
を含む群から選択される。

特定の態様では、Ｒ^１はＨである。

別の態様では、Ｒ^１は、任意選択で置換されていてもよいフェニル基であり、例えば、4-ヒドロキシフェニルである。

別の態様では、Ｒ^１は以下の式：
を有する。

上記式（Ｉ）では、Ｒ^２基及びＲ^３基は、互いに独立に、水素原子、カルボン酸（好ましくはＣ１〜Ｃ５）、シアノ、オキシム、オキシムエーテル、テトラゾール、エステル、置換又は非置換のアミド、酸（好ましくはＣ１〜Ｃ５）、二塩基酸（好ましくはＣ１〜Ｃ５）、シクロアルキルカルボン酸（特にＣ５及びＣ６）、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び-ＣＨ＝ＣＨ-ＣＨＯ基によって構成される群から選択される。

特定の態様では、Ｒ^２又はＲ^３はＣＯＯＨである。

別の態様では、Ｒ^２又はＲ^３はＣＨ＝ＣＨ-ＣＯＨである。

この式（Ｉ）では、Ａｒ^１及びＡｒ^２は、互いに独立に選択され、且つ、置換又は非置換のシクロアルキル（Ｃ５又はＣ６）、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のアリール、及び直鎖状又は分枝状のヘテロアルキルによって構成される。シクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を含んでいてもよい。

具体的な態様では、Ａｒ^１及び／又はＡｒ^２は、互いに独立に、置換又は非置換の単環式ヘテロアリールから選択される。特に、Ａｒ^１は、Ｒ^２を有する単環式ヘテロアリールによって構成され、Ｒ^２-ピリジル、Ｒ^２-ピラジニル、Ｒ^２-フラニル、Ｒ^２-チエニル、Ｒ^２-ピリミジニル、Ｒ^２-イソオキサゾリル、Ｒ^２-イソチアゾリル、Ｒ^２-オキサゾリル、Ｒ^２-チアゾリル、Ｒ^２-ピラゾリル、Ｒ^２-フラザニル、Ｒ^２-ピロリル、Ｒ^２-ピラゾリル、Ｒ^２-トリアゾリル、Ｒ^２-ピラジニル、及びＲ^２-ピリダジニルの群から選択され、前記単環式ヘテロアリールは置換されているか又は非置換である。さらに、具体的態様では、Ａｒ^２は、Ａｒ^１とは独立に、Ｒ^３を有する単環式ヘテロアリールによって構成され、Ｒ^３-ピリジル、Ｒ^３-ピラジニル、Ｒ^３-フラニル、Ｒ^３-チエニル、Ｒ^３-ピリミジニル、Ｒ^３-イソオキサゾリル、Ｒ^３-イソチアゾリル、Ｒ^３-オキサゾリル、Ｒ^３-チアゾリル、Ｒ^３-ピラゾリル、Ｒ^３-フラザニル、Ｒ^３-ピロリル、Ｒ^３-ピラゾリル、Ｒ^３-トリアゾリル、Ｒ^３-ピラジニル、及びＲ^３-ピリダジニルの群から選択され、前記単環式ヘテロアリールは置換されているか又は非置換である。

特定の態様では、Ａｒ^１又はＡｒ^２はフランである。別の態様では、Ａｒ^１及び／又はＡｒ^２はそれぞれ、Ｒ^２-フラニル基及びＲ^３-フラニル基である。特に、Ａｒ^１及び／又はＡｒ^２は互いに独立に、それぞれ、Ｒ^２-フル-２-イル（Ｒ^２-fur-２-yl）、Ｒ^２-フル-３-イル、又はＲ^２-フル-４-イル、及びＲ^３-フル-２-イル、Ｒ^３-フル-３-イル、又はＲ^３-フル-４-イルである。好ましい態様では、Ａｒ^１及びＡｒ^２はそれぞれ、Ｒ^２-フル-２-イル及びＲ^３-フル-２-イルである。

本発明の特定の態様では、Ａｒ^１及びＡｒ^２基はフラン、特にフル-２-イル（fur-2-yl）であり、Ｒ^２及び／又はＲ^３を、特にＲ^２及びＲ^３を、３、４、又は５位、特に５位に有する。

特に、本出願は、下記式（Ｉ）をもつビス(ヘテロアリール)マレイミド構造を含む分子を意図している。

式（Ｉ）中、
- Ｒ^１は、水素、直鎖状又は分枝状のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルコキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、テトラゾリル、アシル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、フェニル、ヒドロキシフェニル、又は
によって構成される群から選択され；
- Ｒ^２及びＲ^３は互いに独立に、水素原子、カルボン酸、シアノ、オキシム、オキシムエーテル、テトラゾール、エステル、置換又は非置換アミド、酸、二塩基酸、シクロアルキルカルボン酸、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び-ＣＨ＝ＣＨ-ＣＨＯによって構成される群から選択され；
- Ａｒ^１及びＡｒ^２は互いに独立に選択され、かつ、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のアリール、直鎖状又は分枝状のヘテロアルキルによって構成され；かつ、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３がともにＨであることは除かれる。

本発明との関連では、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３基が、式（Ｉ）をもつ化合物においてともに水素原子（Ｈ）であることは明確に除かれる。

特定の態様では、以下の化合物も、本発明の分子に対して付与される定義から明確に除かれる：
- Ｒ^１が水素であり、Ａｒ^１及びＡｒ^２がフランであり、Ｒ^２及びＲ^３がＣＨＯである、式（Ｉ）の分子；及び
- Ｒ^１がフェニルであり、Ａｒ^１及びＡｒ^２がフランであり、Ｒ^２及びＲ^３がＣＨＯである、式（Ｉ）の分子。

特定の態様では、Ｒ^２及びＲ^３は同じであり、本発明の分子は以下の式（Ｉａ）を有する：
式（Ｉａ）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ａｒ^１、及びＡｒ^２は上に定義した通りである。

特定の態様では、Ａｒ^１及びＡｒ^２は同じであり、本発明の分子は以下の式（Ｉｂ）を有する：
式（Ｉｂ）中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＡｒ^１は上に定義した通りである。

本発明の別の態様では、Ｒ^２及びＲ^３が一方で、Ａｒ^１及びＡｒ^２が他方で同じであり、本発明の分子は以下の式（Ｉｃ）を有する：
式（Ｉｃ）中、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＡｒ^１は上に定義した通りである。

本発明の特定の分子は、Ａｒ^１及びＡｒ^２がフランである分子であり、以下の式（ＩＩ）を有するものである：
式（ＩＩ）中、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３は上に定義した通りである。

特定の態様では、式（ＩＩ）をもつ分子は同じＲ^２及びＲ^３基を有し、以下の式（ＩＩａ）を有する：
Ｒ^１及びＲ^２は上に定義した通りである。

本出願で定義した特定の態様、特に式（Ｉ）と関連しての態様は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ）、及び（ＩＩａ）に対しても同様に適用する。

特定の態様では、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ）、又は（ＩＩａ）に従う本発明の分子は「Ｎ−置換」されており、すなわち、Ｒ^１基は、上に示した定義において、水素原子とは異なる。この場合、Ｒ^２及びＲ^３基の性質は、上に示した可能性あるものから選択される。

別の態様では、上述のものの代替である、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ）、又は（ＩＩａ）に従う本発明の分子はＮ−置換ではなく（従って、「非Ｎ−置換」分子として限定される）、すなわち、Ｒ^１基は水素原子である。この場合は、Ｒ^２及びＲ^３基は、互いに独立に、水素原子を除いて、上に示した可能性の一つを満たす（なぜなら、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３は同時に水素原子であることはできないからである）。

本発明の特定の分子の合成例を図１１に示す。したがって、本出願は、式（Ｉ）を有し且つ類似又は同じ合成によって得られる全ての分子を意図してもいる。

本発明は、生理学的に許容可能な塩の形態にある、本出願に記載した分子を意図してもいる。生理学的に許容可能な塩の例には、塩基性塩、例えば、アルカリ金属（例えば、ナトリウム又はカリウム）の塩あるいはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）の塩、塩基性有機塩、及びアミノ酸塩が含まれる。分子（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ）、又は（ＩＩａ）に関連して定義し又は説明した態様は、その分子の生理学的に許容可能な塩に適用することもできる。

本発明との関連では、以下の定義を本明細書及び特許請求の範囲に適用する。

「アルキル」の用語は、直鎖状又は分岐状の、１〜２０の炭素原子、好ましくは１〜１２の炭素原子、より好ましくは１〜６の炭素原子を含む炭化水素鎖を意味する。

「アルケニル」の用語は、少なくとも１つの炭素-炭素二重結合と、２〜２０の炭素原子、好ましくは２〜１２の炭素原子、より好ましくは２〜６の炭素原子を含む直鎖状又は分枝状の脂肪族炭化水素基を意味する。アルケニル基の非限定的な例は、エテニル、プロペニル、n-ブテニル、n-ペンテニル、オクテニル、及びデセニルである。

