EA038994B1 - Способы лечения таупатии - Google Patents

Способы лечения таупатии Download PDF

Info

Publication number
EA038994B1
EA038994B1 EA201690898A EA201690898A EA038994B1 EA 038994 B1 EA038994 B1 EA 038994B1 EA 201690898 A EA201690898 A EA 201690898A EA 201690898 A EA201690898 A EA 201690898A EA 038994 B1 EA038994 B1 EA 038994B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
tau protein
amino acid
tau
seq
Prior art date
Application number
EA201690898A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201690898A1 (ru
Inventor
Ирэн Грисволд-Преннер
Грэм Пэрри
Original Assignee
Айпириэн, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Айпириэн, Инк. filed Critical Айпириэн, Инк.
Publication of EA201690898A1 publication Critical patent/EA201690898A1/ru
Publication of EA038994B1 publication Critical patent/EA038994B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

Изобретение относится к способам лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума путем введения индивидууму антитела к тау-белку. Предложены также способы лечения черепно-мозговой травмы и способы лечения инсульта у индивидуума путем введения индивидууму антитела к тау-белку.

Description

Настоящая заявка испрашивает преимущество приоритета по предварительной заявке США на патент 61/909965 (поданной 27 ноября 2013 г.), которая включена в данное описание посредством отсылки.
Предшествующий уровень техники
Ассоциированный с микротрубочками тау-белок (protein Tau) присутствует в больших количествах в центральной нервной системе и синтезируется, в основном, нейронами.
Основная функция тау-белка состоит в стабилизации микротрубочек. Шесть изоформ тау-белка существуют в мозге взрослого человека; изоформы Tau являются продуктами альтернативного сплайсинга одного гена.
Таупатии представляют собой класс нейродегенеративных заболеваний, возникающих вследствие патологической агрегации тау-белка в так называемых нейрофибриллярных сплетениях (neurofibrillary tangles (NFT)) в головном мозге. Некоторые примеры таупатий включают лобно-височную деменцию (frontotemporal dementia (FTD)), болезнь Альцгеймера, прогрессирующий надъядерный паралич, кортико-базальную дегенерацию и дегенерацию лобно-височной доли.
Существует потребность в данной области техники в способах лечения таупатий.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к способам лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума.
Соответственно, в одном аспекте обеспечиваются способы лечения острой таупатии у индивидуума, причем упомянутый способ включает введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости индивидуума.
В одном из вариантов осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 72 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 48 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 36 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 24 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 12 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного таубелка во внеклеточной жидкости в течение 8 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 7 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 4 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 2 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 1 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости в течение 30 мин с начала введения антитела к тау-белку.
В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 10%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 15%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 20%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 25%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 30%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного таубелка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 35%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 40%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 45%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 50%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня сво- 1 038994 бодного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 55%. В другом варианте антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкость по меньшей мере на около 60%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 65%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 70%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 75%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 80%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 85%. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости по меньшей мере на около 90%.
В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости до неопределяемого уровня. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку является эффективным для снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости до нормального уровня. В другом варианте осуществления пониженный уровень свободного тау-белка сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 2 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления пониженный уровень свободного тау-белка сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 5 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления пониженный уровень свободного таубелка сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 10 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления пониженный уровень свободного тау-белка сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 24 ч с начала введения антитела к тау-белку. В другом варианте осуществления пониженный уровень свободного тау-белка сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 7 дней с начала введения антитела к таубелку. В некоторых случаях пониженный уровень свободного тау-белка сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 2 недели с начала введения антитела к тау-белку.
В одном варианте осуществления внеклеточная жидкость представляет собой плазму. В другом варианте осуществления внеклеточная жидкость представляет собой цереброспинальную жидкость. В другом варианте осуществления внеклеточная жидкость представляет собой межклеточную жидкость. В другом варианте осуществления внеклеточная жидкость представляет собой кровь.
Антитело к тау-белку можно вводить любым подходящим способом. Например, антитело к таубелку можно вводить путем подкожного введения, путем интратекального введения или путем внутривенного введения.
В одном из вариантов осуществления антитело к тау-белку вводят в количестве от около 0,1 мг/кг массы тела до около 50 мг/кг массы тела. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку вводят в виде однократной болюсной инъекции. В другом варианте осуществления вводят несколько доз антитела к тау-белку (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 доз). В одном из вариантов осуществления, в котором вводят несколько доз антитела к тау-белку, любые две дозы антитела к тау-белку вводят с интервалом 3 или более дней друг от друга. В другом варианте осуществления, в котором вводят несколько доз антитела к тау-белку, любые две дозы антитела к тау-белку вводят с интервалом 5 или более дней друг от друга. В другом варианте осуществления, в котором вводят несколько доз антитела к тау-белку, любые две дозы антитела к тау-белку вводят с интервалом 7 или более дней друг от друга. В другом варианте осуществления, в котором вводят несколько доз антитела к тау-белку, любые две дозы антитела к таубелку вводят с интервалом 2 или более недель друг от друга. В другом варианте осуществления, в котором вводят несколько доз антитела к тау-белку, любые две дозы антитела к тау-белку вводят с интервалом 4 или более недель друг от друга. В другом варианте осуществления, в котором вводят несколько доз антитела к тау-белку, любые две дозы антитела к тау-белку вводят с интервалом 2 или более месяцев друг от друга.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения острой таупатии у индивидуума, причем данный способ включает введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости (cerebrospinal fluid (CSF)) индивидуума. В одном варианте осуществления минимальная концентрация антитау антитела в цереброспинальной жидкости достигается в течение 1 ч с начала введения антитела к таубелку. В другом варианте осуществления минимальная концентрация анти-тау антитела в цереброспинальной жидкости составляет по меньшей мере 20 нг/мл. В другом варианте осуществления минимальная концентрация анти-тау антитела в цереброспинальной жидкости составляет по меньшей мере 30 нг/мл. В другом варианте осуществления минимальная концентрация анти-тау антитела в цереброспинальной жидкости обеспечивает молярное отношение антитела к тау-белку и Tau в цереброспинальной жидкости, составляющее по меньшей мере 2:1. В другом варианте осуществления минимальная концентрация анти-тау антитела в цереброспинальной жидкости обеспечивает молярное отношение антитела к
- 2 038994 тау-белку и Tau в цереброспинальной жидкости, составляющее по меньшей мере 2,5:1. В любом из вариантов осуществления, описанных выше или здесь, острая таупатия может представлять собой черепномозговую травму (например, диффузное аксональное повреждение головного мозга, сотрясение мозга, ушибы, повреждение от противоудара, синдром второго воздействия, проникающую рану, синдром тряски младенца и синдром окружения. В любом из вариантов осуществления, описанных выше или здесь, острая таупатия может представлять собой инсульт. В любом из вариантов осуществления, описанных выше или здесь, острая таупатия может представлять собой хроническую травматическую энцефалопатию. Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения черепно-мозговой травмы у индивидуума, причем данный способ включает введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости индивидуума. В некоторых случаях антитело вводят в течение 48 ч после черепно-мозговой травмы. В некоторых случаях антитело вводят в виде однократной дозы. В некоторых случаях антитело вводят в виде многократных доз. В некоторых случаях антитело вводят каждую неделю, каждые 2 недели, каждые 4 недели, каждые 6 недель, каждые 8 недель, каждые 3 месяца или каждые 6 месяцев.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения инсульта у индивидуума, причем данный способ включает введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости индивидуума. В некоторых случаях антитело вводят в течение 48 ч после инсульта. В некоторых случаях антитело вводят в виде однократной дозы. В некоторых случаях антитело вводят в виде многократных доз. В некоторых случаях антитело вводят каждую неделю, каждые 2 недели, каждые 4 недели, каждые 6 недель, каждые 8 недель, каждые 3 месяца или каждые 6 месяцев.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает способ лечения острой таупатии у индивидуума, причем данный способ включает введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня свободного тау-белка во внеклеточной жидкости индивидуума в течение периода времени, достаточного для понижения уровней Άβ во внеклеточной жидкости. В одном из вариантов осуществления антитело вводят в виде однократной дозы. В другом варианте осуществления антитело вводят в виде многократных доз. В другом варианте осуществления антитело вводят каждую неделю, каждые 2 недели, каждые 4 недели, каждые 6 недель, каждые 8 недель, каждые 3 месяца или каждые 6 месяцев. В любом из вариантов осуществления, описанных выше или здесь, уровень Άβ значительно понижается в течение периода времени, составляющего от около 5 дней до около 15 дней с начала введения антитела к тау-белку.
Любое подходящее антитело к тау-белку может быть использовано в способах, описанных в настоящем документе. Примером антитела к тау-белку служит hu-IPN002 (также известное как IPN007 и IPN002 вариант 2), содержащее тяжелую и легкую цепи, имеющие последовательности, показанные в SEQ ID NO: 37 и 41 соответственно, или его антигенсвязывающие фрагменты и варианты. hu-IPN002 представляет собой гуманизированное иммуноглобулиновое (IgG4), моноклональное антитело, которое связывается с внеклеточным Tau.
В одном из вариантов осуществления антитело содержит CDR-домены (от complementaritydetermining regions, определяющие комплементарность области) тяжелой и легкой цепи или вариабельные области hu-IPN002. Соответственно, в одном из вариантов осуществления антитело содержит домены CDR1, CDR2 и CDR3 из VH-области hu-IPN002, имеющей последовательность, показанную в SEQ ID NO:37, и домены CDR1, CDR2 и CDR3 из VL-области hu-IPN002, имеющей последовательность, показанную в SEQ ID NO: 41. В другом варианте осуществления антитело содержит домены CDR1 CDR2 и CDR3 из тяжелой цепи, имеющие последовательности, показанные в SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, и домены CDR1 CDR2 и CDR3 из легкой цепи, имеющие последовательности, показанные в SEQ ID NO: 7, 8 и 9 соответственно. В другом варианте осуществления антитело содержит VH- и/или VLобласти, имеющие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 37 и/или SEQ ID NO: 41 соответственно. В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и/или вариабельную область легкой цепи (VL), кодируемые последовательностями нуклеиновых кислот, показанных в SEQ ID NO: 29 и/или SEQ ID NO: 33 соответственно. В другом варианте осуществления антитело конкурирует за связывание с тем же эпитопом на Tau, что и упомянутые выше антитела, и/или связывается с ним. В другом варианте осуществления антитело имеет по меньшей мере около 90% идентичности аминокислотной последовательности вариабельной области с вышеупомянутыми антителами (например, по меньшей мере около 90%, 95% или 99% идентичности вариабельной области с SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 41).
В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может специфически связываться с эпитопом в пределах аминокислот от 1 до 158 из 2N4R Tau. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может специфически связываться с эпитопом в пределах аминокислот от 2 до 18 тау-белка. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может специфически связываться с эпитопом в пределах аминокислот от 7 до 13 или из числа аминокислот от 25 до 30 тау-белка. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, мо
- 3 038994 жет специфически связываться с эпитопом в пределах аминокислот от 15 до 24 тау-белка. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может специфически связываться с эпитопом в пределах аминокислот от 28 до 126 из 2N4R Tau. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может специфически связываться с эпитопом в пределах аминокислот от 150 до 158 из 2N4R Tau. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может связываться с линейным эпитопом. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может связываться с эпитопом, который находится внутри тау-полипептида, имеющего по меньшей мере 95% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью eTau4, изображенной на фиг. 9.
В другом варианте осуществления антитело к тау-белку, которое вводят, может представлять собой антитело к тау-белку, которое конкурирует за связывание с антителом, которое включает в себя: а) область легкой цепи, содержащую: i) домен CDR1 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 7; (ii) домен CDR2 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 8; и (iii) домен CDR3 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 9; и b) область тяжелой цепи, содержащую: (i) домен CDR1 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 10; (ii) домен CDR2 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 11; и (iii) домен CDR3 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 12. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку представляет собой антитело к тау-белку, которое включает в себя: а) область легкой цепи, содержащую: i) домен CDR1 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 7; (ii) домен CDR2 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 8; и (iii) домен CDR3 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 9; и b) область тяжелой цепи, содержащую: (i) домен CDR1 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 10; (ii) домен CDR2 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 11; и (iii) домен CDR3 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 12. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку представляет собой антитело к таубелку, которое специфически связывается с эпитопом, независимо от фосфорилирования аминокислот внутри эпитопа. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку представляет собой гуманизированное антитело к тау-белку.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 показаны уровни IPN002 в плазме крови и в цереброспинальной жидкости (CSF) после однократной инъекции IPN002 яванским макакам.
На фиг. 2 изображен эффект IPN002 на уровни Tau в CSF (цереброспинальной жидкости) у яванских макак, получавших IPN002.
На фиг. 3 изображен эффект IPN002 на уровни белка Άβ в CSF у яванских макак, получавших IPN002.
На фиг. 4Ά и 4В показаны уровни hu-IPN002 в сыворотке крови не относящихся к человеку приматов (non-human primates, NHP), получавших 5 мг/кг (фиг. 4Ά) или 20 мг/кг (фиг. 4В) hu-IPN002.
На фиг. 5Ά и 5В показаны уровни hu-IPN002 в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг (фиг. 5Ά) или 20 мг/кг (фиг. 5В) hu-IPN002.
На фиг. 6 представлены сводные фармакокинетические данные, изображенные на фиг. 4Ά и 4В и 5Ά и 5В.
На фиг. 7 изображен эффект от введения hu-IPN002 антитела на уровень свободного тау-белка в цереброспинальной жидкости не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг или 20 мг/кг huIPN002 антитела.
На фиг. 8 изображен эффект от введения hu-IPN002 антитела на уровень Άβ40 в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002 антитела.
На фиг. 9 представлена аминокислотная последовательность 2N4R Tau (SEQ ID NO: 72), выровненная с аминокислотной последовательностью eTau4 (SEQ ID NO: 71).
На фиг. 10 изображено наличие фрагментов Tau в CSF у лиц с вероятной хронической травматической энцефалопатией.
На фиг. 11Ά и 11В представлены аминокислотные последовательности VH-области (фиг. 11Ά) и VL-области (фиг. 11В) из IPN001. Определяющие комплементарность области (complementaritydetermining regions (CDR)) выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
На фиг. 12Ά и 12В представлены аминокислотные последовательности VH-области (фиг. 12Ά) и VL-области (фиг. 12В) из IPN002. Определяющие комплементарность области (CDR) выделены жирным шрифтом и подчеркнуты.
На фиг. 13 представлена аминокислотная последовательность варианта 1 VH-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
- 4 038994
На фиг. 14 представлена аминокислотная последовательность варианта 2 VH-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 15 представлена аминокислотная последовательность варианта 3 VH-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 16 представлена аминокислотная последовательность варианта 4 VH-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 17 представлена аминокислотная последовательность варианта 1 VK-области гуманизированного IPN002; и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 18 представлена аминокислотная последовательность варианта 2 VK-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 19 представлена аминокислотная последовательность варианта 3 VK-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 20 представлена аминокислотная последовательность варианта 4 VK-области гуманизированного IPN002 и нуклеотидная последовательность, кодирующая данную аминокислотную последовательность.
На фиг. 21 представлены аминокислотные последовательности различных внеклеточных полипептидов Tau (SEQ ID NO:73-78, соответственно, в порядке появления).
На фиг. 22 изображен уровень hu-IPN002 в сыворотке крови не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 56-го дня после лечения.
На фиг. 23 изображен уровень hu-IPN002 в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 56-го дня после лечения.
На фиг. 24 изображены уровни свободного тау-белка в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 56-го дня после лечения.
На фиг. 25 изображены уровни Άβ40 в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 56-го дня после лечения.
На фиг. 26 изображен уровень hu-IPN002 в сыворотке крови не относящихся к человеку приматов, получавших 0,5 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 57-го дня после лечения.
На фиг. 27 изображен уровень hu-IPN002 в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 0,5 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 57-го дня после лечения.
На фиг. 28 изображены уровни свободного тау-белка в CSF у не относящихся к человеку приматов, получавших 0,5 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 57-го дня после лечения.
На фиг. 29Ά-29Β сравниваются уровни свободного тау-белка в CSF не относящихся к человеку приматов, получавших 0,5 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 57-го дня после лечения.
На фиг. 30A-30B сравниваются уровни Άβ40 в CSF у не относящихся к человеку приматов, получавших 0,5 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 57-го дня после лечения, как оценено с использованием аналитической процедуры собственной разработки.
На фиг. 31Ά-31Β сравниваются уровни Άβ40 в CSF у не относящихся к человеку приматов, получавших 0,5 мг/кг, 2 мг/кг, 5 мг/кг или 20 мг/кг hu-IPN002, вплоть до 57-го дня после лечения, как оценено с использованием анализа Millipore.
На фиг. 32 изображены уровни hu-IPN002 на 1-й день в сыворотке крови не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002.
На фиг. 33 изображены уровни hu-IPN002 на 29-й день в сыворотке крови не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002.
На фиг. 34 изображены уровни hu-IPN002 на 57-й день в сыворотке крови не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002.
На фиг. 35 изображены уровни hu-IPN002 на 1-й день в CSF не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002.
На фиг. 36 изображены уровни hu-IPN002 на 29-й день в CSF не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002.
На фиг. 37 изображены уровни hu-IPN002 на 57-й день в CSF не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002.
На фиг. 38 изображены уровни свободного тау-белка в CSF не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002, вплоть до 112-го дня.
На фиг. 39 изображены уровни свободного тау-белка в CSF не относящихся к человеку приматов,
- 5 038994 которых лечили по схеме многократного дозирования 20 мг/кг hu-IPN002 в дни 1, 29 и 57 (группа 2) по сравнению с контролем (группа 1), вплоть до 169-го дня.
На фиг. 40 изображены уровни Άβ40 в CSF не относящихся к человеку приматов, которых лечили по схеме многократного дозирования hu-IPN002, вплоть до 112-го дня.
На фиг. 41 представлены смоделированные концентрации свободного hu-IPN002 и свободного eTau в сыворотке крови и CSF у людей после 10 mpk внутривенного вливания.
На фиг. 42 представлен предсказанный профиль концентрации в человеческой плазме в зависимости от времени после режима дозирования 700 мг Q4W (пунктирная линия) и 700 мг нагрузочная доза + 280 мг Q4W (пунктирная линия).
На фиг. 43 представлен предсказанный профиль концентрации eTau в человеческой плазме в зависимости от времени после режима дозирования 700 мг Q4W (пунктирная линия) и 700 мг нагрузочная доза + 280 мг Q4W (пунктирная линия).
Определения.
Термины антитела и иммуноглобулин включают антитела или иммуноглобулины любого изотипа, фрагменты антител, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с антигеном, включая, но не ограничиваясь ими, фрагменты Fab, Fv, ScFv и Fd, химерные антитела, гуманизированные антитела, одноцепочечные антитела, биспецифические антитела, а также слитые белки, содержащие антигенсвязывающую часть и белок, не являющийся антителом. Антитела могут быть помечены детектируемой меткой, например, радиоактивным изотопом, ферментом, образующим детектируемый продукт, флуоресцентным белком и т.п. Антитела могут быть дополнительно конъюгированы с другими группами, такими как члены специфично связывающихся пар, например, с биотином (член специфически связывающейся пары биотин-авидин), и т.п. Антитела также могут быть связаны с твердой подложкой, включая, но не ограничиваясь ими, полистирольные чашки или шарики и т.п. Термин также охватывает Fab', Fv, F(ab')2 и/или другие фрагменты антител, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с антигеном, и моноклональные антитела. Антитело может быть одновалентным или бивалентным.
Термин гуманизированный иммуноглобулин, используемый в данном описании, относится к иммуноглобулину, содержащему участки иммуноглобулинов различного происхождения, в котором по меньшей мере один участок содержит аминокислотные последовательности человеческого происхождения. Например, гуманизированное антитело может содержать участки, происходящие из иммуноглобулина нечеловеческого происхождения с необходимой специфичностью, такого как мышиного, и из последовательностей иммуноглобулинов человеческого происхождения (например, химерный иммуноглобулин), соединенных вместе обычными химическими способами (например, синтетическим) или полученных в виде непрерывного полипептида с помощью способов генной инженерии (например, ДНК, кодирующая белковые участки химерного антитела, может быть экспрессирована с получением непрерывной полипептидной цепи). Другим примером гуманизированного иммуноглобулина является иммуноглобулин, содержащий одну или более иммуноглобулиновых цепей, содержащих домен CDR (от complementarity determinimg region, определяющая комплементарность область), происходящий из антитела нечеловеческого происхождения, и каркасную область, происходящую из легкой и/или тяжелой цепи человеческого происхождения (например, CDR-привитые антитела с изменениями в каркасной области или без них). Химерные или CDR-привитые одноцепочечные антитела также охватываются термином гуманизированный иммуноглобулин. См., например, Cabilly et al., U.S. Pat. No. 4816567; Cabilly et al., European Patent No. 0125023 B1; Boss et al., U.S. Pat. No. 4816397; Boss et al., European Patent No. 0120694 B1; Neuberger, M.S. et al., WO 86/01533; Neuberger, M.S. et al., European Patent No. 0194276 B1; Winter, U.S. Pat. No. 5225539; Winter, European Patent No. 0239400 B1; Padlan, E.A. et al., European Patent Application No. 0519596 A1. См. также, Ladner et al., U.S. Pat. No. 4946778; Huston, U.S. Pat. No. 5476786; и Bird, R.E. et al., Science, 242: 423-426 (1988)), применительно к одноцепочечным антителам. Например, гуманизированные иммуноглобулины могут быть получены с использованием синтетических и/или рекомбинантных нуклеиновых кислот для получения генов (например, кДНК), кодирующих желаемую гуманизированную цепь. Например, последовательности нуклеиновых кислот (например, ДНК), кодирующие гуманизированные вариабельные области, могут быть построены с использованием способов мутагенеза с PCR (ПЦР; полимеразная цепная реакция) для изменения последовательностей ДНК, кодирующих человеческую или гуманизированную цепь, такие как ДНК-матрица из предварительно гуманизированной вариабельной области (см., например, Kamman, M., et al., Nucl. Acids Res., 17: 5404 (1989)); Sato, K., et al., Cancer Research, 53: 851-856 (1993); Daugherty, B.L. et al., Nucleic Acids Res., 19(9): 2471-2476 (1991); и Lewis, A.P. and J.S. Crowe, Gene, 101: 297-302 (1991)). Используя те или иные подходящие способы, можно также легко получить варианты. Например, клонированные вариабельные области могут быть подвергнуты мутагенезу, и последовательности, кодирующие варианты с желаемой специфичностью, могут быть выбраны (например, из библиотеки фагов, см., например, Krebber et al., U.S. Pat. No. 5514548; Hoogenboom et al., WO 93/06213, опубликованная 1 апреля 1993)). Фрагменты антитела содержат участок интактного антитела, например антигенсвязывающий сайт или вариабельную область интактного антитела. Примеры фрагментов антитела включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv; диатела; линейные
- 6 038994 антитела (Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995)); одноцепочечные молекулы антитела; и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. Расщепление антител папаином дает два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых Fab''-фрагментами, каждый с одним антигенсвязывающим сайтом, а также остаточный фрагмент Fc, название которого отражает его способность легко кристаллизоваться. Обработка пепсином дает F(ab')2-фрагмент, который имеет два антигенсвязывающих сайта и по-прежнему способен перекрестно связываться к перекрестному связыванию антигена.
Fv представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный сайт распознавания и связывания антигена. Данный участок состоит из димера одного вариабельного домена тяжелой цепи и одного вариабельного домена легкой цепи, тесно связанных нековалентной связью. Именно в такой конфигурации взаимодействуют три CDR каждого вариабельного домена, составляя антигенсвязывающий сайт на поверхности димера VH-VL. В совокупности такие шесть CDR придают антителу антигенсвязывающую специфичность. Однако даже единичный вариабельный домен (или половина фрагмента Fv, содержащая только три CDR, специфичных к антигену) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с меньшим сродством, чем связывающий целиком сайт.
Fab''-фрагмент также содержит константный домен легкой цепи и первый константный домен (first constant domain (CH1)) тяжелой цепи. Fab-фрагменты отличаются от Fab'-фрагментов добавлением нескольких остатков на карбоксильном конце СН1-домена тяжелой цепи, включая один или более цистеиновых остатков из шарнирной области антител. Fab'-SH в данном описании обозначает такие Fab'фрагменты, в которых остаток(и) цистеина в константных доменах содержат свободную тиоловую группу. F(ab')2-фрагменты антител первоначально были получены в виде пары Fab'-фрагментов, содержащих между ними шарнирные цистеины. Известны также другие химические конъюгаты фрагментов антител. Легкие цепи антител (иммуноглобулинов) из любого вида позвоночных могут относиться к одному из двух четко различающихся типов, называемых каппа и лямбда, исходя из аминокислотных последовательностей их константных доменов. В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелых цепей, иммуноглобулины могут относиться к различным классам. Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, а некоторые из них могут дополнительно подразделяться на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2.
Фрагменты антител одноцепочечный Fv или sFv содержат домены VH и VL антитела, причем указанные домены находятся в одной полипептидной цепи. В некоторых вариантах осуществления полипептид Fv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, который позволяет sFv образовывать структуру, требуемую для связывания антигена. См. обзор по sFv: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
Термин диатела относится к небольшим фрагментам антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, причем данные фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи (VH), связанный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) в одной и той же полипептидной цепи (VH-VL). С использованием линкера, который является слишком коротким для того, чтобы позволить спаривание между двумя доменами на одной и той же цепи, домены вынуждены спариваться с комплементарными доменами другой цепи, создавая при этом два антигенсвязывающих сайта. Диатела более подробно описаны, например, в ЕР 404097; WO 93/11161; и Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448. Используемый в настоящем описании термин сродство (аффинность) относится к константе равновесия для обратимого связывания двух агентов (например, антитело и антиген) и выражается в виде константы диссоциации (Kd). Сродство может быть по меньшей мере в 1 раз больше, по меньшей мере в 2 раза больше, по меньшей мере в 3 раза больше, по меньшей мере в 4 раза больше, по меньшей мере в 5 раз больше, по меньшей мере в 6 раз больше, по меньшей мере в 7 раз больше, по меньшей мере в 8 раз больше, по меньшей мере в 9 раз больше, по меньшей мере в 10 раз больше, по меньшей мере в 20 раз больше, по меньшей мере в 30 раз больше, по меньшей мере в 40 раз больше, по меньшей мере в 50 раз больше, по меньшей мере в 60 раз больше, по меньшей мере в 70 раз больше, по меньшей мере в 80 раз больше, по меньшей мере в 90 раз больше, по меньшей мере в 100 раз больше или по меньшей мере в 1000 раз больше, или больше, чем сродство антитела к посторонним аминокислотным последовательностям. Сродство антитела к белку-мишени может составлять, например, от около 100 до около 0,1 нМ, от около 100 нМ до около 1 пМ или от около 100 нМ до около 1 фМ или больше. Используемый в данном описании термин авидность относится к устойчивости комплекса из двух или нескольких агентов к диссоциации после разбавления. Термины иммунореактивный и предпочтительно связывается применяются взаимозаменяемым образом в отношении антител и/или антигенсвязывающих фрагментов.
Термин связывание относится к прямой ассоциации между двумя молекулами благодаря, к примеру, ковалентным, электростатическим, гидрофобным и ионным и/или водородным взаимодействиям, включая такие взаимодействия, как солевые мостики и водные мостики. Подходящее антитело к таубелку специфически связывается с эпитопом на полипептиде Tau. Неспецифическое связывание может относиться к связыванию со сродством, составляющим менее чем около 10-7 М, например связыванию со сродством, составляющим 10-6 М, 10-5 М, 10-4 М и т.д. В настоящем изобретении термин CDR или
- 7 038994 определяющая комплементарность область (complementarity determining region) предназначен для обозначения несмежных антигенсвязывающих сайтов, найденных в вариабельной области полипептидов и тяжелой и легкой цепей. CDR были описаны Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, Sequences of proteins of immunological interest (1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); и MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), где определения включают перекрывания или подмножества аминокислотных остатков при сравнении друг с другом. В любом случае, применение любого из данных определений в отношении CDR антитела или привитых антител либо их вариантов предназначено для использования в рамках термина, который определен и используется в данном описании. Аминокислотные остатки, которые охватывают CDR, определенные в каждой из вышеприведенных работ, для сравнения приведены ниже в табл. 1.
Таблица 1
Определения CDR
Kabat1 Chothia2 MacCallum3
CDR1 VH 31-35 26-32 30-35
CDR2 Vh 50-65 53-55 47-58
CDR3 VH 95-102 96-101 93-101
CDR1 VL 24-34 26-32 30-36
CDR2 Vl 50-56 50-52 46-55
CDR3 VL 89-97 91-96 89-96
1 Нумерация остатков следует номенклатуре Kabat et al., см. выше.
2 Нумерация остатков следует номенклатуре Chothia et al., см. выше. 3 Нумерация остатков следует номенклатуре MacCallum et al., см. выше.
В настоящем изобретении термин каркас в применении к вариабельной области антитела служит для обозначения всех аминокислотных остатков вне доменов CDR в вариабельной области антитела. Каркас вариабельной области обычно представляет собой прерывистую аминокислотную последовательность приблизительно от 100 до 120 аминокислот в длину, но к нему относятся только те аминокислоты, которые находятся вне доменов CDR. Используемый в данном описании термин каркасная область предназначен для обозначения каждого домена каркаса, который отделен областями CDR.
Выделенное антитело представляет собой антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из компонента своего естественного окружения. Примесными компонентами естественного окружения являются материалы, которые будут мешать диагностическим или терапевтическим применениям антитела, и они могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые вещества. В некоторых вариантах осуществления антитело подвергается очистке (1) более чем на 90%, более чем на 95% или более чем на 98% от массы антитела, определенной способом Лоури, например более чем на 99 мас.%, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков Nконцевой или внутренней аминокислотной последовательности с помощью центрифужного секвенатора, или (3) до гомогенности способом электрофореза с додецилсульфатом натрия в полиакриламидном геле (SDS-PAGE) в восстановительных или невосстановительных условиях с использованием окраски Кумасси синим или серебром. Выделенное антитело включает антитело in situ внутри рекомбинантных клеток, так как по меньшей мере один компонент естественного окружения антитела отсутствует. В некоторых случаях выделенное антитело получают посредством по меньшей мере одной стадии очистки. Термин эпитоп или антигенная детерминанта относится к участку на антигене, с которым специфически связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитопы могут быть образованы как из смежных аминокислот, так и несмежных аминокислот, чье соседнее расположение обусловлено третичной структурой белка. Эпитопы, образованные из смежных аминокислот, как правило, сохраняются при воздействии денатурирующих растворителей, тогда как эпитопы, чье образование обусловлено третичной структурой, как правило, теряются при обработке с денатурирующими растворителями. Эпитоп, как правило, включает в себя по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислот в уникальной пространственной конформации. Способы определения того, какие эпитопы связываются данным антителом (т.е. картирование эпитопов), хорошо известны в данной области техники и включают, например, анализы с помощью иммуноблоттинга и иммунопреципитации, в которых перекрывающиеся или смежные пептиды тау-белка тестируются на способность к взаимодействию с данным антителом анти-Tau. Способы определения пространственной конформации эпитопов включают способы, известные в данной области и описанные в настоящем документе, например рентгеновскую кристаллографию и двумерный ядерный магнитный резонанс (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G.E. Morris, Ed. (1996)). Другие способы включают, например, способы картирования эпитопов, такие как рентгеновский анализ кристаллов комплексов антиген:антитело, который обеспечивает атомное разрешение эпитопа. Другие способы контролируют связывание антитела с фрагментами антигена или мутированными вариантами антигена, где потерю связывания, обусловленную модификацией аминокис
