EA035761B1 - Композиция для получения лиофильных форм наночастиц и способ получения лиофильных форм наночастиц - Google Patents

Композиция для получения лиофильных форм наночастиц и способ получения лиофильных форм наночастиц Download PDF

Info

Publication number
EA035761B1
EA035761B1 EA201890367A EA201890367A EA035761B1 EA 035761 B1 EA035761 B1 EA 035761B1 EA 201890367 A EA201890367 A EA 201890367A EA 201890367 A EA201890367 A EA 201890367A EA 035761 B1 EA035761 B1 EA 035761B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
cyclodextrin
composition
nucleic acid
dextrin
Prior art date
Application number
EA201890367A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201890367A1 (ru
Inventor
Венбин Йинг
Роджер Адами
Ювей Ванг
Хайкинг Йин
Липинг Ванг
Донг Лиу
Original Assignee
Нитто Денко Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нитто Денко Корпорейшн filed Critical Нитто Денко Корпорейшн
Publication of EA201890367A1 publication Critical patent/EA201890367A1/ru
Publication of EA035761B1 publication Critical patent/EA035761B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5161—Polysaccharides, e.g. alginate, chitosan, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/145—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/146—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Abstract

Изобретение обеспечивает композиции для получения твердого лиофила одного или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот, которые могут быть восстановлены в качестве лекарственного продукта. Композиция может включать водную суспензию липидных наночастиц в фармацевтически приемлемом растворе, где липидные наночастицы инкапсулируют один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот, соединение декстрина и сахаридное соединение. Активными агентами на основе нуклеиновых кислот могут быть PHKi молекулы, способные опосредовать РНК интерференцию, а также другие РНК и олигонуклеотиды.

