EA034414B1 - Способ лечения тройного негативного рака молочной железы - Google Patents

Способ лечения тройного негативного рака молочной железы Download PDF

Info

Publication number
EA034414B1
EA034414B1 EA201491352A EA201491352A EA034414B1 EA 034414 B1 EA034414 B1 EA 034414B1 EA 201491352 A EA201491352 A EA 201491352A EA 201491352 A EA201491352 A EA 201491352A EA 034414 B1 EA034414 B1 EA 034414B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
antibody
variable region
binding fragment
heavy chain
Prior art date
Application number
EA201491352A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201491352A1 (ru
Inventor
Жилль Бернар Тремблэ
Анна Н. Морайтис
Марио Филион
Original Assignee
Адс Терапьютикс Са
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Адс Терапьютикс Са filed Critical Адс Терапьютикс Са
Publication of EA201491352A1 publication Critical patent/EA201491352A1/ru
Publication of EA034414B1 publication Critical patent/EA034414B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/14—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for lactation disorders, e.g. galactorrhoea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3015—Breast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

В изобретении на клетки рака молочной железы, у которых отсутствует экспрессия белка ER, экспрессия белка PgR и/или которые демонстрируют отсутствие избыточной экспрессии белка HER2 (т.е. клетки тройного негативного рака молочной железы, базальноподобные), может быть эффективно нацелено антитело к KAAG1, причем указанные клетки уничтожаются вследствие доставки терапевтической частицы. Антитела и антиген-связывающие фрагменты, которые специфически связываются с KAAG1, таким образом могут быть применены для обнаружения и терапевтического лечения клеток рака молочной железы, являющихся негативными по меньшей мере для одного из этих маркеров. В изобретении раскрыто применение конъюгатов антитела в лечении тройного негативного рака молочной железы и/или базальноподобного рака молочной железы.