- 8 038994 лотного остатка в последовательности антигена, часто рассматривают как указание на эпитопную компоненту. Кроме того, можно также использовать вычислительные комбинаторные способы картирования эпитопов. Данные способы основаны на способности антитела, представляющего интерес, к сродству с выделенными определенными короткими пептидами из комбинаторных фаговых пептидных библиотек. Затем такие пептиды рассматриваются как зонды для установления эпитопа, соответствующего антителу, которое использовали для скрининга пептидной библиотеки. Для картирования эпитопов также были разработаны вычислительные алгоритмы, которые, как было показано, картируют конформационные прерывистые эпитопы.
Термин картирование эпитопов относится к процессу идентификации молекулярных детерминант для распознавания антигена антителом.
Термин связывается с одним и тем же эпитопом, применительно к двум или более антителам, означает, что антитела связываются с одними и теми же, перекрывающимися или охватывающими непрерывными или прерывистыми сегментами аминокислотных остатков. Специалистам в данной области техники понятно, что фраза связывается с одним и тем же эпитопом не обязательно означает, что антитела связываются с точно теми же самыми аминокислотными остатками. Определенные аминокислотные остатки, с которыми связываются антитела, могут отличаться. Например, первое антитело может связываться с сегментом аминокислотных остатков, который полностью охвачен сегментом аминокислотных остатков, связанных со вторым антителом. В другом примере первое антитело связывается с одним или более сегментами аминокислотных остатков, которые существенно перекрывают один или более сегментов, связанных вторым антителом. Для целей данного изобретения считается, что такие антитела связываются с одним и тем же эпитопом.
Соответственно, настоящим изобретением также охватываются антитела, которые связываются с эпитопом на тау-белке, который содержит весь эпитоп или часть эпитопа, распознаваемого конкретными антителами, описанными в настоящем изобретении (например, тот же самый или перекрывающийся участок или участок между или охватывающий участок).
Настоящим изобретением также охватываются антитела, которые конкурируют за связывание с таубелком с антителами, описанными в настоящем документе. Антитела, которые конкурируют за связывание, могут быть идентифицированы с использованием обычных способов. Такие способы включают, например, иммуноферментный анализ, который показывает способность одного антитела блокировать связывание другого антитела с антигеном-мишенью, т.е. анализ конкурентного связывания. Конкурентное связывание определяют в анализе, в котором тестируемый иммуноглобулин ингибирует специфическое связывание эталонного антитела с общим для них антигеном, таким как тау-белок. Известны многочисленные типы анализов конкурентного связывания, например, твердофазный прямой или непрямой радиоиммуноанализ (radioimmunoassay (RIA)), твердофазный прямой или непрямой иммуноферментный анализ (enzyme immunoassay (EIA)), сэндвич-анализ конкуренции (см. Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)); твердофазный прямой EIA биотин-авидин (см. Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)); твердофазный анализ прямого мечения, твердофазный сэндвич-анализ прямого мечения (см. Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); твердофазный RIA с прямым мечением с использованием метки I-125 (см. Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)); твердофазный EIA с прямым мечением биотин-авидин (Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); и RIA с прямым мечением. (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)). Как правило, такой анализ включает использование очищенного антигена, связанного с твердой поверхностью или клетками, несущей(ми) непомеченный тестовый иммуноглобулин или помеченный эталонный иммуноглобулин. Конкурентное ингибирование измеряют путем определения количества метки, связанной с твердой поверхностью или с клетками в присутствии тестового иммуноглобулина. Обычно тестовый иммуноглобулин присутствует в избытке. Обычно, когда конкурирующее антитело присутствует в избытке, оно будет ингибировать специфическое связывание эталонного антитела с общим антигеном по меньшей мере на от 50 до 55%, от 55 до 60%, от 60 до 65%, от 65 до 70%, от 70 до 75% или более. Термины полипептид, пептид и белок, используемые в настоящем описании взаимозаменяемым образом, относятся к полимерной форме аминокислот любой длины, которая может включать в себя генетически закодированные и негенетически закодированные аминокислоты, химически или биохимически модифицированные или дериватизированные аминокислоты, и полипептиды, имеющие модифицированные пептидные остовы. Данный термин включает слитые белки, включая, но не ограничиваясь ими, слитые белки с гетерологичной аминокислотной последовательностью, слитые с гетерологичными и гомологичными лидерными последовательностями, с N-концевыми остатками метионина или без них; иммунологически меченые белки; и т.п.
Используемые в настоящем описании термины обработка, лечение и т.п. относятся к получению желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Данный эффект может быть профилактическим в терминах полного или частичного предотвращения заболевания или его симптома и/или может быть терапевтическим в терминах частичного или полного излечения заболевания и/или неблагоприятного эффекта, связанного с болезнью. Лечение, как используется в настоящем описании, охватывает любое лечение заболевания у млекопитающего, в частности у человека, и включает: (а) предотвращение возникновения заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но
- 9 038994 такой диагноз у него все еще не был поставлен; (b) ингибирование заболевания, т.е. блокирование его развития; и (с) облегчение заболевания, т.е. вызывая его регресс.
Термины индивидуум, субъект, хозяин и пациент, которые используются в настоящем описании взаимозаменяемым образом, относятся к млекопитающему, включая, но не ограничиваясь ими, мышиных (крысы, мыши), не относящихся к человеку приматов, людей, собачьих, кошачьих, копытных (например, непарнокопытных, коров, овец, свиней, коз) и т.д.
Термин терапевтически эффективное количество или эффективное количество означает такое количество антитела к тау-белку, которое при введении млекопитающему или другому субъекту для лечения заболевания достаточно для осуществления лечения заболевания. Терапевтически эффективное количество варьирует в зависимости от антитела к тау-белку, заболевания и его тяжести и возраста, массы и т.д. у подлежащего лечению субъекта.
Используемые в настоящем описании термины фиксированная доза, постоянная доза и постоянная фиксированная доза используются взаимозаменяемым образом и относятся к дозе, которая вводится пациенту без учета массы или площади поверхности тела (body surface area (BSA)) пациента. Фиксированная или постоянная доза, следовательно, не предусмотрена в виде мг/кг, а, скорее, как абсолютное количество агента (например, антитела к тау-белку).
Используемый в описании термин доза, основанная на площади поверхности тела (BSA), относится к дозе (например, антитела к тау-белку), которая корректируется с учетом площади поверхности тела (BSA) отдельного пациента. Основанная на BSA доза может быть предоставлена в виде мг/кг массы тела. Были опубликованы различные расчеты для определения BSA без прямого измерения, наиболее широко используемыми из которых является формула Du Bois (см. Du Bois D., Du Bois E.F. (Jun 1916) Archives of Internal Medicine 17 (6): 863-71; и Verbraecken, J. et al. (Apr 2006). Metabolism - Clinical and Experimental 55 (4): 515-24). Другие примеры формул BSA включают в себя формулу Мостеллер (Mosteller R.D. N. Engl. J. Med., 1987; 317:1098), формулу Хэйкока (Haycock G.B., et al., J. Pediatr 1978, 93:62-66), формулу Gehan and George (Gehan E.A., George S.L., Cancer Chemother Rep. 1970, 54:225-235), формулу Бойда (Current, J.D. (1998), The Internet Journal of Anesthesiology 2 (2); and Boyd, Edith (1935), University of Minnesota. The Institute of Child Welfare, Monograph Series, No. x. London: Oxford University Press), формулу Фудзимото (Fujimoto S., et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968; 5:443-50), формулу Такахира (Fujimoto S., et al., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968; 5:443-50)) и формулу Шлиха (Schlich E., et al., Ernahrungs Umschau 2010; 57:178-183. Биологический образец охватывает разнообразие типов образцов, полученных от индивидуума, и может быть использован в качестве диагностического или следящего анализа. Данное определение охватывает кровь и другие жидкие образцы биологического происхождения, образцы твердых тканей, таких как образец биопсии или культуры тканей или клеток, полученных из них, и их потомство. Определение также включает в себя образцы, которые были изменены каким-либо образом после их приобретения, например путем обработки реагентами, солюбилизации или обогащения для получения определенных компонентов, таких как полинуклеотиды. Термин биологический образец охватывает клинический образец, а также включает в себя клетки в культуре, клеточные супернатанты, клеточные лизаты, сыворотку, плазму, биологическую жидкость и образцы ткани. Термин биологический образец включает в себя мочу, слюну, цереброспинальную жидкость, фракции крови, такие как плазма и сыворотка, и т.п.
Термин острая таупатия, как он использован в настоящем описании, относится к заболеванию, расстройству или состоянию, связанному с внезапным началом аномального повышения уровня Tau (например, повышения по сравнению с нормальным, контрольным уровнем Tau) во внеклеточной жидкости (например, цереброспинальной жидкости (cerebrospinal fluid (CSF)), межклеточной жидкости (interstitial fluid (ISF)), крови или фракции крови (например, фракции крови, такой как сыворотка или плазма крови) субъекта, например, повышение уровня Tau во внеклеточной жидкости после поражения, связанного с физическим нарушением в мозге субъекта и/или связанными с ним тканями центральной нервной системы. Такое поражение, как правило, сопровождается последующим повышением уровня Tau во внеклеточной жидкости (например, CSF, ISF, крови и/или фракции крови (например, в плазме)) в течение относительно короткого периода времени, например в течение нескольких недель или месяцев (или более короткого периода времени). Примеры таких поражений включают, но не обязательно ограничиваются ими, физическую травму (например, травму головы) и инсульт. Неограничивающими примерами острых таупатий являются инсульт, хроническая травматическая энцефалопатия, черепно-мозговая травма, сотрясение мозга, судороги, эпилепсия (например, синдром Драве (Dravet) (также известный как тяжелая миоклоническая эпилепсия младенчества (SMEI)) и острая свинцовая энцефалопатия.
Фраза черепно-мозговая травма (traumatic brain injury) (также известная как ЧМТ, TBI) является одной из форм приобретенного повреждения головного мозга, которое возникает, когда повреждение головного мозга вызывает травма (например, травма головного мозга, вызванная внешней силой). Например, TBI может возникнуть, когда голова внезапно и жестко сталкивается с предметом (например, во время падения, автомобильной аварии, спортивного мероприятия или любого количества различных способов) или когда предмет пронзает череп и входит в мозговую ткань. Оба типа TBI могут привести к ушибу ткани головного мозга, кровоизлиянию в мозг, большим или малым ранам в головном мозге и/или
- 10 038994 повреждению нервов вследствие сдвигающих сил. Мозг может также испытать ряд вторичных типов повреждений, таких как отек, лихорадка, судороги или дисбаланс неврологических химических веществ. Симптомы TBI могут быть легкими, умеренными или тяжелыми, в зависимости от степени повреждения головного мозга. Пациент с легкой TBI может остаться в сознании или может потерять сознание на протяжении нескольких секунд или минут. Другие симптомы легкой TBI включают головную боль, спутанность сознания, дурноту, головокружение, помутнение зрения или усталость глаз, звон в ушах, неприятный привкус во рту, усталость или вялость, изменение режима сна, изменения в поведении или изменения настроения и проблемы с памятью, концентрацией, вниманием или мышлением. Пациент с умеренной или тяжелой TBI может проявлять такие же симптомы, но может также иметь головную боль, которая становится хуже или не проходит, повторяющуюся рвоту или тошноту, конвульсии или судороги, неспособность пробудиться от сна, дилатацию одного или обоих зрачков глаз, невнятную речь, онемение или слабость в конечностях, потерю координации и повышение спутанности сознания, беспокойства или волнения. Примеры черепно-мозговой травмы включают, но не ограничиваются ими, диффузное аксональное повреждение головного мозга, сотрясение мозга, ушибы, повреждение от противоудара, синдром второго воздействия, проникающую рану, синдром тряски младенца и синдром окружения (Locked In Syndrome).
Хроническая таупатия используется в настоящем описании для обозначения в целом состояния, связанного с постепенным началом повышения уровня тау-белка во внеклеточной жидкости субъекта, например, с накоплением тау-белка во внеклеточной жидкости (например, CSF, ISF, крови и/или фракциях крови (например, плазме)) в течение относительно длительного периода времени, например на протяжении нескольких лет, например десятилетиями. Хронические таупатии включают, но не ограничиваются ими, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз/паркинсонизм-деменцию, болезнь аргирофильных зерен, проявляющуюся деменцией, амилоидную ангиопатию британского типа, церебральную амилоидную ангиопатию, кортикобазальную дегенерацию, болезнь Крейтцфельда-Якоба, деменцию боксеров, диффузные нейрофибриллярные клубки с кальцификацией, синдром Дауна, лобновисочную деменцию (frontotemporal dementia (FTD)), лобно-височную деменцию с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, дегенерацию лобной и височной долей, болезнь Герстмана-ШтраусслераШейнкера (Gerstmann-Straussler-Scheinker), болезнь Hallervorden-Spatz, миозит с включёнными тельцами, множественную системную атрофию, миотоническую дистрофию, заболевание Niemann-Pick тип С, не являющееся болезнью Гуама заболевание двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, болезнь Пика (Pick), постэнцефалитический паркинсонизм, прион-протеин-церебральную амилоидную ангиопатию, прогрессивный субкортикальная глиоз, прогрессивный надъядерный паралич, подострый склерозирующий панэнцефалит, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков (Tangle only dementia) и мультиинфарктную деменцию.
Перед тем как перейти к дальнейшему описанию настоящего изобретения, следует иметь в виду, что данное изобретение не ограничивается конкретными описанными в нем вариантами осуществления, поскольку они, конечно, могут варьировать. Также нужно иметь в виду, что применяемая в настоящем описании терминология предназначается только для описания конкретных вариантов осуществления изобретения, но не для ограничения, поскольку сфера действия настоящего изобретения должна ограничиваться только прилагаемой формулой изобретения. Если приводится диапазон значений, то нужно иметь в виду, что каждое промежуточное значение, до десятых долей единицы из нижнего предела, если только из контекста четко не следует иное, между верхней и нижней границей данного диапазона, и любое другое указанное или промежуточное значение в указанном диапазоне охватывается настоящим изобретением. Верхний и нижний пределы данных меньших диапазонов могут быть независимо включены в меньшие диапазоны и также охватываются данным изобретением, с учетом любого конкретно исключенного предела в указанном диапазоне. Если же указанный диапазон включает одну или обе границы, то исключающие их диапазоны также включены в настоящее изобретение. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют те же значения, которые обычно подразумеваются специалистами в области техники, к которой принадлежит данное изобретение. Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в настоящем изобретении, также могут быть использованы на практике или при тестировании настоящего изобретения, предпочтительные способы и материалы описаны ниже. Все приведенные здесь публикации включены в настоящее описание посредством ссылки для изложения и описания способов и/или материалов, в связи с которыми данные публикации приводятся.
Следует отметить, что в настоящем описании и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают в себя значения множественного числа, если только из контекста явно не следует иное. Таким образом, например, ссылка на антитело к тау-белку включает в себя множество таких антител к тау-белку и ссылка на таупатию включает в себя ссылку на одну или более таупатий и их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники, и так далее. Следует также отметить, что формула изобретения может быть составлена таким образом, чтобы она исключала любые необязательные элементы. При этом данное заявление должно служить априорным основанием для использования такой исключающей терминологии, как исключительно, только и т.п., в связи с указанием эле
- 11 038994 ментов формулы либо для использования отрицательных ограничений. Следует понимать, что определенные признаки изобретения, которые для ясности описаны в контексте отдельных вариантов осуществления, также могут быть представлены в сочетании в одном варианте осуществления. Наоборот, различные признаки изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта осуществления, также могут быть представлены отдельно или в любой подходящей подкомбинации. Все комбинации вариантов осуществления, относящихся к настоящему изобретению конкретно охватываются настоящим изобретением и описаны в данном документе, как если бы каждая комбинация была индивидуально и явным образом раскрыта. Кроме того, все подкомбинации различных вариантов осуществления и их элементов также конкретно охватываются настоящим изобретением и описаны в данном документе, как если бы каждая такая подкомбинация была индивидуально и в явном виде раскрыта в настоящем описании.
Рассмотренные в настоящем описании публикации представлены исключительно для их изложения до срока подачи настоящей заявки. При этом ничто не должно истолковываться как признание того, будто настоящее изобретение не может предвосхищать такую публикацию в силу более раннего, чем они, изобретения. Кроме того, приведенные даты публикации могут отличаться от действительных дат публикации, которые могут нуждаться в независимом подтверждении.
Подробное описание
Настоящее изобретение относится к способам лечения таупатии у индивидуума.
Способы лечения таупатии
Настоящее изобретение относится к способам лечения таупатии, например острой таупатии. Способы, как правило, включают введение индивидууму, нуждающемуся в этом, эффективного количества антитела к тау-белку или фармацевтической композиции, содержащей антитело к тау-белку. В некоторых случаях антитело к тау-белку специфически связывается с эпитопом в N-концевой области таубелка. В некоторых случаях антитело к тау-белку специфически связывается с эпитопом в N-концевой области внеклеточного тау-белка (extracellular Tau (eTau)). В некоторых случаях антитело является гуманизированным. В некоторых случаях внеклеточная жидкость является цереброспинальной жидкостью (CSF), интерстициальной жидкостью (ISF), кровью или фракцией крови (например, фракцией крови, такой как сыворотка или плазма). В некоторых случаях таупатией является острая таупатия, такая как инсульт, хроническая травматическая энцефалопатия, черепно-мозговая травма, сотрясение мозга, судороги, эпилепсия (например, синдром Драве (также известный как тяжелая миоклоническая эпилепсия младенчества (Severe Myoclonic Epilepsy of Infancy (SMEI))) и острая свинцовая энцефалопатия. Как описано у Gheyara et al., понижение уровня Tau может оказывать терапевтический эффект при синдроме Драве и других трудноизлечимых генетических эпилепсиях (Ann Neurol. 2014 Sep; 76(3): 443-56). Соответственно, способы, описанные в настоящем описании, могут быть полезны при лечении любой острой таупатии, включая, например, эпилепсии (например, синдром Драве).
В некоторых случаях уровень свободного тау-белка понижается. Свободный тау-белок относится к тау-полипептиду, который не связан с антителом к тау-белку. В одном варианте осуществления свободный тау-белок является внеклеточным тау-белком (eTau). Общий тау-белок включает в себя свободный тау-белок и тау-белок, который связан с анти-тау антителом. В некоторых случаях уровень общего тау-белка понижается. В некоторых случаях уровень связанного тау-белка (тау-белка, связанного с антитау антителом) во внеклеточной жидкости увеличивается.
Настоящее изобретение относится к способам лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума, причем данный способ включает введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для существенного понижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) у индивидуума. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) значительно понижается в течение 36 ч с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых случаях эффективное количество антитела к тау-белку представляет собой количество, которое является эффективным для существенного понижения уровня тау-белка (например, общего таубелка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости в течение 48 ч, 36 ч, в течение 24 ч, в течение 12 ч, в течение 8 ч, в течение 4 ч, в течение 2 ч, в течение 1 ч в течение 30 мин, в течение 15 мин или в течение 5 мин с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых случаях эффективное количество антитела к тау-белку представляет собой количество, которое является эффективным для существенного понижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости в течение от 5 до около 10 мин, от около 10 до около 15 мин, около 15 до около 30 мин, около 30 мин до около 1 ч, от около 1 до около 2 ч, от около 2 до около 4 ч, от около 4 до около 8 ч, от около 8 до около 12 ч, от около 12 до около 24 ч, от около 24 до около 36 ч, от около 24 до около 48 ч или от около 36 до около 48 ч. Значительное понижение уровня тау-белка (например, общего таубелка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в CSF, ISF, крови или фракции крови (например, сыворотке или плазме)) индивидуума представляет собой понижение по меньшей мере на 10%, понижение по меньшей мере на 15%, понижение по меньшей мере на 20%, понижение по мень
- 12 038994 шей мере на 25%, понижение по меньшей мере на 30%, понижение по меньшей мере на 40%, понижение по меньшей мере на 45%, понижение по меньшей мере на 50%, понижение по меньшей мере на 75%, понижение по меньшей мере на 80%, понижение по меньшей мере на 85%, понижение по меньшей мере на 90%, понижение по меньшей мере на 95% или понижение более чем на 90%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости понижается до нормального контрольного уровня (например, около 100 пг/мл). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости понижается до неопределяемого уровня. В некоторых случаях внеклеточной жидкостью является CSF. В других случаях внеклеточной жидкостью является интерстициальная жидкость (ISF). В других случаях внеклеточной жидкостью является плазма. В других случаях внеклеточной жидкостью является цельная кровь. В других случаях внеклеточной жидкостью является сыворотка крови.
Настоящее изобретение относится к способу лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума. Способ обычно включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума. Значительное снижение уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума представляет собой понижение по меньшей мере на 10%, понижение по меньшей мере на 15%, понижение по меньшей мере на 20%, понижение по меньшей мере на 25%, понижение по меньшей мере на 30%, понижение по меньшей мере на 40%, понижение по меньшей мере на 45%, понижение по меньшей мере на 50%, понижение по меньшей мере на 75%, понижение по меньшей мере на 80%, понижение по меньшей мере на 85%, понижение по меньшей мере на 90%, понижение по меньшей мере на 95% или понижение более чем на 90%. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости понижается до нормального контрольного уровня (например, около 100 пг/мл). В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного таубелка) во внеклеточной жидкости понижается до неопределяемого уровня. В некоторых случаях внеклеточной жидкостью является CSF. В других случаях внеклеточной жидкостью является интерстициальная жидкость (ISF). В других случаях внеклеточной жидкостью является плазма. В других случаях внеклеточной жидкостью является сыворотка. В других случаях внеклеточной жидкостью является цельная кровь.
В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где антитело к тау-белку является эффективным для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости в течение 48 ч с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, причем антитело к тау-белку является эффективным, чтобы значительно снизить уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости в течение 48 ч, в течение 36 ч, в течение 24 ч, в течение 12 ч, в течение 8 ч, в течение 4 ч, в течение 2 ч, в течение 1 ч или в течение 30 мин (или менее 30 мин) с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, причем антитело к тау-белку является эффективным, чтобы значительно снизить уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости за период времени от около 15 до около 30 мин, от около 30 мин до 1 ч, от около 1 до около 2 ч, от около 2 до около 4 ч, от около 4 до около 8 ч, от около 8 до около 12 ч, от около 12 до около 24 ч, от около 24 до около 36 ч или от около 36 до около 48 ч.
В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в CSF, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где пониженный уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 2 ч с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в
- 13 038994 количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, причем пониженный уровень таубелка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 2 ч, по меньшей мере 4 ч, по меньшей мере 8 ч, по меньшей мере 12 ч, по меньшей мере 24 ч, по меньшей мере 36 ч, по меньшей мере 48 ч, по меньшей мере 72 ч, по меньшей мере 96 ч, по меньшей мере 120 ч, по меньшей мере 144 ч, по меньшей мере 168 ч или более 168 ч с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к таубелку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего таубелка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, причем пониженный уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) сохраняется в течение периода времени от около 2 до около 4 ч, от около 4 до около 8 ч, от около 8 до около 12 ч, от около 12 до около 24 ч, от около 24 до около 36 ч, от около 36 до около 48 ч, от около 48 до около 72 ч, от около 72 до около 96 ч, от около 96 до около 120 ч, от около 120 до около 144 ч, от около 144 до 168 ч или более 168 ч (например, 8 дней, 10 дней, 14 или более дней 14 дней). В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где пониженный уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) сохраняется в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 7 дней, по меньшей мере 10 дней, по меньшей мере 2 недели или по меньшей мере 4 недели. Например, в некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где пониженный уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) сохраняется в течение периода времени от около 7 дней до около 10 дней, от около 10 дней до 2 недель или от около 2 недель до 4 недель, или более 4 недель (например, 3 месяца, 4 месяца, 6 месяцев или более чем 6 месяцев).
В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в CSF, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где пониженный уровень тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) сохраняется в течение периода времени, который предусматривает уменьшение уровня Άβ во внеклеточной жидкости (например, в CSF, ISF, крови или фракции крови (например, сыворотке или плазме)). Например, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень Άβ во внеклеточной жидкости значительно понижается в течение периода времени от около одного дня до около 25 дней с начала введения антитела к тау-белку. Например, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения уровень Άβ во внеклеточной жидкости значительно понижается в течение периода времени от около 1 дня до около 5 дней, от около 5 дней до около 10 дней, от около 10 дней до около 15 дней, от около 15 дней до 20 дней или от около 20 дней до 25 дней с начала введения антитела к таубелку. Антитело к тау-белку может быть введено для обеспечения непрерывного подавления уровней Άβ в течение долгого времени. Άβ включает в себя Άβ40 и Άβ42. В некоторых случаях понижаются уровни Άβ40. В некоторых случаях понижаются уровни Άβ42. В некоторых случаях понижаются оба уровня Άβ40 и Άβ42. Значительное понижение в уровнях Άβ представляет собой понижение по меньшей мере на 5%, понижение по меньшей мере на 10%, понижение по меньшей мере на 15%, понижение по меньшей мере на 20%, понижение по меньшей мере на 25%, понижение по меньшей мере на 30%, понижение по меньшей мере на 40%, понижение по меньшей мере на 45%, понижение по меньшей мере на 50% или понижение более чем на 50% в уровне Άβ по сравнению с уровнем Άβ в отсутствие введения антитела к тау-белку (например, по сравнению с уровнем Άβ до введения антитела к тау-белку). В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где внеклеточной жидкостью является CSF. В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня таубелка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где внеклеточной жидкостью является ISF. В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к таубелку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего таубелка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где внеклеточной жидко
- 14 038994 стью является плазма.
В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где антитело к тау-белку вводят подкожным введением, например путем подкожной инъекции. В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к таубелку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего таубелка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где антитело к тау-белку вводят путем интратекального введения. В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где антитело к тау-белку вводят путем внутривенного введения, например путем внутривенной инъекции. В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня таубелка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где антитело к тау-белку вводят в количестве, составляющем от около 0,1 до около 50 мг/кг массы тела. Например, в некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума, где антитело к тау-белку вводят в количестве, составляющем от около 0,1 до около 0,5 мг/кг массы тела, от около 0,5 до около 1 мг/кг массы тела, от около 1 до около 5 мг/кг массы тела, от около 5 до около 10 мг/кг массы тела, от около 10 до около 15 мг/кг массы тела, от около 15 до около 20 мг/кг массы тела, от около 20 до около 25 мг/кг массы тела, от около 25 до около 30 мг/кг массы тела, от около 30 до около 35 мг/кг массы тела, от около 35 до около 40 мг/кг массы тела, от около 40 до около 45 мг/кг массы тела или от около 45 до около 50 мг/кг массы тела или более чем 50 мг/кг массы тела.
В некоторых случаях антитело к тау-белку вводят в количестве, составляющем от около 0,1 до около 0,5 мг/кг массы тела, от около 0,5 до около 1 мг/кг массы тела, от около 1 до около 5 мг/кг массы тела, от около 5 до около 10 мг/кг массы тела, от около 10 до около 15 мг/кг массы тела, от около 15 до около 20 мг/кг массы тела, от около 20 до около 25 мг/кг массы тела, от около 25 до около 30 мг/кг массы тела, от около 30 до около 35 мг/кг массы тела, от около 35 до около 40 мг/кг массы тела, от около 40 до около 45 мг/кг массы тела, или от около 45 до около 50 мг/кг массы тела, или более чем 50 мг/кг массы тела; и антитело к тау-белку вводят в виде однократной дозы.
В некоторых случаях антитело к тау-белку вводят в количестве, составляющем от около 0,1 до около 0,5 мг/кг массы тела, от около 0,5 до около 1 мг/кг массы тела, от около 1 до около 5 мг/кг массы тела, от около 5 до около 10 мг/кг массы тела, от около 10 до около 15 мг/кг массы тела, от около 15 до около 20 мг/кг массы тела, от около 20 до около 25 мг/кг массы тела, от около 25 до около 30 мг/кг массы тела, от около 30 до около 35 мг/кг массы тела, от около 35 до около 40 мг/кг массы тела, от около 40 до около 45 мг/кг массы тела, или от около 45 до около 50 мг/кг массы тела, или более чем 50 мг/кг массы тела; и антитело к тау-белку вводят в нескольких (2 или более) дозах.
В некоторых случаях антитело к тау-белку вводят в количестве, составляющем от около 0,1 до около 0,5 мг/кг массы тела, от около 0,5 до около 1 мг/кг массы тела, от около 1 до около 5 мг/кг массы тела, от около 5 до около 10 мг/кг массы тела, от около 10 до около 15 мг/кг массы тела, от около до около 20 мг/кг массы тела, от около 20 до около 25 мг/кг массы тела, от около 25 до около 30 мг/кг массы тела, от около 30 до около 35 мг/кг массы тела, от около 35 до около 40 мг/кг массы тела, от около 40 до около 45 мг/кг массы тела, или от около 45 до около 50 мг/кг массы тела, или более чем 50 мг/кг массы тела; и антитело к тау-белку вводят в нескольких дозах, например антитело к тау-белку вводят один раз в час, один раз каждые 2 ч, один раз каждые 3 ч, один раз каждые 4 ч, один раз каждые 5 ч, один раз каждые 6 ч, один раз каждые 7 ч, один раз каждые 8 ч, один раз каждые 9 ч, один раз каждые 10 ч, один раз каждые 12 ч, один раз каждые 24 ч, один раз каждые 48 ч, один раз каждые 3 дня, один раз каждые 4 дня, один раз каждые 5 дней, один раз каждые 6 дней, один раз каждые 7 дней, один раз каждые 2 недели, один раз каждый месяц, один раз каждые 2 месяца, один раз каждые 4 месяца, один раз каждые 6 месяцев или один раз в год.
В некоторых случаях антитело к тау-белку вводят в количестве, составляющем от около 0,1 до около 0,5 мг/кг массы тела, от около 0,5 до около 1 мг/кг массы тела, от около 1 до около 5 мг/кг массы тела, от около 5 до около 10 мг/кг массы тела, от около 10 до около 15 мг/кг массы тела, от около 15 до около 20 мг/кг массы тела, от около 20 до около 25 мг/кг массы тела, от около 25 до около 30 мг/кг массы тела, от около 30 до около 35 мг/кг массы тела, от около 35 до около 40 мг/кг массы тела, от около 40 до около
- 15 038994 мг/кг массы тела, или от около 45 до около 50 мг/кг массы тела, или более чем 50 мг/кг массы тела; и антитело к тау-белку вводят в виде многократных доз, например, начальную дозу антитела к тау-белку вводят не позднее 30 мин, не позднее 1 ч, не позднее 2 ч, не позднее 4 ч, не позднее 8 ч, не позднее 12 ч, не позднее 24 ч, не позднее 2 дней, не позднее 4 дней, не позднее 1 недели, не позднее 2 недель, не позднее 4 недель или не позднее 2 месяцев после инсульта, связанного с физическим нарушением в головном мозге субъекта и/или ассоциированных тканях центральной нервной системы, что приводит к повышенным уровням тау-белка; и последующую дозу антитела к тау-белку вводят в течение периода времени, составляющего от около 1 ч до 1 года или более (например, от около 1 до около 4 ч, от около 4 до около 8 ч, от около 8 до около 12 ч, от около 12 до около 24 ч, от около 24 ч до около 2 дней, от около 2 до около 4 дней, от около 4 до около 7 дней, от около 1 недели до около 2 недель, от около 2 до около 4 недель, от около 4 недель до около 2 месяцев, от около 2 до около 4 месяцев, от около 4 до около 6 месяцев, от около 6 месяцев до около 1 года или более 1 года), с начала введения первой дозы антитела к тау-белку.
В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где антитело к тау-белку вводят в виде однократной болюсной инъекции.
