EA043247B1 - Способ получения лекарственного препарата для парентерального применения - Google Patents

Description

Область техники

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и медицине, касается способа получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитол и обладающего противовирусным, противомикробным, противогрибковым, противопара-зитарным, радиопротекторным и иммуномодулирующим действием. Лекарственный препарат используют для лечения широкого спектра заболеваний инфекционного генеза.

Предшествующий уровень техники

Соединение 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-uл-ацетат)]аммоний-D-глюцитол известно как биологически активное вещество, обладающее иммуномодулирующим действием (патент ЕА 000382). Биологическая активность известного соединения позволяет использовать его при лечении широкого спектра заболеваний человека и животных: лечение териоидита (патент РФ 2306932), кандидоза полости рта (патент РФ 2642053), рецидивирующего вагинального кандидоза (патент РФ 2309761), гриппа (патент РФ 2281097), вирусного гепатита у детей (патент РФ 2154478), артритов (патент РФ 2417091, РФ 2169563), гнойно-деструктивных поражений слизистых оболочек и кожи (патент РФ 2414221, РФ 2361626, РФ 2295348), онихомикозов (патент РФ 2391100), силоаденита (патент РФ 2413507), бруцеллеза (патент РФ 2423143), туберкулеза (патент РФ 2296996) вирусных инфекций (патент РФ 2281097, РФ 2526253, РФ 2538083, РФ 2228756, РФ 2459629), вторичных иммунодефицитов (патент РФ 2364396, РФ 2320293), хореорети-нитов (патент РФ 2275933), одонтогенного верхнечелюстного синусита (патент РФ 2460528), гиперпластического ларингита (патент РФ 2214249), тонзиллита (патент РФ 2357732), псориаза и нейродермита (патент РФ 2292215), плоскоклетчного рака (патент РФ 2332277), трансплантации аутологичных клеток (патент РФ 2325934), ожогов (патент РФ 2166960), стафилококковой инфекции (патент РФ 2441656).

Известно гомеопатическое лекарственное средство на основе N-метилглюкамина 9-оксоакридинил10-ацетата при его разведении в физиологическом растворе до концентраций 10’²⁹-10’² мг/мл применяемое для профилактики и лечения гриппа, ОРВИ, гепатитов В и С (патент РФ 2281097), что свидетельствует о высокой фармакологической активности соединения даже в гомеопатических дозах и необходимости получения стабильных растворов для парентерального введения различной концентрации активного вещества.

Известен лекарственный препарат для парентерального применения, содержащий в качестве активного вещества 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитол (патент ЕА 002462). Препарат дополнительно содержит в качестве стабилизатора-N-метилглюкамин при следующем соотношении компонентов, мас.%: 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитол - 8,5-25,0, N-метилглюкамин - 0,05-1,00, вода для инъекций - до 100%.

Согласно изобретению, повышена фотостабильность и термостабильность лекарственной формы в процессе производства и хранения за счет применения стабилизатора.

Способ получения данного препарата заключается в растворении 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола в воде, добавлении стабилизатора, фильтрации через стерилизующий фильтр, розливе в стерильные ампулы объемом 1, 2, и 5 мл и запайке. Далее полученные ампулы подвергают термической стерилизации ав-токлавированием при температуре 120°С в течение 30 мин.

Данный способ выбран в качестве прототипа заявляемого изобретения.

Одной из проблем, которая решается в изобретении по патенту ЕА 002462, является снижение интенсивности выпадения при хранении осадка нерастворимого в воде N-метилакридона за счет высокого содержания N-метилглюкамина от 0,5 до 1,0 мас.%.

Однако позже было установлено, что в прототипе при известном режиме стерилизации 120°С в течение 30 мин и диапазоне содержания стабилизатора, происходит дополнительное нарастание уровня единичных неидентифицированных примесей и суммы неидентифицированных примесей, за счет взаимодействия стабилизатора с активным компонентом.

Кроме того, при содержании N-метилглюкамина в количестве от 0,5 до 1,0 мас.% происходит спонтанное и трудно прогнозируемое выпадение осадка акридона - продукта деацетилирования 1-дезокси-1N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола в щелочной среде в процессе стерилизации и хранения. В связи с этим уровень неидентифицированных примесей в готовом лекарственном препарате, изготовленном согласно прототипу, превышал нормы, описанные в современных международных требованиях (ICH Q3B (R2) Impurities in new drag products, June 2006).

В известном количественном диапазоне N-метилглюкамин выполняет функцию со-любилизатора и регулятора рН при производстве и хранении препарата, тем самым оказывая стабилизирующее действие в растворе. Однако солюбилизирующие свойства N-метилглюкамина в отношении примесей акридона и N-метилакридона приводят к образованию квазистабильных мицелл из плохо растворимых в воде нежелательных соединений, образующихся на стадии приготовления раствора и его стерилизации. В дальнейшем в процессе хранения препарата под воздействием различных внешних факторов (свет, скачки температуры и вибрация в процессе транспортировки и хранения), а также при взаимодействии с компонентами стекла внутренней поверхности ампул происходит разрушение мицелл и выпадение этих соеди- 1 043247 нений в осадок, что недопустимо для лекарственных препаратов для парентерального введения.

Более того, использование избытка N-метилглюкамина в диапазоне концентраций 0,05-1,0 мас.% приводит к существенному защелачиванию раствора до рН=8,5 (1,0% избытка N-метилглюкамина) и способствует образованию большого количества дополнительных примесей - продуктов разложения производного глюкозы N-метилглюкамина - токсичных соединений из ряда фурфуролов. В целом, особенно в режиме стерилизации 120°С в течение 30 мин, уровень примесей в лекарственном препарате, полученном согласно прототипу, имеет неприемлемые показатели и не соответствует современным требованиям (ICH Q3B (R2) Impurities in new drag products, June 2006).