「アルキニル」の用語は、少なくとも１つの炭素-炭素三重結合と、２〜１５の炭素原子、好ましくは２〜１２の炭素原子、より好ましくは２〜４の炭素原子を含む直鎖状又は分枝状の脂肪族炭化水素基を意味する。アルキニル基の非限定的な例は、エチニル、プロピニル、２-ブチニル、３-メチルブチニル、n-ペンチニル、及びデシニルである。

「アリール」の用語は、６〜１４の炭素原子、好ましくは６〜１０の炭素原子を含む、少なくとも１つの芳香環を含む単環式又は多環式芳香族基を意味する。アリール基の非限定的な例はフェニル基である。アリール基は、非置換であるか、又は互いに独立に選択された１、２、又は３つの置換基で置換されていることができる。置換されたアリール基の非限定的な例はヒドロキシフェニルである。

「アリールアルキル」の用語は、上に定義したアルキル基に結合した、上で定義したアリール基を意味し、親の基への結合はそのアルキル基を介して形成される。アリールアルキル基の非限定的な例はベンジルである。

「シクロアルキル」の用語は、３〜１０（例えば、３〜７）の炭素原子、好ましくは５〜１０の炭素原子、より好ましくは５〜７の炭素原子を含み、且つ１、２、又は３つの環を含む、飽和炭素環式システムを意味する。シクロアルキル基の非限定的な例は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロへキシル、及びシクロヘプチルである。

「ハロゲン」の用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素基を意味する。

「ヘテロアリール」の用語は、５〜１４、好ましくは５〜１０の単一の又は縮合した芳香環のシステムを意味し、その環はＯ、Ｓ、及びＮから独立に選択された１、２、又は３つのヘテロ原子を含み、その環は隣接する複数酸素原子又は複数硫黄原子を有しない。好ましいヘテロアリール基は５又は６個の原子を含む。別の好ましい態様では、ヘテロアリールは単環式である。ヘテロアリール基は、非置換であるか、又は互いに独立に選択された１、２、又は３個の置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の非限定的な例は、ピリジル、ピラジニル、フラニル、チエニル、ピリミジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フラザニル、ピロリル、ピラゾリル、チアゾリル、1,2,4-チアジアゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、キノキサリニル、フタラジニル、イミダゾ[1,2-a]ピリジニル、イミダゾ[2,1-b]チアゾリル、ベンゾフラザニル、インドリル、アザインドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、イミダゾリル、チエノピリジル、キナゾリニル、チエノピリミジル、ピロロピリジル、イミダゾピリジル、イソキノリニル、ベンゾアザインドリル、及びベンゾチアゾリルである。単環式ヘテロアリールの好ましい例は、ピリジル、ピラジニル、フラニル、チエニル、ピリミジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、フラザニル、ピロリル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、及びピリダジニルである。特に、本発明との関連では、好ましい単環式ヘテロアリールはフラニルである。単環式ヘテロアリールは、非置換であるか、又は互いに独立に選択された１、２、又は３個の置換基で置換されていてもよい。

「ヘテロシクリル」又は「ヘテロシクロアルキル」の用語は、３〜１０（例えば、３〜７）の炭素原子、好ましくは５〜１０の炭素原子、より好ましくは５〜７の炭素原子を含み、且つ１、２、又は３の環を含み、このシステムの原子の１つ以上が炭素原子以外の元素、例えば、硫黄、酸素、及び／又は窒素原子である、飽和の、単環式又は多環式の非芳香族システムを意味する。

「アリールスルホニル」の用語は、-ＳＯ_２-アリール基を意味し、このアリール基は上に定義した通りである。

「ヘテロアラルキル」又は「ヘテロアリールアルキル」、あるいはそれぞれ「ヘテロアリールスルホニル」の用語は、上に定義したアルキル基、あるいはそれぞれ上に定義したスルホニル基に結合した、上で定義したヘテロアリール基を意味し、その親の基との結合はそのアルキルあるいはそれぞれそのスルホニル基を介して形成されている。

「アルコキシ」の用語は、-Ｏ-アルキル基を意味し、このアルキル基は上に定義した通りであり、１〜２０の炭素原子、より好ましくは１〜１０の炭素原子を含む。

「カルボキシル」の用語は、-Ｃ(Ｏ)ＯＨ官能基を意味する。

「アシル」の用語は、-Ｃ(Ｏ)-アルキル基を意味し、アルキル基は上に定義したとおりである。

「置換された」又は「置換基」の用語は、ハロゲン基、エーテル、ヒドロキシル、カルボキシル官能基、カルボキサミド、エステル、ケトン、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、アミン、置換アミン、直鎖状又は分枝状アルキル、特にＣ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、ニトロ、ハロアルキル、アルコキシ、カルボキシアルキル、メルカプト、スルフヒドリル（sulphhydryl）、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルホニル、又はスルホンアミドを意味する。特定の態様では、ヘテロアリール（特に単環式ヘテロアリール）が置換されている場合、置換はその環のヘテロ原子（１又は複数）上で起こる。それに代えて又は前述の態様に加えて、ヘテロアリール（特に単環式ヘテロアリール）が置換されている場合、その置換はその環の炭素原子又は複数の炭素原子で起こる。

上に示した定義を有する本発明の分子は、少なくとも１種のＤＤＥ／ＤＤＤ酵素に対する阻害特性、特にインビトロで観察される阻害活性によって測定した阻害特性を有する。ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素（特にトランスポサーゼ及び／又はレトロウイルス・インテグラーゼ）に対する本発明の分子の阻害活性を実証することができる試験条件を、以下の例に示す。

本出願との関連で用いているように「ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素」の用語は、ホスファチジルトランスフェラーゼ活性をもち且つ３つのアミノ酸Ｄ、Ｄ、及びＥ（ＤＤＥ酵素）、又はＤ、Ｄ、及びＤ（ＤＤＤ酵素）によって形成された触媒酵素部位を有する任意の酵素を意味する。特定の態様では、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素は、ゲノム内又はゲノム間でＤＮＡセグメントの移動を助ける酵素である。これの発現は、トランスポサーゼ（バクテリア又は真核生物）及び／又はレトロウイルス・インテグラーゼ及び／又はＲＡＧリコンビナーゼを包含する。

特定の態様では、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素は、原核生物由来の、特にバクテリア由来のトランスポサーゼ、例えば、ＭｕＡ、Ｔｎ５、又はＴｎ１０である。別の態様では、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素は、真核生物由来のトランスポサーゼ、例えば、Ｔｃ１／マリナーファミリーからのトランスポサーゼ（この例は、ＭＯＳ１トランスポサーゼ又はＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポサーゼである）、又はｈＡＴファミリーからのトランスポサーゼ（この例はヘルメストランスポサーゼである）である。

本発明の別の態様では、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素はレトロウイルス由来のインテグラーゼ、特にレトロウイルスのｐｏｌ遺伝子によってコードされるインテグラーゼである。本発明のインテグラーゼのための阻害分子によって標的とされうるレトロウイルスは、アルファレトロウイルス属、ベータレトロウイルス属、ガンマレトロウイルス属、デルタレトロウイルス属、レンチウイルス属、及びスプマウイルス属に属する。

特に興味あるレンチウイルスを下の表１に列挙する。

特定の態様では、本発明の分子によって標的とされるレトロウイルス・インテグラーゼは、動物又はヒト向性（human tropism）をもつレトロウイルスに由来する。

特定の態様では、本発明の分子によって標的とされるレトロウイルス・インテグラーゼは、ヒト向性をもつレンチウイルスからのもの、例えば、ＨＩＶウイルス（ヒト免疫不全ウイルス）、特に、ＨＩＶ−１分離株（アイソレート）及び／又はＨＩＶ−２分離株（細胞病原性レトロウイルス）である。

ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素、特に、トランスポサーゼ又はレトロウイルス・インテグラーゼの酵素活性を阻害する特定の分子は、下記式（ＩＩＩ）〜（ＶＩ）の１つをもつ分子である。

本発明は、本発明との関連で定義した少なくとも１種の分子、特に上の式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、又は上の式（ＩＩＩ）〜（ＶＩ）の１つをもつ少なくとも１種の分子を含む組成物も意図している。

