EP1644120A1 - Vorrichtung und verfahren zum abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren partikeln aus einer flüssigkeit - Google Patents

Vorrichtung und verfahren zum abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren partikeln aus einer flüssigkeit

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EP1644120A1
EP1644120A1 EP04740646A EP04740646A EP1644120A1 EP 1644120 A1 EP1644120 A1 EP 1644120A1 EP 04740646 A EP04740646 A EP 04740646A EP 04740646 A EP04740646 A EP 04740646A EP 1644120 A1 EP1644120 A1 EP 1644120A1
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EP
European Patent Office
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magnetic field
rod
magnetic
liquid
magnet
Prior art date
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EP04740646A
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English (en)
French (fr)
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EP1644120B1 (de
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Lothar A Brassard
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PerkinElmer Chemagen Technologie GmbH
Original Assignee
Chemagen Biopolymer Technologie AG
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Publication date
Application filed by Chemagen Biopolymer Technologie AG filed Critical Chemagen Biopolymer Technologie AG
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Publication of EP1644120B1 publication Critical patent/EP1644120B1/de
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    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C1/00—Magnetic separation
    • B03C1/02—Magnetic separation acting directly on the substance being separated
    • B03C1/28—Magnetic plugs and dipsticks
    • B03C1/286—Magnetic plugs and dipsticks disposed at the inner circumference of a recipient, e.g. magnetic drain bolt
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
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    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
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    • B03C1/02—Magnetic separation acting directly on the substance being separated
    • B03C1/28—Magnetic plugs and dipsticks
    • B03C1/288—Magnetic plugs and dipsticks disposed at the outer circumference of a recipient
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
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    • B03C1/00—Magnetic separation
    • B03C1/005—Pretreatment specially adapted for magnetic separation
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    • B03C1/06—Magnetic separation acting directly on the substance being separated with the material carriers in the form of trays or with tables with magnets moving during operation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
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    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C2201/00—Details of magnetic or electrostatic separation
    • B03C2201/26—Details of magnetic or electrostatic separation for use in medical or biological applications