В других случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) по настоящему изобретению включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для значительного снижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости (например, в цереброспинальной жидкости, ISF, крови или фракции крови (например, в сыворотке крови или плазме)) индивидуума, где антитело к тау-белку вводят в нескольких дозах (например, 2, 3, 4, 5 или более дозах). Когда вводят многократные дозы, интервал дозирования может составлять каждый час, каждые 2 ч, каждые 3 ч, каждые 4 ч, каждые 5 ч, каждые 6 ч, каждые 7 ч, каждые 8 ч, каждые 9 ч, каждые 10 ч, каждые 12 ч, каждые 24 ч, каждые 48 ч, каждые 3 дня, каждые 4 дня, каждые 5 дней, каждые 6 дней, каждые 7 дней и т.д.
Настоящее изобретение относится к способу лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума, причем данный способ включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости (CSF) индивидуума. В некоторых случаях минимальная концентрация анти-тау антитела в CSF достигается в течение 30 мин с начала введения антитела к тау-белку. В некоторых случаях минимальная концентрация анти-тау антитела в CSF достигается в течение 1 ч с начала введения антитела к тау-белку. В некоторых случаях минимальная концентрация антитела к тау-белку в CSF достигается в течение 48 ч, в течение 36 ч, в течение 24 ч, в течение 12 ч, в течение 8 ч, в течение 4 ч, в течение 2 ч, в течение 1 ч или в течение 30 мин (или менее 30 мин) с начала введения антитела к тау-белку. В некоторых случаях минимальная концентрация анти-тау антитела в CSF достигается в течение периода времени, составляющего от около 15 до около 30 мин, от около 30 мин до около 1 ч, от около 1 до около 2 ч, от около 2 до около 4 ч, от около 4 до около 8 ч, от около 8 до около 12 ч, от около 12 до около 24 ч, от около 24 до около 36 ч или от около 36 до около 48 ч. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в CSF у индивидуума, где минимальная концентрация анти-тау антитела в CSF составляет по меньшей мере 20 нг/мл. Например, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в CSF у индивидуума, где минимальная концентрация анти-тау антитела в CSF составляет по меньшей мере 20 нг/мл, по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 40, по меньшей мере 50, по меньшей мере 60, по меньшей мере 75, по меньшей мере 100, по меньшей мере 125, по меньшей мере 150, по меньшей мере 175, по меньшей мере 200, по меньшей мере 250, по меньшей мере 300, по меньшей мере 350, по меньшей мере 400, по меньшей мере 450, по меньшей мере 500, по меньшей мере 550, по меньшей мере 600, по меньшей мере 650, по меньшей мере 700, по меньшей мере 750 или по меньшей мере 800 нг/мл. Например, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации анти-Tau антител в CSF у индивидуума, где минимальная концентрация анти-тау антитела в CSF составляет от около 20 до около 30 нг/мл, от около 30 до около 40 нг/мл, от около 40 до около 50 нг/мл, от около 50 до около 60 нг/мл, от около 60 до около 75 нг/мл, от около 75 до около 100 нг/мл, от около 100 до около нг/мл, от около 150 до около 200 нг/мл, от около 200 до около 250 нг/мл, от около 250 до около нг/мл, от около 300 до около 350 нг/мл, от около 350 до около 400 нг/мл, от около 400 до около нг/мл, от около 450 до около 500 нг/мл, от около 500 до около 550 нг/мл, от около 550 до около нг/мл, от около 600 до около 700 нг/мл, от около 700 до около 800 нг/мл или более чем 800 нг/мл.
150
300
450
600
- 16 038994
В некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости у индивидуума, где минимальная концентрация анти-тау антитела в цереброспинальной жидкости обеспечивает молярное отношение анти-тау антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости, которое составляет по меньшей мере 2:1. Например, в некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости у индивидуума, где минимальная концентрация анти-тау антитела в цереброспинальной жидкости обеспечивает молярное отношение анти-тау антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости, которое составляет по меньшей мере 2:1, по меньшей мере 2,5:1, по меньшей мере 3:1, по меньшей мере 3,5:1, по меньшей мере 4:1, по меньшей мере 4,5:1, по меньшей мере 5:1, по меньшей мере 6:1, по меньшей мере 7:1, по меньшей мере 8:1, по меньшей мере 9:1 или по меньшей мере 10:1.
В некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости у индивидуума, где острая таупатия представляет собой черепно-мозговую травму. В некоторых случаях способ по настоящему изобретению для лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума включает в себя введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для обеспечения минимальной концентрации антитела к тау-белку в цереброспинальной жидкости у индивидуума, где острая таупатия представляет собой инсульт.
Настоящее изобретение относится к способам лечения черепно-мозговой травмы (TBI) у индивидуума, причем данные способы, как правило, включают введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для существенного понижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного тау-белка) во внеклеточной жидкости индивидуума. В некоторых случаях антитело вводят в течение 48 ч после черепно-мозговой травмы. В некоторых случаях антитело вводят в течение 48 ч, в течение 36 ч, в течение 24 ч, в течение 12 ч, в течение 8 ч, в течение 4 ч, в течение 2 ч, в течение 1 ч или в течение 30 мин (или менее чем 30 мин) после TBI.
Настоящее изобретение относится к способам лечения инсульта у индивидуума, причем данные способы, как правило, включают введение индивидууму антитела к тау-белку в количестве, эффективном для существенного понижения уровня тау-белка (например, общего тау-белка и/или свободного таубелка) во внеклеточный жидкости индивидуума. В некоторых случаях антитело вводят в течение 48 ч после инсульта. В некоторых случаях антитело вводят в течение 48 ч, в течение 36 ч, в течение 24 ч, в течение 12 ч, в течение 8 ч, в течение 4 ч, в течение 2 ч, в течение 1 ч или в течение 30 мин (или менее чем 30 мин) после инсульта.
Количество свободного тау-белка, например, свободного внеклеточного тау-белка (eTau), не связанного с антителом анти-eTau во внеклеточной жидкости, может быть определено следующим образом. Количество свободного тау-белка может быть определено с помощью способа, предусматривающего: а) контактирование иммобилизованного антитела с образцом внеклеточной жидкости (например, CSF, ISF, сыворотки, крови или плазмы), полученным от индивидуума, где иммобилизованное антитело конкурирует за связывание с eTau с анти-eTau антителом, которое вводят индивидууму, и где контактирование происходит в условиях, подходящих для связывания несвязанного eTau с иммобилизованным антителом; и b) определение количества eTau, связанного с иммобилизованным антителом. Количество eTau, связанного с иммобилизованным антителом, является показателем количества eTau, не связанного с антителом к тау-белку в образце. В некоторых случаях количество eTau, связанного с иммобилизованным антителом, определяется с использованием третьего антитела, имеющего детектируемую метку, которое не конкурирует с иммобилизованным антителом за связывание с eTau.
Антитела.
Антитела к тау-белку (или домены VH/VL или CDR, происходящие из них), подходящие для использования в настоящем изобретении, могут быть получены с использованием способов, хорошо известных в данной области техники. В качестве альтернативы могут быть использованы признанные в данной области антитела к тау-белку. Также могут быть использованы антитела, которые связываются с тем же эпитопом и/или конкурируют с любым из таких известных в данной области антител за связывание с тау-белком.
Служащее примером антитело к тау-белку представляет собой hu-IPN002 (также известно как IPN007 и IPN002 Variant 2), содержащее тяжелую и легкую цепи, имеющие последовательности, показанные в SEQ ID NO: 37 и 41 соответственно, или его антигенсвязывающие фрагменты и их варианты. hu-IPN002 является гуманизированным моноклональным антителом, иммуноглобулином (IgG4), которое связывается с внеклеточным тау-белком.
В других вариантах осуществления антитело содержит тяжелую и легкую цепь, области CDR или вариабельные области hu-IPN002. Соответственно, в одном из вариантов осуществления антитело со
- 17 038994 держит домены CDR1, CDR2 и CDR3 из VH-области hu-IPN002, имеющей последовательность, показанную в SEQ ID NO: 37, и домены CDR1, CDR2 и CDR3 из VL-области hu-IPN002, имеющей последовательность, показанную в SEQ ID NO: 41. В другом варианте осуществления антитело содержит домены CDR1 CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, имеющие последовательности, показанные в SEQ ID NO: 10, 11 и 12 соответственно, и домены CDR1 CDR2 и CDR3 легкой цепи, имеющие последовательности, показанные в SEQ ID NOS: 7, 8 и 9 соответственно. В другом варианте осуществления антитело содержит VH- и/или VL-области, имеющие аминокислотные последовательности, показанные в SEQ ID NO: 37 и/или SEQ ID NO: 41 соответственно. В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и/или вариабельную область легкой цепи (VL), кодируемые последовательностями нуклеиновых кислот, показанных в SEQ ID NO: 29 и/или SEQ ID NO: 33 соответственно. В другом варианте осуществления изобретения антитело конкурирует за связывание с тем же эпитопом на тау-белке, что и упомянутые выше антитела, и/или связывается с ним. В другом варианте осуществления изобретения антитело имеет по меньшей мере около 90% идентичности аминокислотной последовательности вариабельной области с вышеупомянутыми антителами (например по меньшей мере около 90%, 95% или 99% идентичности вариабельной области с SEQ ID NO: 37 или SEQ ID NO: 41).
В одном варианте осуществления антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), представляет собой гуманизированное антитело, которое связывается с эпитопом Тау-белка, который находится в пределах аминокислот от 2 до 176 Тау-белка, например в пределах аминокислот от 2 до 15, аминокислот от 15 до 24, аминокислот от 24 до 50, аминокислот от 2 до 25, аминокислот от 15 до 50, аминокислот от 50 до 75, аминокислот от 40 до 60, аминокислот от 75 до 100, аминокислот от 60 до 80, аминокислот от 100 до 125, аминокислот от 80 до 115, аминокислот от 125 до 150, аминокислот от 115 до 140, аминокислот от 150 до 176 или аминокислот от 140 до 160 тау-белка. Примеры полипептидов тау изображены на фиг. 9; антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии, может быть гуманизированным антителом, которое специфически связывается с эпитопом в полипептиде тау, показанном на фиг. 9.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), представляет собой гуманизированное антитело, которое связывается с эпитопом в пределах аминокислот от 15 до 24 тау-белка.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), представляет собой антитело, которое связывается с эпитопом тау-белка, который находится в пределах аминокислот от 1 до 158 тау-белка, например, в пределах аминокислот от 1 до 15, аминокислот от 7 до 13, аминокислот от 2 до 18, аминокислот от 15 до 24, аминокислот от 19 до 46, аминокислот от 24 до 50, аминокислот от 2 до 25, аминокислот от 25 до 30, аминокислот от 15 до 50, аминокислот от 28 до 126, аминокислот от 50 до 75, аминокислот от 40 до 60, аминокислот от 75 до 100, аминокислот от 60 до 80, аминокислот от 100 до 125, аминокислот от 80 до 115, аминокислот от 125 до 150, аминокислот от 115 до 140 или аминокислот от 150 до 158 тау-белка, где нумерация аминокислоты основана на номере аминокислоты в 2N4R тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых случаях антитело является гуманизированным. В некоторых случаях способы по настоящему изобретению включают лечение таупатии (например, острой таупатии) путем введения антитела к тау-белку, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 1 до 158 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R таубелка, изображенной на фиг. 9. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 18 тау-белка. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, является линейным эпитопом, и при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 68 тау-белка. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с полипептидом Tau4, имеющим по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 71. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с линейным эпитопом внутри полипептида тау, в котором эпитоп находится в пределах аминокислот от 2 до 68 тау-белка. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с линейным эпитопом внутри тау-полипептида, где эпитоп находится в пределах аминокислот от 15 до 24 тау-белка. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 7 до 13 тау-белка, например аминокислоты EFEVMED (SEQ ID NO: 21). В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в
- 18 038994 пределах аминокислот от 25 до 30 тау-белка, например аминокислоты DQGGYT (SEQ ID NO: 22). В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 28 до 126 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 150 до 158 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 19 до 46 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9.
В некоторых случаях способ по настоящему изобретению включает лечение таупатии (например, острой таупатии) путем введения антитела, которое специфически связывает внеклеточный тау-белок (eTau), при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 1 до 158 из eTau, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 18 из eTau. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, является линейным эпитопом, и при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 68 из eTau. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с полипептидом eTau4, имеющим по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO:71. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с линейным эпитопом внутри полипептида eTau4, в котором эпитоп находится в пределах аминокислот от 2 до 68 из eTau4. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывает линейный эпитоп внутри полипептида eTau4, в котором эпитоп находится в пределах аминокислот от 15 до 24 из eTau4. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 7 до 13 из eTau, например аминокислоты EFEVMED (SEQ ID NO: 21). В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 25 до 30 из eTau, например аминокислоты DQGGYT (SEQ ID NO: 22). В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается с eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 28 до 126 из eTau, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 150 до 158 из eTau, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое вводят, специфически связывается eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 19 до 46 из eTau, где нумерация аминокислот основана на аминокислотной последовательности 2N4R Tau, изображенной на фиг. 9. Настоящее изобретение относится к способу лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума. Данный способ обычно включает в себя введение индивидууму: а) эффективного количества антитела (например, моноклонального антитела), причем данное антитело необязательно может представлять собой гуманизированное антитело, которое связывается с Nконцевой областью полипептида тау; или b) фармацевтической композиции, содержащей гуманизированное антитело. Антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау (необязательно гуманизированного антитела, например моноклонального антитела) и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), представляет собой антитело, которое связывается с эпитопом тау, который находится в пределах аминокислот от 1 до 158 тау-белка, например в пределах аминокислот от 1 до 15, аминокислот от 7 до 13, аминокислот от 2 до 18, аминокислот от 15 до 24, аминокислот от 19 до 46, аминокислот от 24 до 50, аминокислот от 2 до 25, аминокислот от 25 до 30, аминокислот от 15 до 50, аминокислот от 28 до 126, аминокислот от 50 до 75, аминокислот от 40 до 60, аминокислот от 75 до 100, аминокислот от 60 до 80, аминокислот от 100 до 125, аминокислот от 80 до 115, аминокислот от 125 до 150, аминокислот от 115 до 140 или аминокислот от 150 до 158 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на номере аминокислоты в 2N4R Tau, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых случаях антитело является гуманизированным.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), является гуманизированным антителом анти-тау по настоящему изобретению. В некоторых случаях антитело представляет собой гуманизированное антитело, которое связывается с эпито
- 19 038994 пом (например, линейным эпитопом) в пределах аминокислот от 15 до 24 тау-белка.
В некоторых случаях способ лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума предусматривает введение индивидууму эффективного количества антитела к тау-белку, для которого не требуется присутствие вставки 2N тау-белка для связывания с тау-белком. В некоторых случаях эпитоп, распознанный антителом анти-тау, подходящим для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии, не находится внутри вставки 2N тау-белка. Вставка 2N тау-белка включает в себя аминокислоты от 45 до 102 из аминокислотной последовательности 2N4R, изображенной на фиг. 9.
В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 68 тау-белка. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с внеклеточным тау-белком (eTau), при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 68 eTau. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с eTau, при этом эпитоп, связанный с антителом, является линейным эпитопом, и при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 68 из eTau. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с полипептидом eTau4, имеющим по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100% идентичности аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID NO: 48. В некоторых случаях антитело к тау-белку, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с линейным эпитопом внутри полипептида eTau4, и при этом данный эпитоп находится в пределах аминокислот от 2 до 68 из eTau4. В любом из упомянутых выше вариантов осуществления антитело может быть гуманизированным.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, содержит аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 1 до 158 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на 2N4R-форме тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых из данных вариантов осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых из данных вариантов осуществления эпитоп представляет собой линейный эпитоп.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, включает в себя аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 2 до 18 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на 2N4R-форме тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых из данных вариантов осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых из данных вариантов осуществления эпитоп представляет собой линейный эпитоп.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, включает в себя аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 7 до 13 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на 2N4R-форме тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых из данных вариантов осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых из данных вариантов осуществления эпитоп представляет собой линейный эпитоп.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, включает в себя аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 25 до 30 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на 2N4R-форме тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых из данных вариантов осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых из данных вариантов осуществления эпитоп представляет собой линейный эпитоп.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, включает в себя аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 28 до 126 тау-белка, где нумерация
- 20 038994 аминокислот основана на 2N4R-форме тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых из данных вариантов осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых из данных вариантов осуществления эпитоп представляет собой линейный эпитоп.
В некоторых случаях антитело, которое связывается с N-концевой областью полипептида тау-белка и которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению лечения таупатии (например, острой таупатии), специфически связывается с тау-белком, при этом эпитоп, связанный с антителом, включает в себя аминокислотные остатки в пределах аминокислот от 150 до 158 тау-белка, где нумерация аминокислот основана на 2N4R-форме тау-белка, например, как изображено на фиг. 9. В некоторых из данных вариантов осуществления антитело является гуманизированным. В некоторых из данных вариантов осуществления эпитоп представляет собой линейный эпитоп.
В некоторых случаях антитело к тау-белку, подходящее для применения в способе по настоящему изобретению, представляет собой антитело к тау-белку, которое специфически связывается с эпитопом в N-концевой области полипептида тау-белка (например, линейный эпитоп в аминоконцевой (N-концевой) части тау-белка, например, в пределах аминокислот от 1 до 25 тау-белка, в пределах аминокислот от 1 до 18 тау-белка, в пределах аминокислот от 9 до 18 тау-белка (где аминокислоты от 1 до 18 тау-белка представляют собой MAEPRQEFEVMEDHAGTY; SEQ ID NO: 23), в пределах аминокислот от 15 до 44 таубелка, в пределах аминокислот от 13 до 24 тау-белка или в пределах аминокислот от 15 до 24 тау-белка (где аминокислоты от 15 до 24 тау-белка представляют собой: AGTYGLGDRK (SEQ ID NO: 24) В некоторых случаях антитело является гуманизированным, например одна или более каркасных областей вариабельной области тяжелой цепи и/или вариабельной области легкой цепи включает в себя последовательности, происходящиее из каркасной области человеческого иммуноглобулина.
В некоторых случаях гуманизированное моноклональное антитело, которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению, специфически связывается с эпитопом внутри фрагмента в пределах аминокислот от 15 до 24 из полипептида тау-белка. В некоторых случаях эпитоп не содержит фосфорилированную аминокислоту. В некоторых случаях эпитоп не содержит нитрированную аминокислоту. В некоторых случаях эпитоп содержит фосфорилированную аминокислоту, нитрированную аминокислоту или как фосфорилированную аминокислоту, так и нитрированную аминокислоту.
В некоторых случаях антитело, которое подходит для применения в способе по настоящему изобретению, является гуманизированным. Гуманизация каркасной области(ей) понижает риск того, что антитело вызовет ответную реакцию человеческих антимышиных антител (human-anti-mouse-antibody (HAMA)) в организме человека. Известные в данной области техники способы определения иммунного ответа можно выполнять, чтобы контролировать реакцию НАМА у определенного пациента или в ходе клинических испытаний. У пациентов, которым вводят гуманизированные антитела, можно провести оценку иммуногенности в начале и на протяжении введения терапии. Ответная реакция НАМА измеряется, например, выявлением антител к гуманизированному терапевтическому реагенту в образцах сыворотки от пациента с помощью способа, известного в данной области, включая технологию поверхностного плазмонного резонанса (BIACORE) и/или твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA). Во многих случаях подходящее гуманизированное антитело к тау-белку, по существу, не вызывает реакцию НАМА у человека. В некоторых случаях подходящее гуманизированное антитело к тау-белку уменьшило иммуногенный потенциал, как определено с помощью анализа EpiScreenTM, который проводят с использованием обедненных CD8+-клетками мононуклеарных клеток периферической крови. В некоторых случаях подходящее гуманизированное антитело к тау-белку демонстрирует индекс стимуляции (Stimulation Index), составляющий менее 2,0.
Некоторые аминокислоты из каркасных остатков человеческой вариабельной области выбираются для замещения на основе их возможного влияния на CDR-конформацию и/или связывание с антигеном. Неестественное соседство мышиных CDR-областей с человеческой вариабельной каркасной областью может приводить к неестественным конформационным затруднениям, которые, если их не скорректировать посредством замещения некоторых аминокислотных остатков, приводят к потере сродства, необходимого для связывания.
Выбор аминокислотных остатков для замещения может быть определен, частично, с помощью компьютерного моделирования. Компьютерное оборудование и программное обеспечение для получения трехмерных изображений молекул иммуноглобулинов известны в данной области техники. В целом, молекулярные модели получают, исходя из известных структур иммуноглобулиновых цепей или их доменов. Цепи, которые должны быть смоделированы, сравниваются для поиска сходства аминокислотной последовательности с цепями или доменами известных трехмерных структур, и цепи или домены, которые обнаруживают самую высокую степень сходства, выбирают в качестве отправной точки для построения молекулярной модели. Упомянутые цепи или домены, разделяющие по меньшей мере 50% идентичности последовательности, выбраны для моделирования, например, те, которые разделяют по меньшей мере 60%, 70%, 80%, 90% или более чем 90% идентичности последовательности или более, выбраны для моделирования. Известные исходные структуры модифицируют с учетом различий между фактическими аминокислотами в моделируемых цепях или доменах иммуноглобулина и таковыми в исходной структуре. Модифицированные структуры затем собирают в составной иммуноглобулин. В за- 21 038994 ключение, полученную модель совершенствуют путем энергетической минимизации и проверки того, чтобы все атомы находились на соответствующих расстояниях друг от друга и чтобы длины связей и углы находились внутри химически допустимых диапазонов.
CDR-домены и каркасные области таковы, как определено Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991). Альтернативное структурное определение было предложено Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901 (1987); Nature 342:878 (1989); и J. Mol. Biol. 186:651 (1989) (совместно именуемые как Chothia). Когда каркасные остатки, согласно определению Kabat, см. выше, представляют собой остатки структурной петли, согласно определению Chothia, см. выше, то аминокислоты, присутствующие в мышином антителе, могут быть выбраны для подстановки в гуманизированное антитело. Остатки, которые прилегают к области CDR, включают в себя аминокислотные остатки в положениях, непосредственно примыкающих к одной или более CDR в первичной последовательности цепи гуманизированного иммуноглобулина, например, в положениях, непосредственно примыкающих к области CDR, по определению Kabat, или CDR, по определению Chothia (см., например, Chothia and Lesk JMB 196:901 (1987)). Такие аминокислоты, что очень вероятно, будут взаимодействовать с аминокислотами в CDR, и, если выбраны из акцептора, искажать донорные CDR и уменьшать аффинность. Кроме того, смежные аминокислоты могут взаимодействовать непосредственно с антигеном (Amit et al., Science, 233:747 (1986)), и отбор данных аминокислот из донора может быть желательным, чтобы сохранить все антигенные контакты, которые обеспечивают аффинность в исходном антителе. Антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать гуманизированную каркасную область легкой цепи; и гуманизированную каркасную область тяжелой цепи, причем выделенное антитело конкурирует за связывание с эпитопом в N-концевой области полипептида таубелка с антителом, которое включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) CDR1 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 7; (ii) CDR2 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 8; и (iii) CDR3 VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 9; и b) область тяжелой цепи, содержащую: (i) CDR1 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 10; (ii) CDR2 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 11; и (iii) CDR3 VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях область легкой цепи и область тяжелой цепи присутствуют в виде отдельных полипептидов. В других случаях область легкой цепи и область тяжелой цепи присутствуют в одном полипептиде. Выделенное антитело может включать в себя тяжелую цепь, которая содержит константную область изотипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В других случаях антитело представляет собой Fv, ScFv, Fab, F(ab')2, или Fab'. Антитело может содержать ковалентно связанный непептидный синтетический полимер, например, когда синтетический полимер представляет собой полимер поли(этиленгликоль). В некоторых случаях выделенное антитело слито, непосредственно или через линкер, с молекулой-носителем, пептидом или белком, который способствует преодолению гематоэнцефалического барьера. В некоторых случаях эпитоп, связанный с выделенным антителом, находится в пределах аминокислот от 15 до 24 полипептида тау-белка. Гуманизированная каркасная область легкой цепи выделенного антитела может включать в себя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, изображенных в табл. 3. Гуманизированная каркасная область тяжелой цепи выделенного антитела содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 аминокислотных замен, изображенных в табл. 2.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать: а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три определяющие комплементарность области (CDR) антитела IPN001, где CDR таковы, как определено Kabat (см., например, табл. 1, выше; и Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, Sequences of proteins of immunological interest (1991)).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VL антитела IPN001; и ii) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VH антитела IPN001; и b) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи; где CDR из VH и VL таковы, как определено Kabat (см., например, табл. 1; и Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, Sequences of proteins of immunological interest (1991)). В некоторых из данных вариантов осуществления антитело к тау-белку включает гуманизированную каркасную область VH и/или VL.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VL антитела IPN001 и ii) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VH антитела IPN001 и b) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи; где CDR VH и VL таковы, как определено Chothia (см., например, табл. 1, и Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901 (1987)).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VL антитела
- 22 038994
IPN002 и ii) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VH антитела IPN002 и b) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи; где CDR VH и VL таковы, как определено Kabat (см., например, табл. 1, и Kabat et al., U.S. Dept. of
Health and Human Services, Sequences of proteins of immunological interest (1991)).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя: а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VL антитела IPN002; и ii) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR VH антитела IPN002; и b) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи; где CDR VH и VL таковы, как определено Chothia (см., например, табл. 1, см. выше, и Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901 (1987)).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR, выбранных из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3; и ii) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR, выбранных из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6; и ii) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR, выбранных из SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9; и ii) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: i) одну, две или три CDR, выбранных из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12; и ii) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя а) область легкой цепи, содержащую: i) домен CDR1 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 7; (ii) домен CDR2 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 8; (iii) домен CDR3 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 9; и (IV) гуманизированную каркасную область легкой цепи; и b) область тяжелой цепи, содержащую: (i) домен CDR1 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 10; (ii) домен CDR2 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 11; (iii) домен CDR3 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 12; и IV) гуманизированную каркасную область тяжелой цепи.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую одну, две или три CDR тяжелой цепи, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из одной или более из SEQ ID NO: 4, 5 и 6; и одну, две, три, или четыре FR-области (каркасные области), которые являются гуманизированными. Например, в некоторых вариантах осуществления подходящее антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит, по порядку от N-конца к С-концу, гуманизированную FR1 тяжелой цепи; CDR1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4; гуманизированную FR2 тяжелой цепи; CDR2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5; гуманизированную FR3 тяжелой цепи; CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6; и гуманизированную FR4 тяжелой цепи.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя одну, две или три CDR легкой цепи, имеющих полипептидную последовательность, выбранную из одной или более из SEQ ID NO: 1, 2 и 3; и одну, две, три или четыре FR-области, которые являются гуманизированными. Например, в некоторых вариантах осуществления подходящее антитело содержит вариабельную область легкой цепи, которая включает в себя, по порядку от N-конца к С-концу, гуманизированную FR1 легкой цепи; CDR1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; гуманизированную FR2 легкой цепи; CDR2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2; гуманизированную FR3 легкой цепи; CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3; и гуманизированную FR4 легкой цепи.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя одну, две или три CDR тяжелой цепи, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из одной или более из SEQ ID NO: 10, 11 и 12; и одну, две, три или четыре FRобласти, которые являются гуманизированными. Например, в некоторых вариантах осуществления подходящее антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, которая содержит, по порядку от Nконца к С-концу, гуманизированную FR1 тяжелой цепи; CDR1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 10; гуманизированную FR2 тяжелой цепи; CDR2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11; гуманизированную FR3 тяжелой цепи; CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12; и гуманизированную FR4 тяжелой цепи.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя одну, две или три CDR легкой цепи, имеющих полипептидную последователь- 23 038994 ность, выбранную из одной или более из SEQ ID NO: 7, 8 и 9; и одну, две, три, или четыре FR-области, которые являются гуманизированными. Например, в некоторых вариантах осуществления подходящее антитело содержит вариабельную область легкой цепи, которая включает в себя, по порядку от N-конца к С-концу, гуманизированную FR1 легкой цепи; CDR1, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7; гуманизированную FR2 легкой цепи; CDR2, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8; гуманизированную FR3 легкой цепи; CDR3, имеющую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9; и гуманизированную FR4 легкой цепи.
Аминокислотные последовательности VH и VL из IPN001 изображены на фиг. 11А и 11В. Области CDR (по определению Kabat) выделены в тексте жирным шрифтом и подчеркнуты. Аминокислотные последовательности VH и VL из IPN002 изображены на фиг. 12А и 12В. Области CDR (по определению Kabat) выделены в тексте жирным шрифтом и подчеркнуты. SEQ ID NO: 1-12 являются следующими:
RSSQTILHSNGNTYLE (SEQ ID NO:1);
KVSKRFS (SEQ ID NO:2);
FQGSLVPWA (SEQ ID NOG);
SYGMS (SEQ ID NO:4);
TISSSGSRTYFPDSVKG (SEQ ID NO;5);
TWDGAMDY (SEQ ID NO:6);
KSSQS1VHSNGNTYLE (SEQ ID NO:7);
KVSNRFS (SEQ ID NO:8);
FQGSLVPWA (SEQ ID NO:9);
KYGMS (SEQ ID NO: 10);
TISSSGSRTYYPDSVKG (SEQ ID NO: 11);
SWDGAMDY (SEQ ID NO: 12).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 11В и показанной в SEQ ID NO: 13.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 11А и показанной в SEQ ID NO: 14.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 12В, показанной в SEQ ID NO: 15.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 12А и показанной в SEQ ID NO: 16.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 13 (вариант 1 VH).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 14 (вариант 2 VH).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 15 (вариант 3 VH).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 16 (вариант 4 VH).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобре- 24 038994 тению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 17 (вариант 1 Vk).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 18 (вариант 2 Vk).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 19 (вариант 3 Vk).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая на 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности, изображенной на фиг. 20 (вариант 4 Vk).