Description

Родственные заявки
Настоящая заявка заявляет приоритет согласно предварительной заявке на патент США № 62/195356, поданной 22 июля 2015 г, под названием Композиции и способы для лиофильных форм наночастиц, содержание которой включено в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к областям биофармацевтики и терапевтических средств, состоящих из молекул на основе нуклеиновых кислот. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способам и композициям для лиофильных форм терапевтических композиций на основе нуклеиновых кислот.
Уровень техники
Терапевтические средства, основанные на соединениях нуклеиновых кислот, включают в себя различные формы РНК, такие как siPHK, антисмысловые РНК, микроРНК, а также различные формы ДНК и плазмиды, гибридные олигонуклеотиды и аптамеры, среди прочих.
Трансфекция терапевтических средств нуклеиновой кислоты и других агентов осуществлялась путем инкапсуляции активных молекул в липидные наночастицы.
Недостатком этой методики является неспособность сохранять композиции для последующего использования из-за деградации наночастиц или их инкапсулированного вещества. Например, композиции липидных наночастиц, которые инкапсулируют молекулы siPHK, могут быть стабильными в течение нескольких минут или часов при 25°С и всего несколько дней или недель при 4°С. Другие недостатки включают необходимость очень низкой температуры при хранении композиций липидных наночастиц.
Одним из способов обеспечения длительного хранения терапевтической композиции является получение лиофильной формы, которую можно хранить и восстанавливать, чтобы получить препарат для введения терапевтических средств.
Однако в общем оказалось невозможным создать лиофильные формы липидных наночастиц, содержащих агенты на основе нуклеиновых кислот, так чтобы липидная наночастица могла быть восстановлена с инкапсулированным агентом нуклеиновой кислоты, с образованием стабильной композиции. Процесс лиофилизации может разрушить наночастицы и/или агенты на основе нуклеиновых кислот. Некоторые методы включали химическое присоединение защитных групп или компонентов к липидным наночастицам или к агенту на основе нуклеиновых кислот, что является невыгодным. Другие методы могут использовать липосомы в качестве адъюванта, без обеспечения инкапсуляции агентов на основе нуклеиновых кислот.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции для терапевтических средств, состоящих из молекул на основе нуклеиновых кислот. Более конкретно, настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции для лиофильных форм терапевтических композиций на основе нуклеиновых кислот.
Настоящее изобретение также обеспечивает лиофильные формы наночастиц, которые могут быть восстановлены в эффективные терапевтические композиции, которые могут применяться для доставки терапевтических агентов на основе нуклеиновых кислот для трансфекции.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения настоящее изобретение обеспечивает композиции и соединения для получения растворов или суспензий терапевтических липидных наночастиц, которые являются стабильными в процессе лиофилизации. Терапевтические липидные наночастицы могут инкапсулировать агенты на основе нуклеиновых кислот и могут быть трансформированы и храниться в твердых лиофильных формах. Лиофильные формы могут быть восстановлены с обеспечением терапевтических липидных наночастиц с инкапсулированными агентами на основе нуклеиновых кислот. Восстановленные липидные наночастицы могут иметь неожиданно предпочтительные трансфекционные свойства, включая размер и распределение частиц.
Варианты выполнения настоящего изобретения включают диапазон композиций и соединений для образования растворов или суспензий терапевтических липидных наночастиц, которые могут подвергаться процессу лиофилизации с обеспечением стабильных твердых лиофильных форм для длительного хранения терапевтических средств на основе нуклеиновых кислот.
Варианты выполнения настоящего изобретения включают следующее:
Композиция для получения твердых лиофильных липидных наночастиц, содержащая один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот, причем композиция содержит водную суспензию липидных наночастиц в фармацевтически приемлемом растворе, где липидные наночастицы инкапсулируют один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот;
соединение декстрина и сахаридное соединение сахара.
Вышеуказанная композиция, в которой общее количество соединений декстрина и сахара составляет от 2 до 20% (мас./об.) композиции.
Вышеуказанная композиция, в которой соединение декстрина составляет от 40 до 70% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара.
- 1 035761
Вышеуказанная композиция, в которой соединение декстрина составляет от 40 до 55% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара.
Вышеуказанная композиция, в которой соединение декстрина составляет от 40 до 45% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара.
Вышеуказанная композиция, в которой при лиофилизации и восстановлении композиции изменение среднего размера наночастиц находится в пределах 10% от их размера в первоначальной композиции.
Вышеуказанная композиция, в которой при лиофилизации, хранении и восстановлении композиции изменение среднего размера наночастиц находится в пределах 10% от их размера в первоначальной композиции.
Вышеуказанная композиция, где лиофилизированная композиция хранится при 5°С в течение по меньшей мере одного месяца.
Вышеуказанная композиция, где лиофилизированная композиция хранится при -20°С в течение по меньшей мере одного месяца.
Вышеуказанная композиция, в которой наночастицы имеют средний диаметр от 45 до 110 нм.
Вышеуказанная композиция, в которой концентрация активных агентов на основе нуклеиновых кислот составляет от 1 до 10 мг/мл или от 3 до 5 мг/мл.
Вышеуказанная композиция, в которой один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот представляют собой PHKi молекулы, способные опосредовать РНК интерференцию. Вышеуказанная композиция, в которой PHKi молекулами являются siPHK, shPHK, ddPHK, piPHK или rasiPHK.
Вышеуказанная композиция, в которой один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот представляют собой miPHK, антисмысловые РНК, плазмиды, гибридные олигонуклеотиды или аптамеры.
Вышеуказанная композиция, в которой фармацевтически приемлемый раствор представляет собой HEPES буфер, фосфатный буфер, цитратный буфер или буфер, содержащий трис(гидроксиметил)аминометан.
Вышеуказанная композиция, в которой соединением декстрина является циклодекстрин.
Вышеуказанная композиция, в которой соединение циклодекстрина имеет одно или более из 2, 3 и 6 гидроксильных положений, замещенных сульфоалкильными, бензолсульфоалкильными, ацетоалкильными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилсукцинатными, гидроксиалкилмалонатными, гидроксиалкилглутаратными, гидроксиалкиладипатными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилмалеатными, гидроксиалкилоксалатными, гидроксиалкилфумаратными, гидроксиалкилцитратными, гидроксиалкилтартратными, гидроксиалкилмалатными или гидроксиалкилцитраконатными группами.
Вышеуказанная композиция, в которой соединением циклодекстрина является (2-гидроксипропил)β-циклодекстрин, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин сукцинат, (2-гидроксипропил)-у-циклодекстрин или 2-гидроксипропил-у-циклодекстрин сукцинат.
Вышеуказанная композиция, в которой соединением циклодекстрина является сульфобутиловый простой эфир β-циклодекстрина или сульфобутиловый простой эфир γ-циклодекстрина.
Вышеуказанная композиция, в которой соединением циклодекстрина является метил-βциклодекстрин или метил-у-циклодекстрин.
Вышеуказанная композиция, в которой соединение циклодекстрина присоединено к полимерной цепи или сети.
Вышеуказанная композиция, в которой соединение циклодекстрина включает адсорбируемое соединение.
Вышеуказанная композиция, в которой адсорбируемое соединение выбирают из холестерина, ланостерина, зимостерина, зимостенола, демостерола, стигмастанола, дигидроланостерина, 7дегидрохолестерина, пегилированного холестерина, холестерилацетата, холестериларахидоната, холестерилбутирата, холестерилгексаноата, холестерилмиристата, холестерилпальмитата, холестерилбегената, холестерилстеарата, холестерилкаприлата, холестерил н-деканоата, холестерилдодеканоата, холестерилнервоната, холестерилпеларгоната, холестерил н-валерата, холестерилолеата, холестерилэлаидата, холестерилэруката, холестерилгептаноата, холестериллинолелаидата, холестериллинолеата, бетаситостерина, кампестерина, эргостерина, брассикастерина, дельта-7-стигмастерина и дельта-7авенастерина.
Вышеуказанная композиция, в которой сахаридное соединение сахара представляет собой моносахаридное или дисахаридное соединение сахара.
Вышеуказанная композиция, в которой соединение сахара выбирают из сахарозы, лактозы, лактулозы, мальтозы, трегалозы, целлобиозы, койибиозы, сакебиозы, изомальтозы, софорозы, ламинарибиозы, гентиобиозы, туранозы, мальтулозы, изомальтулозы, генцибиулозы, маннобиозы, мелибиозы, мелибиулозы и ксилобиозы.
Способ получения твердого лиофила одного или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот, причем способ включает лиофилизацию вышеописанной композиции. Настоящее изобретение
- 2 035761 также охватывает твердый лиофил, полученный вышеуказанным способом, а также лекарственный продукт, полученный восстановлением вышеописанного твердого лиофила.
Настоящее изобретение также включает способ получения лекарственного продукта на основе нуклеиновых кислот, причем способ включает синтез липидных наночастиц, где липидные наночастицы инкапсулируют один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот;
обеспечение водной суспензии липидных наночастиц в фармацевтически приемлемом растворе;
добавление соединения декстрина в раствор, содержащий липидные наночастицы;
добавление сахаридного соединения сахара в раствор, содержащий липидные наночастицы;
лиофилизацию раствора, содержащего липидные наночастицы, таким образом получая твердый лиофил;
восстановление лиофила в фармацевтически приемлемый носитель, таким образом получая лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот.
Вышеуказанный способ, в котором общее количество соединений декстрина и сахара составляет от 2 до 20% (мас./об.) раствора, содержащего липидные наночастицы.
Вышеуказанный способ, в котором соединение декстрина составляет от 40 до 70% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара.
Вышеуказанный способ, в котором соединение декстрина составляет от 40 до 55% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара.
Вышеуказанный способ, в котором соединение декстрина составляет от 40 до 45% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара.
Вышеуказанный способ, в котором при восстановлении изменение среднего размера наночастиц в пределах 10% от их размера при синтезе.
Вышеописанный способ, дополнительно включающий хранение лиофила перед восстановлением.
Вышеуказанный способ, в котором при хранении и восстановлении лиофила изменение среднего размера наночастиц находится в пределах 10% от их размера при синтезе.
Вышеуказанный способ, в котором лиофил хранят при 5°С в течение по меньшей мере одного месяца.
Вышеуказанный способ, в котором лиофил хранят при -20°С в течение по меньшей мере одного месяца.
Вышеуказанный способ, в котором наночастицы имеют средний диаметр от 45 до 110 нм.
Вышеуказанный способ, в котором концентрация активных агентов на основе нуклеиновых кислот составляет от 1 до 10 мг/мл.
Вышеуказанный способ, в котором один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот представляют собой PHKi молекулы, способные опосредовать РНК интерференцию. Вышеуказанный способ, в котором PHKi молекулы представляют собой siPHK, shPHK, ddPHK, piPHK или rasiPHK.
Вышеуказанный способ, в котором один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот представляют собой miPHK, антисмысловые РНК, плазмиды, гибридные олигомеры или аптамеры.
Вышеуказанный способ, в котором фармацевтически приемлемый носитель представляет собой стерильную воду, воду для инъекции, стерильный нормальный соляной раствор, бактериостатическую воду для инъекции или раствор для распылителя.
Вышеуказанный способ, в котором фармацевтически приемлемый носитель представляет собой фармацевтически приемлемый раствор.
Вышеуказанный способ, в котором фармацевтически приемлемый раствор представляет собой HEPES буфер, фосфатный буфер, цитратный буфер или буфер, содержащий трис(гидроксиметил)аминометан.
Вышеуказанный способ, в котором соединением декстрина является циклодекстрин.
Вышеуказанный способ, в котором соединение циклодекстрина имеет одно или более из 2, 3 и 6 гидроксильных положений, замещенных сульфоалкильными, бензолсульфоалкильными, ацетоалкильными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилсукцинатными, гидроксиалкилмалонатными, гидроксиалкилглутаратными, гидроксиалкиладипатными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилмалеатными, гидроксиалкилоксалатными, гидроксиалкилфумаратными, гидроксиалкилцитратными, гидроксиалкилтартратными, гидроксиалкилмалатными или гидроксиалкилцитраконатными группами.
Вышеуказанный способ, в котором соединением циклодекстрина является (2-гидроксипропил)-вциклодекстрин, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин сукцинат, (2-гидроксипропил)-у-циклодекстрин или 2-гидроксипропил-у-циклодекстрин сукцинат.
Вышеуказанный способ, в котором соединением циклодекстрина является сульфобутиловый простой эфир β-циклодекстрина или сульфобутиловый простой эфир γ-циклодекстрина.
Вышеуказанный способ, в котором соединением циклодекстрина является метил-в-циклодекстрин или метил-/-циклодекстрин.
Вышеуказанный способ, в котором соединение циклодекстрина включает адсорбируемое соедине
- 3 035761 ние.
Вышеуказанный способ, в котором сахаридное соединение сахара представляет собой моносахаридное или дисахаридное соединение сахара.
Вышеуказанный способ, в котором фармацевтически приемлемый носитель представляет собой стерильную воду, воду для инъекции, стерильный нормальный соляной раствор, бактериостатическую воду для инъекции или раствор для распылителя.
Вышеуказанный способ, в котором фармацевтически приемлемый носитель представляет собой фармацевтически приемлемый раствор.
Вышеуказанный способ, в котором восстановленный лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот имеет менее 0.001% (мас./об.) агрегированных частиц с размером более 0.2 мкм.
Вышеуказанный способ, в котором лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот восстанавливается в период времени от 3 до 30 с.
Вышеуказанный способ, в котором лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот восстанавливается после периода хранения в течение шести месяцев и сохраняет 80% активности агентов на основе нуклеиновых кислот.
Вышеуказанный способ, в котором восстановленный лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот имеет менее 0.001% (мас./об.) агрегированных частиц с размером более 0.2 мкм.
Вышеуказанный способ, в котором восстановленный лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот имеет уменьшенную цитокиновую активацию.
Вышеуказанный способ, в котором лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот восстанавливается в период времени от 3 до 30 с.
Вышеуказанный способ, в котором лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот восстанавливается после периода хранения в течение шести месяцев и сохраняет 80% активности агентов на основе нуклеиновых кислот.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показаны экспериментальные результаты для активности in vivo агента на основе нуклеиновой кислоты, который был siPHK нацеленным на подавление Hsp47 (GP46), полученного с конечным лекарственным продуктом, которым был восстановленный раствор твердой лиофилизированной наночастичной композиции siPHK. Восстановленные лекарственные композиции siPHK использовались на модели фиброза печени крыс, индуцированного диметилнитрозамином (DMN). Как показано на фиг. 1, восстановленная лекарственная композиция siPHK на основе наночастиц проявляла сильную и удивительную активность при подавлении экспрессии гена Hsp47 (GP46) in vivo. Эффективность in vivo является строгим испытанием на жизнеспособность лиофилизированных восстановленных наночастиц, содержащих агент на основе нуклеиновых кислот. Композиция siPHK на основе наночастиц, которая была лиофилизирована, включает общее содержание защитного вещества 10% (мас./об.), которое состояло из 40% (мас./об.) (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина и 60% сахарозы.
На фиг. 2 показаны экспериментальные результаты для фармакокинетики концентрации в плазме in vivo лиофилизированной, восстановленной композиции siPHK на основе наночастиц. siPHK, нацеленная на Hsp47 (GP46), была получена в виде композиции липосомальных наночастиц. Композиции на основе наночастиц были лиофилизированы с защитной композицией, содержащей сахарозу и (2гидроксипропил)-в-циклодекстрин. Композиция siPHK на основе наночастиц, которая была лиофилизирована, включала общее содержание защитного вещества 12,5% (мас./об.), которое состояло из 40% (мас./об.) (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина и 60% сахарозы. РК-профили в плазме оценивали на крысах Sprague Dawley после внутривенного введения однократной дозы лиофилизированного препарата по сравнению с замороженной композицией. Концентрации siPHK в образцах плазмы определяли методом ELISA на основе гибридизации. Как показано на фиг. 2, фармакокинетика концентрации в плазме лиофилизированной восстановленной лекарственной композиции siPHK, по существу, была такой же, как и сравнительной контрольной композиции, которая была только заморожена.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции для терапевтических средств, состоящих из молекул на основе нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения настоящее изобретение обеспечивает способы и композиции для получения лиофильных форм терапевтических композиций, содержащих агенты на основе нуклеиновых кислот.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения настоящее изобретение обеспечивает лиофильные формы наночастиц, которые могут быть восстановлены в эффективные терапевтические композиции. Наночастицы могут инкапсулировать агенты на основе нуклеиновых кислот. Лиофильные формы согласно настоящему изобретению могут применяться для восстановления и доставки композиций наночастиц, инкапсулирующих терапевтические агенты на основе нуклеиновых кислот, для трансфекции.
В других вариантах настоящее изобретение обеспечивает соединения и способы для получения растворов и суспензий терапевтических липидных наночастиц, которые являются стабильными в процессах