Definitions

  • the invention relates to devices for separating magnetic or magnetizable particles from liquids by means of a magnetic field which is generated by one or more permanent magnets.
  • the invention further relates to methods for separating magnetic or magnetizable particles from liquids by means of a magnetic field which is generated by one or more permanent magnets.
  • the devices and methods are suitable, for example, for applications in biochemistry, molecular genetics, microbiology, medical diagnostics and forensic medicine.
  • the basic principle of magnetic separation of substances from complex mixtures is based on the fact that magnetic par- particles (magnetizable or magnetically attractable particles) are functionalized in a specific manner for the intended separation process, ie they are endowed by chemical treatment with specific binding properties for the target substances to be separated.
  • the size of such magnetic particles is generally in the range from approximately 0.05 to 500 ⁇ m.
  • Magnetic particles which have specific binding properties for certain substances and are suitable for separating these substances from complex mixtures have been described, for example, in DE 195 28 029 AI and are commercially available (e.g. chemagen Biopolymer-Technologie AG, DE-52499 Baesweiler) ,
  • the functionalized magnetic particles are added in a first step (“binding step”) to a mixture to be purified which contains the target substance (s) in a liquid which promotes the binding of the target substance molecules to the magnetic particles (binding buffer).
  • binding step a first step
  • binding buffer a liquid which promotes the binding of the target substance molecules to the magnetic particles
  • binding buffer a liquid which promotes the binding of the target substance molecules to the magnetic particles
  • binding buffer a selective binding of the target substance (s) present in the mixture to the magnetic particles.
  • These magnetic particles are then immobilized at one point on the inner wall of the reaction vessel ("pellet") by using magnetic forces or a magnetic field, for example by means of a permanent magnet.
  • the liquid supernatant is then separated off and discarded, for example by suction or decanting. Since the magnetic particles are immobilized in the manner mentioned, it is largely prevented that these particles are separated off with the supernatant.
  • the immobilized magnetic particles are then resuspended.
  • An elution liquid or an elution buffer is used which is suitable for breaking the bond between the target substance (s) and the magnetic particles, so that the target substance molecules of the magnetic particles are released and can be separated with the elution liquid, while the magnetic particles are immobilized by the action of a magnetic field.
  • One or more washing steps can be carried out before the elution step.
  • DE 296 14 623 gg discloses a magnetic separator which is equipped with movable permanent magnets.
  • the reaction vessel containing the magnetic particles be moved relative to a permanently installed permanent magnet by mechanical drive devices.
  • the device described in DE 100 63 984 A1 which has a movable magnet holder and a movable reaction vessel holder, also works on a similar principle.
  • the magnetic particles are immobilized or collected on the inner wall or on the bottom of a reaction vessel as a "pellet".
  • these devices are not suitable for removing the magnetic particles from a reaction vessel. Therefore, in order to separate the liquid from the magnetic particles, the liquid must be sucked out of the individual reaction vessels. This is disadvantageous because it involves a high material consumption (disposable pipette tips). Furthermore, it cannot be prevented that individual magnetic particles are also extracted; this results in a high error rate. Other errors can be caused by dripping liquids that lead to cross-contamination.
  • DE 100 57 396 CI proposes a magnetic separator which has a large number of rotatable rods which are magnetized by an electromagnetic excitation coil can. By immersing the rod in the liquid containing the magnetic particles and pulling out the rod in the magnetized state, the magnetic particles can be removed from the liquid and, if necessary, transferred to a further reaction vessel. There they can be released again into a liquid by switching off the excitation coil, for example into a washing or elution liquid.
  • a disadvantage of this device is that the magnetic field generated by the excitation coil is not sufficiently homogeneous, so that the individual rods - depending on their position within the ring-shaped excitation coil - are magnetized to different extents. This disadvantage is particularly pronounced when a large number of bars are required.
  • the excitation coil requires a relatively large amount of space, which results in design restrictions.
  • the known devices are especially not suitable for the simultaneous treatment of larger numbers of samples, as is required for high throughput applications (e.g. microtiter plates with 364 or 1536 wells).
  • the invention was therefore based on the object of providing devices and methods with which the separation of magnetic particles from liquids and the transfer of magnetic particles from one liquid into another liquid is made possible without the disadvantages mentioned above occurring.
  • the devices and methods should be suitable for use in high-throughput methods.
  • the devices according to the invention for separating magnetic or magnetizable particles from a liquid are distinguished by the following features:
  • the devices have two legs made of a soft magnetic material; these form a magnetic circuit, possibly together with other components;
  • a head piece On one of the two poles, a head piece is fixed or detachable; a magnetizable rod or a plurality of such rods is / are fixedly or movably attached to the head piece in the vertical direction;
  • a permanent magnet, or a group of at least two permanent magnets, is movably arranged at at least one point of the device; the arrangement is such that a magnetic field can be generated between the two poles and the magnetic field can be switched on or off by moving the magnet (s);
  • That area of the device in which the movable magnet (s) is / are arranged in the magnetic circuit (iron circle) is at least partially surrounded by a material shielding the magnetic field.
  • the two legs are made of a soft magnetic magnetic material, for example made of soft iron (in particular Fe-Ni alloys) or magnetizable steel.
  • Their cross section can be square, rectangular, circular or oval, for example; the size of the cross-sectional area depends on the desired cross-sectional area of the magnetic field and can be, for example, 20 to 100 cm 2 . It is also possible to attach the legs to a frame men or housing made of non-magnetizable material.
  • the two legs are generally arranged one above the other, with the leg carrying the head piece being located above that area of the other leg which is intended to hold the liquid containers (i.e. the sample vessels).
  • the head piece can be arranged detachably, which, for example, enables the exchange of head pieces with different numbers or types (length, diameter; fixed or movable) of magnetizable bars.
  • the number of rods depends on the number of samples or liquid containers that are to be treated simultaneously.
  • Microtiter plates, in particular with 96, 384 or 1536 wells, are preferably used as containers, so that appropriate head pieces with, for example, 96, 384 or 1536 magnetizable rods are provided for these cases.
  • sample tubes or reaction vessels with a volume of, for example, 0.015 to 100 ml, which can be treated individually or in groups, in each case in combination with matched magnetizable rods.
  • the rods are also made of a soft magnetic material, as described above. Their length and their diameter depend on the intended application, in particular on the dimensions of the containers and the liquid volumes, and can be varied accordingly. Furthermore, it is provided that a strippable, exchangeable covering is placed over the rods in order to avoid cross-contamination between different liquid samples. For this, a special dere device provided which enables the automatic dropping of the used casings and the provision and attachment of new casings.
  • a permanent magnet which can also be composed of several individual magnets
  • an essentially homogeneous magnetic field is generated between the poles of the legs.
  • This enables the arrangement of a larger number of rods, for example in several rows, the magnetic field on each of the rods being approximately the same size; this is particularly advantageous with regard to high-throughput processes.
  • the devices according to the invention also have the advantage that the magnetic particles — in the switched-on state — essentially collect at the tip of the rods.
  • the permanent magnets are / are arranged to be movable relative to the magnetic circuit of the device, so that the magnetic field between the poles can be alternately switched on and off by moving the magnet (s).
  • the magnet (s) are / are moved in the magnetic circuit or into or out of the magnetic circuit.
  • the magnetic field between the poles is on when the permanent magnet (s) is in a first position and the magnetic field between the poles is off when the permanent magnet (s) is in a first position second position is / are.
  • the magnet (s) are preferably located outside the magnetic circuit.
  • the magnetic field can preferably be switched on or off in such a way that the magnet (s) are moved within the iron circle (magnetic circle) (for example by rotation) or that the magnet (s) of outside is / are moved into the magnetic circuit (“switching on”) and then moved out again (“switching off”).
  • the device can be used to remove magnetic particles from the first liquid with the aid of the magnetizable rods and to transfer them to a second or further liquid and release them there again. It also makes it possible to use the rods for other functions, for example as stirring rods.
  • all hard magnetic materials known to the person skilled in the art can be used to manufacture the permanent magnets, in particular ferrites, Al-Ni-Co alloys and rare earth magnets (preferably NdFeB); Such magnetic materials and magnets are commercially available from various manufacturers.
  • the area of the device in which the movable magnet (s) is / are arranged in the iron circle is at least partially surrounded by a material shielding the magnetic field.
  • a soft magnetic material can be used as the shielding material and / or a magnetic field shielding material known to the person skilled in the art, such as, for. B. tinplate or mum metal.
  • This shielding material is arranged around the movable magnet (s) in such a way that, when switched off, no magnetic forces can act on the sample liquid container located in the air gap of the magnetic circuit.
  • a shield that completely surrounds the area in which the permanent magnet (s) are arranged is particularly preferred.
  • a short-circuit ring can be formed for this.
  • the device is preferably set up in such a way that the area of the device in which the movable magnet (s) is / are arranged in the iron circle, in the event of movement of the magnet (s) in or into the iron circle, at least partially the magnetic one Field shielding material is surrounded.
  • the two legs of the device are connected to one another on the side opposite the two poles by a likewise magnetizable (soft magnetic) material, so that a magnetic circuit or a magnetization ring is formed which, with the exception of the air gap between the poles, is completely closed.
  • the movable permanent magnet (s) is / are preferably arranged between the two legs and at their other end (i.e. opposite the poles). If the two legs are connected to one another as described, then the permanent magnet (s) are / are preferably attached in or on the region connecting the two legs.
  • the magnet (s) is / are / are movably installed in a recess provided for this purpose in one of the legs or in the section connecting the two legs.
  • the magnet In order to enable movement of the permanent magnet (s) to switch the magnetic field on and off, the magnet, or a group of several magnets, can be rotatably or tiltably arranged in a recess provided for this purpose. By turning or tilting, the magnet can be brought into a position in which its poles or its magnetic field point in the direction of the magnetic circuit or in the direction of the legs (switched on state, maximum field strength between the poles of the legs), or the magnet can be moved to another position, in which the magnetic field emanating from it is essentially perpendicular to the direction mentioned (switched-off state). The magnet (s) can also be rotated or tilted to intermediate positions to ensure that the field strength between the poles of the legs is less than the maximum value.
  • magnet (s) it is also possible to attach the magnet (s) so that they can be moved so that the magnet (s) can be moved into the magnetic circuit (switching on) or removed from it again (switching off).
  • the movement can take place either directly or indirectly by hand or by means of one or more electric motors, or by pneumatic or hydraulic means; combinations of the means mentioned are also possible.
  • the drive devices can other means known to those skilled in the art, such as. B. include linkage or gear.
  • the extent of the movement of the permanent magnet (s) can be predetermined.
  • the magnetic field strength can be set to a specific value, depending on the respective application. This can be achieved, in particular, by specifying and maintaining a certain tilt or rotation angle or a certain displacement distance.
  • the head piece carrying the magnetizable rods is movably attached.
  • the head piece can be movable in the horizontal plane.
  • Drive means for example electrical, pneumatic, hydraulic), gears, linkage and the like are then preferably connected to the head piece, so that the head piece is suitable for the controllable execution of shaking movements (eg circular movements or movements in the manner of an orbital shaker).
  • said magnetizable bar (s) are rotatably attached (about their longitudinal axis) to the respective head piece and can be set in rotation during the treatment of a liquid containing magnetic particles in order to ensure thorough mixing effect or to accelerate the detachment of the particles from the rods.
  • the rotation is preferably carried out by electromotive means.
  • liquids which contain such particles are introduced into the air gap of the device, below the magnetizable rods, containers of the type mentioned at the outset being able to be used.
  • at least one holding device is preferably provided, which can be positioned below the rods, so that the rods are aligned with the openings of the containers.
  • This holding device can be configured, for example, in the form of a holding plate.
  • the holding device can be moved in a substantially horizontal plane in one or more directions; alternatively or additionally, the holding device can be movable in the vertical direction.
  • the movement is preferably carried out by an electric motor drive or by pneumatic or hydraulic means, or by combinations of these means.
  • the holding devices can also be designed in such a way that they are suitable for carrying out shaking movements.
  • the constructive measures required for this are basically known to the expert known. It is further provided that both the head piece and the holding device can be moved and used to carry out shaking movements. In this way, a particularly effective mixing of the sample liquid is possible if the rods are immersed in it.
  • a control or regulating device is provided, by means of which the vertical movement of the holding device (s) can be adjusted or controlled in such a way that the rods (7) are immersed in the liquid-filled containers (7) during an upward movement. 10) is effected.
  • said holding device can be part of a program-controlled laboratory robot system, wherein it is preferably set up in such a way that a large number of individual containers or groups of such containers, in particular microtiter plates, are alternately brought into a position below said rods and then after one predeterminable time interval is brought back into a position which lies outside the area below the bars. This enables a high sample throughput.
  • the device is assigned a program-controlled computer and is connected to it.
  • at least one of the following functions of the device can be controlled or regulated, or at least two of the functions mentioned below can be coordinated with one another: movement of the permanent magnet (s) for switching the magnetic field on and off, in particular the duration of the switch-on and switch-off phases, as well as magnetic field strength; - rotation speed and duration in the case of rotatable bars;
  • rotational or shaking movement of the holding device in particular rotational speed, amplitude and intervals between individual work phases.
  • the devices according to the invention can advantageously be combined with other devices for the automated treatment of sample material. Furthermore, two or more of the devices according to the invention can also be arranged side by side and combined.
  • the invention therefore also extends to devices of the type described above, to which one or more of the devices mentioned below are assigned, the functions of which are coordinated with the functions of the device by means of a common control:
  • thermostattable heating or cooling devices One or more thermostattable heating or cooling devices
  • the invention further comprises methods for separating a target substance from a mixture of substances in liquid form. These methods generally have the following steps: a) adding magnetic or magnetizable particles which have specific binding properties with respect to the target substance; b) introducing a predetermined volume of the mixture into the air gap between the two poles of a magnetic circuit and immersing a magnetizable rod in the mixture, the rod being connected to one of the poles of the magnetic circuit and the magnetic field initially being switched off; c) switching on the magnetic field by changing the position of a permanent magnet arranged in or on the magnetic circuit, as a result of which the rod is magnetized and the particles essentially collect at the lower end of the rod; then the rod with the adhering particles is removed from the first liquid mixture; d) immersing the rod with the adhering particles in a predetermined volume of a liquid, which causes the target substance to elute from the particles; e) Lifting the rod out of the elution liquid, the particles sticking to the rod and thus being separated from the liquid.
  • the particles into the liquid can be advantageous to release the particles into the liquid by switching off the magnetic field, to mix them, and then by switch the magnetic field back to collect on the bars.
  • the mixing can be effected, for example, by rotating the rods or by shaking the holding device and / or the head part.
  • the described method can optionally contain one or more washing processes; Such a washing process can follow step c), for example, and proceed as follows:
  • the aforementioned methods can be carried out in a particularly simple and quick manner.
  • the devices and methods according to the invention are particularly advantageously suitable for the fields of application mentioned at the outset, in particular for high-throughput methods.
  • FIG. 1A and 1B show an embodiment of a device according to the invention in a side view.
  • the device (1) has two magnetizable legs (2, 3) of a magnetic circuit, the legs being connected to one another in the region (6). At the opposite end of the legs are the two poles (4, 5) with an air gap (12) in between.
  • the pole (4) of the upper leg (2) carries a head piece (8) with magnetizable rods (7) attached to it. Below the rods there is a holding device (11) which is connected to the pole (5) of the other leg (3) or is at least in contact with it.
  • a sample container (9) with a plurality of depressions (10) for holding liquid samples is arranged on the holding device, for example detachably fixed on the holding device (11).
  • a rod-shaped or cuboid permanent magnet (15) is rotatably arranged on the side opposite the air gap (12) on which a rod-shaped or cuboid permanent magnet (15) is rotatably arranged.
  • a short-circuit ring (20) is arranged around the area of the permanent magnet (this is shown in a broken line in the area of the rotatable magnet).
  • 1A shows the device in the switched-off state; the position of the permanent magnet (15) is essentially perpendicular to the direction of the magnetic circuit; the magnetic field of the permanent magnet is conducted into the short-circuit ring (20).
  • FIG. 1B shows the same device in the switched-on state.
  • the position of the permanent magnet (15) points essentially in the direction of the magnetic circuit.
  • between the poles (4,5) and thus also at the ends of the Rods (7) generates a magnetic field that can be used to attract magnetic particles.
  • FIG. IC shows a sectional representation of the device shown in FIGS. 1A / B, in the plane indicated by the dashed line a (FIG. 1B).
  • the arrows (17) schematically show the direction of the magnetic field when switched on.
  • ID and 1 ⁇ show, also in a schematic side view, a further embodiment of the devices according to the invention, the magnet used having a flat cuboid shape and the poles being located on the two large side faces.
  • the switched-on state is shown in FIG. ID (the magnetic field runs in the direction of the iron circle), and the switched-off state is shown in FIG.
  • the position of the short-circuit ring (20) is only indicated.
  • the other elements shown in FIGS. 1A, 1B have been omitted to simplify the illustration.
  • Fig. 4 shows the device (1) of Fig. 1A / B in plan view; the annular shape of the short-circuit ring (20) can be seen thereby.
  • the short-circuit ring (20) is designed such that it does not lie completely against the magnetic circuit, but rather a cavity (22) is present. Access to the rotatable magnet (15) is thereby facilitated or made possible.
  • the short-circuit ring (20) can be composed of two halves (20a, 20b) or several parts, as indicated by the dashed line 21, in order to facilitate assembly and disassembly.
  • Fig. 5 shows an embodiment of the device according to the invention (also in side view), in which a displaceable (double arrow) permanent magnet (15) is provided in the recess (16).
  • Fig. 5 shows the switched-on state in which the permanent magnet causes a magnetic field to arise between the poles (4, 5). To switch off, the magnet is moved out of the magnetic circuit of the device (1).
  • Fig. 6 shows a modification of the device shown in Fig. 1A / B, wherein the two legs (3,4) are of different lengths.
  • FIGS. 7A to 7D show different views of a particularly preferred embodiment in which a magnet (15) is arranged on a base (40) which can be rotated about the axis Y in a horizontal plane.
  • the magnet (15) can be brought into the magnetic circuit (iron circuit) by rotation of the support (40) (switched on state, FIGS. 7C, 7D) or moved out of the region of the magnetic circuit (FIGS. 7A, 7B).
  • the short-circuit ring (20) not shown in these figures (FIGS. 7A to 7D), has a suitable recess in the area of the base (40), or the shielding material is not completely formed on this side of the device.
  • the base (40) is preferably designed in the form of a turntable or also as a rotatable arm which is moved by means of known drive devices.
  • two or more magnets can also be attached to the base.
  • 7A, 7C show a sectional representation in the area of the axis of rotation Y; 7B, 7D each show the same device in plan view.
  • Fig. 8 shows an embodiment of the device (1) according to the invention in side view; in this case the two legs (2, 3) are not connected to one another by a common area (6).
  • the rotatable magnet (15) is arranged between the two legs (2, 3) on the side opposite the air gap.
  • the short-circuit ring (20) is shown in a sectional view.
  • Fig. 9 shows the front view of the upper leg (4) of a device according to the invention with the head piece (8) and rods (7) attached to it.
  • a holding device (8) is positioned below the rods, on which a number of containers (10) are arranged in rows.
  • the holding device can be moved in the horizontal plane in different directions as well as up and down (arrows).
  • Fig. 10 (a-d) shows in longitudinal section examples of different shapes of the magnetizable rods (7).
  • the particles attracted under the influence of the magnetic field are designated by (30).
  • Fig. 9d shows a rod which is provided with an exchangeable sleeve (25).