Таким образом, разработка способа получения безопасной и стабильной при хранении лекарственной формы 1-дезокси-1-М-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-О-глюцитола в виде водного раствора для внутривенного введения является важной технологической задачей.

В настоящее время наиболее широко используемым методом финишной стерилизации в промышленном производстве лекарственных препаратов является термическая стерилизация насыщенным водяным паром под давлением (автоклавирование). Параметры этого процесса регламентированы в международных фармакопеях (Государственная фармакопея РФ 14 издание, Европейская фармакопея ЕР 10,0, американская фармакопея USP 40) и руководствах (ЕМА 366428/2018 Guideline on the sterilization of the medicinal product, active substance, excipient and primary container, 6 March 2019).

На практике часто встречаются лекарственные препараты, которые содержат термолабильные лекарственные вещества, не позволяющие применить стандартные режимы стерилизации, и в настоящее время используются промышленные технологии в комплексе с другими способами воздействия (гаммаизлучение, ультразвук и др.), в том числе с применением химических методов стерилизации.

Так, в заявке RU 2001117337 предлагается вариант радиационной стерилизации растворов, в патенте RU 2519841 стерилизация СВЧ-сверхвысокочастотным излучением. В заявке RU 2006142783 стерилизация осуществляется в обработке импульсными высоковольтными разрядами, генерирующими стерилизующее УФ излучение, а в заявке RU 2000130091 предлагается способ электрохимической стерилизации жидкостей химически активными частицами. В патенте RU 2366347 предложенный способ стерилизации осуществляется в кавитационном реакторе, через который в ходе процесса нагретая до заданной температуры стерилизуемая жидкость циркулирует по замкнутому циклу. При этом, жидкость подвергается воздействию ультразвука, амплитуду звукового давления которого устанавливают в зависимости от давления и температуры в реакторе, пользуясь значением давления насыщенного водяного пара при этой температуре. Способ позволяет расходовать акустическую энергию в меньших количествах, а также снизить температуру термической стерилизации.

В настоящее время для стерилизации нестабильных водных растворов используются также комбинации режимов термической и физической стерилизации, так в патенте RU 2238108 нагрев осуществляют воздействием электромагнитного поля СВЧ, а стерилизацию осуществляют электромагнитным полем КВЧ. В заявке RU 2003115619 предложен оригинальный комбинированный способ стерилизации, путем воздействия электрического поля и акустической вибрации.

Однако, поскольку многие комбинированные нестандартные методы стерилизации не дают высокой гарантии отсутствия микробной контаминации лекарственного препарата, при его приготовлении в раствор часто вынуждены добавлять разрешенные международными фармакопеями различные водорастворимые антимикробные консерванты: бензило-вый спирт (RU 2209070, RU 210550, RU 2326669, RU 2192855, US 20150126466, UA 26343), бензалкония хлорид (RU 2419417, UA 26343), хлорбутанол (UA 26343), метакрезол (РФ 2093144), крезол (RU 2020954), фенол (RU 2111012). Данный комбинированный способ позволяет стерилизовать термолабильные лекарственные препараты при нестандартных режимах стерилизации, однако он имеет весьма существенный недостаток - ограничение к медицинскому применению, особенно в педиатрической практике (Государственная фармакопея РФ 14 издание).

Так же для обеспечения возможности применения термической стерилизации термолабильных инъекционных и инфузионных растворов применяются стабилизирующие агенты различной химической структуры.

Так, например, в патенте CN 102552950В описан успешный способ стабилизации водного раствора аденозина трифосфата целым рядом различных соединений твин 80, гуанидина карбонат, глицин, аргинин, пропиленгликоль, глицерин, креатинин, каприлат натрия, никотинамид или их комбинации.

В патенте RU 2529800 показано, что стабильность инъекционной лекарственной формы бортезоломиба повышается в присутствии высоко очищенного пропиленгликоля. А в патенте SU 1225573 установлено увеличение сроков хранения раствора целанида, что достигается путем растворения целанида в 1,2пропиленгликоле.

Согласно патенту RU 2260429, стабильность инъекционного раствора моксифлокса-цина достигается путем введения в раствор натрия хлорида и в присутствии ионов железа.

Для стабилизации инъекционных и инфузионных лекарственных препаратов, содержащих легкоокисляющиеся активные вещества часто используют комплексоны: ЭДТА-этилендиаминтетрауксусную кислоту, трилон Б (динатриевая соль ЭДТА), тетрацин-кальций (кальций-динатриевая соль ЭДТА), которые хорошо растворимы в воде и термоустойчивы, механизм стабилизирующего действия которых свя- 2 043247 зан с переводом катионов тяжелых металлов в комплексные, практически недиссоциируемые соединения, не активные по отношению к гидроперекиси. Данные стабилизаторы проявляют эффективность особенно в случаях использования устаревшего оборудования, которое является источником загрязнений тяжелыми металлами как исходных субстанций, так и готового лекарственного средства. Подобным действием обладают гидрохинон, маннит, глицерин, 8-оксихинолин и др. Эти комплексоны являются косвенными антиоксидантами.

Так в патенте RU 2362560 описан лекарственный препарат в виде раствора для инъекций, включающий метилналтрексон или его соль (производное опиоидного антагониста) и хелатообразующий агент ЭДТА или ее производное. Изобретение обеспечивает предотвращение разложения метилналтрексона или его соли при термической стерилизации и демонстрирует стабильность препарата метилналтрексона в виде раствора при хранении в течение 12 месяцев.

В патенте US 8133883 для композиции в инъекционной лекарственной форме, содержащей антибактериальные препараты натрия пиперациллин и натрия тазобактам использована в качестве хелатирующего агента аминокарбоновая кислота, в частности ЭДТА и ее фармацевтически приемлемые соли, для ингибирования образования твердых частиц при хранении раствора композиции, после его оттаивания или восстановления лиофилизата, а также повышения совместимости композиции с аминогликозидами.