- 4 035761 лиофилизации. Способы лиофилизации согласно настоящему изобретению могут обеспечить стабильные лиофильные формы терапевтических липидных наночастиц, в которых наночастицы могут инкапсулировать агенты на основе нуклеиновых кислот. Лиофильные формы могут храниться в течение времени и восстанавливаться с обеспечением терапевтических липидных наночастиц с инкапсулированными агентами на основе нуклеиновых кислот.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения настоящее изобретение включает диапазон композиций и соединений для растворов или суспензий липидных наночастиц, которые могут подвергаться процессу лиофилизации, с обеспечением стабильных твердых лиофильных форм для длительного хранения терапевтических средств на основе нуклеиновых кислот. Композиции и способы согласно настоящему изобретению могут обеспечить лиофильные формы, которые могут быть восстановлены и обеспечить предпочтительную активность, размер частиц, время хранения и стабильность в сыворотке.
В других вариантах выполнения настоящее изобретение относится к соединениям, композициям и способам для обеспечения наночастиц для доставки и распределения активных агентов или лекарственных соединений в субъектах, тканях и органах.
Настоящее изобретение обеспечивает диапазон липидных соединений и ионизируемых соединений для доставки активных агентов в клетки. Липидные соединения и ионизируемые соединения согласно настоящему изобретению могут применяться для образования наночастиц для доставки и распределения активных агентов.
Настоящее изобретение охватывает композиции лекарственного средства на основе липидных наночастиц, содержащие, например, siPHK агенты, которые могут быть получены посредством лиофилизации суспензии наночастиц и восстановления наночастиц в суспензию.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения липидные наночастицы могут быть синтезированы путем высокоскоростной инъекции раствора липид/этанол в буферный раствор siPHK. Второй буфер можно подвергнуть диафильтрации и использовать в качестве внешнего буфера через картриджи TFF для получения конечной водной суспензии продукта.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения наночастицы могут иметь средний диаметр от 45 до 110 нм. Концентрация активных агентов на основе нуклеиновых кислот может составлять от 1 до 10 мг/мл.
Неожиданно было обнаружено, что липидные наночастицы могут пережить лиофилизацию суспензии, когда суспензию превращают в защищенную композицию.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения защищенная композиция согласно настоящему изобретению может состоять из водной суспензии липидных наночастиц в фармацевтически приемлемом растворе, соединения декстрина и сахаридного соединения сахара. Липидные наночастицы могут инкапсулировать активный агент, как например один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот.
Лиофилизация защищенной суспензии может обеспечить твердый лиофильный продукт, который может быть восстановлен в суспензию липидных наночастиц.
Восстановленная суспензия может содержать липидные наночастицы, которые инкапсулируют активный агент и сопоставимы с липидными наночастицами перед лиофилизацией.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения восстановленная суспензия может обеспечить активность инкапсулированного агента, которая сопоставима с активностью суспензии перед лиофилизацией.
В других вариантах выполнения восстановленная суспензия может обеспечить стабильные наночастицы, сопоставимые с наночастицами суспензии перед лиофилизацией. В отдельных вариантах выполнения настоящего изобретения средний размер частиц наночастиц может быть почти равен размеру наночастиц в суспензии перед лиофилизацией.
Композиции и способы согласно настоящему изобретению могут обеспечить неожиданную стабильность и активность восстановленной суспензии, состоящей из наночастиц, имеющих инкапсулированный агент.
В других вариантах выполнения защищенная суспензия, которая может быть лиофилизирована и восстановлена, может содержать защитную композицию для лиофилизации. Защитная композиция согласно настоящему изобретению может состоять из соединения декстрина и сахаридного соединения сахара. Общее количество соединений декстрина и сахара может составлять от 2 до 20% (мас./об.) от защищенной суспензии.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения соединение декстрина может составлять от 40 до 70% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара в защитной композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения соединение декстрина может составлять от 40 до 55% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара в защитной композиции. В других вариантах выполнения настоящего изобретения соединение декстрина может составлять от 40 до 45% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара в защитной композиции. Эти композиции могут обеспечить неожиданно выгодные свойства восстановленной суспензии наночастиц, например незначительное изменение размера или активности наночастиц.
- 5 035761
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения при лиофилизации и восстановлении защищенной композиции наночастиц изменение среднего размера наночастиц может быть в пределах 10% от их размера в первоначальной композиции перед лиофилизацией. В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения при лиофилизации и восстановлении защищенной композиции наночастиц изменение среднего размера наночастиц может находиться в пределах 5% от их размера в первоначальной композиции перед лиофилизацией.
Настоящее изобретение охватывает композиции лекарственного средства на основе липидных наночастиц, содержащих, например, siPHK агенты, которые могут быть получены лиофилизацией суспензии наночастиц и восстановлением наночастиц в суспензию после периода хранения. Восстановленная суспензия может обеспечить активность инкапсулированного агента, которая сопоставима с активностью суспензии перед лиофилизацией.
Восстановленная суспензия, полученная после периода хранения, могут содержать липидные наночастицы, которые инкапсулируют активный агент и сопоставимы с липидными наночастицами перед лиофилизацией.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения восстановленная суспензия, полученная после периода хранения, может обеспечить активность инкапсулированного агента, которая сопоставима с активностью суспензии перед лиофилизацией.
В других вариантах выполнения восстановленная суспензия, полученная после периода хранения, может обеспечить стабильные наночастицы, сопоставимые с наночастицами суспензии перед лиофилизацией. В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения средний размер частиц наночастиц может быть почти равен размеру наночастиц в суспензии перед лиофилизацией.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения лиофилизированная композиция может храниться при 5°С в течение по меньшей мере одного месяца. В других вариантах выполнения настоящего изобретения лиофилизированная композиция может храниться при -20°С в течение по меньшей мере одного месяца.
Активные агенты.
Композиции и способы согласно настоящему изобретению могут быть использованы для распределения агентов для подавления экспрессии генов. Примеры агента для подавления экспрессии гена включают ингибирующие молекулы нуклеиновой кислоты, включая рибозимы, антисмысловые нуклеиновые кислоты и интерференционные молекулы РНК (молекулы PHKi).
Терапевтические композиции согласно настоящему изобретению могут включать ингибирующие молекулы нуклеиновой кислоты. Примерами молекул нуклеиновых кислот, способных опосредовать интерференцию РНК, являются молекулы, активные в интерференции РНК (молекулы PHKi), включая дуплексную РНК, такую как siPHK (малая интерферирующая РНК), miPHK (микро РНК), shPHK (короткая шпилечная РНК), ddPHK (ДНК-направленная РНК), piPHK (Piwi-взаимодействующая РНК) или rasiPHK (ассоциированная с повторами siPHK) и их модифицированные формы.
Примеры активных терапевтических средств согласно настоящему изобретению включают ДНК, плазмиды, гибридные олигонуклеотиды или аптамеры.
Концентрация активных молекул нуклеиновой кислоты в композиции для предварительной лиофилизации согласно настоящему изобретению может составлять от около 1 до около 10 мг/мл. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения концентрация активных молекул нуклеиновой кислоты в композиции согласно настоящему изобретению может составлять от около 1 до около 5 мг/мл или от 2 до 4 мг/мл.
Композиции на основе липидных наночастиц для предварительной лиофилизации.
Варианты выполнения настоящего изобретения могут обеспечить композиции липидных наночастиц, композиции которых содержат защитное соединение для процесса лиофилизации.
Липидные наночастицы могут иметь любую композицию, известную в данной области техники. Липидные наночастицы могут быть синтезированы и загружены инкапсулированным веществом любым способом, включая процессы, известные в данной области техники.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения липидные наночастицы могут быть получены способом погружного впрыскивания. Некоторые примеры способов липидных наночастиц приведены в US 2013/0115274.
Некоторые примеры получения липосом приведены в Szoka, Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467 (1980); Liposomes, Marc J. Ostro, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1983, Chapter 1.
В общем, липидные наночастицы могут быть синтезированы путем смешивания липидных компонентов в органическом растворителе с водным буферным раствором, содержащим активные агенты на основе нуклеиновых кислот. Липосомы могут быть разделены по размеру путем фильтрации или экструзии. Липосомальную суспензию или раствор можно дополнительно трансформировать путем диафильтрации.
Композиция на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению, которая стабилизирована для процесса лиофилизации, может содержать липидные наночастицы, которые инкапсулируют
- 6 035761 один или более активных агентов, таких как агенты на основе нуклеиновых кислот, в суспензию. Суспензия может быть водной и может содержать смешивающийся с водой растворитель, такой как этанол. Композиция, стабилизированная для процесса лиофилизации, может дополнительно содержать защитные соединения для стабилизации липосом в процессе лиофилизации.
Средний размер липидных наночастиц в виде синтезированных может составлять от 40 до 120 нм, или от 45 до 110 нм, или от 85 до 105 нм.
Концентрация активного агента в композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению может быть в интервале от около 0.1 до около 10 мг/мл. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения концентрация активного агента в композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению может составлять от 0.5 до 8 мг/мл, или от 1 до 6 мг/мл, или от 2 до 5 мг/мл, или от 3 до 4 мг/мл.
Примеры защитных соединений включают соединения декстрина.
Примеры соединений декстрина включают мальтодекстрины и бета- и гамма-циклодекстрины.
Примеры соединений декстрина включают метилированные бета- и гамма-циклосоединения декстрина и сульфоалкиловые простые эфиры бета- и гамма-циклосоединений декстрина.
Примеры соединений декстрина включают соединения циклодекстрина, имеющие одно или более из 2, 3 и 6 гидроксильных положений, замещенных сульфоалкильными, бензолсульфоалкильными, ацетоалкильными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилсукцинатными, гидроксиалкилмалонатными, гидроксиалкилглутаратными, гидроксиалкиладипатными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилмалеатными, гидроксиалкилоксалатными, гидроксиалкилфумаратными, гидроксиалкилцитратными, гидроксиалкилтартратными, гидроксиалкилмалатными или гидроксиалкилцитраконатными группами.
Примеры соединений декстрина включают (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин, 2гидроксипропил-в-циклодекстрин сукцинат, (2-гидроксипропил)-у-циклодекстрин и 2-гидроксипропилγ-циклодекстрин сукцинат.
Примеры соединений декстрина включают гидроксиэтил β-циклодекстрин.
Примеры соединений декстрина включают диметил β-циклодекстрин и триметил β-циклодекстрин.
Примеры соединений декстрина включают сульфобутиловый простой эфир β-циклодекстрина и сульфобутиловый простой эфир γ-циклодекстрина.
Примеры соединений декстрина включают метил-в-циклодекстрин и метил-/-циклодекстрин.
Примеры соединений декстрина включают гидроксипропил-сульфобутил-в-циклодекстрин.
Примеры соединений декстрина включают H107 SIGMA циклодекстрин (Sigma-Aldrich Соф.).
Примеры соединений декстрина включают CAVAMAX, CAVASOL и CAVATRON циклодекстрины (Ashland Inc.).
Примеры соединений декстрина включают KLEPTOSE и CRYSMEB циклодекстрины (Roquette America Inc.).
Примеры соединений декстрина включают CAPTISOL циклодекстрины (Ligand Pharmaceuticals, Inc.).
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения примеры соединений декстрина включают соединения декстрина, присоединенные к полимерной цепи или сети. Например, циклодекстриновые молекулы могут быть присоединены к полимерам полиакриловой кислоты. В других вариантах выполнения настоящего изобретения молекулы циклодекстрина могут быть связаны вместе сшивающими соединениями, такими как акрилоильные группы. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения могут быть использованы виниловые акрилатные гидрогелевые формы с прикрепленным соединением циклодекстрина.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения соединение декстрина, которое будет использоваться в композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению, может быть объединено с адсорбируемым соединением перед введением в композицию на основе липидных наночастиц. Не желая связываться какой-либо одной конкретной теорией, предварительная адсорбция стерольного соединения соединением декстрина может образовывать комплекс включения, который может предотвратить потерю активности активного агента в восстановленном лекарственном продукте.
Примеры адсорбируемых соединений включают холестерин, ланостерин, зимостерин, зимостенол, десмостерин, стигмастанол, дигидроланостерин, 7-дегидрохолестерин.
Примеры адсорбируемых соединений включают ПЭГилированные холестерины и холестан 3-оксо(С1-22)ацильные соединения, например холестерил ацетат, холестерил арахидонат, холестерил бутират, холестерил гексаноат, холестерил миристат, холестерил пальмитат, холестерил бегенат, холестерил стеарат, холестерил каприлат, холестерил н-деканоат, холестерил додеканоат, холестерил нервонат, холестерил пеларгонат, холестерил н-валерат, холестерил олеат, холестерил элаидат, холестерил эрукат, холестерил гептаноат, холестерил линолелаидат и холестерил линолеат.
Примеры адсорбируемых соединений включают фитостерины, бета-ситостерин, кампестерин, эргостерин, брассикастерин, дельта-7-стигмастерин и дельта-7-авенастерин.
Дополнительные примеры защитных соединений включают сахаридные соединения. Примеры са
- 7 035761 харидных соединений включают соединения сахара.
Примеры защитных соединений сахара включают моносахариды, такие как С(5-6) альдозы и кетозы, а также дисахариды, такие как сахароза, лактоза, лактулоза, мальтоза, трегалоза, целлобиоза, койибиоза, сакебиоза, изомальтоза, софороза, ламинарибиоза, гентиобиоза, тураноза, мальтулоза, изомальтулоза, генцибиулоза, маннобиоза, мелибиоза, мелибиулоза и ксилобиоза.
Примеры защитных сахаридных соединений включают полисахариды, такие как фиколл.
Концентрация защитных соединений в композициях для предварительной лиофилизации может составлять от около 1 до около 25% (мас./об.).
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения концентрация защитных соединений в композициях для предварительной лиофилизации может составлять от 2 до 20% (мас./об.), или от 4 до 16% (мас./об.), или от 5 до 15% (мас./об.), или от 6 до 14% (мас./об.), или от 8 до 12% (мас./об.).
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения концентрация защитных соединений в композициях для предварительной лиофилизации может составлять 6% (мас./об.), или 8% (мас./об.), или 10% (мас./об.), или 12% (мас./об.), или 14% (мас./об.), или 16% (мас./об.), или 18% (мас./об.), или 20% (мас./об.), или 22% (мас./об.), или 24% (мас./об.).
Процессы лиофилизации.
Процессы лиофилизации могут проводиться в любом подходящем сосуде, таком как стеклянные сосуды, или, например, стеклянные флаконы, или сосуды с двумя камерами, как известно в фармацевтической области.
В стеклянный сосуд можно ввести стабилизированную композицию на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению, содержащую защитное соединение. Добавленный в сосуд объем композиции может составлять от 0,1 до 20 мл или от 1 до 10 мл.
Можно использовать любой процесс лиофилизации, в том числе известный в фармацевтической области (смотрите, например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Penn (1990)).
Процесс лиофилизации может включать замораживание стабилизированной защитным веществом композиции на основе липидных наночастиц при температуре от около -40°С до около -30°С. Замороженную композицию может быть высушенной формой лиофилизированной композиции.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения стадия замораживания может снизить температуру от температуры окружающей среды до конечной температуры в течение нескольких минут. Температурный диапазон может составлять около 1°С/мин.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения стадию сушки можно проводить при давлении около 0-250 мТорр или 50-150 мТорр, при температуре от около -15 до около -38°С. Стадию сушки можно продолжать при более высокой температуре, вплоть до температуры окружающей среды, в течение периода времени до нескольких дней. Уровень остаточной воды в твердом лиофиле может составлять менее около 5%, или менее 4%, или менее 3%, или менее 2%, или менее 1% (мас./об.).
Защищенная стабилизированная композиция липидных наночастиц согласно настоящему изобретению после лиофилизации может быть восстановлена способами, известными в фармацевтической области.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения настоящее изобретение обеспечивает способы ингибирования уровня агрегированных частиц в восстановленном лекарственном продукте, полученном из стабилизированной защищенной композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению после лиофилизации.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения восстановленный лекарственный продукт, полученный из стабилизированной защищенной композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению, после лиофилизации может иметь уменьшенный уровень агрегированных частиц.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения восстановленный лекарственный препарат, полученный из стабилизированной защищенной композиции на основе липидных наночастиц согласно настоящему изобретению, после лиофилизации может иметь уменьшенные уровни агрегированных частиц с размером более около 0,2 мкм, или больше чем около 0,5 мкм, или больше чем около 1 мкм.