Landscapes

  • Physical Or Chemical Processes And Apparatus (AREA)
  • Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
  • Soft Magnetic Materials (AREA)
  • Magnetic Treatment Devices (AREA)

Abstract

Eine Vorrichtung (1) zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln aus einer Flüssigkeit unter Verwendung eines Magnetfeldes weist zwei Schenkel (2,3) aus einem weich-magnetischen Werkstoff auf, wobei zwischen den beiden Polen (4,5) der Schenkel ein Luftspalt (12) vorhanden ist, der zur Aufnahme eines Behälters oder einer Vielzahl von Behältern (9,10) geeignet ist; und wobei an dem einen der beiden Pole (4) ein Kopfstück (8) fest oder lösbar angeordnet ist, an dem in vertikaler Richtung ein magnetisierbarer Stab oder eine Vielzahl derartiger Stäbe (7) fest oder beweglich angebracht ist/ sind; und wobei an mindestens einer Stelle der Vorrichtung ein Permanentmagnet (15), oder eine Gruppe von mindestens zwei Permanentmagneten, beweglich angeordnet ist, dergestalt, daß ein Magnetfeld (17) zwischen den beiden Polen erzeugbar ist und das Magnetfeld durch Bewegung des/der Magneten eingeschaltet oder ausgeschaltet werden kann, und wobei derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die beweglichen Magnet(e) angeordnet ist/sind, zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material (20) umgeben ist.