本発明の特定の態様では、本組成物は、式（Ｉ）〜（ＶＩ）から選択される少なくとも二種の異なる分子を含む。

特定の態様では、本組成物は、治療用又は医薬組成物であり、すなわち、それは動物又は患者への投与に対して適合されている。

特定の態様では、本発明の組成物は、医薬として許容可能な担体（ビヒクル）をも含む。「担体」の用語は、本発明の分子を組成物中に配合することを可能にする任意の物質を意味する。特定の態様では、担体は、医薬として許容可能な、すなわち、生きているもの（例えば、動物、特に非ヒト動物、及び例えばヒト）と接触する組成物の使用に適している物質（１種又は複数種）又はその組み合わせであり、したがって好ましくは非毒性である。そのような医薬として許容可能な担体の例は、水、食塩水、水と混和性の溶媒、糖類、結合剤、賦形剤、色素、植物又は鉱物油、水溶性ポリマー、界面活性剤、増粘剤、又はゲル化剤、化粧用剤、保存料、アルカリ性化又は酸性化剤などである。

特定の態様では、本発明の少なくとも１種の分子と、任意選択で場合により１種以上の医薬として許容可能な担体を含むことに加えて、本発明の組成物は、レトロウイルスによる感染に関連する症状の治療のための追加の生物学的活性化合物、特に、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連した症状の治療に生物学的に活性である追加の化合物をさらに含む。本組成物との関連において「追加」の用語は、本明細書で定義した分子とは異なる、特に上の式（Ｉ）を満たす分子とは異なる化合物を指す。

引用することができる、後天性免疫不全症候群と関連する症状の治療のための追加の生物学的活性化合物の例は、（ａ）プロテアーゼ阻害剤、（ｂ）ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、（ｃ）非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、（ｄ）ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、（ｅ）ヌクレオチド及びヌクレオシド阻害剤、（ｆ）インテグラーゼ阻害剤、（ｇ）融合阻害剤、及び（ｈ）インターロイキンである。

本発明は、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素、特に、トランスポサーゼ又はレトロウイルス・インテグラーゼの活性のインビトロ阻害のための、本出願で説明した少なくとも１種の分子の使用にも関する。「インビトロ」の用語は、完全な生きている生物の外（すなわち、試験管内で行われる試験、及び原核生物又は真核生物の細胞の培養物に対して行われる試験）で行われる阻害試験を意味する。

本発明は、医薬として使用するための、本発明による分子又は組成物にも関する。

したがって、本出願に示した定義にしたがって、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素の酵素活性、特にトランスポサーゼ又はレトロウイルス・インテグラーゼの活性を阻害するための、本発明の分子又は組成物の使用を考えることができる。このため、本発明は、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素阻害剤として用いるための、本出願に記載した分子又は組成物をも意図している。この治療との関連では、この分子（単独、又は組成物の形態で用いられる）は、Ｎ−置換又は非Ｎ−置換である。

特定の態様では、このＤＤＥ／ＤＤＤ酵素はトランスポサーゼ又はＲＡＧリコンビナーゼである。特定の態様では、本発明の分子又は組成物は、トランスポサーゼ又はＲＡＧリコンビナーゼの活性の生体外（ex vivo）での阻害のために用いられる。

別の態様では、ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素は、動物又はヒト向性をもつレトロウイルス（特にレンチウイルス）に由来するインテグラーゼである。後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の進行におけるそれらの関与により、ＨＩＶタイプのレトロウイルス、例えば、ＨＩＶ−１型及び／又はＨＩＶ−２型のもの（それらのサブタイプにかかわらず）、及び前記のレトロウイルスのインテグラーゼは、本発明の分子の応用のための特に興味ある標的である。

本発明は、レトロウイルスによる感染に伴う及び／又は感染に続く、特に動物向性又はヒト向性(human tropism)をもつレトロウイルス、例えば、ＨＩＶによる感染に続く疾患又は症状の治療に用いるための、本発明の分子又は組成物にも関連する。

本出願との関連で、「治療」の用語は、本発明の少なくとも１種の分子又は組成物によって得られる治療効果（例えば、レトロウイルスの消失）、並びに、動物又は患者で（及びレトロウイルスの存在に続いて又はレトロウイルスに関連して）観察される症状の改善又は患者の状態の改善の両方を意味する。したがって、「治療」の用語は、レトロウイルスによる感染、並びにそのレトロウイルスによる感染から生じる症状又は疾患に適用可能である。したがって、レトロウイルスによる感染に関連する又は感染に続く疾患又は症状の治療のために、それを必要とする動物又は患者に本発明の化合物又は組成物の投与を含む方法も、本発明の一部を形作る。

「動物」の用語は、特に、ヒト以外の動物を意味する。

特定の態様では、本出願は、レトロウイルス複製を低減又は抑制にさえ用いるための本発明の分子又は組成物に関する。レトロウイルスの複製の低減又は抑制に対する本発明の分子又は組成物の効果は、感染した宿主の血漿中のウイルス量の変化によって実証されうる。

別の態様では、本出願は、ＨＩＶによる感染に続いての症状及び／又は感染の治療、特に、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療における、本発明の分子又はそれを含む組成物を意図している。有利には、この出願において議論する治療は、ＨＩＶ−１及び／又はＨＩＶ−２分離株（アイソレート）に対して適している。分離株ＨＩＶ−１による感染の治療の場合、その治療は、Ｏ群からの分離株、及びまたＭ群からの分離株、特にクレード(crede)Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＨ中のＭ群からの分離株に対して適用できる。本発明の分子又は組成物による、ＡＩＤＳに関連した疾患又は症状の治療の有効性は、Ｔ ＣＤ４^＋リンパ球（ＨＩＶウイルスの主要な標的細胞）の数の変化と、任意選択によって場合により、血漿中のウイルス量の変化の計算と組み合わせて、測定することができる。

上述した治療のための使用又は治療法において、本発明の分子又は組成物は固体形態（サシェ、粉末、顆粒、錠剤、座薬、急速放出錠剤、胃抵抗性錠剤、遅延放出錠剤）又は液体（シロップ、注入可能な溶液、点眼液）であってよい。したがって、その製剤学的形態によって、本発明の分子又は組成物は、経口、口腔、経粘膜、経膣、経直腸、非経口（静脈内、筋肉内、又は皮下）、又は経皮（transcutaneously, transdermally, percutaneously,又はcutaneously）で投与されうる。

レトロウイルス、特にＨＩＶによる感染時の症状及び／又は感染に続く感染の治療のため、特に後天性免疫不全症候群の治療のための医薬の製造における、本発明の分子又は組成物の使用も本発明の一部を形作る。

別の側面では、本発明は、ＤＮＡ転移ツール（「トランスポゾンツール」）としての、特に遺伝子治療における、ＭＯＳ１システム（Ｍｏｓ１トランスポゾン）の使用にも関連する。

本出願の関連では、ＭＯＳ１システムは以下の要素を含む：
（ａ）ＭＯＳ１タンパク質（アミノ酸１〜３４５）、特に、マルトース結合タンパク質すなわちＭＢＰに融合したもの（それによって安定性を高めるが、活性は変えない）又はＭＯＳ１タンパク質の有利な突然変異体；
（ｂ）トランスポゾン（任意選択により、その配列の一部が欠失している及び／又は興味ある導入遺伝子をもっている）。

特定の態様では、ＤＮＡの転移は真核生物細胞で行われ；その転移による細胞は、生体外(ex vivo)用途、例えば、遺伝子治療における生体外用途、又は工場細胞（経済的又は医薬的興味のあるタンパク質を産生する細胞）を得るために用いることができる。

したがって、本発明の分子は、上述したＭＯＳ１システムを、形質転換させる細胞と接触させることによって引き起こされる転移反応を止めるために用いることができる。本発明の分子の優位性は、したがって、ＭＯＳ１システムの「カスケード」反応を制御し且つ避ける能力である。