Например, в патенте RU 2284811 описано применение комбинации стабилизаторов трилона Б и альфа оксипропионовой (молочной) кислоты для предотвращения образования механических включений в растворе для инъекций ципрофлоксацина в процессе производства, повышения стабильности при хранении, а также улучшенной биодоступности. В патенте RU 2205640 применение трилона Б обеспечило стабильность раствора препарата мек-сидол в течение 3,5 лет без изменения окраски раствора.

Часто для стабилизации инъекционных растворов используют вещества, разрушающие гидропероксиды, которые, снижая скорость разветвления цепей окисления, замедляют окислительные реакции. Это соли сернистой кислоты, органические соединения серы: натрия сульфит (Na₂SO₃) натрия метабисульфит (Na₂S₂O₃), натрия бисульфит (NaHSO₃), унитиол, ронгалит, тиомочевина, метионин и др.

Для стабилизации инъекционного раствора 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината по патенту RU 2635759, в качестве стабилизатора используют соль, выбранную из группы сульфитных стабилизаторов антиоксидантов: натрия или калия дисульфит (метабисульфит), натрия или калия сульфит, натрия или калия гидросульфит, натрия или калия тиосульфат, что позволяет стерилизовать препарат паром под давлением в автоклаве при температуре 100-130°С и обеспечивать стабильность раствора при хранении в течение 5 лет.

Для стабилизации полиионного инфузионного раствора на основе N-метилглюка-мина натрия сукцината (Евразийский патент №035241) в качестве стабилизаторов, для снижения уровня образования продуктов его разложения - фурфуролов, использованы карбо-новые кислоты из ряда: этановая кислота, 2-гидроксибутандиовая кислота, 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоновая кислота, бутандиовая, трансбутендиовая кислота, 2,3-дигид-роксибутандиовая кислота, 2-гидроксипропановая кислота.

Согласно изобретению (ЕА 029693, RU 2629204) для стабилизации раствора для внутривенного введения, содержащего термически нестойкие и гидролитически нестабильных компоненты никотинамид, инозин, рибофлавина мононуклеотид использованы натрия гид-роксид, меглюмин, ТРИС, этаноламин, диэтаноламин, L-аргинин.

Известен способ стабилизации (RU 2020941) натрия 10-метиленкарбоксилат-9-акри-дона метиленовой синью с целью защиты от воздействия света, однако в патенте нет данных о термической устойчивости таких растворов, а сама метиленовая синь термически нестабильна.

В патенте SU 1178447 описан способ стабилизации производных аймалина с применением поливинилпирролидона с молекулярной массой 11 200. В патенте RU 2443432 заявлено о возможности использования довольно плохо растворимых в воде комплексов четырехвалентной платины в инъекционной лекарственной форме благодаря использованию циклодекстринов, существенно повышающих их растворимость в воде без использования смесей с органическими растворителями.

Авторами изобретения RU 2451510 предложена фармацевтическая композиция, содержащая наночастицы лекарственного вещества доцетаксел, имеющие средний диаметр не более чем 200 нм и которая подходит для парентерального введения.

Таким образом, для решения проблемы стабильности водных растворов термолабильных активных компонентов при термической стерилизации, используют стабилизирующие вещества различной химической природы и механизма действия: антиоксиданты, хелатирующие агенты, поверхностно активные вещества, полимеры различной молекулярной массы, карбоновые кислоты, аминокислоты, аминополиспирты и другие соединения.

Эффективность применения стабилизатора зависит от его концентрации, химической структуры активных компонентов, температуры и времени стерилизации, лекарственной формы, а подбор стабилизатора из ряда фармацевтически приемлемых соединений в большинстве случаев является эмпирическим процессом.

При этом известно, что в процессе производства и хранения в готовом препарате происходит хими- 3 043247 ческое взаимодействие активных компонентов, упаковочных материалов и вспомогательных веществ между собой и может идти в непредсказуемом направлении с образованием различных нежелательных примесей. Такие взаимодействия с образованием примесей неизвестной структуры могут привести не только к побочным реакциям при применении препарата, но к изменению его фармакологической активности.

Кроме того, для композиций, содержащих термолабильные компоненты, применение стандартных режимов стерилизации приводят к деградации ингредиентов с образованием неприемлемого уровня продуктов разложения. С другой стороны, низкотемпературная термическая обработка ниже 110°С не допускается (ЕМА 366428/2018 Guideline on the sterilisation of the medicinal product, active substance, excipient and primary container) и для термолабильных препаратов регламентируется только стерилизующая фильтрация и последующий розлив в асептических условиях. Данный способ возможно использовать только в случае абсолютной невозможности применения термической стерилизации.

Таким образом, известные способы получения композиций, содержащих термолабильные компоненты, не могут считаться оптимальными, так как при их применении выявлен ряд проблем, которые могут оказать негативное влияние при использовании готовых растворов в качестве лекарственного препарата.

Задачей настоящего изобретения является разработка оптимального способа получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве активного компонента 1дезокси-1-N-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитол, который обеспечит сокращение количества примесей в готовом лекарственном препарате и увеличение его срока годности.

Поставленная задача решается тем что, в способе получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве активного вещества 1-дезокси-1-М-[метил-(2-акридон-9он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитол, путем растворения активного вещества в воде для инъекций, перемешивания, фильтрования раствора через стерилизующий фильтр, розлива его в стерильные емкости, согласно изобретению, в раствор в качестве вспомогательного компонента добавляют N-метилглюкамин в количестве не более 0,05 мас.% или N-этилглюкамин в количестве не более 0,2 мас.%, перемешивают до полного растворения компонентов при температуре 55-60°С, затем полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, а после этапа фильтрования и розлива, подвергают его термической стерилизации при температуре 121°С, в течение 815 мин.