Description

Vorrichtung und Verfahren zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln aus einer Flüssigkeit.
Die Erfindung betrifft Vorrichtungen zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln aus Flüssigkeiten mittels eines Magnetfeldes, das durch einen oder mehrere Permanentmagneten erzeugt wird.
Die Erfindung betrifft ferner Verfahren zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln aus Flüssigkeiten mittels eines Magnetfeldes, das durch einen oder mehrere Permanentmagneten erzeugt wird. Die Vorrichtungen und Verfahren sind beispielsweise für Anwendungszwecke in der Biochemie, Molekulargenetik, Mikrobiologie, medizinischen Diagnostik und forensischen Medizin geeignet.
Verfahren, die auf der magnetischen Abtrennung unter Verwendung von spezifisch bindenden, magnetisch anziehbaren Partikeln beruhen, erlangen im Bereich der Probenvorbereitung für diagnostische oder analytische Untersuchungen zunehmende Bedeutung. Dies gilt insbesondere für automatisierte Verfahren, da auf diese Weise eine große Anzahl von Proben innerhalb kurzer Zeit analysiert werden können und auf arbeitsaufwendige Zentrifugationsschritte verzichtet werden kann. Dadurch werden die Voraussetzungen für ein effizientes Screening mit einem hohen Proben-Durchsatz geschaffen. Dies ist beispielsweise für Anwendungen bei molekulargenetischen Studien oder auf dem Gebiet der medizinischen Diagnostik von enormer Bedeutung, da eine rein manuelle Handhabung von sehr großen Probenzahlen praktisch nicht zu bewältigen ist. Weitere wichtige Anwendungsgebiete betreffen pharmazeutische Sσreening-Methoden zur Identifizierung potentieller Arzneimittel-Wirkstoffe.
Das Grundprinzip der magnetischen Abtrennung von Substanzen aus komplexen Gemischen beruht darauf, daß magnetische Par- tikel (magnetisierbare bzw. magnetisch anziehbare Partikel) in spezifischer Weise für den beabsichtigten Separationsprozeß funktionalisiert werden, d. h. sie werden durch chemische Behandlung mit spezifischen Bindungseigenschaften für die abzutrennenden Zielsubstanzen ausgestattet. Die Größe solcher Magnetpartikel liegt im allgemeinen im Bereich von ca. 0,05 bis 500 um.
Magnetpartikel, die spezifische Bindungseigenschaften für bestimmte Substanzen aufweisen und sich zur Abtrennung dieser Substanzen aus komplexen Gemischen eignen, sind beispielsweise in DE 195 28 029 AI beschrieben worden und sind kommerziell erhältlich (z. B. chemagen Biopolymer-Technologie AG, DE-52499 Baesweiler) .
Bei bekannten Trennverfahren werden die funktionalisierten Magnetpartikel in einem ersten Schritt ("Bindungs-Schritt") zu einem aufzureinigenden Gemisch hinzugegeben, das die Zielsubstanz (en) in einer Flüssigkeit enthält, welche die Bindung der Zielsubstanz-Moleküle an die Magnetpartikel begünstigt (Bindungspuffer) . Dadurch kommt es zu einer selektiven Bindung der im Gemisch vorhandenen Zielsubstanz (en) an die Magnetpartikel. Anschließend werden diese Magnetpartikel durch Anwendung magnetischer Kräfte bzw. eines Magnetfeldes, beispielsweise mittels eines Permanentmagneten, an einer Stelle der Reaktionsgefäß-Innenwand immobilisiert ("Pellet"). Nachfolgend wird der flüssige Überstand abgetrennt und verworfen, beispielsweise durch Absaugen oder Dekantieren. Da die Magnetpartikel auf die genannte Weise immobilisiert sind, wird weitgehend verhindert, daß diese Partikel mit dem Überstand abgetrennt werden.
Anschließend werden die immobilisierten Magnetpartikel erneut resuspendiert. Dabei wird eine Elutionsflüssigkeit bzw. ein Elutionspuffer verwendet, der geeignet ist, die Bindung zwischen der/den Zielsubstanz (en) und den Magnetpartikeln zu lösen, so daß die Zielsubstanz-Moleküle von den Magnetpartikeln freigesetzt werden und mit der Elutionsflüssigkeit abgetrennt werden können, während die Magnetpartikel durch Einwirkung eines Magnetfeldes immobilisiert werden. Vor dem Elutionssσhritt können ein oder mehrere Waschschritte durchgeführt werden.
Für die Durchführung von Trennverfahren mittels magnetischer Partikel sind verschiedenartige Vorrichtungen beschrieben worden. DE 296 14 623 ül offenbart einen Magnetseparator, der mit beweglichen Dauermagneten ausgestattet ist. Alternativ wird vorgeschlagen, daß die Magnetpartikel enthaltende Reaktionsgefäß durch mechanische Antriebseinrichtungen relativ zu einem fest installierten Dauermagneten zu bewegen. Nach einem ähnlichen Prinzip arbeitet auch die in DE 100 63 984 AI beschriebene Vorrichtung, die eine bewegliche Magnethalterung und eine bewegliche Reaktionsge- fäßhalterung aufweist.
Mit den vorstehend genannten Vorrichtungen läßt sich erreichen, daß die Magnetpartikel an der Innenwand oder am Boden eines Reaktionsgefäßes als "Pellet" immobilisiert oder gesammelt werden. Diese Vorrichtungen sind jedoch nicht dafür geeignet, um die Magnetpartikel aus einem Reaktionsgefäß zu entfernen. Deshalb muß zur Abtrennung der Flüssigkeit von den Magnetpartikeln jeweils die Flüssigkeit aus den einzelnen Reaktionsgefäßen abgesaugt werden. Dies ist nachteilig, weil es mit einem hohen Materialverbrauch einhergeht (Ein- mal-Pipettenspitzen) . Ferner läßt sich nicht verhindern, daß einzelne Magnetpartikel mit abgesaugt werden; hieraus resultiert eine hohe Fehlerquote. Weitere Fehler können durch herabtropfende Flüssigkeiten verursacht werden, die zu Kreuzkontaminationen führen.
In DE 100 57 396 CI wird ein MagnetSeparator vorgeschlagen, der eine Vielzahl von drehbaren Stäben aufweist, die durch eine elektromagnetische Erregerspule magnetisiert werden können. Durch Eintauchen des Stabes in die Magnetpartikel enthaltende Flüssigkeit und Herausziehen des Stabes im mag- netisierten Zustand können die Magnetpartikel aus der Flüssigkeit entfernt werden und gegebenenfalls in ein weiteres Reaktionsgefäß überführt werden. Dort können sie durch Abschalten der Erregerspule wieder in eine Flüssigkeit freigesetzt werden, beispielsweise in eine Wasch- oder Eluti- onsflüssigkeit.
Nachteilig ist bei dieser Vorrichtung, daß das von der Erregerspule erzeugte magnetische Feld nicht ausreichend homogen ist, so daß die einzelnen Stäbe - abhängig von ihrer Position innerhalb der ringförmigen Erregerspule - unterschiedlich stark magnetisiert werden. Dieser Nachteil tritt insbesondere dann hervor, wenn eine große Anzahl von Stäben benötigt wird. Außerdem hat die Ξrregerspule einen relativ hohen Platzbedarf, woraus sich konstruktive Einschränkungen ergeben.
Die bekannten Vorrichtungen sind vor allem nicht für die gleichzeitige Behandlung von größeren Anzahlen von Proben geeignet, wie dies für Hochdurch atz-Anwendungen erforderlich ist (z. B. Mikrotiterplatten mit 364 oder 1536 wells) .
Der Erfindung lag deshalb die Aufgabe zugrunde, Vorrichtungen und Verfahren bereitzustellen, mit denen die Abtrennung von Magnetpartikeln aus Flüssigkeiten und das Überführen von Magnetpartikeln aus einer Flüssigkeit in eine andere Flüssigkeit ermöglicht wird, ohne daß dabei die vorstehend genannten Nachteile auftreten. Insbesondere sollen die Vorrichtungen und Verfahren für die Anwendung bei Hochdurchsatzverfahren geeignet sein.
Diese und weitere Aufgaben werden überraschenderweise durch eine Vorrichtung gemäß Hauptanspruch sowie durch Verfahren gemäß Anspruch 24-27 gelöst, sowie durch die in den abhängigen Ansprüchen beschriebenen Ausführungsformen. Demnach zeichnen sich die erfindungsgemäßen Vorrichtungen zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln aus einer Flüssigkeit durch folgende Merkmale aus:
- die Vorrichtungen weisen zwei Schenkel aus einem weichmagnetischen Werkstoff auf; diese bilden - gegebenenfalls zusammen mit weiteren Komponenten - einen magnetischen Kreis;
- zwischen den beiden Polen der Schenkel ist ein Luftspalt vorhanden, der zur Aufnahme eines Behälters oder einer Vielzahl von Behältern geeignet ist;
- an dem einen der beiden Pole ist ein Kopfstück fest oder lösbar angeordnet; an dem Kopfstück ist/sind in vertikaler Richtung ein magnetisierbarer Stab oder eine Vielzahl derartiger Stäbe fest oder beweglich angebracht;
- an mindestens einer Stelle der Vorrichtung ist ein Permanentmagnet, oder eine Gruppe von mindestens zwei Permanentmagneten, beweglich angeordnet; die Anordnung ist dergestalt, daß ein Magnetfeld zwischen den beiden Polen erzeugbar ist und das Magnetfeld durch Bewegung des/der Magneten eingeschaltet oder ausgeschaltet werden kann;
- derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die bewegliche (n) Magnet (e) im magnetischen Kreis (Ξisenkreis) angeordnet ist/sind, ist zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material umgeben.
Die beiden Schenkel sind aus einem weichmagnetischen Magnetwerkstoff, beispielsweise aus Weicheisen (insbesondere Fe-Ni-Legierungen) oder magnetisierbarem Stahl hergestellt. Ihr Querschnitt kann beispielsweise quadratisch, rechteckig, kreisrund oder oval sein; die Größe der Querschnittsfläche hängt von der gewünschten Querschnittsfläche des Magnetfeldes ab und kann beispielsweise 20 bis 100 cm2 betragen. Ferner ist es möglich, die Schenkel an einem Rah- men oder Gehäuse aus nichtmagnetisierbarem Material zu befestigen.
Die beiden Schenkel sind im allgemeinen übereinander angeordnet, wobei sich der das Kopfstück tragende Schenkel sich über demjenigen Bereich des anderen Schenkels befindet, der für die Aufnahme der Flüssigkeitsbehälter (d. h. der Probengefäße) bestimmt ist.
Das Kopfstück kann lösbar angeordnet sein, wodurch beispielsweise das Auswechseln von Kopfstücken mit unterschiedlichen Anzahlen oder Arten (Länge, Durchmesser; fest oder beweglich) von magnetisierbaren Stäben ermöglicht wird. Die Anzahl der Stäbe hängt von der Anzahl der Proben bzw. Flüssigkeitsbehälter ab, die gleichzeitig behandelt werden sollen. Bevorzugt werden als Behälter Mikrotiter- platten, insbesondere mit 96, 384 oder 1536 Vertiefungen ("wells") verwendet, so daß für diese Fälle entsprechende Kopfstücke mit beispielsweise 96, 384 oder 1536 magnetisierbaren Stäben vorgesehen sind. Weiterhin kommen als Behälter auch Probenröhrchen oder Reaktionsgefäße mit einem Volumen von beispielsweise 0,015 bis 100 ml in Betracht, die einzeln oder in Gruppen behandelt werden können, jeweils in Kombination mit daran angepaßten magnetisierbaren Stäben.
Die Stäbe, wahlweise auch das Kopfstück, sind ebenfalls aus einem weichmagnetischen Material gefertigt, wie oben beschrieben. Ihre Länge und ihr Durchmesser richten sich nach dem beabsichtigten Anwendungszweck, insbesondere nach den Dimensionen der Behälter und den Flüssigkeitsvolumina, und können entsprechend variiert werden. Ferner ist vorgesehen, daß über die Stäbe jeweils eine abstreifbare, auswechselbare Umhüllung aufgesteckt wird, um Kreuzkontaminationen zwischen verschiedenen Flüssigkeitsproben zu vermeiden. Hierfür wird vorzugsweise eine beson- dere Vorrichtung vorgesehen, welche das automatische Abwerfen der gebrauchten Hüllen und die Bereitstellung und das Anbringen neuer Hüllen ermöglicht.