Восстановленный лекарственный продукт.
Лиофил может быть восстановлен в фармацевтически приемлемом носителе.
Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают стерильную воду, воду для инъекции, стерильный нормальный соляной раствор, бактериостатическую воду для инъекции или раствор для распылителя.
Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают фармацевтически приемлемый раствор.
Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают HEPES буфер, фосфатные буферы, цитратные буферы и буфер, содержащий трис(гидроксиметил)аминометан.
- 8 035761
Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают фармацевтически приемлемые буферные растворы.
Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают буферные растворы малеиновой кислоты, винной кислоты, молочной кислоты, уксусной кислоты, бикарбоната натрия и глицина.
Восстановленный лиофил можно использовать в качестве лекарственного продукта.
Восстановленный лиофил можно дополнительно разбавить изотоническим солевым раствором или другими наполнителями для обеспечения заданной концентрации для введения.
Примеры эксципиентов включают модификаторы тоничности.
Примеры эксципиентов включают стабилизаторы, такие как человеческий сывороточный альбумин, бычий сывороточный альбумин, α-казеин, глобулины, α-лактальбумин, LDH, лизоцим, миоглобин, овальбумин и РНКаза.
Примеры эксципиентов включают буферы, такие как ацетат калия, ацетат натрия и бикарбонат натрия.
Примеры эксципиентов включают аминокислоты, такие как глицин, аланины, аргинин, бетаин, лейцин, лизин, глутаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту, гистидин, пролин, 4-гидроксипролин, саркозин, γ-аминомасляную кислоту, аланопин, октопин, стромбин и триметиламин N-окид.
Примеры эксципиентов включают неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат 20, полисорбат 80 и полоксамер 407.
Примеры эксципиентов включают диспергирующие агенты, такие как фосфатидилхолин, этаноламин, ацетилтриптофанат, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, этиленгликоль, глицерин, глицерол, пропиленгликоль, сорбит, ксилит, декстран и желатин.
Примеры эксципиентов включают антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, цистеин, тиоглицерин, тиогликолевая кислота, тиосорбит и глутатион.
Примеры эксципиентов включают восстанавливающие агенты, такие как дитиотреитол, тиолы и тиофены.
Примеры эксципиентов включают хелатирующие агенты, такие как ЭДТА, ЭГТА, глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения лиофил можно восстановить с применением иглы шприца через флакон, закрытый пробкой. Лиофил можно восстановить с или без встряхивания флакона.
Время восстановления может составлять от 3-30 с или более.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения восстановленный лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот может содержать менее 0.001% (мас./об.) агрегированных частиц с размером более 0.2 мкм.
В определенных вариантах выполнения настоящего изобретения восстановленный лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот может иметь уменьшенную цитокиновую активацию.
В дополнительных вариантах выполнения лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот может быть восстановлен после периода хранения 6 месяцев и сохранить 80% активности агентов на основе нуклеиновых кислот.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот может быть восстановлен после периода хранения шесть месяцев, а средний размер частиц липидных наночастиц может быть менее чем на 25% больше, чем перед лиофилизацией.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот может быть восстановлен после периода хранения 24 месяца и сохранять 90% активности агентов на основе нуклеиновых кислот.
В других вариантах выполнения настоящего изобретения лекарственный продукт на основе нуклеиновых кислот может быть восстановлен после периода хранения 24 месяца, и средний размер частиц липидных наночастиц может быть менее чем на 25% выше, чем перед лиофилизацией.
PHKi молекулы.
Количество активного ингредиента, индуцирующего интерференцию РНК, входящего в состав композиции согласно настоящему изобретению, может быть количеством, которое не вызывает неблагоприятного эффекта, превышающего преимущество введения. Такое количество может быть определено с помощью теста in vitro с использованием культивируемых клеток или теста на модели животного или млекопитающего, такого как мышь, крыса, собака или свиньи и т.д., и такие методы испытаний известны специалисту в данной области. Способы согласно настоящему изобретению могут быть применимы к любому животному, включая людей.
Количество активного ингредиента в форме композиции может варьироваться в зависимости от способа введения агента или композиции. Например, когда для одного введения используют множество единиц композиции, количество активного ингредиента, который содержится в композиции, в одной единице композиции может быть определено путем деления количества активного ингредиента, необходимого для одного введения, на указанное множество единиц.
- 9 035761
Молекулы нуклеиновой кислоты и молекулы PHKi согласно настоящему изобретению могут быть доставлены или введены в клетку, ткань, орган или субъекту путем непосредственного применения молекул в липосомальных композициях для содействия, усиления или облегчения проникновения в клетку.
Молекулы нуклеиновой кислоты и молекулы PHKi согласно настоящему изобретению могут быть объединены с катионными липидами, упакованными внутри липосом, и доставляться в клетки-мишени или ткани. Нуклеиновая кислота и комплексы нуклеиновых кислот могут локально вводиться в соответствующие ткани ex vivo или in vivo посредством прямого дермального применения, трансдермального применения или инъекции.
Ингибирующую молекулу нуклеиновой кислоты или композицию согласно настоящему изобретению можно вводить в виде стандартной лекарственной формы. Обычную фармацевтическую практику можно использовать для обеспечения подходящих составов или композиций для введения соединений пациентам, страдающим от заболевания. Может быть использован любой подходящий способ введения, например введение может быть парентеральным, внутривенным, внутриартериальным, подкожным, внутриутробным, внутримышечным, внутричерепным, внутриглазничным, офтальмологическим, внутрижелудочковым, внутрипеченочным, внутрикапсулярным, интратекальным, интрацистернальным, внутрибрюшинным, интраназальным, аэрозольным или пероральным.
Композиции и способы согласно настоящему изобретению могут включать экспрессионный вектор, который включает последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одну молекулу PHKi согласно настоящему изобретению, таким образом, что позволяет экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты.
Молекулы нуклеиновой кислоты и молекулы PHKi согласно настоящему изобретению могут быть экспрессированы из единиц транскрипции, вставленных в ДНК или РНК-векторы. Рекомбинантными векторами могут быть ДНК-плазмиды или вирусные векторы.
Например, вектор может содержать последовательности, кодирующие обе нити молекулы PHKi дуплекса или одну молекулу нуклеиновой кислоты, которая является самокомплементарной и, таким образом, образует молекулу PHKi. Вектор экспрессии может включать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую две или более молекулы нуклеиновых кислот.
Молекула нуклеиновой кислоты может быть экспрессирована в клетках из эукариотических промоторов. Специалисты в данной области техники понимают, что любая нуклеиновая кислота может быть экспрессирована в эукариотических клетках из соответствующего вектора ДНК/РНК.
Липидные композиции можно вводить животным внутривенной, внутримышечной или внутрибрюшинной инъекцией, или перорально, или путем ингаляции, или другими способами, известными в данной области.
Фармацевтически приемлемые композиции для введения олигонуклеотидов известны и могут применяться.
В одном варианте выполнения вышеописанного способа ингибирующая молекула нуклеиновой кислоты вводится при дозе около от 5 до 500 мг/м2/день, например 5, 25, 50, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275 или 300 мг/м2/день.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения ингибирующие молекулы нуклеиновых кислот согласно настоящему изобретению вводятся системно при дозах около от 1 до 100 мг/кг, например 1, 5, 10, 20, 25, 50, 75 или 100 мг/кг.
В других вариантах выполнения настоящего изобретения доза может находиться в диапазоне от около 25 до 500 мг/м2/день.
Способы, известные в данной области техники, для получения композиций обнаруживаются, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy Ed. A. R. Gennaro, Lippincourt Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa., 2000.
Препараты для парентерального введения могут, например, содержать эксципиенты, стерильную воду или физиологический раствор, полиалкиленовые гликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения или гидрированные нафталины. Биосовместимый биоразлагаемый лактидный полимер, сополимер лактид/гликолид или сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилена могут использоваться для контроля высвобождения соединений. Другие потенциально пригодные парентеральные системы доставки для ингибирующих молекул нуклеиновой кислоты включают частицы сополимера этилен-винилацетат, осмотические насосы, имплантируемые инфузионные системы и липосомы. Препараты для ингаляции могут содержать эксципиенты, например лактозу, или могут представлять собой водные растворы, содержащие, например, полиоксиэтилен-9-лауриловый простой эфир, гликохолат и деоксихолат, или могут быть масляными растворами для введения в виде назальных капель или в виде геля.
Препараты могут вводиться пациентам людям в терапевтически эффективных количествах (например, количествах, которые предотвращают, устраняют или уменьшают патологическое состояние), чтобы обеспечить терапию для неопластических заболеваний или состояний. Предпочтительная дозировка нуклеотидного олигомера согласно изобретению может зависеть от таких переменных, как тип и степень нарушения, общее состояние здоровья конкретного пациента, композиция соединений эксципиентов и
- 10 035761 способ введения.
Примеры липидных композиций.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения четыре липидподобных компонента, т.е. одна или более ионизируемых липидных молекул, структурный липид, один или более стабилизирующих липидов и один или более липидов для уменьшения иммуногенности композиции, могут составлять 100% от липидных компонентов композиции.
Примеры композиций липидных наночастиц показаны в табл. 1.
Таблица 1
Композиции липидных компонентов (каждый в мол.% от общего)
Ионизируемый Катионный Структурный Стабилизатор Уменьшающий иммуногенность
17 0 35 40 8
20 0 35 40 5
25 0 35 39 1
25 0 35 35 5
25 0 30 40 5
25 0 40 30 5
30 0 25 40 5
35 0 25 35 5
40 0 30 25 5
25 5 30 35 5
25 10 30 30 5
25 15 25 30 5
Ионизируемые липидподобные молекулы.
Примеры ионизируемой молекулы включают соединения, имеющие структуру, показанную в формуле I
в которой R1 и R2 представляют собой
R1=CH2(CH2)nOC(=O)R4
R2=CH2(CH2)mOC(=O)R5 где n и m каждый независимо равен от 1 до 2; и R4 и R5 независимо друг от друга представляют собой С(12-20)алкильную группу или С(12-20)алкенильную группу; где R3 выбирают из 1-азетидинов, 1пирролидинов, 1-пиперидинов, 4-морфолинов и 1,4-пиперазинов, где кольца могут быть замещены при любом положении атома углерода
и могут также быть выбраны из амино и аминоалкильных групп, которые могут быть замещены
где
- 11 035761 каждый R6 независимо выбирают из Н, алкила, гидроксила, гидроксиалкила, алкокси, алкоксиалкокси и аминоалкила;
каждый R7 независимо выбирают из Н, алкила, гидроксиалкила и аминоалкила;
каждый R8 независимо выбирают из Н, алкила, гидроксиалкила и аминоалкила, и любые два R8 могут образовывать кольцо;
q равно от нуля до четырех;
Q представляет собой О или NR7;
р равно от 1 до 4.
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение А6
которое представляет собой ((2-((3S,4R)-3,4-дигидроксипирролидин-1-ил)ацетил)азандиил)бис(этан-2,1 -диил) (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис-(октадека-9,12-диеноат).
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение А9
которое представляет собой ((2-(3-(гидроксиметил)азетидин-1 -ил)ацетил)азандиил)бис-(этан-2,1 диил)дитетрадеканоат.
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение АА
которое представляет собой ((2-(4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил)ацетил)азандиил)бис-(этан-2,1диил) (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис-(октадека-9,12-диеноат).
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение АВ
которое представляет собой ((2-(4-(2-гидроксиэтил)шшеразин-1-ил)ацетил)азандиил)бис-(этан-2,1диил) (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-бис-(октадека-9,12-диеноат).
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение С2
которое представляет собой 2-(( 1 -(((9Z, 122)-гептадека-9,12-диен-1 -ил)окси)-5 -(((9Z, 12Z)-октадека9,12-диен-1 -ил)окси)-1,5-диоксопентан-3 -ил)амино)-Н^,№триметил-2-оксоэтан-1 -аминий.
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение F5 которое представляет собой
2-((92,122)-№(3-(диметиламино)пропил)октадека-9,12
- 12 035761 диенамвдо)этил(92,122)-октадека-9,12-диеноат.
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение F7 которое представляет собой ^^^триметил-3-((92,122)-№(2-(((92,122)-октадека-9,12диеноил)окси)этил)октадека-9,12-диенамидо)пропан-1-аминий.
Примеры ионизируемого липида включают следующее соединение:
Соединение С24 о
которое представляет собой ^^№триметил-2-((^)-3-(((92,122)-октадека-9,12-диен-1-ил)окси)-2((9Z, 122)-октадека-9,12-диенамидо)-3 -оксопропил)амино)-2-оксоэтан-1 -аминий.
Структурные липиды.
Примеры структурных липидов включают холестерины, стерины и стероиды.
Примеры структурных липидов включают холаны, холестаны, эргостаны, кампестаны, пориферастаны, стигмастаны, горгостаны, ланостаны, гонаны, эстраны, андростаны, прегнаны и циклоартаны.
Примеры структурных липидов включают стерины и зоостерины, такие как холестерин, ланостерин, зимостерин, зимостенол, десмостерол, стигмастанол, дигидроланостерин и 7-дегидрохолестерин.
Примеры структурных липидов включают ПЭГилированные холестерины и холестан 3 оксо-(С122)ацильные соединения, например холестерил ацетат, холестерил арахидонат, холестерил бутират, холестерил гексаноат, холестерил миристат, холестерил пальмитат, холестерил бегенат, холестерил стеарат, холестерил каприлат, холестерил н-деканоат, холестерил додеканоат, холестерил нервонат, холестерил пеларгонат, холестерил н-валерат, холестерил олеат, холестерил элаидат, холестерил эрукат, холестерил гептаноат, холестерил линолелаидат и холестерил линолеат.
Примеры структурных липидов включают стерины, такие как фитостерины, бета-ситостерин, кампестерин, эргостерин, брассикастерин, дельта-7-стигмастерин и дельта-7-авенастерин.
Стабилизирующие липиды.
Примеры стабилизирующих липидов включают цвиттерионные липиды.
Примеры стабилизирующих липидов включают соединения, такие как фосфолипиды.
Примеры фосфолипидов включают фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол, фосфатидиновая кислота, пальмитоилоолеоил фосфатидилхолин, лизофосфатидилхолин, лизофосфатидилэтаноламин, дипальмитоилфосфатидилхолин, диолеоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилхолин и дилинолеоилфосфатидилхолин.
Примеры стабилизирующих липидов включают фосфатидилэтаноламиновые соединения и фосфатидилхолиновые соединения.
Примеры стабилизирующих липидов включают 1,2-диолеоил^п-глицеро-3-фосфохолин (DOPC).
Примеры стабилизирующих липидов включают дифитаноилфосфатидилэтаноламин (DPhPE) и 1,2дифитш юид-sii-i дицеро-3 -фосфохолин (DPhPC).
Примеры стабилизирующих липидов включают 1,2-дистеароил^п-глицеро-3-фосфохолин (DSPC), 1,2-дипальмитоил^п-глицеро-3 -фосфохолин (DPPC), 1,2-дипальмитоил^п-глицеро-3 -фосфоэтаноламин (ВРРЕ), и 1,2-диолеоил^п-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DOPE).
Примеры стабилизирующих липидов включают 1,2-дилауроил^п-глицерин (DLG); 1,2димиристоил^п-глицерин (DMG); 1,2-дипальмитоил^п-глицерин (DPG); 1,2-дистеароил^п-глицерин (DSG); 1,2-диарахидоил^п-глицеро-3-фосфохолин (DAPC); 1,2-дилауроил^п-глицеро-3-фосфохолин (DLPC); 1,2-димиристоил^п-глицеро-3-фосфохолин (DMPC); 1,2-дипальмитоил^п-глицеро-О-этил-3фосфохолин (DPePC); 1,2-дилауроил^п-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DLPE); 1,2-димиристоил^пглицеро-3-фосфоэтаноламин (DMPE); 1,2-дистеароил^п-глицеро-3-фосфоэтаноламин (DSPE); 1пальмитоил-2-линолеоил^п-глицеро-3 -фосфохолин; 1 -пальмитоил-2-олеоил^п-глицеро-3-фосфохолин (РОРС); 1-пальмитоил-2-лизо^п-глицеро-3-фосфохолин (Р-Lyso-PC) и 1-стеароил-2-лизо^п-глицеро-3фосфохолин (S-Lyso-PC).
Липиды для уменьшения иммуногенности.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают полимерные соединения и конъюгаты полимер-липид.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают ПЭГилированные липиды, имеющие полиэтиленгликолевые (ПЭГ) области. ПЭГ области могут иметь любую молекулярную массу. В
- 13 035761 некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения ПЭГ область может иметь молекулярную массу 200, 300, 350, 400, 500, 550, 750, 1000, 1500, 2000, 3000, 3500, 4000 или 5000 Да.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают соединения, имеющие метоксиполиэтиленгликолевую область.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают соединения, имеющие карбонилметоксиполиэтиленгликолевую область.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают соединения, имеющие мультиразветвленную ПЭГ область.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают соединения, имеющие полиглицериновую область.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают полимерные липиды, такие как DSPE-тПЭГ, DMPE-тПЭГ, DPPE-тПЭГ и DOPE-ml 1ЭГ.
Примеры липидов для уменьшения иммуногенности включают ПЭГ-фосфолипиды и ПЭГ церамиды.
Катионные липиды.
Примеры катионных липидов включают HEDC соединения, описанные в US 2013/022665 А1, и другие соединения, описанные в US 2013/0330401 А1 и US 2013/0115274 А1. Дополнительные примеры катионных липидов известны в данной области техники.
Композиции на основе наночастиц.