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 замен аминокислот в каркасе (FR), относительно аминокислотных последовательностей FR парентерального антитела IPN002, изображенных в табл. 2.
Таблица 2
Варианты VH
Положение аминокислоты IPN002 (Парентеральное антитело) VH Вариант 1 VH Вариант 2 VH Вариант 3 VH Вариант 4
FR1
3 Н Н Н Q Q
19 К R R R R
FR2
40 т А А А А
42 D G G G G
44 R G G G G
FR3
66 Q R R R R
83 S S N N N
85 L S L L L
86 К К R R R
87 S S А А А
93 S S S S А
FR4
108 S S т т Т
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, включающую замещение Н ^ Q в положении аминокислоты 3 в FR1 VH и/или замещение K ^ R в положении аминокислоты 19 в FR1 VH.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, содержащую замещение Т ^ А в положении аминокислоты 40 в FR2 VH, и/или замещение D ^ G в положении аминокислоты 42 в FR2 VH, и/или замещение R ^ G в положении 44 в FR2 VH.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область тяжелой цепи, включающую замещение Q ^ R в положении аминокислоты 66 в FR3 VH, и/или замещение S ^ N в положении аминокислоты 83 FR3 VH, и/или замещение L ^ S в положении аминокислоты 85 в FR3 VH, и/или замещение K ^ R в положении аминокислоты 86 в последовательности FR3, и/или замещение S ^ А в положении аминокислоты 87 в FR3 VH, и/или замещение S ^ А в положении аминокислоты 93 в VH FR3.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может включать в себя вариабельную область тяжелой цепи, включающую замещение S ^ Т в положении аминокислоты 108 в FR4 VH. В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может включать в себя, по порядку от N-конца к С-концу, VH-область, содержащую EVX1LVESGGALVKPGGSLRLSCAASGFSFS (SEQ ID NO: 25); CDR VH1, как
- 25 038994 показано на фиг. 2А; WVRQAPGKGEWVA (SEQ ID NO: 26); CDR VH2, как показано на фиг. 2А;
RFTISRDNAKNTLYLQMX2SX3X4X5EDTAMYYCX6I (SEQ ID NO: 27); CDR VH3, как показано на фиг.
2A; WGQGTX7VTVSS (SEQ ID NO: 44), где X1 представляет собой Н или Q; X2 представляет собой S или N; X3 представляет собой S или L; X4 представляет собой K или R; Х5 представляет собой S или А;
Х6 представляет собой S или А; и Х7 представляет собой S или Т.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен в каркасе (FR), относительно аминокислотных последовательностей FR парентерального антитела IPN002, изображенных в табл. 3.
Таблица 3 _____________________Варианты . Vk______________________
Положение аминокислоты IPN002 (Парентеральное антитело) Vk Вариант 1 Vk Вариант 2 Vk Вариант 3 Vk Вариант 4
FR1
3 L L V V V
7 Т S S S S
14 S т т т т
17 D Q Q Q Q
18 Q Р Р Р Р
FR2
45 к Q Q Q Q
48 V V V V I
FR3
83 L V V V V
85 Т т т V V
FR4
104 L V V V V
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую замещение L ^ V в аминокислотном положении 3 в FR1 VL, и/или замещение Т ^ S в положении аминокислоты 7, в FR1 VL, и/или замещение S ^ Т в положении аминокислоты 14 в FR1 VL, и/или замещение D ^ Q в аминокислотном положении 17 в FR1 VL, и/или замещение Q ^ Р в аминокислотном положении 18 в FR1 VL.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, включающую замещение K ^ Q в положении аминокислоты 45 из FR2 VL и/или замещение V ^ I в положении аминокислоты 48 FR2 VL.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащую замещение L ^ V в положении аминокислоты 83 из последовательности FR3 VL и/или замещение Т ^ V в аминокислотном положении 85 FR3 VL.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать вариабельную область легкой цепи, содержащей замещение L ^ V в положении аминокислоты 104 FR4 VL. В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может включать в себя, по порядку от N-конца к С-концу, VLобласть, содержащую: DVX1MTQSPLSLPVTLGQPASISC (SEQ ID NO: 45); CDR VL1, как показано на фиг. 12В; WYLQKPGQSPQLLX2Y (SEQ ID NO: 46); CDR VL2, как показано на фиг. 12В;
GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGX3YYC (SEQ ID NO: 47); CDR VL3, как показано на фиг. 2В; FGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 48); где X1 представляет собой L или V; Х2 представляет собой V или I; и X3 представляет собой Т или V.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя
а) вариант VH 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 13; и вариант Vk 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 17;
b) вариант VH 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 13; и вариант Vk 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 18;
с) вариант VH 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 13; и вариант Vk 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 19;
d) вариант VH 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 13; и вариант Vk 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 20;
- 26 038994
e) вариант VH 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 14; и вариант Vk 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 17;
f) вариант VH 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 14; и вариант Vk 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 18;
g) вариант VH 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 14; и вариант Vk 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 19;
h) вариант VH 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 14; и вариант Vk 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 20;
i) вариант VH 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 15; и вариант Vk 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 18;
j) вариант VH 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 15; и вариант Vk 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 19;
k) вариант VH 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 15; и вариант Vk 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 20;
l) вариант VH 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 15; и вариант Vk 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 20;
m) вариант VH 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 16; и вариант Vk 1, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 17;
n) вариант VH 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 16; и вариант Vk 2, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 18;
о) вариант VH 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 16; и вариант Vk 3, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 19; или
р) вариант VH 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 16; и вариант Vk 4, содержащий аминокислотную последовательность, изображенную на фиг. 20.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя CDR-области тяжелой цепи анти-Tau и CDR-области легкой цепи анти-Tau в одной полипептидной цепи, например в некоторых вариантах осуществления подходящим антителом является ScFv. В некоторых вариантах осуществления подходящее антитело включает в себя, по порядку от N-конца к С-концу, первую аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:1; вторую аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:2; третью аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:3; четвертую аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:4; пятую аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:5; шестую аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6; и седьмую аминокислотную последовательность длиной от около 5 аминокислот до около 25 аминокислот.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя, по порядку от N-конца к С-концу: FR1-область легкой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; FR2-область легкой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2; FR3-область легкой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3; необязательно FR4-область легкой цепи; область линкера; необязательно FR1-область тяжелой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID: 4; FR2-область тяжелой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5; FR3-область тяжелой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6; и FR4-область тяжелой цепи. В некоторых из данных вариантов осуществления одна или более из FR-областей является гуманизированной FR-областью. В некоторых из данных вариантов осуществления каждая из областей FR является гуманизированной FR-областью. Область линкера может составлять от около 5 аминокислот до около 50 аминокислот (а.к.) в длину, например от около 5 а.к. до около 10 а.к., от около 10 а.к. до около 15 а.к., от около 15 а.к. до около 20 а.к., из около 20 а.к. до около 25 а.к., от около 25 а.к. до около 30 а.к., от около 30 а.к. до около 35 а.к., от около 35 а.к. до около 40 а.к., от около 40 а.к. до около 45 а.к., или от около 45 а.к. до около 50 а.к. в длину. В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя, в порядке от N-конца к С-концу, FR1-область тяжелой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID: 4; FR2-область тяжелой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5; FR3-область тяжелой цепи; CDR3, со- 27 038994 держащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6; необязательно FR4область тяжелой цепи; линкер; необязательно FR1-область легкой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; FR2-область легкой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2; FR3-область легкой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3; и FR4область легкой цепи. В некоторых из данных вариантов осуществления одна или более из FR-областей является гуманизированной FR-областью. В некоторых из данных вариантов осуществления каждая из областей FR является гуманизированной FR-областью. Область линкера может составлять от около 5 аминокислот до около 50 аминокислот в длину, например от около 5 а.к. до около 10 а.к., от около 10 а.к. до около 15 а.к., от около 15 а.к. до около 20 а.к., из около 20 а.к. до около 25 а.к., от около 25 а.к. до около 30 а.к., от около 30 а.к. до около 35 а.к., от около 35 а.к. до около 40 а.к., от около 40 а.к. до около 45 а.к., или от около 45 а.к. до около 50 а.к. в длину.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя, по порядку от N-конца к С-концу, FR1-область легкой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7; FR2-область легкой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8; FR3-область легкой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9; необязательно FR4-область легкой цепи; область линкера; необязательно FR1-область тяжелой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID: 10; FR2-область тяжелой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11; FR3-область тяжелой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12; и FR4-область тяжелой цепи. В некоторых из данных вариантов осуществления одна или более из FR-областей является гуманизированной FR-областью. В некоторых из данных вариантов осуществления каждая из областей FR является гуманизированной FR-областью. Область линкера может составлять от около 5 аминокислот до около 50 аминокислот в длину, например от около 5 а.к. до около 10 а.к., от около 10 а.к. до около 15 а.к., от около 15 а.к. до около 20 а.к., из около 20 а.к. до около 25 а.к., от около 25 а.к. до около 30 а.к., от около 30 а.к. до около 35 а.к., от около 35 а.к. до около 40 а.к., от около 40 а.к. до около 45 а.к., или от около 45 а.к. до около 50 а.к. в длину.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя, в порядке от N-конца к С-концу, FR1-область тяжелой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID: 10; FR2-область тяжелой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11; FR3-область тяжелой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12; необязательно FR4-область тяжелой цепи; линкер; необязательно FR1-область легкой цепи; CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 7; FR2-область легкой цепи; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8; FR3-область легкой цепи; CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO:9; и FR4-область легкой цепи. В некоторых из данных вариантов осуществления одна или более из FR-областей является гуманизированной FR-областью. В некоторых из данных вариантов осуществления каждая из областей FR является гуманизированной FR-областью. Область линкера может составлять от около 5 аминокислот до около 50 аминокислот в длину, например от около 5 а.к. до около 10 а.к., от около 10 а.к. до около 15 а.к., от около 15 а.к. до около 20 а.к., из около 20 а.к. до около 25 а.к., от около 25 а.к. до около 30 а.к., от около 30 а.к. до около 35 а.к., от около 35 а.к. до около 40 а.к., от около 40 а.к. до около 45 а.к., или от около 45 а.к. до около 50 а.к. в длину.
Линкеры, подходящие для применения в качестве антитела, включают гибкие линкеры. Если они присутствуют, линкерные молекулы, как правило, обладают достаточной длиной, чтобы позволить некоторое гибкое движение между связанными областями. Длина линкерных молекул обычно составляет приблизительно от 6 до 50 атомов. Линкерные молекулы могут также представлять собой, например, олигомеры арилацетилена, этиленгликоля, содержащие от 2 до 10 мономерных единиц, диамины, дикислоты, аминокислоты или их комбинации. Другие линкерные молекулы, которые могут связываться с полипептидами, могут быть использованы в свете данного описания.
Подходящие линкеры могут быть легко выбраны и могут иметь любую подходящую из различных длин, например от 1 аминокислоты (например, Gly) до 20 аминокислот, от 2 аминокислот до 15 аминокислот, от 3 аминокислот до 12 аминокислот, включая от 4 аминокислот до 10 аминокислот, от 5 аминокислот до 9 аминокислот, от 6 аминокислот до 8 аминокислот или от 7 аминокислот до 8 аминокислот, и могут составлять 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 аминокислот.
Примеры гибких линкеров включают полимеры глицина (G)n, полимеры из глицина и серина (включая, например, (GS)n, (GSGGS)n (SEQ ID NO: 49) и (GGGS)n (SEQ ID NO: 50), где n представляет собой целое число, по меньшей мере один), полимеры из глицина и аланина, полимеры из аланина и серина и другие гибкие линкеры, известные в данной области техники. Глициновые и глицин-сериновые полимеры представляют интерес, так как обе эти аминокислоты не обладают выраженной структурой и, следовательно, могут служить в качестве нейтрального соединительного звена между компонентами.
- 28 038994
Полимеры из глицина представляют особый интерес, поскольку глицин имеет доступ к значительно большему конформационному phi-psi пространству, чем даже аланин, и стерически существенно менее ограничен, чем остатки с более длинными боковыми цепями (см. Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)). Примеры гибких линкеров включают, но без ограничения, GGSG (SEQ ID NO: 51), GGSGG (SEQ ID NO: 52), GSGSG (SEQ ID NO: 53), GSGGG (SEQ ID NO: 54), GGGSG (SEQ ID NO: 55), GSSSG (SEQ ID NO: 56) и т.п. Специалисту в данной области будет понятно, что конструкция пептида, конъюгированного с любым элементом, описанным выше, может включать в себя линкеры, которые являются полностью или частично гибкими, таким образом, что линкер может включать в себя гибкий линкер, а также одну или более частей, которые придают менее гибкую структуру.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, представляет собой фрагмент антитела, Fv, ScFv, Fab, F(ab')2 или Fab'. Таким образом, настоящее изобретение относится к выделенному антителу, причем данное антитело представляет собой Fv, ScFv, Fab, F(ab')2 или Fab', и при этом антитело конкурирует за связывание с эпитопом в N-концевой области Tau-полипептида с антителом, которое содержит: а) область легкой цепи, содержащую: i) домен CDR1 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 7; (ii) домен CDR2 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 8; и (iii) домен CDR3 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 9; и b) область тяжелой цепи, содержащую: (i) домен CDR1 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 10; (ii) домен CDR2 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 11; и (iii) домен CDR3 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 12. В некоторых из данных вариантов осуществления выделенное антитело включает в себя одну, две, три или четыре гуманизированные каркасные области из VL, как описано выше. В некоторых из данных вариантов осуществления выделенное антитело содержит одну, две, три, или четыре гуманизированные каркасные области из VH, как описано выше.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, представляет собой антитело ScFv. В некоторых вариантах осуществления антитело к тау-белку по настоящему изобретению включает в себя мультимеры ScFv. Например, в некоторых вариантах осуществления подходящее антитело представляет собой димер ScFv (например, включает в себя два тандемных ScFv (scFv2)), тример ScFv (например, включает в себя три тандема ScFv (scFv3)), тетрамер ScFv (например, включает в себя четыре тандема ScFv (scFv4)) или является мультимером из более чем четырех ScFv (например, в тандеме). Мономеры ScFv могут быть связаны в тандеме с помощью линкеров из от около 2 аминокислот до около 10 аминокислот (а.к.) в длину, например 2 а.к., 3 а.к., 4 а.к., 5 а.к., 6 а.к., 7 а.к., 8 а.к., 9 а.к. или 10 а.к. в длину. Подходящие линкеры включают, например, (Gly)x, где х является целым числом от 2 до 10. Другими подходящими линкерами являются те, которые описаны выше. В некоторых вариантах осуществления каждый из мономеров ScFv в мультимере ScFv является гуманизированным, как описано выше.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, содержит константную область иммуноглобулина (например, Fc-область). Fc-область, если она присутствует, может быть человеческой Fc-областью. Если присутствуют константные области, антитело может содержать как легкую цепь, так и константные области тяжелой цепи. Подходящая константная область тяжелой цепи включает области СН1, шарнирную область, СН2, CH3 и СН4. Антитела, описанные в настоящем описании, включают в себя антитела, имеющие все типы константных областей, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, и любой изотип, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Пример подходящей Fcобласти тяжелой цепи представляет собой Fc человеческого изотипа IgGl. В некоторых случаях область тяжелой цепи представляет собой Fc изотипа IgG4. В некоторых из данных вариантов осуществления шарнирная область содержит замену S241P. См., например, Angal et al. (1993) Mol. Immunol. 30:105. Константные области легкой цепи могут быть лямбда или каппа. Подходящее антитело (например, гуманизированное антитело) может содержать последовательности из более чем одного класса или изотипа. Антитела могут быть экспрессированы в виде тетрамеров, содержащих две легкие и две тяжелые цепи, в виде отдельных тяжелых цепей, легких цепей, в виде Fab, Fab', F(ab')2 и Fv или в виде одноцепочечных антител, в которых вариабельные домены тяжелой и легкой цепи связаны через спейсер.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, содержит человеческую константную область легкой цепи и человеческую константную область тяжелой цепи, и при этом выделенное антитело конкурирует за связывание с эпитопом в N-концевой области полипептида тау с антителом, которое включает в себя: а) область легкой цепи, содержащую: i) домен CDR1 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 7; (ii) домен CDR2 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 8; и (iii) домен CDR3 VL, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 9; и b) область тяжелой цепи, содержащую: (i) домен CDR1 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 10; (ii) домен CDR2 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 11; и (iii) домен CDR3 VH, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 12. В некоторых из данных вариантов осуществ- 29 038994 ления выделенное антитело включает в себя одну, две, три или четыре гуманизированные каркасные области из VL, как было описано выше. В некоторых из данных вариантов осуществления выделенное антитело содержит одну, две, три или четыре гуманизированные каркасные области из VH, как описано выше.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может содержать свободную тиоловую (-SH) группу на карбоксильном конце, при этом свободная тиоловая группа может использоваться для присоединения антитела ко второму полипептиду (например, другому антителу, включая подходящее антитело), каркасу, носителю и т.д.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, включает в себя одну или несколько не встречающихся в природе аминокислот. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения не встречающаяся в природе аминокислота содержит карбонильную группу, ацетильную группу, аминооксигруппу, гидразиновую группу, гидразидную группу, семикарбазидную группу, азидную группу или алкиновую группу. См., например, патент США № 7632924, где описаны типичные не встречающиеся в природе аминокислоты. Включение не встречающейся в природе аминокислоты может обеспечивать присоединение к полимеру, второму полипептиду, каркасу и т.п. Например, можно получить подходящее антитело, соединенное с водорастворимым полимером, при взаимодействии водорастворимого полимера (например, ПЭГ), содержащего карбонильную группу, с антителом, где антитело содержит неприродную аминокислоту, содержащую аминоокси-, гидразиновую, гидразидную или семикарбазидную группу. В качестве другого примера можно получить подходящее антитело, соединенное с водорастворимым полимером, при взаимодействии соответствующего антитела, содержащего алкинсодержащую аминокислоту, с водорастворимым полимером (например, ПЭГ), содержащим азидную группу; в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения азидная или алкиновая группа соединяется с молекулой ПЭГ амидной связью. Не встречающаяся в природе аминокислота означает такую аминокислоту, которая не является одной из 20 распространенных аминокислот или пирролизином или селеноцистеином. Другими терминами, которые могут применяться как синонимы термину не встречающаяся в природе аминокислота, являются не природная аминокислота, неприродная аминокислота, аминокислота неприродного происхождения и различные их варианты с написанием через дефис и без него. Термин не встречающаяся в природе аминокислота также включает, без ограничения, аминокислоты, которые получаются при модификации (например, посттрансляционной модификации) аминокислот природного происхождения (в том числе 20 распространенных аминокислот или пирролизина и селеноцистеина), но сами они не встраиваются трансляционным комплексом в растущую полипептидную цепь. Примеры таких не встречающихся в природе аминокислот включают, но не ограничиваются ими, N-ацетилглюкозаминил-L-серин, Nацетилглюкозаминил-Ь-треонин и О-фосфотирозин.
В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, связано (например, ковалентно связано) с полимером (например, полимером, не являющимся полипептидом). Подходящие полимеры включают, например, биосовместимые полимеры и водорастворимые биосовместимые полимеры. Подходящие полимеры включают синтетические полимеры и природные полимеры. Подходящие полимеры включают, например, замещенные или незамещенные линейные или разветвленные полиалкиленовые, полиалкениловые или полиоксиалкиленовые полимеры или разветвленные либо неразветвленные полисахариды, например гомо- или гетерополисахарид. Подходящие полимеры включают, например, сополимер этилена и винилового спирта (широко известные под общим названием EVOH или под торговой маркой EVAL); полибутилметакрилат; поли(гидроксивалерат); поли(Ь-молочную кислоту); поликапролактон; поли(лактид-ко-гликолид); поли(гидроксибутират); поли(гидроксибутират-ко-валерат); полидиоксанон; полиортоэфир; полиангидрид; поли(гликолевую кислоту); поли(D,L-молочную кислоту); поли(гликолевая кислота-ко-триметилен-карбонат); полифосфоэфир; полифосфоэфируретан; поли(аминокислоты); цианоакрилаты; поли(триметиленкарбонат); поли(иминокарбонат); сополи(простой эфир-сложные эфиры) (например, сополимеры поли(этиленоксид)поли(молочной кислоты) (PEO/PLA)); полиалкиленоксалаты; полифосфазены; такие биомолекулы, как фибрин, фибриноген, целлюлоза, крахмал, коллаген и гиалуроновая кислота; полиуретаны; силиконы; полиэфиры; полиолефины; сополимеры полиизобутилена и этилена-а-олефинов; акриловые полимеры и сополимеры; винилгалогенидные полимеры и сополимеры, такие как поливинилхлорид; поливиниловые простые эфиры, такие как поливиниловый эфир; поливинилиденгалогениды, такие как поливинилиденфторид и поливинилиденхлорид; полиакрилонитрил; поливиниловые кетоны; поливиниловые ароматические углеводороды, такие как полистирол; поливиниловые сложные эфиры, такие как поливинилацетат; такие сополимеры виниловых мономеров друг с другом и с олефинами, как сополимеры этиленаметилметакрилата, сополимеры акрилонитрила-стирола, ацетонитрил-бутадиенстиреновые (ABS) смолы и сополимеры этилена-винилацетата; полиамиды, такие как Nylon 66 и поликапролактам; алкидные смолы; поликарбонаты; полиоксиметилены; полиимиды; полиэфиры; эпоксидные смолы; полиуретаны; вискоза; триацетат вискозы; целлюлоза; ацетат целлюлозы; бутират целлюлозы; ацетат-бутират целлюлозы; целлофан; нитрат целлюлозы; пропионат целлюлозы; простые эфиры целлюлозы; аморфный тефлон; поли(этиленгликоль); и карбоксиметилцеллюлоза.
- 30 038994
Подходящие синтетические полимеры включают незамещенные и замещенные линейные или разветвленные поли(этиленгликоль), поли(пропиленгликоль), поли(виниловый спирт) и их производные, например замещенный поли(этиленгликоль), такой как метоксиполи(этиленгликоль), и его производные.
Подходящие природные полимеры включают, например, альбумин, амилозу, декстран, гликоген и их производные.
Средняя молекулярная масса подходящих полимеров может составлять от 500 до 50000 Да, например от 5000 до 40000 Да или от 25000 до 40000 Да. Например, в некоторых вариантах осуществления, в которых соответствующее антитело содержит полимер поли(этиленгликоль) (ПЭГ) или метоксиполи(этиленгликоль), данный ПЭГ или полимер метоксиполи(этиленгликоль) может иметь молекулярную массу с интервалом от около 0,5 до 1 кДа, от около 1 до 5 кДа, от 5 до 10 кДа, от 10 до 25 кДа, от 25 до 40 кДа или от 40 до 60 кДа. Как отмечалось выше, в некоторых вариантах осуществления подходящее антитело ковалентно связано с полимером ПЭГ. В некоторых вариантах осуществления мультимер ScFv ковалентно связан с полимером ПЭГ. См., например, Albrecht et al. (2006) J. Immunol. Methods 310:100. Способы и реагенты, подходящие для ПЭГилирования белка, хорошо известны в данной области, и они приводятся, например, в патенте США № 5849860. Подходящий для конъюгирования с белком ПЭГ обычно растворим в воде при комнатной температуре и имеют общую формулу R(O-CH2-CH2)nO-R, где R представляет собой водород или защитную группу, такую как алкильная или алканольная группа, и где п представляет собой целое число от 1 до 1000. Если R является защитной группой, то обычно она содержит от 1 до 8 атомов углерода.
ПЭГ, конъюгированный с антителом, может быть линейным. Конъюгируемый с белком ПЭГ также может быть разветвленным. Разветвленные производные ПЭГ включают, к примеру, описанные в патенте США № 5643575 звездчатые ПЭГ и многолучевые ПЭГ могут быть такими, как описанные в каталоге Shearwater Polymers, Inc. catalog Polyethylene Glycol Derivatives 1997-1998. Звездчатые ПЭГ описаны в данной области техники, включая, например, описанные в патенте США № 6046305. В некоторых вариантах осуществления антитело, подходящее для применения в способе по изобретению, может быть гликозилировано, например подходящее антитело может содержать ковалентно связанную углеводную или полисахаридную группу. Гликозилирование антител, как правило, является либо N-связанным, либо О-связанным. N-связанное относится к присоединению углеводного остатка к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где X обозначает любую аминокислоту, за исключением пролина, являются последовательностями распознавания для ферментативного присоединения углеводной группы к боковой цепи аспарагина. Так, наличие любой из данных трипептидных последовательностей в полипептиде создает потенциальный сайт гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к присоединению одного из сахаров Nацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы к гидроксиаминокислоте, чаще всего серину или треонину, хотя может использоваться и 5-гидроксипролин или 5-гидроксилизин.
Добавление сайтов гликозилирования к антителу удобно осуществляется путем изменения аминокислотной последовательности таким образом, чтобы она содержала одну или несколько из вышеописанных трипептидных последовательностей (для N-связанных сайтов гликозилирования). Изменение также может осуществляться путем добавления или замещения на один или несколько остатков серина или треонина в последовательности исходного антитела (для О-связанных сайтов гликозилирования). Аналогичным образом, удаление сайтов гликозилирования может осуществляться путем изменения аминокислот в нативных сайтах гликозилирования антитела. Подходящее антитело в некоторых вариантах осуществления должно содержать рентгеноконтрастную метку, например метку, которую можно легко визуализировать, к примеру, с помощью рентгеновских лучей. Рентгеноконтрастные материалы хорошо известны специалистам в данной области техники. Наиболее распространенными рентгеноконтрастными материалами являются соли йода, брома или бария Также известны и другие рентгеноконтрастные материалы, которые включают, без ограничения, органические производные висмута (например, см. патент США № 5939045), рентгеноконтрастные мультиуретаны (см. патент США № 5346981), висмуторганические композиты (см., например, патент США № 5256334), рентгеноконтрастные мультимерные комплексы бария (см, например, патент США № 4866132) и т.п.
Подходящее антитело может быть ковалентно связано со второй молекулой (например, липидом, полипептидом, отличным от данного антитела, синтетическим полимером, углеводом и т.п.) при помощи, например, глутарового альдегида, гомобифункционального сшивающего агента или гетеробифункционального сшивающего агента. Глутаральдегид сшивает полипептиды через их аминогруппы.
Гомобифункциональные сшивающие агенты (например, гомобифункциональный имидоэфир, гомобифункциональный N-гидроксисукцинимидиловый (NHS) эфир или гомобифункциональный сшивающий агент, реагирующий с сульфгидрильными группами) содержат две или несколько идентичных реагирующих молекул и могут использоваться в одностадийной реакционной процедуре, в которой сшивающий агент добавляется в раствор, содержащий смесь подлежащих сшиванию полипептидов. Гомобифункциональный NHS-эфир и имидоэфиры сшивают аминосодержащие полипептиды. При слегка щелочном значении рН имидоэфиры реагируют только с первичными аминами с образованием имидоамидов и не влияют на общий заряд сшитого полипептида. Гомобифункциональные сшивающие реагенты,
- 31 038994 реагирующие с сульфгидрильными группами, включают бисмалеимидгексан (bismaleimidhexane (ВМН)),
1,5-дифтор-2,4-динитробензол (l,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene (DFDNB)) и 1,4-ди-(3',2'-пиридилдитио) пропиноамидобутан (1,4-di-(3',2'-pyridyldithio)propinoamido butane (DPDPB)).
Гетеробифункциональные сшивающие реагенты содержат одну или несколько различных реагирующих групп (например, реагирующую с аминами группу и реагирующую с сульфгидрилами группу) и сшиваются с одним из полипептидов через реагирующую с аминами группу или реагирующую с сульфгидрилами группу, а затем реагируют с другим полипептидом через непрореагировавшую группу. Существует множество гетеробифункциональных галоацетильных сшивающих реагентов, а также пиридилдисульфидных сшивающих реагентов. Карбодиимиды служат классическим примером гетеробифункциональных сшивающих реагентов для конъюгирования карбоксилов с аминами, что дает амидную связь.
Подходящее антитело в некоторых вариантах осуществления должно содержать детектируемую метку. Подходящие детектируемые метки включают любую композицию, детектируемую спектроскопическим, фотохимическим, биохимическими, иммунохимическим, электрическим, оптическим или химическим способом. Подходящие детектируемые метки включают, без ограничения, магнитные шарики (например, Dynabeads™), флуоресцентные красители (например, флуоресцеин изотиоцианат, техасский красный, родамин, зеленый флуоресцентный белок, красный флуоресцентный белок, желтый флуоресцентный белок и т.п.), радиоактивные метки (например, 3Н, 125I, 35S, 14C или 32Р), ферменты (например, пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, люциферазу и другие, широко используемые в ферментном иммуносорбентном анализе (ELISA)) и колориметрические метки, такие как коллоидное золото или цветные стеклянные или пластиковые (например, полистиреновые, полипропиленовые, латексные и т.д.) шарики.
В некоторых вариантах осуществления подходящее антитело содержит контрастное вещество или радиоизотоп, при этом контрастное вещество или радиоактивный изотоп должно подходить для применения в визуализации, например, при проведении визуализации на людях. Неограничивающие примеры меток включают такой радиоизотоп, как 1231I (йод), 18F (фтор), 99Тс (технеций), 111In (индий) и 67Ga (галлий), и такой контрастный агент, как гадолиний (Gd), диспрозий и железо. Радиоактивные изотопы Gd (153Gd) также доступны и подходят для процедур визуализации, проводимых на других млекопитающих. Подходящее антитело может быть помечено с использованием стандартных методик. Например, подходящее антитело может быть йодировано при помощи хлорамина Т или 1,3,4,6-тетрахлор-3а,6адифенилгликолурила. При фторировании фтор добавляют к антителу анти-Tau в процессе синтеза реакцией замещения ионов фтора. См. обзоры по синтезу белков с такими радиоизотопами: Muller-Gartner, H., TIB Tech., 16:122-130 (1998) и Saji, H., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 16(2):209-244 (1999). Подходящее антитело также может быть помечено контрастным веществом при помощи стандартных методик. Например, подходящее антитело может быть помечено Gd путем конъюгирования с антителом низкомолекулярных хелатов Gd, таких как Gd-диэтилентриаминпентауксусная кислота (GdDTPA) или Gd тетраазациклододекантетрауксусная кислота (GdDOTA). См. Caravan et al., Chem. Rev. 99:2293-2352 (1999) и Lauffer et al., J. Magn. Reson. Imaging, 3:11-16 (1985). Подходящее антитело может быть помечено Gd, например, путем конъюгирования с антителом хелатов полилизин-Gd. Например, см. Curtet et al., Invest. Radiol., 33(10):752-761 (1998). С другой стороны, подходящее антитело может быть помечено Gd путем инкубирования парамагнитных полимеризованных липосом, содержащих липид-хелатор Gd, с авидином и биотинилированным антителом. Например, см. Sipkins et al., Nature Med., 4:623-626 (1998).
Подходящие флуоресцентные белки, которые могут быть присоединены к подходящему антителу, включают, без ограничения, зеленый флуоресцентный белок (GFP) из Aequoria victoria, либо его мутант или производное, например, как описано в патентах США №№ 6066476; 6020192; 5985577; 5976796; 5968750; 5968738; 5958713; 5919445; 5874304; например, Enhanced GFP, многие такие GFP, которые являются коммерчески доступными, например, от Clontech, Inc.; красный флуоресцентный белок; желтый флуоресцентный белок; любые из целого ряда флуоресцентных и окрашенных белков из видов Anthozoan, как описано, например, у Matz et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:969-973; и т.п.
В некоторых вариантах осуществления антитело должно быть связано (например, ковалентно или нековалентно связано) с партнером по слиянию, например, лигандом; эпитопной меткой; пептидом; белком, отличающимся от антитела; и т.п. Подходящие партнеры по слиянию включают пептиды и полипептиды, которые придают повышенную стабильность in vivo (например, увеличение времени полувыведения из сыворотки); облегчают очистку, например, полигистидиновые последовательности (His)n, например 6His (SEQ ID NO: 57), и т.п.; обеспечивают секрецию слитого белка из клетки; обеспечивают эпитопную метку, например, GST, гемагглютинин (НА, например, YPYDVPDYA; SEQ ID NO: 58), FLAG (например, DYKDDDDK; SEQ ID NO: 59), c-myc (например, EQKLISEEDL; SEQ ID NO:60) и т.п.; обеспечивают детектируемый сигнал, например фермент, который генерирует детектируемый продукт (например, β-галактозидаза, люцифераза), или белок, который сам детектируется, например зеленый флуоресцентный белок, красный флуоресцентный белок, желтый флуоресцентный белок и т.д.; обеспечивают мультимеризацию, например такой мультимеризационный домен, как Fc-части иммуноглобулина; и т.п.
