EP1233815A1 - Verwendung von dopamin-d3-rezeptor-agonisten in der therapie der salzabhängigen hypertonie - Google Patents

Verwendung von dopamin-d3-rezeptor-agonisten in der therapie der salzabhängigen hypertonie

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EP1233815A1
EP1233815A1 EP00975979A EP00975979A EP1233815A1 EP 1233815 A1 EP1233815 A1 EP 1233815A1 EP 00975979 A EP00975979 A EP 00975979A EP 00975979 A EP00975979 A EP 00975979A EP 1233815 A1 EP1233815 A1 EP 1233815A1
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EP
European Patent Office
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salt
rats
dopamine
hypertension
dahl
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Withdrawn
Application number
EP00975979A
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Inventor
Bernd Mühlbauer
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Abbott GmbH and Co KG
Original Assignee
Abbott GmbH and Co KG
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Publication date
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    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
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    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
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    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the present invention relates to the use of dopamine D 3 receptor agonists for the manufacture of a medicament for the diagnosis and treatment of salt-dependent hypertension.
  • salt-dependent hypertension is present in approximately 10 to 15% of cases.
  • the diagnosis has so far been made in such a way that the patients have to follow a low-salt diet for several weeks, which in the case of salt-dependent hypertension results in a reduction in hypertension.
  • all agonists which are selective for this receptor subtype can be considered as dopamine D receptor agonists.
  • Such an agonist is, for example, R (+) -7-hydroxy-2-dipropylamino-tetra-lin (7 OH-DPAT). Those agonists which have high peripheral plasma levels are particularly suitable.
  • the Dahl rat (see Dahl et al., Nature 1962, 194: 480-482) represents an animal model for salt-dependent hypertension.
  • sodium-enriched food can cause hypertension even in adolescence be generated during this effect be the so-called salzre ⁇ sistenten Dahl rats does not occur.
  • Dopamine-D 3 receptor agomes can be used for the diagnosis of salt-sensitive forms of hypertension. This is a
  • D 3 -Agomst to be administered orally or parenterally and to measure urine volume and sodium excretion under standardized conditions.
  • An increase in urine volume and sodium excretion would suggest a normal response; failure to do so would indicate a salt-sensitive form of hypertension.
  • Such a distinction is important for further therapy decisions
  • the D -receptor agones can be processed into customary pharmaceutical dosage forms, for example for peroral, parenteral, subcutaneous, mtrape ⁇ toneal or topical administration.
  • customary pharmaceutical dosage forms for example tablets, capsules, infusion and Injekti ⁇ onsaten, drinking molds or sprays.
  • the pharmaceutical preparations according to the invention contain the usual carriers and diluents in addition to the active ingredient.
  • pharmaceutical-technical auxiliaries such as ethanol, isopropanol, ethoxylated castor oil, ethoxylated hydrogenated castor oil, polyacrylic acid, polyethylene glycol, polyethylene glycostearate, ethoxylated fatty alcohols, paraffin oil, petroleum jelly and wool fat can be used.
  • pharmaceutical-technical auxiliaries such as ethanol, isopropanol, ethoxylated castor oil, ethoxylated hydrogenated castor oil, polyacrylic acid, polyethylene glycol, polyethylene glycostearate, ethoxylated fatty alcohols, paraffin oil, petroleum jelly and wool fat can be used.
  • internal use e.g. Milk sugar, propylene glycol, ethanol, starch, talc and polyvinyl pyrrolidone.
  • Antioxidants such as tocopherol and butylated hydroxyanisole and butylated hydroxytoluene, taste-improving additives, stabilizers, emulsifiers and lubricants can also be present.
  • the substances contained in the preparation in addition to the active substance and the substances used in the manufacture of the pharmaceutical preparation are toxicologically safe and compatible with the respective active substance.
  • the pharmaceutical preparations are prepared in the usual way, e.g. by mixing the active ingredient with the other conventional carriers and diluents.
  • the rats (80 mg / kg body weight; Trapanal®, Byk guilders, Konstanz, DE.) By an intraperitoneal injection of sodium thiopental anesthetized and trium-sheet on a heat table pla ⁇ to a rectal temperature of 37.1 ° C. A tracheostomy was performed to facilitate spontaneous breathing.