図１は、選択した化合物１〜１０の構造である。 図２は、Ｍｏｓ１転位機構のモデルである。 図３は、化合物９についての切除試験である。（ａ）インビトロ切除試験は、図の上に示すように、超らせんの（supercoiled, ＳＣ）ｐＢＣ-３Ｔ３及び様々な濃度の化合物９を用いて行った。（−）：トランスポサーゼなし；（Ｄ）：ＤＭＳＯ。ＤＮＡに対するマーカー分子量（ＭＷ）は、左側の余白にｋｂｐ単位で示す。様々な生成物を右側に示す：ＯＣ（白抜き丸）、Ｌ（線状＝４．６ｋｂ）、ＳＣ（超らせん）。切除されたトランスポゾン（３Ｔ３＝１．２ｋｂ）及びプラスミド骨格（ｐＢＣ＝３．４ｋｂ）も示す。（ｂ）ＩＣ５０値グラフ；切除のパーセント阻害率（縦軸）は、化合物９の濃度（横座標）の関数として測定した。 図４は、ＥＭＳＡ（Electrophretic-mobility shift assay, 電気泳動移動度シフトアッセイ）によるトランスポサーゼ-ＩＴＲ複合体の構築。ＥＭＳＡは、プローブとしてのＩＴＲ３０と選択した１０の化合物（図１の１〜１０）を用い、ＭＢＰ-ＭＯＳ１で行った。（−）：トランスポサーゼなし；（０）化合物なし；（Ｄ）ＤＭＳＯ。様々な複合体（ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＰＥＣ１、ＰＥＣ２）、標的の捕獲複合体（target capture complex, ＴＣＣ）及び非結合ＤＮＡ（フリープローブ）を示している。ＳＥＣ１は、単一ＩＴＲに結合した単一トランスポサーゼによって形成された。この複合体は上の分子複合体の解離の結果変化した（（１８）及び私信）。ＳＥＣ２は単一ＩＴＲに結合したトランスポサーゼ二量体によって形成され、ＰＥＣ１はＩＴＲペアに結合したトランスポサーゼ二量体によって形成され、ＰＥＣ２はＩＴＲペアに結合したトランスポサーゼ四量体によって形成された。 図５は、化合物６での切除に対する試験を示す。インビトロでの切除試験は、図の上側に示したように、超らせん（ＳＣ）ｐＢＣ-３Ｔ３及び様々な濃度の化合物６を用いて行った。（Ｄ）：ＤＭＳＯ。ＤＮＡ分子量マーカーは、左側余白にｋｂｐ単位で示している。様々な生成物を右側に示している。ＯＣ（白抜き丸）、Ｌ（線状＝４．６ｋｂ）、ＳＣ（超らせん）。切除されたトランスポゾン（３Ｔ３＝１．２ｋｂ）及びプラスミド骨格（ｐＢＣ＝３．４ｋｂ）も示している。 図６は、ＭＯＳ１-ＩＴＲ複合体の組み立てに対する化合物６の効果を示す。ＥＭＳＡは、図の上側に示したように、プローブとしてのＵＴＲ３０及び様々な濃度の化合物６を用いて、ＭＢＰ-ＭＯＳ１で行った。（−）：トランスポサーゼなし；（０）化合物なし。様々な複合体（ＳＥＣ１、ＳＥＣ２、ＰＥＣ１、ＰＥＣ２）、及び結合していないＤＮＡ（フリープローブ）を示している。ＳＥＣ１は、単一ＩＴＲに結合した単一トランスポサーゼによって形成された。その複合体は、より高次の分子複合体の解離の結果変化した。ＳＥＣ２は単一ＩＴＲに結合したトランスポサーゼ二量体によって形成され、ＰＥＣ１はＩＴＲペアに結合したトランスポサーゼ二量体によって形成され、ＰＥＣ２はＩＴＲペアに結合したトランスポサーゼ四量体によって形成された。 図７は、化合物１の存在下でのＭＯＳ１鎖の転移反応を示す。試験は、表の上側に示したように、ＭＢＰ-ＭＯＳ１、ラベルしたＩＴＲ３０、標的プラスミドとしてのｐＢＣ-ＳＫ、及び様々な濃度の化合物１（μＭ単位）を用いて行った。Ｎｏ Ｔｐａｓｅ：トランスポサーゼなし；（Ｄ）：ＤＭＳＯ。組込み生成物は右に示す：ＯＣ（白抜き丸）、Ｌ（線状）。 図８は、ＭＯＳ１鎖（ストランド）転移反応を示す。ＩＣ５０値プロット；切除の阻害パーセント率（縦軸）は、化合物１の濃度（Ｍ単位）（横座標）の関数として測定した。得られたＩＣ５０値は、表ＩＩＩに示している。 図９は、化合物４の存在下での、ＨＩＶ−１についての３’成熟及び鎖（ストランド）転移に対する活性を示す。試験は、図の上側に示したように、ＨＩＶ−１インテグラーゼ、Ｕ５ ＬＴＲの末端を模倣したオリゴヌクレオチド二本鎖、及び様々な濃度の化合物４（μＭ単位）を用いて行った。Ｎｏ Ｉｎｔ：インテグラーゼなし；（Ｄ）：ＤＭＳＯ；（２１-ｍｅｒ）：転移した鎖；（１９-ｍｅｒ）：３’成熟生成物。鎖転移生成物は右に示している。 図１０は、化合物４の存在下でのＨＩＶ−１インテグラーゼに対する３’成熟及び鎖（ストランド）転移活性を示す。グラフのＩＣ５０値；鎖転移のパーセント阻害率（線）及び成熟の阻害（点線）を、化合物４の濃度（Ｍ）（横座標）の関数として測定した。 図１１は、本発明の分子の合成の方法の単純化した例を示す。

〔Ａ．方法及び装置〕

［化合物］
この研究のために、８００の化合物が、フランス、ツール（Ｔｏｕｒｓ）のフランソワーズ・ラブレー大学のＳＰＯＴ ＥＡ ３８５７研究室（合成並びに有機及び治療生理化学の研究室）によって提供された。ビス-(ヘテロアリール)マレイミド誘導体（図１の１〜４）は、文献（２５）の記載にしたがって、Marie-Claude Viaud-Massuard教授の研究室によって合成された。２０種の化合物をChemBridge又はInterBioscreenから購入し、これらはＴｎ５トランスポサーゼ阻害剤として以前記載されている（１４）。２８種の化合物は、ＨＩＶ−１インテグラーゼ阻害剤として記載されており、１６種の化合物は、Vladimir Ryabinin博士（分子生物学科、Koltsovo、ロシア）によって快く提供されたＤＮＡ挿入化合物であり、５種は新規なチアゾロチアゼピン類（２６）であり、４種はＧカルテットであり（２７〜３０）、そして最後の２種は3,5-ジカフェオイルキナ酸（３１）及び「インテグラーゼ３阻害剤」（Merck社）だった。これら活性化合物を図１に示す。全ての化合物は、ＤＭＳＯ中の懸濁液にした。

［タンパク質］
完全長トランスポサーゼＭＯＳ１[アミノ酸１〜３４５]及びＭＯＳ１二量化ドメイン[アミノ酸１〜８５]が産生され、以前記載されている（８）ようにマルトース結合タンパク（ＭＢＰ）に結合した融合タンパク質の形態で精製した。本明細書で用いる「トランスポサーゼ」、「ＭＯＳ１」、及び「Ｔｎｐ」の用語は、タンパク質ＭＯＳ１の単一サブユニットを示す。

[インビトロ転位（トランスポジション）試験]
インビトロ転位反応は、ドナーＤＮＡ及び標的の両方としてｐＢＣ-３Ｔ３を用いて、バクテリアの転位試験について以前行われた（１６）ように行った。転位反応混合物は、１０ｍＭのＴｒｉｓ-ＨＣｌ（ｐＨ９）、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．５ｍＭのジチオスレイトール、２０ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、１００ｎｇのＢＳＡ、８０ｎＭのＭＢＰ-ＭＯＳ１、及び６００ｎｇの超らせんｐＢＣ-３Ｔ３（２０μｌの体積中）を含んでいた。阻害剤（最終濃度は８０μＭ）又はＤＭＳＯを、トランスポサーゼより前にその反応混合物に添加した。反応は３０℃で３０分間自由に行い、次に１０μｌの停止溶液（０．４％のＳＤＳ、０．４μｇ／μｌのプロテイナーゼＫ）を添加し、反応混合物をさらに３７℃で３０分間、次に６５℃で１０分間インキュベートした。生成物をフェノール-クロロホルムで抽出し、常法を用いて１μｇのイーストｔＲＮＡを使用してエタノール中で沈殿させた。１０％のこの反応混合物を、４５μｌのエレクトロコンピテント大腸菌ＪＭ１０９細胞（２ｍｍセル、BioRad社からのMicroPulser(登録商標)中１．５ｋＶ）中で、形質転換のための陽性対照として用いた０．０１ｎｇのｐＢＳ-ＳＫ（−）で同時形質転換させた。このバクテリアを３７℃で１時間、ＳＯＣ媒体中で培養した。各反応の適切な希釈系列をＬＢ-アンピシリン・ゲロース（１００μｇ／ｍｌ）上に広げ、形質転換効率を評価し、さらに、転移の頻度を評価するために、ＬＢ-テトラサイクリン・ゲロース（１２．５μｇ／ｍｌ）及びＬＢ-クロラムフェニコール・ゲロース（８０μｇ／ｍｌ）上に広げた。転位の頻度は、Tet(登録商標)コロニーの数をChloram(登録商標)コロニーの数で割ったものである。形質転換効率は、Amp(登録商標)コロニーの数によってモニターされる。様々な化合物の効果を、阻害因子（ＩＦ）を計算することによって表した。例えば、ＩＦ＝対照（ＤＭＳＯ中）の転位の頻度を、その化合物を用いて得られた転位の頻度で割ったもの。各試験は５回、最も有効な薬剤については１０回繰り返した。