Description

Предпосылки изобретения
Ежегодно во всем мире диагноз рак молочной железы ставят более чем 1 млн женщин. Рак молочной железы (РМЖ) представляет собой одно из самых гетерогенных заболеваний, состоящее из десятков различных типов рака, которые различают, используя гистологическую систему классификации. Обширный подтип и большинство случаев РМЖ гистологически определяются как люминальный А и люминальный В, которые в общем могут быть охарактеризованы наличием экспрессии рецептора эстрогена (ER) с низкой степенью или более высокой степенью гистологической злокачественности соответственно (Santana-Davila and Perez, 2010). Для измерения экспрессии рецептора прогестерона (PgR) используют иммуногистохимические способы, которые в сочетании с положительным статусом ER позволяют классифицировать опухоль как гормонозависимую. Кроме того, за избыточной экспрессией или усилением рецептора человеческого эпидермального фактора роста 2 (HER2) можно наблюдать либо с помощью иммуногистохимического анализа, либо методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Обычно экспрессию этих трех маркеров в опухолях молочной железы связывают с более благоприятным клиническим результатом, поскольку в данном случае для таких пациентов подходят несколько вариантов лечения, нацеленных на эти белки (de Ruijter et al., 2011), среди них тамоксифен, Arimidex™ (анастрозол), Aromasin™ (экземестан), Femara™ (летрозол), Faslodex™ (фулвестрант), Herceptin™ (трастузумаб) или Tykerb™ (лапатиниб).
Другой гистологический подтип РМЖ включает базальноподобные опухоли, которые характеризуются, среди прочего, более высокой степенью гистологической злокачественности, повышенным митотическим индексом и высокой экспрессией Ki67 (Santana-Davila and Perez, 2010). Подавляющее большинство базальноподобных опухолей состоят из тройного негативного РМЖ (ТНРМЖ), который составляет 15-20% от всех диагностируемых случаев РМЖ (Ismail-Khan and Bui, 2010). ТНРМЖ определяется по малому уровню экспрессии белка ER, PgR и отсутствию избыточной экспрессии белка HER2. Взаимосвязь между базальноподобными опухолями и ТНРМЖ просматривается не столь легко, поскольку не все ТНРМЖ являются базальноподобными, и не все базальноподобные опухоли представляют собой ТНРМЖ, но примерно 75% случаев в этих категориях разделяют признаки как тех, так и других. ТНРМЖ ассоциируется с плохим прогнозом в отношении 5-летней выживаемости и высокой вероятностью рецидива.
У пациентов с ТНРМЖ болезнь развивается в более раннем возрасте, чем в случае других подтипов РМЖ, и часто диагностируется в предклимактерическом периоде (Carey et al., 2006). Тройной отрицательный рак молочной железы демонстрирует повышенную склонность к рецидиву после лечения и, повидимому, является более агрессивным, чем другие подтипы карциномы молочной железы (NofechMozes et al., 2009), как и в случае подтипа базальноподобного рака молочной железы. Соответственно общая 5-летняя выживаемость пациентов с ТНРМЖ является значительно более низкой, чем у пациентов с установленными диагнозами других подтипов рака молочной железы. В настоящий момент не существует принятого специфического молекулярного маркера для ТНРМЖ. Несмотря на отсутствие такового, эти опухоли все же реагируют на химиотерапию (Kriege et al., 2009). Пациенты демонстрировали более хороший ответ на цитотоксические агенты при адьюватноной терапии, как и при неоадьювантной терапии, при введении таких агентов, как 5-фторурацил, доксорубицин и циклофосфамид (Rouzier et al. 2005). Другие агенты, продемонстрировавшие определенную эффективность, включают соединения на основе платины, такие как соединения цисплатин и анти-тубулин, например таксаны (Santana-Davila and Perez, 2010).
Как упоминалось ранее, специфические мишени для ТНРМЖ не существуют, но это не препятствовало испытанию нацеленных агентов, например ингибирования поли[АДФ-рибоза]полимеразы 1 (PARP1). PARP1 представляет собой фермент, который участвует в рапарации однонитиевых разрывов ДНК путем ассоциации с поврежденными нитями и является посредником в вовлечении ферментов, необходимых для репарации однонитиевых разрывов (de Ruijter et al., 2011). Таким образом, стратегия состояла в том, чтобы ингибировать активность PARP1 как средства, позволяющего раковым клеткам накапливать все больше однонитиевых разрывов ДНК, которые в конечном итоге приводят к генетической нестабильности, остановке митотической активности и апоптозу. Перспективные клинические результаты были получены у пациентов, которые показали мутации в BRCA1 и/или BRCA2 - важных медиаторах поддержания стабильности генов и гомологичной рекомбинации, необходимых для правильного деления клеток. Действительно, пациенты с мутациями в BRCA1, которые скорее всего испытывают недостаточность в генетической стабильности метаболических путей, демонстрировали более сильную реакцию на ингибиторы PARP1 по сравнению с теми пациентами, для которых взаимосвязь с BRCA1 была дикого типа (Fong et al.,2009). Ясно, что нацеливание на PARP1 у пациентов с ТНРМЖ, которые являются носителями мутаций BRCA, представляет собой перспективную стратегию. Сочетание ER/PgR/HER2 статуса со статусом генетического профиля генов BRCA1/2 может предоставить наилучшую информацию для принятия решения в отношении соответствующих вариантов лечения пациентов с ТНРМЖ.
Другие стратегии также рассматривали применение ингибиторов EGFR либо в качестве моноклональных антител, либо как малых молекул или анти-ангиогенных соединений для нацеливания на VEGF.
- 1 034414
Несколько клинических исследования произвели оценку действенности этих соединений, но ни одно из них не показало значительного ответа при введении исключительно только этих соединений. Однако небольшую действенность наблюдали у пациентов, получавших лечение этими ингибиторами в комбинации с другими цитотоксическими средствами (Santana-Davila and Perez, 2010).
Несмотря на последние достижения в понимании и лечении РМЖ, применение химиотерапии неизменно связано с тяжелыми нежелательными реакциями, которые ограничивают ее применение. В результате, необходимость в более специфических подходах, таких как сочетание антигенной тканевой специфичности с избирательностью моноклональных антител должно обеспечить значительное уменьшение побочных эффектов, связанных с нецелевым воздействием. Не существует антигенов, специфических для ТНРМЖ, которые на данный момент изучают в качестве терапевтических мишеней для моноклональных антител. Так, для пациентов с ТНРМЖ существует немного вариантов, поскольку нет возможности нацеливания на специфический маркер белка, который экспрессируется в этих опухолях. Существует срочная потребность в идентификации новых белков, экспрессируемых при ТНРМЖ для применения в качестве новых диагностических маркеров и новых направленных (таргетных) терапий.
Ассоциированный с почками антиген 1 (KAAG1), белковая последовательность которого приведена здесь как SEQ ID NO: 2, изначально клонировали из библиотеки кДНК, полученной из линии клеток гипернефромы с антигеном В7 главного комплекса гистосовместимости, в качестве антигенного пептида, презентируемого цитотоксическим Т-лимфоцитам (Van den Eynde et al., 1999; инвентарный номер в Genebank Q9UBP8, кДНК последовательность представлена нуклеотидами 738-992 последовательности SEQ ID NO: 1). Было обнаружено, что локус, содержащий KAAG1 кодирует два гена, транскрибируемые в обоих направлениях на противоположных цепях ДНК. Было обнаружено, что смысловая цепь кодирует транскрипт, который кодирует белок под названием DCDC2. При исследовании экспрессии авторами настоящего изобретения было обнаружено, что антисмысловой транскрипт KAAG1 был опухольспецифичным и демонстрировал очень небольшую экспрессию в нормальных тканях, тогда как смысловой транскрипт DCDC2 экспрессируется повсеместно (Van den Eynde et al., 1999). Экспрессия транскрипта KAAG1 при раке, в частности при карциноме яичников, раке почек, раке легких, раке толстой кишки, раке молочной железы и меланоме раскрыта в международной заявке № РСТ/СА2007/001134, опубликованной 27 декабря 2007 г. под номером WO 2007/147265. Van den Eynde et al. также наблюдали экспрессию РНК при гипернефромах, колоректальных карциномах, меланомах, саркомах, лейкозах, опухолях головного мозга, опухолях щитовидной железы, карциномах молочной железы, карциномах предстательной железы, карциномах пищевода, опухолях мочевого пузыря, карциномах легких и опухолях головы и шеи. Недавно, в результате исследований неравновесного сцепления было получено убедительное генетическое доказательство, демонстрирующее, что локус VMP/DCDC2/KAAG1 ассоциирован с дислексией (Schumacher et al., 2006; Соре et al., 2005). Одно из этих сообщений было посвящено маркеру DCDC2 в качестве причины, вызывающей дислексию у пациентов, поскольку функция этого белка в миграции кортикальных нейронов согласовывалась с симптомами у этих пациентов, у которых часто проявлялись атипичная миграция и созревание нейронов (Schumacher et al., 2006).
Заявитель получил ряд антител и антиген-связывающий фрагмент, которые связываются с белком KAAG1. Было показано, что эти антитела или антиген-связывающие фрагменты нацелены на три участка белка: аминокислоты 1-35, аминокислоты 36-60 и аминокислоты 61-84. Заявитель обнаружил, что антитела, нацеленные на участок между аминокислотами 30-84, были наиболее полезными для терапевтических целей, поскольку они распознавали KAAG1, расположенный на поверхности клеток опухоли. Заявитель показал, что некоторые из этих антител и антиген-связывающих фрагментов могут служить посредниками при антитело-зависимой клеточной цитотоксичности и/или интернализуются в клетки опухоли, что делает их хорошими кандидатами для доставки полезного груза в клетки опухоли. Заявитель также получил химерные и гуманизированные антитела, основанные на отобранных антителахкандидатах, и показал, что эти антитела могут ингибировать образование клеток опухоли и их инвазивность (см. РСТ/СА2009/001586, опубликованную 3 июня 2010 г. под номером WO2010/060186, и РСТ/СА2010/001785, опубликованную 12 мая 2011 г. под номером WO2011/054112). Наконец, заявитель обнаружил, что эти антитела могут быть применены для лечения и диагностики рака яичников, рака кожи, рака почек, колоректального рака, саркомы, лейкоза, опухоли головного мозга, опухоли щитовидной железы, рака молочной железы, рака простаты, опухоли пищевода, опухоли мочевого пузыря, опухоли легких и опухоли головы и шеи.
Заявитель сделал неожиданное открытие от том, что антитело или антиген-связывающий фрагмент, которые специфически связываются с KAAG1, могут быть эффективно нацелены на клетки рака молочной железы, у которых отсутствует экспрессия белка ER, экспрессия белка PgR и/или которые демонстрируют отсутствие избыточной экспрессии белка HER2 (т.е. клетки тройного негативного рака молочной железы, базальноподобные). Анти-KAAG1 антитела, таким образом, могут быть применены для обнаружения и терапевтического лечения клеток рака молочной железы, являющихся негативными для по меньшей мере одного из этих маркеров.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1а показано выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельных доменов
- 2 034414
3A4 мышиных и гуманизированных легких цепей. Легкая цепь имеет два гуманизированных варианта (Lh1 и Lh2). CDR показаны жирным и обозначены CDRL1, CDRL2 и CDRL3. Обратные мутации в каркасных участках человека, которые являются мышиными аминокислотами, подчеркнуты в гуманизированных последовательностях.
На фиг. 1b показано выравнивание аминокислотных последовательностей вариабельных доменов 3A4 мышиных и гуманизированных тяжелых цепей. Тяжелая цепь имеет четыре гуманизированных варианта (Hh1 - Hh4). CDR показаны жирным и обозначены CDRH1, CDRH2 и CDRH3. Обратные мутации в каркасных участках человека, которые являются мышиными аминокислотами, подчеркнуты в гуманизированных последовательностях.
На фиг. 2а показано выравнивание вариабельного участка легкой цепи 3A4 мыши (SEQ ID NO: 4) с вариантом вариабельного участка легкой цепи (SEQ ID NO: 33) при помощи программы ClustalW2 (Larkin M.A., et al., (2007) ClustalW и ClustalX версия 2. Bioinformatics 2007 23(21): 2947-2948), в которой * (звездочка) указывает на положения, которые имеют отдельный, полностью сохраненный остаток, где : (двоеточие) указывает на консервативность между группами с сильно схожими свойствами - подсчет >0,5 по матрице Gonnet РАМ 250 и где . (точка) обозначает консервативность между группами с мало схожими свойствами - подсчет = <0,5 по матрице Gonnet РАМ 250.
На фиг. 2b показано выравнивание вариабельного участка тяжелой цепи 3A4 мыши (SEQ ID NO: 2) с вариантом вариабельного участка легкой цепи (SEQ ID NO: 38) при помощи программы ClustalW2 (Larkin M.A., et al., (2007) ClustalW и ClustalX версия 2. Bioinformatics 2007 23(21): 2947-2948), в которой * (звездочка) указывает на положения, которые имеют отдельный, полностью сохраненный остаток, где : (двоеточие) указывает на консервативность между группами с сильно схожими свойствами - подсчет >0,5 по матрице Gonnet РАМ 250 и где . (точка) обозначает консервативность между группами с мало схожими свойствами - подсчет = <0,5 по матрице Gonnet РАМ 250.
На фиг. 3a представлена карта плазмиды pKCR5-3A4-HC-Variant 1. Тяжелые цепи гуманизированных вариантов 3A4 клонировали таким же образом в сайт Hind III pK-CR5. Следовательно, полученные в результате плазмиды идентичны pKCR5-3A4-HC-Variant 1, за исключением последовательности вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина.
На фиг. 3b представлена карта плазмиды pKCR5-3A4-HC-Variant 1. Легкие цепи гуманизированных вариантов 1 и 2 антитела 3A4 клонировали таким же способом в сайт BamHI pMPG-CR5. Следовательно, полученная в результате плазмида идентична pMPG-CR5-3A4-LC-Variant 1 за исключением последовательности вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина.
На фиг. 4 представлен анализ получения антитела после временной трансфекции в клетках CHO. Надосадочная жидкость (13 дней после трансфекции) клеток CHOcTA, трансфицированных различными комбинациями легких или тяжелых цепей гуманизированного антитела 3A4, проанализировали при помощи вестерн-блоттинга. Количественный анализ антитела, полученного в супернатантах, определяли после сканирования пучков вестерн-блоттинга по сравнению с разбавлением известного стандарта (очищенного антитела IgG человека). Mr - маркер молекулярного веса (кДа).
На фиг. 5 представлен график результатов гель-фильтрации в Superdex G75 образца рекомбинантного KAAG1. KAAG1 впрыскивали над гель-фильтрацией и разделяли со скоростью 0,4 мл/мин. Наибольший пик находится между фракциями 15-19.
На фиг. 6 представлена таблица, в которой перечислены константы скорости и аффинности для мышиных и гуманизированных вариантов антитела 3A4.
На фиг. 7а изображена гистограмма, иллюстрирующая скорости ассоциаций (Ka) гуманизированных антител.
На фиг. 7b изображена гистограмма, иллюстрирующая скорости диссоциаций (Kd) гуманизированных антител.
На фиг. 7c изображена гистограмма, иллюстрирующая константы афинности (KD) гуманизированных антител.
На фиг. 8a проиллюстрировано связывание вариантов гуманизированного 3A4 с KAAG1 в ИФА тесте (ELISA). Этот чертеж демонстрирует сравнительное связывание вариантов гуманизированного антитела 3A4 и мышиного 3A4. Графики связывания в зависимости от концентрации гуманизированных тяжелых цепей (Hh1, Hh2, Hh3 и Hh4), объединенных с вариантом легкой цепи Lh1.
На фиг. 8b проиллюстрировано связывание вариантов гуманизированного 3A4 с KAAG1 в ИФА тесте. Этот чертеж демонстрирует сравнительное связывание вариантов гуманизированного антитела 3A4 и мышиного 3A4. Графики связывания в зависимости от концентрации гуманизированных тяжелых цепей (Hh1, Hh2, Hh3 и Hh4), объединенных с вариантом легкой цепи Lh2.
На фиг. 9 проиллюстрировано связывание вариантов гуманизированного 3A4 с KAAG1 на поверхности раковых клеток. На данной иллюстрации продемонстрирована сравнительная связывающая активность гуманизированных и мышиных антител 3A4 на непермеабилизированных клетках карциномы яичника SKOV-3.
На фиг. 10 показан результат сканирования микрочипа тканей, содержащий 139 образцов биопсии, полученных от пациентов с РМЖ. Образцы блоттировали, используя антитело 3A4 к KAAG1, было пока- 3 034414 зано, что огромное большинство опухолей молочной железы экспрессировали антиген KAAG1 очень в большом количестве. Образцы с подтвержденным ТНРМЖ помечены звездочкой.
На фиг. 11 показаны результаты проточной цитометрии, проведенной с использованием клеточных линий MDA-MB-231, MDA-МВ-436, MDA-MB-468, BT-20, BT-549, T47D, MCF-7 и 293-6Е, инкубированных с антителом 3A4 к KAAG1 (синие столбцы на гистограмме) в сравнении с контрольным образцом IgG (красные столбцы). Это представительные результаты эксперимента, который проводили сериями из трех. Клеточные линии ТНРМЖ помечены звездочкой.
На фиг. 12 представлено обнаружение антигена KAAG1 на поверхности клеток MDA-MB-231 при помощи проточной цитометрии с антителом 3A4 к KAAG1. Флуоресцентный сигнал снижается со временем при инкубации клеток при 37°С, что свидетельствует о том, что комплекс KAAG1/антитело интернализировался в ходе инкубирования при инкубации клеток с 3A4.
На фиг. 13 представлено обнаружение антигена KAAG1 на поверхности клеток MDA-MB-436 при помощи проточной цитометрии с антителом 3A4 к KAAG1. Флуоресцентный сигнал снижается со временем при инкубации клеток при 37°С, что свидетельствует о том, что комплекс KAAG1/антитело интернализировался в ходе инкубирования при инкубации клеток с 3A4.
На фиг. 14 представлено обнаружение антигена KAAG1 на поверхности клеток MDA-MB-436 при помощи проточной цитометрии с антителом 3A4 к KAAG1. Флуоресцентный сигнал снижается со временем при инкубации клеток при 37°С, что свидетельствует о том, что комплекс KAAG1/антитело интернализировался в ходе инкубирования при инкубации клеток с 3A4.
На фиг. 15 представлено обнаружение антигена KAAG1 на поверхности клеток T47D при помощи проточной цитометрии с антителом 3A4 к KAAG1. Флуоресцентный сигнал снижается со временем при инкубации клеток при 37°С, что свидетельствует о том, что комплекс KAAG1/антитело интернализировался в ходе инкубирования при инкубации клеток с 3A4.
На фиг. 16 представлены иммунофлуоресцентные данные, полученные на живых клетках MDAMB-231 с антителом 3A4 к KAAG1 и антителом к LAMP1. Иммунофлуоресцентный сигнал, связанный с антителом к KAAG1, показан на чертеже слева, иммунофлуоресцентный сигнал, связанный с антителом к LAMP1, показан на чертеже в центре, и совмещенное изображение их обоих показано на чертеже справа. Эти данные иллюстрируют совместную локализацию KAAG1 и LAMP1 рядом с околоядерной областью.
На фиг. 17 представлены иммунофлуоресцентные данные, полученные на живых клетках MDAMB-231 с антителом 3A4 к KAAG1 и антителом к LAMP1. Иммунофлуоресцентный сигнал, связанный с антителом к KAAG1, показан на чертеже слева, иммунофлуоресцентный сигнал, связанный с антителом к LAMP1, показан на чертеже в центре, и совмещенное изображение их обоих показано на чертеже справа. Эти данные иллюстрируют локализацию KAAG1 с LAMP1 - маркером поздних эндосом/лизосом.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение предлагает способ лечения или обнаружения рака или раковых клеток (in vitro или in vivo) у субъектов, нуждающихся в этом.
В соответствии с настоящим изобретением способы лечения или обнаружения можно осуществлять с помощью антитела, способного связываться с KAAG1, или связывающего фрагмента его антигена.
Нуждающееся лицо может представлять собой, например, лицо, у которого обнаружен рак или есть подозрение на рак. Рак или раковые клетки у такого лица могут происходить из карциномы молочной железы.
Рак или раковые клетки более конкретно могут происходить из карциномы молочной железы, охарактеризованной как тройная негативная или базальноподобная опухоль.
По этой причине лица, которые могут получить пользу от способов лечения или обнаружения данного документа, могут включать тех, у кого выявлена карцинома молочной железы.
Карцинома молочной железы может представлять собой клетки опухоли, которые демонстрируют уменьшение или потеря экспрессии рецептора эстрогена.
Карцинома молочной железы может представлять собой клетки опухоли, которые демонстрируют уменьшение или потеря экспрессии рецептора прогестерона.
Карцинома молочной железы может представлять собой клетки опухоли, которые демонстрируют уменьшение или потеря экспрессии Her2.
Карцинома молочной железы может представлять собой клетки опухоли, которые демонстрируют уменьшение или потеря избыточной экспрессии Her2.
Более конкретно карцинома молочной железы может представлять собой клетки опухоли, демонстрирующие либо 1) уменьшение или потерю экспрессии рецептора эстрогена и рецептора прогестерона, 2) уменьшение или потерю экспрессии рецептора эстрогена и уменьшение или потерю избыточной экспрессии Her2, 3) уменьшение или потерю экспрессии рецептора прогестерона и уменьшение или потерю избыточной экспрессии Her2 или 4) уменьшение или потерю экспрессии рецептора эстрогена, уменьшение или потерю экспрессии рецептора прогестерона и уменьшение или потерю избыточной экспрессии Her2.
Еще более конкретно карцинома молочной железы может представлять собой клетки опухоли, де- 4 034414 монстрирующие либо 1) потерю экспрессии рецептора эстрогена и рецептора прогестерона, 2) потерю экспрессии рецептора эстрогена и потерю экспрессии Her2, 3) потерю экспрессии рецептора прогестерона и потерю экспрессии Her2 или 4) потерю экспрессии рецептора эстрогена, потерю экспрессии рецептора прогестерона и потерю экспрессии Her2.
В соответствии с настоящим изобретением данное лицо может иметь клетки РМЖ, которые охарактеризованы как тройные негативные, или может иметь опухоль, которая охарактеризована как тройной негативный РМЖ.
В соответствии с настоящим изобретением данное лицо может иметь клетки РМЖ, которые охарактеризованы как базальноподобные, или может иметь опухоль, которая охарактеризована как базальноподобный РМЖ.
Другими лицами, которые получат пользу от лечения анти-KAAG1, являются те, у которых выявлена карцинома, содержащая клетки опухоли с переходным эпителиально-мезенхимальным (ЕМТ) фенотипом.
Широко используемыми молекулярными маркерами ЕМТ являются, например, сниженная экспрессия Е-кадгерина, цитокератина и β-катенина (в мембране) и/или повышенная экспрессия Snail, Slug, Twist, ZEB1, ZEB2, N-кадгенира, виментина, α-актина гладких мышц, матричных металлопротеиназ и т.д. (см., например, Kalluri and Weinberg, The Journal of Clinical Investigation, 119(6), p. 1420-1428; 2009; Fassina et al., Modern Pathology, 25; p. 86-99; 2012; Lee et al., JCB; 172; p. 973-981; 2006). ЕМТ фенотип можно также различить по его повышенной способности к миграции, инвазивности или по устойчивости к аноикозу/апоптозу. Клетки, находящиеся в процессе эпитально-месенхимального перехода, можно, таким образом, обнаружить благодаря уменьшению эпитальных маркеров и появлению месенхимальных маркеров или ЕМТ фенотипа.
В соответствии с настоящим изобретением способ может включать, например, введение нуждающемуся в этом лицу антитела или антиген-связывающего фрагмента, который способен специфично связываться с KAAG1. Нуждающееся лицо предпочтительно отбирают на основании отсутствия у их опухоли экспрессии ER, экспрессии PgR и/или отсутствию избыточной экспрессии белка HER2. Клинические исследования этих маркеров обычно проводят, используя гистопатологические способы (иммуногистохимические, FISH и т.п.), и/или путем изучения экспрессии генов (см., например, Dent et al, 2007, Bernstein and Lacey, 2011). Нуждающимся лицом, таким образом, может быть лицо, у которого был установлен диагноз тройного негативного РМЖ или базальноподобного РМЖ. Нуждающееся лицо может быть лицом, у которого не наблюдается ответ на гормональную терапию и/или на лечение транстузумабом (или другими антителами к Her2). Альтернативно, нуждающееся лицо может быть лицом, имеющим клетки опухоли, которые способны к эпитально-мезенхимальному переходу или которые приобрели мезенхимальный фенотип.
Настоящее изобретение, таким образом, предлагает способ лечения тройного негативного РМЖ или базальноподобного РМЖ путем введения ингибитора активности или экспрессии KAAG1 нуждающемуся лицу.
В соответствии с настоящим изобретением ингибитор KAAG1 может, таким образом, включать антитело, описанное в данном документе, или его антиген-связывающий фрагмент.
Также в соответствии с настоящим изобретением ингибитор KAAG1 может включать нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID NO: 1 или ее фрагменту. Более конкретно ингибитор KAAG1 может включать нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеотидам 738-992 (включительно) последовательности SEQ ID NO: 1 или ее фрагменту. Например, ингибитор может включать по меньшей мере 10 последовательных нуклеотидов (по меньшей мере 15, по меньшей мере 20), комплементарных последовательности SEQ ID NO: 1 или нуклеотидам 738-992 (включительно) последовательности SEQ ID NO: 1. Более конкретно тип ингибитора KAAG1 включает миРНК, которая демонстрирует экспрессию последовательности SEQ ID NO: 1.
Подходящие антитела или антиген-связывающие фрагменты включают те, которые способны связываться с KAAG1 на поверхности клеток опухоли. Такие антитела или их антиген-связывающие фрагменты могут предпочтительно связываться с эпитопом, находящимся в KAAG1 в пределах аминокислот с 30 по 84 включительно.
Альтернативно, такие антитела или их антиген-связывающие фрагменты могут связываться с эпитопом, расположенным в KAAG1 в пределах аминокислот 36-60 (включительно) или в пределах аминокислот 61-84 (включительно).
Эпитоп может быть, в частности, расположен или заключен в пределах аминокислот 50-70, 50-65, 51-65, 52-65, 53-65, 54-65, 54-64, 54-63, 54-62, 54-61, 54-60, 50-62; 50-61 или 50-60 (включительно или исключительно).
В соответствии с вариантом осуществления данного изобретения антитело или их антигенсвязывающий фрагмент может связываться с эпитопом, содержащимся в KAAG1 в пределах аминокислот 50-70.
В дополнительном варианте осуществления данного изобретения антитело или их антиген- 5 034414 связывающий фрагмент может связываться с эпитопом, содержащимся в KAAG1 в пределах аминокислот 50-62.
В еще одном дополнительном варианте осуществления данного изобретения антитело или их антиген-связывающий фрагмент может связываться с эпитопом, содержащимся в KAAG1 в пределах аминокислот 54-65.
Подходящие антитела для терапевтического лечения включают, например, те, которые выступают посредниками в антитело-зависимой клеточной цитотоксичности.
Другие даже более подходящие антитела для терапевтического лечения включают антитела с присоединенным к ним терапевтическим фрагментом.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут быть, например, моноклональным антителом, химерным антителом, гуманизированным антителом, антителом человека или их антигенсвязывающим фрагментом.
Подробное описание изобретения
Способ лечения.
Как указано в данном документе, настоящее изобретение включает введение антитела или антигенсвязывающего фрагмента лицу, страдающему от РМЖ, который охарактеризован как тройной негативный РМЖ или базальноподобный РМЖ.
Классификация подтипов РМЖ как тройного негативного РМЖ или базальноподобного РМЖ известна в уровне техники (см., например, Foulkes et al., N. Engl. J. Med., 2010; 363:1938-1948) и включает, например, следующие определения.
Базальноподобный РМЖ может включать, например, подтип РМЖ, заключающий в себе гетерогенную группу опухолей, характеризующихся отсутствием или низким уровнем экспрессии рецепторов эстрогена, очень низкой распространенностью избыточной экспрессии Her2 и экспрессией генов, которые обычно наблюдают в базальных или миоэпителиальных клетках молочной железы человека. Такую экспрессию можно определить с помощью микрочипового анализа.
Тройной негативный РМЖ может включать, например, опухоль, характеризующуюся отсутствием рецептора эстрогена (ER), рецептора прогестерона (PR) и экспрессии Her2. Некоторые исследователи относят опухоли к негативным с точки зрения экспрессии ER или PR лишь при наличии менее чем 1% позитивных с точки зрения экспрессии ER или PR клеток; другие считают опухоли негативными с точки зрения экспрессии ER или PR, если вплоть до 10% клеток являются позитивными с точки зрения экспрессии. Другие определения были использованы для HER2-негативности. Два из наиболее часто применяемых включают опухоли с иммуногистохимической оценкой, равной 0/1 + или 2+, у которых отсутствует амплификация гена HER2 после гибридизации in situ. Такую экспрессию можно особенно определить с помощью иммуногистохимического окрашивания.
В соответствии с настоящим изобретением способ лечения включает введение ингибитора KAAG1 нуждающемуся в этом лицу. Такой ингибитор KAAG1 включает, например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связываются с KAAG1.
Скорее всего, наиболее сильнодействующими антителами или антиген-связывающие фрагментами будут те, которые обладают высокой аффинностью к KAAG1. Также скорее всего, что наиболее сильнодействующими антителами или антиген-связывающие фрагментами будут те, которые интернализуются в такие отделы клетки, как, например, лизосома или эндосома.
Как таковое, настоящее изобретение особенно охватывает антитела или антиген-связывающие фрагментами, которые обладают высокой аффинностью к KAAG1.
Подходящие антитела или антиген-связывающие фрагменты включают те, которые способны связываться с KAAG1 на поверхности клеток опухоли с высокой аффинностью. Такие антитела или их антиген-связывающие фрагменты с высокой аффинностью могут предпочтительно связываться с эпитопом, находящимся в KAAG1 в пределах аминокислот с 30 по 84 включительно.
Альтернативно, такие антитела или их антиген-связывающие фрагменты с высокой аффинностью могут связываться с эпитопом, расположенным в KAAG1 в пределах аминокислот 36-60 (включительно) или в пределах аминокислот 61-84 (включительно).
Антитела или их антиген-связывающие фрагменты с высокой аффинностью могут связываться, например, с эпитопом, который может быть, в частности, расположен или заключен в пределах аминокислот 50-70, 50-65, 51-65, 52-65, 53-65, 54-65, 54-64, 54-63, 54-62, 54-61, 54-60, 50-62; 50-61 или 50-60 (включительно или исключительно).
В соответствии с вариантом осуществления данного изобретения антитело или их антигенсвязывающий фрагмент с высокой афинностью может связываться с эпитопом, содержащимся в KAAG1 в пределах аминокислот 50-70.
В дополнительном варианте осуществления данного изобретения антитело или их антигенсвязывающий фрагмент с высокой афинностью может связываться с эпитопом, содержащимся в KAAG1 в пределах аминокислот 50-62.
В еще одном дополнительном варианте осуществления данного изобретения антитело или их антиген-связывающий фрагмент с высокой афинностью может связываться с эпитопом, содержащимся в
- 6 034414
KAAG1 в пределах аминокислот 54-65.
Предпочтительными антителами, включая антитела с высокой афинностью, являются те антитела, которые могут интернализоваться в клетку или отделы клетки (например, лизосомы или эндосомы). Способность антител к интернализации можно определить с помощью такого известного в уровне техники способа, как, например, и без ограничения, исследования с помощью иммунофлюоресценции, аналогичные тем, которые выполняются в данном документе.
Антитела с CDRs, идентичными таковым антител 3A4, особым образом охвачены настоящим изобретением. Как таковые, антитела, имеющие консенсусные последовательности с вариабельным участком легкой цепи и/или вариабельным участком тяжелой цепи, приведенные в любой из SEQ ID NOs: 186188 и 191-193, и специфические последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 46, 48, 189, 190 или 194-198, охвачены настоящим изобретением.
Среди них антитела, имеющие консенсусные последовательности с вариабельным участком легкой цепи и/или вариабельным участком тяжелой цепи, приведенные в любой из SEQ ID NO: 188 и 196, или специфические последовательности, приведенные в SEQ ID NO: 46, 48, 189, 190 или 194-198, представляют особый интерес.
К антителам или их антиген-связывающим фрагментам предпочтительно можно присоединять терапевтические фрагменты.
Антитела или их антиген-связывающие фрагменты могут иметь константный участок человека. Предпочтительно антитела или их антиген-связывающие фрагменты могут иметь константный участок IgG1 человека. Альтернативно, антитела или их антиген-связывающие фрагменты могут иметь константный участок IgG2 человека.
Способ настоящего изобретения может также включать введение ингибитора KAAG1, такого как антитело (например, с присоединенным терапевтическим фрагментом) или антиген-связывающий фрагмент в комбинации с противораковым средством, таким как, например, лекарство на основе малой молекулы, антитела или антиген-связывающего фрагмента, связывающегося с целью, отличной от KAAG1, химиотерапевтического или цитотоксического агента. Пример противоракового средства, которое можно вводить с ингибитором KAAG1, может включать, например, доксорубицин, таксаны, антиангиогенные средства, соли платины, ингибиторы PARP.
Другие способы лечения, охваченные настоящим изобретением, включают введение других типов ингибиторов KAAG1, таких как терапевтические средства на антисмысловой основе (миРНК, антисмысловые средства, рибозимы и т.п.).
Антитела и антиген-связывающие фрагменты, которые связываются с KAAG1.
Термин антитело или антиген-связывающий фрагмент или сходные с ним термины, такие как антитела или антиген-связывающие фрагменты, охватывают, например, вариантное антитело или антиген-связывающий фрагмент, такой как, например, гуманизированное антитело или антигенсвязывающий фрагмент.
Термин антитело относится к интактному антителу, моноклональным или поликлональным антителам. Термин антитело также охватывает мультиспецифические антитела, такие как биспецифические антитела. Антитела человека обычно состоят из двух легких цепей и двух тяжелых цепей, каждая из которых содержит вариабельные участки и константные участки. Вариабельный участок легкой цепи содержит 3 CDR, обозначенные в данном документе как CDRL1, CDRL2 и CDRL3, фланкированные каркасными участками. Вариабельный участок тяжелой цепи содержит 3 CDR, обозначенные в данном документе как CDRH1, CDRH2 и CDRH3, фланкированные каркасными участками.
Термин антиген-связывающий фрагмент, применяемый в данном документе, относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность связываться с антигеном (например, KAAG1, секретируемой формой KAAG1 или его вариантами). Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может осуществляться фрагментами интактного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином антиген-связывающий фрагмент антитела, включают (i) Fab фрагмент, моновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (ii) F(ab')2 фрагмент, бивалентный фрагмент, содержащий два Fab фрагмента, соединенные дисульфидным мостиком в шарнирном участке; (iii) Fd фрагмент, состоящий из доменов VH и CH1; (iv) Fv фрагмент, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела, (v) dAb фрагмент (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), который состоит из домена VH; и (vi) выделенный определяющий комплементарность участок (CDR), например VH CDR3. Кроме того, несмотря на то что два домена Fv фрагмента, VL и VH, кодированы раздельными генами, они могут быть соединены с использованием рекомбинантных способов, при помощи синтетического линкера, который позволяет им быть сконструированными в качестве отдельной полипептидной цепи, в которой пара участков VL и VH соединяются с образованием моновалентных молекул (известных как отдельная цепь Fv (scFv); см., например, Bird et al. (1988) Science 242:423-426; и Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Предполагается, что такие одноцепочечные антитела также охватываются термином антиген-связывающий фрагмент антитела. Кроме того, антиген-связывающие фрагменты включают химерные белки иммуноглобулинов со связывающим доменом, содержащие (i) полипептид со связывающим доменом (как, например, вариабельный участок тяжелой цепи, вариабель
- 7 034414 ный участок легкой цепи или вариабельный участок тяжелой цепи, слитый с вариабельным участком легкой цепи посредством линкерного пептида), который слит с полипептидом с шарнирным участком иммуноглобулина, (ii) константный участок CH2 тяжелой цепи иммуноглобулина, слитый с шарнирным участком, и (iii) константный участок CH3 тяжелой цепи иммуноглобулина, слитый с константным участком CH2. Шарнирный участок может быть модифицирован при помощи замены одного или нескольких цистеиновых остатков на сериновые остатки для предупреждения димеризации. Такие гибридные белки иммуноглобулинов со связывающим доменом дополнительно раскрыты в публикациях US 2003/0118592 и US 2003/0133939. Эти фрагменты антител получают, используя традиционные методики, известные специалистам в данной области техники, и подвергают скринингу на пригодность таким же образом, как и интактные антитела.
Обычный сайт связывания антигена находится в составе вариабельных участков, сформированных путем спаривания иммуноглобулина легкой цепи и иммуноглобулина тяжелой цепи. Структура вариабельных участков антитела является очень устойчивой и демонстрирует очень сходные структуры. Такие вариабельные участки обычно содержат сравнительно гомологичные каркасные участки (FR), прерываемые тремя гипервариабельными участками, которые называются участками, определяющими комплементарность (CDR). Общая связывающая активность антиген-связывающего фрагмента часто обуславливается последовательностью CDR. FR часто играют некоторую роль в точном моделировании и выравнивании CDR по трем измерениям для оптимального связывания антигена.
Как используется в данном документе, термин высокая афинность относится к аффинности, равной 10 нМ или менее.
Термин высокая аффинность в особенности включает антитела, обладающие аффинностью, равной 5 нМ или менее. Термин высокая аффинность еще более конкретно включает антитела, обладающие аффинностью, равной 1 нМ или менее или равной 0,1 нМ или менее.
Антитела и/или антиген-связывающие фрагменты настоящего изобретения могут происходить, например, от мыши, крысы или другого млекопитающего или от других источников, как, например, получаемые посредством методик рекомбинантной ДНК.
Антитела изначально были выделены из Fab-библиотек по их специфичности к представляющему интерес антигену. В данном документе приведены иллюстративные способы превращения Fab в полные иммуноглобулины.
Можно проводить слияние вариабельных участков антител, описанных в данном документе, с константными участками требуемых видов, таким образом делая возможным распознавание антитела эффекторными клетками требуемых видов. Константный участок может происходить, например, от подтипа IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Клонирование или синтез константного участка в рамке с вариабельным участком хорошо известны специалисту в данной области и могут быть осуществлены, например, при помощи методики рекомбинантной ДНК.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения связывающиеся смKAAG1 антитела могут относиться к подтипу IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Более определенные варианты осуществления изобретения относятся к антителу подтипа IgG1 или особенно человеческого антитела подтипа IgG1. Другие определенные варианты осуществления изобретения относятся к антителу подтипа IgG2 или особенно человеческого антитела подтипа IgG2.
Антитело может быть гуманизированным антителом подтипа IgG1 или особенно человеческим антителом подтипа IgG1. Кроме того, антитело может быть гуманизированным антителом подтипа IgG2 или особенно человеческим антителом подтипа IgG2.
Антитело может быть, например, биологически активным, выступая посредником в антителозависимой клеточной цитотоксичности (опухолевых клеток, экспрессирующих), комплиментопосредованной цитотоксичности (CMC) или ассоциированным с иммунными комплексами. Типичная АЗКЦ включает активизацию естественных клеток-киллеров (NK-клеток) и основывается на распознавании клеток, покрытых антителами, Fc рецепторами на поверхности NK-клеток. Fc рецепторы распознают Fc домен антител, например, такой как находится на IgG1, которые связываются с поверхностью клеткимишени, в частности раковой клетки, которая экспрессирует антиген, такой как KAAG1. После связывания с Fc рецептором на IgG1 NK-клетка выделяет цитокины и цитотоксические гранулы, которые внедряются в клетку-мишень и, вызывая апоптоз, ускоряют гибель клетки.
Настоящее изобретение описывает набор антител, которые связываются с KAAG1 или вариантом KAAG1. В некоторых вариантах осуществления антитела можно выбирать из группы, состоящей из поликлональных антител, моноклональных антител, таких как химерные или гуманизированные антитела, фрагментов антител, таких как антиген-связывающие фрагменты, одноцепочечных антител, доменных антител и полипептидов с антиген-связывающим участком.
В одном аспекте данного изобретения изолированное антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут быть способны вызывать гибель (устранение, уничтожение, лизис) опухолевых клеток, экспрессирующих KAAG1, или опухолевых клеток, экспрессирующих вариантный KAAG1 (например, путем механизма, основанного АЗКЦ).
В дополнительном аспекте изобретения, выделенное антитело или антиген-связывающий фрагмент
- 8 034414 настоящего изобретения могут быть специально охарактеризованы их способностью к уменьшению распространения опухолевых клеток, экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1.
В дополнительном аспекте изобретения, выделенное антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут быть специально охарактеризованы их способностью к уменьшению или затруднению образования опухолей, экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут содержать аминокислоты константного участка, который может происходить, например, из антитела человека.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут содержать каркасные аминокислоты антитела человека.
Безотносительно к иллюстративным вариантам осуществления, представленным в данном документе, заявитель выработал специфические антитела и антиген-связывающие фрагменты, которые могут быть полезны для описанных в данном документе целей.
Нижеследующее представляет собой перечень полученных антител, которые демонстрировали специфическое связывание с KAAG1; 3D3, 3A4, 3C4, 3G10, 3A2, 3F6, 3E8, 3E10, 3A9, 3B1, 3G5, 3B2, 3B8, 3G8, 3F7, 3E9, 3G12, 3C3, 3E12, 4А2, 3F10, 3F4, 3B11, 3D1, 3C2, 3E6 и 3H3. Последовательности легкой цепи или тяжелой цепи антитела, вариабельные участки или участки, определяющие комплементарность (CDRs) можно найти в международной заявке № РСТ/СА2009/001586, опубликованной 3 июня 2010 г. под номером WO2010/060186A8, в международной заявке № РСТ/СА2010/001795, опубликованной 12 мая 2011 г. под номером WO2011/054112A1, или в международной заявке № РСТ/СА2012/000296, опубликованной 4 октября 2012 г. под номером WO2012/129668A1.
В большинстве случаев последовательности CDRs приведены отдельно или показаны жирным шрифтом в данном документе.
Из этих антител 3D3, 3A4, 3G10 и 3C4 были выбраны для биологических испытаний in vitro и/или in vivo. Антитело 3A4 обладало наилучшими свойствами. На основании наших экспериментов антитело 3A4 более эффективно убивает раковые клетки, если к нему присоединить терапевтический фрагмент (например, цитотоксический агент), по сравнению с антителом без такого присоединения.
В иллюстративном варианте осуществления антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать любой отдельный CDR или комбинацию из CDR1, CDR2 и/или CDR3 вариабельного участка легкой цепи. CDR3 может быть выбран более конкретно. Комбинация может включать, например, CDRL1 и CDRL3; CDRL1 и CDRL2; CDRL2 и CDRL3 и CDRL1, CDRL2 и CDRL3.
В иллюстративном варианте осуществления антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать любой отдельный CDR или комбинацию из CDR1, CDR2 и/или CDR3 вариабельного участка тяжелой цепи. CDR3 может быть выбран более конкретно. Комбинация может включать, например, CDRH1 и CDRH3; CDRH1 и CDRH2; CDRH2 и CDRH3 и CDRH1, CDRH2 и CDRH3.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать по меньшей мере два CDR из CDRL1, CDRL2 или CDRL3.
Также в соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать один CDRL1, один CDRL2 и один CDRL3.
Дополнительно, в соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать:
a) по меньшей мере два CDR из CDRL1, CDRL2 или CDRL3 и
b) по меньшей мере два CDR из CDRH1, одного CDRH2 или одного CDRH3.
Антитело или антиген-связывающий фрагмент могут более предпочтительно содержать один CDRL1, один CDRL2 и один CDRL3.
Антитело или антиген-связывающий фрагмент могут более предпочтительно содержать один CDRH1, один CDRH2 и один CDRH3.
В тех случаях, когда доступен только один из вариабельных участков легкой цепи или вариабельных участков тяжелой цепи, антитело или антиген-связывающий фрагмент можно восстановить при помощи скрининга библиотеки комплементарных вариабельных участков с помощью способов, известных в данной области техники (Portolano et al. The Journal of Immunology (1993) 150:880-887, Clarkson et al., Nature (1991) 352:624-628).
Иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения охватывают антитела или антиген, связывающиеся с фрагментами, имеющими CDRs легкой цепи и/или тяжелой цепи антител 3D3, 3A4, 3C4, 3G10, 3A2, 3F6, 3E8, 3E10, 3A9, 3B1, 3G5, 3B2, 3B8, 3G8, 3F7, 3E9, 3G12, 3C3, 3E12, 4А2, 3F10, 3F4, 3B11, 3D1, 3C2, 3E6 или 3H3. Более конкретные варианты осуществления данного изобретения включают антитела или антиген, связывающиеся с фрагментами, имеющими CDR легкой цепи и/или тяжелой цепи антител 3D3, 3A4, 3C4 или 3G10. Еще более конкретные варианты осуществления данного изобретения включают антитела или антиген, связывающиеся с фрагментами, имеющими CDRs легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела 3A4. Изобретение, таким образом, охватывает любые моноклональные, химерные, человеческие или гуманизированные антитела, содержащие один или несколько CDRs антитела 3A4.
- 9 034414
Антитела или антиген-связывающие фрагменты, которые можно применять в способах настоящего изобретения, включают те, которые имеют CDRs антитела 3A4, и могут содержать, например, CDRH1, как приведено в последовательности SEQ ID NO: 49, CDRH2, как приведено в последовательности SEQ ID NO: 50 или в SEQ ID NO: 212, CDRH3, как приведено в последовательности SEQ ID NO: 51, CDRL1, как приведено в последовательности SEQ ID NO: 52, CDRL2, как приведено в последовательности SEQ ID NO: 53, CDRL3, как приведено в последовательности SEQ ID NO: 54.
Настоящее изобретение, таким образом, охватывает антитела и антиген-связывающий фрагмент, который способен специфично связываться с KAAG1, и который может содержать последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
a) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 16, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 18,
b) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 20, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 22,
c) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 24, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 26,
d) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 48, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 46,
e) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 103, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 126,
f) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 104, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 127,
g) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 105, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 128,
h) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 106, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 145,
i) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 107, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 129,
j) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 108, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 130,
k) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 109, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 141,
l) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 110, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 131,
m) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 111, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 134,
n) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 112, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 135,
o) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 113, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 136,
p) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 114, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 133,
q) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 115, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 140,
r) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 116, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 137,
s) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 117, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 144,
t) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 118, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 139,
u) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 119, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 132,
v) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 120, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 142,
w) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 121, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 138,
x) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 122, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 146,
y) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 123, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 153,
z) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 124, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 143, aa) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 189, и/или 3CDRs вариа- 10 034414 бельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 194, bb) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 189, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 195, cc) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 189, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 196, dd) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 189, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 197, ee) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 194, ff) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 195, gg) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 196, или hh) 3CDRs вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или 3CDRs вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 197.
Другие иллюстративные варианты осуществления данного изобретения охватывают антитела или антигены, связывающиеся с фрагментами, имеющими легкую цепь и/или тяжелые цепи антител 3D3, 3A4, 3C4, 3G10, 3A2, 3F6, 3E8, 3E10, 3A9, 3B1, 3G5, 3B2, 3B8, 3G8, 3F7, 3E9, 3G12, 3C3, 3E12, 4А2, 3F10, 3F4, 3B11, 3D1, 3C2, 3E6 или 3H3. Более конкретные варианты осуществления данного изобретения включают антитела или антиген, связывающиеся с фрагментами, имеющими легкую цепь и/или тяжелые цепи антител 3D3, 3A4, 3C4 или 3G10. Еще более конкретные варианты осуществления данного изобретения включают антитела или антиген, связывающиеся с фрагментами, имеющими легкую цепь и/или тяжелые цепи антитела 3A4 (гуманизированного или не гуманизированного).
Настоящее изобретение, таким образом, охватывает антитела и антиген-связывающий фрагмент, который способен специфично связываться с KAAG1, и который может содержать последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
a) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 16 (кодируемого последовательностью SEQ ID NO: 15), и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 18 (кодируемого последовательностью SEQ ID NO: 17),
b) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 20 (кодируемого последовательностью SEQ ID NO: 19), и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 22 (кодируемого последовательностью SEQ ID NO: 21),
c) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 24 (кодируемого последовательностью SEQ ID NO: 23), и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 26 (кодируемого последовательностью SEQ ID NO: 25),
d) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 48, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 46,
e) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 103, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 126,
f) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 104, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 127,
g) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 105, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 128,
h) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 106, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 145,
i) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 107, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 129,
j) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 108, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 130,
k) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 109, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 141,
l) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 110, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 131,
m) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 111, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 134,
n) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 112, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 135,
o) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 113, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 140,
p) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 114, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 133,
q) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 115, и/или вариабельного участка
- 11 034414 тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 140,
r) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 116, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 137,
s) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 117, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 144,
t) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 118, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 139,
u) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 119, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 132,
v) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 120, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 142,
w) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 121, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 138,
x) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 122, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 146,
y) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 123, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 147,
z) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 124, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 144, aa) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 189, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 194, bb) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 189, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 195, cc) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 194, dd) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 195, ee) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 196, или ff) вариабельного участка легкой цепи, описанного в SEQ ID NO: 190, и/или вариабельного участка тяжелой цепи, описанного в SEQ ID NO: 197.
Каркасный участок тяжелой и/или легкой цепей, описанных в данном документе, может быть получены от одного или нескольких каркасных участков, проиллюстрированных в антителах, описанных в данном документе. Антитело или антиген-связывающие фрагменты могут, таким образом, содержать один или несколько CDRs, описанных в данном документе (например, выбранных из специфичных CDRs или консенсусных CDRs последовательностей SEQ ID NO: 72-88 или CDR вариантов последовательностей SEQ ID NO: 89-102), и каркасных участков, взятых из описанных в данном документе. В последовательностях SEQ ID NO: 103-154 ожидаемые CDRs выделены жирным шрифтом, в то время как каркасные участки не выделены.