  • Two catheters were inserted into the right jugular vein.
  • Ringer's saline solution (111 mmol NaCl, 30 mmol NaHC0 3 , 4.7 mmol KCl) was infused through the first catheter at a rate of 1.5 to 3.0 ml / h, corresponding to 0.8% by weight of the body weight.
  • [ 3 H] inulin (1.2 ⁇ Ci / ml) dissolved in Ringer's solution was infused at a rate of 0.6 ml / h throughout the experiment to determine the glomerular filtration rate.
  • a cannula was inserted into the left carotid artery to take blood samples and to continuously measure systemic blood pressure. Urine samples were taken through a bladder catheter. After the rats have been exposed to each other for a period of 80 to 100 min. had recovered from this procedure, two successive clearance periods of 20 min each. examined to establish the baseline. Then, instead of Ringer's saline solution, a solution of the D3 receptor agonist R (+) - 7-hydroxy-2-dipropyl-aminotetralin, dissolved in Ringer's solution, in two successive doses of 0.01 to 0.1 ⁇ g / kg body weight / min infused. Then Ringer's solution was infused again and after 10 min. a clearance period. During each 20 minute clearance period, a blood sample of 180 ⁇ l was taken after 10 minutes.
  • Renal [ 3 H] inulin clearance was used to determine the glomerular filtration rate (GFR).
  • Mean arterial blood pressure (MAP) and heart rate (HR) were continuously measured during the experiments.
  • MAP mean arterial blood pressure
  • HR heart rate
  • the urine volume was determined gravimetrically.
  • the blood samples were centrifuged and the hematocrit determined.
  • the sodium concentrations in urine and plasma were determined by flame photometry using an ELEX 6361 device from Eppendorf, Hamburg.
  • the 3H inulin radioactivity was determined by liquid phase scanning.
  • Rats were first anesthetized to obtain kidney tissue. Using sterile working material, the kidneys were exposed, removed, weighed and the capsule removed.
  • RNA isolation was carried out according to the method of Chomczynski and Sacchi (1987). The tissue is homogenized and centrifuged in the presence of an acidic phenol / chloroform mixture. The upper aqueous phase contains the RNA. This is cleaned of phenol residues with isopropanol and precipitated with ethanol. This can then be recorded in DEPC-H0 and used in RT-PCR after quantification. All operations were carried out sterile, contamination with RNases was excluded.
  • RNA 500 ng of total RNA were transcribed into complementary DNA (cDNA) in 15 ⁇ l batches.
  • the primers for the subsequent RT-PCR were selected either from the relevant literature or with the aid of published sequences in gene databases and synthesized by MWG-Biotech (Ebersberg).
  • the relative quantification of the D 3 receptor mRNA expression was carried out according to the "primer dropping" method as described by (Wong et al., 1994). In the first stage, the target sequence is amplified over a certain number of cycles, in the second stage the primer pair for the amplification of the "hoppinging gene", in this case beta-actin, is added and the PCR is continued for further cycles.
  • Kidneys from animals of both Dahl strains (DS and DR) after normal and salt-rich diet were homogenized immediately after removal using a potter in buffer solution (TRIS 25 mM / HEPES 40 mM (pH 4.7), sucrose 320 mM, EDTA 0.5 mM) and centrifuged at 1,000 xg for 15 minutes (4 ° C). After discarding the supernatant, the pellet was resuspended with buffer and centrifuged again. The second supernatant was centrifuged at 100,000 x g for 30 minutes (4 ° C). The final pellet was resuspended in buffer without sucrose and EDTA and stored at -80 ° C until binding experiments. Binding studies were carried out with 100 mg membrane protein. Saturation experiments were performed at 0.5 to 50 nM
  • [3H] -7-OH-DPAT carried out, using 10 uM unlabeled 7-OH-DPAT to determine the non-specific binding. Specific binding was calculated by subtracting non-specific from total binding.
  • the dissociation constant (K D ) as an expression of the affinity of the ligand for its receptor was not found to be significantly different and was around 10 nM in both Dahl strains.