[電気泳動移動度シフト試験（Electrophoretic mobility shift tests, EMSA）]
ＩＴＲ３０を調製し、所定の軽微な変更を伴い上述したようにラベルした（８）；ラベル後、ＤＮＡをさらに未変性ポリアクリルアミドゲル上で精製した。結合反応は、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．５ｍＭのＤＴＴ、１０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ９）、５％のグリセロール及び１００ｎｇのＢＳＡ中で行った。各２０μｌの反応液は、^３２Ｐでラベルした０．２ｐｍｏｌのＩＴＲ３０、４００ｍＭの精製したＭＢＰ-ＭＯＳ１、５ｍＭのＥＤＴＡ、及び１μｌの試験化合物（最終濃度４００μＭ）又はＤＭＳＯを含んでいた。この混合物を３０℃で２時間インキュベートした。５％のグリセロールを含む４％〜６％のＴＢＥ０．２５ｘ（アクリルアミド／ビスアクリルアミド ３０：０．９３）をもつ非連続的な未変性ポリアクリルアミドゲルを用いて、その複合体を分離した。ゲルは２００Ｖに３時間かけ、次にオートラジオグラフィーにかけた。

[インビトロ切除試験及びＩＣ５０の測定]
これらの試験は、インキュベーションを３０℃に代えて３７℃で行ったという事実を例外として、インビトロ転位試験と同様の条件下で行った。ＩＣ５０を測定するために、１０００〜０．８μＭの化合物濃度範囲を、本明細書に示したように用いた。インキュベーション後、２μｌの１０Ｘ量緩衝液を添加することによって反応を中断させ、生成物をエチジウムブロマイドを含む０．８％ＴＡＥ１ｘ-アガロースゲル上に直接ロードした。遊離した骨格の量は、GeneSnapシステム（SynGene社）を使用して評価した。切除のパーセント阻害率を、本化合物の濃度の関数としてグラフにした。試験データはPrismソフトウェアを使用して、シグモイド用量応答曲線に適合させた。各試験は少なくとも２回繰り返した。

[ＭＯＳ１鎖転移反応]
反応（４０μｌ）は、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９）、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、及び５％のグリセロール中で、１０ｎＭの切断されているＩＴＲ基質及び８０ｎＭのＭＢＰ-ＭＯＳ１存在下で行った。この予め切断したＩＴＲ基質は、オリゴヌクレオチドＮＴＳ-３及びＴＳ：
- ＮＴＳ-３：5’-GGTGTACAAGTATGAAATGTCGTTTCG-3’;及び
- ＴＳ：5’-AATTCGAAACGACATTTCATACTTGTACACCTGA-3’
をハイブリダイズさせることによって形成された。
ＴＳはポリヌクレオチドキナーゼＴ４（Promega社）及びα-[^３２Ｐ]ＡＴＰを用いて５’位に放射標識した。常温で２０分後、反応毎に、ＭｇＣｌ_２（最終濃度５ｍＭ）及び２００ｎｇのｐＢＣ-ＫＳ標的プラスミド（Stratagene社）を１時間にわたって３０℃で添加した。５％ＤＭＳＯ中に希釈した阻害剤は、複合体の形成時且つＭｇＣｌ_２及び標的プラスミドを添加する前に添加した。反応を１０ｍＭのＥＤＴＡで中断させ、０．１ｍｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ、０．１％のＳＤＳ、及び２ｍＭのＣａＣｌ_２で、４５℃にて１時間処理した。鎖（ストランド）転移反応物を０．８％ＴＢＥ１ｘアガロースゲル上に負荷し、分離させた。このゲルをエチジウムブロマイドで染色し、次に乾燥させ且つリンスクリーン（Phosphorimager、STORM Molecular Dynamics社）上に露出させた。挿入生成物を、Image Quantソフトウェアを使用して定量化した。

[３’成熟試験及びＨＩＶ−１鎖（ストランド）転移試験]
ＨＩＶ−１インテグラーゼは（３２）に記載されたように精製した。２００ｎＭのＨＩＶ−１インテグラーゼを、ＬＴＲ Ｕ５の末端を模倣した放射標識したオリゴヌクレオチド二本鎖６．２５ｎＭの存在下で、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＤＴＴ、７．５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１０％のＤＭＳＯ、及び様々な濃度の薬剤を含む緩衝液中でインキュベートした。この反応を２時間、３７℃で行い、生成物を１８％アクリルアミド尿素ゲル上で分離した。このゲルをホスフォイメージャー（Phosphorimager）を使用してスキャンし、Image Quant（Molecular Dynamics社）ソフトウェアを使用して解析した。各試験は二重に行った。

〔Ｂ．結果〕

[ＭＯＳ１阻害剤の特定]
Ｍｏｓ１トランスポサーゼの阻害剤を特定するための最初の試験の間、１７０の分子のコレクションを、インビトロ転位試験（インビトロトランスポジションテスト）を用いてスクリーニングした。テストパネルの最初の部分は、Ｔｎ５トランスポサーゼの阻害剤、及びＨＩＶ−１インテグラーゼによって構成されていた。インテグラーゼ阻害剤又はトランスポサーゼ阻害剤として試験されたことのないその他の化合物は、置換ヘテロ環誘導体だった。

転位試験は、ＭＢＰと融合させた精製したＭＯＳ１タンパク質と、擬性Ｍｏｓ１トランスポゾンを有するｐＢＣ−３Ｔ３プラスミドとを用いて行った。この試験では、ｐＢＣ−３Ｔ３を、擬性Ｍｏｓ１ドナーとして又はトランスポゾンの組込みのための標的として用いた（１６）。転位事象は、プロモーター標識によって明らかにされた。最初のスクリーニングのために用いた薬剤の濃度は８０μＭだった。１０の最良の化合物は、阻害剤なしで、しかしＤＭＳＯの存在下で行った対照試験と比較して２５より大きな阻害因子（ＩＦ）（９６％阻害より大きい）を有していた（表ＩＩ）。

表ＩＩ：１０の最良の化合物に対する転位の頻度及び阻害係数（図１の１〜１０）；転位頻度及び阻害係数の値は、少なくとも５つの試験の平均である。阻害係数はＤＭＳＯで得られた転位頻度と化合物１〜１０のそれぞれで得られた転位頻度との間の比である。

上記阻害剤の構造を図１に示す。化合物１〜４はビス-(ヘテロアリール)マレイミド誘導体であり、これまでに知られていないＤＤＥ／Ｄ酵素阻害剤を構成する。化合物５及び６は、ＤＮＡと相互作用することが知られているＮ-メチルピロールポリアミドであった（（１７）中の合成）。化合物７は、Ｔｎ５トランスポサーゼ及びＨＩＶ−１インテグラーゼに対する阻害剤であることも示されているビス-クマリン誘導体だった（１４）。化合物８、９、及び１０は、それぞれ、シンナモイル誘導体、安息香酸誘導体、及びカルボン酸で置換されたチオキソチアゾリジンだった。この３種の化合物（８、９、及び１０）は、Ｔｎ５トランスポサーゼの阻害剤として既に特定されている（１４）。

［トランスポゾンの切除に対する阻害剤の活性］
これらの１０の化合物の阻害活性及びＭｏｓ１の転位に対するそれらの作用機構のより良い特徴付けのために、トランスポゾンの切除を示す化合物の能力を、ドナープラスミドとしてｐＢＣ−３Ｔ３トランスポゾンを用いてインビトロで試験した。ＭＯＳ１は、ドナープラスミドからのトランスポゾンの切除を誘発し、２つの線状ＤＮＡフラグメント、トランスポゾン（１．２ｋｂ）とプラスミド骨格（３．４ｋｂ）を生成する。切除後、トランスポゾンは標的に再挿入されうる。薬剤の切除活性は、プラスミド骨格を定量化することによって測定したが、それはこれが反応の最終生成物だからである。化合物９の活性を図３ａに示す。薬剤なしでは、トランスポサーゼは、ドナープラスミドからトランスポゾンを放出させる（線８）。薬剤の最高濃度（１ｍＭ）では、トランスポゾンの切除は完全に抑制された（線２）。

