EP1144603A3 - Protease mit zwei aspartatresten in der katalytisch aktiven struktur - Google Patents

Protease mit zwei aspartatresten in der katalytisch aktiven struktur

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EP1144603A3
EP1144603A3 EP00903587A EP00903587A EP1144603A3 EP 1144603 A3 EP1144603 A3 EP 1144603A3 EP 00903587 A EP00903587 A EP 00903587A EP 00903587 A EP00903587 A EP 00903587A EP 1144603 A3 EP1144603 A3 EP 1144603A3
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EP
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protease
medicament
aspartate
diagnostic agent
proteases
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Kay Hofmann
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MEMOREC STOFFEL GMBH-MEDIZINISCH-MOLEKULARE ENTWIC
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Memorec Medical Molecular Research Cologne Stoffel GmbH
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Publication of EP1144603A3 publication Critical patent/EP1144603A3/de
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
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    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Definitions

  • the present invention relates to a protease encoding nucleic acids for the protease and the inhibitors, antibodies, medicaments and diagnostic agents associated therewith.
  • the present invention provides a protease with two aspartate residues in a catalytically active structure, wherein a first aspartate residue is in a motif X1GX2GD and a second aspartate residue is in a motif X 3 X 4 DX 5 , wherein Xi, X 2 , X3 and X 5 are independent are selected from each other from Ala, Val, Leu, Met and Ile and X 4 is an aromatic amino acid, and the motifs X ⁇ GX 2 GD and X 3 X 4 DX 5 are located in a transmembrane region.
  • proteases are very likely to be involved in the cleavage of the amyloid precursor protein (APP).
  • the protease according to the invention represents the hitherto unidentified ⁇ -secretase which is involved in processing the APP to form the amyloid peptides referred to as Aß.
  • Preferred proteases of the present invention additionally have a sequence PALX6YX7V, where X 6 and X 7 independently of one another have the same meaning as Xi. However, it is preferred that X 6 and X 7 are leucine or isoleucine.
  • the proteases are proteases from mammals, in particular from humans.
  • the proteases according to the invention preferably have catalytically active aspartate residues in a region which lies within a transmembrane region.
  • Transmembrane regions can be predicted on the basis of different models if the sequence of a protein is known. They are characterized in that in one area there are predominantly hydrophobic amino acids which are flanked by areas in which there are more hydrophilic amino acids.
  • An aspartate in a transmembrane region can be detected, for example, by using the "GREASE" program, which is part of the FASTA 2.0 program package. With a window width of 17, this program must be used to calculate a hydrophobicity value of at least 80 for the aspartate.
  • the FASTA program package is described in WR Pearson and DJ Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 (1988) 2444-2448.
  • the GREASE program uses the Kyte / Doolittle algorithm, described in J. Kyte and RF Doolittle, J. Mol. Biol 157: 105-132 (1982).
  • proteases of the present invention are referred to as psl 1-5 (human psl 1-5: SEQ ID No. 1 to 4 + 19, murine psl 2-4: SEQ ID No. 5-7, sacc. Cerevisiae psl 3: SEQ ID No. 8, human psl2L SEQ ID No. 18).
  • the invention furthermore relates to variants of the proteases according to the invention.
  • Variants are proteins which are derived from the proteases according to the invention by one or more mutations, insertions and deletions, in particular by conservative exchanges. special N- or C-terminal shortened or elongated forms.
  • the invention also relates to nudeic acids which code for the proteases according to the invention.
  • Preferred nucleic acids according to the invention are those with SEQ ID No. 9 - 17 + 20 (human psl 1 - 5: SEQ ID No. 9 - 12 + 20, murine psl 2 - 4: SEQ ID No. 13 - 15, sacc. Cerevisiae psl 3: SEQ ID No. 16, human psl2L SEQ ID No. 17).
  • Complementary nudeic acids are also part of the invention.
  • the proteases according to the invention are involved in the cleavage of the APP to Aß and are thus indirectly involved in the development of, for example, Alzheimer's disease.