Варианты выполнения настоящего изобретения могут обеспечить композиции липосомальных наночастиц.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения ионизируемая молекула согласно настоящему изобретению может применяться для образования липосомальных композиций, которые могут иметь бислой липидподобных молекул.
Композиция на основе наночастиц может иметь одну или более ионизируемых молекул согласно настоящему изобретению в липосомальной структуре, структуре бислоя мицелле, ламеллярной структуре или их смеси.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения композиция может включать один или более компонентов жидкого носителя. Жидкий носитель, подходящий для доставки активных агентов согласно настоящему изобретению, может представлять собой фармацевтически приемлемый жидкий носитель. Жидкий носитель может включать органический растворитель или комбинацию воды и органического растворителя.
Варианты выполнения настоящего изобретения могут обеспечить липидные наночастицы, имеющие размер от 10 до 1000 нм. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения липосомальные наночастицы могут иметь размер от 10 до 150 нм.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения липосомальные наночастицы согласно настоящему изобретению могут инкапсулировать PHKi молекулу и удерживать по меньшей мере 80% инкапсулированных PHKi молекул после 1 ч воздействия сывороткой человека. Настоящее изобретение может обеспечить композицию для применения для распределения активного агента в клетках, тканях или органах, организмах и субъектах, где композиция включает одну или более ионизируемых липидных молекул согласно настоящему изобретению.
Композиции согласно настоящему изобретению может включать одну или более ионизируемых липидных молекул, наряду со структурным липидом, один или более стабилизирующих липидов и один или более липидов для уменьшения иммуногенности композиции.
Ионизируемые липидные молекулы согласно настоящему изобретению могут составлять любые мол.% от композиции согласно настоящему изобретению.
Ионизируемые липидные молекулы композиции согласно настоящему изобретению могут составлять от 15 до 40 мол.% от липидных компонентов композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения ионизируемые липидные молекулы композиции могут составлять от 20 до 35 мол.% от липидных компонентов композиции. В других вариантах выполнения настоящего изобретения ионизируемые липидные молекулы композиции могут составлять от 25 до 30 мол.% от липидных компонентов композиции.
Структурный липид композиции согласно настоящему изобретению может составлять от 25 до 40 мол.% от липидных компонентов композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения структурный липид композиции может составлять от 30 до 35 мол.% от липидных компонентов композиции.
Сумма стабилизирующих липидов композиции согласно настоящему изобретению может составлять от 25 до 40% мол.% от липидных компонентов композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения сумма стабилизирующих липидов композиции может составлять от 30 до 40 мол.% от липидных компонентов композиции.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения композиция согласно настоящему изобретению может включать два или более стабилизирующих липида, где каждый из стабилизирующих
- 14 035761 липидов по отдельности может составлять от 5 до 35 мол.% от липидных компонентов композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения композиция согласно настоящему изобретению может включать два или более стабилизирующих липида, где каждый из стабилизирующих липидов по отдельности может составлять от 10 до 30 мол.% от липидных компонентов композиции.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения сумма одного или более стабилизирующих липидов может составлять от 25 до 40 мол.% от липидов композиции, каждый из стабилизирующих липидов по отдельности может составлять от 5 до 35 мол.%.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения сумма одного или более стабилизирующих липидов может составлять от 30 до 40 мол.% от липидов композиции, каждый из стабилизирующих липидов по отдельности может составлять от 10 до 30 мол.%.
Один или более липидов для уменьшения иммуногенности композиции могут составлять в общем от 1 до 8 мол.% от липидных компонентов композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения один или более липидов для уменьшения иммуногенности композиции могут составлять в общем от 1 до 5 мол.% от липидных компонентов композиции.
В дополнительных вариантах выполнения композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно включать катионный липид, который может составлять от 5 до 25 мол.% от липидных компонентов композиции. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно включать катионный липид, который может составлять от 5 до 15 мол.% от липидных компонентов композиции. В этих вариантах выполнения молярное соотношение концентраций молекул катионного липида и ионизируемого липида композиции согласно настоящему изобретению может составлять от 5:35 до 25:15.
В композициях согласно настоящему изобретению совокупность липидных компонентов может включать один или более ионизируемых липидных молекулярных компонентов, один или более структурных липидов, один или более стабилизирующих липидов и один или более липидов для уменьшения иммуногенности композиции.
В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения композиция может содержать ионизируемый липид соединение А6, структурный липид холестерин, стабилизирующие липиды DOPC и DOPE и липид для уменьшения иммуногенности DPPE-mПЭГ. В некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения соединение А6 может составлять от 15 до 25 мол.% от композиции; холестерин, DOPC и DOPE в комбинации могут составлять от 75 до 85 мол.% от композиции; и DPPE-mПЭГ может составлять 5 мол.% от композиции.
В одном варианте выполнения настоящего изобретения соединение А6 может составлять 25 мол.% от композиции; холестерин может составлять 30 мол.% от композиции, DOPC может составлять 20 мол.% от композиции, DOPE может составлять 20 мол.% от композиции; и ОРРЕ-шПЭГ(2000) может составлять 5 мол.% от композиции.
Фармацевтические композиции.
Настоящее изобретение также охватывает способы распределения активного агента в орган субъекта для лечения заболевания посредством введения субъекту композиции согласно настоящему изобретению. Органы, которые можно лечить, включают легкие, печень, поджелудочную железу, почки, толстую кишку, кости, кожу и кишечник.
В других вариантах выполнения настоящее изобретение обеспечивает диапазон фармацевтических композиций.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может включать активный агент, а также носитель для лекарственного средства или липид согласно настоящему изобретению, наряду с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. В общем, активные агенты согласно настоящему изобретению включают любые активные агенты для злокачественных опухолей, включая любые ингибирующие молекулы нуклеиновых кислот и любые низкомолекулярные лекарственные средства. Примеры ингибирующих молекул нуклеиновых кислот включают рибозимы, антисмысловые нуклеиновые кислоты и РНК интерферирующие молекулы (PHKi молекулы).
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может содержать один или более каждого из следующего: поверхностно-активный агент, разбавитель, эксципиент, консервант, стабилизатор, краситель и суспендирующий агент.
Некоторые фармацевтические носители, разбавители и компоненты для фармацевтической композиции, а также способы получения и введения соединений и композиций согласно настоящему изобретению описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, Penn. (1990).
Примеры консервантов включают бензоат натрия, аскорбиновую кислоту и сложные эфиры пгидроксибензойной кислоты.
Примеры поверхностно-активных агентов включают спирты, сложные эфиры, сульфатированные алифатические спирты.
Примеры эксципиентов включают сахарозу, глюкозу, лактозу, крахмал, кристаллизованную целлюлозу, маннит, легкий безводный силикат, алюминат магния, алюминат метасиликат магния, синтетический силикат алюминия, карбонат кальция, кислый карбонат натрия, гидрофосфат кальция и кальция
- 15 035761 карбоксиметилцеллюлозу.
Примеры суспендирующих агентов включают кокосовое масло, оливковое масло, кунжутное масло, арахисовое масло, сою, целлюлозы ацетат фталат, метилацетат-метакрилатный сополимер и сложные эфиры фталатов.
Терапевтическая композиция согласно настоящему изобретению для доставки одной или более молекул, активных для подавления активности гена, может вводиться млекопитающему, нуждающемуся в этом. Терапевтически эффективное количество композиции и активного агента, который может быть инкапсулирован в липосоме, может быть введено млекопитающему для профилактики или лечения злокачественной опухоли.
Путь введения может быть локальным или системным.
Терапевтически эффективная композиция согласно настоящему изобретению может вводиться различными путями, включая внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный, подкожный и пероральный.
Пути введения могут включать, например, парентеральную доставку, включая внутримышечную, подкожную, внутривенную, интрамедуллярную инъекции, а также интратекальную, прямую внутрижелудочковую, внутрибрюшинную, интраназальную или внутриглазную инъекции.
Композиция может быть введена в виде лекарственных форм с замедленным или контролируемым высвобождением, включающих инъекции веществ замедленного всасывания, осмотические помпы и тому подобное для пролонгированного и/или рассчитанного по времени импульсного введения с заданной скоростью.
Композиция согласно настоящему изобретению может вводиться различными способами, включая как пероральный, так и парентеральные способы, и примеры этого включают, но не ограничиваются этим, пероральный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, местный, внутрилегочный, трахеобронхиальный, интратрахеальный, внутрибронхиальный, назальный, интраректальный, внутриартериальный, внутрипортальный, интравентрикулярный, интрамедуллярный, внутрь лимфатического узла, внутрилимфатический, внутрицеребральный, интратекальный, интрацеребровентрикулярный, трансмукозальный, чрескожный, интраназальный, внутрибрюшинный и внутриматочный способы, и она может быть составлена в лекарственной форме, подходящей для каждого способа введения. Такая лекарственная форма и метод составления могут быть выбраны как соответствующие из любой известной лекарственной формы и способа (см., например, Hyojun Yakuzaigaku, Standard Pharmaceutics, Ed. by Yoshiteru Watanabe et al, Nankodo, 2003).
Примеры лекарственных форм, подходящих для перорального введения, включают, но без ограничения к этому, следующие: порошок, гранула, таблетка, капсула, жидкость, суспензия, эмульсия, гель и сироп, и примеры лекарственных форм, подходящих для парентерального введения, включают инъекции, такие как раствор для инъекции, суспензия для инъекции, эмульсия для инъекции и инъекция, которая должна быть приготовлена непосредственно перед использованием. Композиции для парентерального введения могут быть в форме, такой как водный или неводный изотонический стерильный раствор или суспензия.
Фармацевтические составы для парентерального введения, например, путем болюсной инъекции или непрерывной инфузии, включают водные растворы активных композиций в водорастворимой форме. Суспензии активных соединений могут быть получены в виде подходящих масляных суспензий для инъекций. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, повышающие вязкость суспензии, такие как натрий-карбоксиметилцеллюлоза, сорбит или декстран. Возможно, суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или агенты, повышающие растворимость соединений, что позволяет получать высококонцентрированные растворы.
Составы для инъекции могут находиться в дозированной лекарственной форме, например в ампулах или в многодозовых контейнерах с добавленным консервантом. Композиции могут находиться в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных растворителях, и могут содержать вспомогательные вещества, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. В качестве альтернативы активный компонент может находиться в форме порошка для разбавления подходящим растворителем, например стерильной апирогенной водой перед применением.
В дополнение к составам, описанным ранее, композиции также могут быть изготовлены в виде депо-препарата. Указанные составы длительного действия могут быть введены путем внутримышечной инъекции. Таким образом, например, композиции могут быть изготовлены совместно с подходящими полимерными или гидрофобными веществами, например, в виде эмульсии в подходящем масле, или ионообменными смолами, или в виде умеренно растворимых производных, например в виде умеренно растворимой соли.
Композиции и составы согласно настоящему изобретению могут также быть приготовлены для местной доставки и могут наноситься на кожу субъекта с применением любых подходящих способов нанесения средства для местной доставки. Например, композиция может наноситься в ручную, с применением аппликатора или способом, который включает и то и другое. После нанесения композиция может вводиться в кожу субъекта, например, путем втирания. Нанесение может осуществляться множество раз
- 16 035761 каждый день или один раз каждый день. Например, композиция может наноситься на кожу субъекта один раз в день, дважды в день или множество раз в день или может наноситься один раз каждые два дня, один раз каждые три дня или около одного раза каждую неделю, один раз за каждые две недели или один раз за каждые несколько недель.
Композиции или фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть введены субъекту любыми подходящими способами. Неограничивающие примеры способов введения включают в том числе (а) введение путем инъекции, подкожно, интраперитонеально, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно, интраорбитально, интракапсулярно, интраспинально, интрастернально или тому подобное, включая доставку посредством инфузионной помпы; (b) локальное введение, например, путем инъекции напрямую в область почки или сердца, например путем имплантации депо; а также местное введение; по усмотрению специалиста в данной области для приведения активного соединения в контакт с живой тканью.
Точный состав, способ введения и дозировка фармацевтических композиций могут быть выбраны лечащим врачом с учетом состояния пациента (смотрите, например, Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 12th Ed., Sec. 1, 2011). Как правило, диапазон доз композиции, вводимой пациенту, может составлять от примерно 0.5 до примерно 1000 мг/кг массы тела пациента. Доза может представлять собой однократную дозу или серию двух или более доз, вводимых в течение одного или более дней, в зависимости от того, что необходимо пациенту. В тех случаях, когда человеческие дозы соединений были определены, по меньшей мере, для какого-либо состояния, дозы будут приблизительно такими же или составлять от примерно 0.1 до примерно 500%, более предпочтительно от примерно 25 до примерно 250% от определенной человеческой дозы. В случае, когда человеческая доза не определена, как будет в случае вновь открываемых фармацевтических композиций, подходящая человеческая доза может быть получена из значений ED50 или ID50 или других подходящих значений, полученных в результате исследований in vitro или in vivo, определенных исследованиями токсичности и исследованиями эффективности у животных.
Примеры
Пример 1. Получение siPHK композиций лекарственного средства на основе липидных наночастиц посредством лиофилизации и восстановления.
Липидные наночастицы были синтезированы высокоскоростным впрыскиванием раствора липид/этанол в буферный раствор siPHK в течение примерно 10 мин. После этого второй буфер, выбранный из цитратного буфера с рН 6,1, PBS с рН 7,0, Tris с рН 7,2 и HEPES с рН 7,4, подвергали диафильтрации и использовали в качестве внешнего буфера через картриджи TFF для получения конечной водной суспензии продукта.
К водной суспензии конечного продукта добавляли различные количества защитных соединений с последующей фильтрацией 0,2/0,8 мкм. Липидные наночастицы готовили в партиях по 500 или 1000 мл.
Результаты.
Неожиданно было обнаружено, что липидные наночастицы пережили процесс лиофилизации, и что лиофил обеспечил восстановленную суспензию липидных наночастиц со средним размером частиц, близким к размеру, который присутствовал в исходной суспензии.
Пример 2.
Восстановленные лекарственные препараты siPHK в соответствии с настоящим изобретению демонстрируют стабильный размер частиц и инкапсуляцию siPHK, которые пригодны для использования в лекарственных препаратах. Удивительный уровень стабильности составов siPHK согласно настоящему изобретению вызван свойствами защищенной композиции для лиофилизации.
В этом исследовании siPHK, нацеленная на Hsp47, была получена в виде композиции с липосомальными наночастицами со следующим приблизительным составом: ионизируемые липиды 40 мол.%, DOPE 30 мол.%, холестерин 25 мол.% и ПЭГ -DMPE 5.0 мол.%.
Композиции на основе наночастиц лиофилизировали с защитной композицией, содержащей сахарозу и (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин. Общее содержание защитной композиции составляло 10% (мас./об.). Применяемыми количествами были 6% сахарозы и 4% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина. Таким образом, содержание (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина составляло 40% (мас./об.) от общего количества сахарозы плюс (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина.
Липидные наночастицы были синтезированы путем высокоскоростного впрыска раствора липид/этанол в буферный раствор siPHK, чтобы получить конечную водную суспензию продукта. Начальный объемный состав siPHK-содержащих наночастиц имел средний размер частиц наночастиц 99-101 нм.
Лиофилизированные восстановленные лекарственные композиции siPHK протестировали на стабильность размера частиц и инкапсулирование siPHK.
В целом, наиболее предпочтительно, чтобы композиции siPHK на основе наночастиц проявляли менее чем около 10% изменение среднего размера частиц между состоянием до лиофилизации и лиофилизированным восстановленным состоянием. Кроме того, наиболее предпочтительно, чтобы композиции
- 17 035761 siPHK на основе наночастиц демонстрировали по меньшей мере около 85% эффективности инкапсуляции siPHK лиофилизированного восстановленного состояния.
Стабильность восстановленных продуктов siPHK на основе наночастиц приведена в табл.2. В табл.2 показаны средний размер частиц и эффективность инкапсуляции siPHK после лиофилизации (AL) и восстановления, а также аналогичные результаты, полученные для замороженного, оттаиваемого раствора перед лиофилизацией (BL).