反応の５０％を阻害するために必要な薬剤の濃度（ＩＣ５０）を決定するために、２つの独立した試験から測定した阻害パーセント割合を、薬剤の濃度の関数としてグラフにした（図３ｂ）。同様の試験を、９つのその他の化合物を用いて行った。対応するＩＣ５０値を表ＩＩＩに示す。

表ＩＩＩ： Ｍｏｓ１トランスポゾンに対する様々な段階での各化合物の効果；ＭＯＳ１−ＩＴＲ結合に対する及びＭｏｓ１の切除に対するＩＣ５０値は他に示されていない限りμＭ単位で示す。ＭＯＳ１−ＩＴＲ複合体の構築への影響は、（＋）：複合体が観察された；（−）：複合体なし、及び（＋／）：微量のＳＥＣ１、によって示す。ＮＤ：未測定。

化合物２〜６は切除の最良の阻害剤であり、１０μＭのオーダーのＩＣ５０値をもつ。３５μＭ（化合物１０）〜１５０μＭ（化合物９）のＩＣ５０値をもつ、薬剤の第二の組には、Ｔｎ５阻害剤が含まれていた。最後に、ビス-フリル-マレイミド（化合物１）（これは最初の転位試験において特性解析された最良の阻害剤である）は、１８〜５４μＭの範囲のＩＣ５０で切除を阻害した。このＩＣ５０値は、この化合物は転位に続く段階にも作用しうることを示唆している。

これらの結果は、化合物１〜１０が、トランスポゾン切除に大きな影響を有することを示している。Ｔｎ５トランスポサーゼ阻害剤（化合物７〜１０）は、Ｔｎ５のシナプス複合体の形成をブロックする（１４）一方で、化合物５及び６はＤＮＡタンパク質結合の強力な阻害剤である（（１７）の合成）。文献中のデータ及びこれらの結果は、これらの化合物がトランスポサーゼ-ＩＴＲ複合体の形成（切除前に起こる段階）に作用しうることを強く示唆している。

［ＭＯＳ−ＩＴＲ複合体の構築における阻害剤の活性］
ＭＯＳ１とＩＴＲ３’との間でインビトロで形成される複合体の出現（８）を防止するこの１０の分子の能力を、ゲル移動度シフト法（ＥＭＳＡ）を用いて試験した。ＭＯＳ１−ＩＴＲ複合体は、４００μＭ濃度の分子の存在下で、放射標識したＩＴＲ３’（ＩＴＲ３０）を用いて形成させた。この濃度は、上記の１０の化合物について測定した最も高いＩＣ５０値よりも少なくとも２．５倍高かった。

これらの最初のデータは、複合体が、化合物１の存在下でなお観察されたが（図４、線４）、モチーフは修飾されていることを示しており、このことは薬剤が複合体と相互作用することを示唆している。対照的に、複合体は、化合物２、３、４、７、８、及び１０の存在下で完全に不安定化され、化合物９の存在下ではほとんど完全に抑制され（９０％阻害）、これは切除活性に対して最も高いＩＣ５０を有していた。不成功なＳＥＣ１複合体の微量のみが検出された。化合物７〜１０についてここで観察されたデータは、Ｔｎ５トランスポサーゼ複合体の及びＨＩＶ−１インテグラーゼの構築に対するこれらの分子の作用機序と完全に一致している（１４）。最後に、４００μＭの濃度の化合物５及び６は、おそらく含まれているＤＮＡの凝集又は中和によって、ウェル中で、ＩＴＲ基質とトランスポサーゼの複合体の沈殿を引き起こした。ＩＴＲ基質だけの同様の沈殿が、未変性ＰＡＧＥ（示していない）において、高濃度の薬剤５及び６においても観察された。

ＤＮＡと化合物５及び６との間の相互作用も、切除試験中にプラスミド基質を用いて観察された（図５）。薬剤５及び６の作用機構を確かめるために、それらの濃度を低減することによって試験を繰り返した。これらの化合物は、低濃度（４０ｎＭ、図６）で特定のトランスポサーゼ-ＩＴＲ複合体の形成を完全にブロックした。Ｎ-メチルピロールポリアミドについて知られていること（１７）と一致して、これらのデータは、したがって、化合物５及び６がＩＴＲに結合し、それによってＭＯＳ１に対する競合者として作用することを示している。

同様の試験を、新規なトランスポサーゼ阻害剤（化合物２〜４）を用いて行い、それらは、これらの阻害剤が、切除に対するものと同様のＩＣ５０値（表ＩＩＩ）で特定のトランスポサーゼ−ＩＴＲ複合体の形成をブロックすることを示した。

複合体の形成を阻害する分子が、ＭＯＳ１二量体の形成（ＩＴＲに結合する前に起こると推測されている段階（１８））を阻害しないことを確かめることを決めた。ＭＯＳ１の切断型（Ｔｎｐ［１−８５］）を用いることによって、以前記載されたようにして（１８）、グルタルアルデヒド結合試験を用いて二量化を測定した。試験化合物のいずれも、５００μＭの濃度で、Ｔｎｐ［１−８５］二量体の形成を阻害できず（示していない）、このことは、Ｎ−末端二量化ドメインを不活性化することによってこれらの化合物が複合体の形成を阻害することができるという仮説を排除する。これらの結果は、これらの阻害剤がおそらくＩＴＲ−ＭＯＳ１相互作用レベルで作用することを示唆している。化合物５〜１０についてのデータは、Ｔｎ５トランスポサーゼ及びＨＩＶ−１インテグラーゼへのこれらの化合物の作用の機構と一致し、したがって本研究は新規な化合物１〜４に焦点をあてた。

［鎖（ストランド）転移反応における図１の化合物１〜４の効果］
我々は、３つの新規な化合物（化合物２〜４）が、ＭＯＳ−ＩＴＲ複合体の構築を妨害する一方で、化合物１はＭｏｓ１切除レベルで作用することを既に示している。切除と鎖転移反応は非常に関連している。

したがって、化合物１を、それが鎖転移反応をも阻害することができるかどうか検証するために試験した。予め切断したＩＴＲを、その転移鎖の５’末端で標識し、鎖転移複合体を形成させるために用いた。ＭＯＳ１−ＩＴＲ複合体の形成の前に阻害剤を添加した。標的プラスミドにおける転位事象は、アガロースゲル上での反応生成物の分離後に検出した（図７）。４つの独立した試験について測定した阻害パーセント割合を、薬剤の濃度の関数としてグラフにした（図８）。化合物１は、１９〜４５μＭの範囲のＩＣ５０値で鎖転移反応を阻害した。それは触媒的阻害剤の特性をも有する。それは、切除反応及び鎖転移反応の両方を阻害する濃度で、ＭＯＳ１−ＬＴＲ複合体の構築を防止できなかった。

［ＨＩＶ−１インテグラーゼの３’成熟活性及び鎖（ストランド）転移に対する阻害剤の効果］
上の結果は、Ｔｎ５及びＨＩＶ−１インテグラーゼの阻害剤はＭＯＳ１を阻害することもできることを示している。阻害剤の新規なグループ（化合物１〜４）がＨＩＶ−１インテグラーゼをブロックすることもできるかどうかを検証するために、化合物４の活性を、ＨＩＶ−１インテグラーゼの３’成熟及びストランド転移活性に対して試験した。試験は以前に記載されたようにして行った（１９）。結果を図９に示す。２つの独立した試験で測定したパーセント阻害率は、化合物４の濃度の関数として追跡した（図１０）。化合物４は、７０μＭのＩＣ５０で３’成熟化を、７μＭのＩＣ５０でストランド転移活性を阻害した。言い換えれば、この化合物は、ストランド転移活性に対して１０倍高活性である。それはまた、ＨＩＶ−１インテグラーゼの優れた阻害剤でもあった。これは、ビス-(フラニル)-Ｎ-マレイミド誘導体が、Ｍｏｓ１のトランスポサーゼ及びＨＩＶ−１インテグラーゼに対する高い活性をもつ阻害剤の新規なグループを構成することを実証している。したがって、ＭＯＳ１は、ＨＩＶ−１インテグラーゼの阻害剤の同定のための新規な代替物と考えることができる。