Табл. 1 относится к полным последовательностям легкой и тяжелой цепи некоторых из антител к KAAG1, которые были отобраны для биологического испытания.
- 12 034414
Таблица 1
Обозначение антитела Тип цепи Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO.:) Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO.:)
3D3 Легкая (L) 3 4
3D3 Тяжелая (Н) 5 6
3G10 Легкая 7 8
3G10 Тяжелая 9 10
ЗС4 Легкая 11 12
ЗС4 Тяжелая 13 14
Гуманизированное 3D3 Легкая 166
Гуманизированное 3D3 Тяжелая 167
Гуманизированное ЗС4 Легкая 170
Гуманизированное ЗС4 Тяжелая 171
Гуманизированный ЗА4 Легкая (Lhl) 199
Гуманизированное ЗА4 Легкая (Lh2) 200
Гуманизированное ЗА4 Тяжелая (Hhl) 202
Гуманизированное ЗА4 Тяжелая (Hh2) 203
Гуманизированное ЗА4 Тяжелая (ННЗ) 204
Гуманизированное ЗА4 Тяжелая (Hh4) 205
Исследования по картированию эпитопов выявили, что антитело 3D3 взаимодействует с эпитопом KAAG1 на протяжении аминокислот 36-60, включительно. Антитела 3G10 и 3A4 взаимодействуют с эпитопом KAAG1 на протяжении аминокислот 61-84, включительно, и антитело 3C4 взаимодействует с эпитопом KAAG1 на протяжении аминокислот 1-35. Несмотря на то что 3G10 и 3A4 связывают похожие участки, антитело 3G10 не связывается с KAAG1 столь же эффективно, как антитело 3A4.
Здесь следует понять, что вариабельный участок легкой цепи с определенной комбинацией, приведенной выше, может быть заменен на любой другой вариабельный участок легкой цепи. Сходным образом здесь следует понять, что вариабельный участок тяжелой цепи с определенной комбинацией, приведенной выше, может быть заменен на любой другой вариабельный участок тяжелой цепи.
Последовательности вариабельных участков легкой и тяжелой цепей выбранных антител, связывающихся с KAAG1, раскрыты в табл. 2.
- 13 034414
Таблица 2
Обозначение антитела Тип вариабельного участка Нуклеотид (SEQ ID NO. : ) Аминокислотн. посл-ть (SEQ ID NO.:)
3D3 Легкий (VL) 15 16
3D3 Тяжелый (VH) 17 18
3G10 Легкий 19 20
3G10 Тяжелый 21 22
ЗС4 Легкий 23 24
ЗС4 Тяжелый 25 26
ЗА2 Легкий 103
ЗА2 Тяжелый 126
ЗЕ10 Легкий 106
ЗЕ10 Тяжелый 145
3G12 Легкий 121
3G12 Тяжелый 138
ЗА4 Легкий 47 48
ЗА4 Тяжелый 45 46
Гуманизированное 3D3 Легкий 168
Гуманизированное 3D3 Тяжелый 169
Гуманизированное ЗС4 Легкий 172
Гуманизированное ЗС4 Тяжелый 173
Гуманизированный ЗА4 Легкий (Lvhl) 189
Гуманизированный ЗА4 Легкий (Lvh2) 190
Гуманизированный ЗА4 Тяжелый (Hvhl) 194
Гуманизированный ЗА4 Тяжелый (Hvh2) 195
Гуманизированный ЗА4 Тяжелый (Hvh3) 197
Гуманизированный ЗА4 Тяжелый (Hvh4) 198
Последовательности SEQ ID NO: 103-154 соответствуют вариабельным участкам легкой цепи и тяжелой цепи других антител, для которых было показано, что они связываются с KAAG1.
CDR последовательности вариабельных участков легкой и тяжелой цепей выбранных антител, связывающихся с KAAG1, раскрыты в табл. 3.
Таблица 3
Обозначение антитела Тип цепи CDR SEQ ID N0. : а. а. последовательность
3D3 Легкая (L) CDR L1 27 KSSQSLLNSNFQKNFLA
3D3 Легкая CDR L2 28 FASTRES
3D3 Легкая CDR L3 29 QQHYSTPLT
3D3 Тяжелая (Н) CDR Н1 30 GYIFTDYEIH
3D3 Тяжелая CDR Н2 31 VIDPETGNTA
3D3 Тяжелая CDR НЗ 32 MGYSDY
- 14 034414
3G10 Легкая CDR L1 33 RSSQSLLHSNGNTYLE
3G10 Легкая CDR L2 34 KVSNRFS
3G10 Легкая CDR L3 35 FQGSHVPLT
3G10 Тяжелая CDR Н1 36 GYTFTDNYMN
3G10 Тяжелая CDR Н2 37 DINPYYGTTT
3G10 Тяжелая CDR НЗ 38 ARDDWFDY
ЗС4 Легкая CDR L1 39 KASQDIHNFLN
ЗС4 Легкая CDR L2 40 RANRLVD
ЗС4 Легкая CDR L3 41 LQYDEIPLT
ЗС4 Тяжелая CDR Н1 42 GFSITSGYGWH
ЗС4 Тяжелая CDR Н2 43 YINYDGHND
ЗС4 Тяжелая CDR НЗ 44 ASSYDGLFAY
ЗА2 Легкая CDR L1 148 KSSQSLLHSDGKTYLN
ЗА2 Легкая CDR L2 149 LVSKLDS
ЗА2 Легкая CDR L3 150 WQGTHFPRT
ЗА2 Тяжелая CDR Н1 151 GYTFTD YNMH
ЗА2 Тяжелая CDR Н2 152 YINPYNDVTE
ЗА2 Тяжелая CDR НЗ 153 AWFGL RQ
ЗЕ10 Легкая CDR L1 154 RSSKSLLHSNGN TYLY
ЗЕ10 Легкая CDR L2 155 RMSNLAS
ЗЕ10 Легкая CDR L3 156 MQHLEYPYT
ЗЕ10 Тяжелая CDR Н1 157 GDTFTD YYMN
ЗЕ10 Тяжелая CDR Н2 158 DINPNYGGIT
ЗЕ10 Тяжелая CDR НЗ 159 QAYYRNS DY
3G12 Легкая CDR L1 160 KASQDVGTAVA
3G12 Легкая CDR L2 161 WTSTRHT
3G12 Легкая CDR L3 162 QQHYSIPLT
3G12 Тяжелая CDR Н1 163 GYIFTDYEIH
3G12 Тяжелая CDR Н2 164 VIDPETGNTA
3G12 Тяжелая CDR НЗ 165 MGYSDY
ЗА4 Легкая CDR L1 52 RSSQSLLHSNGNTYLE
ЗА4 Легкая CDR L2 53 TVSNRFS
ЗА4 Легкая CDR L3 54 FQGSHVPLT
ЗА4 Тяжелая CDR Н1 49 GYTFTDDYMS
ЗА4 Тяжелая CDR Н2 50 или 212 DINPYNGDTNYNQKFKG или DINPYNGDTN
ЗА4 Тяжелая CDR НЗ 51 DPGAMDY
Вариантное антитело и антиген-связывающие фрагменты.
Настоящее изобретение также охватывает варианты антител или антиген-связывающих фрагментов, описанных в данном документе. Включенные вариантные антитела или антиген-связывающие фрагменты представляют собой те, которые имеют вариацию в аминокислотной последовательности. Например, включенные вариантные антитела или антиген-связывающие фрагменты представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере один вариантный CDR (два, три, четыре, пять или шесть вариантных CDR и т.д. или даже двенадцать вариантных CDR), вариабельный участок вариантной легкой цепи, вариабельный участок вариантной тяжелой цепи, вариантную легкую цепь и/или вариантную тяжелую цепь. Вариантные антитела или антиген-связывающие фрагменты, включенные в настоящее изобретение, являются такими, которые имеют, например, подобную или повышенную связывающую способность по сравнению с исходным антителом или антиген-связывающим фрагментом.
Как используется в данном документе термин вариантный применяют к любой последовательности, описанной в данном документе, и он включает, например, вариантный CDR (или CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 и/или CDRH3), вариабельный участок вариантной легкой цепи, вариабельный участок вариантной тяжелой цепи, вариантную легкую цепь, вариантную тяжелую цепь, вариантное ан- 15 034414 титело, вариантный антиген-связывающий фрагмент и вариант KAAG1.
Представляющие наибольший интерес сайты для замещающего мутагенеза включают гипервариабельные участки (CDR), но также предполагаются модификации в каркасном участке или даже в константном участке. Иллюстративные варианты осуществления вариантов CDR приведены в последовательностях SEQ ID NOs: 72-102.
Консервативные замены могут быть осуществлены при помощи обмена аминокислоты (из CDR, вариабельной цепи, антитела и т.д.) из одной из перечисленных ниже групп (группа 1-6) на другую аминокислоту этой же группы.
Другие иллюстративные варианты осуществления консервативных замен показаны в табл. 1A под заголовком предпочтительные замены. Если результат такой замены придает нежелательное свойство, то могут быть произведены более существенные изменения, обозначенные как иллюстративные замены в табл. 1A, или как дополнительно описано ниже в отношении классов аминокислот, а продукты подвергнуты скринингу.
В данной области техники известно, что варианты можно получать замещающим мутагенезом, сохраняя биологическую активность полипептидов настоящего изобретения. Такие варианты в своей аминокислотной последовательности имеют по меньшей мере один удаленный аминокислотный остаток и другой остаток, вставленный на его место. Например, один представляющий интерес сайт для замещающего мутагенеза может включать сайт, в котором определенные остатки, полученные из различных видов, являются идентичными. Примеры замен, обозначенных как консервативные замены, показаны в табл. 1A. Если результат такой замены дает нежелательное изменение, то вводят другой тип замен, обозначенных как иллюстративные замены в табл. 1A, или как дополнительно описано в данном документе в отношении классов аминокислот, а продукты подвергнуты скринингу.
Существенные модификации в функции или иммунологической идентичности выполняют путем отбора замен, которые значительно отличаются по их эффекту на поддержание (a) структуры полипептидного скелета в области замены, например в виде конформации пласта или спирали; (b) заряда или гидрофобности молекулы в целевом сайте или (c) основной части боковой цепи. Встречающиеся в природе остатки разделены на группы на основании общих свойств боковых цепей:
(группа 1) норлейцин, метионин (Met), аланин (Ala), валин (Val), лейцин (Leu), изолейцин (He), (группа 2) нейтральные гидрофильные: цистеин (Cys), серин (Ser), треонин (Thr), (группа 3) кислотные: аспарагиновая кислота (Asp), глутаминовая кислота (Glu), (группа 4) основные: аспарагин (Asn), глутамин (Gln), гистидин (His), лизин (Lys), аргинин (Arg), (группа 5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: глицин (Gly), пролин (Pro) и (группа 6) ароматические: триптофан (Trp), тирозин (Tyr), фенилаланин (Phe). Неконсервативные замены повлекут обмен члена одного из таких классов на другой.
- 16 034414
Таблица 1А
Аминокислотная замена
Исходный остаток Иллюстративная замена Консервативная замена
Ala (А) Val, Leu, He Val
Arg (R) Lys, Gin, Asn Lys
Asn (N) Gin, His, Lys, Arg, Asp Gin
Asp (D) Glu, Asn Glu
Cys (С) Ser, Ala Ser
Gin (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp, Gin Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn, Gin, Lys, Arg, Arg
He (I) Leu, Val, Met, Ala, Phe, норлейцин Leu
Leu (L) Норлейцин, lie, Val, Met, Ala, Phe He
Lys (K) Arg, Gin, Asn Arg
Met (M) Leu, Phe, He Leu
Phe (F) Leu, Val, He, Ala, Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Ser Ser
Trp (W) Tyr, Phe Tyr
Tyr (Y) Trp, Phe, Thr, Ser Phe
Val (V) He, Leu, Met, Phe, Ala, норлейцин Leu
Изменения в аминокислотной последовательности вариантного антитела или антигенсвязывающего фрагмента могут включать аминокислотную вставку, делецию, замену и т.п., одну или несколько модификаций основной цепи или боковой цепи одной или нескольких аминокислот, или присоединение группы или другой молекулы к одной или нескольким аминокислотам (боковым цепям или основной цепи).
Вариантное антитело или антиген-связывающий фрагмент может иметь существенное сходство последовательности и/или идентичность последовательности своей аминокислотной последовательности с таковой аминокислотной последовательности исходного антитела или антиген-связывающего фрагмента. Степень сходства между двумя последовательностями основана на доле идентичностей (идентичных аминокислот) и консервативной замены.
Как правило, степень сходства и идентичности между вариабельными цепями определяли в данном документе при помощи программы для последовательностей Blast2 (Tatiana A. Tatusova, Thomas L. Madden (1999), Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences, FEMS Microbiol Lett. 174:247-250) при помощи настроек по умолчанию, т.е. программы blastp, матрицы BLOSUM62 (штраф за открытие разрыва 11 и штраф за удлинение разрыва 1; предельная длина разрыва 50, порог 10,0, размер слова 3) и активированных фильтров.
Процентная идентичность будет, таким образом, свидетельствовать об аминокислотах, которые идентичны аминокислотам исходного пептида и которые могут занимать такое же или сходное положение. Процентное сходство будет свидетельствовать об аминокислотах, которые идентичны, и аминокислотах, которые заменены консервативной аминокислотной заменой, по сравнению с исходным пептидом в таком же или сходном положении.
Варианты настоящего изобретения, таким образом, содержат такие, которые могут иметь по меньшей мере 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% идентичность последовательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
Иллюстративные варианты осуществления вариантов представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере 81% идентичность последовательности с последовательностью, описанной в данном документе, и 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% сходство после- 17 034414 довательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
Другие иллюстративные варианты осуществления вариантов представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере 82% идентичность последовательности с последовательностью, описанной в данном документе, и 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% сходство последовательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
Дополнительные иллюстративные варианты осуществления вариантов представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере 85% идентичность последовательности с последовательностью, описанной в данном документе, и 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% сходство последовательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
Другие иллюстративные варианты осуществления вариантов представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере 90% идентичности последовательности с последовательностью, описанной в данном документе, и 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% сходство последовательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
Дополнительные иллюстративные варианты осуществления вариантов представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере 95% идентичности последовательности с последовательностью, описанной в данном документе, и 95, 96, 97, 98, 99 или 100% сходство последовательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
Другие дополнительные иллюстративные варианты осуществления вариантов представляют собой такие, которые имеют по меньшей мере 97% идентичности последовательности с последовательностью, описанной в данном документе, и 97, 98, 99 или 100% сходство последовательности с исходной последовательностью или частью исходной последовательности.
В целях краткости заявитель приводит в данном документе табл. 1B, иллюстрирующую иллюстративные варианты осуществления отдельных вариантов, охватываемых настоящим изобретением и включающих указанный % идентичности последовательности и % сходства последовательности. Каждый X следует истолковывать как обозначающий заданный вариант.
ки тяжелой цепи, легкие цепи, тяжелые цепи, антитела и/или антиген-связывающие фрагменты, которые имеют по меньшей мере 70% идентичность или по меньшей мере 80% идентичность с последовательностью, описанной в данном документе.
Настоящее изобретение, таким образом, охватывает антитела и антиген-связывающий фрагмент, которые способны специфично связываться с KAAG1, и которые могут содержать последовательности, выбранные из группы, состоящей из:
a) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 16, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 18,
b) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 20, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 22,
c) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 24, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 26,
d) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 48, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 46,
e) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последова-
- 18 034414 тельности с SEQ ID NO: 103, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 126,
f) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 104, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 127,
g) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 105, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 128,
h) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 106, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 145,
i) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 107, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 128,
j) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 108, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 130,
k) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 109, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 141,
l) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 110, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 131,
m) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 111, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 134,
n) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 112, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 135,
o) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 113, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 136,
p) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 114, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 133,
q) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 115, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 140,
r) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 116, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 137,
s) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 117, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 144,
t) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 118, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 139,
u) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 119, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 132,
v) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 120, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 142,
w) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 121, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 138,
x) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 122, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 146,
y) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 123, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 147, или
- 19 034414
z) вариабельного участка легкой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 124, и вариабельного участка тяжелой цепи, имеющего по меньшей мере 70% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 143.
В соответствии с настоящим изобретением вариантные антитела или антиген-связывающие фрагменты могут содержать CDRs, идентичные с таковыми соответствующего вариабельного участка легкой и/или тяжелой цепи. В другом случае вариантные антитела или антиген-связывающие фрагменты могут содержать вариантные CDR(s).
Таким образом, иллюстративные варианты осуществления вариантного антитела или антигенсвязывающего фрагмента настоящего изобретения представляют собой такие, которые содержат вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательность по меньшей мере на 70, 75, 80% идентичную SEQ ID NO: 16, 20, 24, 103, 106 или 121. CDRs такого варианта могут быть идентичны таковым соответствующего не вариантного (последовательность дикого типа) антитела или антигенсвязывающего фрагмента, или могут отличаться 1-3 аминокислотами.
Другой иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка легкой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 16 и имеет, например, 1-22 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 16. Вариант SEQ ID NO: 16 приведен в SEQ ID NO: 168.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка легкой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 20 и имеет, например, 1-22 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 20.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка легкой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 24 и имеет, например, 1-21 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 24. Вариант SEQ ID NO: 24 приведен в SEQ ID NO: 172.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка легкой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 103 и имеет, например, 1-22 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 103.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка легкой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 106 и имеет, например, 1-22 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 106.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка легкой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 121 и имеет, например, 1-21 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 121.
В отдельных случаях вариабельный участок легкой цепи вариантного антитела может содержать аминокислотные делеции или присоединения (в сочетании с аминокислотными заменами или без них). Зачастую, может быть допущено 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных делеций или присоединений.
Другие иллюстративные варианты осуществления вариантного антитела или антигенсвязывающего фрагмента настоящего изобретения представляют собой такие, которые содержат вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательность по меньшей мере на 70, 75, 80% идентичную SEQ ID NO: 18, 22, 26, 126, 138 или 145. CDRs такого варианта могут быть идентичны таковым соответствующего не вариантного (последовательность дикого типа) антитела или антигенсвязывающего фрагмента, или могут отличаться 1-3 аминокислотами.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка тяжелой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 18 и имеет, например, 1-22 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 18. Вариант SEQ ID NO: 18 приведен в SEQ ID NO: 169.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка тяжелой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность
- 20 034414
CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 22 и имеет, например, 1-23 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 22.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка тяжелой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 26 и имеет, например, 1-23 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 26. Вариант SEQ ID NO: 26 приведен в SEQ ID NO: 173.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка тяжелой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 126 и имеет, например, 1-23 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 126.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка тяжелой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 145 и имеет, например, 1-23 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 145.
Иллюстративный вариант осуществления вариабельного участка тяжелой цепи вариантного антитела охватывает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность CDR, которая на 100% идентична аминокислотной последовательности CDR SEQ ID NO: 138 и имеет, например, 1-22 аминокислотных модификаций (например, консервативных или не консервативных аминокислотных замен) в своем каркасном участке по сравнению с каркасным участком SEQ ID NO: 138.
В отдельных случаях вариабельный участок тяжелой цепи вариантного антитела может содержать аминокислотные делеции или присоединения (в сочетании с аминокислотными заменами или без них). Зачастую, может быть допущено 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных делеций или присоединений.
Вариантные CDRS.
Также настоящим изобретением охвачены полипептиды или антитела, содержащие вариабельные цепи по меньшей мере с одной консервативной аминокислотной заменой по меньшей мере в одном из описанных в данном документе CDRs (по сравнению с исходным CDR).
Настоящее изобретение также охватывает полипептиды, антитела или антиген-связывающие фрагменты, содержащие вариабельные цепи по меньшей мере с одной консервативной аминокислотной заменой по меньшей мере в двух из CDRs (по сравнению с исходными CDRs).
Настоящее изобретение также охватывает полипептиды, антитела или антиген-связывающие фрагменты, содержащие вариабельные цепи по меньшей мере с одной консервативной аминокислотной заменой в трех CDRs (по сравнению с исходными CDRs).
Настоящее изобретение также охватывает полипептиды, антитела или антиген-связывающие фрагменты, содержащие вариабельные цепи по меньшей мере с двумя консервативными аминокислотными заменами по меньшей мере в одном из CDRs (по сравнению с исходными CDRs).
Настоящее изобретение также охватывает полипептиды, антитела или антиген-связывающие фрагменты, содержащие вариабельные цепи по меньшей мере с двумя консервативными аминокислотными заменами по меньшей мере в двух из CDRs (по сравнению с исходными CDRs).
Настоящее изобретение также охватывает полипептиды, антитела или антиген-связывающие фрагменты, содержащие вариабельные цепи по меньшей мере с двумя консервативными аминокислотными заменами в трех CDRs (по сравнению с исходными CDRs).
Сравнение аминокислотных последовательностей вариабельных участков легкой цепи или вариабельных участков тяжелой цепи антител, демонстрирующих отличные свойства, позволило нам получать конценсусные последовательности с CDRs в пределах вариабельных участков. Согласованность CDRs приведена в последовательностях SEQ ID Nos: 72-88.
Настоящее изобретение, таким образом, предлагает в иллюстративном варианте осуществления выделенное антитело или антиген-связывающий фрагмент, содержащий вариабельный участок легкой цепи с:
a) последовательностью CDRL1, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 72 и SEQ ID NO: 73;
b) последовательностью CDRL2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 75 и SEQ ID NO: 76; или
c) последовательностью CDRL3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78 и SEQ ID NO: 79.
Настоящее изобретение, таким образом, предлагает в иллюстративном варианте осуществления выделенное антитело или антиген-связывающий фрагмент, содержащий вариабельный участок тяжелой цепи с:
- 21 034414
a) последовательностью CDRH1, включающей SEQ ID NO: 80;
b) последовательностью CDRH2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84 и SEQ ID NO: 85; или
c) последовательностью CDRH3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87 и SEQ ID NO: 88.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL1, содержащую или состоящую из формулы
XiaSSX2aSLLX3aX4aX5aX6aX7aX8aX9aXi0aLXiia (SEQ ID NO . : 72 ) где X1a может быть основной аминокислотой;
X2a может быть основной аминокислотой;
X3a может быть Н, Y или N;
X4a может быть S, Т, N или R;
X5a может отсутствовать, быть S или N;
X6a может быть D, F или N;
X7a может быть G или Q;
X8a может быть K, L или N;
X9a может быть T или N;
X10a может быть ароматической аминокислотой и
X11a может быть A, N, E или Y.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1a может быть K или R.
В дополнительном варианте осуществления изобретения X2a может быть Q или K.
В еще одном дополнительном варианте осуществления изобретения X3a может быть N или H.
В дополнительном варианте осуществления изобретения X10a может быть Y или F.
Более конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL1 последовательности SEQ ID NO: 72, где X1a представляет собой K; X2a представляет собой Q; X3a представляет собой N; X3a представляет собой H; X4a представляет собой S; X4a представляет собой T; X5a представляет собой S; X5a отсутствует; X6a представляет собой N; X7a представляет собой Q; X7a представляет собой G; X8a представляет собой K; X9a представляет собой N; X9a представляет собой T; X10a представляет собой Y или X11a представляет собой А.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL1, содержащую или состоящую из формулы
KASQDXlbX2bX3bX4bX5bX6b (SEQ ID NO. :73) где X1b может быть гидрофобной аминокислотой;
X2a может быть G или H;
X3b может быть T, N или R;
X4b может быть F, Y или A;
X5b может быть гидрофобной аминокислотой, и;
X6b может быть N или А.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1b может быть V или I.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X5b может быть V или L.
Более конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL1 последовательности SEQ ID NO: 73, где X1b представляет собой I; X2b представляет собой H; X3b представляет собой T; X3b представляет собой N; X4b представляет собой Y; X4b представляет собой F; X5b представляет собой L или X6b представляет собой N.
Другие иллюстративные варианты осуществления CDRL1 приведены в SEQ ID NOs:89 и 90.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL2, содержащую или состоящую из формулы
FXlcSTX2cX3cS (SEQ ID NO. :74) где X1c представляет собой A или G;
X2c представляет собой R или Т и
X3c представляет собой E, K или A.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1c может быть A, и X2c может быть T.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X1c может быть A, и X2c может быть R.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL2 последовательности SEQ ID NO: 74, где X1c представляет собой A; X2c представляет собой R или X3c представляет собой E.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL2, содержащую или состоящую из формулы
XldVSX2dX3dX4dS (SEQ ID NO. :75) где X1d может быть L или K;
X2d может быть основной аминокислотой;
X3d может быть L или R и
- 22 034414
X4d может быть D или F.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X2d может быть K или N.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL2 последовательности
SEQ ID NO: 75, где X1d представляет собой L; X2d представляет собой K; X3d представляет собой L или
X4d представляет собой D.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL2, содержащую или состоящую из формулы
XieANRLVX2e (SEQ ID NO . : 7 6) где X1e может быть основной аминокислотой;
X2e может быть D или А.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1e может быть R или H.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL2 последовательности SEQ ID NO: 76, где X1e представляет собой R или X2e представляет собой D.
Другие иллюстративные варианты осуществления CDRL2 приведены в SEQ ID NOs:91-93.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL3, содержащую или состоящую из формулы
XifQX2fX3fX4fX5fPLT (SEQ ID NO. :77) где X1f может быть Q или L;
X2f может быть ароматической аминокислотой;
X3f может быть D, F или Y;
X4f может быть E, A, N или S и
X5f может быть I, F или T.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X2f может быть Y или H.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X3f может быть Y или D.
Еще в одном иллюстративном варианте осуществления изобретения X5f может быть I или T.
Более конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL3 последовательности SEQ ID NO: 77, где X1f представляет собой Q; X2f представляет собой H; X3f представляет собой D; X3f представляет собой Y; X4f представляет собой S; X4f представляет собой E; X4f представляет собой A; X5f представляет собой T или X5f представляет собой I.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL3, содержащую или состоящую из формулы
QQHXlgX2gX3gPLT (SEQ ID NO. :78) где X1g может быть ароматической аминокислотой;
X2g может быть N или S и
X3g может быть I или T.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1g может быть F или Y.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL3 последовательности SEQ ID NO: 78, где X2g представляет собой S или X3g представляет собой T.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRL3, содержащую или состоящую из формулы
XihQGX2hHX3hPX4hT (SEQ ID NO. :79) где X1h может быть ароматической аминокислотой;
где X2h может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой;
где X3h может быть F или V и где X4h может быть R или L.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1h может быть W или F.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X2b может быть S или Т.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRL3 последовательности SEQ ID NO: 79, где X1h представляет собой W; X2h представляет собой T; X3h представляет собой F или X4h представляет собой R.
Другие иллюстративные варианты осуществления CDRL3 приведены в SEQ ID NOs: 94 и 95
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH1, содержащую или состоящую из формулы
ΟΥΧιιΕΧ22Χ32ΥΧ42Χ5ΐΗ (SEQ ID NO . : 80 ) где X1i может быть T, I или K;
X2i может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой;
X3| может быть кислой аминокислотой;
X4i может быть Е, N или D и
X5i может быть гидрофобной аминокислотой.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X2i может быть T или S.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X3i может быть D или E.
Еще в одном иллюстративном варианте осуществления изобретения X4i может быть N или E.
- 23 034414
В дополнительном иллюстративном варианте осуществления изобретения X5i может быть M, I или
v.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH1 последовательности SEQ ID NO: 80, где X2i представляет собой T; X3i представляет собой D; X4| представляет собой I или X5i представляет собой M.
Другие иллюстративные варианты осуществления CDRH1 приведены в SEQ ID NOs: 96 и 97.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH2, содержащую или состоящую из формулы
Xi:X2:DPX3:TGX4:TX5: (SEQ ID NO. :81) где X1j может быть V или G;
X2j может быть гидрофобной аминокислотой;
X3j может быть A, G или E;
X4j может быть R, G, D, A, S, N или V и
X5j может быть гидрофобной аминокислотой.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X2j может быть I или L.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X5j может быть A или V.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH2 последовательности SEQ ID NO: 81, где X1j представляет собой V; X2j представляет собой I; X3j представляет собой E, X4j представляет собой D, или X5j представляет собой А.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH2, содержащую или состоящую из формулы
VXikDPX2kTGX3kTA (SEQ ID NO. :82) где X1k может быть гидрофобной аминокислотой;
X2k может быть A, E или G;
X3k может быть R, G, D, A, S, N, V или D.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X1k может быть L или I.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH2 последовательности SEQ ID NO: 82, где X1k представляет собой I; X2k представляет собой E или X3k представляет собой D.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH2, содержащую или состоящую из формулы
YIXiiX2iX3iGX4iX5iX6i (SEQ ID NO. :83) где X1i может быть S или N;
X2l может быть ароматической аминокислотой
X31 может быть D, E или N;
X41 может быть D или H;
X51 может быть Y, S или N;
X61 может быть D, E или N.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X31 может быть D или N.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X61 может быть D или N.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH2 последовательности SEQ ID NO: 83, где X21 представляет собой F или Y; X31 представляет собой N, X41 представляет собой D, или X61 представляет собой N.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH2, содержащую или состоящую из формулы
XlmINPYNX2mVTE (SEQ ID NO. :84) где X1m может быть N или Y и
X2m может быть Е, D или N.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X2m может быть D или N.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH2 последовательности SEQ ID NO: 84, где X1m представляет собой N или X2m представляет собой D.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH2, содержащую или состоящую из формулы
DINPXlnYGX2nX3nT (SEQ ID NO. :85) где X1n может быть N или Y,
X2n может быть G или T и
X3n может быть I или T.
Другие иллюстративные варианты осуществления CDRH2 приведены в SEQ ID NOs: 98 и 99.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH3, содержащую или состоящую из формулы
MXioX2oX3oDY (SEQ ID NO . : 8 6) где X1o может быть G или S;
X2o может быть Y или H и
- 24 034414
X3o может быть A или S.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH3 последовательности
SEQ ID NO: 86, где X1o представляет собой G; X2o представляет собой Y или X3o представляет собой S.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH3, содержащую или состоящую из формулы
где X1p может быть G или S и
X2p может отсутствовать или быть M.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH3 последовательности SEQ ID NO: 87, где X1p представляет собой S или X2p представляет собой M.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут содержать последовательность CDRH3, содержащую или состоящую из формулы
где X1q может быть R или W;
X2q может быть ароматической аминокислотой и
X3q может быть основной аминокислотой.
В иллюстративном варианте осуществления изобретения X2q может быть W или F.
В другом иллюстративном варианте осуществления изобретения X3q может быть Q или N.
Другие конкретные варианты осуществления изобретения включают CDRH3 последовательности SEQ ID NO: 88, где X1q представляет собой R; X2q представляет собой W или X3q представляет собой N.
Вариантные антитела или антиген-связывающие фрагменты, охватываемые настоящим изобретением, включают те, которые могут содержать вставку, делецию или аминокислотную замену (консервативную или не консервативную). Такие варианты могут иметь по меньшей мере один удаленный аминокислотный остаток в своей аминокислотной последовательности и другой остаток, вставленный на его место.
Гуманизированные антитела.
Иллюстративные варианты осуществления вариантных антител и антиген-связывающих фрагментов настоящего изобретения представляют собой группу антител и антиген-связывающих фрагментов, способных связываться с KAAG1 и охарактеризованных в данном документе как гуманизированные.
Гуманизированные антитела и антиген-связывающие фрагменты настоящего изобретения более конкретно включают гуманизированные антитела 3D3, 3A4 или 3C4 и антиген-связывающие фрагменты. Гуманизированные антитела 3D3, 3A4 или 3C4 в каркасном участке содержат по меньшей мере одну аминокислоту, которая отличает их от моноклональных антител 3D3, 3A4 или 3C4.
Гуманизированные антитела 3A4, содержащие CDRs, идентичные таковым моноклонального антитела 3A4 (VL SEQ ID NO: 48, VH: SEQ ID NO: 46), были получены и исследованы. Эти гуманизированные антитела содержат вплоть до 11 аминокислотных замен (от одной до одиннадцати) в вариабельном каркасном участке легкой цепи и вплоть до 23 аминокислотных замен (от одной до двадцати трех) в вариабельном каркасном участке тяжелой цепи, отличающих их от моноклонального антитела 3A4. Заявитель показал, что эти гуманизированные антитела 3A4 связываются с KAAG1 столь же эффективно, как и моноклональное антитело 3A4.
Иллюстративные варианты осуществления вариантного антитела или антиген-связывающих фрагментов включают такие, которые имеют вариабельный участок легкой цепи, который приведен в SEQ ID NO: 186
SEQ ID NO. : 186 DXVMTQTPLSLXVXXGXXASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPXLLIHTVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDXGVYYCFQGSHVPLTFGXGTXLEXK, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 48. Аминокислотной заменой может быть, например, аминокислота, находящаяся в соответствующем положении в естественном антителе человека или в консенсусной последовательности антитела человека. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
Другой иллюстративный вариант осуществления вариантного антитела или антиген-связывающего фрагмента включает такие, которые имеют вариабельный участок легкой цепи, который приведен в SEQ ID NO: 187
SEQ ID NO.:187
DXeiVMTQTPLSLXe2VXe3Xe4GXe5Xe6ASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPX e7LLIHTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDXe8GVYYCFQGSHVPLTFGXe9GTXel 0LEXellK, где Xe1 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xe2 может быть A или P;
- 25 034414
Xe3 может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой;
Xe4 может быть L или P;
Xe5 может быть кислой аминокислотой;
Xe6 может быть Q или P;
Xe7 может быть основной аминокислотой;
Xe8 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xe9 может быть A или Q;
Xeio может быть основной аминокислотой или
Xe11 может быть гидрофобной аминокислотой, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 48.
Дополнительный иллюстративный вариант осуществления вариантного антитела или антигенсвязывающего фрагмента включает такие, которые имеют вариабельный участок легкой цепи, который приведен в SEQ ID NO: 188
SEQ ID NO.:188
JDXeiVMTQTPLSLXe2VXe3Xe4GXe5Xe6ASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPX e7LLIHTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDXe8GVYYCFQGSHVPLTFGXe9GTXe1 0LEXe11K где XE1 может быть V или I;
XE2 может быть A или P;
XE3 может быть S или T;
XE4 может быть L или P;
XE5 может быть D или E;
XE6 может быть Q или P;
XE7 может быть K или Q;
XE8 может быть L или V;
XE9 может быть A или Q;
XE10 может быть R или K или
XE11 может быть L или I, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 48.
В соответствии с вариантом осуществления вариант вариабельного домена легкой цепи может иметь последовательность, которая приведена в SEQ ID NO: 189 или 190
SEQ ID NO.:189
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYTVSN
RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK.
SEQ ID NO.:190 DWMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYTVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK.
Иллюстративные варианты осуществления вариантного антитела или антиген-связывающих фрагментов включают такие, которые имеют вариабельный участок тяжелой цепи, который приведен в SEQ ID NO: 191
SEQ ID NO.:191 QXQLVQSGXEXXKPGASVKXSCKASGYTFTDDYMSWVXQXXGXXLEWXGDINPYNGDT NYNQKFKGXXXXTXDXSXSTAYMXLXSLXSEDXAVYYCARDPGAMDYWGQGTXVTVSS, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 46. Аминокислотной заменой может быть, например, аминокислота, находящаяся в соответствующем положении в естественном антителе человека или в консенсусной последовательности антитела человека. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
Другой иллюстративный вариант осуществления вариантного антитела или антиген-связывающего фрагмента включает такие, которые имеют вариабельный участок тяжелой цепи, который приведен в SEQ ID NO: 192
SEQ ID NO.:192
IQXflQLVQSGXf2EXf3Xbf4KPGASVKXf5SCKASGYTFTDDYMSWVXf6QXf7Xf8GXf9Xfi oLEWXfllGDINPYNGDTNYNQKFKGXfl2Xfi3Xbi4Xfi5TXfl6DXfl7SXfi8STAYMXfl9LXf2OSL
Xf21SEDXf22AVYYCARDPGAMDYWGQGTXf23VTVSS,
- 26 034414 где Xf1 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xbf2 может быть P или A;
Xf3 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xf4 может быть V или K;
Xf5 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xf6 может быть основной аминокислотой;
Xf7 может быть S или A;
Xf8 может быть H или P;
Xf9 может быть основной аминокислотой;
Xf10 может быть S или G;
Xf11 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xf12 может быть основной аминокислотой;
Xf13 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xf14 может быть I или T;
Xf15 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xf16 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xf17 может быть K или T;
Xf18 может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой;
Xf19 может быть Q или E;
Xf20 может быть N или S;
Xf21 может быть T или R;
Xf22 может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой или
Xf23 может быть S или L, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 46.
Дополнительный иллюстративный вариант осуществления вариантного антитела или антигенсвязывающего фрагмента включает такие, которые имеют вариабельный участок тяжелой цепи, который приведен в SEQ ID NO: 193
SEQ ID NO.:193
QXfiQLVQSGXf2EXf3Xf4KPGASVKXf5SCKASGYTFTDDYMSWVXf6QXf7Xf8GXf9Xfi0 LEWXf11GDINPYNGDTNYNQKFKGXfi2Xfi3Xfi4Xfi5TXf16DXf17SXfi8STAYMXf19LXF2oSLX f21sedxf22avyycardpgamdywgqgtxf23vtvss где XF1 может быть I или V;
XF2 может быть P или A;
XF3 может быть M или V;
XF4 может быть V или K;
XF5 может быть M или V;
XF6 может быть K или R;
XF7 может быть S или A;
XF8 может быть H или P;
XF9 может быть K или Q;
XF10 может быть S или G;
XF11 может быть I или M;
XF12 может быть K или R;
XF13 может быть A или V;
XF14 может быть I или T;
XF15 может быть L или I,
XF16 может быть V или A;
XF17 может быть K или T;
XF18 может быть S или T;
XF19 может быть Q или E;
XF20 может быть N или S;
XF21 может быть T или R;
XF22 может быть S или T или
XF23 является S или L, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 46.
В соответствии с вариантом осуществления вариант вариабельного домена тяжелой цепи может иметь последовательность, которая приведена в любой из SEQ ID NO: 194-197
- 27 034414
SEQ ID NO.:194
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWMGDINPYNGDT
NYNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS.
SEQ ID NO.:195
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWMGDINPYNGDT
NYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS.
SEQ ID NO.:196
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWIGDINPYNGDT
NYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS.
SEQ ID NO.:197
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGQGLEWIGDINPYNGDT
NYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS.
В соответствии с вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3D3 может содержать вариабельный участок легкой цепи формулы
DIVMTQSPXSLAVSXGXXXTXNCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQXPKLLIYEAS
TRESSXPDRFXGSGSGTDFTLTISSXQAEDXAXYXCQQHYSTPLTFGXGTKLEXK (SEQ ID
NO.:174);
где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 16. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3D3 может содержать вариабельный участок легкой цепи формулы
DIVMTQSPXaiSLAVSXa2GXa3Xa4Xa5TXa6NCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQXa7 PKLLIYFASTRESSXa8PDRFXa9GSGSGTDFTLTISSXaioQAEDXaiiAXai2YXa13CQQHYSTP LTFGXai4GTKLEXai5K (SEQ ID NO. :175) ;
где XA1 может быть, например, D или S;
XA2 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - L или I;
XA3 может быть, например, E или Q;
XA4 может быть, например, основной аминокислотой или более конкретно - R или K;
XA5 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - А или V;
XA6 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - I или M;
XA7 может быть, например, P или S;
XA8 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или I;
XA9 может быть, например, S или I;
XA10 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - L или V;
XA11 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или L;
XA12 может быть, например, V или D;
XA13 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - Y или F;
XA14 может быть, например, Q или A и
XA15 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - I или L.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3D3 может содержать вариабельный участок легкой цепи формулы
DIVMTQSPXaiSLAVSXa2GXa3Xa4Xa5TXa6NCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQXa7 PKLLIYFASTRESSXa8PDRFXa9GSGSGTDFTLTISSXaioQAEDXallAXal2YXal3CQQHYSTP LTFGXai4GTKLEXai5K (SEQ ID NO.:176);
где Xa1 может быть, например, D или S;
Xa2 может быть, например, L или I;
Xa3 может быть, например, E или Q;
Xa4 может быть, например, R или K;
Xa5 может быть, например, A или V;
Xa6 может быть, например, I или M;
Xa7 может быть, например, P или S;
Xa8 может быть, например, V или I;
Xa9 может быть, например, S или I;
Xa10 может быть, например, L или V;
Xa11 может быть, например, V или L;
Xa12 может быть, например, V или D;
Xa13 может быть, например, Y или F;
Xa14 может быть, например, Q или A и
- 28 034414
Xa15 может быть, например, I или L.
В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения гуманизированное антитело
3D3 может содержать вариабельный участок тяжелой цепи формулы
EVQLXQSXAEXXXPGASVXXSCKASGYIFTDYEIHWVXQXPXXGLEWXGVIDPETGNT
AFNQKFKGXXTXTADXSXSTAYMELSSLTSEDXAVYYCMGYSDYWGQGTXXTVSS (SEQ ID
NO. : 177) ;
где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 18. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3D3 может содержать вариабельный участок тяжелой цепи формулы
EVQLXb1QSXb2AEXb3XB4Xb5PGASVXb6Xb7SCKASGYIFTDYEIHWVXb8QXb9PXb10Xbi iGLEWXBiBGVIDPETGNTAFNQKFKGXBisXBMTXBibTADXBigSXBivSTAYMELSSLTSEDXBig AVYYCMGYSDYWGQGTXbi9Xb2oTVSS (SEQ ID NO. :178), где XB1 может быть, например, V или Q;
XB2 может быть, например, G или V;
XB3 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или L;
XB4 может быть, например, K или V;
XB5 может быть, например, основной аминокислотой или более конкретно - K или R;
XB6 может быть, например, K или T;
XB7 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или L;
XB8 может быть, например, основной аминокислотой или более конкретно - R или K;
XB9 может быть, например, A или T;
XB10 может быть, например, G или V;
XB11 может быть, например, Q или H;
XB12 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - M или I;
XB13 может быть, например, основной аминокислотой или более конкретно - R или K;
XB14 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или A;
XB15 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - I или L;
XB16 может быть, например, T или I;
XB17 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - T или S;
XB18 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - T или S;
XB19 может быть, например, L или T и
XB20 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или L.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3D3 может содержать вариабельный участок тяжелой цепи формулы
EVQLXbiQSXb2AEXb3Xb4Xb5PGASVXb6Xb7SCKASGYIFTDYEIHWVXb8QXb9PXbioXbi iGLEWXbi2GVIDPETGNTAFNQKFKGXbi3Xbi4TXbi5TADXbi6SXbi7STAYMELSSLTSEDXbi8 AVYYCMGYSDYWGQGTXbi9Xb2oTVSS (SEQ ID NO. :179) ;
где Xb1 может быть, например, V или Q;
Xb2 может быть, например, G или V;
Xb3 может быть, например, V или L;
Xb4 может быть, например, K или V;
Xb5 может быть, например, K или R;
Xb6 может быть, например, K или T;
Xb7 может быть, например, V или L;
Xb8 может быть, например, R или K;
Xb9 может быть, например, A или T;
Xb10 может быть, например, G или V;
Xb11 может быть, например, Q или H;
Xb12 может быть, например, M или I;
Xb13 может быть, например, R или K;
Xb14 может быть, например, V или A;
Xb15 может быть, например, I или L;
Xb16 может быть, например, T или I;
Xb17 может быть, например, T или S;
Xb18 может быть, например, T или S;
Xb19 может быть, например, L или Т;
- 29 034414
Xb2o может быть, например, V или L.
В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения гуманизированное антитело
3C4 может содержать вариабельный участок легкой цепи формулы
DIVMXQSPSSXXASXGXRVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKXPKTLIFRANRLVDGV
PSRFSGSGSGXDYXLTISSLXXEDXXXYSCLQYDEIPLTFGXGTKLEXX (SEQ ID
NO.:18 0) ;
где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 24. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3C4 может содержать вариабельный участок легкой цепи формулы
DIVMXciQSPSSXc2Xc3ASXc4GXc5RVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKXc6PKTLIFR ANRLVDGVPSRFSGSGSGXcvDYXcsLTISSLXcgXcioEDXciiXc^XcisYSCLQYDEIPLTFGXci 4GTKLEXci5Xci6 (SEQ ID NO. :181) ;
где XC1 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - Т или S;
XC2 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - L или M;
XC3 может быть, например, S или Y;
XC4 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или L;
XC5 может быть, например, кислой аминокислотой или более конкретно - D или E;
XC6 может быть, например, A или S;
XC7 может быть, например, T или Q;
XC8 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - T или S;
XC9 может быть, например, Q или E;
XC10 может быть, например, P или F;
XC11 может быть, например, F или L;
XC12 может быть, например, A или G;
XC13 может быть, например, T или I;
XC14 может быть, например, Q или A;
XC15 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - I или L и
XC16 может быть, например, основной аминокислотой или более конкретно - K или R.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3C4 может содержать вариабельный участок легкой цепи формулы
DIVMXclQSPSSXc2Xc3ASXc4GXc5RVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKXc6PKTLIFR ANRLVDGVPSRFSGSGSGXc7DYXc8LTISSLXc9Xc10EDXc11Xc12Xc13YSCLQYDEIPLTFGXc1 4GTKLEXC15XC16 (SEQ ID NO. :182);
где Xc1 может быть, например, T или S;
Xc2 может быть, например, L или M;
Xc3 может быть, например, S или Y;
Xc4 может быть, например, V или L;
Xc5 может быть, например, D или E;
Xc6 может быть, например, A или S;
Xc7 может быть, например, T или Q;
Xc8 может быть, например, T или S;
Xc9 может быть, например, Q или E;
Xc10 может быть, например, P или F;
Xc11 может быть, например, F или L;
Xc12 может быть, например, A или G;
Xc13 может быть, например, T или I;
Xc14 может быть, например, Q или A;
Xc15 может быть, например, I или L и
Xc16 может быть, например, K или R.
В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения гуманизированное антитело 3C4 может содержать вариабельный участок тяжелой цепи формулы
EVQLQESGPXLVKPSQXLSLTCTVXGFSITSGYGWHWIRQXPGXXLEWXGYINYDGHN DYNPSLKSRXXIXQDTSKNQFXLXLXSVTXXDTAXYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVSX (SEQ ID NO.:183);
где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в
- 30 034414 полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 26. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3C4 может содержать вариабельный участок тяжелой цепи формулы
EVQLQESGPXdiLVKPSQXd2LSLTCTVXd3GFSITSGYGWHWIRQXd4PGXd5Xd6LEWXd7 GYINYDGHNDYNPSLKSRXd8Xd9IXdioQDTSKNQFXd11LXd12LXd13SVTXd14Xd15DTAXd16YY CASSYDGLFAYWGQGTLVTVSXdi7 (SEQ ID NO.:184);
где XD1 может быть, например, G или D;
XD2 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - T или S;
XD3 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - S или T;
XD4 может быть, например, H или F;
XD5 может быть, например, K или N;
XD6 может быть, например, G или K;
XD7 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - I или M;
XD8 может быть, например, гидрофобной аминокислотой или более конкретно - V или I;
XD8 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - T или S;
XD10 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - S или T;
XD11 может быть, например, нейтральной гидрофильной аминокислотой или более конкретно - S или F;
XD12 может быть, например, основной аминокислотой или более конкретно - K или Q;
XD13 может быть, например, S или N;
XD14 может быть, например, A или T;
XD15 может быть, например, А или E;
XD16 может быть, например, V или T и
XD17 может быть любой аминокислотой, A или отсутствовать.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления изобретения гуманизированное антитело 3C4 может содержать вариабельный участок тяжелой цепи формулы
EVQLQESGPXdlLVKPSQXd2LSLTCTVXd3GFSITSGYGWHWIRQXd4PGXd5Xd6LEWXd7 GYINYDGHNDYNPSLKSRXd8Xd9IXdioQDTSKNQFXdllLXdl2LXdl3SVTXdl4Xdl5DTAXdl6YY CASSYDGLFAYWGQGTLVTVSXdi7 (SEQ ID NO. :185) ;
где Xd1 может быть, например, G или D;
Xd2 может быть, например, T или S;
Xd3 может быть, например, S или T;
Xd4 может быть, например, H или F;
Xd5 может быть, например, K или N;
Xd6 может быть, например, G или K;
Xd7 может быть, например, I или M;
Xd8 может быть, например, V или I;
Xd9 может быть, например, T или S;
Xd10 может быть, например, S или T;
Xd11 может быть, например, S или F;
Xd12 может быть, например, K или Q;
Xd13 может быть, например, S или N;
Xd14 может быть, например, A или T;
Xd15 может быть, например, A или E;
Xd16 может быть, например, V или T и
Xd17 представляет собой A или отсутствует;
Соответственно настоящее изобретение предлагает в одном аспекте антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, способный специфично связываться с ассоциированным с почками антигеном 1 (KAAG1), который может содержать вариабельный участок легкой цепи, по меньшей мере на 70% идентичный последовательности SEQ ID NO: 16, и/или вариабельный участок тяжелой цепи, по меньшей мере на 70% идентичный последовательности SEQ ID NO: 18. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент может также содержать по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 18.
В другом аспекте настоящее изобретение также предлагает антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который может содержать вариабельный участок легкой цепи, по меньшей мере на 70% идентичный последовательности SEQ ID NO: 24, и/или вариабельный участок тяжелой цепи, по меньшей ме- 31 034414 ре на 70% идентичный последовательности SEQ ID NO: 26. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент может также содержать по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 24 или SEQ ID NO: 26.
В другом аспекте настоящее изобретение также предлагает антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который может содержать вариабельный участок легкой цепи, по меньшей мере на 70% идентичный последовательности SEQ ID NO: 48, и/или вариабельный участок тяжелой цепи, по меньшей мере на 70% идентичный последовательности SEQ ID NO: 46. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент может также содержать по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 48 или SEQ ID NO: 46.
В соответствии с вариантом осуществления данного изобретения аминокислотная замена может быть вне участка, определяющего комплементарность (CDR). Антитело или антиген-связывающий фрагмент, имеющее такую аминокислотную последовательность, охватывает, например, гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент.
Как используется в данном документе, выражение от одного до двадцати пяти включает каждое индивидуальное значение и изменяется, как, например, от 1, 2, 3 и вплоть до 25; от 1 до 25; от 1 до 24, от до 23, от 1 до 22, от 1 до 21, от 1 до 20, от 1 до 19; от 1 до 18; от 1 до 17; от 1 до 16; от 1 до 15 и т.д.; от до 25, от 2 до 24, от 2 до 23, от 2 до 22, от 2 до 21, от 2 до 20; от 2 до 19; 2 до 18; от 2 до 17 и т.д.; от 3 до 25, от 3 до 24, от 3 до 23, от 3 до 22, от 3 до 21, от 3 до 20; от 3 до 19; от 3 до 18 и т.д.; от 4 до 25, от 4 до 24, от 4 до 23, от 4 до 22, от 4 до 21, от 4 до 20; от 4 до 19; от 4 до 18; от 4 до 17; от 4 до 16 и т.д.; от 5 до 25, от 5 до 24, от 5 до 23, от 5 до 22, от 5 до 21, от 5 до 20; 5 до 19; от 5 до 18; от 5 до 17 и т.д. и т.п.