Durch die Anordnung eines Permanentmagneten, der auch aus mehreren einzelnen Magneten zusammengesetzt sein kann, wird zwischen den Polen der Schenkel ein im wesentlichen homogenes Magnetfeld erzeugt. Dadurch wird die Anordnung einer größeren Anzahl von Stäben, beispielsweise in mehreren Reihen, ermöglicht, wobei das magnetische Feld an jedem der Stäbe annähernd gleich groß ist; dies ist dies insbesondere im Hinblick auf Hochdurchsatzverfahren von Vorteil. Die erfindungsgemäßen Vorrichtungen haben des weiteren den Vorteil, daß sich die Magnetpartikel - im eingeschalteten Zustand - im wesentlichen an der Spitze der Stäbe ansammeln.
Erfindungsgemäß ist/sind die Permanentmagneten relativ zum magnetischen Kreis der Vorrichtung beweglich angeordnet, so daß das Magnetfeld zwischen den Polen durch Bewegung des/ der Magneten abwechselnd ein- bzw. ausgeschaltet werden kann. Der/die Magnet (e) wird/werden dazu im Magnetkreis oder in diesen hinein bzw. wieder aus dem Magnetkreis heraus bewegt.
Das heißt, daß das Magnetfeld zwischen den Polen eingeschaltet ist, wenn sich der/die Permanentmagnet (e) in einer ersten Position befindet/befinden, und daß das Magnetfeld zwischen den Polen abgeschaltet ist, wenn sich der/die Permanentmagnet (e) in einer zweiten Position befindet/ befinden. In der genannten zweiten Position befindet/befinden sich der/die Magnet (e) vorzugsweise außerhalb des magnetischen Kreises.
Das Magnetfeld kann vorzugsweise in der Weise ein- bzw. ausgeschaltet werden, daß der/die Magnet (e) innerhalb des Ξisenkreises (magnetischen Kreises) bewegt werden (z. B. durch Rotation), oder daß der/die Magnet (e) von außen her in den magnetischen Kreis hineinbewegt wird/werden ("Einschalten" ) und danach wieder nach außen bewegt wird/werden ("Ausschalten") .
Durch die Möglichkeit, das Magnetfeld ein- bzw. auszuschalten, kann die Vorrichtung dazu verwendet werden, magnetische Partikel mit Hilfe der magnetisierbaren Stäbe aus einer ersten Flüssigkeit zu entfernen und in eine zweite oder weitere Flüssigkeit zu überführen und dort wieder freizusetzen. Ferner wird es dadurch ermöglicht, die Stäbe zusätzlich für andere Funktionen zu nutzen, beispielsweise als Rührstäbe.
Zur Herstellung der Permanentmagnete können grundsätzlich alle dem Fachmann bekannten hartmagnetischen Materialien verwendet werden, insbesondere Ferrite, Al-Ni-Co-Legierun- gen und Seltenerd-Magnete (vorzugsweise NdFeB) ; derartige Magnetwerkstoffe und Magnete sind von verschiedenen Herstellern kommerziell erhältlich.
Derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die beweglichen Magnet (e) im Ξisenkreis angeordnet ist/sind, ist zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material umgeben.
Als abschirmendes Material kann ein weichmagnetisches Material verwendet werden oder/und ein dem Fachmann bekanntes, magnetische Felder abschirmendes Material, wie z. B. Weißblech oder Mumetall. Dieses abschirmende Material wird in der Weise um den/die beweglichen Magneten herum angeordnet, daß im ausgeschalteten Zustand keine magnetischen Kräfte auf die im Luftspalt des Magnetkreises befindlichen Probenflüssigkeitsbehälter wirken können.
Besonders bevorzugt ist eine Abschirmung, die den Bereich, in dem der/die Permanentmagnet (e) angeordnet sind, vollständig umgibt. Insbesondere kann hierfür ein Kurzschlußring ausgebildet sein. Die Vorrichtung ist vorzugsweise so eingerichtet, daß derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die beweglichen Magnet (e) im Ξisenkreis angeordnet ist/sind, im Falle einer Bewegung des/der Magneten im Eisenkreis oder in diesen hinein zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material umgeben ist.
Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform sind die beiden Schenkel der Vorrichtung an der den beiden Polen gegenüberliegenden Seite durch ein ebenfalls magnetisierbares (weichmagnetisches) Material miteinander verbunden, so daß ein magnetischer Kreis oder ein Magnetisierungsring gebildet wird, der - mit Ausnahme des Luftspaltes zwischen den Polen - vollständig geschlossen ist.
Der/die bewegliche(n) Permanentmagnet (e) ist/sind vorzugsweise zwischen den beiden Schenkeln und an deren anderem Ende (d. h. den Polen gegenüberliegend) angeordnet. Falls die beiden Schenkel, wie beschrieben, miteinander verbünd- nen sind, dann wird/werden der/die Permanentmagnet (e) vorzugsweise in oder an dem die beiden Schenkel verbindenden Bereich angebracht. Bevorzugt ist/sind der/die Magnet (e) in einer dafür vorgesehenen Aussparung in einem der Schenkel oder in dem die beiden Schenkel verbindenden Teilstück beweglich eingebaut.
Um eine Bewegung des/der Permanentmagneten zum Ein- und Ausschalten des Magnetfeldes zu ermöglichen, kann der Magnet, oder eine Gruppe von mehreren Magneten, drehbar oder kippbar in einer dafür vorgesehenen Aussparung angeordnet werden. Durch Drehen oder Kippen kann der Magnet in eine Position gebracht werden, in der seine Pole bzw. sein Magnetfeld in Richtung des magnetischen Kreises bzw. in Richtung auf die Schenkel weisen (eingeschalteter Zustand, maximale Feldstärke zwischen den Polen der Schenkel) , oder der Magnet kann in eine andere Position gebracht werden, in der das von ihm ausgehende Magnetfeld im wesentlichen senkrecht zu der genannten Richtung steht (ausgeschalteter Zustand) . Der Magnet/die Magnete kann/können auch in dazwischenliegende Positionen gedreht oder gekippt werden, um zu erreichen, daß die Feldstärke zwischen den Polen der Schenkel einen geringeren als den maximalen Wert hat.
Alternativ ist es auch möglich, den/die Magnet (en) verschiebbar anzubringen, so daß der/die Magnet (e) durch Verschieben in den Magnetkreis hineingebracht werden können (Einschalten) oder wieder aus diesem entfernt werden können (Ausschalten) .
Die Bewegung (z. B. Kippen, Drehen, Verschieben) kann entweder direkt oder indirekt von Hand oder mittels einem oder mehrerer Elektromotoren erfolgen, oder durch pneumatische oder hydraulische Mittel; auch Kombinationen der genannten Mittel sind möglich. Die Antriebseinrichtungen können weitere, dem Fachmann bekannte Mittel, wie z. B. Gestänge oder Getriebe umfassen.
Nach einer bevorzugten Ausführungsform ist vorgesehen, daß das Ausmaß der Bewegung des/der Permanentmagneten vorherbestimmbar ist. Auf diese Weise läßt sich die magnetische Feldstärke, abhängig vom jeweiligen Anwendungszweck, auf einen bestimmten Wert einstellen. Dies kann insbesondere dadurch erreicht werden, daß ein bestimmter Kipp- oder Drehwinkel oder eine bestimmte Verschiebungsstrecke vorgegeben und eingehalten wird.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist vorgesehen, daß das die magnetisierbaren Stäbe tragende Kopfstück bewegbar angebracht ist. Insbesondere kann das Kopfstück in der horizontalen Ebene bewegbar sein. Vorzugsweise sind dann Antriebsmittel (z. B. elektrisch, pneumatisch, hydraulisch), Getriebe, Gestänge und dgl. mit dem Kopfstück verbunden, so daß das Kopfstück zur steuerbaren Ausführung von Schüttel- bewegungen geeignet ist (z. B. kreisförmige Bewegungen oder Bewegungen nach Art eines Orbitalschüttlers) .
Ferner wird bevorzugt, daß der/die genannte(n) magnetisier- bare(n) Stab/Stäbe drehbar (um ihre Längsachse) an dem jeweiligen Kopfstück angebracht sind und während der Behandlung einer magnetpartikelhaltigen Flüssigkeit in Rotation versetzt werden können, um eine Durchmisσhung zu bewirken oder um das Ablösen der Partikel von den Stäben zu beschleunigen. Die Rotation erfolgt vorzugsweise durch elektromotorische Mittel.
Zur Abtrennung von Magnetpartikeln werden Flüssigkeiten, die solche Partikel enthalten, in den Luftspalt der Vorrichtung, unterhalb der magnetisierbaren Stäbe, eingebracht, wobei Behälter der eingangs erwähnten Art verwendet werden können. Vorzugsweise ist hierfür mindestens eine Haltevorrichtung vorgesehen, die unterhalb der Stäbe positionierbar ist, so daß die Stäbe auf die Öffnungen der Behälter hin ausgerichtet werden. Diese Haltevorrichtung kann beispielsweise in Form einer Halteplatte ausgestaltet sein.
Des weiteren werden Ausführungsformen bevorzugt, bei denen die Haltevorrichtung in einer im wesentlichen horizontalen Ebene in einer oder mehreren Richtungen bewegbar ist; alternativ oder zusätzlich kann die Haltevorriσhtung in vertikaler Richtung bewegbar sein. Die Bewegung erfolgt vorzugsweise durch elektromotorischen Antrieb oder durch pneumatische oder hydraulische Mittel, oder durch Kombinationen dieser Mittel.
Insbesondere können die Haltevorrichtungen auch in der Weise ausgebildet sein, daß sie zur Durchführung von Schüttelbewegungen geeignet sind. Die hierfür erforderlichen konstruktiven Maßnahmen sind dem Fachmann grundsätzlich be- kannt. Ferner ist vorgesehen, daß sowohl das Kopfstück als auch die Haltevorrichtung bewegbar und zur Durchführung von Schüttelbewegungen verwendet werden können. Auf diese Weise ist eine besonders wirksame Durchmischung der Probenflüssigkeit möglich, wenn die Stäbe darin eingetaucht sind.
Des weiteren wird bevorzugt, daß eine Steuer- oder Regel- Vorrichtung vorhanden ist, durch welche die vertikale Bewegung der Haltevorrichtung(en) in der Weise einstellbar oder steuerbar ist, daß bei einer Aufwärtsbewegung ein Eintauchen der Stäbe (7) in die flüssigkeitsgefüllten Behälter (10) bewirkt wird.
Insbesondere kann die genannte Haltevorrichtung Bestandteil eines programmgesteuerten Laborroboter-Systems sein, wobei sie vorzugsweise so eingerichtet ist, daß eine Vielzahl von einzelnen der genannten Behälter oder von Gruppen solcher Behälter, insbesondere Mikrotiterplatten, abwechselnd in eine Position unterhalb der genannten Stäbe gebracht und anschließend nach einem vorherbestimmbaren Zeitintervall wieder in eine Position gebracht wird, die außerhalb des unterhalb der Stäbe befindlichen Bereiches liegt. Auf diese Weise wird ein hoher Probendurchsatz ermöglicht.
Nach einer weiteren, besonders bevorzugten Au führungsform der Erfindung ist vorgesehen, daß der Vorrichtung ein programmgesteuerter Rechner zugeordnet und mit ihr verbunden ist. Dadurch kann mindestens eine der nachfolgenden Funktionen der Vorrichtung gesteuert oder geregelt werden, oder es können mindestens zwei der nachfolgend genannten Funktionen miteinander koordiniert werden: - Bewegung des/der Permanentmagneten zum Ein- und Ausschalten des magnetische Feldes, insbesondere Zeitdauer der Einschalt- und Ausschaltphasen, sowie magnetische Feldstärke; - Rotationsgeschwindigkeit und -Dauer im Falle rotierbarer Stäbe;
- Bewegung des Kopfes in horizontaler Ebene, insbesondere Dauer, Frequenz und Amplitude einer Schüttelbewegung;
- Bewegung des/der Haltevorrichtung(en) , um Behälter oder Gruppen von Behältern abwechselnd unterhalb der Stäbe zu positionieren und anschließend wieder aus dieser Position zu entfernen, insbesondere Geschwindigkeit und Frequenz der Bewegungen, sowie Verweildauer der Haltevorrichtung unterhalb der Stäbe;