〔議論〕

［ＭＯＳ１阻害剤の同定］
特定の阻害剤が入手可能であることは、転位などの複雑な機構の分析及び制御のために非常に重要である。初めて、本出願は、真核生物において最も広範囲に手に可能な要素であるマリナーの転位を阻害する化合物を明らかにした。１７０の化合物のパネルをスクリーニングすることによって詳細に特定した最も有効な阻害剤の作用機構を研究している。最初のグループは、トランスポサーゼ（Ｔｎ５）又はインテグラーゼ（ＨＩＶ−１）の阻害剤として既に特定されている（図１の化合物５〜１０）。これらの阻害剤の全ては、ＭＯＳ１−ＩＴＲ複合体の形成を阻止する。第二のグループは、トランスポサーゼＭＯＳ１及びＨＩＶ−１インテグラーゼの両方に対する優れた阻害活性をもつ化合物の新規なファミリーから構成されている（図１の化合物１〜４）。

上記化合物のための標的は、ＤＮＡに結合する化合物５及び６と、ＤＮＡに結合する能力のないその他の化合物との間で区別することができることを意味している。化合物７〜１０はＭＯＳ１及びＴｎ５トランスポサーゼに対する類似した作用機構を有していた。それらは、おそらくはＤＮＡのトランスポサーゼ認識ドメインの一つを撹乱することによって、複合体の形成を阻害する。Ｔｎ５阻害剤はＭｏｓ１の転位に対して効果が低く、これはＤＮＡ認識機構と複合体の組織化との間の違いを反映している可能性がある。化合物５及び６は、γ-アミノ酪酸（γターン）によって結合されたＮ-メチルピロールポリアミドからなるヘアピンポリアミドであり、且つマイナーＤＮＡの溝に結合される（１７）。それらは、３（化合物６）又は４（化合物７）のＡ／Ｔ対によって構成される短い配列が特異的である。これらの配列はＩＴＲ基質の末端に存在するが、内部にも存在する。γターン連結基を持たない単一のＮ-メチルピロールも、ＭＯＳ１の転位に対して活性である（ＩＦ〜２０）。それらはまた、複合体の形成の優れた阻害剤でもあったが（結合のＩＣ５０＜４０ｎＭ）、それらは非特異的ＤＮＡの存在下では有効性が低かった。切除試験では、ＤＮＡの量はゲルシフト試験よりも１６０倍多く、化合物の活性は２５０係数低下する（切断のＩＣ５０＝１０μＭ）。

［ビス-(ヘテロアリール)マレイミド誘導体は、ＤＤＥ酵素阻害剤のための新規な骨格を構成する］
ＭＯＳ１阻害剤としての、本出願との関連における試験化合物のパネルは、ヒドロキシル基で置換されたヘテロ環分子によって主に構成される。このタイプの低分子は、ＨＩＶ−１インテグラーゼの有効な阻害剤として以前に特定されている（２０）。本出願との関連において試験した分子の組のうち、２１はビス-(ヘテロアリール)マレイミドの誘導体だった。明らかになった最も有効な阻害剤は、全てがビス-(ヘテロアリール)マレイミド骨格について組織化されていた（図１の化合物１〜４）。非置換の骨格は有効ではないことが示されており、これはビス-(ヘテロアリール)マレイミド骨格自体はファルマコフォアではないことを示唆している（データは示していない）。マレイミド基のＮ-置換及び／又はヘテロアリール基の置換は両方とも、作用機構と、化合物の有効性とに大きな影響をもっていた。全てＮ-置換されている化合物２、３、及び４は、切除のＩＣ５０と非常に類似したＩＣ５０値でＭＯＳ１−ＩＴＲ複合体の構築を阻害した。対照的に、移動モチーフの違いが、化合物１はその複合体の構造を変えうることを示唆しているとしても、Ｎ-置換されていない化合物１はＭＯＳ１−ＩＴＲ複合体の構築を阻害しない。この化合物は、切除及びストランド転移活性の両方に対して活性であり、化合物２、３、及び４のものよりもわずかに高いＩＣ５０を示した。このファミリーの化合物はＤＮＡに結合しない（２１）が、それらはおそらくトランスポサーゼ又はトランスポサーゼ-ＤＮＡ複合体を標的にする。化合物１とその他のマレイミド誘導体との間の阻害機構における極端な違いに対して２つの可能な説明がある。第一に、Ｎ-マレイミドの芳香族基による置換（化合物２〜４）によって薬剤の標的が異なる可能性があり、これは阻害機構における違いを説明しうる。第二に、この４つの化合物は全て同様の標的を有することができるが、Ｎ-マレイミドの嵩高い芳香族置換がＤＮＡ結合を乱す一方で、非Ｎ-置換化合物はＤＮＡの存在を許容する。

標的として、ＭＯＳ１トランスポサーゼのＤＤＤ触媒ポケットは、ＨＩＶ−１インテグラーゼに対するこれらの化合物の阻害機構と交差活性における主要な変化を説明する優れた候補となり、なぜならそれは類似した触媒残基を含み、反応に関与する２つのＤＮＡ基質の交点に結合するからである。この領域に結合しうる骨格を備えた化合物は、異なる阻害剤の表現型を有することができ、それらの骨格中の軽微な置換の違いの結果として、複合体形成、切除、又はストランド転移の特異的阻害剤となる。

この化合物に対する様々な標的は、このファミリーの化合物の様々な表現型も説明しうる。ＨＩＭＡＲ１（ＭＯＳ１に関連するマリナー・トランスポサーゼ）のＮ-末端ドメイン中の点突然変異は、トランスポサーゼ-ＩＴＲ相互作用の変化が多面的な結果を有しうる仕方を説明している。特定の突然変異がトランスポサーゼ-ＩＴＲ複合体を完全に不安定化する一方で、別のものは複合体を形成させるが、第一又は第二ストランドの切断反応を阻害する（２２）。このことはＮ-末端ドメイン／ＩＴＲ相互作用を標的とする化合物が、Ｎ-末端ドメインにおける突然変異の表現型を反映しうることを暗示している。このファミリーの化合物の標的（１又は複数）の同定は既に進行中であり、なぜならそれが将来の開発のため、及びＭｏｓ１の転位及びＨＩＶ−１の組込過程へのこれらの阻害剤の作用の機構を理解するために必須であると思われるからである。

［ＤＤＥ酵素阻害剤の交差活性］
機構に関して関連する酵素を阻害するための化合物の能力（交差活性）は、ＨＩＶ−１インテグラーゼ、ＡＳＶインテグラーゼ、及びその他の関連するレトロウイルス・インテグラーゼを阻害する化合物によって説明されている（２３）。さらに、ジケト酸タイプのインテグラーゼ阻害剤（５ＣＩＴＥＰ及びＬ−７０８９０６）は、遠い関連のＲＡＧリコンビナーゼに対しても活性である（２４）が、この阻害剤の活性は大きく低下している（１００の係数で）。より最近、Ｔｎ５トランスポサーゼ阻害剤スクリーニングは、ＨＩＶ−１インテグラーゼに対して活性な化合物を特定するために用いられた（１４）。

本出願に提示した研究は、Ｔｎ５とＭＯＳ１トランスポサーゼの阻害剤の間の交差活性と、ＭＯＳ１及びＨＩＶ−１インテグラーゼの間の最初の交差活性の新規な実証を構成している。同定した阻害剤の新規なファミリーの交差活性は、ＭＯＳ１が阻害剤スクリーニングのための優れた代替物を構成することを示している。この代替物は以下の理由で非常に興味深い。第一に、ＭＯＳ１の転位は、インテグラーゼのように、真核生物環境中で機能し、これは真核生物細胞における阻害試験のための可能性を開く。第二に、ＭＯＳ１の触媒ドメインの構造は、ＡＳＶ及びＨＩＶ−１のレトロウイルス・インテグラーゼのものと非常に類似している（９、１０）。第三に、転位におけるＤＮＡ切断の触媒過程は、レトロウイルス・インテグラーゼの成熟の反応に類似しており、第二のストランドの切断の反応は、インテグラーゼの３’成熟活性を模倣している（これら２つの反応ではストランド間中間体又はヘアピンが存在しない）。これまでのところ、Ｔｎ５トランスポソゾームがレトロウイルス・インテグラソームのモデルとして用いられてきたが、マリナートランスポソゾームは新規な、おそらくより良い、ＨＩＶ−１インテグラソームの組織化のためのモデルを構成しうる。それにも関わらず、これら２つのモデル（Ｍｏｓ１及びＨＩＶ−１）は本質的な違い、例えば、それらのＤＮＡ結合ドメインの構造及び配置、ドナーＤＮＡ基質の性質、及びＤＮＡ切断反応（単一ストランドの切断に対して二本ストランドの切断）、を示しており、これはこの２つのシステムが完全に入れ替え可能ではないということを念頭に置いておかなければならない。この点で、交差活性をもつ薬剤の使用は、これら２つの酵素の間の類似性及び違いを検出するのに重要なツールを提供する。

［参考文献］

Claims (48)