Таблица 2
Стабильность наночастиц перед лиофилизацией и после восстановления
Защитное соединение в общем % (мас./об.) /(средний) (ни) PDI Дзета потенциал (мВ) %ЕЕ [siPHK] мг/мл
BL AL BL AL BL AL BL AL
10% (А)* 105 108 0.140 0.167 -1.4 -1.7 91 86 1.9
10% (В) 106 110 0.156 0.138 -1.8 -1.7 92 87 2.0
10% (С) 106 108 0.150 0.165 -2.0 -1.7 92 87 1.9
10% (D) 105 111 0.146 0.157 -1.7 -2.4 92 85 1.8
10% (А) 106 111 0.134 0.149 -1.5 -1.1 93 88 3.7
12.5% (А) 106 112 0.165 0.186 -1.7 -1.6 93 87 3.7
15% (А) 105 112 0.170 0.141 -1.3 -1.1 93 87 3.6
15% (А) 106 116 0.140 0.149 -1.3 -0.5 93 88 4.4
15% (В) 105 116 0.154 0.157 -1.3 -0.7 93 88 4.4
15% (С) 105 118 0.151 0.150 -1.1 -0.8 93 88 4.5
* В табл. 2 применяли (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин - защитное соединение из четырех различных коммерческих источников А, В, С и D.
В табл. 2 все защитные композиции демонстрируют подходящую стабильность конечных восстановленных лекарственных композиций siPHK. За исключением образцов с самыми высокими уровнями концентрации siPHK и защитным средством в общем (15%) композиции siPHK на основе наночастиц показали менее 10% изменение среднего размера частиц между состоянием до лиофилизации и лиофилизированным восстановленным состоянием, а также по меньшей мере 85% эффективности инкапсулирования siPHK лиофилизированного восстановленного состояния.
Результаты, приведенные в табл. 2, показывают, что восстановленные лекарственные композиции siPHK согласно настоящему изобретению, которые были получены из композиций на основе наночастиц путем лиофилизации из защитной композиции, содержащей 60% сахарозы и 40% (2-гидроксипропил)-вциклодекстрина, были преимущественно стабильны в отношении среднего размера частиц и эффективности инкапсуляции siPHK.
Пример 3. Модель фиброза печени крыс, индуцированного диметилнитрозамином (DMN).
Восстановленные лекарственные композиции siPHK согласно настоящему изобретению проявляли сильную и удивительную активность при подавлении активности генов in vivo. Наблюдался нокдаун in vivo с лиофилизированными и восстановленными композициями siPHK. siPHK, инкапсулированные в липосомальную композицию, использовались в модели фиброза печени крыс, индуцированного диметилнитрозамином (DMN).
siPHK, нацеленная на Hsp47 (GP46), была получена в виде композиции с липосомальными наночастицами со следующим приблизительным составом: ионизируемые липиды 40 мол.%, DOPE 30 мол.%, холестерин 25 мол.% и ПЭГ-DMPE 5,0 мол.%.
Композиции на основе наночастиц были лиофилизированы с защитной композицией, содержащей сахарозу и (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин. Общее содержание защитного соединения составляло 10% (мас./об.). Содержание (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина варьировалось от 20 до 40% (мас./об.).
Образцы были получены в виде свежего лиофилизированного в тот же день кека, хранящегося при -80°С. Образцы восстанавливали солевым раствором и дополнительно разбавляли солевым раствором до концентрации 0,17 мг/мл siPHK. Время восстановления составляло около 20 с при объеме 3 мл.
Конечные восстановленные растворы лекарственного продукта Hsp47 siPHK протестировали на активность in vivo, что является строгим испытанием на жизнеспособность лиофилизированных восстановленных наночастица, содержащих агент на основе нуклеиновых кислот.
В этом исследовании использовались крысы Naivve Sprague Dawley в десяти группах из 7-8 самцов с диапазоном массы 180-200 г. Использовали жидкую лекарственную форму с PBS при рН 7,4. В день дозирования перед введением композицию восстанавливали и разбавляли, используя солевой раствор, до концентраций по группам. Замороженную контрольную композицию оттаивали и разбавляли за один день до введения. Количество DMN для достижения 5 мг/мл прозрачного раствора для дозирования в
- 18 035761 день инъекции добавляли к PBS при рН 7,4. Введение осуществлялось путем внутрибрюшинной инъекции. Дозирование было QD, день 1-3, в течение 3 последовательных дней. Доза составляла 0,5-1,5 мг/кг (siPHK) с использованием диапазона концентраций композиции 0,17-0,5 мг/мл с вводимым объемом 3 мл/кг. Крыс взвешивали до введения DMN, и животным вводили на день 1-3 внутрибрюшинно 10 мг/кг DMN (раствор при 5 мг/мл) с объемом дозирования 2 мл/кг. На 4-6 день животных вводили DMN с объемом дозирования 1 мл/кг. В день 5DMN-обработанные животные были рандомизированы в группы по массе тела (день 5) до введения лекарственного средства. Испытуемый образец вводили в день 6 (первым днем инъекции DMN был день 1). В день 7 получили крысиную печень и сразу же промыли PBS, рН 7,4 (40 мл со скоростью 20 мл/мин), через обрезанную печеночную портальную вену. Из левых боковых долек собирали одну поперечную секцию печени толщиной 2 мм.
Оценка нокдауна gp46 mPHK. Общую РНК из печени крыс экстрагировали с применением RNeasy колонок (Qiagen). РНК количественно оценивали с применением спектрофотометра Nanodrop.
Как показано на фиг. 1, восстановленная лекарственная композиция siPHK согласно настоящему изобретению, которая была защищена 40% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина, проявляла сильную и удивительную активность при подавлении активности гена Hsp47 (GP46) in vivo.
В частности, in vivo эффективность подавления гена Hsp47 (GP46) композиции, защищенной 40% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрином, по существу, составляла 100%.
Напротив, проявляемая эффективность in vivo композиций, содержащих от 20 до 30% (2гидроксипропил)-в-циклодекстрина, была неприемлемо низкой в отношении нокдауна гена, составляя только 47 и 32% соответственно.
Таким образом, неожиданно преимущественный результат показывает, что защитные композиции для лиофилизации липосомальных композиций siPHK согласно настоящему изобретению могут быть получены по меньшей мере с 40% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина в композиции, содержащей сахарозу и (2-гидроксипропил) β- циклодекстрин.
Физическая характеризация показала, что воссозданные лекарственные композиции siPHK согласно настоящему изобретению, которые были получены из наночастиц, путем лиофилизации из защитной композиции, содержащей от около 40 до около 70% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина и остальную сахарозу, были преимущественно стабильными в отношении среднего размера частиц. Ниже около 40% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина композиции имели тенденцию к аномально повышенным значениям инкапсуляции, что свидетельствует о нежелательных структурных изменениях. Таким образом, предпочтительный диапазон для (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина составлял от около 40 до около 70%.
В заключение, восстановленная лекарственная композиция siPHK в соответствии с настоящим изобретением использует от 40 до 70% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина с удивительной эффективностью для лекарственного агента на основе нуклеиновых кислот in vivo.
Пример 4: Восстановленные лекарственные композиции siPHK согласно настоящему изобретению проявляли достаточную концентрацию в плазме для подавления активности гена in vivo. Фармакокинетика в плазме лиофилизированных и восстановленных siPHK композиций наблюдалась in vivo.
siPHK, нацеленная на Hsp47 (GP46), была получена в виде композиции с липосомальными наночастицами со следующим приблизительным составом: ионизируемые липиды 40 мол.%, DOPE 30 мол.%, холестерин 25 мол.% и ПЭГ-DMPE 5.0 мол.%.
Композиции на основе наночастиц были лиофилизированы с защитной композицией, содержащей сахарозу и (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин. Общее содержание защитного соединения составляло 12.5% (мас./об.). Содержание (2-гидроксипропил)- β-циклодекстрина составляло 40% (мас./об.) защитного соединения в общем, остальное составляла сахароза.
РК профили в плазме оценивали на крысах Sprague Dawley после внутривенного введения при уровне однократной дозы лиофилизированной композиции по сравнению с замороженной композицией. Концентрации siPHK в образцах плазмы определяли методом ELISA на основе гибридизации. Крысам Sprague-Dawley вводили препарат с помощью двойного катетера в яремную вену. Животным вводили однократную внутривенную инъекцию болюсной дозы через один катетер в яремной вене в течение 15 с на день 1. Приблизительно 0,30 мл цельной крови собирали из катетера яремной вены каждого животного в пробирки K2EDTA в каждый момент времени.
Как показано на фиг. 2, фармакокинетика концентрации в плазме лиофилизированной восстановленной лекарственной композиции siPHK, по существу, была такой же, как и у сравнительной контрольной композиции, которая была только заморожена. Лиофилизированная восстановленная композиция лекарственного средства на основе нуклеиновой кислоты siPHK обеспечивала удивительно эффективные уровни лекарственного средства в плазме.
Для этого эксперимента площадь под кривой концентрация-время (AUC) и пиковая концентрация в плазме (Cmax) после однократной дозы показаны в табл.3.
- 19 035761
Таблица 3
Фармакокинетика в плазме лиофилизированных восстановленных композиций на основе нуклеиновых кислот
Восстановленная Замороженная
AUC 2751 2683
Стах 2922 3350
В заключение, этот эксперимент показывает, что фармакокинетика концентрации в плазме лиофилизированной восстановленной композиции лекарственного средства на основе нуклеиновой кислоты, по существу, такая же, как и у сравнительной положительной контрольной композиции, которая была только заморожена. Таким образом, лиофилизированная восстановленная композиция лекарственного средства на основе нуклеиновой кислоты siPHK обеспечивала удивительно эффективные уровни лекарственного средства в плазме и не деградировала относительно нелиофилизированной композиции.
Пример 5. Защита липидных наночастиц в 100 нм диапазоне размера.
Липидные наночастицы синтезировали с диспергированием раствора липид/этанол в буфер siPHK, чтобы получить водную суспензию конечного продукта. У наночастиц был средний размер 105-106 нм. Наночастицы синтезировали с использованием соединения HEDC в виде ионизируемого липида (смотрите, например, US 2013/022665 А1). Наночастицы инкапсулировали siPHK, нацеленную на Hsp47.
В табл.4 показаны характеристики наночастиц перед лиофилизацией, где водная суспензия конечного продукта была просто заморожена, затем разморожена. В табл.5 показаны характеристики наночастиц после лиофилизации.
Увеличение среднего размера частиц из табл.4 в табл.5 составляет лишь 6,7%.
Таблица 4
Характеристики наночастиц перед лиофилизацией (100 нм диапазон размера)
№ Сахароза/2НРВСИ (мас.%/мас.%) До лиофилизации (замороженная)
/(среднее) (нм) PDI Дзета потенциал (мВ) ЕЕ [siPHK] Выход (%)
(%) (мг/мл)
1 6/4 105 0.14 -1.4 91 2.1 103
2 6/4 106 0.16 -1.8 92 2.1 105
3 6/4 106 0.15 -2.0 92 2.1 104
4 6/4 105 0.15 -1.7 92 2.1 104
5 6/4 106 0.14 -1.3 93 5.1 101
6 6/4 105 0.15 -1.3 93 4.9 99
7 6/4 105 0.15 -1.1 93 5.2 103
8 6/4 106 0.16 -0.9 93 5.2 104
Таблица 5
Характеристики наночастиц после лиофилизации (100 нм диапазон размера)
№ Сахароза/2НРВСВ (мас.%/мас.%) После лиофилизации (восстановленная)
/(среднее) (нм) PDI Дзета потенциал (мВ) ЕЕ [siPHK] Выход (%)
(%) (мг/мл)
1 6/4 108 0.17 -1.7 86 1.9 94
2 6/4 110 0.14 -1.7 87 2.0 98
3 6/4 108 0.16 -1.7 87 1.9 95
4 6/4 111 0.16 -2.4 85 1.8 92
5 6/4 116 0.15 -0.5 88 4.4 88
6 6/4 116 0.16 -0.7 88 4.4 89
7 6/4 118 0.15 -0.8 88 4.5 90
8 6/4 114 0.12 -1.3 87 4.42 88
В дополнительном тесте девять растворов конечного продукта, содержащих 6% (мас./об.) сахарозы, 4% (мас./об.) (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина и концентрацию siPHK, нацеленной на Hsp47, равную 2 мг/мл, протестировали на увеличение среднего размера частиц при лиофилизации и восстановлении. После лиофилизации восстановленные лекарственные продукты показали удивительно небольшое увеличение среднего размера частиц менее 5%, от 102 до 107 нм, по сравнению с растворами конечного
- 20 035761 продукта перед лиофилизацией.
Пример 6. Защита липидных наночастиц в 50 нм диапазоне размера.
Липидные наночастицы синтезировали высокоскоростным впрыскиванием раствора липид/этанол в siPHK буфер с получением водной суспензии конечного продукта. Наночастицы имели средний размер 48-50 нм. Наночастицы синтезировали с применением соединения А6 в качестве ионизируемого липида. Наночастицы инкапсулировали siPHK, нацеленную на Hsp47, при 2 мг/мл.
В табл.6 показаны характеристики наночастиц перед лиофилизацией (BL) и после лиофилизации (AL) наночастиц в 50 нм диапазоне.
Таблица 6
Характеристики наночастиц до и после лиофилизации наночастиц в 50 нм диапазоне
Сахароза/2НРВСИ (мас.%/мас,%) 2(среднее) (нм) PDI Дзета потенциал (мВ) %ЕЕ
BL AL BL AL BL AL BL AL
5/5 48 53 0.07 0.13 -2.3 -3.3 76 66
6/4 48 51 0.07 0.14 -2.8 -4.8 81 68
12/0 50 75 0.08 0.25 -4.9 -2.0 86 81
Пример 7. Защита siPHK липидных наночастиц для длительного хранения.
Восстановленные лекарственные композиции siPHK согласно настоящему изобретению проявляли длительную стабильность в отношении подавления активности гена in vivo.
siPHK, нацеленную на Hsp47 (GP46), получили в виде композиции с липосомальными наночастицами со следующим приблизительным составом: ионизируемые липиды 40 мол.%, DOPE 30 мол.%, холестерин 25 мол.% и ПЭГ-DMPE 5.0 мол.%.
Композиции на основе наночастиц были лиофилизированы с защитной композицией, содержащей сахарозу и (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин. Общее содержание защитного соединения составляло от 10 до 12.5% до 15% (мас./об.). Содержание (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина составляло 40% (мас./об.), сахарозы - 60%. Циклодекстрином был CAVITRON W7 НР5 PHARMA циклодекстрин.
Ампулы хранили при температуре, указанной в табл. 7, в течение 4 недель. После хранения и восстановления средний размер наночастиц (PS, Z-среднее) был неожиданно стабильным, как показано в табл. 7.
Как показано в табл.7, размер наночастиц siPHK находился в пределе 4% от их размера в первоначальной композиции.
Таблица 7
Характеристики наночастиц
Общее содержание защитного соединения в образце % Температура -2 ОС Температура 5 С
Начальный Z- средний 1 месяц Zсредний Начальный Zсредний 1 месяц Zсредний
Zсредний PDI Zсредний PDI Zсредний PDI Zсредний PDI
10 103 0.12 99 0.15 103 0.12 102 0.14
12.5 101 0.13 101 0.15 101 0.13 100 0.16
15 102 0.13 ... ... 102 0.13 102 0.15
10 100 0.13 99 0.17 100 0.13 96 0.16
12.5 95 0.16 94 0.14 95 0.16 94 0.14
15 96 0.13 95 0.13 96 0.13 96 0.13
10 95 0.15 95 0.16 95 0.15 96 0.15
12.5 95 0.15 92 0.11 95 0.15 93 0.14
15 94 0.13 92 0.14 94 0.13 91 0.14
Пример 8. Защита siPHK липидных наночастиц для длительного хранения.
Восстановленные лекарственные композиции siPHK согласно настоящему изобретению проявляли длительную стабильность в отношении подавления активности гена in vivo.
siPHK, нацеленные на Hsp47 (GP46), были получены в виде композиции с липосомальными наночастицами со следующим приблизительным составом: ионизируемые липиды 40 мол.%, DOPE 30 мол.%, холестерин 25 мол.% и ПЭГ-DMPE 5.0 мол.%.
Композиции на основе наночастиц были лиофилизированы с защитной композицией, содержащей сахарозу и (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрин. Общее содержание защитного соединения составляло от 10 до 12.5% до 15% (мас./об.). Содержание (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрина составляло 40% (мас./об.), сахарозы - 60%. Циклодекстрином был CAVITRON W7 НР7 PHARMA циклодекстрин.
- 21 035761
Ампулы хранили при температуре, указанной в табл.8, в течение 4 недель. После хранения и восстановления средний размер наночастиц (PS, Z-среднее) был неожиданно стабильным, как показано в табл.8.
Как показано в табл.8, размер наночастиц siPHK находился в пределе 5% от их размера в первоначальной композиции.
Таблица 8
Характеристики наночастиц
Общее содержание защитного соединения в образце % Температура -20С Температура 5 С
Начальное Zсреднее 1 месяц Zсреднее Начальное Zсреднее 1 месяц Zсреднее
Z- среднее PDI Z- среднее PDI Z- среднее PDI Z- среднее PDI
10 103 0.11 99 0.14 103 0.11 99 0.15
12.5 101 0.14 99 0.15 101 0.14 98 0.15
15 102 0.15 ... ... 102 0.15 97 0.14
10 96 0.13 95 0.13 96 0.13 93 0.13
12.5 94 0.12 91 0.12 94 0.12 91 0.13
15 94 0.13 89 0.14 94 0.13 91 0.14
10 94 0.15 89 0.15 94 0.15 89 0.13
12.5 91 0.15 87 0.13 91 0.15 88 0.14
15 90 0.14 86 0.15 90 0.14 87 0.12
Все публикации, патенты и литература, упомянутые в настоящей заявке, включены в посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.
1. Понятно, что настоящее изобретение не ограничивается конкретной методологией, протоколами, веществами и реагентами, поскольку они могут различаться. Следует также понимать, что используемая в настоящей заявке терминология предназначена только для описания конкретных вариантов выполнения изобретения и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что различные изменения и модификации могут быть сделаны для описания, раскрытого в настоящей заявке, без отклонения от объема и сущности описания, и что эти варианты выполнения изобретения находятся в пределах объема этого описания и прилагаемой формулы изобретения.
2. Следует отметить, что как используется в описании и в прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число, если из контекста явно не следует иное. Кроме того, в настоящей заявке могут быть взаимозаменяемы форма единственного числа, выражение один или более и выражение по меньшей мере один. Следует также отметить, что термины содержит, содержащий, включающий, включая и имеющий могут использоваться взаимозаменяемо и должны читаться экспансивно и без ограничения.
3. Раскрытие диапазонов значений в настоящей заявке предназначено только для использования в качестве условного способа для индивидуальной ссылки на каждое отдельное значение, попадающее в диапазон, если не указано иное, и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было отдельно указано в настоящей заявке. В отношении групп Маркуша специалистам в данной области техники очевидно, что описание настоящей заявки включает в себя отдельные члены, а также подгруппы членов группы Маркуша.
Без дальнейшего уточнения полагают, что специалист в данной области может на основе вышеприведенного описания использовать настоящее изобретение в полной мере. Следовательно, следующие конкретные варианты осуществления должны толковаться как просто иллюстративные, а не ограничивающие объем настоящего изобретения каким-либо образом.
Все признаки, раскрытые в описании настоящей заявки, могут быть комбинированы в любой комбинации. Каждый признак, раскрытый в описании настоящего изобретения, может быть заменен альтернативным признаком, служащим той же эквивалентной или аналогичной цели.