Как используется в данном документе, выражение от одного до двадцати трех включает каждое индивидуальное значение и изменяется, как, например, от 1, 2, 3 и вплоть до 23; от 1 до 23, от 1 до 22, от до 21, от 1 до 20, от 1 до 19; от 1 до 18; от 1 до 17; от 1 до 16; от 1 до 15 и т.д.; от 2 до 23, от 2 до 22, от до 21, от 2 до 20; от 2 до 19; от 2 до 18; от 2 до 17 и т.д.; от 3 до 23, от 3 до 22, от 3 до 21, от 3 до 20; от до 19; от 3 до 18 и т.д.; от 4 до 23, от 4 до 22, от 4 до 21, от 4 до 20; от 4 до 19; от 4 до 18; от 4 до 17; от до 16 и т.д.; от 5 до 25, от 5 до 24, от 5 до 23, от 5 до 22, от 5 до 21, от 5 до 20; от 5 до 19; от 5 до 18; от до 17 и т.д. и т.п.
Как используется в данном документе, выражение от одного до двадцати включает каждое индивидуальное значение и изменяется, как, например, от 1, 2, 3 и вплоть до 20; от 1 до 20, от 1 до 19; от 1 до 18; 1 до 17; от 1 до 16; от 1 до 15 и т.д.; от 2 до 20; от 2 до 19; от 2 до 18; от 2 до 17 и т.д.; от 3 до 20; от 3 до 19; от 3 до 18 и т.д.; от 4 до 20; от 4 до 19; от 4 до 18; от 4 до 17; от 4 до 16 и т.д.; от 5 до 20; от 5 до 19; от 5 до 18; от 5 до 17 и т.д. и т.п.
Таким же образом выражение от одного до пятнадцати включает каждое индивидуальное значение и изменяется, как, например, от 1, 2, 3 и вплоть до 15; от 1 до 15, от 1 до 14; от 1 до 13; 1 до 12; от 1 до 11; от 1 до 10 и т.д.; от 2 до 15; от 2 до 14; от 2 до 13; от 2 до 12 и т.д.; от 3 до 15; от 3 до 14; от 3 до 13 и т.д.; от 4 до 15; от 4 до 14; от 4 до 13; от 4 до 12; от 4 до 11 и т.д.; от 5 до 15; от 5 до 14; от 5 до 13; от 5 до 12 и т.д. и т.п.
Таким же образом выражение от одного до одиннадцати включает каждое индивидуальное значение и изменяется, как, например, от 1, 2, 3 и вплоть до 11; от 1 до 11, от 1 до 10; от 1 до 9; 1 до 8; от 1 до 7 и т.д.; от 2 до 11; от 2 до 10; от 2 до 9; от 2 до 8 и т.д.; от 3 до 11; от 3 до 10; от 3 до 9 и т.д.; от 4 до 11; от 4 до 10; от 4 до 9; от 4 до 8; от 4 до 7 и т.д.; от 5 до 11; от 5 до 10; от 5 до 9; от 5 до 8 и т.д. и т.п.
В более конкретном варианте осуществления данного изобретения число аминокислотных замен, которые могут быть размещены в гуманизированном вариабельном участке легкой цепи, полученном из SEQ ID NO: 16, может составлять, например, от 1 до 15 аминокислотных замен.
В более конкретном варианте осуществления данного изобретения число аминокислотных замен, которые могут быть размещены в гуманизированном вариабельном участке тяжелой цепи, полученном из SEQ ID NO: 18, может составлять, например, от 1 до 20 аминокислотных замен. В некоторых случаях при рассмотрении гуманизированной версии последовательности SEQ ID NO: 18, может быть полезно иметь по меньшей мере три аминокислотные замены.
В последующем более конкретном варианте осуществления данного изобретения число аминокислотных замен, которые могут быть размещены в гуманизированном вариабельном участке легкой цепи, полученном из SEQ ID NO: 24, может составлять, например, от 1 до 16 аминокислотных замен.
В более конкретном варианте осуществления данного изобретения число аминокислотных замен, которые могут быть размещены в гуманизированном вариабельном участке тяжелой цепи, полученном из SEQ ID NO: 26, может составлять, например, от 1 до 17 аминокислотных замен.
В последующем более конкретном варианте осуществления данного изобретения число аминокислотных замен, которые могут быть размещены в гуманизированном вариабельном участке легкой цепи, полученном из SEQ ID NO: 48, может составлять, например, от 1 до 11 аминокислотных замен.
В более конкретном варианте осуществления данного изобретения число аминокислотных замен, которые могут быть размещены в гуманизированном вариабельном участке тяжелой цепи, полученном из SEQ ID NO: 46, может составлять, например, от 1 до 23 аминокислотных замен.
В соответствии с вариантом осуществления данного изобретения от одной до двадцати аминокис- 32 034414 лотных замен может находиться, например, в вариабельном участке легкой цепи.
В соответствии с вариантом осуществления данного изобретения от одной до двадцати аминокислотных замен может находиться, например, в вариабельном участке тяжелой цепи.
Гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент может, таким образом, иметь вариабельный участок легкой цепи, содержащий вплоть до двадцати аминокислотных замен по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 16 или SEQ ID NO: 24, и может иметь вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий вплоть до двадцати аминокислотных замен по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 26. Гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент может, таким образом, иметь вариабельный участок легкой цепи, содержащий вплоть до двадцати пяти аминокислотных замен по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 48, и может иметь вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий вплоть до двадцати пяти аминокислотных замен по сравнению с последовательностью SEQ ID NO: 46.
Здесь следует понимать, что если гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент имеет два вариабельных участка в легкой цепи, то каждый из вариабельных участков легкой цепи может независимо содержать вплоть до двадцати пяти, двадцати четырех, двадцати трех, двадцати двух, двадцати одной, двадцати, девятнадцати, восемнадцати, семнадцати, шестнадцати, пятнадцати, четырнадцати, тринадцати, двенадцати, одиннадцати, десяти, девяти, восьми, семи, шести, пяти, четырех, трех, двух, одной аминокислотных замен, и каждый из вариабельных участков тяжелой цепи может независимо содержать вплоть до двадцати пяти, двадцати четырех, двадцати трех, двадцати двух, двадцати одной, двадцати, девятнадцати, восемнадцати, семнадцати, шестнадцати, пятнадцати, четырнадцати, тринадцати, двенадцати, одиннадцати, десяти, девяти, восьми, семи, шести, пяти, четырех, трех, двух, одной аминокислотных замен.
Как обсуждается в данном документе, аминокислотные замены могут быть консервативными или неконсервативными. В иллюстративном варианте осуществления аминокислотные замены могут быть консервативными.
Здесь следует понимать, что гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент данного изобретения может также иметь вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи, в котором есть делеция в отличие от последовательностей SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 190, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 24 и/или SEQ ID NO: 26. Такие делеции можно найти, например, в амино- или карбоксиконце вариабельного участка легкой цепи и/или вариабельного участка тяжелой цепи.
Другой иллюстративный вариант осуществления гуманизированного антитела или антигенсвязывающего фрагмента данного изобретения включает, например, антитело или антиген-связывающий фрагмент, имеющий вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой из последовательностей SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 189 или SEQ ID NO: 190.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 186 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111 или по меньшей мере 112 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 186 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 186, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 186, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 6 по 108, с 5 по 109, с 13 по 103, с 14 по 111 последовательности SEQ ID NO: 186, и т.д.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 187 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111 или по меньшей мере 112 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 187 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 187, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 187, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 7 по 109, с 12 по 104, с 22 по 113, с 18 по 112 последовательности SEQ ID NO: 187, и т.д.
Выражения по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 188, по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 189 или по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 190 имеют сходное значение.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут иметь, например, вариабельный участок легкой цепи, приведенный в последовательности SEQ ID NO: 189 или 190.
Гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения содер- 33 034414 жит (или дополнительно содержит), например, вариабельный участок тяжелой цепи, который может включать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NOs:
191, 192, 193, 194, 195, 196 или 197.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 191 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115 или по меньшей мере 116 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 191 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 191, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO:
191, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 1 по 106, с 2 по 112, с 11 по 113, с 7 по 102 последовательности SEQ ID NO: 191, и т.д.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 192 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115 или по меньшей мере 116 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 192 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO:
192, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 192, например последовательность, содержащая аминокислоты с 6 по 109, с 8 по 113, с 1 по 102, с 2 по 105 последовательности SEQ ID NO: 192, и т.д.
Выражения по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 193, по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 194, по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 195, по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 196 или по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 197 имеют сходное значение.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут иметь, например, вариабельный участок тяжелой цепи, приведенный в последовательности SEQ ID NO: 194, 195, 196 или 197.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать, например:
a) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 186, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197;
b) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 187, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197;
c) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать аминокислоты по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 188, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197;
d) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 189, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197; или
e) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 190, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 189 или 190, и вариабельный участок тяжелой цепи может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 194, 195, 196 или 197.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 189, и вариабельный участок тяжелой
- 34 034414 цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 194.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 189, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 195.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 189, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 196.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 189, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 197.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 190, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 194.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 190, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 195.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 190, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 196.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 190, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 197.
Другой иллюстративный вариант осуществления гуманизированного антитела или антигенсвязывающего фрагмента данного изобретения включает, например, антитело или антиген-связывающий фрагмент, имеющий вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой из последовательностей SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 176 или SEQ ID NO: 168.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 174 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112 или по меньшей мере 113 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 174 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 174, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 174, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 6 по 108, с 5 по 109, с 13 по 103, с 14 по 111 последовательности SEQ ID NO: 174, и т.д.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 175 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112 или по меньшей мере 113 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 175 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 175, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 175, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 7 по 109, с 12 по 104, с 22 по 113, с 18 по 112 последовательности SEQ ID NO: 175, и т.д.
Выражения по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 176 или по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 168 имеют сходное значение.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут иметь, например, вариабельный участок легкой цепи, приведенный в последовательности SEQ ID NO: 168.
Гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения содержит (или дополнительно содержит), например, вариабельный участок тяжелой цепи, который может включать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NOs: 177, 178, 179 или 169.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 177 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112 или по меньшей мере 113 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 177 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 177, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 177, такие
- 35 034414 как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 1 по 106, с 2 по 112, с 11 по 113, с 7 по
102 последовательности SEQ ID NO: 177, и т.д.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 178 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112 или по меньшей мере 113 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 178 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 178, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 178, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 6 по 109, с 8 по 113, с 1 по 102, с 2 по 105 последовательности SEQ ID NO: 178, и т.д.
Выражения по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 179 или по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 169 имеют сходное значение.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут иметь, например, вариабельный участок тяжелой цепи, приведенный в последовательности SEQ ID NO: 169.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать, например:
f) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 174, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 179 или SEQ ID NO: 169;
g) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 175, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 179 или SEQ ID NO: 169;
h) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать аминокислоты по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 176, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 179 или SEQ ID NO: 169;
i) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 168, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 179 или SEQ ID NO: 169.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 168, и вариабельный участок тяжелой цепи может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 169.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 168, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 169.
Другие иллюстративные варианты осуществления гуманизированных антител или антигенсвязывающих фрагментов настоящего изобретения представляют собой те, которые могут содержать вариабельный участок легкой цепи, который может включать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NOs: 180, 181, 182 или 172.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 180 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 или по меньшей мере 107 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 180 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 180, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 180, например последовательность, содержащая аминокислоты с 6 по 102, с 11 по 106, с 1 по 106, с 3 по 95, с 5 по 95 последовательности SEQ ID NO: 180, и т.д.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 181 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106 или по меньшей мере 107 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 181 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 181, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 181, например последовательность, со- 36 034414 держащая аминокислоты с 9 по 106, с 10 по 101, с 1 по 98, с 3 по 99, с 7 по 107 последовательности SEQ
ID NO: 181, и т.д.
Выражения по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO:
182 или по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 172 имеют сходное значение.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут иметь, например, вариабельный участок легкой цепи, приведенный в последовательности SEQ ID NO: 172.
Гуманизированное антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения содержит (или дополнительно содержит), например, вариабельный участок тяжелой цепи, который может включать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NOs: 183, 184, 185 или 173.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 183 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115 или по меньшей мере 116 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 183 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 183, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 183, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 3 по 111, с 1 по 106, с 2 по 104, с 5 по 106, с 10 по 107 последовательности SEQ ID NO: 183, и т.д.
Как используется в данном документе, выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 185 также включает выражение по меньшей мере 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115 или по меньшей мере 116 последовательных аминокислот. Выражение по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 185 охватывает любую возможную последовательность по меньшей мере из 90 последовательных аминокислот, находящуюся в последовательности SEQ ID NO: 185, и особенно те последовательности, которые включают три CDRs последовательности SEQ ID NO: 185, такие как, например, последовательность, содержащая аминокислоты с 3 по 107, с 1 по 115, с 1 по 110, с 22 по 116, с 20 по 115 последовательности SEQ ID NO: 185, и т.д.
Выражения по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 184 или по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 173 имеют сходное значение.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения могут иметь, например, вариабельный участок тяжелой цепи, приведенный в последовательности SEQ ID NO: 173.
В соответствии с настоящим изобретением антитело или антиген-связывающий фрагмент могут содержать, например:
a) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 180, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 185 или SEQ ID NO: 173;
b) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 181, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 185 или SEQ ID NO: 173;
c) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать аминокислоты по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 182, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 185 или SEQ ID NO: 173; или
d) вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 172, и вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 185 или SEQ ID NO: 173.
В соответствии с более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может иметь по меньшей мере 90 последовательных аминокислот последовательности SEQ ID NO: 172, и вариабельный участок тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 90 последовательных аминокислот любой последовательности SEQ ID NO: 173.
В соответствии с еще более конкретным вариантом осуществления данного изобретения вариабельный участок легкой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 172, и вариабельный участок тяжелой цепи может быть приведен в SEQ ID NO: 173.
Антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения может иметь вариабельный
- 37 034414 участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи, как описывалось выше, и может дополнительно содержать аминокислоты константного участка, такие как, например, аминокислоты константного участка человеческого антитела.
В иллюстративном варианте осуществления антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения может содержать, например, константный участок IgG1 человека.
В соответствии с другим иллюстративным вариантом осуществления настоящего изобретения антиген-связывающим фрагментом может быть, например, scFv, Fab, Fab' или (Fab')2.
Продуцирование антител в клетках.
Антитела к KAAG1, которые раскрыты в данном документе, можно получить при помощи ряда способов, которые знакомы специалистам в данной области техники, как, например, методика с использованием гибридомы или способами рекомбинантной ДНК.
В иллюстративном варианте осуществления настоящего изобретения антитела к KAAG1 можно получить с помощью традиционной методики с использованием гибридомы, в котором мышь иммунизируют антигеном, клетки селезенки выделяют и проводят слияние с миеломными клетками без экспрессии HGPRT, и проводят отбор гибридных клеток при помощи среды, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимин (HAT).
В дополнительном иллюстративном варианте осуществления настоящего изобретения антитела к KAAG1 можно получать при помощи способов рекомбинантной ДНК.
Для экспрессии антител к KAAG1 нуклеотидные последовательности, которые могут кодировать любую из легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, или любую другую, можно вставить в вектор экспрессии, т.е. вектор, который содержит элементы для управления транскрипцией и трансляцией вставленной кодирующей последовательности в конкретном хозяине. Эти элементы могут включать регуляторные последовательности, такие как энхансеры, конститутивные и индуцибельные промоторы и 5'- и 3'-нетранслируемые участки. Для построения таких векторов экспрессии можно применять способы, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Эти способы включают методики рекомбинантной ДНК in vitro, методики синтеза и генетическую рекомбинацию in vivo.
Для экспрессии полипептида или РНК, полученной из нуклеотидных последовательностей, которые могут кодировать любую из описанных в данном документе легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина, можно использовать ряд систем вектор экспрессии/хозяин, которые известны специалистам в данной области техники. Такие системы включают, без ограничения, микроорганизмы, как, например, бактерии, трансформированные векторами экспрессии ДНК на основе рекомбинантного бактериофага, плазмиды или космиды; дрожжи, трансформированные векторами экспрессии на основе дрожжей; системы клеток насекомых, инфицированные векторами на основе бакуловирусов, системы растительных клеток, трансформированные вирусными или бактериальными векторами экспрессии; или системы животных клеток. Для долгосрочного продуцирования рекомбинантных белков в системах млекопитающих можно выполнить стабильную экспрессию в клеточных линиях. Например, нуклеотидные последовательности, способные кодировать любую из тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина, описанные в данном документе, могут быть трансформированы в клеточную линию при помощи векторов экспрессии, которые могут содержать вирусные сайты начала репликации и/или эндогенные элементы экспрессии и селективный или видимый маркерный ген на одном и том же или на отдельном векторе. Настоящее изобретение не следует ограничивать используемым вектором или клеткой-хозяином. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения нуклеотидные последовательности, способные кодировать любую из легких и тяжелых цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, можно лигировать в отдельный вектор экспрессии и экспрессировать каждую цепь отдельно. В другом варианте осуществления как легкие, так и тяжелые цепи, способные кодировать любую из легких и тяжелых цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, можно лигировать в один вектор экспрессии и экспрессировать одновременно.
Альтернативно, РНК и/или полипептид можно экспрессировать с вектора, содержащего нуклеотидные последовательности, способные кодировать любую из легких и тяжелых цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, с помощью системы транскрипции in vitro или системы сопряженной транскрипции/трансляции in vitro соответственно.
В целом, клетки-хозяева, которые содержат нуклеотидные последовательности, способные кодировать любую из легких и тяжелых цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, и/или которые экспрессируют пелипептид, кодируемый нуклеотидными последовательностями, способными кодировать любую из легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, или их части, могут быть определены при помощи ряда процедур, известных специалистам в данной области техники. Такие процедуры включают, без ограничения, гибридизации ДНК/ДНК или ДНК/РНК, ПЦРамплификацию и биологические способы анализа белка или метод иммуноанализа белка, которые включают основанные на мембране, растворе или чипе методики определения и/или количественного анализа последовательностей нуклеиновых кислот или аминокислот. Иммунологические способы определения и измерения экспрессии полипептидов при помощи либо специфических поликлональных, либо монокло- 38 034414 нальных антител, известны в данной области техники. Примеры таких методик включают твердофазные иммуноферментные анализы (ELISA), радиоиммуноанализы (RIA) и сортировку флуоресцентноактивированных клеток (FACS).
Специалисты в данной области техники могут легко адаптировать такие методики для настоящего изобретения.
Клетки-хозяева, содержащие нуклеотидные последовательности, способные кодировать любую из легких и тяжелых цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, можно, таким образом, культивировать в условиях для транскрипции соответствующей РНК (мРНК, миРНК, кмРНК и т.д.) и/или экспрессии полипептида из клеточной культуры. Продуцируемый клеткой полипептид может выделяться или может оставаться внутри клетки в зависимости от применяемой последовательности и/или вектора. В иллюстративном варианте осуществления векторы экспрессии, содержащие нуклеотидные последовательности, способные кодировать любую из тяжелых и легких цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе, могут быть сконструированы с содержанием сигнальных последовательностей, которые направляют секрецию полипептида через мембрану прокариотической или эукариотической клетки.
В связи с природной вырожденностью генетического кода, другие ДНК-последовательности, которые кодируют такую же, практически такую же или функционально эквивалентную аминокислотную последовательность, можно получить и применять, например, для экспрессии полипептида, кодируемого нуклеотидными последовательностями, способными кодировать любую из тяжелых и легких цепей иммуноглобулина, описанных в данном документе. Нуклеотидные последовательности настоящего изобретения могут быть сконструированы при помощи способов, которые, как правило, известны в данной области техники для изменения нуклеотидных последовательностей для ряда целей, включая, без ограничения, модификацию клонирования, процессинга и/или экспрессии генетического продукта. Для конструирования нуклеотидных последовательностей можно применять перестановку ДНК при помощи рандомизированной фрагментации и вторичную сборку фрагментов гена и синтетических олигонуклеотидов при помощи ПЦР. Например, олигосахарид-опосредованный сайт-направленный мутагенез можно применять для введения мутаций, которые создают новые рестрикционные сайты, изменяют профили гликозилирования, изменяют предпочтение в использовании кодонов, производят сплайс-варианты и тому подобное.
Кроме того, штамм клеток-хозяев можно выбрать по его способности модулировать экспрессию вставленных последовательностей или перерабатывать экспрессированный полипептид требуемым образом. Такие модификации полипептида включают, без ограничения, ацетилирование, карбоксилирование, гликозилирование, фосфорилирование, липидизацию и ацилирование. В иллюстративном варианте осуществления могут быть желательны антитела к KAAG1, которые содержат специальные структуры или профили гликозилирования. Пост-трансляционный процессинг, который расщепляет препро-форму полипептида, также можно применять с тем, чтобы точно задать белковое нацеливание, фолдинг и/или активность. Различные клетки-хозяева, которые имеют специфическое клеточное устройство и характерные механизмы пост-трансляционных активностей (например, CHO, HeLa, MDCK, HEK293 и W138), можно приобрести или получить из Американской коллекции типовых культур (АТСС) и могут быть выбраны для обеспечения надлежащей модификации и переработки экспрессированного полипептида.
Специалисты в данной области техники легко поймут, что природные, модифицированные или рекомбинантные последовательности нуклеиновых кислот могут быть лигированы с гетерологичной последовательностью, что приведет к трансляции химерного полипептида, содержащего гетерологичные полипептидные фрагменты в любых вышеупомянутых системах хозяев. Такие гетерологичные полипептидные фрагменты могут облегчать очистку химерных полипептидов при помощи коммерчески доступных аффинных матриц. Такие фрагменты включают, без ограничения, глутатион^-трансферазу (GST), белок, связывающий мальтозу, тиоредоксин, пептид, связывающий кальмодулин, 6-His (His), FLAG, cmyc, гемагглютинин (HA) и эпитопы антител, такие как эпитопы моноклональных антител.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к полинуклеотиду, который может содержать нуклеотидную последовательность, кодирующую химерный белок. Химерный белок может содержать партнера слияния (например, HA, Fc и т.д.), слитого с полипептидом (например, полной легкой цепью, полной тяжелой цепью, вариабельными участками, CDR и т.д.), описанным в данном документе.
Специалисты в данной области легко поймут, что последовательности нуклеиновых кислот и полипептидов могут быть синтезированы полностью или частично при помощи хорошо известных в данной области техники химических или ферментативных способов. Например, синтез пептидов можно осуществить при помощи ряда твердофазных методик и оборудования, так, например, для автоматического синтеза можно применять синтезатор пептидов ABI 431A (PE Biosystems). В случае необходимости, для получения вариантного белка аминокислотную последовательность можно изменить в ходе синтеза и/или объединить с последовательностями из других белков.
Конгьюгаты антител.
Антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения может быть соединен с поддающимся обнаружению фрагментом (т.е. предназначенным для обнаружения или диагностики) или
- 39 034414 с терапевтическим фрагментом (для терапевтических целей).
Обнаруживаемый фрагмент представляет собой фрагмент, обнаруживаемый при помощи спектроскопических, фотохимических, биохимических, иммунохимических, химических и/или других физических средств. Обнаруживаемый фрагмент может быть соединен либо напрямую и/либо опосредованно (например, посредством связи, как, например, без ограничений, DOTA- или NHS-связь) с антителами и их антиген-связывающими фрагментами настоящего изобретения при помощи способов, хорошо известных в данной области техники. Можно применять широкий спектр обнаруживаемых фрагментов, при этом выбор зависит от необходимой чувствительности, простоты конъюгации, требований к стабильности и доступного оборудования. Подходящий обнаруживаемый фрагмент включает, без ограничения, флуоресцентную метку, радиоактивную метку (например, без ограничения, 125I, In111, Tc99, I131 и включая позитронно-активные изотопы для ПЭТ-сканера и т.д.), активную метку для ядерного магнитного резонанса, люминесцентную метку, хемилюминесцентную метку, хромофорную метку, ферментную метку (например, и без ограничения, пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу и т.д.), квантовые точки и/или наночастицу. Обнаруживаемый фрагмент может вызывать и/или производить детектируемый сигнал, таким образом, позволяя регистрировать сигнал от обнаруживаемого фрагмента.
В другом иллюстративном варианте осуществления настоящего изобретения антитело или его антиген-связывающий фрагмент может быть соединен (модифицирован) с терапевтическим фрагментом (например, лекарственным средством, цитотоксическим фрагментом, противораковым средством).
В иллюстративном варианте осуществления антитела к KAAG1 или антиген-связывающие фрагменты могут содержать ингибитор, химиотерапевтическое или цитотоксическое средство. Например, антитело или антиген-связывающие фрагменты можно конъюгировать с химиотерапевтическим или цитотоксическим средством. Такие химиотерапевтические или цитотоксические средства включают, без ограничения, иттрий-90, скандий-47, рений-186, йод-131, йод-125 и многие другие известные специалистам в данной области техники (например, лютеций (например, Lu ), висмут (например, Bi ), медь (например, Cu67)). В других случаях химиотерапевтическое или цитотоксическое средство могут содержать, без ограничения, 5-фторурацил, адриамицин, иринотекан, соединения на основе платины, такие как цисплатин и анти-тубулин или анти-миотические соединения, такие как таксаны, доксорубицин и циклофосфамид, эндотоксин представителей рода Pseudomonas, рицин и другие токсины. Пригодные лекарственные конъюгаты антител выбирают из тех, которые находятся в интервале IC50, равном 0,001-150 нМ, 0,001-100 нМ, 0,001-50 нМ, 0,001-20 нМ или 0,001-10 нМ (включительно). Цитотоксическое лекарственное средство, используемое для присоединения, таким образом, выбирают на основе этих критериев.
Кроме того, для осуществления способов настоящего изобретения и, как известно в данной области техники, антитело или антиген-связывающий фрагмент настоящего изобретения (конъюгированное или нет) можно применять в сочетании со второй молекулой (например, вторичным антителом и т.д.), которое способно специфично связываться с антителом или антиген-связывающим фрагментом настоящего изобретения, и которые могут нести необходимый обнаруживаемый, диагностический или терапевтический фрагменты.
Фармацевтические композиции антител и их применение
Также настоящим изобретением охватываются фармацевтические композиции антител к KAAG1 или антиген-связывающих фрагментов (конъюгированных или нет). Фармацевтическая композиция может содержать антитело к KAAG1 или антиген-связывающий фрагмент и может также включать фармацевтически приемлемый носитель.
Другие аспекты настоящего изобретения относятся к композиции, которая может содержать антитело или антиген-связывающий фрагмент, описанный в данном документе, и носитель.
Настоящее изобретение относятся к фармацевтической композиции, которая может содержать антитело или антиген-связывающий фрагмент, описанный в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
В дополнение к активным ингредиентам, фармацевтическая композиция может содержать фармацевтически приемлемые носители, включая воду, забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS), солевые растворы, желатин, масла, спирты и другие наполнители и вспомогательные добавки, которые способствуют переработке активных соединений в препараты, которые можно применять в фармацевтических целях. В других случаях такие препараты могут быть простерилизованы.
Как используется в данном документе выражение фармацевтическая композиция означает терапевтически эффективные количества средства вместе с фармацевтически приемлемыми разбавителями, консервантами, растворителями, эмульгаторами, вспомогательным средством и/или носителями. Как используется в данном документе выражение терапевтически эффективное количество относится к такому количеству, которое обеспечивает терапевтический эффект для данного состояния и схемы введения. Такие композиции представляют собой жидкости или лиофилизированные или иным образом высушенные составы и включают разбавители с различным содержанием буферных компонентов (например, Tris-HCl, ацетат, фосфат), рН и ионной силой, добавок, как, например, альбумин или желатин, для предупреждения абсорбции на поверхностях детергентов (например, Tween 20, Tween 80, Pluronic F68,
- 40 034414 соли желчной кислоты). Солюбилизирующие средства (например, глицерин, полиэтиленглицерин), антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, матабисульфит натрия), консерванты (например, тимеросал, бензиловый спирт, парабены), вещества-наполнители или модификаторы концентрации (например, лактоза, маннит), ковалентное присоединие полимеров, как, например, полиэтиленгликоля с белком, комплексообразование с ионами металлов или внесение материала в препараты или на них в виде частиц полимерных соединений, как, например, полимолочной кислоты, полигликолевой кислоты, гидрогелей и т.д., или на липосомы, микроэмульсии, мицеллы, однослойные или многослойные везикулы, тени эритроцитов или сферопласты. Такие композиции будут оказывать действие на физическое состояние, растворимость, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость клиренса in vivo. Композиции с контролируемым или пролонгированным высвобождением включают состав в липофильном депо (например, жирные кислоты, виды воска, масла). Также настоящим изобретением охватываются композиции в виде частиц, покрытых полимерами (например, полоксамерами или полоксаминами). Другие варианты осуществления композиций настоящего изобретения включают защитные оболочки для форм в виде частиц, ингибиторы протеаз или усилители проникновения для различных путей введения, включая парентеральные, пульмональные, назальные, пероральные, вагинальные, ректальные пути. В одном варианте осуществления фармацевтическую композицию вводят парентерально, в район опухоли, трансмукозально, трансдермально, внутримышечно, внутривенно, внутрикожно, подкожно, внутрибрюшинно, интравентрикулярно, интракраниально и в опухоль.
Дополнительно, как используется в данном документе выражения фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтический носитель известны в данной области техники и включают, без ограничения, 0,01-0,1 или 0,05 М фосфатный буфер или 0,8% физиологический раствор. Дополнительно, такие фармацевтически приемлемые носители могут быть водными или неводными растворами, суспензиями и эмульсиями. Примерами неводных растворов являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, как, например, оливковое масло, и инъекционные органические сложные эфиры, как, например, этилолеат. Водные носители включают воду, спирто/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевой раствор и буферную среду. Парентеральные среды для лекарства включают раствор хлорида натрия, раствор Рингера с декстрозой, декстрозу с хлоридом натрия, раствор Рингера с нелетучими маслами и лактатом. Внутривенные среды включают жидкие и питательные наполнители, электролитные наполнители, как, например, те, которые основаны на растворе Рингера с декстрозой, и т.д. Также могут присутствовать консерванты и другие добавки, такие как, например, противомикробные средства, антиоксиданты, объединяющие средства, инертные газы и т.п.
Для любого соединения терапевтически эффективная доза может быть рассчитана изначально либо при анализах клеточных культур, либо в животных моделях, таких как мыши, крысы, кролики, собаки или свиньи. Животную модель можно применять для определения диапазонов концентрации и пути введения. Такую информацию затем можно применять для определения пригодных доз и путей введения у людей. Такие методики хорошо известны специалисту в данной области техники, и терапевтически эффективная доза относится к количеству активного ингредиента, которое облегчит симптомы или состояние. Терапевтическую эффективность и токсичность можно определить при помощи стандартных фармацевтических процедур в культурах клеток или с экспериментальными животными, как, например, при помощи подсчета и установления различий статистических данных ED50 (доза, терапевтически эффективная у 50% популяции) и LD50 (доза, летальная для 50% популяции). Любые описанные выше терапевтические композиции можно применять для любого нуждающегося в терапии подобного рода субъекта, включая, без ограничения, млекопитающих, таких как собаки, коты, коровы, лошади, кролики, обезьяны и люди.
Используемые в настоящем изобретении фармацевтические композиции можно вводить посредством любого числа путей, включая, без ограничения, пероральный, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, интрамедулярный, интратекальный, интравентрикулярный, трансдермальный, подкожный, интраперитонеальный, интраназальный, энтеральный, местный, подъязычный или ректальный способы.
Способы применения
Термин лечение в целях настоящего раскрытия относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам, где преследуется цель предотвратить или замедлить (уменьшить) целевое патологическое состояние или расстройство. Нуждающиеся в лечении включают уже имеющих расстройство, а также тех, которые предрасположены к развитию расстройства, или тех, у кого расстройство необходимо предупредить.
Настоящее изобретение в одном своем аспекте предоставляет способ лечения лица, страдающего раком молочной железы, или с подозрением на него, с использованием антитела или антигенсвязывающего фрагмента, который способен специфично связываться с KAAG1.
В соответствии с настоящим изобретением данное лицо может страдать РМЖ с отрицательными экспрессией рецептора эстрагена, экспрессией рецептора прогестерона и/или экспрессией Her2 (или отсутствием избыточной экспрессии).
Также в соответствии с настоящим изобретением лицо может страдать РМЖ с низкой экспрессией
- 41 034414 по меньшей мере одного из следующего: рецептора эстрагена, рецептора прогестерона и/или Her2.
Например, опухоль может быть негативной с точки зрения (или иметь низкую экспрессию) как экспрессии рецептора эстрагена, так и экспрессии рецептора прогестерона.
В соответствии с настоящим изобретением данное лицо может страдать РМЖ, который характеризуется как тройной негативный или базальноподобный.
В еще одном аспекте данное изобретение относится к применению выделенных антитела или антиген-связывающего фрагмента, описанных в данном документе, в лечении или диагностике РМЖ, характеризуемого отсутствием экспрессии рецептора эстрогена, экспрессии рецептора прогестерона и/или избыточной экспрессии Her2, или низкой экспрессией по меньшей мере одного из этих трех маркеров.
В соответствии с настоящим изобретением способ может включать, например, введение нуждающемуся в этом лицу антитела или антиген-связывающего фрагмента, который способен специфично связываться с KAAG1. Нуждающееся лицо предпочтительно отбирают на основании отсутствия экспрессии ER, экспрессии PgR и/или отсутствию избыточной экспрессии белка HER2. Клинические исследования этих маркеров обычно проводят, используя гистопатологические способы (иммуногистохимические, FISH и т.п.), и/или путем изучения экспрессии генов (см., например, Dent et al, 2007, Bernstein and Lacey, 2011). Нуждающимся лицом, таким образом, может быть лицо, у которого был установлен диагноз тройного негативного РМЖ или базальноподобного РМЖ.
Таким образом, настоящее изобретение в особенности относится к терапевтическому лечению лица, страдающего тройным негативным РМЖ или базальноподобным РМЖ с применением антитела к KAAG1.
Подходящие антитела или антиген-связывающие фрагменты включают те, которые способны специфично связываться с KAAG1 на поверхности клеток опухоли. Такие антитела могут предпочтительно связываться с эпитопом, находящимся в KAAG1 в пределах аминокислот с 30 по 84, включительно (например, в KAAG1 в пределах аминокислот с 36 по 60 (включительно) или в пределах аминокислот с 61 по 84 (включительно)).
Пригодными антителами могут быть те, которые выступают посредниками в антитело-зависимой клеточной цитотоксичности, и те, которые коньюгированы с терапевтическим фрагментом.
В соответствии с настоящим изобретением антитела могут быть, например, моноклональным антителом, химерным антителом, гуманизированным антителом или их антиген-связывающим фрагментом.
Способ настоящего изобретения может включать введение антитела или антиген-связывающегося фрагмента в комбинации с ингибитором, химиотерапевтическим или цитотоксическим средством.
Другие способы лечения, охваченные настоящим изобретением, включают введение других типов ингибиторов KAAG1, таких как терапевтические средства на антисмысловой основе (миРНК, антисмысловые средства, рибозимы и т.п.).
Настоящее изобретение, таким образом, предлагает способ лечения тройного негативного РМЖ или базальноподобного РМЖ путем введения ингибитора активности или экспрессии KAAG1 нуждающемуся лицу.
Ингибитор может содержать нуклеотидную последовательность, комплементарную последовательности SEQ ID NO: 1 или ее фрагменту. Более конкретно ингибитор может содержать нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеотидам 738-992 (включительно) последовательности SEQ ID NO: 1 или ее фрагменту. Например, ингибитор может содержать по меньшей мере 10 последовательных нуклеотидов (по меньшей мере 15, по меньшей мере 20), комплементарных последовательности SEQ ID NO: 1 или нуклеотидам 738-992 (включительно) последовательности SEQ ID NO: 1.
В некоторых случаях антитела к KAAG1 или их фрагменты могут взаимодействовать с раковыми клетками, экспрессирующими KAAG1, и вызывать иммунную реакцию, выступая посредником в АЗКЦ. В других случаях антитела и фрагменты к KAAG1 могут блокировать взаимодействие KAAG1 с его белковыми партнерами.
В конкретных случаях, антитела к KAAG1 и их антиген-связывающие фрагменты можно вводить одновременно с другими лечебными средствами, предназначенными для такого же состояния (ингибитор, химиотерапевтические или цитотоксические средства). В связи с этим, антитела можно вводить с ингибитором PARP1, ингибитором EGFR, антимитотическими средствами (например, таксанами), средствами на основе платины (например, цисплатин), ДНК-разрушающими средствами (например, доксорубицин) и другими противораковыми терапевтическими средствами, которые известны специалистам в данной области техники. В других случаях, антитела к KAAG1 и их антиген-связывающие фрагменты можно вводить с другими терапевтическими антителами. Они включают, без ограничения, антитела, которые нацелены на EGFR, CD-20 и Her2.
Настоящее изобретение относится в своем дополнительном аспекте к способу ингибирования роста клеток, экспрессирующих KAAG1, которые являются эстроген-негативными (ER-негативными), прогестерон-негативными (PgR-негативными) и/или у которых отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2негативные), причем способ может включать приведение в контакт клетки с эффективным количеством антитела или антиген-связывающего фрагмента, описанных в данном документе.
Настоящее изобретение также охватывает способ лечения рака или ингибирования роста клеток,
- 42 034414 экспрессирующих KAAG1, которые являются эстроген-негативными (ER-негативными), прогестероннегативными (PgR-негативными) и/или у которых отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2негативные), у млекопитающих, причем способ может включать введение антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанных в данном документе, нуждающемуся в этом млекопитающему.
В дополнительных аспектах настоящее изобретение предлагает способ лечения, диагностические способы и способ обнаружения при помощи антитела или антиген-связывающего фрагмента настоящего изобретения и применение таких антител или антиген-связывающего фрагмента в производстве фармацевтической композиции или лекарственного средства для таких целей.
Способ лечения, охваченный настоящим изобретением, включает введение антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, нуждающемуся в этом млекопитающему, и особенно пациенту, имеющему рак, или с подозрением на рак, характеризующийся как эстрогеннегативный (ER-негативный), прогестерон-негативный (PgR-негативный) и/или при котором отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2-негативный).
Изобретение в других аспектах также предоставляет способы для уменьшения распространения опухоли, инвазивности опухоли или вызывает лизис опухоли, которые могут включать введение выделенного антитела или антиген-связывающего фрагмента нуждающемуся в этом млекопитающему.
Изобретение, таким образом, относится к применению выделенного антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанного в данном документе, для (производстве фармацевтической композиции для) лечения рака, уменьшения распространения опухоли, инвазивности опухоли, образования опухоли или вызова лизиса опухоли, состоящей из экспрессирующих KAAG1 опухолевых клеток, которые являются эстроген-негативными (ER-негативными), прогестерон-негативными (PgR-негативными) и/или в которых отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2-негативные).
Антитело или антиген-связывающий фрагмент, конкретнее, можно применять при злокачественной опухоли, включая, например, злокачественную опухоль, обладающую способностью к метастазированию, и/или опухолевые клетки, которые характеризуются безъякорным ростом. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент настоящего изобретения также можно применять для диагностики рака. Диагностику рака можно осуществлять in vivo при помощи введения антитела или антиген-связывающего фрагмента настоящего изобретения млекопитающему, которое страдает от рака, или у него подозревают наличие рака. Диагностику также можно осуществлять ex vivo путем приведения в контакт образца, полученного от млекопитающего, с антителом или антиген-связывающим фрагментом и выявления присутствия или отсутствия клеток (опухолевых клеток), экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1.
Настоящее изобретение также охватывает способ выявления рака или определения клеток, экспрессирующих KAAG1, которые являются эстроген-негативными (ER-негативными), прогестероннегативными (PgR-негативными), и/или у которых отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2негативные), у млекопитающих, причем способ может включать введение антитела или антигенсвязывающего фрагмента, описанных в данном документе, нуждающемуся в этом млекопитающему.
Настоящее изобретение в другом своем аспекте относится к способу обнаружения клеток, экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1, при этом способ может включать приведение в контакт клетки с антителом или антиген-связывающим фрагментом, описанным в данном документе, и обнаружение комплекса, образованного антителом и клеткой, экспрессирующей KAAG1 или вариант KAAG1. Иллюстративные варианты осуществления антител или антиген-связывающих фрагментов, применяемых в способах обнаружения, являются такими, которые могут связываться с внеклеточным участком KAAG1.
Другими иллюстративными вариантами осуществления антител или антиген-связывающего фрагмента, применяемого в способах обнаружения, являются те, которые связываются с KAAG1 или вариантом KAAG1, экспрессированным на поверхности опухолевых клеток, которые являются эстрогеннегативными (ER-негативными), прогестерон-негативными (PgR-негативными) и/или у которых отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2-негативные).
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу обнаружения KAAG1 (SEQ ID NO: 2), варианта KAAG1, имеющего по меньшей мере 80% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 2, или секретированной формы или циркулирующей формы KAAG1 или варианта KAAG1, при этом способ может включать приведение в контакт клетки, экспрессирующей KAAG1 или вариант KAAG1, или образца (биопсии, сыворотки, плазмы, мочи и т.д.)/ содержащего или с подозрением на содержание KAAG1 или варианта KAAG1, с описанными в данном документе антителом или антиген-связывающими фрагментами, и количественного измерения связывания. Образец может быть взят у млекопитающего (например, человека), у которого может наблюдаться рак (например, раком молочной железы, который характеризуется как эстроген-негативный (ER-негативный), прогестерон-негативный (PgR-негативный) и/или у которого отсутствует избыточная экспрессия Her2 (Her2-негативный), такой как базальноподобный РМЖ или тройной негативный РМЖ) или у которого подозревают рак. Образец может представлять собой образец ткани, полученный от млекопитающего, или надосадочную жидкость клеточной культуры.
В соответствии с настоящим изобретением образец может быть образцом сыворотки, образцом плазмы, образцом крови или асцитической жидкостью, полученной от млекопитающего. Описанное в
- 43 034414 данном документе антитело или антиген-связывающий фрагмент может преимущественно обнаруживать секретированную или циркулирующую форму (циркулирующую в крови) KAAG1.
Способ может включать количественное определение комплекса, образованного антителом или антиген-связывающим фрагментом, связанным с KAAG1 или с вариантом KAAG1.
Связывание антитела с антигеном будет приводить к повышению предполагаемой молекулярной массы антигена. Таким образом, при специфическом связывании антитела или антиген-связывающего фрагмента с антигеном происходит физическое изменение.
Такие изменения можно обнаружить при помощи, например, электрофореза с последующим вестерн-блоттингом и окрашиванием геля или блотта, масс-спектрометрии, ВЭЖХ в сочетании с компьютерной обработкой или др. Устройства, способные рассчитывать сдвиг молекулярной массы, известны в данной области техники и включают, например, Phosphorimager™.
Если антитело включает, например, обнаруживаемую метку, то комплекс антиген-антитело можно обнаружить по флюоресценции, излучаемой меткой, радиационному излучению метки, ферментативной активности метки со своим субстратом, или др.
Обнаружение и/или измерение связывания антитела или антиген-связывающего фрагмента с антигеном может быть осуществлено при помощи ряда способов, известных в данной области техники. Связывание антитела или антиген-связывающего фрагмента с антигеном можно отслеживать при помощи устройства, способного выявлять сигнал, излучаемый обнаруживаемой меткой (радиационное излучение, флюоресценция, изменение цвета и т.д.). Такое устройство предоставляет данные, которые указывают на произошедшее связывание, и может также предоставлять указание на количество антитела, связанного с антигеном. Устройство (обычно, соединенное с компьютером) может также быть способно рассчитывать разницу между фоновым сигналом (например, сигналом, получаемым при отсутствии связывания антиген-антитело) или фоновым шумом и сигналом, получаемым при специфическом связывании антителоантиген. Такие устройства, таким образом, могут предоставлять пользователю показатели и выводы относительно того, был ли выявлен антиген или нет.
Дополнительные аспекты настоящего изобретения относятся к наборам, которые могут включать один или несколько контейнеров, содержащих одно или несколько описанных в данном документе антител или антиген-связывающих фрагментов.
Нуклеиновые кислоты, векторы и клетки.
Антитела обычно получают в клетках, допускающих экспрессию легкой цепи и тяжелой цепи, экспрессируемых с вектора(ов), содержащего(их) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь и/или тяжелую цепь.
Настоящее изобретение, таким образом, охватывает нуклеиновые кислоты, способные кодировать любые из описанных в данном документе CDRs, вариабельные участки легкой цепи, вариабельные участки тяжелой цепи, легкие цепи, тяжелые цепи.
Настоящее изобретение, таким образом, в дополнительном аспекте относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи антитела, которое способно специфически связываться с KAAG1.