- vertikale Bewegung der Haltevorrichtung, um den Stab/die Stäbe in die Flüssigkeit des/der Behälter einzutauchen und wieder daraus zu entfernen; insbesondere Eintauchtiefe, Dauer und Frequenz;
- sofern vorgesehen, Rotations- oder Schüttelbewegung der Haltevorrichtung(en) , insbesondere Rotationsgeschwindigkeit, -Amplitude und Intervalle zwischen einzelnen Arbeitsphasen.
Die erfindungsgemäßen Vorrichtungen können auf vorteilhafte Weise mit anderen Vorrichtungen zur automatisierten Behandlung von Probenmaterial kombiniert werden. Des weiteren können auch zwei oder mehrere der erfindungsgemäßen Vorrichtungen nebeneinander angeordnet und kombiniert werden.
Die Erfindung erstreckt sich deshalb auch auf Vorrichtungen der vorstehend beschriebenen Art, welchen eine oder mehrere der nachfolgend genannten Einrichtungen zugeordnet sind, deren Funktionen durch eine gemeinsame Steuerung mit den Funktionen der Vorrichtung koordiniert werden:
- eine oder mehrere thermostatisierbare Heiz- oder Kühleinrichtungen;
- eine oder mehrere Pipettierstationen zum Hinzudosieren von Flüssigkeiten, insbesondere Reagenzien;
- eine oder mehrere Saugeinrichtungen zum Absaugen von Flüssigkeit aus den Behältern; - eine oder mehrere Einrichtungen zum Schütteln oder Durchmischen der in den Behältern enthaltenen Flüssigkeiten;
- analytische Geräte, insbesondere für photometrische Messungen oder Lumineszenzdetektion.
Die Erfindung umfaßt ferner Verfahren zum Abtrennen einer Zielsubstanz aus einem in flüssiger Form vorliegenden Stoffgemisch. Diese Verfahren weisen im allgemeinen folgende Schritte auf: a) Zugabe von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln, welche spezifische Bindungseigenschaften in Bezug auf die Zielsubstanz aufweisen; b) Einbringen eines vorgegebenen Volumen des Gemisches in den Luftspalt zwischen den zwei Polen eines magnetischen Kreises und Eintauchen eines magnetisierbaren Stabes in das Gemisch, wobei der Stab mit einem der Pole des magnetischen Kreises verbunden ist und das magnetische Feld zunächst ausgeschaltet ist; c) Einschalten des magnetischen Feldes durch Veränderung der Position eines im oder am magnetischen Kreis angeordneten Dauermagneten, wodurch der Stab magnetisiert wird und die Partikel sich im wesentlichen am unteren Ende des Stabes ansammeln; anschließend wird der Stab mit den anhaftenden Partikeln aus dem ersten Flüssigkeitsgemisch herausgenommen; d) Eintauchen des Stabes mit den anhaftenden Partikeln in ein vorgegebenes Volumen einer Flüssigkeit, welche Elu- tion der Zielsubstanz von den Partikeln bewirkt; e) Herausheben des Stabes aus der Elutionsflüssigkeit, wobei die Partikel an dem Stab haften bleiben und so aus der Flüssigkeit abgetrennt werden.
Zur Verbesserung der Reinheit und Ausbeute kann es vorteilhaft sein, die Partikel im Anschluß an Schritt d durch Ausschalten des magnetischen Feldes in die Flüssigkeit freizusetzen, diese zu durchmischen, und anschließend durch Ein- schalten des Magnetfeldes wieder an den Stäben zu sammeln. Das Durchmischen kann beispielsweise durch Rotation der Stäbe oder durch Schütteln der Haltevorrichtung oder/und des Kopfteils bewirkt werden.
Ferner kann das beschriebene Verfahren wahlweise einen oder mehrere Wasch-Vorgänge enthalten; ein solcher Wasch-Vorgang kann sich beispielsweise an Schritt c) anschließen und wie folgt ablaufen:
- Eintauchen des Stabes mit den anhaftenden Partikeln in ein vorgegebenes Volumen einer Waschflüssigkeit;
- Ausschalten des magnetischen Feldes durch entgegengesetzte Veränderung der Position des Dauermagneten, wodurch die Partikel in die Flüssigkeit freigesetzt werden;
- Mischen;
- Einschalten des magnetischen Feldes durch Veränderung der Position eines im oder am magnetischen Kreis angeordneten Dauermagneten, wodurch der Stab magnetisiert wird und die Partikel sich im wesentlichen am unteren Ende des Stabes ansammeln;
- Herausheben des Stabes aus der Waschflüssigkeit;
- Elution der Zielsubstanz, wie in den Schritten d) und e) .
Durch Verwendung einer der oben beschriebenen erfindungsgemäßen Vorrichtungen können die genannten Verfahren auf besonders einfache und schnelle Weise durchgeführt werden. Die erfindungsgemäßen Vorrichtungen und Verfahren eignen sich in besonders vorteilhafter Weise für die eingangs erwähnten Anwendungsgebiete, insbesondere für Hochdurchsatz- Methoden.
Die Erfindung wird nachfolgend anhand der beigefügten schematischen Zeichnungen beispielhaft erläutert. Die verwendeten Bezugszeichen haben in allen Zeichnungen dieselbe Bedeutung, sofern nicht anders angegeben. Da es sich ledig- lieh um schematische Darstellungen handelt, können die tatsächlichen Größenverhältnisse hiervon abweichen.
Fig. 1A und 1B zeigen eine Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Vorrichtung in einer Seitenansicht. Die Vorrichtung (1) weist zwei magnetisierbare Schenkel (2,3) eines magnetischen Kreises auf, wobei die Schenkel im Bereich (6) miteinander verbunden sind. Am gegenüberliegenden Ende der Schenkel befinden sich die beiden Pole (4,5) mit einem dazwischen liegenden Luftspalt (12) . Der Pol (4) des oberen Schenkels (2) trägt ein Kopfstück (8) mit daran angebrachten magnetisierbaren Stangen (7) . Unterhalb der Stangen befindet sich eine Haltevorrichtung (11), die mit dem Pol (5) des anderen Schenkels (3) verbunden ist oder zumindest in Kontakt mit diesem steht. Auf der Haltevorrichtung ist ein Probenbehälter (9) mit mehreren Vertiefungen (10) zur Aufnahme von Flüssigkeitsproben angeordnet, beispielsweise wiederablösbar auf der Haltevorrichtung (11) fixiert.
Auf der dem Luftspalt (12) gegenüberliegenden Seite ist in dem die beiden Schenkel verbindenden Bereich (6) eine Aussparung (16) vorhanden, in der ein stab- oder quaderförmi- ger Dauermagnet (15) drehbar angeordnet ist. Um den Bereich des Dauermagneten ist ein Kurzschlußring (20) angeordnet (dieser ist im Bereich des drehbaren Magneten durchbrochen dargestellt) . Fig. 1A zeigt die Vorrichtung im ausgeschalteten Zustand; die Lage des Dauermagneten (15) ist im wesentlichen senkrecht zur Richtung des magnetischen Kreises; das magnetische Feld des Dauermagneten wird in den Kurzschlußring (20) geleitet.
Fig. 1B zeigt dieselbe Vorrichtung im eingeschalteten Zustand. Die Lage des Dauermagneten (15) zeigt im wesentlichen in die Richtung des magnetischen Kreises. Dadurch wird zwischen den Polen (4,5) und somit auch an den Enden der Stäbe (7) ein Magnetfeld erzeugt, das zur Anziehung von Magnetpartikeln verwendet werden kann.
Fig. IC zeigt eine Sσhnittdarsteilung der in den Fig. 1A/B gezeigten Vorrichtung, in der durch die gestrichelte Linie a (Fig. 1B) angedeuteten Ebene. Die Pfeile (17) zeigen schematisch die Richtung des Magnetfeldes im eingeschalteten Zustand an.
Die Fig. ID und 1Ξ zeigen, ebenfalls in schematischer Seitenansicht, eine weitere Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtungen, wobei der verwendete Magnet eine flache Quader-Form aufweist und die Pole sich an den beiden großen Seitenflächen befinden. In Fig. ID ist der eingeschaltete Zustand (das Magnetfeld verläuft in Richtung des Eisenkreises), in Fig. IE der ausgeschaltete Zustand dargestellt. Die Position des Kurzschlußringes (20) ist lediglich angedeutet. Die weiteren, in Fig. 1A, 1B gezeigten Elemente sind zur Vereinfachung der Darstellung weggelassen worden.
Fig. 2 und Fig. 3 zeigen, ebenfalls in Seitenansicht, weitere Konstruktionsvarianten der erfindungsgemäßen Vorrichtungen.
Fig. 4 zeigt die Vorrichtung (1) der Fig. 1A/B in Draufsicht; dadurch ist die ringförmige Gestalt des Kurzschlußringes (20) zu erkennen. Bei der gezeigten Ausführungsform ist der Kurzschlußring (20) so gestaltet, daß er nicht vollständig am Magnetkreis anliegt, sondern ein Hohlraum (22) vorhanden ist. Dadurch wird der Zugang zu dem drehbaren Magneten (15) erleichtert bzw. ermöglicht. Der Kurzschlußring (20) kann aus zwei Hälften (20a, 20b) oder mehreren Teilen zusammengesetzt sein, wie durch die gestrichelte Linie 21 angedeutet, um die Montage und Demontage zu erleichtern. Fig. 5 zeigt eine Aus ührungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung (ebenfalls in Seitenansicht), bei der in der Aussparung (16) ein verschiebbarer (Doppelpfeil) Dauermagnet (15) vorgesehen ist. Fig. 5 zeigt den eingeschalteten Zustand, in welchem der Dauermagnet bewirkt, daß zwischen den Polen (4,5) ein Magnetfeld entsteht. Zum Ausschalten wird der Magnet aus dem magnetischen Kreis der Vorrichtung (1) nach außen verschoben.
Fig. 6 zeigt eine Abwandlung der in Fig. 1A/B dargestellten Vorrichtung, wobei die beiden Schenkel (3,4) unterschiedlich lang sind.
Die Fig. 7A bis 7D zeigen verschiedene Ansichten einer besonders bevorzugten Ausführungsform, bei der ein Magnet (15) auf einer Unterlage (40) angeordnet ist, die in einer horizontalen Ebene um die Achse Y drehbar ist. Dadurch kann der Magnet (15) durch Rotation der Unterlage (40) in den magnetischen Kreis (Eisenkreis) hineingebracht werden (eingeschalteter Zustand, Fig. 7C, 7D) oder aus dem Bereich des magnetischen Kreises herausbewegt werden (Fig. 7A, 7B) . Der in diesen Abbildungen (Fig. 7A bis 7D) nicht dargestellte Kurzschlußring (20) weist im Bereich der Unterlage (40) eine passende Aussparung auf, oder das abschirmende Material ist auf dieser Seite der Vorrichtung nicht vollständig ausgebildet. Die Unterlage (40) ist vorzugsweise in Form einer Drehscheibe oder auch als drehbarer Arm ausgebildet, die/der mittels bekannter Antriebsvorrichtungen bewegt wird. Auf der Unterlage können optional auch zwei oder mehrere Magnete angebracht sein. Fig. 7A, 7C zeigen eine Sσhnittdarstellung in der Fläche der Drehachse Y; die Fig. 7B, 7D zeigen jeweils dieselbe Vorrichtung in Draufsicht. Fig. 8 zeigt eine Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung (1) in Seitenansicht; in diesem Fall sind die beiden Schenkel (2,3) nicht durch einen gemeinsamen Bereich (6) miteinander verbunden. Der drehbare Magnet (15) ist zwischen den beiden Schenkeln (2,3) angeordnet, auf der dem Luftspalt gegenüberliegenden Seite. Der Kurzschlußring (20) ist in Schnittdarstellung abgebildet.
Fig. 9 zeigt die Vorderansicht des oberen Schenkels (4) einer erfindungsgemäßen Vorrichtung mit dem Kopfstück (8) und daran angebrachten Stäben (7). Unterhalb der Stäbe ist eine Haltevorrichtung (8) positioniert, auf der mehrere Behälter (10) in Reihen angeordnet sind. Die Haltevorrichtung läßt sich in der horizontalen Ebene in verschiedene Richtungen sowie nach oben und unten bewegen (Pfeile) .
Fig. 10 (a-d) zeigt im Längsschnitt Beispiele für verschiedene Formen der magnetisierbaren Stäbe (7) . Die unter dem Einfluß des Magnetfeldes angezogenen Partikel sind mit (30) bezeichnet. Fig. 9d zeigt einen Stab, der mit einer auswechselbaren Hülle (25) versehen ist.

Claims

Ansprüche
1. Vorrichtung zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln (30) aus einer Flüssigkeit unter Verwendung eines Magnetfeldes, wobei
- die Vorrichtung (1) zwei Schenkel (2,3) aus einem weich- magnetischen Werkstoff aufweist;
- zwischen den beiden Polen (4,5) der Schenkel (2,3) ein Luftspalt (12) vorhanden ist, der zur Aufnahme eines Behälters oder einer Vielzahl von Behältern (9,10) geeignet ist;
- an dem einen der beiden Pole (4) ein Kopfstück (8) fest oder lösbar angeordnet ist, an dem in vertikaler Richtung ein magnetisierbarer Stab oder eine Vielzahl derartiger Stäbe (7) fest oder beweglich angebracht ist/sind;
- an mindestens einer Stelle der Vorrichtung ein Permanentmagnet (15), oder eine Gruppe von mindestens zwei Permanentmagneten, beweglich angeordnet ist, dergestalt, daß ein Magnetfeld (17) zwischen den beiden Polen (4,5) erzeugbar ist und das Magnetfeld durch Bewegung des/der Magneten (15) eingeschaltet oder ausgeschaltet werden kann, und wobei
- derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die beweglichen Magnet (e) angeordnet ist/sind, zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material (20) umgeben ist.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die beiden Schenkel (2,3) an der den Polen (4,5) gegenüberliegenden Seite (6) miteinander verbunden sind und dadurch einen magnetischen Kreis (Ξisenkreis) bilden.
3. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der/die Magnet (e) innerhalb des Eisenkreises bewegbar, insbesondere drehbar, angeordnet ist/sind, oder daß der/die Magnet (e) so angeordnet ist/sind, daß er/sie von außen her in den magnetischen Kreis hineinbewegt und wieder aus diesem heraus bewegt werden kann/können.
4. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die beweglichen Magnet (e) im Eisenkreis angeordnet ist/sind, zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material umgeben ist.
5. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß derjenige Bereich der Vorrichtung, in welchem der/die beweglichen Magnet (e) im Eisenkreis angeordnet ist/sind, im Falle einer Bewegung des/der Magneten im Eisenkreis oder in diesen hinein zumindest teilweise von einem das magnetische Feld abschirmenden Material umgeben ist.
6. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der/die Permanentmagnet (e) in einer dafür vorgesehenen Aussparung (16) drehbar oder kippbar angeordnet ist/sind.
7. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der/die Permanentmagnet (e) ein einer dafür vorgesehenen Aussparung (16) verschiebbar angeordnet ist/sind.
8. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der/die Permanentmagnet (e) auf einer drehbaren Unterlage (40) angeordnet sind, mittels welcher der/die Permanentmagnet (e) in den magnetischen Kreis hinein und wieder aus diesem herausbewegt werden können.
9. Vorrichtung nach einem vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Bewegung des/der Permanent- magneten mittels Elektromotor oder durch pneumatische oder hydraulische Mittel erfolgt.
10. Vorrichtung nach einem vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Ausmaß der Bewegung, insbesondere der Drehwinkel oder die Verschiebungsstrecke, des/der Permanentmagneten vorherbestimmbar ist, um die magnetische Feldstärke auf einen gewünschten Wert einzustellen.
11. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet-■ daß derjenige Bereich des magnetischen Kreises, in welchem der/die beweglichen Magnet (e) angeordnet ist/sind, vollständig von einem das magnetische Feld abschirmendem Material umgeben ist, wobei diese Abschirmung vorzugsweise als Kurzschlußring (20) ausgebildet ist.
12. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Kopfstück (8) in der horizontalen Ebene bewegbar ist, vorzugsweise zur Ausführung von Schüttelbewegungen.
13. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das genannte Kopfstück (8) eine Vielzahl von in Reihen angeordneten magnetisierbaren Stäben (7) trägt.
14. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Kopfstück (8) auswechselbar befestigt ist.
15. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der/die genannte(n) Stab/Stäbe (7) drehbar angeordnet sind und vorzugsweise durch elektro- motorischen Antrieb in Rotation um die Längsachse versetzt werden können.
16. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der/die genannte(n) Stab/Stäbe (7) jeweils mit einer abstreifbaren, auswechselbaren Umhüllung (25) überzogen sind.
17. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Vorrichtung mindestens eine Haltevorrichtung (11) für den/die genannten Behälter (9, 10) zugeordnet ist, die dazu geeignet ist, den/die Behälter unterhalb des genannten Kopfstückes und der daran angebrachten Stäbe zu positionieren.
18. Vorrichtung nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß die Haltevorrichtung(en) in der horizontalen Ebene oder /und vertikal bewegbar ist/sind, vorzugsweise durch elektromotorischen Antrieb oder durch pneumatische oder hydraulische Mittel.
19. Vorrichtung nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß die Haltevorrichtung(en) für die Durchführung von Schüttelbewegungen eingerichtet ist/sind.
20. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 17 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß die Hal evorrichtung(en) Bestandteil eines programmgesteuerten Laborroboter-Systems ist/sind und so eingerichtet ist/sind, daß eine Vielzahl von einzelnen der genannten Behälter oder von Gruppen solcher Behälter, insbesondere Mikrotiterplatten, abwechselnd in eine Position unterhalb der genannten Stäbe gebracht und anschließend nach einem vorherbestimmbaren Zeitintervall wieder in eine Position gebracht werden, die außerhalb des unterhalb der Stäbe befindlichen Bereiches liegt.
21. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 17 bis 20, dadurch gekennzeichnet, daß die vertikale Bewegung der Haltevorrichtung(en) (11) durch eine Steuerungs- oder Regelein- heit in der Weise Steuer- oder regelbar ist, daß bei einer Aufwärtsbewegung ein Eintauchen der Stäbe (7) in die flüssigkeitsgefüllten Behälter (10) bewirkt wird.
22. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß der Vorrichtung ein programmgesteuerter Rechner zugeordnet und mit ihr verbunden ist, durch den mindestens eine der nachfolgenden Funktionen der Vorrichtung gesteuert oder geregelt werden kann, oder durch den mindestens zwei der nachfolgend genannten Funktionen miteinander koordiniert werden können:
- Bewegung des/der Permanentmagneten zum Ein- und Ausschalten des magnetische Feldes, insbesondere Zeitdauer der Einschalt- und Ausschaltphasen, sowie magnetische Feldstärke;
- Rotationsgeschwindigkeit und -Dauer im Falle rotierbarer Stäbe;
- Bewegung des Kopfes in horizontaler Ebene, insbesondere Dauer, Frequenz und Amplitude einer Schüttelbewegung;
- Bewegung des/der Haltevorrichtung(en) , um Behälter oder Gruppen von Behältern abwechselnd unterhalb der Stäbe zu positionieren und anschließend wieder aus dieser Position zu entfernen, insbesondere Geschwindigkeit und Frequenz der Bewegungen, sowie Verweildauer der Haltevorrichtung unterhalb der Stäbe;
- vertikale Bewegung der Haltevorrichtung, um den Stab/die Stäbe in die Flüssigkeit des/der Behälter einzutauchen und wieder daraus zu entfernen; insbesondere Eintauchtiefe, Dauer und Frequenz;
- sofern vorgesehen, Rotations- oder Sσhüttelbewegung der Haltevorrichtung(en), insbesondere Rotationsgeschwindigkeit, -Amplitude und Intervalle zwischen einzelnen Ar- beitsphasen.
23. Vorrichtung nach einem oder mehreren der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß ihr eine oder mehrere der nachfolgend genannten Einrichtungen zugeordnet sind, deren Funktionen durch eine gemeinsame Steuerung mit den Funktionen der Vorrichtung koordiniert werden:
- eine oder mehrere thermostatisierbare Heiz- oder Kühlein- richtungen;
- eine oder mehrere Pipettierstationen zum Hinzudosieren von Flüssigkeiten, insbesondere Reagenzien;
- eine oder mehrere Saugeinrichtungen zum Absaugen von Flüssigkeit aus den Behältern;
- eine oder mehrere Einrichtungen zum Schütteln oder Durchmischen der in den Behältern enthaltenen Flüssigkeiten;
- analytische Geräte, insbesondere für photometrische Messungen oder Lumineszenzdetektion.
24. Verfahren zum Abtrennen einer Zielsubstanz aus einem in flüssiger Form vorliegenden Stoffgemisch, umfassend folgende Schritte: a) Zugabe von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln, welche spezifische Bindungseigenschaften in Bezug auf die Zielsubstanz aufweisen; b) Einbringen eines vorgegebenen Volumen des Gemisches in den Luftspalt zwischen den zwei Polen eines magnetischen Kreises und Eintauchen eines magnetisierbaren Stabes in das Gemisch, wobei der Stab mit einem der Pole des magnetischen Kreises verbunden ist und das magnetische Feld zunächst ausgeschaltet ist; c) Einschalten des magnetischen Feldes durch Veränderung der Position eines im oder am magnetischen Kreis angeordneten Dauermagneten, wodurch der Stab magnetisiert wird und die Partikel sich im wesentlichen am unteren Ende des Stabes ansammeln; d) Eintauchen des Stabes mit den anhaftenden Partikeln in ein vorgegebenes Volumen einer Flüssigkeit, welche Elu- tion der Zielsubstanz von den Partikeln bewirkt; e) Herausheben des Stabes aus der Elutionsflüssigkeit .
25. Verfahren nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß im Anschluß an Schritt d) folgende Schritte durchgeführt werden: f) Ausschalten des magnetischen Feldes durch entgegengesetzte Veränderung der Position des Dauermagneten, wodurch die Partikel in die Flüssigkeit freigesetzt werden; g) Mischen; h) Einschalten des magnetischen Feldes durch Veränderung der Position eines im oder am magnetischen Kreis angeordneten Dauermagneten, wodurch der Stab magnetisiert wird und die Partikel sich im wesentlichen am unteren Ende des Stabes ansammeln; i) Herausheben des Stabes aus der Elutionsflüssigkeit.
26. Verfahren nach Anspruch 24 oder 25, dadurch gekennzeichnet, daß im Anschluß an Schritt c) folgende Schritte durchgeführt werden: k) Eintauchen des Stabes mit den anhaftenden Partikeln in ein vorgegebenes Volumen einer Waschflüssigkeit; 1) Ausschalten des magnetischen Feldes durch entgegengesetzte Veränderung der Position des Dauermagneten, wodurch die Partikel in die Flüssigkeit freigesetzt werden; m) Mischen; h) Einschalten des magnetischen Feldes durch Veränderung der Position eines im oder am magnetischen Kreis angeordneten Dauermagneten, wodurch der Stab magnetisiert wird und die Partikel sich im wesentlichen am unteren Ende des Stabes ansammeln; 1) Herausheben des Stabes aus der Waschflüssigkeit; m) Elution der Zielsubstanz, wie in den Schritten d) und e) des Anspruchs 24 oder wie nach Anspruch 25.
27. Verfahren nach einem der Ansprüche 24 bis 26, dadurch gekennzeichnet, daß es unter Verwendung einer Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 23 durchgeführt wird.
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Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101229997B1 (ko) * 2004-12-22 2013-02-06 톰 헨닝 요한센 고구배 자기장을 형성하는 방법 및 그에 기반한 물질 선별 장치
DE102005004664B4 (de) * 2005-02-02 2007-06-21 Chemagen Biopolymer-Technologie Aktiengesellschaft Vorrichtung und Verfahren und Verwendung zum Abtrennen von magnetischen oder magnetisierbaren Partikeln aus einer Flüssigkeit sowie deren Verwendungen
EP1748295A1 (de) 2005-07-28 2007-01-31 Nederlandse Organisatie voor toegepast-natuurwetenschappelijk Onderzoek TNO System zur Manipulation magnetischer Partikel
CN101356597B (zh) * 2005-09-26 2013-02-06 磁转换技术全球控股有限公司 磁体阵列
AU2006294433B2 (en) * 2005-09-26 2011-06-09 Magswitch Technology Worldwide Pty Ltd Magnet arrays
AU2007224996B2 (en) 2006-03-13 2013-10-24 Magswitch-Technology Worldwide Pty Ltd Magnetic wheel
AU2007278425B2 (en) * 2006-07-28 2011-11-17 Qiagen Gmbh Device for processing samples
EP2033715B1 (de) 2007-08-14 2010-06-23 Qiagen GmbH Verfahren zum Suspendieren oder Resuspendieren von Partikeln in einer Lösung sowie daran angepasste Vorrichtung
DE102007045474A1 (de) 2007-09-21 2009-04-02 Qiagen Gmbh Vorrichtung und Verfahren zum Behandeln von Flüssigkeiten mit magnetischen Partikeln
DE102008047855A1 (de) * 2008-09-18 2010-04-22 Siemens Aktiengesellschaft Trenneinrichtung zur Trennung von in einer durch einen Trennkanal strömenden Suspension transportierten magnetisierbaren und nichtmagnetisierbaren Teilchen
EP2454020B1 (de) * 2009-07-17 2019-05-15 Koninklijke Philips N.V. Vorrichtung und verfahren zur anreicherung von magnetpartikeln
US9660267B2 (en) 2009-09-18 2017-05-23 A123 Systems, LLC High power electrode materials
WO2011035235A1 (en) * 2009-09-18 2011-03-24 A123 Systems, Inc. Ferric phosphate and methods of preparation thereof
US8512558B2 (en) * 2010-02-19 2013-08-20 Roche Molecular Systems, Inc. Magnetic separation system comprising flexible magnetic pins
CN104122127A (zh) * 2014-07-18 2014-10-29 东南大学 一种生物样本处理装置
DE102015218010A1 (de) 2015-09-18 2017-03-23 Hamilton Bonaduz Ag Magnetische Trennvorrichtung mit magnetischer Aktivierung und Deaktivierung
JP6841630B2 (ja) 2015-10-15 2021-03-10 キヤノンメディカルシステムズ株式会社 検体検査装置
US20190022667A1 (en) * 2016-01-19 2019-01-24 Shanxi Zdgsy Bio-Scientific Co., Ltd. Multifunctional biological substance separation device
JP6461869B2 (ja) 2016-03-30 2019-01-30 Ckd株式会社 流路切替弁、及びその製造方法
GB2549496B (en) * 2016-04-19 2020-12-30 Adey Holdings 2008 Ltd Monitoring magnetite buildup in a magnetic filter
EP3532847B1 (de) * 2016-10-31 2022-12-14 Amgen Inc. Reinigungssysteme und -verfahren
US10399048B2 (en) 2017-08-03 2019-09-03 Agilent Technologies, Inc. Sample processing apparatus with integrated heater, shaker and magnet
WO2019069039A1 (en) 2017-10-02 2019-04-11 Adey Holdings (2008) Limited MEASURING THE ACCUMULATION OF MAGNETIC DEBRIS IN A MAGNETIC FILTER
CN107731446A (zh) * 2017-11-16 2018-02-23 北京中科三环高技术股份有限公司 一种开口式永磁装置
JP6955436B2 (ja) 2017-12-25 2021-10-27 Ckd株式会社 電磁アクチュエータ
USD914231S1 (en) 2019-11-20 2021-03-23 Agilent Technologies, Inc. Sample processing apparatus
USD917063S1 (en) 2019-11-20 2021-04-20 Agilent Technologies, Inc. Sample processing apparatus