  • the invention therefore also relates to inhibitors which inhibit the expression or the activity of the proteases.
  • Such inhibitors can be identified in simple procedures.
  • Corresponding inhibitors can be identified, for example, by measuring the expression or the activity of the proteases in the presence of potential inhibitors.
  • Antibodies directed against the aspartate protesases are particularly suitable for measuring expression and are therefore also part of the invention.
  • the aspartate proteases according to the invention are also involved in the cleavage of other transmembrane proteins, in particular the Notch receptor protein and related proteins which play a role in the development of the nervous system.
  • proteolytic cleavage inside membranes is also involved in other important processes, e.g. :
  • Proteolytic cleavage of the ER stress sensor protein Irel The endoplasmic reticulum has a mechanism that detects the accumulation of unfolded or incorrectly folded proteins and sends a signal to the cell nucleus. This mechanism is called "unfolded protein response" or UPR, and leads to the increased formation of proteins that facilitate folding. In mammals there are two sensor proteins (Irelalpha and Irelbeta) that react to folding defects and are then proteolytically cleaved within the membrane.
  • the processes mentioned can be influenced therapeutically by using the protease or its inhibitors according to the invention.
  • Zeil lines which do not express any of the proteases or nucleic acids according to the invention and preferably also contain no homologous proteases or nucleic acids are particularly suitable for this. These can be used to test the activity of the proteases or to determine inhibitors according to Example 2, preferably in accordance with the method described in Example 1. Saccharomyces cerevisiae is particularly suitable for this.
  • SEQ ID No. 8 and 16 can be used to produce yeast strains by known methods which no longer contain this protein or the nucleic acid. They are therefore preferably suitable as an expression system for characterizing the aspartate proteases according to the invention or for identifying suitable inhibitors.
  • yeast cell lines preferably yeast cell lines and the use of the protein with SEQ ID No. 8 as aspartate protease and the nucleic acid with SEQ ID No. 16 for the expression of a protease are therefore also the subject of the invention.
  • proteases, nudeic acids, inhibitors and antibodies according to the invention can be contained in medicinal and diagnostic agents. They are particularly suitable for the treatment or diagnosis of diseases which are causally linked to the cleavage of the amyloid precursor protein, in particular Alzheimer's disease.
  • the putative ⁇ -secretases are transfected stably or transiently in cos-7 cells, which additionally express SpA4CT (signal peptide fused to ßA4 followed by the APP C-terminus).
  • SpA4CT signal peptide fused to ßA4 followed by the APP C-terminus.
  • ⁇ -Secretase activity is recognizable in this system by the generation of a 4.6 KDa peptide or by the disappearance of the 11 KDa band of the complete SpA4CT. If the pathologically relevant ⁇ -secretase is present, both fragments should be detectable inside the cell.
  • ßA4 which is generated by an endogenous plasma membrane-constant ⁇ -secretase activity, which, however, plays no role in the pathogenesis of Alzheimer's.
  • the transfected cells are washed three times with cold DMEM and then harvested on ice with a cell scraper.
  • the cells (approx. 5X10 6 cells) are collected by centrifugation and in 1 ml Lysis buffer (150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl pH 7.5, 1% NP-40, 1% Triton-x-100, 2 mM EDTA) lysed.
  • the kernels are centrifuged off at 11,000 g.
  • the supernatant is subjected to immunoprecipitation.
  • 1 ⁇ g of the cell lysate is mixed with 2 ⁇ g / ml WO2 immunoglobulin (anti-ßA4 antibody) and shaken overhead at 4 ° C.
  • the Protein-G Sepharose is consecutively two times with the buffers A, B and C (A: 150 mM NaCI, 10 mM Tris-HCl pH 7.5, 0.2% NP-40, 2 mM EDTA; B: 500 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI pH 7.5, 0.2% NP-40, 2 mM EDTA; C: 10 mM Tris-HCI pH 7.5), mixed with 20 ⁇ l 3X sample buffer, heated to 95 ° C and the supernatant to a 12% Tris Tricine gel applied. After the gel electrophoretic size fractionation, the proteins are transferred to a PVDF membrane and subsequently detected with an anti-ßA4 antibody.