1. 下記式（Ｉ）を有する、ビス(ヘテロアリール)マレイミド構造を含む分子。
   （式（Ｉ）中、
   - Ｒ^１基は、水素、直鎖状又は分枝状アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロアラルキル、ヘテロアルコキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、テトラゾリル、アシル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、フェニル、ヒドロキシフェニル、又は以下の基：
   で構成される群から選択され；
   - Ｒ^２基及びＲ^３基は、互いに独立に、水素原子、カルボン酸、シアノ、オキシム、オキシムエーテル、テトラゾール、エステル、置換又は非置換のアミド、酸、二塩基酸、シクロアルキルカルボン酸、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び-ＣＨ＝ＣＨ-ＣＨＯ基によって構成される群から選択され；
   - Ａｒ^１及びＡｒ^２は互いに独立に選択され、且つ、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のアリール、及び直鎖状又は分枝状のヘテロアルキルによって構成され；且つ、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３がともにＨであってはならない。）
2. Ｒ^２及びＲ^３が同じである、下記式（Ｉａ）を有する請求項１記載の分子。
   
3. Ａｒ^１及びＡｒ^２が同じである、下記式（Ｉｂ）を有する請求項１記載の分子。
   
4. Ｒ^２及びＲ^３が一方で同じであり、Ａｒ^１及びＡｒ^２が他方で同じであり、下記式（Ｉｃ）を有する請求項１記載の分子。
   
5. - Ａｒ^１はＲ^２を有する単環式ヘテロアリールによって構成され、Ｒ^２-ピリジル、Ｒ^２-ピラジニル、Ｒ^２-フラニル、Ｒ^２-チエニル、Ｒ^２-ピリミジニル、Ｒ^２-イソオキサゾリル、Ｒ^２-イソチアゾリル、Ｒ^２-オキサゾリル、Ｒ^２-チアゾリル、Ｒ^２-ピラゾリル、Ｒ^２-フラザニル、Ｒ^２-ピロリル、Ｒ^２-ピラゾリル、Ｒ^２-トリアゾリル、Ｒ^２-ピラジニル、及びＲ^２-ピリダジニルの群から選択され、前記単環式ヘテロアリールは置換されているか又は非置換であり；且つ
   - Ａｒ^２は、Ａｒ^１とは独立に、Ｒ^３を有する単環式ヘテロアリールによって構成され、Ｒ^３-ピリジル、Ｒ^３-ピラジニル、Ｒ^３-フラニル、Ｒ^３-チエニル、Ｒ^３-ピリミジニル、Ｒ^３-イソオキサゾリル、Ｒ^３-イソチアゾリル、Ｒ^３-オキサゾリル、Ｒ^３-チアゾリル、Ｒ^３-ピラゾリル、Ｒ^３-フラザニル、Ｒ^３-ピロリル、Ｒ^３-ピラゾリル、Ｒ^３-トリアゾリル、Ｒ^３-ピラジニル、及びＲ^３-ピリダジニルの群から選択され、前記単環式ヘテロアリールは置換されているか又は非置換である、請求項１記載の分子。
6. Ａｒ^１及び／又はＡｒ^２がフラン基である、請求項１記載の分子。
7. Ａｒ^１及びＡｒ^２がフラン基であり、下記式（ＩＩ）を有する、請求項５記載の分子。
   
8. Ａｒ^１及びＡｒ^２がそれぞれ、Ｒ^２-フラニル基及びＲ^３-フラニル基である、請求項５に記載の分子。
9. Ｒ^２及びＲ^３が同じであり、下記式（ＩＩａ）を有する、請求項７又は８に記載の分子。
   
10. Ｒ^２及び／又はＲ^３がＣＯＯＨである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の分子。
11. Ｒ^２及び／又はＲ^３がＣＨ＝ＣＨ-ＣＨＯである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の分子。
12. Ｒ^１が任意選択により置換されていてもよいフェニル基である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の分子。
13. Ｒ^１が４-ヒドロキシフェニルである、請求項１２に記載の分子。
14. Ｒ^１が、
    である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の分子。
15. Ｒ^１がＨである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の分子。
16. - Ｒ^１が水素であり、Ａｒ^１及びＡｒ^２がフランである場合に、Ｒ^２及びＲ^３がＣＨＯである、式（Ｉ）の分子；及び
    - Ｒ^１がフェニルであり、Ａｒ^１及びＡｒ^２がフランである場合に、Ｒ^２及びＲ^３がＣＨＯである、式（Ｉ）の分子、
    ではない、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の分子。
17. Ｎ-置換されていることを特徴とする、請求項１〜１４及び１６のいずれか一項に記載の分子。
18. Ｎ-置換されていないことを特徴とする、請求項１５又は１６に記載の分子。
19. 下記式（ＩＩＩ）〜（ＶＩ）によって構成される群から選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の分子。
    
20. インビトロでＤＤＥ／ＤＤＤ酵素阻害活性を有する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の分子。
21. 請求項１〜２０のいずれか一項に記載の阻害性分子少なくとも１種を含むことを特徴とする組成物。
22. さらに、医薬として許容可能な担体を含むことを特徴とする、請求項２１に記載の組成物。
23. 後天性免疫不全症候群に関連した症状の治療において生物学的に活性である追加の化合物をさらに含むことを特徴とする、請求項２１又は請求項２２に記載の組成物。
24. ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素の活性のインビトロでの阻害における、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子の使用。
25. 前記ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素がトランスポサーゼ、例えば、ＭｕＡ、Ｔｎ５、又はＭＯＳ１である、請求項２４に記載の使用。
26. 前記ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素がレトロウイルス・インテグラーゼ、例えば、ＨＩＶ−１ウイルスからのものである、請求項２４に記載の使用。
27. トランスポサーゼのエクスビボでの阻害における、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子の使用。
28. ＤＤＥ／ＤＤＤ酵素の阻害剤として使用するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子。
29. レトロウイルス・インテグラーゼの阻害剤として使用するための、請求項２８に記載の分子。
30. 薬剤として使用するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子。
31. レトロウイルス複製を低減又は抑制するのに用いるための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子。
32. 前記レトロウイルスがレンチウイルスである、請求項３１に記載の分子。
33. 前記レンチウイルスが、ヒト向性をもつレンチウイルス、例えば、ＨＩＶウイルス（ヒト免疫不全ウイルス）である、請求項３２に記載の分子。
34. 前記ＨＩＶウイルスがＨＩＶ−１分離株又はＨＩＶ−２分離株である、請求項３３に記載の分子。
35. 前記レンチウイルスが、動物向性をもつレンチウイルス、例えば、ＣＡＥＶウイルス（ヤギ関節炎脳炎ウイルス）、ＥＩＡＶウイルス（ウマ伝染性貧血ウイルス）、ＶＩＳＮＡウイルス、ＳＩＶウイルス（サル免疫不全ウイルス）、又はＦＩＶウイルス（猫免疫不全ウイルス）によって構成される群から選択されるレンチウイルスである、請求項３２に記載の分子。
36. ＨＩＶによる感染に続く症状及び／又は感染の治療に用いるための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子。
37. 後天性免疫不全症候群の治療に用いるための、請求項３６に記載の分子。
38. 薬剤として使用するための、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
39. レトロウイルス複製を低減又は抑制に用いるための、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
40. レトロウイルス、特にレンチウイルスのインテグラーゼの阻害剤として用いるための、請求項２１〜２３のいずれか一項の記載の組成物。
41. 前記レトロウイルスが、ＨＩＶウイルス、特に、ＨＩＶ−１分離株又はＨＩＶ−２分離株である、請求項３９又は４０に記載の組成物。
42. 後天性免疫不全症候群の治療に用いるための、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
43. 固体形態（サシェ、粉末、顆粒、錠剤、座薬、急速放出錠剤、胃抵抗性錠剤、遅延放出錠剤）又は液体（シロップ、注入可能な溶液、点眼液）で投与するための、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
44. 経口、口腔-経粘膜、経膣、経直腸、非経口（静脈内、筋肉内、又は皮下）、又は経皮で投与するための、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
45. ＨＩＶによる感染による症状及び／又は感染の治療、特に、後天性免疫不全症候群の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の分子又は請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
46. レトロウイルス・インテグラーゼ阻害剤をスクリーニングするためのＭＯＳ１システムの使用。
47. 真核生物細胞中で行うことを特徴とする、請求項４６に記載の使用。
48. 前記レトロウイルス・インテグラーゼが、ＨＩＶウイルス、特に、ＨＩＶ−１分離株又はＨＩＶ−２分離株のインテグラーゼであることを特徴とする、請求項４６又は４７に記載の使用。