Иллюстративные варианты осуществления нуклеиновых кислот, охваченные настоящим изобретением, включают нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 70% идентичность последовательности (т.е. по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80% идентичность последовательности) с любой одной из последовательностей SEQ ID NOs: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 45 и 47, фрагментов (например, по меньшей мене 10, по меньшей мере 15, по меньшей мере 20 последовательных нуклеотидов) и комплементарных им последовательностей.
В соответствии с вариантом осуществления данного изобретения нуклеиновая кислота может в особенности кодировать вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи антитела, которое может быть способно вызывать гибель (устранение, уничтожение, лизис) опухолевых клеток, экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1.
В соответствии с другим вариантом осуществления данного изобретения нуклеиновая кислота может в особенности кодировать вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи антитела, которое может быть способно снижение распространения опухолевых клеток, экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1.
В соответствии с другим вариантом осуществления данного изобретения нуклеиновая кислота может, в частности, кодировать вариабельный участок легкой цепи и/или вариабельный участок тяжелой цепи антитела, которое может быть способно уменьшать или затруднять образование опухолей, экспрессирующих KAAG1 или вариант KAAG1.
Иллюстративные варианты осуществления нуклеиновых кислот настоящего изобретения включают нуклеиновые кислоты, кодирующие вариабельный участок легкой цепи, содержащий:
a) последовательность CDRL1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 72 и SEQ ID NO: 73;
b) последовательность CDRL2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 74 и SEQ ID NO: 75 и SEQ ID NO: 76; или
- 44 034414
c) последовательность CDRL3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78 и SEQ ID NO: 79.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать вариабельный участок легкой цепи, который может содержать по меньшей мере два CDRs из CDRL1, CDRL2 или
CDRL3.
Также в соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать вариабельный участок легкой цепи, который может содержать один CDRL1, один CDRL2 и один CDRL3.
Настоящее изобретение также относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий:
a) последовательность CDRH1, включающей SEQ ID NO: 80;
b) последовательность CDRH2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84 и SEQ ID NO: 85; или
c) последовательность CDRH3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87 и SEQ ID NO: 88.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать по меньшей мере два CDRs из CDRH1, CDRH2 или CDRH3.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать вариабельный участок тяжелой цепи, который может содержать один CDRH1, один CDRH2 и один CDRH3.
Также настоящим изобретением охватываются нуклеиновые кислоты, кодирующие варианты антитела по меньшей мере с одной консервативной аминокислотной заменой.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать CDR, содержащий по меньшей мере одну консервативную аминокислотную замену.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать CDR, содержащий по меньшей мере одну консервативную аминокислотную замену по меньшей мере в двух из CDRs.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать CDR, содержащий по меньшей мере одну консервативную аминокислотную замену в 3 CDR.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать CDR, содержащий по меньшей мере две консервативные аминокислотные замены по меньшей мере в одном из CDRs.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать CDR, содержащий по меньшей мере две консервативные аминокислотные замены по меньшей мере в двух из CDRs.
В соответствии с настоящим изобретением нуклеиновая кислота может кодировать CDR, содержащий по меньшей мере две консервативные аминокислотные замены в трех CDRs.
Другие аспекты настоящего изобретения относятся к нуклеиновой кислоте, кодирующей вариабельный участок легкой цепи, имеющей по меньшей мере 70, 75, 80% идентичность последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 124 и SEQ ID NO: 125.
Другие аспекты настоящего изобретения помимо этого относятся к нуклеиновой кислоте, кодирующей вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий по меньшей мере 70, 75, 80% идентичность последовательности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 146 и SEQ ID NO: 147.
В еще другом аспекте настоящее изобретение относится к вектору, содержащему описанные в данном документе нуклеиновые кислоты.
В соответствии с настоящим изобретением вектор может представлять собой вектор экспрессии.
Вектор, который содержит элементы для управления транскрипцией и трансляцией вставленной кодирующей последовательности у конкретного хозяина, известны в данной области техники. Эти элементы могут включать регуляторные последовательности, такие как энхансеры, конститутивные и индуцибельные промоторы и 5'- и 3'-нетранслируемые участки. Для построения таких векторов экспрессии можно применять способы, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Эти способы включают методики рекомбинантной ДНК in vitro, методики синтеза и генетическую рекомбинацию in vivo.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к выделенной клетке, которая может содержать описанную в данном документе нуклеиновую кислоту.
Выделенная клетка может содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный участок легкой цепи, и нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный участок тяжелой цепи, либо на от- 45 034414 дельных векторах, либо на одном векторе. Выделенная клетка также может содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь, и нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь, либо на отдельных векторах, либо на одном векторе.
В соответствии с настоящим изобретением клетка может быть способна к экспрессии, сборке и/или секреции антитела или его антиген-связывающего фрагмента.
В другом аспекте настоящее изобретение предоставляет клетку, которая может содержать и/или может экспрессировать описанное в данном документе антитело.
В соответствии с настоящим изобретением клетка может содержать нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный участок легкой цепи, и нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный участок тяжелой цепи.
Клетка может быть способна к экспрессии, сборке и/или секреции антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.
Приведенные ниже примеры представлены для дополнительного описания деталей настоящего изобретения.
Примеры
Пример 1.
Данный пример раскрывает способы, используемые для превращения Fab в полные химерные моноклональные антитела IgG1.
За исключением возможности проведения исследования взаимодействия моноклональных антител с Fab фрагментами и белка KAAG1, применение Fab может быть ограничено в отношении проведения достоверных in vitro и in vivo исследований для подтверждения биологической функции антигена. Таким образом, было необходимо перенести вариабельные участки легкой и тяжелой цепей, содержавшиеся в Fab, в полные каркасы антител для выработки химерных IgG1 мыши-человека. Векторы экспрессии как для легкой, так и для тяжелой цепи иммуноглобулина построили таким образом, чтобы i) последовательности исходного бактериального сигнального пептида перед Fab в векторах экспрессии были заменены сигнальными пептидами млекопитающих и ii) константные участки легкой и тяжелой цепей в антителах мыши были заменены константными участками человека. В способах осуществления такого переноса используют стандартные методики молекулярной биологии, которые известны специалистам в данной области техники.
Вектор экспрессии легкой цепи - существующую экспрессирующую плазмиду млекопитающих, называемую pTTVH8G (Durocher et al., 2002), предназначенную для применения в системе временной трансфекции 293E, модифицировали для размещения вариабельного участка легкой цепи мыши. Полученная химерная легкая цепь мыши-человека содержала вариабельный участок мыши, за которым следовал константный домен каппа человека. Последовательность кДНК, кодирующую константный домен каппа человека, амплифицировали с помощью ПЦР с применением праймеров OGS1773 и OGS1774 (SEQ ID NO: 55 и 56 соответственно). Нуклеотидная последовательность и соответствующая аминокислотная последовательность константного участка каппа человека показаны в SEQ ID NO: 57 и 58 соответственно. Полученный ПЦР-продукт длиной в 321 пару оснований лигировали в pTTVH8G сразу после последовательности сигнального пептида VEGF A человека (NM_003376). В ходе данного этапа клонирования также разместили уникальные сайты для рестрикционных эндонуклеаз, которые делают возможным точное размещение кДНК, кодирующих вариабельные участки легкой цепи мыши. Последовательность полученной в результате этого плазмиды экспрессии, называемой pTTVK1, показана в SEQ ID NO: 59. Основываясь на последовательностях, раскрытых в табл. 2, были разработаны праймеры ПЦР, специфичные для вариабельного участка легкой цепи антител 3D3, 3G10, 3C4 и 3A4 (SEQ ID NOS: 15, 19, 23 и 47 соответственно), которые включали на своем 5'-конце последовательность, идентичную последним 20 парам оснований сигнального пептида VEGF А. Последовательности этих праймеров показаны в SEQ ID NOS: 60, 61, 62 и 213. Один и тот же обратный праймер использовали для амплификации всех трех вариабельных участков легких цепей 3D3, 3G10 и 3C4, поскольку с самого края 3'-концы были идентичными. Праймер (SEQ ID NO: 63) включал на своем 3'-конце последовательность, идентичную первым 20 парам оснований константного домена каппа человека. Праймер SEQ ID NO: 214 использовали для амплификации вариабельного участка легкой цепи 3A4. Как на ПЦР-фрагменты, так и на расщепленную pTTVK1 воздействовали 3'-5' экзонуклеазной активностью ДНК-полимеразы T4, что в результате дало комплементарные концы, которые соединили путем гибридизации. Полученные в результате реакции гибридизации продукты трансформировали в компетентные Е. coli, и экспрессирующие плазмиды проверили путем секвенирования для того, чтобы убедиться, что вариабельные участки легкой цепи мыши правильно вставлены в вектор экспрессии pTTVK1. Специалисты в данной области техники легко поймут, что способ, используемый для конструирования плазмиды экспрессии легкой цепи, применим к антителам к KAAG1, содержащимся в исходной библиотеке Fab.
Вектор экспрессии тяжелой цепи - вектор экспрессии, который давал тяжелую цепь иммуноглобулина 3A4, конструировали аналогичным образом, как и описанную выше pTTVK1, для получения легких цепей иммуноглобулинов. Плазмиду pYD11 (Durocher et al., 2002), которая содержит последовательность сигнального пептида IgGK человека, а также участки CH2 и CH3 Fc-домена человека IgG1, модифициро- 46 034414 вали путем лигирования последовательности кДНК, кодирующей константный участок CH1 человека. Праймеры ПЦР OGS1769 и OGS1770 (SEQ ID NOS: 64 и 65), сконструированные так, чтобы содержать уникальные сайты эндонуклеаз рестрикции, использовали для амплификации участка IgG1 CH1 человека, содержащего нуклеотидную последовательность и соответствующую аминокислотную последовательность, которые показаны в SEQ ID NO: 66 и 67. После лигирования фрагмента из 309 пар оснований CH1 человека непосредственно после сигнальной последовательности пептида IgGK модифицированную плазмиду (SEQ ID NO: 68) назвали pYD15. Если выбранный вариабельный участок тяжелой цепи лигирован в вектор, то полученная плазмида кодирует полную тяжелую цепь иммуноглобулина IgG1 с константными участками человека. Основываясь на последовательностях, раскрытых в табл. 2, были разработаны праймеры ПЦР, специфичные для вариабельного участка тяжелой цепи антител 3D3, 3G10, 3C4 и 3A4 (SEQ ID NOS: 17, 21, 25 и 45 соответственно), которые включали на своем 5'-конце последовательность, идентичную последним 20 парам оснований сигнального пептида IgGK. Последовательности этих праймеров показаны в SEQ ID NOS: 69 (3D3 и 3G10 имеют одинаковую последовательность 5'-конца), SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 215 для 3A4. Один и тот же обратный праймер использовали для амплификации всей трех вариабельных участков тяжелых цепей 3D3, 3C4 и 3G10, поскольку с самого края 3'концы были идентичными. Праймер (SEQ ID NO: 71) включал на своем 3'-конце последовательность, идентичную первым 20 парам оснований константного домена CH1 человека. Для вариабельного участка тяжелой цепи 3A4 использовали SEQ ID NO: 216. Как на ПЦР-фрагменты, так и на расщепленную pYD15, воздействовали 3'-5' экзонуклеазной активностью ДНК-полимеразы Т4, что в результате дало комплементарные концы, которые соединяли путем гибридизации. Полученные в результате реакции гибридизации продукты трансформировали в компетентные Е. coli, и экспрессирующие плазмиды проверили путем секвенирования для того, чтобы убедиться, что вариабельные участки тяжелой цепи мыши правильно вставлены в вектор экспрессии pYD15. Специалисты в данной области техники легко поймут, что способ, используемый для конструирования плазмиды экспрессии тяжелой цепи, применим к антителам к KAAG1, содержащимся в исходной библиотеке Fab.
Экспрессия химерного IgG1 человека в клетках 293E.
Полученные, как описано выше, векторы экспрессии, которые кодировали легкие и тяжелые цепи иммуноглобулинов, экспрессировали в клетках 293E с помощью системы для временной трансфекции (Durocher et al., 2002). Можно использовать другие способы временной или стабильной экспрессии. Соотношение легкой к тяжелой цепи оптимизировали с тем, чтобы достигнуть наибольшего выхода антитела в среде для тканевой культуры и, как оказалось, оно составило 9:1 (L:H). Способность антител (моноклональных, химерных или гуманизированных) к KAAG1 связываться с рекомбинантной Fc-KAAG1 измеряли с помощью ELISA и сравнивали с исходными Fabs мыши.
Схема, использованная для превращения других Fabs в полный IgG (включая 3A4) и для экспрессии антител, описана более детально в международной публикации № РСТ/СА2012/000296, полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.
Пример 2. Гуманизация мышиного моноклонального антитела 3A4.
Международные патенты №№ РСТ/СА2009/001586, РСТ/СА2010/001795 и РСТ/СА2012/000296 описывают иллюстративную методологию, применяемую для создания гуманизированных вариабельных участков легкой цепи и тяжелой цепи.
Гуманизация вариабельного участка легкой цепи антитела 3A4 включала 11 мутаций в его предложенном гуманизированном каркасе для 100% гуманизации каркаса. Гуманизация вариабельного участка тяжелой цепи антитела 3A4 включала 23 мутаций в его предложенном гуманизированном каркасе для 100% гуманизации каркаса. Эти на 100% гуманизированные последовательности вариабельного участка обозначены Lvh1 и Hvh1 соответственно (SEQ ID NO: 189 и 194). Также были сконструированы дополнительные гуманизированные последовательности, в которых несколько остатков из мышиных последовательностей 3A4 сохранили исходя из тщательного структурного и сравнительного анализов последовательностей, которые показали высокую вероятность изменения антиген-связывающей аффинности в случае введения мутаций в эти положения. Эти последовательности вариабельных участков обозначены Lvh2, Hvh2, Hvh3 и Hvh4 (SEQ ID NO: 190, 195, 196 и 197).
Два варианта гуманизированных легких цепей (включающие константный участок) в данном документе определены как Lh1 (SEQ ID NO: 199) и Lh2 (SEQ ID NO: 200). Четыре варианта гуманизированных тяжелых цепей (включающие константный участок) в данном документе определены как Hh1 (SEQ ID NO: 202), Hh2 (SEQ ID NO: 203), Hh3 (SEQ ID NO: 204) и Hh4 (SEQ ID NO: 205). Две гуманизированные легкие цепи и 4 гуманизированные тяжелые цепи можно собрать в 8 гуманизированных антител (Lh1Hh1, Lh1Hh2, Lh1Hh3, Lh1Hh4, Lh2Hh1, Lh2Hh2, Lh2Hh3 и Lh2Hh4).
В случае гуманизированной последовательности Lvh2 (SEQ ID NO: 190) легкой цепи 3A4 сохранялись каркасные остатки Val-L2 и Lys-L45 из мышиной последовательности, поскольку остаток L2 наполовину погружен, контактирует как с CDR-L1, так и с CDR-L3, и имеет предрасположенность к контакту с антигеном, в то время как остаток L45 взаимодействует с тяжелой цепью. Отмечали, что оба этих мышиных остатка могут встречаться в человеческих каркасах. В случае гуманизированной последовательности Hvh2 (SEQ ID NO: 195) тяжелой цепи 3A4 сохранялись каркасные остатки Ile-H2 и Lys-L73 из
- 47 034414 мышиной последовательности, поскольку остаток H2 наполовину погружен, контактирует как с CDR-H1, так и с CDR-H3 и имеет предрасположенность к контакту с антигеном, в то время как остаток H73 принадлежит к верньерной зоне, поддерживающей CDR-H2, и оба этих мышиных остатка могут встречаться в человеческих каркасах. В случае гуманизированной последовательности Hvh3 (SEQ ID NO: 196) тяжелой цепи 3A4 сохранялись возвратные мутации Ile-H2 и Lys-L73, и помимо них сохранялись каркасные остатки Ile-H48, Ala-H67, Leu-H69 и Val-H71 из мышиной последовательности, поскольку все эти дополнительные мышиные остатки являются погруженными остатками и входят в верньерную зону, поддерживающую CDR-H2, и, кроме того, мышиный остаток H71 может встречаться в человеческих каркасах. В случае гуманизированной последовательности Hvh4 (SEQ ID NO: 197) тяжелой цепи 3A4 включили все 6 возвратных мутаций гуманизированного варианта Hvh3 плюс два дополнительных мышиных каркасных остатка Lys-H38 и Lys-H66, поскольку они являются наполовину погруженными остатками, близкими к CDR-H2.
Получаемые в результате аминокислотные последовательности мышиных и гуманизированных цепей приведены в табл. 1. Выравнивание вариабельных участков мышиных и гуманизированных легких цепей показано на фиг. 1a, а выравнивание вариабельных участков мышиных и гуманизированных тяжелых цепей показано на фиг. 1b.
На фиг. 2a и 2b представлено выравнивание вариабельного участка мышиной легкой цепи с вариабельным участком на 100% гуманизированной легкой цепи и вариабельного участка мышиной тяжелой цепи с вариабельным участком на 100% гуманизированной тяжелой цепи соответственно. Этот чертеж иллюстрирует аминокислоты, которые являются консервативными, и аминокислоты, которые были выбраны для замены.
Пример 3. Сборка и экспрессия гуманизированных вариантных антител 3A4.
Цель данных исследований заключается в определении кинетических параметров антител к кластерину. В частности, для определения того, влияет ли гуманизация моноклонального антитела 3A4 к KAAG1 на кинетические параметры его связывания с KAAG1 человека. С этой целью разработали способ кинетического анализа с помощью прибора ProteOn XPR3 6 от BioRad. KAAG1 человека иммобилизировали на сенсорном чипе. Вводили полноразмерные антитела или Fab-фрагменты и позволяли им взаимодействовать с иммобилизированным KAAG1.
Построение плазмиды, кодирующей химерные (мышиные) тяжелую и легкую цепи 3A4.
Тяжелую и легкую цепи химерного антитела амплифицировали с помощью ПЦР с исходными цепями иммуноглобулина мыши с применением следующих олигонуклеотидных праймерных пар: тяжелая цепь, 5'-олиго, кодируемый SEQ ID NO: 206, и 3'-олиго, кодируемый SEQ ID NO: 207; легкая цепь, 5'олиго, кодируемый SEQ ID NO: 208, и 3'-олиго, кодируемый SEQ ID NO: 209. Полученные ПЦРпродукты расщепляли с помощью Hind III и клонировали в pK-CR5 (SEQ ID NO: 210), предварительно расщепленную с помощью Hind III.
Построение плазмид, кодирующих варианты 1-4 гуманизированной тяжелой цепи 3A4.
Фрагменты, кодирующие гуманизированный участок тяжелой цепи антитела 3A4 (Hh1, Hh2, Hh3 и Hh4), заказали у GenScript (Пискатавэй, США). ДНК-фрагменты, включающие последовательности козак и стоп-кодонов, расщепили с помощью HindIII и клонировали в сайт HindIII плазмиды pK-CR5, предварительно дефосфорилированной при помощи фосфатазы из кишечника коровы (NEB) для предупреждения рециркуляризации. На фиг. 3a изображена карта плазмиды pK-CR5-3A4-HC-variant1. Все варианты тяжелой цепи гуманизированного 3A4 построили аналогичным образом.
Построение плазмид, кодирующих варианты 1 и 2 гуманизированной легкой цепи 3A4.
Фрагменты, кодирующие участки легкой цепи человека антитела 3A4 (Lh1 и Lh2), заказали у GenScript. ДНК-фрагменты, включающие последовательности козак и стоп-кодонов, расщепили с помощью BamHI и клонировали в сайт BamHI плазмиды pMPG-CR5 (SEQ ID NO: 211), предварительно дефосфорилированной при помощи фосфатазы из кишечника коровы (NEB) для предупреждения рециркуляризации. На фиг. 3b изображена карта плазмиды pMPG-CR5-3A4-LC-variant1. Все варианты тяжелой цепи гуманизированного 3A4 построили аналогичным образом.
Исследование временной трансфекции.
Плазмидную ДНК выделили из небольших культур Е. coli с применением набора Mini-Prep (Qiagen Inc, Миссиссога, Онтарио) согласно рекомендациям производителя. Вкратце, 2 мл LB среды, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, засеяли одной колонией, отобранной после лигирования и трансформации. Культуры инкубировали при 37°С в течение ночи с интенсивным помешиванием (250 об/мин). Затем плазмиду выделили из 1,5 мл культуры, используя инструкции, буферы и колонки, поставляемые в наборе. ДНК элюировали с помощью 50 мкл стерильной воды. Плазмидную ДНК выделили из большой культуры E. coli с применением набора Plasmid Plus Maxi (Qiagen Inc, Миссиссога, Онтарио) согласно рекомендациям производителя. 200 мл LB среды, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, засеяли одной свежей колонией Е. coli и инкубировали в течение ночи при 37°С с интенсивным помешиванием (250 об/мин). Бактерии (130 мл культуры для тяжелой цепи и 180 мл культуры для легкой цепи) осаждали центрифугированием при 6000xg в течение 15 мин при 4°С и выделяли плазмиду, используя инструкции, буферы и колонки, поставляемые в наборе. Чистые плазмиды повторно суспендировали в стерильном 50
- 48 034414 мМ Tris, pH 8 и проводили количественную оценку по измерениям оптической плотности при 260 нм.
Перед трансфекцией очищенную плазмиду простерилизовали экстракцией с фенолом/хлороформом с последующим осаждением этанолом. Плазмиды повторно суспендировали в стерильном 50 мМ Tris, pH
8, и проводили количественную оценку по оптической плотности при 260 нм.
Перед трансфекцией клетки (CHO-cTA) промывали, используя PBS, и повторно суспендировали при концентрации 4,0х106 клеток/мл в среде для роста (CD-CHO, Invitrogen) без сульфата декстрана в течение 3 ч в суспензионной культуре. Для каждой комбинации плазмид 45 мл клеток трансфицировали путем медленного добавления 5 мл среды CDCHO, дополненной 10 мкг/мл каждой плазмиды и 50 мкг/мл полиэтиленимина (PEI Мах; Polysciences). Конечная концентрация составила 1 мкг/мл каждой плазмиды и 5 мкг/мл PEI. Через 2 ч клетки переносили при 30°С. В последующие дни к клеткам добавляли 50 мкг/мл сульфата декстрана и 3,75 мл каждой добавки (Efficient Feed А и В, Invitrogen) и инкубировали их при 30°С в течение 13 дней. 2,5 мл Feed А и 2,5 мл Feed В добавили на 4, 6, 8 и 11 дни. На 13-й день надосадочную жидкость очищали путем центрифугирования и фильтровали через 0,22-мкм фильтр.
Клетки CHO (CHOcTA) трансфицировали плазмидами, кодирующими различные варианты гуманизированных тяжелых и легких цепей антитела 3A4, под управлением промотора CR5. Трансфекцию осуществляли различными комбинациями легкой и тяжелой цепей. В качестве контроля клетки также трансфицировали плазмидами, кодирующими химерное/мышиное антитело.
Очистка антитела.
мл надосадочной жидкости из образцов трансфицированных клеток CHO концентрировали центрифугированием с применением кассеты Amicon Ultra (Ultacell-50k) при 1500 об/мин. Сконцентрированное антитело (550 мкл) очищали, используя набор Nab spin kit Protein A Plus (Thermo Scientific) согласно рекомендациям производителя. Очищенные антитела затем обессолили, используя PBS и кассеты для концентрирования Amicon Ultra (Ultracel-10K) при 2500 об/мин до конечного объема 250 мкл. Очищенное антитело количественно оценили путем считывания OD280 с помощью спектрофотометра Nanodrop и хранили замороженным при -20°С. Аликвоту очищенного антитела повторно суспендировали в равном объеме Laemmli 2X, нагревали при 95°С в течение 5 мин и охлаждали на льду. Стандартную кривую строили с помощью известного количества очищенной каппа IgG1 человека из плазмы с миеломой человека (Athens Research). Образцы разделяли на полиакриламидном геле Novex с 10% Tris-глицин (Invitrogen Canada Inc., Берлингтон, Онтарио) и переносили на нитроцеллюлозную мембрану Hybond-N (Amersham Bioscience Corp., Бэ-д'Юрфе, Квебек) на 1 ч при силе тока 275 мА. Мембрану блокировали в течение 1 ч в 0,15% Tween 20, 5% обезжиренного молока в PBS и инкубировали в течение 1 ч с антителом козы к IgG человека (H+L), конъюгированным с Су5 (Jackson, Кат. № 109-176-099). Проявляли сигнал и определяли количество путем сканирования при помощи сканера Typhoon Trio+ (GE Healthcare). Как показано на фиг. 4, все комбинации вариантов гуманизированного антитела 3A4 экспрессировались в клетках CHO.
Пример 4. Кинетический анализ мышиного и гуманизированного антитела 3A4.
Приобретенные материалы.
GLM сенсорные чипы, набор для связывания аминоконца Biorad ProteOn (EDC, sNHS и этаноламин) и буферы с 10 мМ ацетатом натрия приобрели у Bio-Rad Laboratories (Миссиссога, Онтарио). Буфер HEPES, EDTA и NaCl приобретены у Sigma-Aldrich (Оаквилль, Онтарио). 10-процентный раствор Tween 20 приобретен у Teknova (Холлистер, Калифорния). Антитело козы, специфическое к Fc-фрагменту IgG человека, приобретено у Jackson ImmunoResearch. Колонку для гель-фильтрации Superdex 75 10/300 GL приобретена у GE Healthcare.
Г ель-фильтрация.
Белок KAAG1 в концентрации 3,114 мг/мл и объемом 220 мкл ввели в колонку Superdex G75. Разделение проводили при 0,4 мл/мин в подвижном буфере HBST (см. ниже) без Tween 20. Объем собранной фракции составил 500 мкл. Концентрацию KAAG1 в каждой фракции определяли по ОП280 с помощью коэффициента удлинения 5500 и MB, равного 8969. На фиг. 5 представлен профиль гельфильтрации KAAG1. Небольшой пик возможного агрегата представляет собой элюат на уровне около 11 мл. Элюат белка на уровне 13 мл использовали в качестве анализируемого вещества для анализа ПНР (фракции 15-19).
Биосенсорные анализы ППР.
Все анализы с применением поверхностного плазмонного резонанса осуществляли с помощью прибора BioRad ProteOn XPR36 (Bio-Rad Laboratories Ltd. (Миссиссога, Онтарио) с подвижным буфером HBST (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3,4 мМ EDTA и 0,05% Tween 20, рН 7,4) при температуре 25°С. Поверхность для захвата мышиного Fc-участка создали при помощи сенсорного чипа GLM, активированного посредством 1:5 разведения стандартных растворов BioRad sNHS/EDC, вводимых в течение 300 с при 30 мкл/мин в направлении подачи анализируемого вещества (горизонтальное). Сразу после активации, в направлении подачи анализируемого вещества вводили 13 мкг/мл раствор антитела, специфичного к Fcфрагменту IgG человека в 10 мМ NaOAc, рН 4,5, со скоростью потока 25 мкл/мин до тех пор, пока не иммобилизировалось примерно 8000 резонансных единиц (RU). Оставшиеся активные группы заблокировали посредством 300 с введения 1 М этаноламина со скоростью 30 мкл/мин в направлении подачи
- 49 034414 анализируемого вещества, и это также обеспечивает создание ложно активированных промежуточных сигналов для холостых проб. Скрининг вариантов 3A4 на связывание с KAAG1 проходил в два этапа, непрямой захват вариантов 3A4 из клеточного супернатанта на поверхность, специфическую к Fcфрагменту IgG человека, в направлении подачи лиганда (вертикальное) с последующим введением KAAG1 в направлении подачи анализируемого вещества. Сначала, для стабилизации фонового уровня использовали одно введение буфера в течение 30 с со скоростью 100 мкл/мин в направлении подачи лиганда. Для каждого захвата 3A4 неочищенные варианты 3A4 в среде для культивирования клеток разбавляли до 4% в HBST или использовали примерно 1,25 мкг/мл очищенного 3A4 в HBST. Четыре-пять вариантов 3A4 вместе с 3A4 дикого типа одновременно ввели в отдельные каналы для лигандов за 240 с при потоке 25 мкл/мин. Это привело к насыщающему захвату 3A4 примерно 400-700 RU на поверхности, специфической к Fc-фрагменту IgG человека. Первый канал для лиганда, при необходимости, оставляли пустым в качестве холостого контроля. Сразу после этапа захвата 3A4 дважды вводили буфер в направлении подачи анализируемого вещества для стабилизации фонового уровня, а затем ввели очищенный при помощи гель-фильтрации KAAG1. Для типичного скрининга в отдельные каналы для анализируемого вещества одновременно вводили пять концентраций KAAG1 (8, 2,66, 0,89, 0,29 и 0,098 нМ) и буферный контроль со скоростью 50 мкл/мин в течение 120 с с фазой диссоциации, равной 600 с, что дало набор сенсограмм связывания с буферным эталоном для каждого из захваченных вариантов 3A4. Комплексы поверхности, специфической к Fc-фрагменту IgG человека, и 3A4 восстанавливали в импульсном режиме, продолжительностью 18 с, подачей 0,85% фосфорной кислоты в течение 18 с при 100 мкл/мин для подготовки поверхности, специфической к Fc-фрагменту IgG человека, для следующего цикла впрыска. Сенсограммы выравнивали и сопоставляли с двумя эталонами с помощью введения буферной холостой пробы и промежуточных сигналов, и полученные сенсограммы проанализировали с помощью программного обеспечения ProteOn Manager, версии 3.0. Кинетические значения и значения аффинности определяли путем приближения упомянутых сенсограмм к модели связывания Langmuir 1:1 с применением локального Rmax, a константы аффинности (KD M) вывели из получаемых констант скорости (k,i s-1/ka M-1s-1).
Определение констант скорости и аффинности.
На фиг. 6 подытожены константы скорости ассоциации (ka, 1/М.с) и диссоциации (kd, 1/с), а также константы аффинности (KD, М) для взаимодействия KAAG1 с очищенным мышиным 3A4, мышиным 3A4, которое временно экспрессировалось в качестве химерного, и временно экспрессируемыми гуманизированными вариантами. Эти константы графически представлены на фиг. 7а-с. Константы скорости ассоциации очень сходны с чистыми исходными, химерными и гуманизированными вариантами 3A4 (фиг. 7а). Константы скорости диссоциации сходны с временно экспрессируемыми химерами при сравнении с исходными 3A4, что указывает на то, что процедура трансфекции не изменила параметры взаимодействия KAAG1 с антителом (фиг. 7b). Тем не менее, все гуманизированные варианты похоже имели слегка измененную скорость диссоциации, т.е. более высокую скорость диссоциации (фиг. 7b). Это отражено в константах аффинности (фиг. 7с). Таким образом, существует линейная корреляция между аффиностью связывания (logKD) гуманизированного варианта и количеством возвратных мутаций, осуществленных в исходном антителе (LcHc), с понижением аффинности связывания по мере увеличения количества мутаций. Однако разница в аффинности связывания отличается лишь в 4 раза между наихудшим вариантом (H1L1, 0,47 нМ), у которого не было сохраненных мышиных остатков, и наилучшим вариантом, у которого было 10 сохраненных мышиных остатков (H4L2, 0,1 нМ). Наконец, было обнаружено, что аффинность связывания у всех вариантов с KAAG1 является субнаномолярной, а наилучший вариант (H4L2, 0,1 нМ) демонстрировал аффинность приблизительно в 6 раз слабее, чем мышиное антитело (LcHc, 0,057 нМ). В целом, данные результаты указывают на то, что гуманизация была успешной, поскольку все варианты проявляли высокую аффинность к KAAG1.
Пример 5. Связывание гуманизированных вариантов 3A4 с KAAG1 в ELISA.
Также применяли способы ELISA для сравнения связывающей активности гуманизированных вариантов 3A4 с мышиным антителом 3A4. Рекомбинантный KAAG1 человека для нанесения покрытия вносили в 96-луночные планшеты на ночь, промывали и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре (КТ) с повышающимися количествами мышиных или гуманизированных вариантов 3A4. После другого цикла этапов промывки в лунки добавили антитело к антителу человека, конъюгированному с HRP, и калориметрически измерили связанное антитело 3A4 при Abs450. Как показано на фиг. 8а, гуманизированные варианты (Lh1Hh1, Lh1Hh2, Lh1Hh3 и Lh1Hh4) проявляли очень сходное связывание с KAAG1 при сравнении с мышиным 3A4 (LcHc), у которого наблюдалась более высокая аффинность, равная 0,016 нМ. Этот результат указывал на то, что все четыре варианта гуманизированной тяжелой цепи были сопоставимы с исходной тяжелой цепью h3A4 при сборке с вариантом L1 гуманизированной легкой цепи. На фиг. 8а показаны результаты, полученные при сборке вариантов тяжелой цепи с вариантом Lh2 гуманизированной легкой цепи 3A4. В этом случае существует различие в связывании вариантов. Например, Lh2hh4 был вариантом с наиболее близким профилем к профилю мышиного 3A4. Это согласовывалось с данными ППР, из которых видно, что вариант 4 тяжелой цепи характеризовался наивысшей аффинностью к KAAG1. Взятые вместе, эти данные по связыванию демонстрируют то, что все гуманизированные варианты в данном анализе взаимодействуют с KAAG1 человека. Несмотря на нали- 50 034414 чие незначительных различий, связывание в ELISA согласовывалось с результатами ПНР.
Пример 6. Связывание гуманизированных вариантов 3A4 на поверхности раковых клеток.
Проточную цитометрию применяли для оценки способности гуманизированных вариантов 3A4 взаимодействовать с KAAG1, экспрессируемым на поверхности раковых клеток. Для этого клетки карциномы яичника SKOV-3, которые, как было показано ранее, эффективно связывались 3A4 с помощью проточной цитометрии, инкубировали с восемью гуманизированными вариантами и исходным мышиным антителом. Вкратце, клетки SKOV-3 отделяли от планшета при помощи EDTA и инкубировали на льду с либо 3,0, 0,3 мг/мл, либо 0,3 мг/мл антител в течение 1 ч. После трех этапов промывания клетки инкубировали с вторичным антителом, антителом к IgG человека, конъюгированным с FITC, в течение 1 ч на льду. Флюоресценцию на клеточной поверхности измеряли в проточном цитометре, и значения показаны в гистограмме на фиг. 9. Как показано, все варианты могли обнаруживать KAAG1 на поверхности непермеабилизированных клеток, наиболее сильные сигналы получали при наиболее высокой концентрации антител 3A4 (3 мг/мл), и они понижались по мере понижения концентрации антитела. Среди различных вариантов, варианты с наибольшим количеством обратных мутаций мышиной цепи (фиг. 9, см. Lh1Hh4 и Lh2Hh4) взаимодействовали с KAAG1 на поверхности клеток с наивысшей активностью. Фактически, Lh1Hh4 и Lh2hh4, по-видимому, демонстрировали слегка улучшенное связывание на клеточной поверхности с KAAG1 по сравнению с мышиным антителом 3A4 (LcHc).
Пример 7. Этот пример описывает применение антител к KAAG1 для обнаружения экспрессии KAAG1 при ТНРМЖ.
В качестве средства определения возможного присутствия антигена KAAG1 в образцах ТНРМЖ проводили иммуногистохимический анализ. Были получены микрочипы тканей, содержащие 139 образцов биопсии РМЖ, взятых у пациентов. Залитые парафином образцы опухолей молочной железы, имеющих эпителиальное происхождение, размещали на покровных стеклах и фиксировали в течение 15 мин при 50°С. Депарафинизацию проводили путем обработки 2х ксилолом с последующим дегидратацией в последовательных промывках по 5 мин в 100, 80 и 70% этаноле. Слайды промывали 3х в PBS в течение 5 мин и обрабатывали раствором для извлечения антигена (1 мМ EDTA, рН 8,0), чтобы размаскировать антиген. Эндогенные частицы, реагирующие с пероксидом, удаляли инкубацией стекол с H2O2 в метаноле и блокирование выполняли инкубацией стекол с бессывороточным блокирующим раствором (Santa Cruz Biotech) в течение 5 мин при комнатной температуре.
Первичное антитело.
(3A4 к KAAG1) добавляли в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционноспособный по отношению к KAAG1 антиген обнаруживали путем инкубации с биотин-конъюгированным мышиным анти-каппа, а затем - с стрептавидин-HRP третичным антителом. Позитивное окрашивание было выявлено путем обработки стекол субстратом ДАБ-перекись водорода в течение менее 5 мин, а затем контрастировали гематоксилином. Белок KAAG1, как оказалось, экспрессировался на очень высоком уровне в абсолютном большинстве образцов опухолей молочной железы. Характерные чипы, содержащие образцы 139 опухолей, приведены на фиг. 10. В частности, 15/20 образцов биопсии с подтвержденным ТНРМЖ (фиг. 10, образцы указаны звездочкой) имели сильное окрашивание антителом 3A4 благодаря экспрессии KAAG1. Вместе взятые эти иммуногистохимические исследования иллюстрируют применимость обнаружения KAAG1 в РМЖ, в частности ТНРМЖ, с помощью моноклональных антител.
Пример 8.
Этот пример описывает применение антител к KAAG1 для обнаружения экспрессии KAAG1 в клеточных линиях ТНРМЖ.
Объединенные результаты анализа биоинформатики первичной структуры кДНК, кодирующей KAAG1, биохимических исследования и иммуногистохимического определения белка в эпителиальных клетках указывают на то, что антиген KAAG1 находился на клеточной поверхности. Однако требовалось более прямое свидетельство, чтобы продемонстрировать, что KAAG1 действительно экспрессируется на поверхности клеток ТНРМЖ. Для проведения анализа клеточные линии РМЖ получали из коммерческих источников (АТСС, Manassas, VA) и использовали в экспериментах с проточной цитометрией. Анализы экспрессии RT-PCR с использованием специфических праймеров mRNA KAAG1 ранее показали, что определенные клетки РМЖ экспрессировали mRNA KAAG1 (см. РСТ/СА2007/001134). Поэтому некоторые из этих клеточных линий были выбраны для определения наличия антигена KAAG1 на их поверхности. Для подтверждения этого исследовали тройные негативные клеточные линии MDA-MB-231, MDA-MB-436, MDA44B-468, ВТ-20 и ВТ-549 на предмет поверхностной экспрессии KAAG1, используя антитело 3A4 к KAAG1. Кроме того, клеточные линии РМЖ, которые не являются тройными негативными, а именно, T47D и MCF-7, также были включены в анализ. И наконец, в качестве отрицательного контроля в эксперимент по проточной цитометрии включили контрольную клеточную линию 293-6E, которая демонстрирует неопределяемый уровень экспрессии антигена KAAG1. Для целей анализа методом проточной цитометрии (FCM) клетки собирали, используя 5 мМ EDTA, подсчитывали с помощью гемоцитометра и повторно суспендировали в FCM-буфере (0,5% BSA, 10 мкг/мл козьей сыворотки в 1х PBS) с плотностью клеток 2х106 клеток/мл. Химерные антитела 3A4 к KAAG1 или контрольные IgG до- 51 034414 бавляли к 100 мкл клеток до конечной концентрации, равной 0,5 мкг/мл, и инкубировали на льду в течение 1 ч. Клетки промывали в холодном FCM-буфере для удаления несвязавшихся антител, ресуспендировали в 100 мкл FCM-буфера, содержащего антитело к IgG человека, конъюгированное с вторичным антителом FITC (разведение 1:200) и инкубировали на льду в течение 45 мин. После еще одного этапа промывания в холодном FCM-буфере клетки повторно суспендировали в 300 мкл FCM-буфера и анализировали с помощью проточного цитометра. К каждому образцу добавляли 10 мкг/мл иодида пропидия для осуществления отбора мертвых клеток. Результаты трех независимых экспериментов показаны на фиг. 11, где средняя интенсивность флуоресценции (MFI) свернутой индукции представляет собой геометрическое среднее значение сигнала при инкубации клеток с антителом 3A4 от сигнала отрицательного контрольного образца IgG человека, который был произвольно установлен равным 1. Инкубация антител с контрольными клетками 293-6EHEK-293 привела к сигналам флуоресценции, сходным с сигналом, полученным при инкубации клеток в отсутствие первичного антитела. Помимо этого, не наблюдали значительного различия между сигналом, полученным с 3A4, по сравнению с контрольным образцом IgG. Кроме того, при инкубации контрольного образца IgG с клеточными линиями РМЖ сигналы были очень схожими с сигналами, полученными от контрольного образца клеток 293-6E. В отличие от этого, регистрируемый флуоресцентный сигнал наблюдали при инкубации антитела 3A4 с клеточными линиями РМЖ. Несмотря на различное наблюдаемое количество флуоресценции, наиболее высокое число KAAG1 было обнаружено на поверхности клеточных линий MDA-MB-231 и ВТ-20 - двух клеточных линий ТНРМЖ (см. фиг. 11, клеточные линии ТНРМЖ обозначены звездочкой). В действительности все пять клеточных линий ТНРМЖ были положительными в отношении экспрессии KAAG1 в этих условиях. Клетки Т47 D и MCF-7 также экспрессировали KAAG1. Вместе взятый этот проточный цитометрический анализ показывает, что клеточные линии ТНРМЖ экспрессируют KAAG1 на поверхности своих клеток на высоком уровне.
Пример 9. Способы применения антитела к KAAG1 3A4 в качестве конъюгата антитела.
Как продемонстрировано выше, антиген KAAG1 был обнаружен с помощью 3A4 на поверхности раковых клеток с использованием поточной цитометрии. Существуют несколько различных молекулярных событий, которые могут произойти при связывании антитела с его целью на поверхности клеток. Они включают i) блокирование доступа к другому антигену/рецептору клеточной поверхности или лиганду, ii) образование относительно стабильного комплекса антитело-антиген, позволяющего нацеливаться на клетки с помощью ADCC или CDC, iii) могут происходить сигнальные события, которые проиллюстрированы с помощью агонстических антител, iv) комплекс может быть интернализирован или v) комплекс может быть сброшен с клеточной поверхности. Для решения данного вопроса мы изучали поведение комплекса KAAG1-антитело 3A4 на поверхности клеток. Клеточную линию карциномы яичников - SKOV3 - использовали в качестве положительного контрольного образца в этом эксперименте, поскольку она была успешно применена в предыдущих экспериментах по интернализации (см. РСТ/СА2009/001586). Клетки ТНРМЖ MDA-MB-231 помещали в чашки, промывали и инкубировали с 0,5 мкг/мл химерного антитела 3A4, как описано в примере 3. После промывки добавляли полную среду и клетки размещали при 37°С в течение не более 60 мин. Клетки удаляли в определенные моменты времени (см. фиг. 12), быстро охлаждали, подготавливали для проточной цитометрии, используя FITCконъюгированные человеческие антитела IgG, а результаты выражали как процентную долю средней интенсивности флуоресценции, оставшейся на клеточной поверхности, по сравнению с сигналом в начале отсчета времени 0 мин (см. фиг. 12, сигнал от поверхности (%, оставшийся от сигнала при 0 мин). Как показано на фиг. 12, флуоресцентный сигнал быстро уменьшается при инкубации 3A4 с клетками MDAMB-231 (фиг. 12, черные столбцы, обозначенные как MDA-MB-231 на чертеже) и предположительно достигает максимальной потери сигнала через 30-45 мин. Потерю сигнала сравнивали с потерей, наблюдаемой при инкубации 3A4 с клетками SKOV3 (фиг. 12, серые столбцы). Эти результаты показывают, что комплекс 3A4/KAAG1 исчез с клеток, что указывало на то, что могла произойти интернализации комплекса. Предварительные исследования для выяснения механизма, ответственного за такое снижение флюоресценции клеточной поверхности, показали, что, судя по всему, комплекс интернализировался. Сходные результаты ожидаются для гуманизированных антител 3A4.
Сходные результаты получали в двух дополнительных клеточных линиях ТНРМЖ, а именно MDAMB-436 (фиг. 13) и ВТ-20 (фиг. 14), что подтверждает интернализацию комплекса 3A4/KAAG1 на поверхности множества клеточных линий ТНРМЖ. В отличие от этого, несмотря на сходные уровни MFI от связывания 3A4 на поверхности MDA-MB-436 и T47D (фиг. 11), потеря сигнала от клеточной поверхности не наблюдалась при инкубации 3A4 с клеточной линией T47D. Это открытие позволяет предположить, что интернализация комплекса 3A4/KAAG1 может происходить до значительно большей степени в клетках ТНРМЖ (фиг. 15) по сравнению с клетками, которые не являются тройными негативными.
Эти результаты дополнительно подтвердили путем проведения иммунофлюоресценции на живых клетках для того, чтобы узнать можно ли наблюдать такую интернализацию с помощью микроскопии. Клетки MDA-MB-231 высевали на покровные стекла, и после того, как клетки надлежащим образом закрепились, добавили свежую среду, содержавшую химерное антитело к KAAG1 3A4 в количестве 10 мкг/мл и инкубировали при 37°С в течение 4 ч. Клетки промывали в PBS, затем фиксировали в 4% пара
- 52 034414 формальдегиде (в PBS) в течение 20 мин. После промывания клетки пермеабилизировали при помощи 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 5 мин. Блокировку осуществляли с помощью 1,5% сухого молока в PBS в течение 1 ч. Ассоциированный с лизосомами мембранный белок 1, (LAMP1, Chang et al., 2002) обнаруживали путем инкубации с антителом к LAMP1 (Santa Cruz, sc-18821, разведение 1:100) в 1,5% молоке в PBS в течение 2 ч. После промывания в PBS добавляли все вместе вторичные антитела в 1,5% молока и инкубировали в течение 1 ч. Для химерных антител к KAAG1 вторичным антителом было антитело осла к IgG (H+L) человека, конъюгированное с родамином Red-X, разведение 1:300. Для антитела к LAMP1 вторичным антителом было антитело козы к IgG (H+L) мыши, конъюгированное с DyLight488, разведение 1:300. Оба вторичных антитела получали от Jackson ImmunoResearch. Покровные стекла промывали в PBS и погружали в препятствующий обесцвечиванию реактив ProLong Gold с DAPI. Как видно на фиг. 7, спустя 4 ч инкубации при 37°С в присутствии раковых клеток MDA-MB-231 антитело 3A4 можно было обнаружить в комплексах в основном вблизи околоядерной области (стрелки, см. красное окрашивание в левой части фиг. 16), что представляет собой типичные пути эндосомальнолизосомальной интернализации. Это наблюдение дополнительно подтвердилось при визуализации лизосомального маркера LAMP1, при этом оказалось, что он тоже экспрессировался в данных областях (стрелки, см. зеленое окрашивание в средней части фиг. 16). Важно то, что объединение двух изображений привело к появлению желто-оранжевых структур, указывающих на то, что 3A4 и антитела к LAMP1 присутствовали в одних и тех же структурах (стрелки, см. желтое окрашивание в правой части фиг. 16). Совместная локализация 3A4, которое связывается с KAAG1 на поверхности раковых клеток, с LAMP1 маркером поздних эндосом/лизосом, демонстрирует, что комплекс антитело/антиген интернализировался, и что он проходит по пути, пригодному для высвобождения полезного груза, который может быть присоединен к антителу 3A4. Идентичные результаты наблюдали в другой клеточной линии ТНРМЖ ВТ-20 (см. фиг. 17).
Вместе взятые, эти исследования продемонстрировали, что антитела, специфичные к KAAG1, такие как 3A4, можно применять в качестве конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC). Таким образом, высокий уровень специфичности к ТНРМЖ у KAAG1 в сочетании с возможностью интернализации данной цели в клетки способствует разработке применений в качестве ADC.
Пример 10.
С целью продемонстрировать эффективность антител к KAAG1 в нахождении и уничтожении клеток, у котрых отсутствует экспрессия белка ER, экспрессия белка PgR и/или которые демонстрируют отсутствие повышенной экспрессии белка HER2, мы произвели два конъюгата антитело-лекарство (ADCs): 3A4-ADC1 и 3A4-ADC2.
Для этого мы использовали химерное антитело 3A4 и присоединили цитотоксическое средство посредством высоко стабильного пептидного линкера, который селективно расщепляется лизосомальными ферментами после интернализации (3A4-ADC1), или конъюгировали с другим антимитотическим средством посредством нерасщепляемого линкера (3A4-ADC2). Цитотоксическое средство может становиться активным после интернализации в клетки.
Способность 3A4 ADCs к обнаружению KAAG1 на поверхности клеток ТНРМЖ определяли, используя проточную цитометрию с применением способов, описанных в данном документе. Вкратце, неконъюгированные 3A4, 3A4-ADC1, 3A4-ADC2 и контрольный образец IgG инкубировали в присутствии клеток ТНРМЖ MDA-231, которые являются KAAG1-позитивными. Результаты указывают на то, что присоединение к 3A4 любого из этих двух средств не оказывает отрицательного влияния на его связывание с клетками тройного негативного рака молочной железы, такими как MDA-231 (данные не показаны).
Получив подтверждение того, что ADC на основе 3A4 может связываться с KAAG1, экспрессированным на поверхности клеток ТНРМЖ, их цитоксичность, направленную на эти клетки, оценивали путем анализа пролиферации клеток. Клетки MDA-231 или TOV-112D культивировали, как описано выше в предыдущих примерах. Клетки засевали с плотностью 3000 клеток/лунку в 96-луночные планшеты в 200 мкл среды в каждой лунке в течение ночи при 37°С, в 5% СО2. На следующий день среду заменяли на свежую, содержащую антитела, в концентрации, изменяющейся от 0,122 до 500 нМ, и инкубировали при 37°С в течение 72 ч. Все условия выполняли в трех экземплярах лунок. Число выживших клеток определяли с помощью анализа клеточной пролиферации, используя CellTiter 96 Aqueous One Solution (Promega, Madison, WI), следуя инструкции от производителя. После сбора первичных данных результаты выражали в виде процентной доли выживаний по сравнению с числом клеток в лунках, обработанных с использованием PBS, которое принимали за 100%. Результаты указывают на то, что неконъюгированное 3A4 не оказывало влияние на распространение клеток MDA-231 при всех исследованных концентрациях. В отличие от этого исследованные ADCs антитела 3A4 показали значительную цитотоксичность.
Эти результаты указывают на то, что конъюгаты антитела 3A4 можно применять в качестве альтернативного лечения пациентов, страдающих тройным негативным раком молочной железы или базальноподобным раком молочной железы. Сходные результаты ожидаются для конъюгатов на основе гуманизированных антител 3A4.
Настоящее описание относится к нескольким документам, содержание которых включено в данный
- 53 034414 документ во всей своей полноте путем ссылки. Последовательности, на которые ссылаются в описании.
SEQ ID NO.:1
GAGGGGCATCAATCACACCGAGAAGTCACAGCCCCTCAACCACTGAGGTGTGGGGGGG
TAGGGATCTGCATTTCTTCATATCAACCCCACACTATAGGGCACCTAAATGGGTGGGCGGTGG GGGAGACCGACTCACTTGAGTTTCTTGAAGGCTTCCTGGCCTCCAGCCACGTAATTGCCCCCG CTCTGGATCTGGTCTAGCTTCCGGATTCGGTGGCCAGTCCGCGGGGTGTAGATGTTCCTGACG GCCCCAAAGGGTGCCTGAACGCCGCCGGTCACCTCCTTCAGGAAGACTTCGAAGCTGGACACC TTCTTCTCATGGATGACGACGCGGCGCCCCGCGTAGAAGGGGTCCCCGTTGCGGTACACAAGC ACGCTCTTCACGACGGGCTGAGACAGGTGGCTGGACCTGGCGCTGCTGCCGCTCATCTTCCCC GCTGGCCGCCGCCTCAGCTCGCTGCTTCGCGTCGGGAGGCACCTCCGCTGTCCCAGCGGCCTC ACCGCACCCAGGGCGCGGGATCGCCTCCTGAAACGAACGAGAAACTGACGAATCCACAGGTGA AAGAGAAGTAACGGCCGTGCGCCTAGGCGTCCACCCAGAGGAGACACTAGGAGCTTGCAGGAC TCGGAGTAGACGCTCAAGTTTTTCACCGTGGCGTGCACAGCCAATCAGGACCCGCAGTGCGCG CACCACACCAGGTTCACCTGCTACGGGCAGAATCAAGGTGGACAGCTTCTGAGCAGGAGCCGG AAACGCGCGGGGCCTTCAAACAGGCACGCCTAGTGAGGGCAGGAGAGAGGAGGACGCACACAC ACACACACACACAAATAT G G T GAAAC С СAAT T T С T TAGAT CATATCTGTGCTACCCTTTC СAA ACAGCCTA
SEQ ID NO.:2
MDDDAAPRVEGVPVAVHKHALHDGLRQVAGPGAAAAHLPRWPPPQLAASRREAPPLSQ RPHRTQGAGSPPETNEKLTNPQVKEK
SEQ ID NO.:3
GACATTGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGGCTGTGTCAATAGGACAGAAGGTCA СTATGAACTGCAAGTСCAGTCAGAGССTTTTAAATAGTAACTTTCAAAAGAACTTTTTGGССT GGTACCAGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCTAAACTTCTGATATACTTTGCATCCACTCGGGAAT CTAGTATCCCTGATCGCTTCATAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTTACCATCAGCA GTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGATTACTTCTGTCAGCAACATTATAGCACTCCGCTCACGT TCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAAGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGC CATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATC CCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGA GTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGC CCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO.:4 DIVMTQSPSSLAVSIGQKVTMNCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYFAS
TRESSIPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELKAVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL
- 54 034414
TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO.:5
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGTAGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGC TGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACATATTTACTGACTATGAGATACACTGGGTGAAGCAGACTC CTGTGCATGGCCTGGAATGGATTGGGGTTATTGATCCTGAAACTGGTAATACTGCCTTCAATC AGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACATATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAAC TCAGCAGTTTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTATGGGTTATTCTGATTATTGGG GCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGG CCCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACT TCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCC CGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCA GCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACA AGAAAGTTGAGСССAAATСTTGTGAATTСACTCACACATGСССACCGTGССCAGСACСTGAAC TCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCC GGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCA ACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACA ACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGG AGTACAAGTGCAAGGTСTССAACAAAGСССTССCAGССССCATCGAGAAAACCATСTСCAAAG CCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCA AGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGT GGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACG GCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCT TCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGT CTCCCGGGAAA
SEQ ID NO.:6
EVQLQQSVAELVRPGASVTLSCKASGYIFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGNT AFNQKFKGKATLTADISSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSSASTKGPSV FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTV PSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEFTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSPGK
SEQ ID NO.:7
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACGCTCCCTGTCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCT CCATCTCTTG TAGAT C GAG T CAGAG С С T T T TACATAG TAAT G GAAACAC С TAT T TAGAAT G G T
- 55 034414
ATTTGCAGAAACCAGGCCAGCCTCCAAAGGTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTG GGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCGGAG TGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCTCTCACGTTCG GTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAAGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCAT CTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCA GAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTG TCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCG TCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO.:8
DVLMTQTPRSLSVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQPPKVLIYKVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISGVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELKAVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLT LSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO.:9
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGTTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGA
TATCCTGTAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTGACAACTACATGAACTGGGTGAAGCAGAGCC ATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTAATCCTTACTATGGTACTACTACCTACAACC AGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCCGCACAGCCTACATGGAGC TCCGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGATGACTGGTTTGATT ATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTC CCCTGGCCCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG ACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACA CCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCT CCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGG TGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAATTCACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCAC CTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGA TCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCA AGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGC AGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATG GCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCT CCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGC TGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCG TGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGA ACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCT
- 56 034414
CCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO.:10
EIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDNYMNWVKQSHGKSLEWIGDINPYYGTT TYNQKFKGKATLTVDKSSRTAYMELRGLTSEDSAVYYCARDDWFDYWGQGTLVTVSAASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEFTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGK
SEQ ID NO.:11
GACATCGTTATGTCTCAGTCTCCATCTTCCATGTATGCATCTCTAGGAGAGAGAGTCA
CTATCACTTGCAAGGCGAGTCAGGACATTCATAACTTTTTAAACTGGTTCCAGCAGAAACCAG
GAAAATCTCCAAAGACCCTGATCTTTCGTGCAAACAGATTGGTAGATGGGGTCCCATCAAGGT