Слияние может также включать в себя обеспечивающий сродство домен, включая пептидные по- 32 038994 следовательности, которые могут взаимодействовать с партнером по связыванию, например, иммобилизованном на твердой подложке, применяющимся для идентификации или очистки. Последовательные единичные аминокислоты, такие как гистидин, при слиянии с белком могут использоваться для одностадийной очистки слитого белка путем высокоаффинного связывания со смолой на колонке, такой как никель-сефароза. Типичные домены сродства включают His5 (HHHHH) (SEQ ID NO: 61), HisX6 (НННННН) (SEQ ID NO: 57), C-myc (EQKLISEEDL) (SEQ ID NO: 60), Flag (DYKDDDDK) (SEQ ID NO: 59), StrepTag (WSHPQFEK) (SEQ ID NO: 62), гемагглютинин, например НА-тег (YPYDVPDYA; SEQ ID NO: 58), глютатион-S-трансферазу (GST), тиоредоксин, целлюлозосвязывающий домен, RYIRS (SEQ ID NO: 63), Phe-His-His-Thr (SEQ ID NO: 64), хитин-связывающий домен, S-пептид, пептид T7, SH2-домен, С-концевой РНК-тег, WEAAAREACCRECCARA (SEQ ID NO: 65), металл-связывающие домены, например цинк-связывающие домены или кальций-связывающие домены, такие как домены кальцийсвязывающих белков, например кальмодулина, тропонина С, кальциневрина В, легкой цепи миозина, рековерина, S-модулина, визинина, VILIP, нейрокальцина, гиппокальцина, фреквенина, кальтрактина, большой субъединицы кальпаина, белков S100, парвальбумина, кальбиндина D9K, кальбиндина D28K, а также кальретинин, интеины, биотин, стрептавидин, MyoD, лейциновые молнии и мальтозосвязывающий белок.
Подходящее антитело в некоторых вариантах осуществления должно быть слито с полипептидом, который связывается с эндогенным рецептором гематоэнцефалического барьера (blood brain barrier (BBB)). Связывание подходящего антитела с полипептидом, связывающимся с эндогенным рецептором ВВВ, облегчает прохождение через ВВВ, например, в рассматриваемом способе лечения (см. ниже), включающем введение данного антитела индивидууму, нуждающемуся в этом. Подходящие полипептиды, которые связываются с эндогенными рецепторами ВВВ, включают антитела, например, моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с эндогенным рецептором ВВВ. Подходящие эндогенные рецепторы ВВВ включают, но не ограничиваются ими, инсулиновый рецептор, трансферриновый рецептор, лептиновый рецептор, липопротеиновый рецептор и рецептор инсулиноподобного фактора роста. Например, см. публикации патента США № 2009/0156498.
В качестве примера подходящее антитело к тау-белку может быть биспецифическим антителом, содержащим первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывается с эпитопом полипептида тау-белка; и второй антигенсвязывающий участок, который связывается с эндогенным рецептором ВВВ. Например, в некоторых случаях подходящее антитело к тау-белку представляет собой биспецифическое антитело, содержащее первый антигенсвязывающий участок, который специфически связывается с эпитопом полипептида тау-белка; и второй антигенсвязывающий участок, который связывается с трансферриновым рецептором.
Например, подходящее антитело к тау-белку может быть слито с пептидом, который облегчает прохождение через ВВВ, при этом пептид имеет длину от около 15 до около 25 аминокислот и содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере около 85% идентичности аминокислотной последовательности с одним из следующих пептидов: Angiopep-1 (TFFYGGCRGKRNNFKTEEY; SEQ ID NO: 66); Angiopep-2 (TFFYGGSRGKRNNFKTEEY; SEQ ID NO: 67); Cys-Angiopep-2 (CTFFYGGSRGKRNNFKTEEY; SEQ ID NO: 68); Angiopep-2-Cys (TFFYGGSRGKRNNFKTEEYC; SEQ ID NO: 69); и апротининовый фрагмент (TFVYGGCRAKRNNFKS; SEQ ID NO: 70). См., например, публикации патентов США 2011/0288011 и 2009/0016959. Пептид, который облегчает прохождение через ВВВ, может быть слит с N-концом области легкой цепи анти-Tau, с С-концом области легкой цепи антиTau, с N-концом области тяжелой цепи антитела к тау-белку, с С-концом области тяжелой цепи антитела к тау-белку, с N-концом одноцепочного антитела к тау-белку, с С-концом одноцепочного антитела к таубелку и т.д.
В некоторых вариантах осуществления подходящее антитело содержит модификацию полиаминами. Модификация подходящего антитела полиаминами повышает проницаемость модифицированного антитела для ВВВ. Подходящее антитело может быть модифицировано полиаминами природными или синтетическими. Например, см. патент США № 5670477. Подходящие природные полиамины включают путресцин, спермидин, спермин, 1,3-диаминпропан, норспермидин, син-гомоспермидин, термин, термоспермин, кальдопентамин, гомокальдопентамин и канавалмин. Особенно подходят путресцин, спермидин и спермин. Синтетические полиамины представлены эмпирической формулой CXHYNZ, могут быть циклическими или ациклическими, разветвленными или неразветвленными, углеводородными цепями из от 3 до 12 атомов углерода, которые дополнительно включают в себя от 1 до 6 групп NR или N(R)2, где R представляет собой Н, (С1-С4)-алкил, фенил или бензил. Полиамины могут быть присоединены к антителу при помощи любого стандартного способа сшивания. В некоторых вариантах осуществления подходящее антитело подвергают модификации так, чтобы оно включало углеводную часть, где углеводный фрагмент может быть ковалентно связан с антителом. В некоторых вариантах осуществления подходящее антитело модифицировано так, чтобы оно включало липидную группу, где липидная группа может быть ковалентно связана с антителом. Подходящие липидные группы включают, например, N-жирные ацильные группы, такие как N-лауроил, N-олеоил и др.; жирный амин, такой как додециламин, олеоил
- 33 038994 амин и т.д.; С3-С16 с длинной цепью, алифатической липид и т.п. Например, см. патент США. № 6638513.
В некоторых вариантах осуществления подходящее антитело заключено в липосомы.
Комбинированная терапия.
Антитело к тау-белку может вводиться нуждающемуся в этом индивидууму само по себе (например, в виде монотерапии); или в виде комбинированной терапии с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Например, антитело к тау-белку можно вводить в в виде комбинированной терапии с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами для лечения инсульта или для лечения TBI.
В комбинации с, как используется в настоящем описании, относится к применениям, когда, например, первое соединение вводится на протяжении всего курса введения второго соединения; когда первое соединение вводят в течение периода времени, который перекрывается с введением второго соединения, например, когда введение первого соединения начинается перед введением второго соединения и введение первого соединения заканчивается до окончания введения второго соединения; когда введение второго соединения начинается до введения первого соединения и введение второго соединения заканчивается до окончания введения первого соединения; когда введение первого соединения начинается до введения второго соединения и введение второго соединения заканчивается до окончания введения первого соединения; когда введение второго соединения начинается до введения первого соединения и введение первого соединения заканчивается до окончания введения второго соединения. Таким образом, в комбинации может также относиться к лечебной схеме, включающей введение двух или более соединений. Выражение в комбинации с, используемое в данном описании, также относится к введению двух или более соединений, которые могут вводиться в одних и тех же или различных композициях, одними и теми же или различными способами и в одной и той же лекарственной форме или лекарственной форме другого типа.
Лица, подлежащие лечению.
Лица, подходящие для лечения с использованием антитела к тау-белку, включают лиц, которым был поставлен диагноз таупатия (например, острая таупатия); лиц, подвергающихся большему риску развития таупатии, чем население в целом (например, физические лица, имеющие генетическую предрасположенность к развитию таупатии); военнослужащих и т.п. В некоторых случаях физическое лицо является человеком в возрасте от менее чем 10 лет до 10 лет; от 10 лет до около 15 лет; от около 15 лет до около 20 лет или от около 20 лет до около 30 лет. В некоторых случаях физическое лицо является взрослым человеком. В некоторых случаях физическое лицо является взрослым человеком в возрасте от около 20 лет до около 30 лет; в возрасте 30 лет и старше; в возрасте 40 лет и старше, в возрасте 50 лет и старше, в возрасте 60 лет и старше, 70 лет и старше или 80 лет или старше. Например, взрослый человек может быть в возрасте от 40 лет до 50 лет, от 50 лет до 60 лет, от 60 лет до 70 лет или старше 70 лет. В некоторых случаях физическое лицо является персоной, которая имеет TBI. В некоторых случаях физическое лицо является тем, кто перенес инсульт.
Лекарственные формы.
В способах по изобретению антитело к тау-белку может вводиться в организм любым стандартным способом, способным принести требуемый терапевтический эффект или диагностический эффект. Так, данный агент может входить в целый ряд лекарственных форм для лечебного применения. В частности, антитело к тау-белку может быть заключено в фармацевтические композиции вместе с подходящими, фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями и может быть приготовлено в виде препаратов в твердой, полутвердой, жидкой или газообразной форме, таких как таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, инъекции, ингаляторы и аэрозоли.
В фармацевтических дозированных формах антитело к тау-белку может вводиться в виде фармацевтически приемлемых солей, или они могут применяться сами по себе или в подходящей ассоциации, а также в комбинации с другими фармацевтически активными соединениями. Следующие способы и наполнители приводятся только для примера и никоим образом не для ограничения.
Для пероральных препаратов антитело к тау-белку может применяться само по себе или в комбинации с соответствующими добавками для составления таблеток, порошков, гранул или капсул, к примеру, с обычными добавками, такими как лактоза, маннитол, кукурузный крахмал или картофельный крахмал; со связующими веществами, такими как кристаллическая целлюлоза, производные целлюлозы, гуммиарабик, кукурузный крахмал или желатины; с дезинтегрирующими веществами, такими как кукурузный крахмал, картофельный крахмал или натриевая карбоксиметилцеллюлоза; со смазывающими веществами, такими как тальк или стеарат магния; а если нужно, то с разбавителями, буферными веществами, консервантами и ароматизаторами.
Антитело к тау-белку может быть заключено в препараты для инъекций путем растворения, суспендирования или эмульгирования его в водном или неводном растворителе, таком как растительное или другие подобные масла, синтетические кислые алифатические глицериды, сложные эфиры высших алифатических кислот или пропиленгликоль; а если нужно, то с обычными добавками, такими как солюбилизаторы, изотонические вещества, суспендирующие вещества, эмульгаторы, стабилизаторы и консерванты.
- 34 038994
Фармацевтические композиции, содержащие антитело к тау-белку, получают смешиванием антитела, имеющего требуемую степень чистоты, с необязательно физиологически приемлемыми носителями, эксципиентами, стабилизаторами, детергентами, буферами и/или изотоническими веществами. Приемлемые носители, наполнители и/или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту, глутатион, цистеин, метионин и лимонную кислоту; консерванты (такие как этанол, бензиловый спирт, фенол, м-крезол, n-хлор-м-крезол, метил- или пропилпарабены, хлорид бензалкония или их комбинации); аминокислоты, такие как аргинин, глицин, орнитин, лизин, гистидин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота, изолейцин, лейцин, аланин, фенилаланин, тирозин, триптофан, метионин, серин, пролин и их комбинации; моносахариды, дисахариды и другие углеводы; низкомолекулярные (менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как желатин или сывороточный альбумин; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как трегалоза, сахароза, лактоза, глюкоза, манноза, мальтоза, галактоза, фруктоза, сорбоза, рафиноза, глюкозамин, N-метилглюкозамин, галактозамин и нейраминовая кислоты; и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как Tween, Brij Pluronics, Тритон-Х или полиэтиленгликоль (PEG; ПЭГ).
Фармацевтическая композиция может находиться в жидком виде, лиофилизованном виде или жидком виде, восстановленном из лиофилизованной формы, при этом лиофилизованный препарат должен быть восстановлен стерильным раствором перед введением. Стандартная методика восстановления лиофилизованной композиции состоит в добавлении туда объема чистой воды (обычно эквивалентного объему, удаленному при лиофилизации); однако при получении фармацевтических композиций для парентерального введения можно использовать растворы, содержащие антибактериальные средства; см. также Chen (1992) Drug Dev Ind Pharm 18, 1311-54. Типичные концентрации антител в фармацевтической композиции могут составлять около 1 до около 200 мг/мл, или от около 50 до около 200 мг/мл, или от около 150 до около 200 мг/мл.
Водный препарат антитела можно готовить в забуференном растворе, например, при рН с интервалом от около 4,0 до около 7,0, или от около 5,0 до около 6,0, или, альтернатно, около 5,5. Примеры буферов, подходящих для рН в данном диапазоне, включают фосфатный, гистидиновый, цитратный, сукцинатный, ацетатный буфер и буфера из других органических кислот. Концентрация буфера может составлять от 1 до 100 мМ или от 5 до 50 мМ, в зависимости, например, от буфера и требуемой тоничности состава.
В лекарственную форму антитела может входить вещество для модулирования тоничности состава. Типичными веществами для поддержания тоничности являются хлорид натрия, хлорид калия, глицерин и любой другой компонент из группы аминокислот, сахаров, а также их комбинации. В некоторых вариантах осуществления водные формы являются изотоничными, хотя могут подойти и гипертоничные или гипотоничные растворы. Термином изотоничный обозначаются растворы с такой же тоничностью, как и другой раствор, с которым он сравнивается, такой как физиологический солевой раствор или сыворотка. Вещества для поддержания тоничности могут применяться в количестве от 5 до 350 мМ, например, в количестве от 100 до 350 мМ.
В состав лекарственной формы антитела также может быть добавлено поверхностно-активное вещество для уменьшения агрегации заключенного в нем антитела и/или чтобы свести к минимуму образование частиц в композиции и/или уменьшить адсорбцию. Типичными поверхностно-активными веществами являются полиоксиэтиленсорбитановые эфиры жирных кислот (Tween), алкиловые эфиры полиоксиэтилена (Brij), алкилфениловые эфиры полиоксиэтилена (Triton-X), сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена (Poloxamer, Pluronic) и додецил сульфат натрия (SDS). Примерами подходящих полиоксиэтиленсорбитановых эфиров жирных кислот являются полисорбат 20 (продается под торговой маркой Tween 20™) и полисорбат 80 (продается под торговой маркой Tween 80™). Примерами подходящих сополимеров полиоксиэтилена и полиоксипропилена являются те, которые продаются под наименованием Pluronic F68 или Poloxamer 188™. Примерами подходящих алкиловых эфиров полиоксиэтилена являются те, которые продаются под торговой маркой Brij™. Типичные концентрации поверхностноактивного вещества составляют от 0,001 до 1% мас./об.
Для защиты лабильного активного ингредиента (например, белка) от дестабилизирующих условий в процессе лиофилизации также можно добавлять лиопротекторы. Например, известные липопротекторы включают сахара (в том числе глюкозу и сахарозу); полиолы (в том числе маннитол, сорбитол и глицерин); и аминокислоты (в том числе аланин, глицин и глутаминовую кислоту). Лиопротекторы можно включать в количестве от 10 до 500 мМ.
В некоторых вариантах осуществления подходящая лекарственная форма включает антитело к таубелку, а также одно или несколько из вышеприведенных веществ (например, поверхностно-активное вещество, буфер, стабилизатор, изотонический агент) одного или нескольких консервантов, таких как этанол, бензиловый спирт, фенол, м-крезол, n-хлор-м-крезол, метил- или пропилпарабен, бензалконий хлорид и их комбинации. В других вариантах осуществления консервант входит в состав, например, в концентрации от 0,001 до 2% (мас./об.).
- 35 038994
Например, подходящая лекарственная форма может представлять собой жидкую или лиофилизованную форму, пригодную для парентерального введения, и может содержать: от 1 до 200 мг/мл антитела к тау-белку; от 0,001 до 1% по меньшей мере одного поверхностно-активного вещества; от 1 до 100 мМ буфера; необязательно от 10 до 500 мМ стабилизатора и от 5 до 305 мМ поддерживающего тоничность вещества; и имеет рН от 4,0 до 7,0.
В качестве другого примера подходящая парентеральная лекарственная форма представляет собой жидкую или лиофилизованную форму, содержащую от 1 до 200 мг/мл антитела к тау-белку; 0,04% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5.
В качестве другого примера подходящая лекарственная форма представляет собой лиофилизованную форму, содержащую: 1) 15 мг/мл антитела к тау-белку; 0,04% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5; или 2) 75 мг/мл антитела к тау-белку; 0,04% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5; или 3) 75 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5; или 4) 75 мг/мл антитела к тау-белку; 0,04% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ трегалозы; и имеет рН 5,5; или 5) 75 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ трегалозы; и имеет рН 5,5.
В качестве другого примера подходящая лекарственная форма представляет собой жидкую форму, содержащую: 1) 7,5 мг/мл антитела к тау-белку; 0,022% мас./об. Tween 20; 120 мМ L-гистидина и 125 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5; или 2) 37,5 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; мМ Lгистидина и 125 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5; или 3) 37,5 мг/мл антитела к тау-белку; 0,01% мас./об. Tween 20; 10 мМ L-гистидина и 125 мМ сахарозы; и имеет рН 5,5; или 4) 37,5 мг/мл антитела к таубелку; 0,02% мас./об. Tween 20; 10 мМ L-гистидина; 125 мМ трегалозы; и имеет рН 5,5; или 5) 37,5 мг/мл антитела к тау-белку; 0,01% мас./об. Tween 20; 10 мМ L-гистидина и 125 мМ трегалозы; и имеет рН 5,5; или 6) 5 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ трегалозы; и имеет рН 5,5; или 7) 75 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ маннитола; и имеет рН 5,5; или 8) 75 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ Lгистидина и 140 мМ хлорида натрия; и имеет рН 5,5; или 9) 150 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ трегалозы; и имеет рН 5,5; или 10) 150 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 250 мМ маннитола; и имеет рН 5,5; или 11) 150 мг/мл антитела к тау-белку; 0,02% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 140 мМ хлорида натрия; и имеет рН 5,5; или 12) 10 мг/мл антитела к тау-белку; 0,01% мас./об. Tween 20; 20 мМ L-гистидина и 40 мМ хлорида натрия; и имеет рН 5,5.
Антитело к тау-белку может применяться в составе аэрозоля для введения путем ингаляции. Антитело к тау-белку может входить в состав находящихся под давлением приемлемых вытеснителей, таких как дихлордифторметан, пропан, азот и др. Более того, антитело к тау-белку может входить в состав суппозиториев при смешивании с различными основами типа эмульгирующих основ или водорастворимых основ. Данное антитело может вводиться интраректально через суппозитории. Суппозитории могут включать носители, такие как масло какао, карбовакс и полиэтиленгликоли, которые плавятся при температуре тела, но затвердевают при комнатной температуре.
Могут предусматриваться единичные стандартные лекарственные формы для перорального или ректального введения, такие как сиропы, эликсиры и суспензии, при этом каждая единица дозирования, например чайная ложка, столовая ложка, таблетка или свеча, содержит заданное количество композиции, содержащей один или более ингибиторов. Аналогичным образом, единичные стандартные лекарственные формы для инъекций или внутривенного введения могут содержать антитело к тау-белку в композиции в виде раствора в стерильной воде, нормальном физиологическом растворе или другом фармацевтически приемлемом носителе.
Термин единичная стандартная лекарственная форма в настоящем изобретении относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для человека или животных, причем каждая единица содержит заранее определенное количество антитела к тау-белку по настоящему изобретению, рассчитанное в количестве, достаточном для получения требуемого эффекта, вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или наполнителем.
Спецификации для антитела к тау-белку могут зависеть от конкретного используемого антитела и того эффекта, который нужно получить, а также фармакодинамики по каждому антителу в хозяине.
Другие способы введения также найдут применение в способе по настоящему изобретению. Например, подходящее антитело может быть заключено в суппозитории, а в некоторых случаях в аэрозоли и интраназальные композиции. В случае суппозиториев в состав носителя должны входить традиционные связывающие вещества и такие носители, как полиалкиленгликоли или триглицериды. Такие суппозитории могут быть получены из смесей, содержащих активный ингредиент с интервалом от 0,5 до 10% (мас./мас.), например от 1 до 2%.
Интраназальные лекарственные формы обычно включают носители, которые не вызывают раздражения слизистой оболочки носа и не нарушают существенно цилиарную функцию. Можно использовать такие разбавители, как вода, водный солевой раствор или другие известные субстанции. Интраназальные формы также могут содержать консерванты, включая, но не ограничиваясь ими, хлорбутанол и бензал- 36 038994 коний хлорид. Может присутствовать и поверхностно-активное вещество для усиления всасывания антитела слизистой оболочкой.
Антитело к тау-белку может вводиться в виде формы для инъекций. Обычно композиции для инъекций готовятся в виде жидких растворов или суспензий; также можно приготовить твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидком носителе перед инъекцией. Препарат также может быть эмульгирован или антитело инкапсулировано в липосомных носителях.
Подходящими носителями являются, к примеру, вода, физиологический раствор, декстроза, глицерин, этанол и др. и их комбинации. Кроме того, если желательно, носитель может содержать небольшое количество вспомогательных веществ, таких как увлажняющих или эмульгирующих веществ или рНбуферных веществ. Фактические способы получения таких дозированных форм известны или должны быть известны специалистам в данной области. Например, см. Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 17th edition, 1985. Вводимая композиция или лекарственная форма, в любом случае, должна содержать количество антитела к тау-белку, адекватное для достижения требуемого состояния у подлежащего лечению субъекта.
Фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как переносчики, адъюванты, носители или разбавители, являются общедоступными. Более того, общедоступными являются и такие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, как средства доведения рН и буферные вещества, средства доведения тоничности, стабилизаторы, смачивающие вещества и др.
В некоторых вариантах осуществления антитело к тау-белку входит в состав формы с контролируемым высвобождением. Препараты с замедленным высвобождением могут быть получены хорошо известными способами. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащих антитело, при этом матрицы имеют вид формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают полиэфиры, сополимеры L-глутаминовой кислоты и этил-L-глутамата, не разлагающийся этилен-винил ацетат, гидрогели, полилактиды, разлагающиеся сополимеры молочной и гликолевой кислоты и поли-D-(-)-3-оксимасляная кислота. Возможную потерю биологической активности и возможные изменения в иммуногенности антител, содержащихся в препаратах с замедленным высвобождением, можно предотвратить с помощью соответствующих добавок, контролируя содержание влаги и путем разработки специфических композиций полимерных матриц.
Контролируемое высвобождение в пределах объема настоящего изобретения может означать любую из целого ряда дозовых форм с замедленным высвобождением. Следующие термины можно рассматривать как практически эквивалентные контролируемому высвобождению в целях настоящего изобретения: продолжительное высвобождение, контролируемое высвобождение, замедленное высвобождение, депо, постепенное высвобождение, продолжительное высвобождение, запрограммированное высвобождение, длительное высвобождение, пропорциональное высвобождение, продленное высвобождение, депонированное, замедленное, медленное высвобождение, распределенное высвобождение, затяжное высвобождение, фиксированное по времени, замедленное выделение, длительное выделение, последовательное выделение, лекарства длительного действия, продолжительного действия, неоднократного действия, медленного действия, затяжного действия и растянутого высвобождения. Дополнительное обсуждение этих терминов приведено в Lesczek Krowczynski, Extended-Release Dosage Forms, 1987 (CRC Press, Inc.).
Различные технологии контролируемого высвобождения охватывают очень широкий круг дозированных лекарственных форм. Технологии контролируемого высвобождения включают, без ограничения, физические системы и химические системы.
Физические системы включают, без ограничения, резервуарные системы с контролирующими скорость мембранами, такие как микроинкапсулирование, макроинкапсулирование и мембранные системы; резервуарные системы без контролирующих скорость мембран, такие как полые волокна, ультрамикропористая триацетатцеллюлоза и пористые полимерные субстраты и пены; монолитные системы, включая системы, физически растворенные в непористых, полимерных или эластомерных матрицах (например, неэродируемых, эродируемых, пропускающих окружающие вещества и разлагаемых), и материалы, физически диспергированные в непористых, полимерных или эластомерных матрицах (например, неэродируемых, эродируемых, пропускающих окружающие вещества и разлагаемых); ламинированные структуры, включая резервуарные слои, химически сходные или несходные с внешними контрольными слоями; и другие физические методы, такие как осмотические насосы или адсорбция на ионообменные смолы.
Химические системы включают, без ограничения, химическую эрозию полимерных матриц (например, гетерогенную или гомогенную эрозию) или биологическую эрозию полимерных матриц (например, гетерогенную или гомогенную). Дополнительное обсуждение различных систем для контролируемого высвобождения приведено в Agis F. Kydonieus, Controlled Release Technologies: Methods, Theory and Applications, 1980 (CrC Press, Inc.).
Существует ряд лекарственных форм с контролируемым высвобождением, разработанных для перорального введения. Они включают, без ограничения, контролируемые осмотическим давлением системы желудочно-кишечной доставки; контролируемые гидродинамическим давлением системы желудоч- 37 038994 но-кишечной доставки; контролируемые проницаемостью мембранные системы доставки в желудочнокишечной доставки, которые включают контролируемые проницаемостью микропористые мембранные устройства желудочно-кишечной доставки; устойчивые к желудочному соку, нацеленные на кишечник устройства желудочно-кишечной доставки с контролируемым высвобождением; контролируемые диффузией в геле системы желудочно-кишечной доставки и контролируемые ионным обменом системы желудочно-кишечной доставки, которые включают катионные и анионные препараты. Дополнительную информацию по системам доставки лекарств с контролируемым высвобождением можно найти в Yie W. Chien, Novel Drug Delivery Systems, 1992 (Marcel Dekker, Inc.).
Протоколы лечения.
В одном аспекте обеспечиваются способы лечения таупатии (например, острой таупатии) у индивидуума, причем данные способы включают введение индивидууму антитела к тау-белку.
Соответственно, в одном варианте осуществления доза антитела к тау-белку рассчитывается на мг/кг массы тела. Однако в другом варианте осуществления доза антитела к тау-белку является постоянной фиксированной дозой, которая фиксируется независимо от массы пациента. В некоторых вариантах осуществления режимы дозирования регулируют так, чтобы обеспечить оптимальный желаемый ответ (например, эффективный ответ).
В другом варианте осуществления доза антитела к тау-белку изменяется с течением времени. Например, антитело к тау-белку может первоначально вводиться в высокой дозе, и его доза может быть понижена со временем. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку первоначально вводят в низких дозах и увеличивают дозу со временем.
В другом варианте осуществления количество вводимого антитела к тау-белку постоянно для каждой дозы. В другом варианте осуществления количество вводимого антитела изменяется с каждой дозой. Например, поддерживающая (или последующая) доза антитела может быть выше или такой же, как нагрузочная доза, которую вводят вначале. В другом варианте осуществления поддерживающая доза антитела может быть ниже или такой же, как нагрузочная доза.
В одном из вариантов осуществления антитело к тау-белку вводят в дозе 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 мг/кг. В одном из вариантов осуществления антитело к тау-белку вводят в дозе 10 мг/кг. В одном из вариантов осуществления антитело к тау-белку вводят в дозе 4 мг/кг. В другом варианте осуществления антитело к тау-белку вводят один раз. В другом варианте осуществления вводят более одной дозы антитела к тау-белку.
В других вариантах осуществления антитело к тау-белку вводят один раз в неделю, один раз в два или три недели, один раз в месяц до тех пор, пока наблюдается клинический эффект, или, например, до тех пор, пока не появится полный ответ или неуправляемая токсичность.
В другом варианте осуществления антитело к тау-белку вводится в качестве первой линии терапии (например, начальная или первая терапия). В другом варианте осуществления антитело к тау-белку вводится в качестве второй линии терапии (например, после начальной или первой терапии, включая случай после рецидива и/или когда первая терапия была неудачной).
Следующие примеры являются только иллюстративными и не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего раскрытия в любом случае, поскольку много вариантов и их эквиваленты будут очевидны для специалистов в данной области техники после прочтения настоящего описания.
Содержание всех ссылок, записей в Genbank, патентов и опубликованных патентных заявок, цитируемых в данной заявке, включено сюда посредством ссылки.
Примеры
Следующие примеры приводятся для того, чтобы предоставить рядовым специалистам полное изложение и описание того, как осуществить и использовать данное изобретение, и не должны ограничивать рамки того, что авторы изобретения считают своим изобретением, и не должны означать, что приведенные ниже эксперименты - это все или единственные проведенные эксперименты. Предпринимались все усилия для обеспечения точности в отношении используемых чисел (например, количества, температуры и т.п.), но следует учитывать и некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иначе, все доли выражены по массе, молекулярные массы представляют усредненные молекулярные массы, температура выражена в градусах Цельсия, а давление равно или близко атмосферному. Могут применяться стандартные сокращения, например, п.о. - пара оснований; т.п.о. - тысяча пар оснований; пл - пиколитр; с - секунды; мин - минуты; ч - часы; а.к. - аминокислота; нт - нуклеотид; в/м внутримышечно; в/б - внутрибрюшинно; п/к - подкожно и др.
Пример 1. Влияние IPN002 на уровни Tau и на уровни Άβ.
Самцам яванского макака (Масаса fascicularis) делали однократную медленную болюсную инъекцию IPN002 с уровнем дозы 20 мг/кг и собирали образцы плазмы крови и цереброспинальной жидкости (CSF) в различные моменты времени после инъекции. Все образцы (CSF и плазма крови) измерялись на наличие IPN002 с использованием способа ELISA для анализа Tau методом захвата. Данный анализ способен обнаружить только тот IPN002, который не связан тау-белком. Кроме того, уровни Tau и Άβ измерялись в CSF с использованием коммерчески доступных анализов ELISA. Иммобилизованное антитело,
- 38 038994 использованное в тесте на Tau (Invitrogen), конкурирует с IPN002, и поэтому данный анализ дает информацию только об уровне свободного тау-белка (т.е. только Tau, который не связан с IPN002). Как показано на фиг. 1, максимальная концентрация IPN002 в плазме была достигнута вскоре после инъекции (приблизительно 666 мкг/мл через 5 мин после инъекции) и оставалась относительно постоянной в течение 8 ч, после чего антитело было выведено из плазмы с ожидаемой кинетикой. Удивительно, но IPN002 был обнаружен в CSF в самой ранней исследуемой временной точке (1 ч, фиг. 1), но на гораздо более низких уровнях, чем наблюдаемые уровни в плазме. Уровни IPN002 в CSF отслеживали изменения уровней в плазме в течение первых 24 ч после инъекции, но затем оставались относительно постоянным в течение 168 ч.
Фиг. 1. Измерение IPN002 в CSF и плазме яванских макак после однократной инъекции IPN002 с уровнем дозы 20 мг/кг. IPN002 измеряли с использованием специфического анализа ELISA. Значения представляют собой среднее значение для всех образцов, собранных в определенные моменты времени (среднее значение ± стандартное отклонение).
В согласии с наблюдением быстрого обнаружения IPN002 в цереброспинальной жидкости, уровни тау-белка также значительно уменьшались в течение 1 ч с момента инъекции IPN002 (фиг. 2). В самом деле, свободный тау-белок не обнаруживался в CSF через 8 ч после инъекции, и данный эффект сохранялся в течение 168 ч в соответствии с фармакокинетикой IPN002 в CSF.
Фиг. 2. Измерение IPN002 и Tau в CSF яванских макак после однократной инъекции IPN002 с уровнем дозы 20 мг/кг. IPN002 измеряли с использованием специфичного анализа ELISA. Значения представляют собой среднее значение для всех образцов, собранных в определенные моменты времени (среднее значение ± стандартное отклонение). Tau-белок измеряли с использованием коммерчески доступного анализа ELISA (Invitrogen), и значения представляют собой среднее значение для всех образцов, собранных в определенные моменты времени (среднее ± стандартная ошибка среднего). Следует отметить, что образцы CSF, собранные за 7 дней до инъекции IPN002 (день -7), приведены на графике для контроля.
В противоположность этому уровни Ав-белка в CSF существенно не изменились при испытанных условиях (фиг. 3).
Фиг. 3. Измерение Ав-белка и тау-белка в CSF яванских макак после однократной инъекции IPN002 с уровнем дозы 20 мг/кг. Тау-белок и Ав-белок измеряли с использованием коммерчески доступных анализов ELISA, и значения представляют собой среднее значение для всех образцов, собранных в определенные моменты времени (среднее ± стандартная ошибка среднего). Следует отметить, что образцы CSF, собранные за 7 дней до инъекции IPN002 (день -7), приведены на графике для контроля.
Пример 2. Влияние hu-IPN002 на уровни тау-белка и на уровни Ав.
Самцы яванского макака (Масаса fascicularis) получали гуманизированный вариант IPN002 (huIPN002), в однократной медленной болюсной инъекции в дозе 5 или 20 мг/кг.
Анализ концентраций hu-IPN002 в сыворотке крови и CSF.
Анализировали уровень hu-IPN002 в сыворотке крови и в CSF. Результаты представлены на фиг. 4А и 4В, 5А и 5В.
Как показано на фиг. 4А, введение 5 мг/кг hu-IPN002 привело к уровням hu-IPN002 в сыворотке крови, составлявшим около 25 мкг/мл, в течение около 0,1 ч. Как показано на фиг. 4В, введение 20 мг/кг hu-IPN002 привело к уровням hu-IPN002 в сыворотке крови, составлявшим около 120 мкг/мл, в течение около 0,1 ч.
Как показано на фиг. 5А, введение 5 мг/кг hu-IPN002 привело к уровням hu-IPN002 в CSF, составлявшим около 25 нг/мл, в момент времени 10 ч. Как показано на фиг. 5В, введение 20 мг/кг hu-IPN002 привело к уровням hu-IPN002 в CSF, составлявшим около 200 нг/мл, в момент времени 10 ч. Фармакокинетические данные суммированы на фиг. 6.
Анализ уровней свободного тау-белка в цереброспинальной жидкости.
Тестировали влияние hu-IPN002 на уровни свободного тау-белка в CSF. Самцов яванского макака обрабатывали, как описано выше, и измеряли величину уровней свободного тау-белка в цереброспинальной жидкости. Результаты представлены на фиг. 7. Как показано на фиг. 7, однократная инъекция в дозе 5 или 20 мг/кг hu-IPN002 понижала уровни свободного тау-белка в CSF. Уровни Tau оставались низкими в течение более 160 ч с начала введения hu-IPN002 антитела.
Анализ уровней Ae в CSF.
Оценивали влияние hu-IPN002 на уровни Ав в CSF не относящихся к человеку приматов. Самцам яванского макака (Масаса fascicularis) делали однократную медленную болюсную инъекцию hu-IPN002 с дозой 5 или 20 мг/кг. Образцы цереброспинальной жидкости (CSF) собирали в различные моменты времени после инъекции. Образцы CSF измеряли на наличие Ав40 с использованием коммерчески доступного анализа ELISA. Результаты приведены на фиг. 8. Величины представляют среднее значение для всех образцов, собранных в определенные моменты времени (среднее ± стандартная ошибка среднего).
Как показано на фиг. 8, однократная инъекция дозы 20 мг/кг hu-IPN002 понижала уровень Ав40 в CSF через около 150 ч. Уровень Ав40 в CSF продолжал падать вплоть до около 350 ч.
- 39 038994
Пример 3. Фрагменты тау-белка присутствуют в цереброспинальной жидкости, полученной от лиц с вероятной хронической травматической энцефалопатией (chronic traumatic encephalopathy (CTE)).
Образцы CSF были получены от бывших судей на линии Национальной футбольной лиги, которые проявляли поведенческие/когнитивные нарушения, и которые, как считалось, вероятно, имеют СТЕ. Образцы CSF анализировали на наличие фрагментов eTau. Фрагменты eTau выделяли способом аффинной хроматографии из объединенной CSF здоровых людей и лиц с вероятной СТЕ. Выделенные фрагменты eTau разделяли с использованием электрофореза в полиакриламидном геле; и выделенные фрагменты переносили на мембрану. Мембрану зондировали с IPN001. Результаты, представленные на фиг. 10, показывают, что фрагменты тау-белка присутствуют в CSF, полученной от лиц с вероятной СТЕ.