  • the specific binding (bmax) was significantly lower in DS compared to DR. The difference became even clearer if the rats were previously fed a salt-rich diet. Here the specific binding in DS rats was only 50% of that in DR animals.
  • Salt-resistant Dahl rats were given a normal diet for one week with the dopamine D3 antagonist 5-amino-3- (4- (4- (2-t-butyl-6-trifluoromethyl) pyrimidin-4-yl) pipe - razin-1-yl) 2-methyl-but-2-en-l-yl-mercapto) -4-methyl -1, 2, 4 (4H) triazole in a dosage of 40 mg / kg per day treated the drinking water.
  • tail plethysmometry was used to measure arterial blood pressure.
  • the animals were then exposed to a salt-rich diet (4% by weight NaCl in the feed) ad libitum. Arterial blood pressure was determined weekly up to 4 weeks after the start of the experiments.

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Abstract

Verwendung von Dopamin-D3-Rezeptor-Agonisten zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnostik und Therapie der salzabhängigen Hypertonie.

Description

Verwendung von Dopamin-D3-Rezeptor-Agonisten in der Therapie der salzabhängigen Hypertonie
Beschreibung
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Dopa- min-D3-Rezeptor-Agonisten zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnostik und Behandlung der salzabhängigen Hypertonie.
Ein Zusammenhang zwischen renaler Dopamin-Rezeptor-Funktion und verschlechterter renaler Natrium-Ausscheidung bei einigen Formen der essentiellen Hypertonie wurde bereits diskutiert, auch wenn die genaue Ursache des renalen Defekts unklar ist (Vgl. T. Hus- sain et al . , Hypertension, 1989, 32:187-197).
Beim Menschen liegt eine salzabhängige Hypertonie in circa 10 bis 15 % der Fälle vor. Die Diagnosestellung erfolgt bislang in der Weise, daß die Patienten für mehrere Wochen eine salzarme Diät einhalten müssen, was bei salzabhängiger Hypertonie eine Senkung des Hypertonus zur Folge hat. Problematisch ist jedoch, daß die Patienten eine solche Diät oft nicht konsequent einhalten, was eine sichere Diagnosestellung erschwert. Auch bei erfolgter Diagnosestellung ist die dauerhafte Einhaltung einer salzarmen Diät durch den Patienten oft nicht gewährleistet.
Es bestand die Aufgabe, Arzneimittel zu finden, die eine einfache Diagnose und Therapie der salzabhängigen Hypertonie ermöglichen. Überraschenderweise wurde gefunden, daß sich Dopamin-D3-Rezeptor- Agonisten zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnostik und Behandlung der salzabhängigen Hypertonie eignen.
Als Dopamin-D -Rezeptor-Agonisten kommen prinzipiell alle für diesen Rezeptor-Subtyp selektiven Agonisten in Betracht. Ein solcher Agonist ist beispielsweise R ( +) -7-Hydroxy-2-dipropylamino-tetra- lin (7 OH-DPAT) . Geeignet sind vor allem solche Agonisten, die hohe periphere Plasmaspiegel aufweisen.
Der Effekt konnte mit Hilfe von verschiedenen Tierexperimenten belegt werden.
Die Dahl-Ratte (Vgl. Dahl et al . , Nature 1962, 194:480-482) stellt ein Tiermodell für salzabhängige Hypertonie dar. Bei den sogenannten salzsensitiven Dahl-Ratten kann durch eine Natrium- angereicherte Nahrung schon im jugendlichen Alter eine Hypertonie erzeugt werden, wahrend dieser Effekt be den sogenannten salzre¬ sistenten Dahl-Ratten nicht eintritt.
Wahrend bei salzresistenten Dahl-Ratten durch Gabe des Dopamin D3- Rezeptor-Agomsten 7 OH-DPAT e ne Steigerung der glomerularen F ltrationsrate, der Natπurese und der Volumenausscheidung er¬ zielt wurde, hatte bei salzsensitiven Dahl-Ratten e ne Verabreichung keinen Einfluß auf renale Funktionen.
Die Bestimmung der Dopamm-D -Rezeptor-m-RNA von salzresistenten Dahl-Ratten und salzsensitiven Dahl-Ratten ergab eine um 60 % ge¬ ringere Expression der m-RNA bei den salzsensitiven Dahl-Ratten im Vergleich zu den salzresistenten Ratten.