TCAGTGGCAGTGGATCTGGGCAAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGTTTGAAGATT TGGGAATTTATTCTTGTCTACAGTATGATGAGATTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGC TGGAGCTGAGAGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGA AATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTAC AGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACA GCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAAC ACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCA ACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO.:12
DIVMSQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKSPKTLIFRANRLVDGV PSRFSGSGSGQDYSLTISSLEFEDLGIYSCLQYDEIPLTFGAGTKLELRAVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO.:13
GAGGTGCAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGACCTGGTGAAACCTTCTCAGTCACTTTCAC
TCACCTGCACTGTCACTGGCTTCTCCATCACCAGTGGTTATGGCTGGCACTGGATCCGGCAGT TTCCAGGAAACAAACTGGAGTGGATGGGCTACATAAACTACGATGGTCACAATGACTACAACC CATСTСTCAAAAGTCGAATСTСTATСACTCAAGACACATСCAAGAACCAGΤTСΤTССTGCAGT TGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGCAAGCAGTTACGACGGCTTAT TTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCTG TCTTTCCCCTGGCCCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGG TCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCG
- 57 034414
TGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCG
TGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACA
CCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAATTCACTCACACATGCCCACCGTGCC
CAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCC
TCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTG AGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGG AGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGC TGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAA CCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG ATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACA TCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGC TGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAA
SEQ ID NO.:14
EVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGFSITSGYGWHWIRQFPGNKLEWMGYINYDGHN DYNPSLKSRISITQDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVSAASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEFTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
SEQ ID NO.:15
GACATTGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGGCTGTGTCAATAGGACAGAAGGTCA СTATGAACTGCAAGTСCAGTCAGAGССTTTTAAATAGTAACTTTCAAAAGAACTTTTTGGССT GGTACCAGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCTAAACTTCTGATATACTTTGCATCCACTCGGGAAT CTAGTATCCCTGATCGCTTCATAGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTTACCATCAGCA GTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGATTACTTCTGTCAGCAACATTATAGCACTCCGCTCACGT TCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
SEQ ID NO.:16
DIVMTQSPSSLAVSIGQKVTMNCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQSPKLLIYFAS
TRESSIPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO.:17
GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGTAGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGC
TGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACATATTTACTGACTATGAGATACACTGGGTGAAGCAGACTC
- 58 034414
CTGTGCATGGCCTGGAATGGATTGGGGTTATTGATCCTGAAACTGGTAATACTGCCTTCAATC AGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACATATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAAC TCAGCAGTTTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTATGGGTTATTCTGATTATTGGG G С CAAG G СAC СAC T С T CACAG T С T С С T CA
SEQ ID NO.:18
EVQLQQSVAELVRPGASVTLSCKASGYIFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGNT AFNQKFKGKATLTADISSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO.:19
GATGTTTTGATGACCCAAACTCCACGCTCCCTGTCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCT CCATCTCTTG TAGAT C GAG T CAGAG С С T T T TACATAG TAAT G GAAACAC С TAT T TAGAAT G G T ATTTGCAGAAACCAGGCCAGCCTCCAAAGGTCCTGATCTACAAAGTTTCCAACCGATTTTCTG GGGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCGGAG TGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCTCTCACGTTCG GTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
SEQ ID NO.:20
DVLMTQTPRSLSVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQPPKVLIYKVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISGVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO.:21
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGACCTGAGTTGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGA
TATCCTGTAAGGCTTCTGGATACACCTTCACTGACAACTACATGAACTGGGTGAAGCAGAGCC ATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTAATCCTTACTATGGTACTACTACCTACAACC AGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGACAAGTCCTCCCGCACAGCCTACATGGAGC TCCGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGATGACTGGTTTGATT ATTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO.:22
EIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDNYMNWVKQSHGKSLEWIGDINPYYGTT TYNQKFKGKATLTVDKSSRTAYMELRGLTSEDSAVYYCARDDWFDYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO.:23
GACATCGTTATGTCTCAGTCTCCATCTTCCATGTATGCATCTCTAGGAGAGAGAGTCA
CTATCACTTGCAAGGCGAGTCAGGACATTCATAACTTTTTAAACTGGTTCCAGCAGAAACCAG GAAAATCTCCAAAGACCCTGATCTTTCGTGCAAACAGATTGGTAGATGGGGTCCCATCAAGGT TCAGTGGCAGTGGATCTGGGCAAGATTATTCTCTCACCATCAGCAGCCTGGAGTTTGAAGATT TGGGAATTTATTCTTGTCTACAGTATGATGAGATTCCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGC TGGAGCTGAGA
SEQ ID NO.:24
DIVMSQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKSPKTLIFRANRLVDGV
- 59 034414
PSRFSGSGSGQDYSLTISSLEFEDLGIYSCLQYDEIPLTFGAGTKLELR
SEQ ID NO.:25
GAGGTGCAGCTTCAGGAGTCAGGACCTGACCTGGTGAAACCTTCTCAGTCACTTTCAC TCACCTGCACTGTCACTGGCTTCTCCATCACCAGTGGTTATGGCTGGCACTGGATCCGGCAGT TTCCAGGAAACAAACTGGAGTGGATGGGCTACATAAACTACGATGGTCACAATGACTACAACC CATСTСTCAAAAGTCGAATСTСTATСACTCAAGACACATСCAAGAACCAGTTСTTССTGCAGT TGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGCAAGCAGTTACGACGGCTTAT TTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO.:26
EVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGFSITSGYGWHWIRQFPGNKLEWMGYINYDGHN DYNPSLKSRISITQDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO.:27
KSSQSLLNSNFQKNFLA
SEQ ID NO.:28
FASTRES
SEQ ID NO.:29
QQHYSTPLT
SEQ ID NO.:30
GYIFTDYEIH
SEQ ID NO.:31
VIDPETGNTA
SEQ ID NO.:32
MGYSDY
SEQ ID NO.:33
RSSQSLLHSNGNTYLE
SEQ ID NO.:34
KVSNRFS
SEQ ID NO.:35
FQGSHVPLT
SEQ ID NO.:36
GYTFTDNYMN
SEQ ID NO.:37
DINPYYGTTT
SEQ ID NO.:38
ARDDWFDY
SEQ ID NO.:39
- 60 034414
KASQDIHNFLN
SEQ ID NO.:40
RANRLVD
SEQ ID NO.:41
LQYDEIPLT
SEQ ID NO.:42
GFSITSGYGWH
SEQ ID NO.:43
YINYDGHND
SEQ ID NO.:44
ASSYDGLFAY
SEQ ID N0:45 - нуклеотидная последовательность вариабельного участка тяжелой цепи ЗА4
CAGATCCAGTTGGTGCAATCTGGACCTGAGATGGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGA
TGTCCTGTAAGGCTTCTGGATACACATTCACTGACGACTACATGAGCTGGGTGAAACAGAGCC
ATGGAAAGAGCCTTGAGTGGATTGGAGATATTAATCCTTACAACGGTGATACTAACTACAACC
AGAAGTTCAAGGGCAAGGCCATATTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAGC TCAACAGCCTGACATCGGAAGACTCAGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGACCCGGGGGCTATGG ACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID N0:46 - полипептидная последовательность вариабельного участка тяжелой цепи ЗА4
QIQLVQSGPEMVKPGASVKMSCKASGYTFTDDYMSWVKQSHGKSLEWIGDINPYNGDT
NYNQKFKGKAILTVDKS S S TAYMQLNS L Т SEDSAVYYCARDPGAMDYWGQGT SVTVS S
SEQ ID N0:47 - нуклеотидная последовательность вариабельного участка легкой цепи ЗА4
GATGTTGTGATGACCCAAACTCCACTCTCCCTGGCTGTCAGTCTTGGAGATCAAGCCT CCATCTCTTG СAGAT С ТAG Т СAGAG С С Т Т С ТACATAG ТААТ G GAAACАС С ТАТ Т ТAGAAT G G Т ACCTTCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAAGCTCCTGATCCACACAGTTTCCAACCGATTTTCTG GGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTCAAGATCAGCAGAG TGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTATTACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCGCTCACGTTCG GTGCTGGGACCAGGCTGGAGCTGAAA
SEQ ID N0:48 - полипептидная последовательность вариабельного участка легкой цепи ЗА4
DWMTQTPLSLAVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIHTVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTRLELK
SEQ ID N0:49 - полипептидная последовательность CDR1
- 61 034414 тяжелой цепи ЗА4
GYTFTDDYMS
SEQ ID N0:50 полипептидная последовательность
CDR2 тяжелой цепи ЗА4
DINPYNGDTNYNQKFKG
SEQ ID
N0:51 полипептидная последовательность
CDR3 тяжелой цепи
ЗА4
DPGAMDY
SEQ ID
N0:52 полипептидная последовательность
CDR1 легкой цепи ЗА4
RSSQSLLHSNGNTYLE
SEQ ID N0:53 полипептидная последовательность
CDR2 легкой цепи ЗА4
TVSNRFS
SEQ ID N0:54 полипептидная последовательность
CDR3 легкой цепи ЗА4
FQGSHVPLT
SEQ ID N0.:55
GTAAGCAGCGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTC
SEQ ID NO.:56
GTAAGCGCTAGCCTAACACTCTCCCCTGTTGAAGC
SEQ ID NO.:57
GCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTG
GAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGA
AGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGG
ACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAG TCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGG GAGAGTGTTAG
SEQ ID NO.:58
AVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ
DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO.:59
CTTGAGCCGGCGGATGGTCGAGGTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCCAGCTGTTGGGG
TGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATTACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGA
GGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTT
TGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAAGTTTAAACGGATCTCTAGCGAATTCA
- 62 034414
TGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTGCATTGGAGCCTTGCCTTGCTGCTCTACCTCCACCATGCCA AGTGGTCCCAGGCTTGAGACGGAGCTTACAGCGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCC CGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCT ATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGG AGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGA GCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCT CGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAGGGTACCGCGGCCGCTTCGAATGAGA TCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAA TTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCG GAGATCTCTAGCTAGAGCCCCGCCGCCGGACGAACTAAACCTGACTACGGCATCTCTGCCCCT TCTTCGCGGGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGCCCTG TTCCACATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGACTGTAGTTGACATCCT TATAAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTGGCTTTCATCCTGGAGCAGACTTTGCAGT CTGTGGACTGCAACACAACATTGCCTTTATGTGTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATG CTGGGGGACATGTACCTCCCAGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATCA GAGGGGCCTGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCAATAGTGTTTATAA GGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGTAGTATATACTATCCAG ACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACGGGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTA GTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGCGATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACA TGGGGTCAGGATTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGGCTGAAGATCA AGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCTTCATTCTCCTTCGTTTAGCTAA TAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAAGGTGTATGTGAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAG GTGACGCCCCCAGAATAAAATTTGGACGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAA TATAAC С С T СACAAAC CCCTTGGG СAATAAATAC TAG T G TAG GAAT GAAACAT T С T GAATAT C TTTAACAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACTGGATGTCCATCTCACACGA ATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGTGCAATATGATACTGGGGTTATTAAGATGTGT CCCAGGCAGGGACCAAGACAGGTGAACCATGTTGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGA GAGTGGACGCCGACAGCAGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAACGGG GCTCCACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTTTTTGAAATTGTGGA GTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCGGTTTTGGACTGTAAAATAAGGGTGTA ATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGCTAACCACTGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACT AATGGCACCCCGGGGAATACCTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCT GCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGGTCCT CATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGGTAGCATATACTACCC AAATAT С T GGATAGCATAT GC TAT CC TAAT С TATAT С T GGGTAGCATAGGC TAT CC TAAT C TA TATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATAT
- 63 034414
CTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTG GGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAATAGAGATTAGGGT AGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATAT GC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAT GC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAGGC T AT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAT GC TAT С C TAAT C TATAT С T GGGTAGTATAT GC TAT C C TAAT T TATAT С T GGGTAGCATAGGC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAT GC TAT CC TA ATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCACG ATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTAT TTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAA ATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGA GAGAATAAC С С T GATAAAT G С T T СAATAATAT T GAAAAAG GAAGAG TAT GAG TAT T СAACAT T TCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAA CGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGG ATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCA CTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCG G T C G С C G CATACAC TAT T С T CAGAAT GAG T T G G T T GAG TACT GAG GAG T CACAGAAAAG CATC TTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTG CGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACA TGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACG ACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCG AACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAG GACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTG AGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAG TTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAG G T G С С T GAG T GAT TAAG CAT T G G TAAC T G T CAGAC CAAG TTTACTCATATATACTT TAGAT T G ATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATСTAGGTGAAGATССTTTTTGATAATСTCATGA СCAAAATСССTTAACGTGAGTTTTCGTTCGAGTGAGCGTCAGACССCGTAGAAAAGATCAAAG GATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGC TACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCT TCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCA AGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCA GTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGC GGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAAC TGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACA GGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACG CCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGAT
- 64 034414
GCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGG CCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACC GTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGT CAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGA TTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAA TTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTA TGTTGTGTG GAAT T G T GAG C G GATAACAAT T T CACACAG GAAACAG С TAT GAC CAT GAT TAC G CCAAGCTCTAGCTAGAGGTCGACCAATTCTCATGTTTGACAGCTTATCATCGCAGATCCGGGC AACGTTGTTGCATTGCTGCAGGCGCAGAACTGGTAGGTATGGCAGATCTATACATTGAATCAA TATTGGCAATTAGCCATATTAGTCATTGGTTATATAGCATAAATCAATATTGGCTATTGGCCA TTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATG TACAT TTATATTGGCTCATGTC CAATAT GAC C G CCATGTTGACATTGATTATT GAC TAGTTATTAATAGTAAT CAAT TACGGGGTCATTAGTTCAT AGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCC AACGACСССCGССCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTССCATAGTAACGСCAATAGGGACT TTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTG TATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTAT GCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCT ATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGG GGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGG GACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGG TGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCCTCACTCTCTTCCGCATC GCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGCTCGCGGTTGAGGACAAACTCTTCGCGGTCTTTCCAG TACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGCGA GTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAAGG TAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTGCT GCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGT
SEQ ID NO.:60
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGACATTGTGATGACCCAGTCTCC
SEQ ID NO.:61
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGATGTTTTGATGACCCAAACTCC
SEQ ID NO.:62
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGACATCGTTATGTCTCAGTCTCC
SEQ ID NO.:63
GGGAAGATGAAGACAGATGGTGCAGCCACAGC
SEQ ID NO.:64 GTAAGCGCTAGCGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCC
- 65 034414
SEQ ID NO.:65
GTAAGCGAATTCACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTG
SEQ ID NO.:66
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG
GGGGCACAGCAGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGT GGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGAC TCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT GCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGT
SEQ ID NO.:67
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
SEQ ID NO.:68
CTTGAGCCGGCGGATGGTCGAGGTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCCAGCTGTTGGGG TGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATTACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGA GGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTT TGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAAGTTTGCCGCCACCATGGAGACAGACA CACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGCGGAGACGGAGCTTACG GGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTG GGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTG ACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGC GTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAG CCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAATTCACTCACACATGC CCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCC AAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC GAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACA AAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCAC CAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCC ATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCC CCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTAT CCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACG CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGC AGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTAC ACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAATGATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATA AAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGAC ATATGGGAGGGCAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGCCCCGCCGCC GGACGAACTAAACCTGACTACGGCATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGCATGTAATCCC
- 66 034414
TTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAG TAGTATATACTATC CAGAC TAAC С С TAAT T СAATAG CATATGTTACC СAAC G G GAAG CATAT G CTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGCGATGTAGGTGGGCGGGCCAAGAT AGGGGCGCGATTGCTGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCAC AGGGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGG TAGCATATAC TACCCAAATAT С T GGATAGCATAT GC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATA GGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGC TAT CC TAAT T TATAT С T GGGTAGCATAGGC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAT GC TAT CCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCT AATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTACCCAAAT AT С T GGATAGCATAT GC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAT GC TAT CC TAAT C TATAT C T GGGTAGCATAGGC TAT CC TAAT C TATAT С T GGGTAGCATAT GC TAT CC TAAT C TATAT С T GG GTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTA GCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCA TAT GC TAT С С T CACGAT GATAAGC T GT CAAACAT GAGAAT TAAT T С T T GAAGACGAAAGGGCC TCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTG GCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATA TGTATCCGCTCAT GAGACAATAAC С С T GATAAATGС T T CAATAATAT T GAAAAAGGAAGAGTA TGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTT TTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGG GTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTT TTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCG GGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAG TCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCA TGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCG CTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATG AAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCA AACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGG CGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATA AATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGC CCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGAC AGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCAT ATATAC T T TAGAT T GAT T TAAAAC T T CAT T T T TAAT T TAAAAGGAT С TAGG T GAAGAT С С T T T TTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCG TAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAA CAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTC
- 67 034414
CGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGT TAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTAC CAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTAC CGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAA CGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAG GGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGC TTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGC GTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCT TTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTG ATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGA CCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGAC CGCCATGTT GACAT T GAT TAT T GAC TAGTTATTAATAGTAAT СAAT TACGGGGTCATTAGTTC ATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGC ССAACGACСССCGССCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTССCATAGTAACGСCAATAGGGA CTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAG TGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATT ATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCG CTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCAC GGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAAC GGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTAC GGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCCTCACTCTCTTCCGCA TCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGCTCGCGGTTGAGGACAAACTCTTCGCGGTCTTTCC AGTACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGC GAGTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAA GGTAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTG CTGCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGT
SEQ ID NO.:69
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGT
SEQ ID NO.:70 GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAGGTGCAGCTTCAGGAGTCAGG
SEQ ID NO.:71
GGGGCCAGGGGAAAGACAGATGGGCCCTTCGTTGAGGC
SEQ ID NO.: 89: Иллюстративный вариант осуществления CDRL1
K-S-S-Q-S-L-L-N/H-S/T-S/N/D-N/G-Q/N/K-K/L-N-Y-L-A
SEQ ID NO.:90: Иллюстративный вариант осуществления CDRL1
K-A-S-Q-D-I-H-N/T-Y/F-L-N
- 68 034414
SEQ ID NO.:91: Иллюстративный вариант осуществления CDRL2
F-A-S-T-R-E-S
SEQ ID NO.: 92: Иллюстративный вариант осуществления CDRL2
L-V-S-K-L-D-S
SEQ ID NO.:93: Иллюстративный вариант осуществления CDRL2
R-A-N-R-L-V-D
SEQ ID NO.:94: Иллюстративный вариант осуществления CDRL3
Q-Q-H-Y-S-T-P-L-T
SEQ ID NO.:95: Иллюстративный вариант осуществления CDRL3 W/L-Q-Y/G-D/T-A/E/H-F-P-R-T
SEQ ID NO.:96: Иллюстративный вариант осуществления CDRH1
G-Y-T/I-F-T-D/E-Y-E/N-M/I/V-H
SEQ ID NO.:97: Иллюстративный вариант осуществления CDRH1
G-F-T/S-I-T-S-G-Y-G-W-H
SEQ ID NO.:98: Иллюстративный вариант осуществления CDRH2 V/N/G-I/L-D-P-E/A/G-T/Y-G-X-T-A
SEQ ID NO.:99: Иллюстративный вариант осуществления CDRH2 Y-I-N/S-F/Y-N/D-G
SEQ ID NO.:100: Иллюстративный вариант осуществления CDRH3 M-G-Y-S/A-D-Y
SEQ ID NO.:101: Иллюстративный вариант осуществления CDRH3
A-S-S-Y-D-G-F-L-A-Y
SEQ ID NO.:102: Иллюстративный вариант осуществления CDRH1
A-R/W-W/F-G-L-R-Q/N
SEQ ID N0.103 - вариабельный участок легкой цепи ЗА2
DAVMTQIPLTLSVTIGQPASLSCKSSQSLLHSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLISLVSK
LDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGLYYCWQGTHFPRTFAGGTNLEIK
SEQ ID N0.104 - вариабельный участок легкой цепи 3F6
SIVMTQTPLTLSVTIGQPASITCKSSQSLLYSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLISLVSK
LDSGVPDGFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPRTFGGGTKLEIK
SEQ ID N0.105 - вариабельный участок легкой цепи ЗЕ8
DAVMTQIPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSK
LDSGVPDRFTGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCWQGTHFPRTFGGGTKLEIK
SEQ ID N0.106 - вариабельный участок легкой цепи ЗЕ10
- 69 034414
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSN
LASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID N0.107 - вариабельный участок легкой цепи ЗА9
DIVMTQSPSSLAMSLGQKVTMSCKSSQSLLNSNNQLNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRKSGVPDRFIGSGSGTDFTLTITSVQAEDLADYFCQQHFNTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.108 - вариабельный участок легкой цепи ЗВ1
DIVMTQSPSSLAISVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVFFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSIPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.109 - вариабельный участок легкой цепи 3G5
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVFFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTITSVQAEDLADYFCQQHYSIPLTFGSGTKLELK
SEQ ID N0.110 - вариабельный участок легкой цепи ЗВ2
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSIPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO.lll - вариабельный участок легкой цепи ЗВ8
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO.112 - вариабельный участок легкой цепи 3G8
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.113 - вариабельный участок легкой цепи 3F7
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.114 - вариабельный участок легкой цепи ЗЕ9
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTEFTLTITSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.115 - вариабельный участок легкой цепи ЗСЗ
DIWTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFGS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISGVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.106 - вариабельный участок легкой цепи ЗЕ12
DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMNCKSSQSLLNRSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSIPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.117 - вариабельный участок легкой цепи 4А2
DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMNCKSSQSLLNNSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLLYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTYFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLDLK
SEQ ID N0.118 - вариабельный участок легкой цепи 3F10
- 70 034414
DIVMTQSPSSLTMSVGQKVTMSCKSSQSLLNTSNQLNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TTESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.119 - вариабельный участок легкой цепи 3F4
DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNTSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRASGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.120 - вариабельный участок легкой цепи ЗВ11
DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFAS
TRESGVPDRFIGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.121 - вариабельный участок легкой цепи 3G12
DIVMTQSPKFMSTSVGDRVSITCKASQDVGTAVAWYQQKPGQSPELLIYWTSTRHTGV
PDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDLADYFCQQHYSIPLTFGAGTKLELR
SEQ ID N0.122 - вариабельный участок легкой цепи 3D1
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIHTYLNWFQQKPGKSPETLIYRANRLVDGV
PSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.123 - вариабельный участок легкой цепи ЗС2
DIQMTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQDIHNYLNWFQQKPGKSPKTLIHRANRLVAGV
PSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDAFPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.124 - вариабельный участок легкой цепи ЗЕ6
DIQMTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQDIHNYLNWFQQKPGKSPKTLIHRANRLVAGV
PSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDAFPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.125 - вариабельный участок легкой цепи ЗНЗ
DIVMSQSPSSMYASLGERVTITCKASQDIHRFLNWFQQKPGKSPKTLIFHANRLVDGV
PSRFSGSGSGLDYSLTISSLEYEDMGIYFCLQYDAFPLTFGAGTKLELK
SEQ ID N0.126 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗА2
HEIQLQQSGPELVKPGASVKMSCKTSGYTFTDYNMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDV
TEYNEKFKGRATLTSDKSSSTAYMDLSSLTSDDSAVYFCAWFGLRQWGQGTLVTVST
SEQ ID N0.127 - вариабельный участок тяжелой цепи 3F6
HEVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYIFTEYNIHWVKQKPGQGPEWIGNINPYNDV
TEYNEKFKGKATLTSDKASSTAYMDLSSLTSEDSAVYYCARWGLRNWGQGTLVTVSA
SEQ ID N0.128 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗЕ8
HEVQLQQSVPELVKPGASVKMSCKTSGYTFTEYNMHWVKQKPGQGPEWIGNINPYNNV
TEYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYLDLSSLTSEDSAVYYCARWGLRNWGQGTLVTVSA
SEQ ID N0.129 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗА9
HQVQVQQPGAELVRPGASVTLSCKASGYIFTDYEVHWVRQRPVHGLEWIGVIDPETGD
TAYNQKFKGKAT L TADKS S S TAYME L S S L ТАЕ DSAVYYCIGYADYWGQGT Т L TVS S
SEQ ID N0.130 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗВ1
- 71 034414
HQVQLQQPGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGG
TAYNQKFKGKATLTTDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.131 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗВ2
HEVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGA
TAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.132 - вариабельный участок тяжелой цепи 3F4
HEVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGS
TAYNQKFKGKATLTADKASSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.133 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗЕ9
HEVQLQQSGAELVRPGASATLSCKASGYTFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGS
TAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYADYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.134 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗВ8
HEVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGD
TAYNQNFTGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYADYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.135 - вариабельный участок тяжелой цепи 3G8
HQVQLKQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEVHWVKQTPVHGLEWIGVIDPATGD
TAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMEVSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.136 - вариабельный участок тяжелой цепи 3F7
HQAYLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGD
TAYNQKFKDKATLTADKASSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.137 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗЕ12
HQVQLQQSEAELVKPGASVKLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGD
TAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSRLTSEDSAVYYCMGHSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.138 - вариабельный участок тяжелой цепи 3G12
HEVQLQQSVAELVRPGASVTVSCKASGYIFTDYEIHWVKQTPAHGLEWIGVIDPETGN
TAFNQKFKGKATLTADISSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.139 - вариабельный участок тяжелой цепи 3F10
HEVQLQQSVAELVRPGAPVTLSCKASGYTFTDYEVHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGA
TAYNQKFKGKATLTADKSSSAAYMELSRLTSEDSAVYYCMSYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.140 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗСЗ
HEVQLQQSVAEWRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVIDPETGV
TAYNQRFRDKATLTTDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYFCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.141 - вариабельный участок тяжелой цепи 3G5
HQVQLQQPGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEIHWVKQTPVHGLEWIGVLDPGTGR
TAYNQKFKDKATLSADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCMSYSDYWGPGTTLTVSS
SEQ ID N0.142 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗВ11
- 72 034414
HEVQLQQSVAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEMHWVKQTPVRGLEWIGVIDPATGD
TAYNQKFKGKATLTADKSSSAAFMELSSLTSEDSAVYYCMGYSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.143 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗЕ6
HQVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFSDYEMHWVKQTPVHGLEWIGGIDPETGD
TVYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCISYAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID N0.144 - вариабельный участок тяжелой цепи 4А2
HQVKLQQSGTELVRPGASVTLSCKASGYKFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGGIDPETGG
TAYNQKFKGKAILTADKSSTTAYMELRSLTSEDSAVYYCISYAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID N0.145 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗЕ10
HEVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGDTFTDYYMNWVKQSHGKSLEWIGDINPNYGG
ITYNQKFKGKATLTVDTSSSTAYMELRGLTSEDSAVYYCQAYYRNSDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID N0.146 - вариабельный участок тяжелой цепи 3D1
HEVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGFSITSGYGWHWIRQFPGDKLEWMGYISFNGD
YNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLSSVTTEDTATYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID N0.147 - вариабельный участок тяжелой цепи ЗС2
HDVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGFSITSGYGWHWIRQFPGNKLEWMGYISFNGD
SNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTSEDTATYYCASSYDGLFAYWGQGPLVTVSA
SEQ ID NO.:148
KSSQSLLHSDGKTYLN
SEQ ID NO.
: 149
LVSKLDS
SEQ ID NO.
: 150
WQGTHFPRT
SEQ ID
GYTFTD
YNMH
SEQ ID
NO.:152
YINPYNDVTE
SEQ ID NO.:153
AWFGL RQ
SEQ ID NO.:154
RSSKSLLHSNGN TYLY
SEQ ID NO.:155
RMSNLAS
SEQ ID NO.:156
MQHLEYPYT
- 73 034414
SEQ ID NO.:157
GDTFTD YYMN
SEQ ID NO.:158
DINPNYGGIT
SEQ ID NO.:159
QAYYRNS DY
SEQ ID NO.:160
KASQDVGTAVA
SEQ ID NO.:161
WTSTRHT
SEQ ID NO.:162
QQHYSIPLT
SEQ ID NO.:163
GYIFTDYEIH
SEQ ID NO.:164
VIDPETGNTA
SEQ ID NO.:165
MGYSDY
SEQ ID NO.:166
MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSNFQKNF LAWYQQKPGQPPKLLIYFASTRESSVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQHYSTP LTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO.:167
MDWTWRILFLVAAATGTHAEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTDYEIHWVRQ APGQGLEWMGVIDPETGNTAFNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCMGYSDY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ YNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO.:168
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSNFQKNFLAWYQQKPGQPPKLLIYFAS TRESSVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQHYSTPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO.:169
- 74 034414
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTDYEIHWVRQAPGQGLEWMGVIDPETGNT
AFNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLTSEDTAVYYCMGYSDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO.:170
MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDIHNFLNWFQQ
KPGKAPKTLIFRANRLVDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYSCLQYDEIPLTFGQG
TKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT
EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO.:171
MDWTWRILFLVAAATGTHAEVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSITSGYGWHWIR
QHPGKGLEWIGYINYDGHNDYNPSLKSRVTISQDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASSYDG
LFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTS
GVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP
CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP
REEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS
RDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO.:172
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDIHNFLNWFQQKPGKAPKTLIFRANRLVDGV
PSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYSCLQYDEIPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO.:173
EVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSITSGYGWHWIRQHPGKGLEWIGYINYDGHN
DYNPSLKSRVTISQDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASSYDGLFAYWGQGTLVTVS
SEQ ID N0:186 (консенсусная последовательность 1 вариабельного участка вариантной легкой цепи ЗА4)
DXVMTQTPLSLXVXXGXXASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPXLLIHTVSN
RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDXGVYYCFQGSHVPLTFGXGTXLEXK где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 48.
Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
SEQ ID N0:187 (консенсусная последовательность 2
I вариабельного участка вариантной легкой цепи ЗА4)
DXalVMTQTPLSLXa2VXa3Xa4GXa5Xa6ASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPX a7LLIHTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDXa8GVYYCFQGSHVPLTFGXa9GTXai 0LEXallK где Xa1 может быть гидрофобной аминокислотой;
Ха2 может быть А или Р;
Ха3 может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой;
Ха4 может быть L или Р;
Ха5 может быть кислой аминокислотой;
Ха6 может быть Q или Р;
Ха7 может быть основной аминокислотой;
Ха8 может быть гидрофобной аминокислотой;
Ха9 может быть А или Q;
Xa10 может быть основной аминокислотой или
Xa11 может быть гидрофобной аминокислотой, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 48.
SEQ ID N0:188 (консенсусная последовательность 3
J вариабельного участка вариантной легкой цепи ЗА4)
DXa1VMTQTPLSLXa2VXa3Xa4GXa5Xa6ASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPX a7LLIHTVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDXa8GVYYCFQGSHVPLTFGXa9GTXa1 olexa11k где ХА1 может быть V или I;
ХА2 может быть А или Р;
ХА3 может быть S или Т;
ХА4 может быть L или Р;
- 75 034414
ХА5 может быть D или Е;
ХА6 может быть Q или Р;
ХА7 может быть K или Q;
Хд8 может быть L или V;
ХА9 может быть А или Q;
ХАю может быть R или K или
ХА11 может быть L или I, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 48.
SEQ ID N0:189 (вариабельный участок варианта 1 легкой цепи
ЗА4: Lvhl)
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYTVSN
RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID N0:190 (вариабельный участок варианта 2 легкой цепи
ЗА4: Lvh2)
DWMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYTVSN
RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID N0:191 (консенсусная последовательность 1 вариабельного участка вариантной тяжелой цепи ЗА4)
QXQLVQSGXEXXKPGASVKXSCKASGYTFTDDYMSWVXQXXGXXLEWXGDINPYNGDT NYNQKFKGXXXXTXDXSXSTAYMXLXSLXSEDXAVYYCARDPGAMDYWGQGTXVTVSS где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 46. Аминокислотная замена может быть, например, консервативной.
SEQ ID N0:192 (консенсусная последовательность 2 вариабельного участка вариантной тяжелой цепи ЗА4)
QXblQLVQSGXb2EXb3Xb4KPGASVKXb5SCKASGYTFTDDYMSWVXb6QXb7Xb8GXb9Xblo LEWXbllGDINPYNGDTNYNQKFKGXbl2Xbi3Xbi4Xbi5TXbi6DXbl7SXbl8STAYMXbl9LXb2oSLX b21SEDXb22AVYYCARDPGAMDYWGQGTXb23VTVSS где Xb1 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb2 может быть Р или А;
Xb3 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb4 может быть V или K;
Xb5 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb6 может быть основной аминокислотой;
Xb7 может быть S или А;
Xb8 может быть Н или Р;
Xb9 может быть основной аминокислотой;
Xb10 может быть S или G;
Xb11 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb12 может быть основной аминокислотой;
Xb13 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb14 может быть I или Т;
Xb15 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb16 может быть гидрофобной аминокислотой;
Xb17 может быть K или Т;
Xb18 может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой;
Xb19 может быть Q или Е;
Xb20 может быть N или S;
Xb21 может быть Т или R;
Xb22 может быть нейтральной гидрофильной аминокислотой или
Xb23 может быть S или L, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 46.
- 76 034414
SEQ ID N0:193 (консенсусная последовательность 3 вариабельного участка вариантной тяжелой цепи ЗА4)
QXbiQLVQSGXb2EXb3Xb4KPGASVKXb5SCKASGYTFTDDYMSWVXb6QXb7Xb8GXb9Xbio LEWXb11GDINPYNGDTNYNQKFKGXbi2Xb13Xb14Xb15TXb16DXbi7SXbi8STAYMXb19LXB2oSLX b21SEDXb22AVYYCARDPGAMDYWGQGTXb23VTVSS где XB1 может быть I или V;
XB2 может быть Р или А;
ХВ3 может быть М или V;
XB4 может быть V или K;
XB5 может быть М или V;
XB6 может быть K или R;
XB7 может быть S или А;
XB8 может быть Н или Р;
XB9 может быть K или Q;
XB10 может быть S или G;
XB11 может быть I или М;
XB12 может быть K или R;
XB13 может быть А или V;
XB14 может быть I или Т;
XB15 может быть L или I;
XB16 может быть V или А;
XB17 может быть K или Т;
ХВ18 может быть S или Т;
XB19 может быть Q или Е;
XB20 может быть N или S;
XB21 может быть Т или R;
XB22 может быть S или Т или
XB23 может быть S или L, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная значениями X, является аминокислотной заменой (консервативной или неконсервативной) по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде, приведенном в SEQ ID NO: 46.
- 77 034414
SEQ ID N0:194 (вариабельный участок варианта 1 тяжелой цепи ЗА4: Hvhl)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWMGDINPYNGDT NYNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID N0:195 (вариабельный участок варианта 2 тяжелой цепи ЗА4: Hvh2)
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWMGDINPYNGDT NYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID N0:196 (вариабельный участок варианта 3 тяжелой цепи ЗА4: Hvh3)
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWIGDINPYNGDT NYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID N0:197 (вариабельный участок варианта 4 тяжелой цепи ЗА4: Hvh4)
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGQGLEWIGDINPYNGDT
NYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 198 мышиная легкая (каппа) цепь ЗА4
DVVMTQTPLSLAVSLGDQASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIHTVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPLTFGAGTRLELKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID N0:199 вариант 1 гуманизированной легкой (каппа) цепи ЗА4; Lhl
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYTVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
- 78 034414
SEQ ID N0:200 вариант 2 гуманизированной легкой (каппа) цепи ЗА4; Lh2
DWMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYTVSN RFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID N0:201 тяжелая (Iggl) цепь мышиного ЗА4
QIQLVQSGPEMVKPGASVKMSCKASGYTFTDDYMSWVKQSHGKSLEWIGDINPYNGDT NYNQKFKGKAILTVDKS S S TAYMQLNS LT SEDSAVYYCARDPGAMDYWGQGTSVTVSSAS TKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQ ID N0:202 вариант 1 гуманизированной тяжелой (Iggl) цепи 3A4; Hhl
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWMGDINPYNGDT NYNQKFKGRVTITADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQ ID N0:203 вариант 2 гуманизированной тяжелой (Iggl) цепи 3A4; Hh2
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWMGDINPYNGDT NYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQ ID N0:204 вариант 3 гуманизированной тяжелой (Iggl)
- 79 034414 цепи ЗА4; Hh3
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVRQAPGQGLEWIGDINPYNGDT NYNQKFKGRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQ ID N0:205 вариант 4 гуманизированной тяжелой (Iggl) цепи 3A4: Hh4
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGQGLEWIGDINPYNGDT NYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPK DTLMI SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQ ID NO.:206
ATAC С CAAG С T T G C GAG CAT G GAGACAGACACAC
SEQ ID NO.:207
ATACCCAAGCTTCATTTCCCGGGAGACAGGGAG
SEQ ID NO.:208
ATACCCAAGCTTGGGCCACCATGAACTTTCTGCTGTCTTGG
SEQ ID NO.:209
ATACCCAAGCTTCTAACACTCTCCCCTGTTGAAG
SEQ ID N0:210 pK-CR5
СTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGC T CAT T T T T TAAC CAATAG G С C GAAAT C G G CAAAAT С С С T TATAAAT CAAAAGAATAGAC C GAG ATAGGGTTGAGTGTTGTTСCAGTTTGGAACAAGAGTССACTATTAAAGAACGTGGACTССAAC GTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCA AGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTT AGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCG GGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTT AATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGA
- 80 034414
TCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTA AGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGCG TAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGAGCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCTCTAGAACTAGT GGATCCACATCGGCGCGCCAAATGATTTGCCCTCCCATATGTCCTTCCGAGTGAGAGACACAA AAAAT T С CAACACAC TAT T G CAAT GAAAATAAAT TTCCTTTATTAGC CAGAG G T C GAGAT T TA AATAAGCTTGCTAGCAGATCTTTGGACCTGGGAGTGGACACCTGTGGAGAGAAAGGCAAAGTG GATGTCATTGTCACTCAAGTGTATGGCCAGATCGGGCCAGGTGAATATCAAATCCTCCTCGTT TTTGGAAACTGACAATCTTAGCGCAGAAGTAATGCCCGCTTTTGAGAGGGAGTACTCACCCCA ACAGCTGGATCTCAAGCCTGCCACACCTCACCTCGACCATCCGCCGTCTCAAGACCGCCTACT TTAATTACATCATCAGCAGCACCTCCGCCAGAAACAACCCCGACCGCCACCCGCTGCCGCCCG CCACGGTGCTCAGCCTACCTTGCGACTGTGACTGGTTAGACGCCTTTCTCGAGAGGTTTTCCG ATCCGGTCGATGCGGACTCGCTCAGGTCCCTCGGTGGCGGAGTACCGTTCGGAGGCCGACGGG TTTCCGATCCAAGAGTACTGGAAAGACCGCGAAGAGTTTGTCCTCAACCGCGAGCCCAACAGC TGGCCCTCGCAGACAGCGATGCGGAAGAGAGTGACCGCGGAGGCTGGATCGGTCCCGGTGTCT TCTATGGAGGTCAAAACAGCGTGGATGGCGTCTCCAGGCGATCTGACGGTTCACTAAACGAGC TCTGCTTATATAGGCCTCCCACCGTACACGCCTACCTCGACCCGGGTACCAATCTTATAATAC AAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGTTATAATA СAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGTTATAAT ACAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGT TAAG G TTGTCGAGTGAAGACGAAAGGGTTCATTAAGGCGCGCCGTCGACCTCGAGGGGGGGCCCGGTA CCCAGCTTTTGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTG TTTCCTGTGT GAAAT TGTTATCCGCT СACAAT T С CACACAACATAC GAG С C G GAAG CATAAAG TGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCC GCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGA GGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTT CGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGG GATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCC GCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCA AGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCC CTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCG GGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGC TCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAAC TATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAAC AGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTAC GGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAA AGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGC
- 81 034414
AAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGG TCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGG АТ С Т Т САС С ТAGAT С С Т Т Т ТAAAT ТAAAAAT GAAG Т Т Т ТAAAT СААТ С ТAAAG ТATATAT GAG TAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTA TTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTA CCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCA GCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCC ATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGC AACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTC AGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTT AGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTT ATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGT GAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCG TCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGT TCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACT CGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACA GGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTC ТТССТТТТТ СААТATTAT Т GAAGCATТ TAT CAGGGT TAT Т GT С Т CAT GAGСGGATАСАТАТ Т Т GAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
SEQ ID N0:211 pMPG-CR5 GTCGACGATACCGTGCACTTAATTAAGCGCGCTCGACCAAATGATTTGCCCTCCCATA TGTCCTTCC GAG T GAGAGACACAAAAAAT T С СAACACAC TAT T G СAAT GAAAATAAAT T T С С T TTATTAGCCAGAGGTCGAGGTCGGGGGATCCGTTTAAACTTGGACCTGGGAGTGGACACCTGT GGAGAGAAAGGCAAAGTGGATGTCATTGTCACTCAAGTGTATGGCCAGATCGGGCCAGGTGAA TATCAAATCCTCCTCGTTTTTGGAAACTGACAATCTTAGCGCAGAAGTAATGCCCGCTTTTGA GAGGGAGTACTCACCCCAACAGCTGGATCTCAAGCCTGCCACACCTCACCTCGACCATCCGCC G T С T CAAGAC CGCCTACTTTAAT TAGAT CAT CAG CAG СAC С T С C G С CAGAAACAAC С С C GAC C GCCACCCGCTGCCGCCCGCCACGGTGCTCAGCCTACCTTGCGACTGTGACTGGTTAGACGCCT TTCTCGAGAGGTTTTCCGATCCGGTCGATGCGGACTCGCTCAGGTCCCTCGGTGGCGGAGTAC CGTTCGGAGGCCGACGGGTTTCCGATCCAAGAGTACTGGAAAGACCGCGAAGAGTTTGTCCTC AACCGCGAGCCCAACAGCTGGCCCTCGCAGACAGCGATGCGGAAGAGAGTGACCGCGGAGGCT GGATCGGTCCCGGTGTCTTCTATGGAGGTCAAAACAGCGTGGATGGCGTCTCCAGGCGATCTG ACGGTTCACTAAACGAGCTCTGCTTATATAGGCCTCCCACCGTACACGCCTACCTCGACCCGG GTACCAATCT T AT ААТ AC AAAC AGAC C AGAT TGTCTGTTTGT T AT ААТ AC AAAC AGAC C AGAT TGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAGA TTGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAGAT TGTCTGTTTGT TATAATACAAACAGAC CAG
- 82 034414
ATTGTCTGTTTGTTAAGGTTGTCGAGTGAAGACGAAAGGGTTAATTAAGGCGCGCCGTCGACT
AGCTTGGCACGCCAGAAATCCGCGCGGTGGTTTTTGGGGGTCGGGGGTGTTTGGCAGCCACAG ACGCCCGGTGTTCGTGTCGCGCCAGTACATGCGGTCCATGCCCAGGCCATCCAAAAACCATGG GTCTGTCTGCTCAGTCCAGTCGTGGACCAGACCCCACGCAACGCCCAAAATAATAACCCCCAC GAACCATAAACCATTCCCCATGGGGGACCCCGTCCCTAACCCACGGGGCCAGTGGCTATGGCA GGGCCTGCCGCCCCGACGTTGGCTGCGAGCCCTGGGCCTTCACCCGAACTTGGGGGGTGGGGT GGGGAAAAGGAAGAAACGCGGGCGTATTGGCCCCAATGGGGTCTCGGTGGGGTATCGACAGAG TGCCAGCCCTGGGACCGAACCCCGCGTTTATGAACAAACGACCCAACACCCGTGCGTTTTATT CTGTCTTTTTATTGCCGTCATAGCGCGGGTTCCTTCCGGTATTGTCTCCTTCCGTGTTTCAGT TAGCCTCCCCCATCTCCCCTATTCCTTTGCCCTCGGACGAGTGCTGGGGCGTCGGTTTCCACT ATCGGCGAGTACTTCTACACAGCCATCGGTCCAGACGGCCGCGCTTCTGCGGGCGATTTGTGT ACGCCCGACAGTCCCGGCTCCGGATCGGACGATTGCGTCGCATCGACCCTGCGCCCAAGCTGC ATCATCGAAATTGCCGTCAACCAAGCTCTGATAGAGTTGGTCAAGACCAATGCGGAGCATATA CGCCCGGAGCCGCGGCGATCCTGCAAGCTCCGGATGCCTCCGCTCGAAGTAGCGCGTCTGCTG CTCCATACAAGCCAACCACGGCCTCCAGAAGAAGATGTTGGCGACCTCGTATTGGGAATCCCC GAACATCGCCTCGCTCCAGTCAATGACCGCTGTTATGCGGCCATTGTCCGTCAGGACATTGTT GGAGCCGAAATCCGCGTGCACGAGGTGCCGGACTTCGGGGCAGTCCTCGGCCCAAAGCATCAG CTCATCGAGAGCCTGCGCGACGGACGCACTGACGGTGTCGTCCATCACAGTTTGCCAGTGATA CACATGGGGATCAGCAATCGCGCATATGAAATCACGCCATGTAGTGTATTGACCGATTCCTTG CGGTCCGAATGGGCCGAACCCGCTCGTCTGGCTAAGATCGGCCGCAGCGATCGCATCCATGGC CTCCGCGACCGGCTGCAGAACAGCGGGCAGTTCGGTTTCAGGCAGGTCTTGCAACGTGACACC CTGTGCACGGCGGGAGATGCAATAGGTCAGGCTCTCGCTGAATTCCCCAATGTCAAGCACTTC CGGAATCGGGAGCGCGGCCGATGCAAAGTGCCGATAAACATAACGATCTTTGTAGAAACCATC GGCGCAGCTATTTACCCGCAGGACATATCCACGCCCTCCTACATCGAAGCTGAAAGCACGAGA TTCTTCGCCCTCCGAGAGCTGCATCAGGTCGGAGACGCTGTCGAACTTTTCGATCAGAAACTT CTCGACAGACGTCGCGGTGAGTTCAGGCTTTTTCATATCTCATTGCCCGGGATCTGCGGCACG CTGTTGACGCTGTTAAGCGGGTCGCTGCAGGGTCGCTCGGTGTTCGAGGCCACACGCGTCACC TTAATATGCGAAGTGGACCTGGGACCGCGCCGCCCCGACTGCATCTGCGTGTTCGAATTCGCC AATGACAAGACGCTGGGCGGGGTTTGTGTCATCATAGAACTAAAGACATGCAAATATATTTCT TCCGGGGACACCGCCAGCAAACGCGAGCAACGGGCCACGGGGATGAAGCAGGGCATGGCGGCC GACGCGCTGGGCTACGTCTTGCTGGCGTTCGCGACGCGAGGCTGGATGGCCTTCCCCATTATG ATTCTTCTCGCTTCCGGCGGCATCGGGATGCCCGCGTTGCAGGCCATGCTGTCCAGGCAGGTA GATGACGACCATCAGGGACAGCTTCAAGGATCGCTCGCGGCTCTTACCAGCCTAACTTCGATC ACTGGACCGCTGATCGTCACGGCGATTTATGCCGCCTCGGCGAGCACATGGAACGGGTTGGCA TGGATTGTAGGCGCCGCCCTATACCTTGTCTGCCTCCCCGCGTTGCGTCGCGGTGCATGGAGC CGGGCCACCTCGACCTGAATGGAAGCCGGCGGCACCTCGCTAACGGATTCACCACTCCAAGAA
- 83 034414
TTGGAGCCAATCAATTCTTGCGGAGAACTGTGAATGCGCAAACCAACCCTTGGCAGAACATAT CCATCGCGTCCGCCATCTCCAGCAGCCGCACGCGGCGCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAA GGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACG CTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAG CTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCC TTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGT TCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGG TAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGG TAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAA CTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGG AAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGT TTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATСTCAAGAAGATCCTTTGATСTTTTCTAG GGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAA AAG GAT C T T СAC С TAGAT С С T T T TAAAT TAAAAATGAAGT T T TAAAT СAAT С TAAAGTATATA TGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTG TCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGG CTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTT ATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGC CTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTT GCGCAACGTTGTTGCCATTGCTGCAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTC ATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGC GGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCAT GGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGAC TGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCC GGCGTCAACACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAA ACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACC CACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAA AACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCAT ACTCTTCCTTTTT CAATAT TAT T GAAGCAT T TAT CAGGGT TAT T GT С T CAT GAGCGGATACAT ATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCC ACCT GAC G T С TAAGAAAC CATTATTATCAT GACAT TAAC С TATAAAAATAG G C G TAT CAC GAG GCCCTTTCGTCTTCAAGAATTCTCATGTTTGACAGCTTATCTCTAGCAGATCCGGAATTCCCC TCCCCAATTTAAATGAGGACCTAACCTGTGGAAATCTACTGATGTGGGAGGCTGTAACTGTAC AAACAGAGGTTATTGGAATAACTAGCATGCTTAACCTTCATGCAGGGTCACAAAAAGTGCATG ACGATGGTGGAGGAAAACCTATTCAAGGCAGTAATTTCCACTTCTTTGCTGTTGGTGGAGACC CCTTGGAAATGCAGGGAGTGCTAATGAATTACAGGACAAAGTACCCAGATGGTACTATAACCC
- 84 034414
CTAAAAACCCAACAGCCCAGTCCCAGGTAATGAATACTGACCATAAGGCCTATTTGGACAAAA ACAATGCTTATCCAGTTGAGTGCTGGGTTCCTGATCCTAGTAGAAATGAAAATACTAGGTATT TTGGGACTTTCACAGGAGGGGAAAATGTTCCCCCAGTACTTCATGTGACCAACACAGCTACCA CAGTGTTGCTAGATGAACAGGGTGTGGGGCCTCTTTGTAAAGCTGATAGCCTGTATGTTTCAG CTGCTGATATTTGTGGCCTGTTTACTAACAGCTCTGGAACACAACAGTGGAGAGGCCTTGCAA GATATTTTAAGATСCGССTGAGAAAAAGATСTGTAAAGAATССTTACСTAATTTССTTTTTGC TAAGTGACCTTATAAACAGGAGAACCCAGAGAGTGGATGGGCAGCCTATGTATGGTATGGAAT CCCAGGTAGAAGAGGTTAGGGTGTTTGATGGCACAGAAAGACTTCCAGGGGACCCAGATATGA TAAGATATAT T GACAAACAGGGACAAT T GCAAACCAAAAT GC T T TAAACAGGT GC T T T TAT T G TACATATACAT T TAATAAAT GC T GC T T T T GTATAAGCCAC T T T TAAGC T T GT GT TAT T T T GGG GGTGGTGTTTTAGGCCTTTTAAAACACTGAAAGCCTTTACACAAATGCAACTCTTGACTATGG GGGTCTGACCTTTGGGAATGTTCAGCAGGGGCTGAAGTATCTGAGACTTGGGAAGAGCATTGT GATTGGGATTCAGTGCTTGATCCATGTCCAGAGTCTTCAGTTTCTGAATCCTCTTCTCTTGTA ATAT CAAGAATACAT TTCCCCATGCATATATTATATTTCATCCTT GAAAAAG TATACATAC T T ATCTCAGAATCCAGCCTTTCCTTCCATTCAACAATTCTAGAAGTTAAAACTGGGGTAGATGCT ATTACAGAGGTAGAATGCTTCCTAAACCCAGAAATGGGGGATCTGC
SEQ ID N0:212 - полипептидная последовательность CDR2 гуманизированной тяжелой цепи ЗА4.
DINPYNGDTN
SEQ ID N0:213 - OGS18500
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGATGTTGTGATGACCCAAACTCC
SEQ ID N0:214 - OGS2084 GGGAAGATGAAGACAGATGGTGCAGCCACAGTCCG SEQ IDNO:215 - OGS1879 GGGTTCCAGGTTCCACTGGCCAGATCCAGTTGGTGCAATCTGG EQ ID N0:216 - OGS1810 GGGGCCAGGGGAAAGACAGATGGGCCCTTCGTTGAGGC
- 85 034414
Список цитированной литературы
Santana-Davila R. and Perez Е.А. (2010) Treatment options for patients with triple-negative breast cancer J Hematol
Oncol. 27:42.
de Ruijter T.C., Veeck J., et al. (2011) Characteristics of triple-negative breast cancer. J Cancer Res Clin Oncol.
137:183.
Ismail-Khan R. and Bui M.M. (2010) A review of Triplenegative breast cancer Cancer Control 17:173.
Carey L.A., Perou C.M. et al. (2006) Race, breast cancer subtypes, and survival in the Carolina Breast Cancer Study.
JAMA 295:2492.
Krieg M., Seynaeve C. et al. (2009) Sensitivity to firstline chemotherapy for metastatic breast cancer in BRCA1 and
BRCA2 mutation carriers. J Clin Oncol 27:3764.
Rouzier R., Perou C.M. et al. (2005) Breast cancer molecular subtypes respond differently to preoperative chemotherapy Clin Cancer Res 11:5678.
Fong P.C., Boss D.S. et al. (2009) Inhibition of poly(ADP-ribose) polymerase in tumors from BRCA mutation carriers. N Engl J Med 361:123.
Dent R., Trudeau M et al. (2007) Triple-Negative Breast
Cancer: Clinical Feature and Patterns of Recurrence Clin.
Cancer Res. 13: 4429.
Bernstein L and J.V. Lacey Jr. (2011) Receptors,
Associations, and Risk Factor Differences by Breast Cancer
Subtypes: Positive or Negative? J Natl Cancer Inst 103(6):
451-453 (Расширенная публикация 23 февраля 2011 г.).
Nofech-Mozes S. et al., (2009) Patterns of recurrence in the basal and non-basal subtypes of triple-negative breast cancers Cancer Res. Treat. 118: 131-137.