В заявленном изобретении N-этилглюкамин и N-метилглюкамин используется как взаимозаменяемые химические вещества и являются альтернативными признаками, поскольку они имеют общий существенный структурный элемент, обладают подобными свойствами и оказывают аналогичное действие на активное вещество.

Отличиями заявляемого способа от способа-прототипа являются:

использование фармацевтически приемлемых вспомогательных компонентов из группы гидроксиаминосоединений, в частности: N-метилглюкамина в новом количественном диапазоне и Nэтилглюкамина в установленном количественном диапазоне, новые температурные режимы на этапе растворения компонентов и после него, применение термической стерилизации при сокращении времени экспозиции более, чем в 2 раза.

Как показал опыт №4, применение предложенного способа с заявленными вспомогательными веществами и температурными режимами существенно влияет на снижение количества примесей в готовом препарате.

Заявляемые количества вспомогательных компонентов N-метилглюкамина и N-этилглюкамина обусловлены тем, что при данном их содержании в растворе 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола в процессе приготовления и выдержки раствора при температуре 5560°С не происходит разложения активного компонента и существенного прироста родственных примесей.

Кроме того, низкое содержание N-метилглюкамина и N-этилглюкамина в композиции, в отличие от прототипа, не оказывают солюбилизирующее действие на уже образовавшиеся плохо растворимые в воде примеси и в процессе охлаждения раствора до температуры 22-25°С и при последующей фильтрации, они удаляются, не попадая в готовую лекарственную форму препарата.

Применение термической стерилизации раствора, полученного вышеописанным способом, при сокращении времени экспозиции при 121°С в течение 8-15 мин в сочетании с добавлением вспомогательных компонентов, дополнительно влияет на снижение уровня содержания примесей.

В связи с этим, при длительном хранении лекарственного препарата, полученного согласно заявленному способу, ввиду низкого содержания в растворе квазистабильных мицелл не происходит выпадения осадка плохо растворимых в воде соединений, что позволяет установить срок хранения готового препарата не менее 5 лет.

Предложенный способ получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве активного вещества 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-илацетат)]аммоний-D-глюцитол, является оптимальным по сравнению со способом-прототипом, так как он

- 4 043247 обеспечивает сокращение времени термической стерилизации более, чем вдвое, а также использование взаимозаменяемых вспомогательных компонентов: N-метилглюкамина в меньших количествах или Nэтилглюкамина, что позволяет существенно снизить затраты энергии и сырья. При этом достигнуто снижение уровня примесей в препарате при его производстве и хранении, а также увеличение срока годности препарата при хранении до 5 лет.

Различные варианты получения лекарственного препарата согласно заявляемому способу представлены в примерах 15-27.

Краткое описание изобретения

Опыт 1.

Изучение влияния термической стерилизации на стабильность водного раствора -дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитол, полученного согласно прототипу, с различным содержанием стабилизатора N-ме-тилглюкамина.

Для изучения влияния термической стерилизации на стабильность водного раствора прототипа готовили образцы препарата согласно формуле изобретения прототипа с несколькими значениями содержания стабилизатора из диапазона 0,05-1,0 мас.%, предложенного в формуле.

Примеры приготовления образцов по прототипу

Пример 1.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 1,00 кг (1,00 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 120°С в течение 30 мин.

Пример 2.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,50 кг (1,00 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 120°С в течение 30 мин.

Пример 3. В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1дезокси-1-N-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,050 кг (0,050 мас.%) Nметилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 120°С в течение 30 мин.

Полученные (примеры 1-3) образцы препарата хранили в климатической камере (Binder KBF 240) при температуре 30°С в течение 5 лет (60 месяцев). Для оценки качества образцов при хранении 1 раз в месяц ампулы просматривали на наличие взвеси, осадка и механических включений, а 1 раз в 3 месяца определяли количественное содержание родственных примесей.

Испытание образцов препаратов на наличие осадка и механических включений проводили в отражённом свете путем просмотра на фоне черного и белого матового экрана с интенсивностью освещения около 3000-3500 люкс.

Содержание акридона, N-метилакридона и неидентифицированных родственных примесей определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Государственная фармакопея Российской Федерации 14 издание). В качестве подвижной фазы использовали смесь 0,05 М раствора калия дигидрофосфата (рН от 2,7 до 2,9), ацетонитрила для хроматографии и метанола для жидкостной хроматографии в соотношении 65:30:5. Длина волны детектирования - 254 нм. Хроматорграфическая колонка Zorbax SB-C8,150x3,0 мм, 5 мкм или аналогичная (хроматограф Simadzu LC 20, Япония).

С учётом максимальной суточной дозы препарата 900 мг 1-дезокси-1-М-[метил-(2-акридон-9-он-10ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола (2 ампулы по 2 мл 22,5% раствора), в соответствии с мировой практикой (Руководство ICH Q3B (R2) Impurities in new drug products, June 2006, Государственная фармакопея Российской Федерации 14 издание) содержание единичной неидентифицированной примеси в препарате должно быть не более 0,20%, содержание суммы неидентифицированных примесей должно быть не >0,50%.

При указанной дозировке препарата при содержании единичной неидентифицированной примеси более 0,2% требуется ее идентификация (установление структуры) и квалификация (исследование ее токсикологической безопасности, канцерогенности, мутагенности, тератогенности), что существенно усложняет, удорожает и замедляет процесс разработки препарата и наличие такого уровня примесей потенциально небезопасно для пациентов, особенно при длительном курсе применения.

- 5 043247

Таким образом, согласно ICH Q3B (R2) Impurities in new drag products в качестве критерия приемлемости стабильности композиции принято, что содержание единичной неидентифицированной примеси в препарате при заявляемом способе получения должно быть не более 0,20%, а содержание суммы неидентифицированных примесей должно быть не более 0,50% на протяжении всего срока годности. Наличие осадка и видимых механических включений не допускается. Образцы, полученные по прототипу, имеющие превышение по этим показателям, считались не прошедшими испытания.