Пример 4. Влияние hu-IPN002 на уровни тау-белка и на уровни Ав (расширенное исследование однократной внутривенной дозы 5 или 20 мг/кг).
Самцам яванского макака делали однократную медленную болюсную инъекцию IPN002 с уровнем дозы 5 или 20 мг/кг. Кровь получали от всех животных перед введением дозы и через 0,083, 0,25, 0,5, 1, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 312 (14-й день), 480 (21-й день), 648 (28-й день), 816 (35-й день), 984 (42-й день), 1152 (49-й день) и 1320 (56-й день) ч после однократной дозы в 1-й день для анализа сывороточного hu-IPN002. CSF получали от всех животных перед введением дозы и из когорт животных через 8, 24, 48, 96, 120 и 168, 312 (14-й день), 480 (21-й день), 648 (28-й день), 816 (35-й день), 984 (42-й день), 1152 (49-й день) и 1320 (56-й день) ч для анализа IPN002 в CSF. Уровень hu-IPN002 в сыворотке крови и в CSF анализировали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).
Анализ концентраций hu-IPN002 в сыворотке крови и CSF.
Фармакокинетические сводные данные для сывороточного hu-IPN002 приведены ниже в табл. 4, а зависимость концентрации hu-IPN002 в сыворотке крови от времени представлена на фиг. 22.
Таблица 4
Средние фармакокинетические параметры для hu-IPN002 в сыворотке крови
Параметр hu-IPN002 (мг/кг)
5 20
Самцы
AUC(O-T): мкгч/мл 4,340а 21,000ь
AUC(INF): мкгч/мл 4,410 21,100
Стах: мкг/мл 27.7 130
Ттах: ч 2.2 0.36
CLT: мл/ч/кг 1,15 0.964
T-HALF: ч 170 150
Vss: Л/кг 0.293 0.271
Для T-HALF, значение представляет собой гармоническое среднее а среднее значение AUC (0-Т) рассчитывали путем усреднения значений AUC (0-816 ч), AUC (0-984 ч) и AUC (0-1152 ч);
b среднее значение AUC (0-Т) рассчитывали путем усреднения значений AUC (0-984 ч), AUC (0-1152 ч) и AUC (0-0-1320 ч).
После однократного внутривенного введения дозы средние системные экспозиции (AUC [0-Т] и AUC [INF]) hu-IPN002 увеличивались приблизительно пропорционально дозе с интервалом от 5 до 20 мг/кг. Средние CL-значения составляли 1,15 и 0,964 мл/ч, и средние значения Vss составляли 0,293 и 0,271 л/кг для доз 5 и 20 мг/кг соответственно. Средние значения T-HALF составляли 170 и 150 ч для 5 и 20 мг/кг соответственно.
Фармакокинетические сводные данные для hu-IPN002 в CSF приведены ниже в табл. 5, а зависимость концентрации hu-IPN002 в CSF от времени показана на фиг. 23.
Таблица 5
Средние фармакокинетические параметры для hu-IPN002 в CSF
Параметр hu-IPN002 (мг/кг)
5 20
Самцы
- 40 038994
AUC(O-T): мкгч/мл 5.55а 79.8Ь
AUC(INF): мкгч/мл N/A 80.8
Стах: мкг/мл 0.0277 0.217
Ттах: ч 23 23
Т-HALF: ч 210 190
Соотношение AUC(O-T) CSF/Сыворотка 0.0013 0.0038
Соотношение AUC(INF) CSF/Сыворотка N/A 0.0039
Для T-HALF, значение представляет собой гармоническое среднее
N/A = не применимо из-за недостатка данных;
а среднее системное воздействие было усреднено из индивидуальных AUC (0-312 ч);
b среднее системное воздействие было усреднено из индивидуальных AUC (0-1320 ч).
После однократного внутривенного введения дозы hu-IPN002 был обнаружен в CSF не относящихся к человеку приматов в самой ранней временной точке (через 8 ч с начала введения дозы), и средние максимальные концентрации hu-IPN002 в CSF достигались за 23 ч с начала введения дозы. Значения THALF для CSF были сходными (превышали от 1,2 до 1,3 раз) с соответствующими значениями в сыворотке крови. Средняя экспозиция (AUC [0-T]) hu-IPN002 в CSF увеличивалась быстрее, чем доза для интервала доз от 5 до 20 мг/кг. Средние соотношения AUC (0-T) CSF/сыворотка составляли 0,0013 и 0,0038 для доз 5 и 20 мг/кг соответственно. В то время как значение AUC (INF) для CSF не было отражено в отчетности для дозы 5 мг/кг из-за недостатка данных, значение AUC (INF) для CSF в случае 20 мг/кг составляло 0.0039х от соответствующего значения AUC (INF) в сыворотке крови. Анализ уровней свободного тау-белка в цереброспинальной жидкости Также тестировали влияние hu-IPN002 на уровни свободного тау-белка в CSF. Самцов яванского макака обрабатывали, как описано выше, и уровень уровней свободного тау-белка в CSF измеряли с использованием коммерческого набора для ELISA. Результаты представлены на фиг. 11, на которой изображены уровни свободного eTau в CSF (в процентах от исходного уровня) в зависимости от времени.
Как показано на фиг. 24, после однократной внутривенной дозы hu-IPN002 уровни свободного eTau в CSF уменьшались в зависимости от дозы в самой ранней временной точке (через 8 ч с начала введения дозы), с максимальными сокращениями на 83 и 99% при 5 и 20 мг/кг соответственно. При 5 мг/кг максимальный результат (минимальный уровень свободного eTau) был достигнут в период времени от 48 до 96 ч, с уровнем свободного eTau, составлявшим от 17,3 до 21% от исходного уровня. Уровни свободного eTau вернулись к исходному уровню через около 480 ч (21-й день) после однократного внутривенного введения дозы. В отличие от этого уровни eTau при дозе 20 мг/кг оставались ниже исходного уровня на протяжении 8-недельного периода с начала введения дозы. При дозе 20 мг/кг максимальное поражение цели наблюдалось в период времени от 8 до 168 ч, с уровнем свободного eTau, составлявшим от 1,35 до 7,44% от исходного уровня. В то время как уровни свободного eTau-белка оставались пониженными относительного исходного уровня на протяжении всего периода исследования, составлявшего 1320 ч, его концентрации возвращались к исходному уровню по мере более поздних измерений.
Анализ уровней Ae в CSF.
Также оценивали влияние hu-IPN002 на уровни Ав в CSF самцов яванского макака (Масаса fascicularis). Самцов яванского макака обрабатывали, как описано выше, и образцы CSF собирали в различные моменты времени после инъекции. Образцы CSF были проанализированы на наличие Ав40 с использованием коммерчески доступного анализа ELISA. Результаты представлены на фиг. 25, на которой изображены уровни Ав40 в CSF (в процентах от исходного уровня) в зависимости от времени. Никаких изменений уровней Ав40 в CSF не наблюдалось в группе дозы 5 мг/кг. В противоположность этому, в группе дозы 20 мг/кг уровни Ав40 в CSF уменьшились в среднем до 82% от исходного уровня на момент времени 480 ч. В момент времени 816 ч и на протяжении оставшегося периода исследования уровни Ав40 в CSF вернулись к исходному уровню. Уровни Ав40 в CSF были значительно понижены на 17% по сравнению с исходным уровнем в группе дозы 20 мг/кг через 3 недели с начала введения дозы, но возвращались к исходному уровню через 648 ч.
Пример 5. Влияние hu-IPN002 на уровни тау-белка и на уровни Ав (исследование однократной внутривенной дозы 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 5,0 мг/кг или 20 мг/кг).
Исследование с применением однократной внутривенной (IV) болюсной инфузии с разными уровнями дозирования проводили для оценки фармакокинетического и фармакодинамического профиля huIPN002 в сыворотке крови и CSF в течение периода времени 57 дней. Используемые уровни дозы составляли 0,5, 2, 5 и 20 мг/кг. Фармакодинамические конечные точки включали свободный eTau и Ae 42 в CSF. Одиннадцати самцам яванских макак были заранее имплантированы порт-системы для постоянного доступа к кровеносной системе (в бедренную вену и бедренную артерию) и порт-системы для постоянного доступа на поясничном уровне к цереброспинальной жидкости (CSF) (катетеры, оканчивающиеся на уровне L1). Каждый из самцов был использован ранее в фармакологических исследованиях с низко
- 41 038994 молекулярными соединениями; данному исследованию предшествовал свободный от приема лекарственных средств период по меньшей мере в один месяц. Возраст макак составлял приблизительно от 5 до 9 лет, и они весили от 4,6 до 8,7 кг в начале исследования. Обезьян обычно размещали парами и кормили стандартным кормом для обезьян (Harlan Teklad Global 20% protein Primate Diet 2050), за исключением утра перед инфузией. Вода была постоянно доступна, и свежие фрукты предоставлялись два раза в неделю. Обычно предоставлялись игрушки и устройства для добывания корма, а также были доступны телевизионные программы в помещениях для проживания колонии. Уход за лабораторными животными осуществлялся в соответствии с рекомендациями Службы общественного здравоохранения США по гуманному лечению и использованию лабораторных животных (U.S. Public Health Service Policy on the Humane Care and Use of Laboratory Animals) и Руководству по содержанию и использованию лабораторных животных (Guide for the Care and use of Laboratory Animals) (2011).
Исходные показатели каждого анализируемого компонента определяли из нескольких образцов CSF до начала исследования. Исследование началось с введения носителя каждому животному. Носитель вводили в виде однократной медленной болюсной инфузии объемом 6 мл/кг в течение 20 мин через порт венозного доступа. Носителем был 0,02% Tween-80 в PBS рН 5,8, состоящем из 10 мМ фосфата и 140 мМ NaCl. Кровь и CSF отбирали в течение по меньшей мере двух недель с начала введения носителя и до введения hu-IPN002 по следующему графику: временные точки забора образцов сыворотки крови были следующими: до дозы, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 168, 336 ч после инфузии через порт-систему для артериального доступа (времена относительно конца инфузии). Временные точки забора образцов CSF были следующими: 2, 4, 7, 8, 24, 25, 48, 49, 72, 73, 168, 169, 336 и 337 ч после инфузии.
Группы лечения были определены так, как показано в табл. 6. hu-IPN002 вводили в виде однократной медленной болюсной дозы 0,5, 2,0, 5,0 или 20,0 мг/кг в объеме дозы 6 мл/кг в течение 20 мин через порт-систему для венозного доступа. Временные точки забора образцов сыворотки крови были следующими: до дозы, 0,5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 168, 336, 504, 672, 840, 1008, 1176, 1344 и 1512 ч с начала введения дозы через порт-систему для артериального доступа (времена относительно конца инфузии).
Временные точки забора образцов CSF были следующими: 2, 4, 7, 8, 24, 25, 48, 49, 72, 73, 168, 169, 336, 337, 504, 505, 672, 673, 840, 841, 1008, 1009, 1176, 1177, 1344, 1345, 1512 и 1513 ч. Образцы CSF, отобранные во временных точках 8, 25, 49, 73, 169, 337, 505, 673, 841, 1009, 1177, 1345 и 1513 ч, использовались для промежуточных анализов, другие образцы были проанализированы в пакетном режиме в конце исследования.
Таблица 6
Дизайн исследования; однократная доза IPN001 в канюлированных яванских макаках
Группа Тестируемое средство Уровень дозы (мг/кг) Путь введения Объем дозы (мл/кг) Количество обезьян
1 носитель 0 IV 6 1
2 hu-IPN002 0,5 IV 6 3
3 hu-IPN002 2,0 IV 6 2
4 hu-IPN002 5,0 IV 6 3
5 hu-IPN002 20,0 IV 6 2
Анализ концентраций hu-IPN002 в сыворотке крови и CSF.
Уровни hu-IPN002 были измерены в образцах сыворотки и CSF с использованием специфического анализа ELISA. На фиг. 26 представлены апроксимированные зависимостью данные в сравнении с наблюдаемыми данными для hu-IPN002 в сыворотке крови, и на фиг. 27 представлены апроксимированные зависимостью данные в сравнении с наблюдаемыми данными для hu-IPN002 в CSF. Как показано на фиг. 26, AUC[INF] для hu-IPN002 увеличивалась пропорционально дозе в интервале от 0,5 мг/кг до 20 мг/кг (4131, 20192, 47087 и 145300 мкг-ч/мл при 0,5, 2, 5 и 20 мг/кг соответственно). Средние значения времени полувыведения из сыворотки крови [T-HALF] варьировались в диапазоне от 218 до 276 ч. Рассчитанная величина среднего сывороточного клиренса [CL] составила 0,12 мл/ч/кг. Значения Vss колебались от 0,037 до 0,059 л/кг.
Как показано на фиг. 27, концентрации hu-IPN002 в CSF также увеличивались пропорционально дозе, так что величина AUC[0-T] составляла 0,1% от соответствующего значения AUC[0-T] для hu-IPN002 в сыворотке крови, за исключением дозы 0,5 мг/кг, при которой оказалось, что экспозиция в CSF ниже, чем предсказывалось концентрациями в сыворотке (AUC[0-T] в CSF определили как 0,05% от AUC[0-T] в сыворотке крови).
Анализ уровней свободного тау-белка в CSF.
Влияние hu-IPN002 на уровни свободного eTau в CSF измеряли с использованием ELISA. На фиг.
- 42 038994 представлены апроксимированные зависимостью данные относительно наблюдаемых данных для huIPN002-eTau в CSF. Kdeg для деградации eTau была оценена в 0,11 ч’1. Kd была оценена в 0,16 нмоль/л.
Как показано на фиг. 29А-29В и в табл. 6 ниже, hu-IPN002 индуцирует зависимые от дозы и времени понижение уровней свободного eTau.
Таблица 6
Влияние hu-IPN002 на уровень свободного eTau в CSF (Таи12-ВТ2)
Время с начала введения дозы (часы) Нос. (п=1) 0,5 mpk (п=3) Средн ее SD CV 2 mpk (п=2) Средн ее SD CV 5 mpk (п=2) Средн ее SD CV 20 mpk (п=2) Средн ее SDa CV
2,0 105,2 85,3 9,7 11 91,1 14,8 16 79,2 13,6 17 58,0 12,3 21
4,0 106,9 81,9 13,9 17 74,6 4,6 6 41,1 1,8 4 27,0 7,5 28
7,0 112,8 88,3 16,1 18 94,5 17,2 18 36,9 1,8 5 24,9 5,9 24
24,0 105,7 86,7 20.3 23 37,9 8,9 24 20.2 4,2 21 8,3 ΝΑ
48,0 95,3 78,8 22,1 28 27,4 7,2 26 14,1 1,8 13 8,7 ΝΑ
72,0 107,8 69,3 15,3 22 31,5 15,6 50 12,8 1,4 11 <LLQ ΝΑ
168 130,2 77,9 9,6 12 26,7 9,5 36 15,6 7,3 47 9,3 ΝΑ
336 109,1 77,2 21,4 28 33,4 6,5 20 11,5 0,6 5 10,7 ΝΑ
504 94,1 78,9 10,1 13 30,6 4,4 14 13,4 3,8 28 10,8 ΝΑ
672 91,6 85,8 24,6 29 41,3 2,0 5 17,6 2,5 14 10,8 ΝΑ
840 89,9 71,5 13,9 19 41,6 9,9 24 30,7 5,7 19 18,3 ΝΑ
1008 98,8 91,2 9,8 11 47,5 13,4 28 30,2 9,2 30 12,7 1,8 14
1176 94,4 71,4 16,4 23 39,9 7,9 20 32,7 13,9 42 20,4 8,9 43
1344 114,2 88,7 14,7 17 63,3 17,4 27 26,9 18,1 67 24,0 7,1 30
1512 94,0 84,2 11,0 13 68,0 9,6 14 24,7 8,1 33 30,3 0,8 3
LLQ обозначает нижний предел количественного определения ELISA.
Как показано на фиг. 29А-29В, hu-IPN002 понижает уровень свободного eTau в CSF в зависимости от дозы и времени. Например, через 24 ч с начала введения дозы уровни свободного eTau понизились до 86,7% от исходного уровня, 37,9% от исходного уровня, 20,2% от исходного уровня и 8,3% от исходного уровня после IV доз 0,5, 2, 5 и 20 мг/кг соответственно. Через 48 ч с начала введения дозы уровни свободного eTau понизились до 78,8% от исходного уровня, 27,4% от исходного уровня, 14,1% от исходного уровня и 8,7% от исходного уровня после IV доз 0,5, 2, 5 и 20 мг/кг соответственно. Через 72 ч с начала введения дозы уровни свободного eTau понизились до 69,3% от исходного уровня, 31,5% от исходного уровня, 12,8% от исходного уровня и до нижнего предела количественного определения после IV доз 0,5, 2, 5 и 20 мг/кг соответственно. Свободные уровни eTau понизились до минимальных уровней 69,3% через 72 ч, 26,7% через 168 ч, 11,5% через 336 ч и <10% через 24 ч (% от исходного уровня) после IV доз 0,5, 2, 5 и 20 мг/кг соответственно. В отличие от этого уровни свободного eTau у животного (п=1), которому вводили дозу носителя, колебалась от 89,9 до 130,2%. Максимальное понижение уровня свободного eTau в CSF после 0,5 мг/кг составляло -50%, в то время как 20 мг/кг производили >90%-ное понижение и промежуточные дозы производили значения в пределах данного диапазона. Уменьшение содержания свободного eTau были долговременным и по-прежнему наблюдалось через 1512 ч (57 дней) с начала введения дозы в группах с дозой 2, 5 и 20 мг/кг, хотя значения постепенно и возвращались к исходному уровню. Уровень свободного eTau в CSF вернулся к исходному уровню в течение 8 дней и 57 дней после доз в 0,5 и 2 мг/кг соответственно, тогда как уровень свободного eTau в CSF был все еще подавлен на -50% и -70% через 57 дней, после доз в 5 и 20 мг/кг соответственно. Данные результаты подтверждают фармакодинамическую активность hu-IPN002 в CSF. Наблюдаемые уменьшения в уровнях свободного eTau можно объяснить несколькими механизмами, включая связывание hu-IPN002 с eTau, уменьшение абсолютных уровней eTau или комбинацию обоих механизмов.
Анализ Αβ-уровней в CSF.
Влияние hu-IPN002 на уровни Αβ42 в CSF измеряли с использованием двух различных анализов сэндвич-ELISA, включая аналитическую процедуру собственной разработки и коммерческий набор (Millipore). Как показано на фиг. 30А-30В и в табл. 7 ниже (использовалась аналитическая процедура собственной разработки) и на фиг. 31А-31В и в табл. 8 (анализ Millipor), hu-IPN002 при любой дозе не влиял на уровни Αβ42 в CSF. Это не согласуется с другими экспериментами, описанными в настоящем доку-43 038994 менте. В то время как основа для такого расхождения остается неясной, это может происходить из-за различных режимов дозирования (например, протокол многократного дозирования в сравнении с протоколом однократного дозирования).
Таблица 7
Влияние hu-IPN002 на Ав42 в CSF (аналитическая процедура собственной разработки)
Время с начала введения дозы 0,5 2 mpk (п=2) 5 mpk 20 mpk
Нос. (п=1) mpk
CV (п=2) CV
(п=3) Сред нее SD CV Средн ее SD Средн ее SD (п=2) Сред нее SD CV
2,0 108,5 92,2 26,5 29 97,4 2,1 2 103,7 7,8 8 98,8 0,8 1
4,0 110,7 86,8 13,8 16 102,1 10,5 10 103,7 3,0 3 98,1 3,1 3
7,0 117,5 107,8 20,9 19 117,9 4,8 4 105,6 16,0 15 118,0 17,4 15
24,0 93,5 87,4 16,3 19 93,6 2,1 2 93,4 4,1 4 93,3 12,3 13
48,0 100,8 94,8 14,1 15 98,9 5,8 6 90,4 2,1 2 113,2 6,1 5
72,0 95,8 91Д 25,0 27 103,1 2,5 2 99,7 2,3 2 89,8 0,8 1
168 111,6 94,5 16,5 17 93,2 2,7 3 94,1 4,2 4 96,4 1,2 1
336 99,8 104,4 23,3 22 94,2 0,4 0 96,7 0,5 0 102,8 0,4 0
504 93,2 97,1 7,2 7 94,7 5,8 6 94,6 2,9 3 96,2 0,9 1
672 107,3 101,6 11,8 12 106,3 7,2 7 96,6 1,2 1 116,4 3,6 3
840 91,7 101,0 15,8 16 94,3 7,8 8 82,9 12,9 16 104,1 6,8 7
1008 102,5 105,4 15,2 14 80,9 11,5 14 96,0 8,4 9 113,8 20,0 18
1176 102,6 97,2 12,2 13 98,2 21,8 22 78,0 9,7 12 110,3 2,9 3
1344 108,6 101,8 9,7 10 99,9 7,5 7 92,1 И,7 13 108,4 8,9 8
1512 93,9 119,2 20,6 17 103,3 21,8 21 103,9 7,6 7 111,7 10,7 10
Таблица 8
Влияние hu-IPN002 на Ав42 в CSF (Millipore)
Время с начала введения дозы (часы) Нос. (п=1) 0,5 mpk 2 mpk 20
5 mpk mpk
(п=3) Сред нее SD CV (п=2) CV (п=2) CV
Средн ее SD Средн ее SD (п=2) Сред нее SD CV
2,0 120,5 93,6 28,8 31 97,1 0,8 1 98,7 15,9 16 101,6 0,0 0
4,0 106,4 83,2 19,5 23 102,0 0,8 1 103,5 И,2 11 103,5 4,3 4
7,0 113,6 111,9 32,0 29 124,7 20,8 17 112,3 1,6 1 121,0 0,5 0
24,0 112,0 94,7 16,8 18 97,0 15,7 16 101,5 4,3 4 98,0 7,2 7
48,0 106,9 87,9 21,5 24 97,0 11,0 11 91,0 0,4 0 104,8 19,8 19
72,0 102,3 92,1 23,6 26 95,2 2,1 2 107,3 0,6 1 89,5 12,5 14
168 114,1 97,6 25,3 26 95,1 0,9 1 96,7 18,7 19 104,3 15,0 14
336 107,6 104,0 28,8 28 82,9 ИД 13 89,4 1,8 2 104,1 8,1 8
504 98,6 90,5 8,7 10 104,2 6,0 6 86,5 5,7 7 98,2 5,9 6
672 120,9 104,8 16,5 16 110,9 15,2 14 106,8 14,5 14 119,3 7,9 7
840 108,3 99,7 20,7 21 106,6 8,7 8 83,5 1,0 1 105,2 8,2 8
1008 108,2 105,7 16,2 15 96,3 2,7 3 94,6 14,0 15 105,4 ИД 11
1176 106,2 101,5 13,6 13 98,2 19,3 20 79,1 1,1 1 97,0 3,6 4
1344 101,6 111,8 14,7 13 107,0 12,1 11 101,7 12,6 12 118,2 27,3 23
1512 101,8 114,9 15,7 14 109,3 5,5 5 108,2 8,4 8 116,4 7,7 7
В частности, как показано на фиг. 30А-30В, уровни Ав42 в цереброспинальной жидкости варьиро- 44 038994 вались от 91,7 до 117,5% (% от базового уровня) у животного, которому вводили дозу носителя, как показано с использованием аналитической процедуры собственной разработки. Как показано на фиг. 31А31В, уровни варьировалась от 98,6 до 120,9% (% от исходного уровня), с использованием анализа Millipore. В обоих анализах уровни Ав42 в CSF у животных, которым вводили hu-IPN002, были сходны с уровнями контроля с носителем.
Пример 6. Влияние hu-IPN002 на уровни тау-белка и на уровни Ав (исследование многократной внутривенной дозы).
Исследование внутривенной (IV) болюсной инфузии с многократным дозированием было проведено для оценки фармакокинетики и фармакодинамики hu-IPN002 в течение периода времени от 4 до 6 месяцев после многократного внутривенного дозирования самцам яванского макака. Дозы вводили в 1 -й, 29-й и 57-й дни исследования. Используемые дозы были следующими:
1) 0 мг/кг (носитель) х 3 дозы;
2) 20 мг/кг х 3 дозы;
3) 40 мг/кг х 3 дозы; а также
4) 60 мг/кг х 1 доза с последующими 20 мг/кг х 2 дозы.
Группа 20 мг/кг х 3 дозы была продлена дополнительно на 56 дней после последней дозы.
Уровни hu-IPN002 измеряли в образцах сыворотки крови и CSF с использованием ELISA. Кровь получали от всех животных в момент времени 0 (перед введением дозы), 0,05, 0,083, 0,5, 1, 8, 12, 24, 48, 72, 120, 168, 336, 504, 648 ч с начала введения дозы на 1-й день, в момент времени 0 (перед введением дозы), 0,05, 0,083, 0,25, 4, 8, 12, 24, 48, 96, 168, 336, 504, 648 ч с начала введения дозы на 29-й день, и в момент времени 0 (перед введением дозы), 0,05, 0,083, 0,5, 1, 8, 12, 24, 48, 72, 120, 168, 336, 504, 672, 840, 1008, 1176, 1344 ч с начала введения дозы на 57-й день для анализа hu-IPN002 в сыворотке. Дополнительные образцы крови собирали в моменты времени 1512, 1680, 1848, 2016, 2184, 2352, 2520 и 2688 ч с начала введения дозы на 57-й день у животных в группе 20 мг/кг х3 дозы в для анализа hu-IPN002 в сыворотке.
Анализ hu-IPN002 концентраций в сыворотке крови.
После первой дозы средние системные экспозиции hu-IPN002 (AUC[O-6724]) увеличивались приблизительно пропорционально дозе в интервале от 20 до 60 мг/кг (табл. 9; фиг. 32). После многократного дозирования средние системные экспозиции hu-IPN002 (AUC [0-672 ч]) на 57-й день (после третьей дозы) также увеличивались пропорционально дозе для интервала от 20 до 40 мг/кг, вводимых каждые 28 дней (табл. 11, фиг. 34). Средние значения T-HALF сыворотки изменялись от 210 до 390 ч.
После многократного дозирования, при дозе 20 и 40 мг/кг, вводимых каждые 28 дней, средние системные экспозиции hu-IPN002 (AUC [0-672 ч]) после третьей дозы на 57-й день были сходными (0,8 и 0,9х) со значениями, полученными после первой дозы, и были сопоставимы (1,0 и 0,9х) с экспозициями после второй дозы на 29-й день (табл. 10 и 11; фиг. 33 и 34). Не наблюдалось никакого накопления или потери воздействия. Устойчивое состояние было достигнуто после первой дозы. После нагрузочной дозы 60 мг/кг и двух поддерживающих доз при 20 мг/кг каждые 28 дней средние системные экспозиции huIPN002 (AUC [0-672 ч]) на 57-й день в группе 4 были сходными (1,1 х) с экспозицией в группе 2 после 3 доз при дозе 20 мг/кг, вводимой через каждые 28 дней, что указывает на то, что нагрузочная доза не оказывала существенного влияния на экспозицию hu-IPN002 в сыворотке крови на 57-й день (табл. 11 и фиг. 34).
Таблица 9
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в сыворотке крови - день 1
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
20/20/20 40/40/40 60/20/20
Самцы
АиС(0-672ч); мкгч/мл 90,100 178,000 220,000
Стах; мкг/мл 328 553 681
Ттах; ч 5,2 2,4 3,5
- 45 038994
Таблица 10
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в сыворотке крови - день 29
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
20/20/20 40/40/40 60/20/20
Самцы
АиС(0-672ч); мкгч/мл 76,400 169,000 125,000
Стах; мкг/мл 463 880 483
Ттах; ч 0,066 о,и о,и
Таблица 11
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в сыворотке крови - день 57
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
20/20/20 40/40/40 60/20/20
Самцы
АЦС(0-672ч); мкгч/мл 76,200 157,000 82,400
Стах; мкг/мл 472 947 600
Ттах; ч 0,050 0,050 0,050
Τ-HALF; ч 390 290 210
Для Τ-HALF значение представляет собой гармоническое среднее.
Анализ концентраций hu-IPN002 в CSF.
CSF также получали от всех животных до введения дозы и в момент времени 8, 48, 168, 336, 504, 648 ч с начала введения дозы в 1-й и 29-й дни и в момент времени 8, 48, 168, 336, 504, 672, 840, 1008, 1176 и 1344 ч с начала введения дозы в 57-й день для анализа hu-IPN002 в CSF. Дополнительные образцы CSF собирали в момент времени 1512, 1680, 1848, 2016, 2184, 2352, 2520 и 2688 ч с начала введения дозы в 57-й день от животных в группе 20 мг/кг хЗ дозы для анализа hu-IPN002 в CSF. После первой дозы средние экспозиции hu-IPN002 в CSF (AUC[0-T]) увеличивались приблизительно пропорционально дозе от 20 до 60 мг/кг (табл. 12, фиг. 35). После многократного дозирования средние экспозиции huIPN002 в CSF (AUC [0-672 ч]) на 57-й день также увеличивались пропорционально дозе от 20 до 40 мг/кг, вводимые каждые 28 дней (табл. 14, фиг. 37)), со значениями AUC (0-672 ч) для CSF, которые составляли от 0,0013 до 0,0014х от соответствующих значениий AUC (0-672 ч) для сыворотки. Средние значения Тшах достигались через 8 ч с начала введения дозы. Средние видимые значения Τ-HALF для CSF варьировали от 250 до 310 ч. После третьей дозы на 57-й день средние соотношения AUC (0-672 ч) CSF/сыворотка составляли 0,0013 к 0,0014.
После повторного дозирования 20 и 40 мг/кг, вводимые каждые 28 дней, средние экспозиции huIPN002 в CSF (AUC [0-672 ч]) после третьей дозы на 57-й день были сходными (1,2х) с таковыми с начала введения первой дозы и были сопоставимыми (1,1 и 1,2х) с экспозициями после второй дозы на 29-й день (табл. 13; фиг. 36). Не наблюдалось никакого накопления или потери воздействия. Устойчивое состояние было достигнуто после первой дозы.
После нагрузочной дозы 60 мг/кг с последующими двумя дозами 20 мг/кг/каждые 4 недели средняя экспозиция (AUC [0-672 ч]) hu-IPN002 в CSF на 57-й день в группе 4 была сходной (1,2х) с экспозицией в группе 2, которая получала дозу 20 мг/кг/каждые 28 дней, что указывает на то, что нагрузочная доза не оказывала существенного влияния на экспозицию hu-IPN002 в сыворотке крови (табл. 14: фиг. 37). Видимые значения Τ-HALF для CSF варьировали от 250 до 310 ч. hu-IPN002 не наблюдалось ни в одном из контрольных образцов CSF.
Таблица 12
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в CSF - день 1
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
20/20/20 40/40/40 60/20/20
-46038994
Таблица 12
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в CSF - день 1 hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
Параметр
Самцы
АиС(0-648ч)а; мкгч/мл 84,3 166 223
Стах; мкг/мл 0,308 0,498 0,618
Ттах; ч 38 28 28
Соотношениеь AUC(O-T) 0,00095 0,00093 0,0010
CSF/Сыворотка
а Значения AUC (0-Т) были усечены до AUC (0-648 ч), поскольку образец в момент времени 672 ч с начала введения дозы не был собран.
b CSF/сыворотка AUC(O-T) = CSF AUC (0-648 ч)/сыворотка AUC (0-672 ч); соотношения могут быть ниже, чем ожидалось, если собирали образцы CSF через 672 ч.
Таблица 13
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в CSF - день 29
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
20/20/20 40/40/40 60/20/20
Самцы
AUC(0-648)a; мкгч/мл 91,8 170 117
Стах; мкг/мл 0,294 0,519 0,339
Ттах; ч 38 28 38
Соотношениеь AUC(O-T) CSF/Сыворотка 0,0012 0,0011 0,00082
а Значения AUC (0-Т) были усечены до AUC (0-648 ч), поскольку образец в момент времени 672 ч с начала введения дозы не был собран.
b CSF/сыворотка AUC (0-T) = CSF AUC (0-648 ч)/сыворотка AUC (0-672 ч); соотношения могут быть ниже, чем ожидалось, если собирали образцы CSF через 672 ч.
Таблица 14
Средние значения фармакокинетических параметров hu-IPN002 в CSF - день 57
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
20/20/20 40/40/40 60/20/20
Самцы
Таблица 14
Средние значения фармакок инетических параметров hu-IPN002 в CSF - день 57
Параметр hu-IPN002 (мг/кг каждые 28 дней)
AUC(0-672h); мкгч/мл 97,1 199 114
Стах; мкг /мл 0,373 0,642 0,402
Ттах; ч 8,0 8,0 8,0
Т-HALF; ч 280 310 250
Соотношение CSF/Сыворотка 0,0013 0,0013 0,0014
AUC(0-672h)
Для T-HALF значение преставляет собой гармоническое среднее.
Анализ уровней свободного eTau в CSF.
Влияние hu-IPN002 на уровни свободного eTau в CSF измеряли с использованием коммерчески доступного анализа ELISA. Профили уровней свободного eTau в CSF (в процентах от исходного уровня) в зависимости от времени для всех доз показаны на фиг. 38.
После первой дозы уровни свободного eTau в CSF быстро понижались всеми тремя дозами дозозависимым образом, в первой же временной точке, в момент времени самого раннего измерения, 8 ч. Уровни свободного eTau в CSF оказались максимально подавленными при дозе 40 мг/кг, но все дозы понижали уровень свободного eTau в CSF на >75%. Уровни свободного eTau не возвращались к исход- 47 038994 ному уровню для любой группы дозирования вплоть до 112-го дня исследования или через 55 дней после последней дозы.
Исследование было продлено на 2 месяца для дозы 20 мг/кг, чтобы определить, не вернется ли уровень свободного eTau в CSF к исходному уровню. Как видно на фиг. 39, в дни исследования 162-169 или через 105-112 дней после последней из 3 доз уровень свободного eTau в CSF возвращается к значениям, близким к исходным. В большинстве временных точек для 3 доз понижения уровней eTau значительно отличались от уровня носителя (данные не показаны). В некоторых случаях р-значения не могли быть вычислены, так как значения, полученные в ходе анализа, были ниже предела обнаружения.
Суммируя вышесказанное, hu-IPN002 обеспечивал быстрое и устойчивое понижение уровня свободного eTau в CSF яванского макака после внутривенной инфузии в данном исследовании многократной дозы с повторным дозированием. На всех исследованных уровнях дозы уровень свободного eTau в CSF оставался подавленным на протяжении всего исследования (112 дней) или через 55 дней после третьей дозы. Оказалось, что уровень дозы 40 мг/кг обеспечивает наиболее устойчивое уменьшение уровня свободного eTau в CSF.
Анализ уровней Άβ42 в CSF.
Профили уровней Άβ42 в CSF (в процентах от исходного уровня) в зависимости от времени для всех доз представлены на фиг. 40. Как показано на фиг. 40, hu-IPN002 понижал уровень Άβ42 в CSF в данном исследовании. Все дозы понижали Άβ42 в CSF через 21 дней после первой дозы. Наибольшее и наиболее устойчивое (от 40 до 50 дней) понижение уровня Άβ42 началось после третьей дозы (день 57).
Максимальное понижение Άβ42 (от 25 до 50% от исходного уровня) произошло в день исследования 77 или через 20 дней после третьей дозы. На всех уровнях дозы значения Άβ42 возвращалось к исходному уровню на 106-й день исследования или через 49 дней после третьей дозы. hu-IPN002 понижал уровень Άβ42 в CSF умеренным образом в зависимости от дозы.
Пример 6. Прогнозирование фармакокинетики и эффективных доз у людей.
Расчет параметров фармакокинетики.
Параметры фармакокинетики Ihu-IPN002 для человека были предсказаны на основе аллометрического анализа, проведенного на одном виде обезьян. Ожидалось, что клиренс для человека составит 0,06 мл/ч/кг. Прогнозируемый объем распределения в равновесном состоянии (Vss) в организме человека составляет 0,041 л/кг.
Для отражения биэкспоненциального характера профиля концентрации в сыворотке крови, наблюдаемого у обезьян, фармакокинетический профиль в организме человека был предсказан с использованием способа определения Css-среднего времени нахождения (mean residence time, MRT). He учитывавший компартментализацию анализ прогнозируемого профиля в организме человека давал значения объема (Vz) и периода полувыведения (T-HALF), равные 0,04 л/кг и 535 ч соответственно. Расчетные фармакокинетические параметры приведены в табл. 15 ниже.
Таблица 15
Прогнозируемые параметры в организме человека для hu-IPN002 от обезьян
РК параметры для обезьян Прогнозируемые параметры для человека
Vss (л/кг) 0,041 0,041
CLTp (мл/ч/кг) о,н 0,06
Vz (л/кг) (из анализа NCA) 0,043 0,04
Т-HALF (ч) (из анализа NCА) 275 535
Vc (л/кг) 0,027 0,025
к12 (ч'1) 0,025 0,023
к21 (ч'1) 0,03 0,023
ке (ч'1) 0,004 0,002
Предсказанная моделью величина kdeg (0,1 ч-1) отличалась от величины, известной из литературных данных, для периода полужизни тау-белка (11 дней эквивалентно kdeg = 0,002 ч-1) в CSF (Yamada K, et al., J. Exp. Med., 2014 Mar 10; 211(3):387-93).
Прогнозирование эффективных доз у людей.
Устойчивое понижение концентраций eTau на 75% в течение 4 недель был выбрано для того, чтобы оценить наиболее вероятное эффективное целевое воздействие в организме человека.
Доза 10 мг/кг (700 мг) была признана необходимой для достижения понижения уровня eTau на 75% в течение 4 недель. Прогнозируемый профиль зависимости концентрации от времени для hu-IPN002 в сыворотке крови и CSF и eTau в CSF был также смоделирован (фиг. 41).
Путем моделирования стационарного состояния было предсказано, что доза 10 мг/кг, вводимая
- 48 038994 один раз каждые 4 недели, будет поддерживать понижение концентраций свободного eTau в течение 24 недель. Было предсказано, что общая экспозиция hu-IPN002 в сыворотке крови может быть уменьшена, а процентное понижение eTau может поддерживаться на уровне 75% или выше введением нагрузочной дозы 10 мг/кг с последующей поддерживающей дозой 4 мг/кг, при введении через каждые 4 недели (фиг. 42-43). Вычисленная предсказанная величина Cmaxss для 10 мг/кг Q4W составила 592 мкг/мл, в то время как для нагрузочной дозы 10 мг/кг с последующей 4 мг/кг Q4W предсказанная величина Cmaxss составила 241 мкг/мл. Соответствующие AUCSS для двух режимов дозирования составляют 204977 мкг-ч/мл и 84114 мкг-ч/мл соответственно. Подход с нагрузочной и поддерживающей дозой, как ожидается, может позволить существенно уменьшить свободные уровни eTau немедленно после дозирования с однократной нагрузочной дозой и поддерживать понижение уровней eTau с использованием более низких поддерживающих доз.
_____________________________________________ Таблица 16
Схема дозирования РК параметры состоянии Стах (мкг/мл) в стационарном AUC(TAU)* (мкг*ч/мл)
700 мг Q4W 592 204,977
700 мг+ 280 мг 241 84,114
Q4W
*AUC(TAU) представляет собой AUC в пределах интервала дозирования.
В то время как настоящее изобретение было описано со ссылками на конкретные варианты его осуществления, специалистам в данной области техники должно быть понятно, что могут быть сделаны различные изменения и могут быть заменены эквиваленты без отхода от истинной сущности и объема настоящего изобретения. Кроме того, могут быть произведены многие модификации, чтобы приспособить конкретную ситуацию, материал, состав вещества, процесс, технологическую стадию или стадии к задаче, сущности и объему настоящего изобретения. Все такие модификации считаются находящимися в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
- 49 038994
Сводный перечень последовательностей
SEQ ID NO: ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
1 RSSQTILHSNGNTYLE
2 KVSKRFS
3 FQGSLVPWA
4 SYGMS
5 TISSSGSRTYFPDSVKG
6 TWDGAMDY
7 KSSQSIVHSNGNTYLE
8 KVSNRFS
9 FQGSLVPWA
10 KYGMS
и TISSSGSRTYYPDSVKG
12 ' SWDGAMDY
13 [Аминокислотная последовательность легкой цепи гибридомного IPN001]; Фигура 11В
14 [Аминокислотная последовательность тяжелой цепи гибридомного ΙΡΝ001 ]; Фигура ИА
15 [Аминокислотная последовательность легкой цепи гибридомного IPN002]; Фигура 12В
16 [Аминокислотная последовательность тяжелой цепи гибридомного IPN002]; Фигура 12А
17 [Нуклеотидная последовательность легкой цепи гибридомного IPN001]; Фигура ИВ
18 [Нуклеотидная последовательность тяжелой цепи гибридомного IPN001]; Фигура НА
19 [Нуклеотидная последовательность легкой цепи гибридомного IPN002]; Фигура 12В
20 [Нуклеотидная последовательность тяжелой цепи гибридомного IPN002]; Фигура 12А
21 EFEVMED
22 DQGGYT
23 MAEPRQEFEVMEDHAGTY
- 50 038994
24 AGTYGLGDRK
25 EVX1LVESGGALVKPGGSLRLSCAASGFSFS
26 WVRQAPGKGLEWVA
27 RFTISRDNAKNTLYLQMX2SX3X4X5EDTAMYYCX6I
28 [Нуклеотидная последовательность Вариант 1 VH IPN002]; Фигура 13
29 [Нуклеотидная последовательность Вариант 2 VH IPN002]; Фигура 14
30 [Нуклеотидная последовательность Вариант 3 VH IPN002]; Фигура 15
31 [Нуклеотидная последовательность Вариант 4 VH IPN002]; Фигура 16
32 [Нуклеотидная последовательность Вариант 1 Vk IPN002]; Фигура 17
33 [Нуклеотидная последовательность Вариант 2 Vk IPN002], Фигура 18
34 [Нуклеотидная последовательность Вариант 3 Vk IPN002]; Фигура 19
35 [Нуклеотидная последовательность Вариант 4 Vk IPN002]; Фигура 20
36 [Аминокислотная последовательность Вариант 1 VH IPN002], Фигура 13
37 [Аминокислотная последовательность Вариант 2 VH IPN002]; Фигура 14
38 [Аминокислотная последовательность Вариант 3 VH IPN002]; Фигура 15
39 [Аминокислотная последовательность Вариант 4 VH IPN002], Фигура 16
40 [Аминокислотная последовательность Вариант 1 Vk IPN002]; Фигура 17
41 [Аминокислотная последовательность Вариант 2 Vk IPN002J; Фигура 18
42 [Аминокислотная последовательность Вариант 3 Vk IPN002];
- 51 038994
Фигура 19
43 [Аминокислотная последовательность Вариант 4 Vk IPN002]; Фигура 20
44 WGQGTX7VTVSS
45 DVX1MTQSPLSLPVTLGQPASISC
46 WYLQKPGQSPQLLX2Y
47 GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGX3YYC
48 FGGGTKVEIK
49 (GSGGS)n
50 (GGGS)n
51 GGSG
52 GGSGG
53 GSGSG
54 GSGGG
55 GGGSG
56 GSSSG
57 HHHHHH
58 YPYDVPDYA
59 DYKDDDDK
60 EQKLISEEDL
61 HHHHH
62 WSHPQFEK
63 RYIRS
64 FHHT
65 WEAAAREACCRECCARA
66 TFFYGGCRGKRNNFKTEEY
67 TFFYGGSRGKRNNFKTEEY
68 CTFFYGGSRGKRNNFKTEEY
69 TFFYGGSRGKRNNFKTEEYC
70 TFVYGGCRAKRNNFKS
71 eTau 4; Фигура 9
72 2N4R; Фигура 9
73 Фетальный внеклеточный Тау-полипептид; Фигура 21
74 Внеклеточный Тау-полипептид #2 ; Фигура 21
75 Внеклеточный Тау-полипептид #3 ; Фигура 21
76 Внеклеточный Тау-полипептид #4 ; Фигура 21
77 eTau 2-172 ; Фигура 21
78 eTau 2-176 ; Фигура 21
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ лечения таупатии у индивидуума, включающий введение антитела к тау-белку индивидууму в виде однократной болюсной инъекции, причем антитело к тау-белку включает вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина (VL) и вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), причем VH состоит из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 37, и VL состоит из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 41.