Claims (21)

1. Способ лечения тройного негативного рака молочной железы, включающий введение индивиду антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которое конъюгировано с терапевтической молекулой, подходящей для лечения тройного негативного рака молочной железы, и способно связываться с ассоциированным с почками антигеном 1 (KAAG1), причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит
CDRH1 с SEQ ID NO: 49,
CDRH2 с SEQ ID NO: 50 или SEQ ID NO: 212,
CDRH3 с SEQ ID NO: 51,
CDRL1 с SEQ ID NO: 52,
CDRL2 с SEQ ID NO: 53 и
CDRL3 с SEQ ID NO: 54.
2. Способ по п.1, в котором антитело представляет собой моноклональное антитело, химерное антитело, антитело человека или гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
3. Способ по п.1 или 2, в котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбрано из группы, состоящей из:
a) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 48 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 46;
b) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 186, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная как X, представляет собой аминокислотную замену по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде с SEQ ID NO: 48, и
- 86 034414 вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 191, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная как X, представляет собой аминокислотную замену по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде с SEQ ID NO: 46;
c) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 187 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 192;
d) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 188 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 193;
e) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 или SEQ ID NO: 190 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197;
f) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 194;
g) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 195;
h) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 196;
i) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 197;
j) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 190 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 194; и
k) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 190 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 195.
4. Способ по любому из пп.1-3, в котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбрано из группы, состоящей из:
a) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 или SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204 или SEQ ID NO: 205;
b) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 202;
c) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 203;
d) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 204;
e) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 205;
f) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 202;
g) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 203;
h) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 204; и
i) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 205.
5. Способ по любому из пп.1-4, в котором терапевтическая молекула представляет собой цитотоксическое средство или антимитотическое средство.
- 87 034414
6. Способ по любому из пп.1-5, дополнительно включающий введение химиотерапевтического средства.
7. Способ по любому из пп.1-5, дополнительно включающий введение противоракового средства.
8. Способ по любому из пп.1-5, дополнительно включающий введение цитотоксического агента.
9. Способ по любому из пп.1-5, дополнительно включающий введение ингибитора PARP1, ингибитора EGFR или терапевтического антитела, подходящего для лечения тройного негативного рака молочной железы.
10. Способ по любому из пп.1-5, в котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент обладают аффинностью 1нМ или меньше или 0,1 нМ или меньше в отношении KAAG1.
11. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, способного специфически связываться с KAAG1, причем антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит
CDRH1 с SEQ ID NO: 49,
CDRH2 с SEQ ID NO: 50 или SEQ ID NO: 212,
CDRH3 с SEQ ID NO: 51,
CDRL1 с SEQ ID NO: 52,
CDRL2 с SEQ ID NO: 53 и
CDRL3 с SEQ ID NO: 54, в производстве лекарственного средства для лечения тройного негативного рака молочной железы.
12. Применение по п.11, при котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конъюгировано с терапевтической молекулой, подходящей для лечения тройного негативного рака молочной железы.
13. Применение по п.12, при котором терапевтическая молекула представляет собой цитотоксическое средство или антимитотическое средство.
14. Применение по любому из пп.11-13, при котором антитело представляет собой моноклональное антитело, химерное антитело, антитело человека или гуманизированное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
15. Применение по любому из пп.11-14, при котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбрано из группы, состоящей из:
a) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 48 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 46;
b) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 186, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенная как X, представляет собой аминокислотную замену по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде с SEQ ID NO: 48, и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 191, где по меньшей мере одна из аминокислот, определенных как X, представляет собой аминокислотную замену по сравнению с соответствующей аминокислотой в полипептиде с SEQ ID NO: 46;
c) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 187 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 192;
d) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 188 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 193;
e) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 или SEQ ID NO: 190 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196 или SEQ ID NO: 197;
f) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 194;
g) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 195;
h) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 196;
i) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 189 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 197;
j) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 190 и
- 88 034414 вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 194; и
к) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего вариабельную область легкой цепи с SEQ ID NO: 190 и вариабельную область тяжелой цепи с SEQ ID NO: 195.
16. Применение по любому из пп.11-15, при котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбрано из группы, состоящей из:
a) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 или SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204 или SEQ ID NO: 205;
b) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 202;
c) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 203;
d) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 204;
e) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 199 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 205;
f) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 202;
g) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 203;
h) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 204; и
i) антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, содержащего легкую цепь с SEQ ID NO: 200 и тяжелую цепь с SEQ ID NO: 205.
17. Применение по любому из пп.11-16, при котором лекарственное средство дополнительно содержит противораковое средство.
18. Применение по любому из пп.11-16, при котором лекарственное средство дополнительно содержит химиотерапевтическое средство.
19. Применение по любому из пп.11-16, при котором лекарственное средство дополнительно содержит цитотоксическое средство.
20. Применение по любому из пп.11-16, при котором лекарственное средство дополнительно содержит ингибитор PARP1, ингибитор EGFR или терапевтическое антитело, подходящее для лечения тройного негативного рака молочной железы.
21. Применение по любому из пп.11-16, при котором антитело или его антигенсвязывающий фрагмент обладают аффинностью 1 нМ или меньше или 0,1 нМ или меньше в отношении KAAG1.
EA201491352A 2012-01-09 2013-01-09 Способ лечения тройного негативного рака молочной железы EA034414B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261584629P 2012-01-09 2012-01-09
PCT/CA2013/000011 WO2013104050A2 (en) 2012-01-09 2013-01-09 Method for treating breast cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201491352A1 EA201491352A1 (ru) 2015-01-30
EA034414B1 true EA034414B1 (ru) 2020-02-05