Claims (27)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Композиция для получения твердого лиофила липидных наночастиц, содержащая один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот, причем композиция содержит водную суспензию липидных наночастиц в фармацевтически приемлемом растворе, где липидные наночастицы инкапсулируют один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот;
    соединение декстрина и сахаридное соединение сахара, в которой общее количество соединений декстрина и сахара составляет от 10 до 15% (мас./об.) ком- 22 035761 позиции, в которой соединение декстрина составляет 40% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара, в которой соединением декстрина является циклодекстрин, в которой сахаридное соединение сахара представляет собой моносахаридное или дисахаридное соединение сахара.
  2. 2. Композиция по п.1, в которой наночастицы имеют средний диаметр от 45 до 110 нм.
  3. 3. Композиция по п.1, в которой концентрация активных агентов на основе нуклеиновых кислот составляет от 1 до 10 мг/мл.
  4. 4. Композиция по п.1, в которой липидные наночастицы содержат соединение, выбранное из соединения А6, соединения А9, соединения АА, соединения АВ, соединения С2, соединения F5, соединения F7, соединения С24 и HEDC, где соединение А6 имеет формулу соединение F5 имеет формулу
    соединение А9 имеет формулу соединение АА имеет формулу соединение С2 имеет формулу соединение F7 имеет формулу соединение С24 имеет формулу
  5. 5. Композиция по п.1, в которой одним или более активными агентами на основе нуклеиновых кислот являются PHKi молекулы, способные опосредовать РНК интерференцию.
  6. 6. Композиция по п.5, в которой PHKi молекулами являются siPHK, shPHK, ddPHK, piPHK или rasiPHK.
  7. 7. Композиция по п.1, в которой одним или более активными агентами на основе нуклеиновых кислот являются miPHK, антисмысловые РНК, плазмиды, гибридные олигонуклеотиды или аптамеры.
  8. 8. Композиция по п.1, в которой фармацевтически приемлемым раствором является HEPES буфер, фосфатный буфер, цитратный буфер или буфер, содержащий трис(гидроксиметил)аминометан.
    - 23 035761
  9. 9. Композиция по п.1, в которой соединение циклодекстрина имеет одно или более из 2, 3 и 6 гидроксильных положений, замещенных сульфоалкильными, бензолсульфоалкильными, ацетоалкильными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилсукцинатными, гидроксиалкилмалонатными, гидроксиалкилглутаратными, гидроксиалкиладипатными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилмалеатными, гидроксиалкилоксалатными, гидроксиалкилфумаратными, гидроксиалкилцитратными, гидроксиалкилтартратными, гидроксиалкилмалатными или гидроксиалкилцитраконатными группами.
  10. 10. Композиция по п.1, в которой соединением циклодекстрина является (2-гидроксипропил)-вциклодекстрин, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин сукцинат, (2-гидроксипропил)^-циклодекстрин или 2-гидроксипропил^-циклодекстрин сукцинат.
  11. 11. Композиция по п.1, в которой соединением циклодекстрина является сульфобутиловый простой эфир β-циклодекстрина или сульфобутиловый простой эфир γ-циклодекстрина.
  12. 12. Композиция по п.1, в которой соединением циклодекстрина является метил-в-циклодекстрин или метил—γ—циклодекстрин.
  13. 13. Композиция по п.1, в которой соединение циклодекстрина присоединено к полимерной цепи или сети.
  14. 14. Композиция по п.1, в которой соединение циклодекстрина включает адсорбируемое соединение.
  15. 15. Композиция по п.14, в которой адсорбируемое соединение выбрано из холестерина, ланостерина, зимостерина, зимостенола, демостерола, стигмастанола, дигидроланостерина, 7-дегидрохолестерина, пегилированного холестерина, холестерилацетата, холестериларахидоната, холестерилбутирата, холестерилгексаноата, холестерилмиристата, холестерилпальмитата, холестерилбегената, холестерилстеарата, холестерилкаприлата, холестерил н-деканоата, холестерилдодеканоата, холестерилнервоната, холестерилпеларгоната, холестерил н-валерата, холестерилолеата, холестерилэлаидата, холестерилэруката, холестерилгептаноата, холестериллинолелаидата, холестериллинолеата, бета-ситостерина, кампестерина, эргостерина, брассикастерина, дельта-7-стигмастерина и дельта-7-авенастерина.
  16. 16. Композиция по п.1, в которой соединение сахара выбрано из сахарозы, лактозы, лактулозы, мальтозы, трегалозы, целлобиозы, койибиозы, сакебиозы, изомальтозы, софорозы, ламинарибиозы, гентиобиозы, туранозы, мальтулозы, изомальтулозы, генцибиулозы, маннобиозы, мелибиозы, мелибиулозы и ксилобиозы.
  17. 17. Композиция по п.1, где при лиофилизации и восстановлении композиции агрегированные частицы с размером более 0.2 мкм составляют менее 0.001% (мас./об.).
  18. 18. Способ получения твердого лиофила одного или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот, причем способ включает лиофилизацию композиции по любому из пп.1-17.
  19. 19. Способ получения твердого лиофила, причем способ включает синтез липидных наночастиц, где липидные наночастицы инкапсулируют один или более активных агентов на основе нуклеиновых кислот;
    обеспечение водной суспензии липидных наночастиц в фармацевтически приемлемом растворе;
    добавление соединения декстрина в раствор, содержащий липидные наночастицы;
    добавление сахаридного соединения сахара в раствор, содержащий липидные наночастицы;
    лиофилизацию раствора, содержащего липидные наночастицы, с образованием таким образом твердого лиофила, в котором общее количество соединений декстрина и сахара составляет от 10 до 15% (мас./об.) от раствора, содержащего липидные наночастицы, в котором соединение декстрина составляет 40% (мас./об.) от общего количества соединений декстрина и сахара, в котором соединением декстрина является циклодекстрин, в котором сахаридное соединение сахара представляет собой моносахаридное или дисахаридное соединение сахара.
  20. 20. Способ по п.19, в котором наночастицы имеют средний диаметр от 45 до 110 нм.
  21. 21. Способ по п.19, в котором концентрация активных агентов на основе нуклеиновых кислот составляет от 1 до 10 мг/мл.
  22. 22. Способ по п.19, в котором одним или более активными агентами на основе нуклеиновых кислот являются PHKi молекулы, способные опосредовать РНК интерференцию.
  23. 23. Способ по п.19, в котором соединение циклодекстрина имеет одно или более из 2, 3 и 6 гидроксильных положений, замещенных сульфоалкильными, бензолсульфоалкильными, ацетоалкильными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилсукцинатными, гидроксиалкилмалонатными, гидроксиалкилглутаратными, гидроксиалкиладипатными, гидроксиалкильными, гидроксиалкилмалеатными, гидроксиалкилоксалатными, гидроксиалкилфумаратными, гидроксиалкилцитратными, гидроксиалкилтартратными, гидроксиалкилмалатными или гидроксиалкилцитраконатными группами.
  24. 24. Способ по п.19, в котором соединением циклодекстрина является (2-гидроксипропил)-вциклодекстрин, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин сукцинат, (2-гидроксипропил)^-циклодекстрин или 2-гидроксипропил-','-циклодекстрин сукцинат.
  25. 25. Способ по п.19, в котором соединением циклодекстрина является сульфобутиловый простой эфир β-циклодекстрина или сульфобутиловый простой эфир γ-циклодекстрина.
    - 24 035761
  26. 26. Способ по п.19, в котором соединением циклодекстрина является метил-β-циклодекстрин или метил-у-циклодекстрин.
  27. 27. Способ по п.19, в котором соединение циклодекстрина включает адсорбируемое соединение.
    эффективность siPHK in vivo
EA201890367A 2015-07-22 2016-07-22 Композиция для получения лиофильных форм наночастиц и способ получения лиофильных форм наночастиц EA035761B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562195356P 2015-07-22 2015-07-22
PCT/US2016/043537 WO2017015552A1 (en) 2015-07-22 2016-07-22 Compositions and methods for nanoparticle lyophile forms