Claims (8)

1. Способ лечения таупатии у индивидуума, включающий введение антитела к тау-белку индивидууму в виде однократной болюсной инъекции, причем антитело к тау-белку включает вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина (VL) и вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), причем VH состоит из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 37, и VL состоит из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 41.
2. Способ по п.1, в котором любые две дозы антитела к тау-белку вводят с интервалом 5 дней, 7 дней, 2 недели, 4 недели, 2 месяца или более друг от друга.
3. Способ лечения таупатии у индивидуума, включающий введение любых двух доз антитела к таубелку индивидууму с интервалом 3-5 дней или 2 месяца или более друг от друга, причем антитело к таубелку включает вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина (VL) и вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина (VH), причем VH состоит из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID NO: 37, и VL состоит из аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID
- 52 038994
NO: 41.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитело к тау-белку вводят путем подкожного введения, путем интратекального введения или путем внутривенного введения.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз/паркинсонизм-деменцию, болезнь аргирофильных зерен, проявляющуюся деменцией, амилоидную ангиопатию британского типа, церебральную амилоидную ангиопатию, кортикобазальную дегенерацию, болезнь Крейтцфельда-Якоба, деменцию боксеров, диффузные нейрофибриллярные клубки с кальцификацией, синдром Дауна, лобно-височную деменцию, лобно-височную деменцию с паркинсонизмом, связанным с хромосомой 17, дегенерацию лобной и височной долей, болезнь Герстмана-Штраусслера-Шейнкера, болезнь Галлервордена-Шпатца, миозит с включёнными тельцами, множественную системную атрофию, миотоническую дистрофию, болезнь Ниманна-Пика, тип С, не являющееся болезнью Гуама заболевание двигательных нейронов с нейрофибриллярными клубками, болезнь Пика, постэнцефалитический паркинсонизм, прион-протеин-церебральную амилоидную ангиопатию, прогрессивный субкортикальный глиоз, прогрессивный надъядерный паралич, подострый склерозирующий панэнцефалит, деменцию с преобладанием нейрофибриллярных клубков и мультиинфарктную деменцию.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором таупатия представляет собой болезнь Альцгеймера.
7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором таупатия представляет собой прогрессивный надъядерный паралич.
8. Способ по любому из пп.1-4, в котором таупатия представляет собой инсульт, хроническую травматическую энцефалопатию, черепно-мозговую травму, сотрясение мозга, судороги, эпилепсию или острую свинцовую энцефалопатию.
EA201690898A 2013-11-27 2014-11-25 Способы лечения таупатии EA038994B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361909965P 2013-11-27 2013-11-27
PCT/US2014/067360 WO2015081085A2 (en) 2013-11-27 2014-11-25 Methods of treating a tauopathy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201690898A1 EA201690898A1 (ru) 2016-09-30
EA038994B1 true EA038994B1 (ru) 2021-11-18