Family

ID=48782004

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491352A EA034414B1 (ru) 2012-01-09 2013-01-09 Способ лечения тройного негативного рака молочной железы
EA201992513A EA201992513A1 (ru) 2012-01-09 2013-01-09 Способ лечения рака груди

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201992513A EA201992513A1 (ru) 2012-01-09 2013-01-09 Способ лечения рака груди

Country Status (27)

Country Link
US (2) US20170174753A1 (ru)
EP (2) EP2802351B1 (ru)
JP (3) JP6282597B2 (ru)
KR (1) KR102102239B1 (ru)
CN (2) CN104955477B (ru)
AU (1) AU2013209234B2 (ru)
BR (1) BR112014016723A2 (ru)
CA (2) CA3115623A1 (ru)
CY (1) CY1121667T1 (ru)
DK (1) DK2802351T3 (ru)
EA (2) EA034414B1 (ru)
ES (1) ES2731665T3 (ru)
HK (1) HK1203816A1 (ru)
HR (1) HRP20190946T1 (ru)
HU (1) HUE043888T2 (ru)
IL (2) IL232915A0 (ru)
IN (1) IN2014CN04690A (ru)
LT (1) LT2802351T (ru)
MX (2) MX366973B (ru)
NZ (1) NZ625758A (ru)
PL (1) PL2802351T3 (ru)
PT (1) PT2802351T (ru)
RS (1) RS58918B1 (ru)
SI (1) SI2802351T1 (ru)
TR (1) TR201908872T4 (ru)
WO (1) WO2013104050A2 (ru)
ZA (1) ZA201404798B (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3050455A1 (en) 2008-11-03 2010-06-03 Adc Therapeutics Sa Antibodies that specifically block the biological activity of a tumor antigen
PT3173427T (pt) * 2011-03-31 2019-09-17 Adc Therapeutics Sa Anticorpos contra antigénio associado ao rim 1 e fragmentos de ligação a antigénio dos mesmos
NZ625758A (en) 2012-01-09 2016-05-27 Alethia Biotherapeutics Inc Method for treating breast cancer
EP3939616A1 (en) 2017-02-08 2022-01-19 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201908128D0 (en) 2019-06-07 2019-07-24 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007147265A1 (en) * 2006-06-23 2007-12-27 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer
WO2010060186A1 (en) * 2008-11-03 2010-06-03 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies that specifically block the biological activity of a tumor antigen
WO2011054112A1 (en) * 2009-11-03 2011-05-12 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies that specifically block the biological activity of kidney associated antigen 1
WO2012129668A1 (en) * 2011-03-31 2012-10-04 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies against kidney associated antigen 1 and antigen binding fragments thereof

Family Cites Families (192)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK365785A (da) 1984-09-17 1986-03-18 Hoffmann La Roche Metalcomplexer
US5075447A (en) 1984-09-17 1991-12-24 Hoffmann-La Roche Inc. Ruthenium complexes useful as carriers for immunologically active materials
US5585279A (en) 1986-01-23 1996-12-17 Davidson; Robert S. Time-resolved luminescence binding assays using a fluorescent transition metal label other than ruthenium
GB8601646D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Davidson R S Binding assay & reagent
US6018030A (en) 1986-11-04 2000-01-25 Protein Polymer Technologies, Inc. Peptides comprising repetitive units of amino acids and DNA sequences encoding the same
CA2071529C (en) 1989-12-28 2001-03-20 Donna Lee Romero Diaromatic substituted anti-aids compounds
IL105325A (en) 1992-04-16 1996-11-14 Minnesota Mining & Mfg Immunogen/vaccine adjuvant composition
AU4017695A (en) 1994-10-28 1996-05-23 Procept, Inc. Ruthenium complexes and their use as immunosuppressive agents
US5708022A (en) 1994-10-28 1998-01-13 Procept, Inc. Method for inhibiting immune response
US5712127A (en) 1996-04-29 1998-01-27 Genescape Inc. Subtractive amplification
US5831003A (en) 1996-06-28 1998-11-03 Bayer Corporation Peptides which bind to prothrombin and thrombin
US6057098A (en) 1997-04-04 2000-05-02 Biosite Diagnostics, Inc. Polyvalent display libraries
EP0991777A1 (en) 1997-06-18 2000-04-12 Ulrich J. Krull Nucleic acid biosensor diagnostics
WO1999031513A1 (en) 1997-12-15 1999-06-24 Lakowicz Joseph R Method and composition for characterizing a sample containing a sample lipid and an assay kit
US6759243B2 (en) 1998-01-20 2004-07-06 Board Of Trustees Of The University Of Illinois High affinity TCR proteins and methods
US6472367B1 (en) 1998-05-05 2002-10-29 Adherex Technologies, Inc. Compounds and methods for modulating OB-cadherin mediated cell adhesion
AU3900399A (en) 1998-05-13 1999-11-29 Ludwig Institute For Cancer Research Tumor associated antigen encoded by the reverse strand of a new ubiquitously expressed gene
EP1950295A1 (en) 1998-05-13 2008-07-30 Domantis Limited Phage display selection system for helper phages sensitive to proteolysis
US7037667B1 (en) 1998-06-01 2006-05-02 Agensys, Inc. Tumor antigen useful in diagnosis and therapy of prostate and colon cancer
US7521197B2 (en) 1998-06-05 2009-04-21 Alexis Biotech Limited Method for producing cytotoxic T-cells
US20020106678A1 (en) 1998-06-30 2002-08-08 Robishaw Janet D. cDNA clones encoding human G protein gamma subunits
WO2000001702A1 (en) 1998-07-02 2000-01-13 Merck & Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
US6288221B1 (en) 1998-08-20 2001-09-11 Duke University Methods of synthesis of halogen base-modified oligonucleotides and subsequent labeling with a metal-catalyzed reaction
US6806089B1 (en) 1998-09-08 2004-10-19 University Of Maryland, Baltimore Low frequency modulation sensors using nanosecond fluorophores
AU6136599A (en) 1998-09-08 2000-03-27 University Of Maryland At Baltimore Low frequency modulation sensors using nanosecond fluorophores
JP4780834B2 (ja) 1998-10-22 2011-09-28 フィリップ・ビー・ビー・モヘノ 新規なプテリン抗新生物薬
WO2000025788A1 (en) 1998-10-29 2000-05-11 Merck & Co., Inc. Inhibitors of prenyl-protein transferase
BR0011678A (pt) 1999-03-19 2002-02-26 Anormed Inc Composições farmacêuticas compreendendo complexos de metal
US6872519B1 (en) 1999-04-27 2005-03-29 Mirus Bio Corporation In vitro process for selecting phage resistant to blood inactivation
US20090087878A9 (en) 1999-05-06 2009-04-02 La Rosa Thomas J Nucleic acid molecules associated with plants
GB9916529D0 (en) 1999-07-14 1999-09-15 Chiron Spa Antigenic peptides
CN1390206A (zh) 1999-09-17 2003-01-08 千嬉药品公司 因子Xa的抑制剂
WO2001046209A1 (en) 1999-12-20 2001-06-28 Fluorrx, Inc. Fluorescent probes
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US7585839B2 (en) 2000-02-23 2009-09-08 Zealand Pharma A/S Medical uses of intercellular communication facilitating compounds
US20030215860A1 (en) 2000-02-29 2003-11-20 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18636, 2466, 43238, 1983, 52881, 2398, 45449, 50289, 52872 and 26908 molecules and uses therefor
US20030165831A1 (en) 2000-03-21 2003-09-04 John Lee Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
US7834146B2 (en) 2000-05-08 2010-11-16 Monsanto Technology Llc Recombinant polypeptides associated with plants
EP1292684A2 (en) 2000-06-16 2003-03-19 Incyte Genomics, Inc. Proteases
WO2002006339A2 (en) 2000-07-03 2002-01-24 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20050053930A1 (en) 2000-07-18 2005-03-10 David Anderson Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US6812339B1 (en) 2000-09-08 2004-11-02 Applera Corporation Polymorphisms in known genes associated with human disease, methods of detection and uses thereof
GB0023008D0 (en) 2000-09-20 2000-11-01 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US7320793B2 (en) 2001-01-19 2008-01-22 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen array
TWI329129B (en) 2001-02-08 2010-08-21 Wyeth Corp Modified and stabilized gdf propeptides and uses thereof
US6783969B1 (en) 2001-03-05 2004-08-31 Nuvelo, Inc. Cathepsin V-like polypeptides
US7030236B2 (en) 2001-03-09 2006-04-18 Mona Savitri Jhaveri Antisense oligonucleotides tarageting folate receptor alpha, and the use thereof
AU2002258518A1 (en) 2001-03-14 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
US20030065157A1 (en) 2001-04-04 2003-04-03 Lasek Amy W. Genes expressed in lung cancer
EP2280030A3 (en) 2001-04-10 2011-06-15 Agensys, Inc. Nucleic acids and corresponding proteins useful in the detection and treatment of various cancers
CA2444691A1 (en) 2001-04-18 2002-10-31 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of lung cancer, compositions and methods of screening for modulators of lung cancer
AU2002257440A1 (en) 2001-05-07 2002-11-18 National Research Council Of Canada Enhanced production of recombinant proteins by transient transfection of suspension-growing mammalian cells
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
AU2002347428A1 (en) 2001-06-18 2003-01-02 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US20040053824A1 (en) 2001-06-29 2004-03-18 Tang Y Tom Extracellular matrix and cell adhesion molecules
US20030099974A1 (en) 2001-07-18 2003-05-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
ATE526028T1 (de) 2001-08-31 2011-10-15 Btg Int Ltd Verwendung von cyclopentaägüchinazoline-derivaten zur krebsbehandlung
EP2332962A1 (en) 2001-08-31 2011-06-15 BTG International Limited Cyclopenta[g]quinazoline compounds for use in the treatment of inflammatory or allergic conditions
US7622260B2 (en) 2001-09-05 2009-11-24 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Diagnostic and prognostic tests
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
OA12812A (en) 2001-11-19 2006-07-10 Elan Pharm Inc (4-phenyl) Piperidin-3-yl-phenylcarboxylate derovatoves and related compounds as beta-secretase inhibitors for the treatment of Alzheimer's Disease.
AU2002351194A1 (en) 2001-11-30 2003-06-17 Incyte Genomics, Inc. Cell adhesion and extracellular matrix proteins
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
WO2003057725A2 (en) 2002-01-09 2003-07-17 University Of Lausanne Cell-permeable peptide inhibitors of the jnk signal transduction pathway
US8048408B2 (en) 2002-01-16 2011-11-01 Biocompatibles Uk Limited Polymer conjugates
EP1478328B1 (en) 2002-01-28 2013-06-05 Keraplast Technologies Ltd. Bioactive keratin peptides
US6962910B2 (en) 2002-02-01 2005-11-08 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Supramolecular complexes as photoactivated DNA cleavage agents
AU2003225573A1 (en) 2002-02-13 2003-09-04 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of He Identification of ovarian cancer tumor markers and therapeutic targets
DE10206616A1 (de) 2002-02-15 2003-09-04 Qiagen Gmbh Verfahren zur Reduktion der Background-Kontamination nach Markierungsreaktionen
EP1490101A4 (en) 2002-03-05 2006-09-20 Univ Texas METHODS OF IMPROVING INDUCTION OF IMMUNE RESPONSE INVOLVING MDA-7
CA2492671C (en) 2002-03-22 2012-04-17 Aprogen, Inc. Humanized antibody and process for preparing same
US20040101874A1 (en) 2002-04-12 2004-05-27 Mitokor Inc. Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
US20040033543A1 (en) 2002-05-20 2004-02-19 Gisela Schwab Treatment of renal carcinoma using antibodies against the EGFr
US20070224201A1 (en) 2002-10-02 2007-09-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1422242A1 (en) 2002-11-22 2004-05-26 Emory University Plastic and elastic protein copolymers
CN1768139A (zh) 2003-02-10 2006-05-03 独立行政法人产业技术总合研究所 通过dna干扰调控基因的表达
WO2004087874A2 (en) 2003-03-28 2004-10-14 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
JP2007531705A (ja) 2003-05-20 2007-11-08 セルペップ ソシエテ アノニム 増大した活性および細胞膜親和性を有する修飾抗ウイルス性ペプチド
US20070274947A1 (en) 2003-05-21 2007-11-29 Young Aiping H Antisense Oligonucleotides Directed to Ribonucleotide Reductase R1 and Uses Thereof in the Treatment of Cancer
US20050008649A1 (en) 2003-06-02 2005-01-13 University Of Miami Chimeric molecules and methods of use
US20060078941A1 (en) 2003-06-09 2006-04-13 Santin Alessandro D Gene expression profiling in primary ovarian serous papillary tumors and normal ovarian epithelium
US20070027075A1 (en) 2003-06-09 2007-02-01 Smithrud David B Compositions and methods for targeted drug delivery
WO2006003352A1 (en) 2004-07-06 2006-01-12 Warwick Effect Polymers Limited Living radical polymerization initiator comprising a functional group capable of reacting with polyeptides or the like, comb polymer obtained therewith, polypeptide conjugates and drugs obtained therefrom
GB0314472D0 (en) 2003-06-20 2003-07-23 Warwick Effect Polymers Ltd Polymer
GB0318096D0 (en) 2003-08-01 2003-09-03 Queen Mary & Westfield College Vaccine
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
US20070178458A1 (en) 2003-09-05 2007-08-02 O'brien Philippa Methods of diagnosis and prognosis of ovarian cancer II
US20050147621A1 (en) 2003-10-10 2005-07-07 Higgins Darren E. Use of bacterial 5' untranslated regions for nucleic acid expression
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US7202234B2 (en) 2003-10-24 2007-04-10 Eisai Co., Ltd. Compounds and methods for treating Toll-like receptor 2-related diseases and conditions
US20050153333A1 (en) 2003-12-02 2005-07-14 Sooknanan Roy R. Selective terminal tagging of nucleic acids
EP1550458A1 (en) 2003-12-23 2005-07-06 Vectron Therapeutics AG Synergistic liposomal adjuvants
EP1547581A1 (en) 2003-12-23 2005-06-29 Vectron Therapeutics AG Liposomal vaccine for the treatment of human hematological malignancies
EP1756272A2 (en) 2004-01-09 2007-02-28 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Compounds, pharmaceutical compositions and therapeutic methods of preventing and treating diseases and disorders associated with amyloid fibril formation
WO2005070456A2 (en) 2004-01-09 2005-08-04 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Diagnosing and treating female reproductive tract or chilhood cancer with pmsa antibodies
CA2555145A1 (en) 2004-02-06 2005-08-25 Wyeth Diagnosis and therapeutics for cancer
WO2005083440A2 (en) 2004-02-19 2005-09-09 Yale University Identification of cancer protein biomarkers using proteomic techniques
BRPI0507822A (pt) 2004-03-01 2007-07-10 Peptera Pharmaceuticals Ltd método e composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou uma condição autoimune ou infecciosa, método e composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou uma condição do sangue, método e composição farmacêutica para modular a formação de células do sangue, método e composição farmacêutica para intensificar a mobilização periférico da célula tronco, método e composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou uma condição metabólica, método e composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento das condições associadas com doses mieloablativas de quimioradioterapia suportadas pelo transplante autólogo de medula óssea ou de células tronco do sangue periférico (asct) ou pelo transplante alogenéico de medula óssea (bmt), método e composição farmacêutica para aumentar o efeito de um fator estimulante de células do sangue, método e composição farmacêutica para intensificar a colonização de células tronco do sangue doadas em um receptor mieloablatado, método e composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de uma doença ou uma condição bacteriana, composição farmacêutica para o tratamento ou a prevenção de uma indicação selecionada do grupo que consiste em doença ou condição autoimune, doença viral, infecção viral, doença hematológica, deficiências hematológicas, trombocitopenia, pancitopenia, granulopenia, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, glucosuria, hiperglicemia, diabetes, aids, hiv-1, distúrbios de células t auxiliares, deficiências de células dendrìticas, deficiências de macrofagos, distúrbios de células tronco hematopoiéticas incluindo distúrbios com plaquetas, linfócitos, células do plasma e neutrófilos, condições pré-leucêmicas, condições leucêmicas, distúrbios do sistema imunológico resultantes da terapia de quimioterapia ou de radiação, distúrbios do sistema imunológico humano resultantes do tratamento das doenças de deficiência imunológica e infecções bacterianas, composição farmacêutica para o tratamento ou a prevenção de um indicação selecionada do grupo que consiste em doença hematológica, deficiências hematológicas, trombocitopenia, pancitopenia, granulopenia, deficiências de células dendrìticas, deficiências de macrofagos, distúrbios de células tronco hematopoiéticas incluindo distúrbios com plaquetas, linfócitos, células do plasma e neutrófilos, condições pré-leucêmicas, condições leucêmicas, sìndrome mielodisplástiacas, malignidades não mielóides, anemia plástica e insuficiência da medula óssea, peptìdeo purificado, peptìdeo quimérico purificado, peptìdeo quimérico, composição farmacêutica, composição farmacêutica para a prevenção ou o tratamento de uma condição associada com um agente infeccioso de sars, método de processamento a baixa temperatura de hidrolisato proteolìtico de caseìna e hidrolisato de proteìna de caseìna
US7772271B2 (en) 2004-07-14 2010-08-10 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis C
WO2007084413A2 (en) 2004-07-14 2007-07-26 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis c
US7553944B2 (en) 2004-07-21 2009-06-30 The University Of Hong Kong Human virus causing respiratory tract infection and uses thereof
US20080280317A1 (en) 2004-08-27 2008-11-13 Northeastern University Comprehensive Characterization Of Complex Proteins At Trace Levels
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
WO2006027202A1 (en) 2004-09-06 2006-03-16 Unite De Recherche En Biotherapie Et Oncologie (Rubio) Generation of multiparent cell hybrids
AU2005282241B2 (en) 2004-09-08 2011-03-03 Chelsea Therapeutics, Inc. Quinazoline derivatives as metabolically inert antifolate compounds.
WO2006044335A2 (en) 2004-10-14 2006-04-27 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Therapy with clostridium perfringens enterotoxin to treat ovarian and uterine cancer
DK2586456T3 (en) 2004-10-29 2016-03-21 Ratiopharm Gmbh Conversion and glycopegylation of fibroblast growth factor (FGF)
AU2005323062A1 (en) 2005-01-04 2006-07-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Sustained delivery of PDGF using self-assembling peptide nanofibers
US7531533B2 (en) 2005-01-27 2009-05-12 Asahi Kasei Pharma Corporation 6-Membered heterocyclic compound and use thereof
KR100890490B1 (ko) 2005-01-27 2009-03-26 아사히 가세이 파마 가부시키가이샤 헤테로 6원환 화합물 및 그의 용도
AU2006214534B2 (en) 2005-02-14 2012-07-19 Epitopix, Llc Polypeptides from Staphylococcus aureus and methods of use
US20090075832A1 (en) 2005-02-24 2009-03-19 Cemines, Inc Compositions and Methods for Classifying Biological Samples
US7902196B2 (en) 2005-03-17 2011-03-08 President And Fellows Of Harvard College Synthesis of avrainvillamide, strephacidin B, and analogues thereof
US8551774B2 (en) 2005-03-17 2013-10-08 National Research Council Of Canada Expression vectors containing a truncated epstein barr nuclear antigen 1 lacking the Gly-Gly-Ala domain for enhanced transient gene expression
FR2885525B1 (fr) 2005-05-13 2009-09-18 Urodelia Sa Medicament notamment anti-cancereux, destine a des traitements par immunotherapie, en particulier autologue
AU2006259630B2 (en) 2005-06-13 2011-10-27 Cleveland Biolabs, Inc. Methods of protecting against apoptosis using lipopeptides
AU2006259415B2 (en) 2005-06-15 2012-08-30 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipids and uses thereof
CA2613522A1 (en) 2005-06-27 2007-01-04 Exelixis, Inc. Imidazole based lxr modulators
WO2007005249A2 (en) 2005-06-29 2007-01-11 Hyperbranch Medical Technology, Inc. Nanoparticles and dendritic-polymer-based hydrogels comprising them
US7494788B2 (en) 2005-07-11 2009-02-24 Molecular Kinetics, Inc. Entropic bristle domain sequences and their use in recombinant protein production
US7820790B2 (en) 2005-07-13 2010-10-26 Amgen Mountain View Inc. IL-6 binding proteins
EP1904649A2 (en) 2005-07-18 2008-04-02 Epigenomics AG Compositions and methods for cancer diagnostics comprising pan-cancer markers
GB0516058D0 (en) 2005-08-04 2005-09-14 Oxford Genome Sciences Uk Ltd New protein isoforms and uses thereof
GB0517293D0 (en) 2005-08-24 2005-10-05 Cancer Rec Tech Ltd Vectors and uses thereof
EP2228656B1 (en) 2005-09-15 2013-10-23 Alk-Abelló A/S Quantification of allergens
US7576106B2 (en) 2005-10-11 2009-08-18 Chemocentryx, Inc. Piperidine derivatives and methods of use
AU2006303037A1 (en) 2005-10-21 2007-04-26 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Chromenones and their use as modulators of metabotropic glutamate receptors
UA96139C2 (ru) 2005-11-08 2011-10-10 Дженентек, Інк. Антитело к нейропилину-1 (nrp1)
US7557213B2 (en) 2005-11-10 2009-07-07 Chemocentryx, Inc. Substituted quinolones and methods of use
US20090203922A1 (en) 2005-11-23 2009-08-13 Kevin Michael Belyk Process for Synthesizing 2-Phenyl-1H-Phenanthro[9,10-d]Imidazole Derivative
KR101049859B1 (ko) 2007-11-28 2011-07-19 대한민국 Ｎ-말단 ｐＩ 값 조절에 의한 수용성 재조합 단백질 생산방법
US20100040606A1 (en) 2006-03-06 2010-02-18 Symphogen A/S Recombinant polyclonal antibody for treatment of respiratory syncytial virus infections
AU2007222991A1 (en) 2006-03-09 2007-09-13 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods based on peptide binding profiling
CA2642819C (en) 2006-03-10 2015-06-09 Warwick Effect Polymers Ltd. Sugar polymers
WO2007110755A1 (en) 2006-03-27 2007-10-04 Medical Therapies Limited Prophylaxis or treatment of cardiovascular inflammation
WO2007122975A1 (ja) 2006-04-20 2007-11-01 Kringle Pharma Inc. Ｈｇｆ前駆体蛋白質改変体及びその活性型蛋白質
US20090253156A1 (en) 2006-05-05 2009-10-08 Perkinelmer Las, Inc. Mass spectrometry methods for multiplexed quantification of protein kinases and phosphatases
CA2652247C (en) 2006-05-08 2015-11-17 Adaerata, Limited Partnership Chimeric pcsk9 proteins, cells comprising same, and assays using same
US20120128661A1 (en) 2006-06-23 2012-05-24 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotide and polypeptide sequences involved in cancer
EP2041556A1 (en) 2006-06-28 2009-04-01 RGB Technologies AB A sensor kit and a system for detecting an analyte in a test environment
US8198046B2 (en) 2006-07-11 2012-06-12 Danisco Us Inc. KEX2 cleavage regions of recombinant fusion proteins
US20080248959A1 (en) 2006-07-21 2008-10-09 Neose Technologies, Inc. Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
WO2008012362A2 (en) 2006-07-27 2008-01-31 Oxford Genome Sciences (Uk) Ltd New protein isoforms and uses thereof
EP2052088A2 (en) 2006-08-02 2009-04-29 Genizon Biosciences Genemap of the human genes associated with psoriasis
WO2008021290A2 (en) 2006-08-09 2008-02-21 Homestead Clinical Corporation Organ-specific proteins and methods of their use
WO2008029031A2 (fr) 2006-09-07 2008-03-13 Laurence Faure Test pharmaco diagnostique ciblant l' oncologie
WO2008033932A2 (en) 2006-09-13 2008-03-20 The Institutes For Pharmaceutical Discovery, Llc Biarylthiazole carboxylic acid derivatives as protein tyrosine phosphatase-ib inhibitors
CA2668262A1 (en) 2006-10-30 2008-05-08 Sanrx Pharmaceuticals, Inc. Dipterinyl calcium pentahydrate (dcp) and therapeutic methods based thereon
DE102006051516A1 (de) 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
AU2007333098A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind CD70 and uses thereof
AU2007332473B2 (en) * 2006-12-14 2012-09-27 Forerunner Pharma Research Co., Ltd. Anti-Claudin-3 monoclonal antibody, and treatment and diagnosis of cancer using the same
CA2672860C (en) 2006-12-28 2013-01-29 Abbott Laboratories Inhibitors of poly(adp-ribose)polymerase
CA2675032A1 (en) 2007-01-09 2008-07-17 Cleveland Biolabs, Inc. Methods for increasing and mobilizing hematopoietic stem cells
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2008104803A2 (en) 2007-02-26 2008-09-04 Oxford Genome Sciences (Uk) Limited Proteins
WO2008124483A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Specigen, Inc. Protein cage immunotherapeutics
WO2009009186A2 (en) 2007-04-13 2009-01-15 The Regents Of The University Of California Receptors useful for gas phase chemical sensing
US20080306007A1 (en) 2007-04-30 2008-12-11 Newcastle Innovation Limited Agents for prophylaxis or treatment of neurological related diseases and conditions
WO2008134761A2 (en) 2007-04-30 2008-11-06 Intezyne Technologies, Inc. Modification of biological targeting groups for the treatment of cancer
US8143372B2 (en) 2007-05-21 2012-03-27 Children's Hospital & Research Center Oakland Synthetic regulators of ferritin protein nanocage pores and methods of use thereof
US20100093554A1 (en) 2007-06-01 2010-04-15 Keting Chu Methods for identifying biomarkers, autoantibody signatures, and stratifying subject groups using peptide arrays
US8618121B2 (en) 2007-07-02 2013-12-31 Cancer Research Technology Limited 9H-pyrimido[4,5-B]indoles, 9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-D]pyridines, and 9H 1,3,6,9 tetraaza-fluorenes as CHK1 kinase function inhibitors
US9018138B2 (en) 2007-08-16 2015-04-28 The Johns Hopkins University Compositions and methods for generating and screening adenoviral libraries
WO2009030237A2 (en) 2007-09-07 2009-03-12 Symphogen A/S Methods for recombinant manufacturing of anti-rsv antibodies
EP2197908A2 (en) 2007-09-27 2010-06-23 Dako Denmark A/S Mhc multimers in tuberculosis diagnostics, vaccine and therapeutics
GB0719644D0 (en) 2007-10-05 2007-11-14 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
EP2538221A3 (en) 2007-11-05 2013-04-24 Nordic Bioscience A/S Biochemical markers for CVD risk assessment
US20100298368A1 (en) 2007-11-06 2010-11-25 Amira Pharmaceuticals, Inc. Antagonists of pgd2 receptors
EP2071334A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Transmedi SA Compositions and methods of detecting TIABS
WO2009111088A2 (en) 2008-01-02 2009-09-11 The Johns Hopkins University Antitumor immunization by liposomal delivery of vaccine to the spleen
JP2011515666A (ja) 2008-03-14 2011-05-19 ドナー， インコーポレイテッド トリプルネガティブ乳がんに関連するｄｎａ修復タンパク質およびその使用法
US8568709B2 (en) 2008-03-20 2013-10-29 University Health Network Thymidylate kinase fusions and uses thereof
WO2009134370A2 (en) 2008-04-30 2009-11-05 University Of Vermont And State Agricultural College Methods and products relating to gsk3 beta regulation
WO2009151520A2 (en) 2008-05-09 2009-12-17 Surmodics Pharmaceuticals, Inc. Biocompatible and biodegradable elastomeric polymers
EP2306993B1 (en) 2008-05-26 2014-03-12 Universität Zürich Protamine/rna nanoparticles for immunostimulation
UY31956A (es) 2008-07-03 2010-01-29 Amira Pharmaceuticals Inc Antagonistas de heteroalquilo de receptores de prostaglandina d2
US8148088B2 (en) 2008-07-18 2012-04-03 Abgent Regulation of autophagy pathway phosphorylation and uses thereof
WO2010014141A1 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lixte Biotechnology, Inc. Methods for regulating cell mitosis by inhibiting serine/threonine phosphatase
PL2328893T3 (pl) 2008-08-08 2013-09-30 Synta Pharmaceuticals Corp Związki triazolowe modulujące aktywność Hsp90
EP2350118B1 (en) 2008-09-19 2016-03-30 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
ES2543095T3 (es) 2009-07-10 2015-08-14 Innate Pharma Agentes de unión a TLR3
EP2486149B1 (en) * 2009-08-06 2015-06-17 John Wayne Cancer Institute Diagnosis of primary and metastatic basal-like breast cancer and other cancer types
US8895001B2 (en) * 2010-03-11 2014-11-25 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Use of ErbB3 inhibitors in the treatment of triple negative and basal-like breast cancers
US20110233107A1 (en) 2010-03-23 2011-09-29 Emily Jainine Lockett Personal Cosmetic Palette
NZ625758A (en) * 2012-01-09 2016-05-27 Alethia Biotherapeutics Inc Method for treating breast cancer
JP6554959B2 (ja) 2015-07-14 2019-08-07 富士通株式会社 情報処理装置、コンパイル方法、およびコンパイルプログラム

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007147265A1 (en) * 2006-06-23 2007-12-27 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in cancer
WO2010060186A1 (en) * 2008-11-03 2010-06-03 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies that specifically block the biological activity of a tumor antigen
US20110223107A1 (en) * 2008-11-03 2011-09-15 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies that specifically block the biological activity of a tumor antigen
WO2011054112A1 (en) * 2009-11-03 2011-05-12 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies that specifically block the biological activity of kidney associated antigen 1
WO2012129668A1 (en) * 2011-03-31 2012-10-04 Alethia Biotherapeutics Inc. Antibodies against kidney associated antigen 1 and antigen binding fragments thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PILLAI, S.K.K. ET AL. "Triple-negative breast cancer is associated with EGFR, CK5/6 and c-KIT expression in Malaysian women", BMC Clinical Pathology 26 September 2012 (26-09-2012), 12(18), pages 12-18 *
SETON-ROGERS, S. ET AL. "On the origins of tumour subtypes", Nature Reviews Cancer October 2007 (10-2007), 7 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2802351B1 (en) 2019-03-27
CA3115623A1 (en) 2013-07-18
MX2014008410A (es) 2014-12-08
JP6282597B2 (ja) 2018-02-21
HK1203816A1 (en) 2015-11-06
SI2802351T1 (sl) 2019-07-31
PL2802351T3 (pl) 2019-11-29
JP6392435B2 (ja) 2018-09-19
IL254964B (en) 2019-03-31
US20170174753A1 (en) 2017-06-22
US20190119366A1 (en) 2019-04-25
EP2802351A2 (en) 2014-11-19
TR201908872T4 (tr) 2019-07-22
MX366973B (es) 2019-08-01
JP2018024701A (ja) 2018-02-15
EA201491352A1 (ru) 2015-01-30
AU2013209234B2 (en) 2017-11-09
DK2802351T3 (da) 2019-05-13
AU2013209234A1 (en) 2014-06-26
WO2013104050A2 (en) 2013-07-18
RS58918B1 (sr) 2019-08-30
ZA201404798B (en) 2020-07-29
KR102102239B1 (ko) 2020-04-21
CA2857400A1 (en) 2013-07-18
CY1121667T1 (el) 2020-07-31
LT2802351T (lt) 2019-06-25
CN111298119A (zh) 2020-06-19
HRP20190946T1 (hr) 2019-07-26
JP2018203755A (ja) 2018-12-27
US11084872B2 (en) 2021-08-10
MX2019009121A (es) 2019-09-16
CN104955477B (zh) 2020-03-03
ES2731665T3 (es) 2019-11-18
KR20140116093A (ko) 2014-10-01
EP3533468A1 (en) 2019-09-04
IN2014CN04690A (ru) 2015-09-18
IL232915A0 (en) 2014-07-31
NZ625758A (en) 2016-05-27
IL254964A0 (en) 2017-12-31
CN104955477A (zh) 2015-09-30
PT2802351T (pt) 2019-06-27
EA201992513A1 (ru) 2020-05-31
EP2802351A4 (en) 2016-04-13
WO2013104050A3 (en) 2015-04-02
JP2015511216A (ja) 2015-04-16
HUE043888T2 (hu) 2019-09-30
BR112014016723A2 (pt) 2018-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11084872B2 (en) Method for treating breast cancer
US10597450B2 (en) Antibodies against kidney associated antigen 1 and antigen binding fragments thereof
NZ615694B2 (en) Antibodies against kidney associated antigen 1 and antigen binding fragments thereof