Данные по стабильности прототипа при длительном хранении полученных образцов по примерам 1-3 представлены в табл. 1.

Таблица 1

Данные по стабильности при хранении полученных образцов по примерам 1-3 с применением термической стерилизации в режиме 120°С в течение 30 мин

Показатель качества	Содержание стабилизатора, масс%
0,05	0,5	1,0
Срок появления осадка, мес	36	38	46
Срок накопления неприемлемого уровня примесей, мес > 0,2 % единичной неидентифицировааной примеси или > 0,5 % суммы неидентифицированных примесей	18	3	0

Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о невозможности использования режима стерилизации в режиме 120°С в течение 30 мин и заявленного стабилизатора N-метилглюкамина в указанном в прототипе диапазоне, так как кроме выпадения осадка после 36 месяцев хранения (содержание Nметилглюкамина 0,05 мас.%) происходит еще и критически значимое накопление единичных неидентифицированных примесей более 0,20% и суммы неидентифицированных примесей >0,50% при содержании стабилизатора в препарате 0,05 мас.% уже через 18 месяцев, при содержании 0,5 мас.% через 3 месяца, а при его содержании 1,0 мас.% критически значимое образование примесей образуется сразу после стерилизации. Так же обнаруживались значительные количества акридона в образцах, полученных по примерам 2 и 3 с содержанием N-метилглюкамина 0,5 и 1,0%.

Таким образом, способ получения, описанный в прототипе, не позволяет обеспечить стабильность препарата при хранении в рамках современных требований к качеству лекарственных препаратов и требует существенных изменений.

Опыт 2. Изучение способов получения раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акри-дон-9-он-10-илацетат)]аммоний-D-глюцитола с использованием различных альтернативных методов и стабилизаторов.

Для стабилизации водных растворов прототипа полученных по примерам 1-3 (опыт 1) дополнительно были приготовлены образцы препарата с добавлением различных стабилизаторов в рекомендуемых в фармацевтической практике количествах, а также с применением способа барботирования раствора инертными газами (азот, гелий) и заполнением воздушного пространства в ампулах ими с целью вытеснения кислорода из раствора и предотвращения процессов окисления при хранении. Режим термической стерилизации был также использован 120°С в течение 30 мин.

Все образцы полученных растворов закладывали на ускоренное старение при температуре 40°С в климатическое оборудование (Binder KBF 240) на 6 месяцев. Для оценки качества образцов сразу после их получения и при хранении 1 раз в месяц ампулы просматривали на наличие взвеси, осадка и механических включений и определяли количественное содержание родственных примесей.

Испытание образцов препаратов на наличие взвеси, осадка и механических включений проводили в отражённом свете путем просмотра на фоне черного и белого матового экрана с интенсивностью освещения около 3000-3500 люкс.

Содержание родственных примесей определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Государственная фармакопея Российской Федерации 14 издание). В качестве подвижной фазы использовали смесь 0,05 М раствора калия дигидрофосфата (рН от 2,7 до 2,9), ацетонитрила для хроматографии и метанола для жидкостной хроматографии в соотношении 65:30:5. Длина волны детектирования - 254 нм. Хроматорграфиче-ская колонка Zorbax SB-C8,150x3,0 мм, 5 мкм или аналогичная (хроматограф Simadzu LC 20, Япония).

Применение инертных газов не дало положительных результатов на стабильность раствора 1дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, так как в условиях ускоренного старения в образцах наблюдалось существенное нарастание (более 0,5%) уровня суммы неидентифицированных примесей. Барборирование растворов углекислым газом уже на стадии приготовления приводило к образованию осадков.

Добавление к раствору 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола таких антиоксидантов, солей сернистой кислоты (натрия сульфит (Na₂SO₃) натрия метабисульфит (Na2S2O3), натрия бисульфит (NaHSO3), а также уни-тиола, ронгалита, тиомочевины, метионина не приводило к стабилизации раствора 1-дезокси- 1-N-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола. Также наблюдалось выпадение осадка и существенный рост родственных примесей при ускоренном старении.

- 6 043247

Добавление хелатирующих агентов - этилендиаминтетрауксусной кислоты и ее различных солей приводило к образованию еще большего количества родственных примесей 1-дезокси-1-N-[метил-(2акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-О-глюцитола при хранении.

Данные эксперименты свидетельствуют, что деградация раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола идет не по окислительно-восстановительному пути, а использованное оборудование и исходные субстанции не вносят существенных загрязнений с высоким окислително-восстановительным потенциалом.

Для стабилизации раствора на основе 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-илацетат)]аммоний-D-глюцитола были использованы карбоновые кислоты из ряда: этановая кислота, 2гидроксибутандиовая кислота, 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоновая кислота, бутандиовая, трансбутендиовая кислота, 2,3-дигидроксибутандиовая кислота, 2-гидрокси-пропановая кислота, однако это также не привело к положительному результату.

Применение таких аминокислот как пролин, глицин, треонин, глутамин существенно увеличивало уровень родственных примесей сразу после стадии стерилизации, а при добавлении стабилизатора аргинина в раствор 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола неожиданно образовывался осадок еще на стадии его приготовления. Установлено, что в осадок выпадает нерастворимый в воде аргинина акридонацетат.

Применение лизина и гистидина в качестве стабилизаторов раствора 1-дезокси-1-М-[метил-(2акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-О-глюцитола при стерилизации в режиме 120°С в течение 30 мин наоборот показывало эффективность, но только незначительную тенденцию к замедлению образования уровня родственных примесей при хранении.

Применение поверхностно активных веществ, полимеров и полиспиртов (твин 80, поливинилпирролидоны, полиэтиленгликоли, поливиниловые спирты различной молекулярной массы, триацетин, глицерин, пропиленгликоль) не дали положительного результата на снижение уровня родственных примесей в растворе 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола.