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE932621C (de) 1936-10-11 1955-09-05 Max Baermann Mit einem Dauermagneten und Weicheisenpolschuhen versehene magnetische Haltevorrichtung
US2904178A (en) * 1956-03-13 1959-09-15 Research Corp Apparatus for collecting magnetic susceptible material
GB1006763A (en) * 1964-04-23 1965-10-06 Mullard Ltd Improvements in and relating to magnetic filters
US3533928A (en) * 1969-04-21 1970-10-13 Inoue K Method of and apparatus for the deburring of workpieces
US3904956A (en) * 1973-02-26 1975-09-09 Brien Kevin C O Alternating force magnetometer
US4272510A (en) * 1976-04-26 1981-06-09 Smith Kendall O Magnetic attraction transfer process for use in solid phase radioimmunoassays and in other assay methods
SE409954B (sv) * 1976-06-11 1979-09-17 Mineral Processing Dev Magnetseparator
JPS6048215B2 (ja) * 1981-01-16 1985-10-25 株式会社井上ジャパックス研究所 磁気フイルタ
US4444398A (en) * 1983-02-22 1984-04-24 Ferrofluidics Corporation Self-activating ferrofluid seal apparatus and method
US4988618A (en) * 1987-11-16 1991-01-29 Gene-Trak Systems Magnetic separation device and methods for use in heterogeneous assays
US4939121A (en) * 1988-10-20 1990-07-03 General Dynamics Corporation, Electronics Division Method and apparatus for inducing grain orientation by magnetic and electric field ordering during bulk superconductor synthesis
JP3339026B2 (ja) * 1994-05-11 2002-10-28 ジェネラ テクノロジーズ リミテッド 液体から種を捕獲する方法及び分析手法
DE4421058A1 (de) * 1994-06-16 1995-12-21 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur magnetischen Abtrennung von Flüssigkeitskomponenten
US5567326A (en) * 1994-09-19 1996-10-22 Promega Corporation Multisample magnetic separation device
DE19528029B4 (de) 1995-07-31 2008-01-10 Chemagen Biopolymer-Technologie Aktiengesellschaft Magnetische Polymerpartikel auf der Basis von Polyvinylalkohol, Verfahren für ihre Herstellung und Verwendung
JPH09248483A (ja) * 1996-03-14 1997-09-22 Inaba Eiko 液体中の不純物の磁気凝集処理装置
DE29614623U1 (de) 1996-08-23 1996-12-19 AGOWA Gesellschaft für molekularbiologische Technologie mbH, 12489 Berlin Magnetseparator zum Trennen und Waschen von paramagnetischen Partikeln sowie zur Elution von Stoffen, welche an die paramagnetischen Partikel gebunden wurden
IL123210A0 (en) * 1998-02-06 1998-09-24 Gombinsky Moshe A device and system for the collection of magnetic particles
US6270666B1 (en) * 1998-07-14 2001-08-07 Toushin Keisoku Corp. Magnetic treatment apparatus for fluids and method for using same
FI20000583A0 (fi) * 2000-03-14 2000-03-14 Labsystems Oy Astia ja sauva
DE10057396C1 (de) 2000-11-18 2002-04-04 Karlsruhe Forschzent Verfahren zum Abtrennen eines dispergierten oder gelösten Stoffes und Magnetseparator
DE10063984A1 (de) * 2000-12-19 2002-06-20 Bilatec Ges Zur Entwicklung Bi Vorrichtungen zur magnetischen Abtrennung von Magnetpartikeln
DE10117659C2 (de) 2001-04-09 2003-07-17 Steinert Gmbh Elektromagnetbau Hochgradienten-Magnetfilter und Verfahren zum Abtrennen von schwach magnetisierbaren Partikeln aus flüssigen Medien

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2005005049A1 *

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DE10331254B4 (de) 2006-05-04
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JP2009513318A (ja) 2009-04-02
US7776221B2 (en) 2010-08-17
CA2531399A1 (en) 2005-01-20
US20070175830A1 (en) 2007-08-02
EP1644120B1 (de) 2011-11-30
ATE535305T1 (de) 2011-12-15
DK1644120T3 (da) 2012-03-19
ES2377733T3 (es) 2012-03-30
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CA2531399C (en) 2012-01-31

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