  • the enzyme is coexpressed according to the above instructions in Cos-7 cells with SpA4CT.
  • the cells are brought into contact with the substance to be investigated in a suitable manner (in the presence or absence of membrane-permeabilizing agents).
  • the intracellularly formed ⁇ A4 is then detected as described above.
  • a reduction in the amount of ⁇ A4 formed suggests that the substance is effective as a ⁇ -secretase inhibitor.

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Abstract

Protease mit zwei Aspartatresten in einer katalytisch aktiven Struktur, wobei ein erster Aspartatrest in einem Motiv X1GX2GD liegt und ein zweiter Aspartatrest in einem Motiv X3X4DX5 liegt, wobei X1, X2, X3 und X5 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus Ala, Val, Leu, Met und Ile und X4 eine aromatische Aminosäure ist, und die Motive X1GX2GD und X3X4DX5 in einer Transmembranregion liegen.

Description

Protease
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind eine Protease, Nudeinsäuren kodierend für die Protease sowie die damit in Verbindung stehenden Inhibitoren, Antikörper, Arznei- und Diagnostikmittel.
Die vorliegende Erfindung stellt eine Protease mit zwei Aspartatresten in einer katalytisch aktiven Struktur, wobei ein erster Aspartatrest in einem Motiv X1GX2GD liegt und ein zweiter Aspartatrest in einem Motiv X3X4DX5 liegt, wobei Xi, X2, X3 und X5 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus Ala, Val, Leu, Met und Ile und X4 eine aromatische Aminosäure ist, und die Motive XιGX2GD und X3X4DX5 in einer Transmembranregion liegen, zur Verfügung. Für die Motive wurde der Einbuchstabencode der Aminosäuren verwendet, d.h. D = Asp, G = Gly usw.
Solche Proteasen sind mit hoher Wahrscheinlichkeit an der Spaltung des Amyloid Precursor Proteins (APP) beteiligt. In einer Ausführungsform der Erfindung stellt die erfindungsgemäße Protease die bisher nicht identifizierte γ-Secretase dar, die an der Prozessierung des APP zu den als Aß bezeichneten Amyloidpeptiden beteiligt ist.
Ein Überblick über die Rolle der γ-Secretasen bei der Entstehung der Alz- heimerschen Erkrankung geben S.L Ross et al. in J. of Biol. Chem. 273 (1998), 15309-15312.
Bevorzugte Proteasen der vorliegenden Erfindung weisen zusätzlich eine Sequenz PALX6YX7V auf, wobei X6 und X7 unabhängig voneinander die gleiche Bedeutung haben wie Xi. Es wird jedoch bevorzugt, dass X6 und X7 Leucin oder Isoleucin sind. Insbesondere handelt es sich bei den Proteasen um Proteasen von Säugetieren, insbesondere von Menschen.
Die erfindungsgemäßen Proteasen weisen bevorzugt katalytisch aktive Aspartatreste in einer Region auf, die innerhalb eines Transmembranbereichs liegt. Transmembranbereiche lassen sich bei Kenntnis der Sequenz eines Proteins aufgrund verschiedener Modelle vorhersagen. Sie sind dadurch gekennzeichnet, dass in einem Bereich überwiegend hydrophobe Aminosäuren liegen, die von Bereichen flankiert werden, in denen eher hydrophile Aminosäuren liegen.
Ein Aspartat in einer Transmembranregion lässt sich beispielsweise durch Anwendung des Programms „GREASE" nachweisen, das Teil des FASTA 2.0 Programmpaketes ist. Bei einer Fensterbreite von 17 muss mit Hilfe dieses Programms ein Hydrophobizitätswert von mindestens 80 für das Aspartat berechnet werden. Das FASTA- Programmpaket ist beschrieben in W. R. Pearson and D. J. Lipman, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 85 (1988) 2444-2448. Das Programm GREASE benutzt den Kyte/Doolittle Algorithmus, beschrieben in J. Kyte and R. F. Doolittle, J. Mol. Biol. 157 (1982) 105-132.