Family

ID=52232410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201690898A EA038994B1 (ru) 2013-11-27 2014-11-25 Способы лечения таупатии

Country Status (9)

Country Link
US (2) US20160289309A1 (ru)
EP (1) EP3074420A2 (ru)
JP (1) JP6629201B2 (ru)
CN (2) CN105899230B (ru)
BR (1) BR112016010454A2 (ru)
CA (1) CA2931396C (ru)
EA (1) EA038994B1 (ru)
MX (2) MX2016006356A (ru)
WO (1) WO2015081085A2 (ru)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX359817B (es) 2012-08-16 2018-10-11 Ipierian Inc Anticuerpos que se enlazan a tau.
US8980270B2 (en) 2013-01-18 2015-03-17 Ipierian, Inc. Methods of treating a tauopathy
AU2014248515B2 (en) 2013-03-13 2019-03-07 Prothena Biosciences Limited Tau immunotherapy
NZ630610A (en) 2014-02-14 2019-05-31 Ipierian Inc Tau peptides, anti-tau antibodies, and methods of use thereof
CN107849124B (zh) 2015-06-05 2021-09-24 基因泰克公司 抗tau抗体及使用方法
WO2017100632A1 (en) * 2015-12-11 2017-06-15 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Human alzheimer's disease and traumatic brain injury associated tau variants as biomarkers and methods of use thereof
ES2933491T3 (es) 2016-05-02 2023-02-09 Prothena Biosciences Ltd Inmunoterapia tau
KR102471787B1 (ko) 2016-05-02 2022-11-29 프로테나 바이오사이언시즈 리미티드 타우 인식 항체
CR20230163A (es) 2016-12-07 2023-07-06 Genentech Inc ANTICUERPOS ANTITAU Y MÉTODOS DE USO (Divisional 2019-0271)
AU2017373884A1 (en) 2016-12-07 2019-05-30 Ac Immune Sa Anti-tau antibodies and methods of their use
EP3583123A1 (en) 2017-02-17 2019-12-25 Denali Therapeutics Inc. Anti-tau antibodies and methods of use thereof
CA3061516A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Prothena Biosciences Limited Antibodies recognizing tau
US20190135905A1 (en) * 2017-06-16 2019-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Compositions and methods for treating tauopathies
JP2020529394A (ja) * 2017-06-16 2020-10-08 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ タウオパチーを治療するための組成物及び方法
WO2020180819A1 (en) 2019-03-03 2020-09-10 Prothena Biosciences Limited Antibodies recognizing tau
GB202010652D0 (en) * 2020-07-10 2020-08-26 Wista Lab Ltd Anti-tau antibodies
CN115607684A (zh) * 2021-07-15 2023-01-17 华中科技大学 一种内耳药物纳米载体及其应用
WO2023079485A1 (en) * 2021-11-03 2023-05-11 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-tau antibody compositions, dosage forms, and methods

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080050383A1 (en) * 2006-03-29 2008-02-28 New York University Immunotherapy for clearing pathological tau conformers
WO2010144711A2 (en) * 2009-06-10 2010-12-16 New York University Immunological targeting of pathological tau proteins
WO2012045882A2 (en) * 2010-10-07 2012-04-12 Ac Immune S.A. Pharmaceutical composition
WO2012049570A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Panima Pharmaceuticals Ag Human anti-tau antibodies
WO2014028777A2 (en) * 2012-08-16 2014-02-20 Ipierian, Inc. Methods of treating a tauopathy

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4866132A (en) 1986-04-17 1989-09-12 The Research Foundation Of State University Of New York Novel radiopaque barium polymer complexes, compositions of matter and articles prepared therefrom
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
ATE120761T1 (de) 1987-05-21 1995-04-15 Creative Biomolecules Inc Multifunktionelle proteine mit vorbestimmter zielsetzung.
US5256334A (en) 1988-09-08 1993-10-26 The Research Foundation Of The State University Of New York Homogeneous radiopaque polymer-organobismuth composites
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
DK0605522T3 (da) 1991-09-23 2000-01-17 Medical Res Council Fremgangsmåde til fremstilling af humaniserede antistoffer
JPH07501451A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド 多価抗原結合タンパク質
US5346981A (en) 1993-01-13 1994-09-13 Miles Inc. Radiopaque polyurethanes
DE614989T1 (de) 1993-02-17 1995-09-28 Morphosys Proteinoptimierung Verfahren für in vivo Selektion von Ligandenbindende Proteine.
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5625048A (en) 1994-11-10 1997-04-29 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
US5939045A (en) 1994-12-22 1999-08-17 Nissan Chemical Industries, Ltd. Organic bismuth derivatives for X-ray imaging
US5958713A (en) 1995-01-31 1999-09-28 Novo Nordisk A/S Method of detecting biologically active substances by using green fluorescent protein
US5670477A (en) 1995-04-20 1997-09-23 Joseph F. Poduslo Method to enhance permeability of the blood/brain blood/nerve bariers to therapeutic agents
US5968738A (en) 1995-12-06 1999-10-19 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Two-reporter FACS analysis of mammalian cells using green fluorescent proteins
US5874304A (en) 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US6020192A (en) 1996-01-18 2000-02-01 University Of Florida Humanized green fluorescent protein genes and methods
JP4162267B2 (ja) 1996-08-27 2008-10-08 カイロン コーポレイション Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｂ複合糖質およびその使用法
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
TW371617B (en) 1996-10-09 1999-10-11 Of Animal And Plant Health Inspection And Quarantine Council Of Agriculture Executive Yuan Bureau Method to transplant GFP into autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus for inflicting pest in an attempt to detect and flow up it existence and to improve life span against UV
EP1040151A4 (en) 1997-12-12 2003-05-21 Macromed Inc HETEROFUNCTIONALIZED STAR POLYETHYLENEGLYCOLS USED TO MODIFY A PROTEIN
US5985577A (en) 1998-10-14 1999-11-16 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Protein conjugates containing multimers of green fluorescent protein
CA2568952C (en) 2004-06-18 2019-05-21 Ambrx, Inc. Novel antigen-binding polypeptides and their uses
US20090016959A1 (en) 2005-02-18 2009-01-15 Richard Beliveau Delivery of antibodies to the central nervous system
US8741260B2 (en) 2005-10-07 2014-06-03 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS
RU2011125366A (ru) 2008-12-05 2013-01-10 Ангиочем Инк. Конъюгаты терапевтических пептидов и их применение
JP6124591B2 (ja) * 2009-08-28 2017-05-10 ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム タウオリゴマーに結合する抗体
CA2990678C (en) * 2009-11-06 2021-08-31 The J. David Gladstone Institutes Methods and compositions for modulating tau levels
GB201112056D0 (en) * 2011-07-14 2011-08-31 Univ Leuven Kath Antibodies
SG10201912964PA (en) * 2011-09-19 2020-02-27 Axon Neuroscience Se Protein-based therapy and diagnosis of tau-mediated pathology in alzheimer's disease

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080050383A1 (en) * 2006-03-29 2008-02-28 New York University Immunotherapy for clearing pathological tau conformers
WO2010144711A2 (en) * 2009-06-10 2010-12-16 New York University Immunological targeting of pathological tau proteins
WO2012045882A2 (en) * 2010-10-07 2012-04-12 Ac Immune S.A. Pharmaceutical composition
WO2012049570A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Panima Pharmaceuticals Ag Human anti-tau antibodies
WO2014028777A2 (en) * 2012-08-16 2014-02-20 Ipierian, Inc. Methods of treating a tauopathy

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
D. R. WILLIAMS: "Tauopathies: classification and clinical update on neurodegenerative diseases associated with microtubule-associated protein tau", INTERNAL MEDICINE JOURNAL, BLACKWELL SCIENCE ASIA, vol. 36, no. 10, 1 October 2006 (2006-10-01), pages 652 - 660, XP055174109, ISSN: 14440903, DOI: 10.1111/j.1445-5994.2006.01153.x *
DIANA L. CASTILLO-CARRANZA, CRISTIAN A. LASAGNA-REEVES, RAKEZ KAYED: "Tau aggregates as immunotherapeutic targets ", FRONTIERS IN BIOSCIENCE, vol. 5, 1 January 2013 (2013-01-01), pages 426 - 438, XP055053507, ISSN: 19450516, DOI: 10.2741/S381 *
Einar M. Sigurdsson: "Tau-Focused Immunotherapy for Alzheimer's Disease and Related Tauopathies", Curr Alzheimer Res., 1 October 2009 (2009-10-01), pages 446-450, XP055081685, Retrieved from the Internet: URL:http://europepmc.org/articles/PMC2891148?pdf=render [retrieved on 2013-09-30] the whole document in particular, pages 3-4 *
N GHOSHAL: "Tau Conformational Changes Correspond to Impairments of Episodic Memory in Mild Cognitive Impairment and Alzheimer's Disease", EXPERIMENTAL NEUROLOGY, ACADEMIC PRESS, vol. 177, no. 2, 1 October 2002 (2002-10-01), pages 475 - 493, XP055089574, ISSN: 00144886, DOI: 10.1006/exnr.2002.8014 *
N. KFOURY, B. B. HOLMES, H. JIANG, D. M. HOLTZMAN, M. I. DIAMOND: "Trans-cellular Propagation of Tau Aggregation by Fibrillar Species", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 287, no. 23, 1 June 2012 (2012-06-01), pages 19440 - 19451, XP055087124, ISSN: 00219258, DOI: 10.1074/jbc.M112.346072 *
X. CHAI, S. WU, T. K. MURRAY, R. KINLEY, C. V. CELLA, H. SIMS, N. BUCKNER, J. HANMER, P. DAVIES, M. J. O'NEILL, M. L. HUTTON, M. C: "Passive Immunization with Anti-Tau Antibodies in Two Transgenic Models: REDUCTION OF TAU PATHOLOGY AND DELAY OF DISEASE PROGRESSION", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 286, no. 39, 30 September 2011 (2011-09-30), pages 34457 - 34467, XP055087176, ISSN: 00219258, DOI: 10.1074/jbc.M111.229633 *
YANAMANDRA KIRAN; KFOURY NAJLA; JIANG HONG; MAHAN THOMAS E.; MA SHENGMEI; MALONEY SUSAN E.; WOZNIAK DAVID F.; DIAMOND MARC I.; HOL: "Anti-Tau Antibodies that Block Tau Aggregate Seeding In Vitro Markedly Decrease Pathology and Improve Cognition In Vivo ", NEURON, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 80, no. 2, 1 January 1900 (1900-01-01), AMSTERDAM, NL, pages 402 - 414, XP028757368, ISSN: 0896-6273, DOI: 10.1016/j.neuron.2013.07.046 *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2931396C (en) 2022-09-06
MX2021008755A (es) 2021-08-24
CN105899230A (zh) 2016-08-24
EP3074420A2 (en) 2016-10-05
BR112016010454A2 (pt) 2017-12-05
US20200102375A1 (en) 2020-04-02
MX2016006356A (es) 2016-10-28
WO2015081085A3 (en) 2015-08-06
EA201690898A1 (ru) 2016-09-30
US20160289309A1 (en) 2016-10-06
CN111569063A (zh) 2020-08-25
WO2015081085A2 (en) 2015-06-04
JP6629201B2 (ja) 2020-01-15
JP2017504570A (ja) 2017-02-09
CN105899230B (zh) 2020-06-09
CA2931396A1 (en) 2015-06-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA038994B1 (ru) Способы лечения таупатии
AU2019200448B2 (en) Anti-complement C1s antibodies and uses thereof
AU2020203113B2 (en) Anti-complement C1s antibodies and uses thereof
US9447180B2 (en) Methods of treating a tauopathy
JP4738696B2 (ja) Ａβペプチドを隔離するヒト化抗体
US9567395B2 (en) Methods of treating a tauopathy