Также было изучено влияние в качестве стабилизаторов соединений из ряда трисоксиметиламинометан (ТРИС), этаноламин, диэтаноламин, N-этилглюкамин, октаноил-N-Me-тилглюкамин на влияние на стабильность раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола при способе получения с режимом стерилизации 120°С в течение 30 мин.

Октаноил-N-метилглюкамин при добавлении в раствор 1-дезокси-1-N-[метил-(2-ак-ридон-9-он-10ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола образовывал эмульсию и применение его в качестве стабилизатора для раствора для внутривенного введения не представлялось возможным. Использование таких гидроксиаминосоединений трисоксиметиламинометан (ТРИС), этаноламин, диэтаноламин при стерилизации в режиме 120°С в течение 30 мин показало незначительное снижение динамики роста примесей при их содержании в количестве 0,5%, однако при хранении уровень примесей оставался недопустимо высоким и не соответствовал требованиям рекомендованным ICH Q3B (R2) Impurities in new drug products, June 2006. Наиболее значимый эффект был установлен при применении N-этилглюкамина в концентрации 0,2 масс.%, однако уровень родственных примесей к 6 месяцам ускоренного старения составлял около 0,5%.

Таким образом, применение барботирования раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-ак-ридон-9-он-10ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола инертными газами и добавление к раствору различных типов стабилизаторов из ряда антиоксиданты, хелатирующие агенты ПАВы, полимеры различной молекулярной массы, карбоновые кислоты, аминокислоты, аминополиспирты и других с использованием режима стерилизации при 120°С в течение 30 мин не привело к повышению термической устойчивости и стабильности при хранении 1-дезокси-1-N-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола. Во всех образцах, с применением стабилизаторов, описанных выше при хранении наблюдалось выпадение осадков и существенное нарастание уровня единичных и суммы неидентифициро-ванных примесей выше рекомендованных ICH Q3B (R2) Impurities in new drag products, June 2006 значений и требующих идентификации образующихся соединений и детального изучения их токсико-фармакологических характеристик (квалификации).

В образующихся при хранении осадках были идентифицированы акридон и N-мети-лакридон, а в растворах большое количество неидентифицированных примесей, хорошо поглощающих в ультрафиолетовом спектре излучения. В связи с этим провели исследования влияния альтернативных режимов стерилизации.

Опыт 3.

Изучение стабильности раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-аиетат)]аммоний-Dглюцитола при использовании альтернативных режимов стерилизации.

Часто для термолабильных лекарственных препаратов (белки, аминокислоты липо-полисахариды и др.) возможно применение только асептического процесса производства. Но так как асептический розлив препарата без финишной термической стерилизации представляет большой риск возможной микробной контаминации в процесс производства и его использование допускается только в случае однозначной невозможности применения термической стерилизации, были предприняты попытки стерилизации прототипа в альтернативных режимах рекомендованных в мировой практике. В соответствии с современны- 7 043247 ми требованиями (ЕМА 366428/2018 Guideline on the sterilization of the medicinal product, active substance, excipient and primary container), допускается применение температуры стерилизации не ниже 110°С. В связи с этим проведены также исследования влияния режима стерилизации 121°С в течение 8-15 мин и пониженных температурах стерилизации 110 и 115°С с учетом расчета времени стерилизации, гарантирующего термическую стерилизацию эквивалентную при температуре 121°С. Расчеты в соответствии с ЕМА 366428/2018 Guideline on the sterilization of the medicinal product, active substance, excipient and primary container показали, что для гарантированной стерилизации исследуемых образцов возможно использовать следующие режимы: 115°С 60 мин и 110°С 189 мин.

Для изучения влияния данных режимов стерилизации готовили образцы композиции согласно прототипу, но с альтернативными режимами стерилизации (примеры 4-15):

Пример 4.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 1,00 кг (1,00 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 121°С в течение 8 мин.

Пример 5.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,50 кг (0,50 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 121°С в течение 8 мин.

Пример 6.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,050 кг (0,050 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 121°С в течение 8 мин.

Пример 7.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 1,00 кг (1,00 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 121°С в течение 15 мин.

Пример 8.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,50 кг (0,50 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 121°С в течение 15 мин.

Пример 9.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,050 кг (0,050 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 121°С в течение 15 мин.

Пример 10.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 1,00 кг (1,00 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 115°С в течение 60 мин.

Пример 11.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до пол- 8 043247 ного растворения компонентов, затем добавляют 0,50 кг (0,50 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа

Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 115°С в течение 60 мин.

Пример 12.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,050 кг (0,050 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 115°С в течение 60 мин.

Пример 13.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 1,00 кг (1,00 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 110°С в течение 189 мин.

Пример 14.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,50 кг (0,50 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 110°С в течение 189 мин.

Пример 15.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 70,0 л воды для инъекций, 22,5 кг 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов, затем добавляют 0,050 кг (0,050 мас.%) N-метилглюкамина и воду для инъекций до получения объема 100 л. Полученный раствор фильтруют через стерилизующий фильтр типа Палл с диаметром пор 0,22 мкм и разливают в стерильные ампулы объемом 1, 2 и 5 мл, запаивают. Ампулы стерилизуют паром под давлением при температуре 110°С в течение 189 мин.

Полученные по примерам 4-15 образцы хранили в климатической камере (Binder KBF 240) при температуре 30°С в течение 5 лет (60 месяцев). Для оценки качества образцов при хранении 1 раз в месяц ампулы просматривали на наличие взвеси, осадка и механических включений, а 1 раз в 3 месяца определяли количественное содержание родственных примесей.

Испытание образцов препаратов на наличие взвеси, осадка и механических включений проводили в отражённом свете путем просмотра на фоне черного и белого матового экрана с интенсивностью освещения около 3000-3500 люкс.