Besonders bevorzugte Proteasen der vorliegenden Erfindung werden als psl 1 - 5 bezeichnet (humane psl 1 - 5: SEQ ID No. 1 bis 4 + 19, murine psl 2 - 4: SEQ ID No. 5 - 7, sacc. cerevisiae psl 3: SEQ ID No. 8, humane psl2L SEQ ID No. 18).
Weiterhin sind Varianten der erfindungsgemäßen Proteasen Gegenstand der Erfindung. Varianten sind Proteine, die durch einen oder mehrere Mutationen, Insertionen und Deletionen, insbesondere durch konservative Austausche, von den erfindungsgemäßen Proteasen abgeleitet sind, ins- besondere N- oder C-terminal verkürzte oder verlängerte Formen.
Auch Nudeinsäuren, die für die erfindungsgemäßen Proteasen kodieren, sind Gegenstand der Erfindung. Bevorzugte erfindungsgemäße Nudeinsäuren sind solche mit der SEQ ID No. 9 - 17 + 20 (human psl 1 - 5: SEQ ID No. 9 - 12 + 20, murine psl 2 - 4: SEQ ID No. 13 - 15, sacc. cerevisi- ae psl 3: SEQ ID No. 16, humane psl2L SEQ ID No. 17). Auch komplementäre Nudeinsäuren sind Bestandteil der Erfindung.
Die erfindungsgemäßen Proteasen sind an der Spaltung des APP zum Aß beteiligt und sind damit indirekt an der Entstehung beispielsweise der Alzheimerschen Erkrankung beteiligt. Daher sind auch Inhibitoren, die die Expression oder die Aktivität der Proteasen hemmen, Gegenstand der Erfindung. Solche Inhibitoren können in einfachen Verfahren identifiziert werden. Entsprechende Inhibitoren können beispielsweise durch Messung der Expression oder der Aktivität der Proteasen in Gegenwart von potentiellen Inhibitoren identifiziert werden. Insbesondere zur Messung der Expression eignen sich gegen die Aspartatprotesasen gerichtete Antikörper, die somit ebenfalls Bestandteil der Erfindung sind.
Die erfindungsgemäßen Aspartatproteasen sind auch an der Spaltung anderer Transmembranproteine beteiligt, insbesondere des Rezeptorprotein Notch und verwandter Proteine, die in der Entwicklung des Nervensystems eine Rolle spielen.
Die proteolytische Spaltungen im Inneren von Membranen ist auch an anderen wichtigen Prozessen beteiligt, z.B. :
• Proteolytischer Abbau von N-terminalen Signalpeptiden nach deren Abspaltung durch die Signalpeptidase. • Proteolytischer Abbau von C-terminalen Propeptiden, wie sie durch transamidase-katalysierte Abspaltung bei der posttranslationalen GPI- Verankerung von Proteinen entstehen.
• Generierung von Peptiden für die Präsentation durch Histokompatibi- litäts-Komplex Moleküle vom Typ I und II. Bei löslichen Proteinen werden solch Peptide vornehmlich durch das Proteasom gebildet. Es entstehen jedoch auch Peptide aus Transmembranregionen von Proteinen, wie sie nur durch eine Spaltung im Inneren der Membran erklärt werden können.
• Proteolytische Spaltung des ER-Stress Sensorproteins Irel. Das en- doplasmatische Retikulum besitzt einen Mechanismus, der die Akkumulation von nicht-gefalteten oder falsch-gefalteten Proteinen detek- tiert und ein Signal in den Zellkern sendet. Dieser Mechanismus wird "Unfolded Protein Response" oder UPR genannt, und führt zur vermehrten Bildung von Proteinen, die die Faltung erleichtern. Im Säuger gibt es zwei Sensor-Proteine (Irelalpha und Irelbeta), die auf Faltungsdefekte reagieren und dann innerhalb der Membran proteoly- tisch gespalten werden.
Durch Einsatz der erfindungsgemäßen Protease bzw. deren Inhibitoren lassen sich die genannten Prozesse therapeutisch beeinflussen.