Ebenfalls auf etwa 50 % reduziert war die Bmdungsfahigkeit für den radioaktiv markierten selektiven Dopamin D -Lιganden [3H] -7-OH-DPAT m Membranpraparationen von Nieren salzsensitiver Dahl-Ratten im Vergleich zu entsprechenden Praparationen von Nieren salzresistenter Dahl-Ratten
Bei salzresistenten Ratten, die defmitionsgemaß keinen Hyperto- nus entwickeln, wenn sie salzreich ernährt werden, war eine signifikante Erhöhung des arteriellen Blutdruckes zu beobachten, wenn die Tiere unter salzreicher Ernährung subchronisch den se- lektiven Dopamin D3-Rezeptor-Antagonιsten 5-Aπu_no-3- (4- (4- (2-t- Butyl-6-tπfluormethyl ) pyrimidm -4-yl) piperazin -1-yl) 2-methyl- but-2-en-l-yl-mercapto) -4-methyl-l, 2 , 4 (4H) triazol verabreicht erhielten.
Aus diesen Beobachtungen laßt s ch ableiten, daß es die Dopa- mιn-D3-Rezeptoren sind, die bei der Entwicklung der salzabhangigen Hypertonieentscheidend beteiligt sind.
Dopamιn-D3-Rezeptor-Agomsten können zur Diagnostik von salzsens - tiven Formen der Hypertonie verwendet werden. Hierzu ist ein
D3-Agomst oral oder parenteral zu verabreichen und das Urinvolumen und die Natriumausscheidung unter standardisierten Bedingungen zu messen. Ein Anstieg des Harnvolumens und der Natriumausscheidung wurde für eine normale Reaktion sprechen; ein Ausblei- ben dieser Reaktion wurde auf eine salzsensitive Form der Hypertonie hinweisen. Eine solche Unterscheidung ist wichtig für weitere Therapieentscheidungen
Zur Herstellung eines Arzneimittels können die D -Rezeptor-Agonι- sten zu üblichen pharmazeutischen Darreichungsformen verarbeitet werden, beispielsweise für die perorale, parenterale, subkutane, mtrapeπtoneale oder topische Veranreichung . Geeignete Formen sind beispielsweise Tabletten, Kapseln, Infusions- und Injekti¬ onslösungen, Trinkformen oder Sprays.
Entsprechend der gewünschten Applikationsart enthalten die erfin- dungsgemäßen Arzneimittelzubereitungen neben dem Wirkstoff die üblichen Trägerstoffe und Verdünnungsmittel. Für die lokale äußere Anwendung können pharmazeutisch-technische Hilfsstoffe, wie Ethanol, Isopropanol, oxethyliertes Ricinusöl, oxethyliertes hydriertes Ricinusöl, Polyacrylsäure, Polyethylenglykol, Polyethy- lenglykostearat, ethoxylierte Fettalkohole, Paraffinöl, Vaseline und Wollfett verwendet werden. Für die innere Anwendung eignen sich z.B. Milchzucker, Propylenglykol , Ethanol, Stärke, Talk und Polyvinylpyrrolidon .
Ferner können Antioxidationsmittel wie Tocopherol und butyliertes Hydroxyanisol sowie butyliertes Hydroxytoluol , geschmacksverbessernde Zusatzstoffe, Stabilisierungs-, Emulgier- und Gleitmittel enthalten sein.
Die neben dem Wirkstoff in der Zubereitung enthaltenen Stoffe sowie die bei der Herstellung der pharmazeutischen Zubereitung verwendeten Stoffe sind toxikologisch unbedenklich und mit dem jeweiligen Wirkstoff verträglich. Die Herstellung der Arzneimittelzubereitungen erfolgt in üblicher Weise, z.B. durch Vermischen des Wirkstoffes mit den anderen üblichen Trägerstoffen und Verdünnungsmitteln .
Experimente
Die Untersuchungen erfolgten an normotensiven Sprague-Dawley-Rat- ten sowie an zwei Tiermodellen der arteriellen Hypertonie, den spontan hypertensiven Ratten des Okamoto-Stammes (SHR) und den salzsensitiven Dahl-Ratten (DS) .