Содержание акридона, N-метилакридона и неидентифицированных родственных примесей определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Государственная фармакопея Российской Федерации 14 издание). В качестве подвижной фазы использовали смесь 0,05 М раствора калия дигидрофосфата (рН от 2,7 до 2,9), ацетонитрила для хроматографии и метанола для жидкостной хроматографии в соотношении 65:30:5. Длина волны детектирования - 254 нм. Хроматорграфическая колонка Zorbax SB-C8,150x3,0 мм, 5 мкм или аналогичная (хроматограф Simadzu LC 20, Япония).

Дополнительно делали посев образцов на тиогликолевую (контроль контаминации грибами) и соево-казеиновую (контроль контаминации бактериями) питательные среды для тестирования на стерильность и инкубировали при температуре 30-35 и 20-25°С соответственно.

Таблица 2

Данные по стабильности при хранении полученных образцов по примерам 4-6 с применением термической стерилизации в режиме 121°С в течение 8 мин

Показатель качества	Содержание стабилизатора, масс%
0,05	0,5	1,о
Срок появления осадка, мес	-	32	52
Срок накопления неприемлемого уровня примесей, мес > 0,2 % единичной неидентифицировааной примеси или > 0,5 % суммы неидентифицированных примесей	-	6	3

- осадок не обнаруживается или уровень примесей приемлемый.

- 9 043247

Таблица 3

Данные по стабильности при хранении полученных образцов по примерам 7-9 с применением термической стерилизации в режиме 121°С в течение 15 мин

Показатель качества	Содержание стабилизатора, масс%
0,05	0,5	1,0
Срок появления осадка, мес	-	30	48
Срок накопления неприемлемого уровня примесей, мес > 0,2 % единичной неидентифицировааной примеси или > 0,5 % суммы неидентифицированных примесей	-	3	0

- осадок не обнаруживается или уровень примесей приемлемый Таблица 4 Данные по стабильности при хранении полученных образцов по примерам 10-12 с применением термической стерилизации ___________________в режиме 115°С 60 мин_________________

Показатель качества	Содержание стабилизатора, масс%
0,05	0,5	1,0
Срок появления осадка, мес		25	42
Срок накопления неприемлемого уровня примесей, мес > 0,2 % единичной неидентифицировааной примеси или > 0,5 % суммы неидентифицированных примесей	-	3	0

Таблица 5

Данные по стабильности при хранении полученных образцов по примерам 13-15 с применением термической стерилизации в режиме 110°С 189 мин

Показатель качества	Содержание стабилизатора, масс%
0,05	0,5	1,о
Срок появления осадка, мес	12	26	30
Срок накопления неприемлемого уровня примесей, мес > 0,2 % единичной неидентифицировааной примеси или > 0,5 % суммы неидентифицированных примесей	3	0	0

При изучении стабильности при стерилизации и хранении образцов растворов 1-дез-окси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола, полученных по примерам 4-15 (табл. 2-5) установлено, что применение режима стерилизации 110°С в течение 189 мин не дало положительного результата во всем диапазоне концентраций стабилизатора, заявленном в прототипе, так как уровень единичных неидентифицированных примесей превышал допустимые значения сразу после стерилизации (0,5 и 1,0 мас.% стабилизатора) или после 3 месяцев хранения (0,05 мас.% стабилизатора), а использование режимов 115°С в течение 60 мин, 121°С в течение 8 мин и 121°С в течение 15 мин дало незначительный результат только при минимальном содержании стабилизатора - 0,05 мас.%, содержание единичных неидентифицированных примесей к концу срока хранения (60 месяцев) составило около 0,15%, а суммы неидентифицированных примесей около 0,45%, что представляет риск выхода за пределы критериев приемлемости (0,2 и 0,5% соответственно) при промышленном производстве препарата нормируемые ICH Q3B (R2) Impurities in new drag products при возможных отклонениях от температурных и временных режимов технологического процесса стерилизации. При этом все образцы, полученные по примерам 4-15 выдержали тест на стерильность.

Таким образом впервые экспериментально установлено, что на устойчивость водного раствора 1дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола к термическому воздействию в процессе стерилизации критическое влияние оказывает не столько температура, сколько длительность процесса стерилизации. Более мягкий температурный режим 110°С в течение 189 мин показал худшие результаты, по сравнению с 115°С в течение 60 мин и 121°С в течение 8 или 15 мин, что подтверждает, что критическим параметром стерилизации, влияющим на деструкцию 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-П-глюцитола и образование родственных примесей является именно время стерилизации.

Режимы стерилизации 121°С, 15 мин и 121°С, 8 мин являются предпочтительными для данной композиции, но не гарантирующими низкий уровень примесей при длительном хранении, граничащий с предельно допустимыми значениями, что указывает на недостаточный уровень безопасности композиции при содержании стабилизатора в диапазоне концентраций 0,05-1,0 мас.%. Применение режима стерилизации при 115°С в течение 60 мин является нецелесообразным ввиду существенного удлинения технологического процесса и повышенных энергозатрат на стадии стерилизации.

В качестве возможного варианта стабилизации раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-αкридон-9-он-10ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола были исследованы режимы стерилизации с меньшим временем температурной экспозиции по сравнению с прототипом 121°С в течение 15 мин и 121°С в течение 8 мин в сочетании с добавлением вспомогательных компонентов N-метилглюкамина и N-этилглюкамина в количе

- 10 043247 стве 0,5 мас.% и менее (Опыт 4).

Опыт 4.

Изучение влияния режимов стерилизации растворов прототипа при температурах 121°С в течение 8 и 15 мин в сочетании с добавлением вспомогательных компонентов N-метилглюкамина и Nэтилглюкамина в количестве 0,5 мас.% и менее.