Hierfür eignen sich insbesondere Zeil-Linien, die keine der erfindungsgemäßen Proteasen oder Nukleinsäuren exprimieren und bevorzugt auch keine homologen Proteasen oder Nukleinsäuren enthalten. Mit diesen läßt sich bevorzugt gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren die Aktivität der Proteasen testen bzw. Inhibitoren gemäß dem Beispiel 2 ermitteln. Besonders geeignet hierfür ist Saccharomyces cerevisiae. In Kenntnis der entsprechenden Protease bzw. der kodierenden Nukleinsäure (SEQ ID No. 8 und 16) lassen sich nach bekannten Methoden Hefestämme herstellen, die dieses Protein bzw. die Nukleinsäure nicht mehr enthalten. Sie eignen sich daher bevorzugt als Expressionssystem zur Charakterisierung der erfindungsgemäßen Aspartatproteasen bzw. zur Identifizierung von geeigneten Inhibitoren. Entsprechende Zellinien, bevorzugt Hefezell-Linien sowie die Verwendung des Proteins mit der SEQ ID No. 8 als Aspartatprotease und der Nukleinsäure mit der SEQ ID No. 16 zur Expression einer Protease sind daher ebenfalls Gegenstand der Erfindung.
Die erfindungsgemäßen Proteasen, Nudeinsäuren, Inhibitoren und Antikörper können in Arznei- und Diagnostikmitteln enthalten sein. Sie eignen sich insbesondere zur Behandlung oder Diagnose von Erkrankungen, die mit der Spaltung des Amyloid Precursor Proteins ursächlich verbunden sind, insbesondere der Alzheimerschen Erkrankung.
Beispiel 1:
γ-Sekretase Assay
Die putativen γ-Sekretasen werden stabil oder transient in cos-7 Zellen transfiziert, die zusätzlich SpA4CT (Signalpeptid fusioniert an ßA4 gefolgt vom APP C-Terminus) stabil exprimieren. γ-Sekretase Aktivität ist in diesem System erkennbar durch die Generierung eines 4,6 KDa großen Peptides bzw. durch das Verschwinden der 11 KDa Bande des vollständigen SpA4CT. Bei Vorliegen der pathologisch relevanten γ- Sekretase sollten beide Fragmente im Inneren der Zelle zu detektieren sein. Im Überstand der Zellen ist immer ßA4 zu finden, das durch eine endogene plasmamembran-ständige γ-Sekretase Aktivität generiert wird, die jedoch bei der Pathogenese von Alzheimer keine Rolle spielt. Die transfizierten Zellen werden dreimal mit kaltem DMEM gewaschen und nachfolgend auf Eis mit einem Zellschaber geerntet. Die Zellen (ca. 5X106 Zellen) werden durch Zentrifugation gesammelt und in 1 ml Ly- sis-Puffer (150 mM NaCI, 50 mM Tris-HCI pH 7.5, 1% NP-40, 1% Triton- x-100, 2 mM EDTA) lysiert. Die Kerne werden bei 11 000 g abzentrifu- giert. Der Überstand wird einer Immunpräzipitation unterworfen. Hierzu werden 1 ml des Zellysates mit 2 μg/ml WO2 Immunglobulin (anti-ßA4 Antikörper ) versetzt und 0,5 h bei 4°C über Kopf geschüttelt. Nachfolgend werden 20 μl Protein-G Sepharose Suspension (1:1) hinzugeben und 5 h bei 4°C über Kopf geschüttelt. Die Protein-G Sepharose wird konsekutiv je zwei mal mit den Puffern A, B und C (A: 150 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI pH 7.5, 0.2% NP-40, 2 mM EDTA; B: 500 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI pH 7.5, 0.2% NP-40, 2 mM EDTA; C: 10 mM Tris-HCI pH 7.5) gewaschen, mit 20 μl 3X Probenpuffer versetzt, auf 95°C erhitzt und der Überstand auf ein 12% Tris-Tricine Gel aufgetragen. Nach der gele- lektrophoretischen Größenfraktionierung werden die Proteine auf eine PVDF-Membran transferiert und nachfolgend mit einem anti-ßA4 Antikörper nachgewiesen.