Männliche SHR-Ratten (n-=8) und ihre Kontrollgruppe, männliche Wi- star-Kyoto-Ratten (WKY) , (n=8), mit einem Alter von 8 bis 10 Wochen und einem Körpergewicht von 180 bis 260 g wurden mit normalem Rattenfutter ernährt, bei freiem Zugang zu Leitungswasser. Männliche DS-Ratten (n=10) und deren normotensive Kontrollen, salzresistente Dahl-Ratten (DR, n=10), mit einem Alter von 6 bis 7 Wochen und einem Körpergewicht von 100 bis 150 g erhielten für einen Zeitraum von 22 bis 25 Tagen vor den Clearance-Versuchen mit 4 Gew.-% Natriumchlorid angereichertes Rattenfutter, ebenfalls bei freiem Zugang zu Leitungswasser. Clearance-Versuche
Die Ratten wurden durch eine intraperitoneale Injektion mit Na- trium-Thiopental (80 mg/kg Körpergewicht; Trapanal®, Fa. Byk Gul- den, Konstanz, DE) anaesthetisiert und auf einem Wärmetisch pla¬ ziert, um eine Rektaltemperatur von 37,1°C zu erhalten. Zur Erleichterung der spontanen Atmung wurde eine Tracheostomie durchgeführt . Zwei Katheter wurden in die rechte Vena jugularis eingeführt. Durch den ersten Katheter wurde Ringers Salzlösung (111 mmol NaCl, 30 mmol NaHC03 , 4,7 mmol KCl) mit einer Rate von 1,5 bis 3,0 ml/h infundiert, entsprechend 0,8 Gew.-% des Körpergewichts . Über den zweiten Katheter wurde während des gesamten Experiments [3H]-Inulin (1,2 μCi/ml) gelöst in Ringer-Lösung mit einer Rate von 0,6 ml/h infundiert, um die glomeruläre Filtrationsrate zu bestimmen.
In die linke Arteria carotis wurde eine Kanüle zur Entnahme von Blutproben und zur kontinuierlichen Messung des systemischen Blutdrucks eingeführt . Urin-Proben wurden über einen Blasenkathe- ter entnommen. Nachdem sich die Ratten während eines Zeitraums von 80 bis 100 min. von diesem Eingriff erholt hatten, wurden zwei aufeinander folgende Clearance-Perioden von je 20 min. zur Festlegung der Basislinie untersucht. Danach wurde statt Ringers Salzlösung eine Lösung des D3-Rezeptor-Agonisten R(+)-7-hy- droxy-2-dipropyl-aminotetralin, gelöst in Ringer-Lösung, in zwei aufeinander folgenden Dosen von 0,01 bis 0,1 μg/kg Körpergewicht/ min infundiert . Danach wurde wieder Ringer-Lösung infundiert und nach 10 min. eine Clearance-Periode durchgeführt. Während jeder 20 minütigen Clearance-Periode wurde nach 10 min eine Blutprobe von 180 μl entnommen.
Mittels der renalen [3H] -Inulin-Clearance wurde die glomeruläre Filtrationsrate (GFR) bestimmt. Während der Versuche wurde fortlaufend der mittlere arterielle Blutdruck (MAP) und die Herzfre- quenz (HR) bes immt. Nach Beendigung der Clearance-Untersuchungen wurden die Nieren entfernt, ausgeblutet und gewogen. Das Urin-Volumen wurde gravimetrisch bestimmt. Die Blutproben wurden zentri- fugiert und der Haematokrit bestimmt. Die Natrium-Konzentrationen in Urin und Plasma wurden flammenphotometrisch mit einem ELEX 6361-Gerät, Fa. Eppendorf, Hamburg, bestimmt. Die 3H-Inulin-Ra- dioaktivität wurde durch Flüssigphasen-Szinti etrie bestimmt.
Als Ergebnis zeigte sich, daß bei spontan hypertensiven Ratten, normotensiven WKY-Ratten und Dahl-salzresistenten Ratten eine einheitliche und dosisabhängige Reaktion auf die Verabreichung des selektiven D3-Rezeptoragonisten auftrat. Die Natriurese, Diu- rese und Steigerung der glomerulären Filtrationsrate bei diesen drei Gruppen stand in klarem Gegensatz zu den Ergebnissen bei den salzsensitiven Dahl-Ratten. Bei Tieren dieses Stammes war keine Änderung der renalen Funktion durch Dopamin D3 Rezeptor-Stimulation zu beobachten
Untersuchung der Dopamin D3-mRNA und der [3H] -7-OH-DPAT-Bindung im Nierengewebe
Zur Gewinnung von Nierengewebe wurden Ratten zunächst narkoti- siert. Unter Verwendung von sterilem Arbeitsmaterial wurden die Nieren freigelegt, entnommen, gewogen und von der Kapsel befreit.
RT-PCR zur Bestimmung von Dopamin D3-mKNA im Nierengewebe
(RT-PCR: Reverse Transscriptase-Polymerase Chain Reaction)
Die Nieren beider Dahl-Stämme (DS und DR) , sowie SHR und WKY-Rat- ten wurden mit einem sterilen Skalpell unter 4 °C kaltem HEPES (Terada et al . , 1993 ) sagittal zerteilt. Die Niere wurde in 3 gleichgroße transversale Stücke geteilt und in 1,5 ml Eppendorf- gefäßen zunächst in Flüssigstickstoff schockgefroren und danach bei -80 °C bis zur weiteren Aufbereitung der RNA aufbewahrt. Die RNA Isolation wurde nach der Methode von Chomczynski und Sacchi (1987) durchgeführt. Hierbei wird das Gewebe im Beisein eines sauren Phenol/Chloroformgemisches homogenisiert und zentrifu- giert. Die obere wässrige Phase enthält die RNA. Diese wird mit Isopropanol von Phenolresten gereinigt und mit Ethanol präzipi- tiert. Diese kann dann in DEPC-H0 aufgenommen werden und nach der Quantifizierung in der RT-PCR eingesetzt werden. Alle Arbeits- gänge wurden steril durchgeführt, Kontamination mit RNasen wurde ausgeschlossen .
500 ng Gesamt-RNA wurden in komplementäre DNA (cDNA) in 15 μl Ansätzen umgeschrieben. Die Primer für die anschließende RT-PCR wurden entweder anhand entsprechender Literatur oder mit Hilfe von veröffentlichten Sequenzen in Gendatenbanken ausgewählt und von der Firma MWG-Biotech (Ebersberg) synthetisiert. Die relative Quantifizierung der D3 Rezeptor mRNA Expression wurde nach der Methode des "Primer Droppings" durchgeführt, wie sie von (Wong et a.1 . , 1994) beschrieben wurde. In der ersten Stufe wird die Zielsequenz über eine bestimmte Anzahl von Zyklen amplifiziert , um in der zweiten Stufe das Primerpaar für die Amplifikation des "hou- sekeeping genes", in diesem Fall beta-Actin hinzuzufügen und die PCR für weitere Zyklen fortlaufen zu lassen. Der Vergleich der Signalintensitäten nach der PCR der verschiedenen Proben zeigte einen signifikanten Unterschied zwischen der Expression in den DS-Ratten mit ihren Kontrollen, den DR-Ratten. DS-Ratten hatten eine signifikant verringerte Expression um ca. 60 %. Die Untersuchungen wurden mit jeweils drei Ratten mit je drei RT-PCR Reaktionen für jede Ratte durchgeführt (n=3/9) . Ein direkter Vergleich der WKY mit den SHR ergab zwar eine geringfü¬ gige Erhöhung der Expression. Diese erreichte aber nicht das Si¬ gnifikanzniveau. Ein Vergleich der DS-Ratten mit den WKY und den SHR Ratten zeigte allerdings einen noch stärkeren signifikanten Unterschied in der Expression von D3-mRNA.
7-OH-DPAT-Bindung
Nieren von Tieren beider Dahl-Stämme (DS und DR) nach normaler und salzreicher Ernährung wurden direkt nach Entnahme mittels eines Potters in Pufferlösung (TRIS 25 mM / HEPES 40 mM (pH 4.7), Su- crose 320 mM, EDTA 0.5 mM) homogenisiert und bei 1.000 x g für 15 Minuten zentrifugiert (4°C) . Nach Verwerfen des Überstandes wurde das Pellet mit Puffer resuspendiert und erneut zentrifugiert. Der zweite Überstand wurde bei 100.000 x g für 30 Minuten (4°C) zentrifugiert. Das endgültige Pellet wurde in Puffer ohne Sucrose und EDTA resuspendiert und bei -80°C bis zu den Bindungsexperimenten aufbewahrt. Bindungs-Studien wurden mit 100 mg Membranprotein durchgeführt. Sättigungsexperimente wurden mit 0.5 bis 50 nM
[3H] -7-OH-DPAT durchgeführt, wobei 10 μM unmarkiertes 7-OH-DPAT zur Ermittelung der unspezifischen Bindung eingesetzt wurden. Die Spezifische Bindung wurde durch Subtraktion der unspezifischen von der totalen Bindung berechnet .
Die Dissoziationskonstante (KD) als Ausdruck für die Affinität des Liganden zu seinem Rezeptor erwies sich nicht als signifikant unterschiedlich und lag bei beiden Dahl-Stämmen um 10 nM. Signifikant niedriger dagegen zeigte sich die spezifische Bindung (bmax) bei DS im Vergleich zu DR. Der Unterschied wurde noch deutlicher, wenn die Ratten vorher salzreich ernährt worden waren. Hier betrug die spezifische Bindung bei DS-Ratten nur noch 50% des Wertes bei DR-Tieren.
Erzeugung einer salzabhängigen arteriellen Hypertonie bei salzresistenten Dahl-Ratten durch Hemmung von Dopamin D3-Rezeptoren
Salzresistente Dahl-Ratten (DR) wurden unter normaler Ernährung für eine Woche mit dem Dopamin D3-Antagonisten 5-Amino-3- (4- (4- (2-t-Butyl-6-trifluormethyl)pyrimidin-4-yl)pipe- razin-1-yl) 2-methyl-but-2-en-l-yl-mercapto) -4-methyl -1, 2 , 4 (4H) triazol in einer Dosierung von 40 mg/kg pro Tag über das Trinkwasser behandelt. Vor und am Ende dieser Woche wurde mit Schwanzplethysmometrie der arterielle Blutdruck gemessen. Danach wurden die Tiere einer salzreichen Diät (4Gew.-% NaCl im Futter) ad libitum ausgesetzt. Bis 4 Wochen nach Beginn der Experimente wurde wöchentlich der arterielle Blutdruck bestimmt.
Es zeigte sich, daß die Behandlung der Tiere mit dem Dopamin D3-Antagonisten unter Normalsalzernährung keine Veränderung des Blutdruckes verursachte (Werte um 100 mmHG) . Unter der salzrei- chen Diät jedoch kam es zu einem zunehmenden Anstieg des arteriellen Druckes, der am Tag 29 mit einem mittleren Maximum von 148 mmHg noch keine Plateauphase zeigte.

Claims

Patentansprüche
1. Verwendung von Dopamin-D3-Rezeptor-Agonisten zur Herstellung eines Arzneimittels zur Diagnostik und Therapie der salzabhängigen Hypertonie.
2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei als Dopamin-D3-Rezeptor- Agonist R(+) -7-Hydroxy-2-dipropylamino-tetralin verwendet wird.
EP00975979A 1999-11-04 2000-10-31 Verwendung von dopamin-d3-rezeptor-agonisten in der therapie der salzabhängigen hypertonie Withdrawn EP1233815A1 (de)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19953254 1999-11-04
DE19953254 1999-11-04
PCT/EP2000/010770 WO2001032263A1 (de) 1999-11-04 2000-10-31 Verwendung von dopamin-d3-rezeptor-agonisten in der therapie der salzabhängigen hypertonie

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EP1233815A1 true EP1233815A1 (de) 2002-08-28

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EP00975979A Withdrawn EP1233815A1 (de) 1999-11-04 2000-10-31 Verwendung von dopamin-d3-rezeptor-agonisten in der therapie der salzabhängigen hypertonie

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AU (1) AU1390801A (de)
BR (1) BR0015310A (de)
CA (1) CA2389643A1 (de)
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