Готовили растворы 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола с различным содержанием вспомогательных компонентов в широком диапазоне концентраций, по примерам 16-27 и подвергали термической стерилизации в режимах 121°С в течение 8 мин и 121°С в течение 15 мин. Ампулы с композициями закладывали в климатическое оборудование (Binder KBF 240) для изучения стабильности при длительном хранении при температуре 30°С в течение 5 лет (60 месяцев). Для оценки качества образцов при хранении в точках наблюдения 0, 6, 12, 24, 36, 48, 60 проводили анализ на наличие взвеси, осадка и механических включений, определяли количественное содержание родственных примесей.

Испытание образцов препаратов на наличие взвеси, осадка и механических включений проводили в отражённом свете путем просмотра на фоне черного и белого матового экрана с интенсивностью освещения около 3000-3500 люкс.

Содержание акридона, N-метилакридона и неидентифицированных родственных примесей определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Государственная фармакопея Российской Федерации 14 издание), В качестве подвижной фазы использовали смесь 0,05 М раствора калия дигидрофосфата (рН от 2,7 до 2,9), ацетонитрила для хроматографии и метанола для жидкостной хроматографии в соотношении 65:30:5. Длина волны детектирования - 254 нм. Хроматорграфическая колонка Zorbax SB-C8,150x3,0 мм, 5 мкм или аналогичная (хроматограф Simadzu LC 20, Япония).

Осуществление заявляемого способа получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве активного вещества 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-илацетат)]аммоний-Д-глюцитол, может быть проиллюстрировано примерами 16-27.

Пример 16.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,50 мас.% N-метилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объемом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 17.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,20 мас.% N-метилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 18.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,05 мас.% N-метилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°C, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 19.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,03 мас.% N-метилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 20.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-ов-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,02 мас.% N-метилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Получен- 11 043247 ный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 21.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,01 мас.% N-метилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 22.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,50 мас.% N-этилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 23.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,20 мас.% N-этилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 24.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,05 мас.% N-этилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 25.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,03 мас.% N-этилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 26.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,02 мас.% N-этилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

Пример 27.

В аппарат с мешалкой ёмкостью 100 л загружают 50,0 л воды для инъекций и доводят ее температуру до 55-60°С, загружают 22,5 кг 1-дезокси-1-N-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитола и добавляют 0,01 мас.% N-этилглюкамина. Далее доводят объем раствора водой для инъекций до 100 л и проводят выдержку при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, фильтруют через стерилизующий фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, разливают в ампулы объёмом 2 или 5 мл и запаивают. Полученные ампулы подвергают термической стерилизации паром под давлением.

- 12 043247

Таблица 6

Данные по стабильности при хранении раствора 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола

- препарат нестабилен (наблюдается наличие взвеси или осадка и/или не соответствует критериям приемлемости по уровню единичной и суммы неидентифицированных примесей).

+ препарат стабилен (соответствует критериям приемлемости по уровню единичной и суммы неидентифицированных примесей).

Таблица 7

Данные по стабильности при хранении раствора 1-дезокси-1-N[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола

- препарат нестабилен (наблюдается наличие взвеси или осадка и/или не соответствует критериям приемлемости по уровню единичной и суммы неидентифицированных примесей).

+ препарат стабилен (соответствует критериям приемлемости по уровню единичной и суммы неидентифицированных примесей).

В результате проведенных исследований было впервые установлено, что при использовании термической стерилизации паром под давлением раствора 1-дезокси-1-М-[метил-(2-акридон-9-он-10-илацетат)]аммоний-D-глюцитола в режимах 121°С в течение 8 мин и 121°С в течение 15 мин и дополнительном введении вспомогательных компонентов: N-этилглюкамина в количестве не более 0,2 мас.% и N-метилглюкамина в количестве не более 0,05 мас.%, оказывает существенное влияние на термическую устойчивость и стабильность при хранении водного раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10ил-ацетат)]аммоний-D-глюцитола в течение 5 лет.

Таким образом, авторами настоящего изобретения получен оптимальный режим термической стерилизации водного раствора 1 -дезокси-1 -N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-О-глюцитола в режиме 121°С в течение 8-15 мин, а также выявлен факт влияния заявленных вспомогательных компонентов на термическую устойчивость водного раствора 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-илацетат)]аммоний-D-глюцитола в соответствии с современными требованиями (Руководство ICH Q3B (R2) Impurities in new drag products, June 2006). При этом содержание вспомогательных компонентов подобрано опытным путем до получения стабильных водных растворов, а именно: содержание Nэтилглюкамина в количестве не более 0,2 мас.% и N-метилглюкамина - в количестве не более 0,05 мас.%.

Заявленный способ получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве активного вещества 1-дезокси-1-N-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]аммоний-Dглюцитол, с использованием режима стерилизации 121°С в течение 8-15 мин и добавлением вспомогательных компонентов N-метилглюкамина в меньших количествах по сравнению с прототипом и Nэтилглюкамина, обеспечивает сокращение времени термической стерилизации более чем вдвое при этом достигается существенное снижение уровня образования примесей при производстве и хранении, что позволило увеличить срок годности препарата при хранении до 5 лет.

Claims (1)

1. Способ получения лекарственного препарата для парентерального применения, содержащего в качестве активного вещества 1 -дезокси-1 -Ы-[метил-(2-акридон-9-он- Ю-ил-ацетат)]аммоний-О-глюцитол, путем растворения активного вещества в воде для инъекций, перемешивания, фильтрования раствора через стерилизующий фильтр, розлива его в стерильные емкости, отличающийся тем, что в раствор в качестве вспомогательного компонента добавляют N-метилглюкамин в количестве не более 0,05 мас.% или N-этилглюкамин в количестве не более 0,2 мас.%, перемешивают до полного растворения компонентов при температуре 55-60°С, затем полученный раствор охлаждают до температуры 22-25°С, а после этапа фильтрования и розлива, подвергают его термической стерилизации при температуре 121 °C в течение 8-15 мин.