Beispiel 2:
Identifizierung eines γ-Sekretase Inhibitors
Zur Identifizierung eines Inhibitors der pathologisch relevanten γ- Sekretase wird das Enzym nach der obigen Vorschrift in cos-7 Zellen mit SpA4CT coexprimiert. Die Zellen werden in geeigneter Weise mit der zu untersuchenden Substanz in Kontakt gebracht (in Gegenwart oder Abwesenheit von membran-permeabilisierenden Agentien). Anschließend wird das intrazellulär gebildete ßA4 wie oben beschrieben nachgewiesen. Eine Verringerung der gebildeten Menge ßA4 lässt auf eine Wirksamkeit der Substanz als γ-Sekretase Inhibitor schließen.

Claims

Patentansprüche
1. Protease mit zwei Aspartatresten in einer katalytisch aktiven Struktur, wobei ein erster Aspartatrest in einem Motiv XiGX2GD liegt und ein zweiter Aspartatrest in einem Motiv X X4DX5 liegt, wobei Xi, X2, X3 und X5 unabhängig voneinander ausgewählt werden aus Ala, Val, Leu, Met und Ile und X4 eine aromatische Aminosäure ist, und die Motive X1GX2GD und X3X4DX5 in einer Transmembranregion liegen.
2. Protease nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease die Sequenz PALX6YX?V aufweist, wobei X6 und X7 unabhängig voneinander die gleiche Bedeutung haben wie Xi und bevorzugt Leu oder Ile sind.
3. Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Protease eine der Sequenzen SEQ ID No. 1 - 8 und 18, 19 aufweist.
4. Nudeinsäuren kodierend für eine Protease nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 3, bevorzugt mit der SEQ ID No. 9 - 17 oder 20.
5. Inhibitoren, dadurch gekennzeichnet, dass sie die Expression oder Aktivität der Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 3 hemmen.
6. Antikörper, gerichtet gegen Proteasen nach einem der Ansprüche 1 bis 3.
7. Verfahren zur Identifizierung von Inhibitoren, dadurch gekennzeichnet, dass die Aktivität der Proteasen nach einem der Ansprüche 1 bis 3 in Gegenwart von potentiellen Inhibitoren gemessen wird.
8. Arzneimittel oder Diagnostikmittel enthaltend eine Protease nach einem der Ansprüche 1 bis 3, eine Nucleinsäure nach Anspruch 4, einen Inhibitor nach Anspruch 5 und/oder einen Antikörper nach Anspruch 6.
9. Verwendung des Arzneimittels oder Diagnostikmittels nach Anspruch 8 zur Diagnose oder Behandlung von Erkrankungen, die mit der Spaltung des Amyloid Precursor Proteins ursächlich verbunden sind, insbesondere der Alzheimerschen Erkrankung.
10. Verwendung des Arzneimittels oder Diagnostikmittels nach Anspruch 8 zur Diagnose oder Behandlung von Erkrankungen, die mit einem gestörten Abbau von hydrophoben Signalpeptiden ursächlich verbunden sind.
11. Verwendung des Arzneimittels oder Diagnostikmittels nach Anspruch 8 zur Diagnose oder Behandlung von Erkrankungen, die ursächlich mit der Akkumulation von ungefalteten Proteinen im Endoplasmati- schen Retikulum verbunden sind.
12. Verwendung des Arzneimittels nach Anspruch 8 zur Beeinflussung der Präsentation von hydrophoben Peptiden durch Histokompatibilitäts- Komplex Moleküle bei Zuständen wie virale Infektion, Krebs oder einer Abstoßungsreaktion nach Transplantation.
13. Zeil-Linie, dadurch gekennzeichnet, dass die Zeil-Linie keine Protease gemäß mindestens einem der Ansprüche 1 bis 3 exprimiert und/oder keine Nukleinsäure nach Anspruch 4 enthält.
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