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201890367A1 EA201890367A1 (ru) 2018-06-29
EA035761B1 true EA035761B1 (ru) 2020-08-06

Family

ID=57834582

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890367A EA035761B1 (ru) 2015-07-22 2016-07-22 Композиция для получения лиофильных форм наночастиц и способ получения лиофильных форм наночастиц

Country Status (23)

Country Link
US (3) US10300018B2 (ru)
EP (1) EP3324932B1 (ru)
JP (2) JP6875373B2 (ru)
KR (1) KR20180030698A (ru)
CN (2) CN108024957B (ru)
AU (1) AU2016297153B2 (ru)
BR (1) BR112018001178A2 (ru)
CA (1) CA2992849C (ru)
CY (1) CY1123984T1 (ru)
DK (1) DK3324932T3 (ru)
EA (1) EA035761B1 (ru)
ES (1) ES2862191T3 (ru)
HR (1) HRP20210523T1 (ru)
HU (1) HUE053990T2 (ru)
IL (2) IL288342B2 (ru)
LT (1) LT3324932T (ru)
MX (1) MX2018000891A (ru)
PL (1) PL3324932T3 (ru)
PT (1) PT3324932T (ru)
RS (1) RS61607B1 (ru)
SI (1) SI3324932T1 (ru)
TW (1) TWI732773B (ru)
WO (1) WO2017015552A1 (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3085694A1 (en) 2017-12-12 2019-06-20 Lead Biotherapeutics Ltd. Solid lipid nanoparticle for intracellular release of active substances and method for production the same
CN108813619A (zh) * 2018-07-19 2018-11-16 广州市汉廷食品有限公司 一种无公害食品添加剂及其制备工艺
BR112021004929A2 (pt) 2018-09-28 2021-06-01 Nutcracker Therapeutics, Inc. peptídeos catiônicos terciários amino-lipidados para entrega de ácido nucleico
JP2022512077A (ja) * 2018-11-16 2022-02-02 日東電工株式会社 Ｒｎａ干渉送達製剤及び悪性腫瘍のための方法
WO2021060440A1 (ja) * 2019-09-26 2021-04-01 日油株式会社 脂質ナノ粒子の凍結乾燥組成物
WO2022036170A1 (en) * 2020-08-14 2022-02-17 Arcturus Therapeutics, Inc. Method of lyophilizing lipid nanoparticles
WO2023064891A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 Hemoshear Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating diseases associated with bile acid transporter
CN116643056A (zh) * 2022-02-15 2023-08-25 厦门万泰凯瑞生物技术有限公司 促甲状腺激素受体复合物、试剂盒、制备方法和用途

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4537883A (en) * 1982-11-12 1985-08-27 Mead Johnson & Company Lyophilized cyclophosphamide
US20040121983A1 (en) * 2002-08-12 2004-06-24 Council Of Scientific And Industrial Research Method for treating leishmaniasis using methyl-beta-cyclodextrin
US20050002998A1 (en) * 2003-06-04 2005-01-06 Georgetown University Method for improving stability and shelf-life of liposome complexes
US20100278885A1 (en) * 2007-02-09 2010-11-04 National University Corporation NARA Institute of Science and Technology C70-Containing Liposome, Method for Producing the Same, and Use of the Same
US20110237686A1 (en) * 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc Formulations and methods of use
US20130115274A1 (en) * 2011-11-04 2013-05-09 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
US20140288023A1 (en) * 2002-09-06 2014-09-25 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutics delivery

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4537683A (en) 1982-02-01 1985-08-27 Rohm And Haas Company Trihalomethane precursor removal using ion exchange emulsions
US4927571A (en) 1987-05-18 1990-05-22 Liposome Technology, Inc. Preparation of injectable doxorubicin/liposome suspension
US20060110441A1 (en) 2004-10-28 2006-05-25 Harry Wong Lyophilized liposome formulations and method
CA2587337A1 (en) * 2004-11-19 2006-05-26 Novosom Ag Improvements in or relating to pharmaceutical compositions for local administration
US8357401B2 (en) * 2009-12-11 2013-01-22 Bind Biosciences, Inc. Stable formulations for lyophilizing therapeutic particles
WO2011103150A2 (en) 2010-02-18 2011-08-25 Cephalon, Inc. Lyophilized preparations of bendamustine
CN102018672B (zh) * 2010-11-29 2013-09-18 广州朗圣药业有限公司 一种水溶性药物的脂质体冻干组合物及其制备方法
US9011903B2 (en) 2011-06-08 2015-04-21 Nitto Denko Corporation Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations
EP3998064A1 (en) * 2011-06-08 2022-05-18 Translate Bio, Inc. Cleavable lipids
JP6133308B2 (ja) 2011-10-21 2017-05-24 セレーター ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 凍結乾燥リポソーム
SI2773326T1 (sl) * 2011-11-04 2019-04-30 Nitto Denko Corporation Metoda za sterilno proizvodnjo delcev lipidno-nukleinske kisline
WO2013149013A1 (en) 2012-03-28 2013-10-03 Discovery Laboratories, Inc. Lyophilization of synthetic liposomal pulmonary surfactant
US9877919B2 (en) * 2012-03-29 2018-01-30 Translate Bio, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
AU2013270685B2 (en) 2012-06-08 2017-11-30 Nitto Denko Corporation Lipids for therapeutic agent delivery formulations
US20140271815A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Aryo Sorayya Heat-and freeze-stable vaccines and methods of making and using same

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4537883A (en) * 1982-11-12 1985-08-27 Mead Johnson & Company Lyophilized cyclophosphamide
US20040121983A1 (en) * 2002-08-12 2004-06-24 Council Of Scientific And Industrial Research Method for treating leishmaniasis using methyl-beta-cyclodextrin
US20140288023A1 (en) * 2002-09-06 2014-09-25 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutics delivery
US20050002998A1 (en) * 2003-06-04 2005-01-06 Georgetown University Method for improving stability and shelf-life of liposome complexes
US20100278885A1 (en) * 2007-02-09 2010-11-04 National University Corporation NARA Institute of Science and Technology C70-Containing Liposome, Method for Producing the Same, and Use of the Same
US20110237686A1 (en) * 2010-03-26 2011-09-29 Cerulean Pharma Inc Formulations and methods of use
US20130115274A1 (en) * 2011-11-04 2013-05-09 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery

Also Published As

Publication number Publication date
WO2017015552A1 (en) 2017-01-26
HRP20210523T1 (hr) 2021-05-14
CN108024957B (zh) 2021-08-24
CA2992849A1 (en) 2017-01-26
KR20180030698A (ko) 2018-03-23
EP3324932A1 (en) 2018-05-30
IL257029A (en) 2018-03-29
CA2992849C (en) 2023-06-13
MX2018000891A (es) 2018-06-11
JP2021119161A (ja) 2021-08-12
ES2862191T3 (es) 2021-10-07
SI3324932T1 (sl) 2021-07-30
AU2016297153A1 (en) 2018-03-01
AU2016297153B2 (en) 2021-02-25
EP3324932B1 (en) 2021-03-10
CN113679689B (zh) 2023-09-01
TW201717914A (zh) 2017-06-01
TWI732773B (zh) 2021-07-11
DK3324932T3 (da) 2021-04-06
IL288342A (en) 2022-01-01
LT3324932T (lt) 2021-04-26
CN113679689A (zh) 2021-11-23
US20190231695A1 (en) 2019-08-01
US10300018B2 (en) 2019-05-28
CN108024957A (zh) 2018-05-11
BR112018001178A2 (pt) 2018-09-11
IL257029B (en) 2021-12-01
IL288342B1 (en) 2023-10-01
EP3324932A4 (en) 2019-03-06
CY1123984T1 (el) 2022-05-27
PL3324932T3 (pl) 2021-07-05
US11737982B2 (en) 2023-08-29
HUE053990T2 (hu) 2021-08-30
RS61607B1 (sr) 2021-04-29
JP7268079B2 (ja) 2023-05-02
US20240000710A1 (en) 2024-01-04
JP6875373B2 (ja) 2021-05-26
EA201890367A1 (ru) 2018-06-29
PT3324932T (pt) 2021-04-06
JP2018521083A (ja) 2018-08-02
US20170020819A1 (en) 2017-01-26
IL288342B2 (en) 2024-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11737982B2 (en) Compositions and methods for nanoparticle lyophile forms
ES2525257T3 (es) Composiciones de ciclopolisacárido y de bendamustina
CA2486007C (en) Delivery of nucleic acid-like compounds
TWI355946B (en) Proliposomal and liposomal compositions of poorly
ES2251134T3 (es) Uso de complejos entre liposomas cationicos y polidesoxirribonucleotidos como medicamentos.
ES2898425T3 (es) Composición acuosa que comprende dantroleno
US20130004592A1 (en) Pharmaceutical compositions for parenteral administration
ES2377352T3 (es) Nuevas composiciones a base de taxoides
BR112020008451A2 (pt) composto fusogênico, composição, composições farmacêutica e para uso na distribuição de um agente ativo, e, método para prevenir, melhorar ou tratar uma doença ou condição
CA3191874A1 (en) Method of lyophilizing lipid nanoparticles
CN114409554A (zh) 一种新型阳离子脂质化合物及其组合物和用途
EP3718537A1 (en) Disease-site-specific liposomal formulation
US11708575B2 (en) RNA interference delivery formulation and methods for malignant tumors
JP2022551311A (ja) 活性剤の沈殿物を含む送達系複合体および使用方法
US20240141342A1 (en) Rna interference delivery formulation and methods for malignant tumors
RU2808990C2 (ru) Фузогенные соединения для доставки биологически активных молекул
EA005308B1 (ru) Препараты эстрамустинфосфата для парентерального применения

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM