EA032693B1

EA032693B1 - Производные 2-h-индазола в качестве ингибиторов циклинзависимых киназ (cdk) и их терапевтическое применение

Info

Publication number: EA032693B1
Application number: EA201790122A
Authority: EA
Inventors: Майкл Николас Греко; Майкл Джон Костанцо; Цзижун Пэн; Виктория Линн Уайлд; Дунь Чжан
Original assignee: Бета Фарма, Инк.
Priority date: 2014-07-24
Filing date: 2015-07-24
Publication date: 2019-07-31
Also published as: EA201790122A1; BR112017001058A2; PH12017500146A1; KR20170031241A; AP2017009728A0; CN106687454B; AU2015292425A1; AU2015292425B2; TWI675028B; CN106687454B8; PH12017500146B1; IL249895B; IL249895A0; CN106687454A; MY187555A; TW201609705A; WO2016014904A1; JP6490215B2; EP3191469A1; CN110117273A

Abstract

Раскрыты соединения индазола формулы (I) в качестве ингибиторов циклинзависимых киназ (CDK) и пролиферации клеток, а также их терапевтическое применение и способы их получения. Указанные соединения и их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, пролекарства и фармацевтические композиции пригодны для лечения заболеваний и нарушений, связанных с активностью циклинзависимых киназ, в частности CDK4/6, включая, без ограничения, различные виды рака и заболеваний или состояний, связанных с воспалением

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно главе 35 Свода законов США, § 119(е), на основании предварительной заявки США № 62/028427, поданной 24 июля 2014 года, содержание которой включено в настоящую заявку по всей полноте посредством ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение относится к области соединений, композиций и способов лечения или предотвращения заболевания, нарушения или патологического состояния, опосредованного конкретными циклинзависимыми киназами (CDK). Указанные заболевания включают различные виды рака.

Уровень техники

Циклинзависимые киназы представляют собой семейство протеинкиназ, которые регулируют деление и пролиферацию клеток. Прохождение клеточного цикла контролируется циклинами и связанными с ними циклинзависимыми киназами, такими как CDK1, CDK2, CDK3, CDK4 и CDK6, в то время как другие CDK, такие как CDK7, CDK8 и CDK9, являются критически важными для транскрипции. Связывание CDK с циклинами приводит к образованию гетеродимерных комплексов, которые фосфорилируют свои субстраты на остатках серина и треонина, что, в свою очередь, запускает события, необходимые для транскрипции и прогрессии в клеточном цикле. Так как неконтролируемая пролиферация клеток является отличительной чертой рака, и у большинства раковых клеток проявляется дерегуляция CDK, ингибирование CDK рассматривают как потенциальный способ лечения различных видов рака. Описаны ингибиторы с различными степенями селективности в отношении CDK; тем не менее, на данный момент селективные ингибиторы CDK4/6 рассматривают в качестве многообещающего класса потенциальных противораковых и противовоспалительных агентов в связи с критической ролью CDK4/6 в регуляции пролиферации клеток и токсическим действием, связанным с ингибированием других членов семейства CDK.

Недавно были описаны несколько типов аминопиридиновых производных, которые, как сообщается, являются селективными ингибиторами CDK4/6 (см., например, заявки WO 2003/062236, WO 2007/140222 и US 2010/0160340). Каждый из указанных типов молекул содержит 2-аминопиридиновый фрагмент, связанный посредством 2-аминогруппы с арильной или гетероарильной системой колец. Сохраняется потребность в разработке новых ингибиторов CDK 4/6 в качестве новых противораковых и/или противовоспалительных агентов.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к 2-аминопиримидинзамещенным производным индазола, которые являются эффективными в качестве селективных ингибиторов CDK и пригодны для применения в лечении или предотвращении заболеваний, нарушений или патологических состояний, опосредованных конкретными CDK, в частности CDK4 и CDK6, например различных типов рака и состояний, связанных с воспалением.

Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к соединению формулы (I)

или его фармацевтически приемлемой соли, где

R¹ выбран из группы, состоящей из водорода, Ci-Cs-алкила с прямой или разветвленной цепью и С₃-С₇-циклоалкила;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, Q-Cs-алкила с прямой или разветвленной цепью, C₃-C₇-циклоалкила и циклоалкилметила;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, Q-Cs-алкила с прямой или разветвленной цепью и C₃-C₇-циклоалкила; и

R⁵ представляет собой водород или галоген.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения заболевания, опосредованного активностью циклинзависимой киназы (CDK), содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, а также одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, таких как адъюванты, разбавители и/или носители.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, нарушения или состояния, опосредованного по меньшей мере одной из циклинзависимых киназ (CDK), в частности CDK4, CDK6 или их комбинацией, включающему введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, нару

- 1 032693 шения или состояния, опосредованного по меньшей мере одной из циклинзависимых киназ (CDK), в частности CDK4, CDK6 или их комбинацией, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, а также одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, таких как адъюванты, разбавители и/или носители.

В одном варианте реализации указанные заболевания, нарушения или состояния, связанные с одной или более циклинзависимыми киназами, в частности CDK4, CDK6 или их комбинацией, включают раковые заболевания, которые могут включать, без ограничения, рак легкого, в частности немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), рак молочной железы, рак предстательной железы, колоректальный рак, глиобластому, лимфому клеток мантии, хронический миелоидный лейкоз и острый миелоидный лейкоз, а также их осложнения. В другом варианте реализации указанные заболевания, нарушения или состояния включают заболевания и состояния, связанные с воспалением, такие как артрит, например ревматоидный артрит, и кистозный фиброз.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу ингибирования клеточной пролиферации, включающему обработку клеток эффективным количеством соединения формулы (I) или соли или композиции указанного соединения.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к способу ингибирования циклинзависимой киназы (CDK), в частности CDK4, CDK6 или их комбинации, причем указанный способ включает обработку киназы эффективным количеством соединения формулы (I) или соли или композиции указанного соединения.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к применению соединений согласно настоящему изобретению для изучения CDK в биологических и патологических процессах, а также для сравнительной оценки новых ингибиторов киназ.

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, или фармацевтически приемлемой соли или композиции указанного соединения в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или нарушения, связанного с активностью CDK. Активность CDK предпочтительно представляет собой активность CDK4, CDK6 или их комбинации.

Согласно еще одному аспекту настоящее изобретение относится к способам синтеза соединений формулы (I), которые, по существу, раскрыты и описаны в настоящем документе.

Другие аспекты или преимущества настоящего изобретения будут очевидны специалистам в данной области исходя из последующего подробного описания и формулы изобретения в комбинации со знаниями и навыками, общеизвестными в данной области.

Подробное описание изобретения

В настоящем изобретении предложены новые 2-аминопиримидинзамещенные производные 2Ниндазола, пригодные для применения в качестве ингибиторов CDK.

Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложено соединение формулы (I)

или его фармацевтически приемлемая соль, где

R¹ выбран из группы, состоящей из водорода, Ci-Cs-алкила и C₃-C7-циклоалкила;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, Q-Cs-алкила с прямой или разветвленной цепью, C₃-C7-циклоалкила и ^^-циклоалкилметила;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, CrCs-алкила с прямой или разветвленной цепью и ^^-циклоалкила; и

R⁵ представляет собой водород или галоген.

В одном варианте реализации данного аспекта R¹ представляет собой Q-Q-алкил.

В другом варианте реализации данного аспекта R¹ представляет собой метил, этил, пропил или изопропил.

В другом варианте реализации данного аспекта R² представляет собой Cr^-алкил, C₃-C₆циклоалкил или C₃-C₆-циклоалкилметил.

В другом варианте реализации данного аспекта R² представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, циклопропил, циклопентил, циклопропилметил или циклопентил метил.

В другом варианте реализации данного аспекта R³ представляет собой C₁-C₆-алкил или C₃-C₆циклоалкил.

В другом варианте реализации данного аспекта R³ представляет собой метил, этил, пропил, изопропил или циклопропил.

- 2 032693

В конкретных вариантах реализации настоящего изобретения предложено соединение формулы (I), в котором заместитель R⁴ присоединен в положении 7 индазолового фрагмента, как в формуле (Ia)

R¹ выбран из группы, состоящей из водорода, Ci-Cs-алкила и Cз-C₇-циклоалкила;

R² и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, Q-Cg-алкила, Cз-C₇-циклоалкила и циклоалкилметила;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, Q-Cs-алкила и ^-^-циклоалкила; и

R⁵ представляет собой водород или галоген.

В другом варианте реализации данного аспекта R⁴ представляет собой водород или галоген.

В другом варианте реализации данного аспекта R⁵ представляет собой водород или фторид.

В другом варианте реализации данного аспекта R представляет собой метил или этил; R представляет собой изопропил, циклопропил, циклопропилметил или циклопентил; R³ представляет собой метил или этил, R⁴ представляет собой водород или фтор, и R⁵ представляет собой водород или фтор.

В конкретных предпочтительных вариантах реализации данного аспекта заместитель R⁴ присоединен в положении 7 индазолового фрагмента, и R⁵ представляет собой фтор, что описано формулой (Ib)

где R⁴ предпочтительно представляет собой водород или галоген; и когда R⁴ представляет собой галоген, он предпочтительно представляет собой хлор или фтор, более предпочтительно фтор.

В конкретных предпочтительных вариантах реализации данного аспекта настоящего изобретения предложено соединение формулы, выбранной из группы, состоящей из

или его фармацевтически приемлемой соли, где каждый R¹, R² и R³ определен в любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе.

В конкретных предпочтительных вариантах реализации данного аспекта настоящего изобретения предложены соединения, перечисленные в табл. 1 (ниже), и фармацевтические приемлемые соли указанных соединений.

В предпочтительном варианте реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы

или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, со·

- 3 032693 держащая соединение формулы (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) или (Ie) согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем изобретении, или их фармацевтически приемлемую соль, а также один или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, разбавителей и/или носителей.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, нарушения или состояния, опосредованного активностью по меньшей мере одной циклинзависимой киназы (CDK), причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) или (Ie) согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли.

В одном варианте реализации данного аспекта настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, нарушения или состояния, опосредованного активностью по меньшей мере одной циклинзависимой киназы (CDK), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) или (Ie) согласно любому из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемой соли, а также одного или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, разбавителей и/или носителей.

Согласно одному предпочтительному варианту реализации данного аспекта указанная по меньшей мере одна CDK представляет собой CDK4, CDK6 или их комбинацию.

Согласно другому предпочтительному варианту реализации данного аспекта указанное заболевание или нарушение представляет собой раковое заболевание или заболевание или состояние, связанное с воспалением.

Согласно другому предпочтительному варианту реализации данного аспекта указанное заболевание или нарушение, связанное с воспалением, представляет собой артрит, такой как ревматоидный артрит, или кистозный фиброз.

Согласно другому предпочтительному варианту реализации данного аспекта указанное раковое заболевание выбрано, без ограничения, из колоректального рака, рака молочной железы, рака легкого, в частности немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака предстательной железы, глиобластомы, лимфомы клеток мантии (MCL), хронического миелоидного лейкоза (CML), острого миелоидного лейкоза (AML), а также их осложнений.

В другом варианте реализации данного аспекта соединение согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту, нуждающемуся в этом, в комбинации с введением второго терапевтического агента.

В другом варианте реализации указанный второй терапевтический агент представляет собой другой ингибитор CDK, ингибитор рецептора-2 эпидермального фактора роста человека (e.g., HER2), ингибитор серин/треонинкиназы, такой как ингибитор мишени рапамицина в клетках млекопитающих (mTOR) или ингибитор рецептора эпидермального фактора роста (EGFR).

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования клеточной пролиферации, включающий обработку клеток эффективным количеством соединения формулы (I) согласно любому из описанных вариантов реализации или его соли или композиции. Указанный способ ингибирования клеточной пролиферации можно осуществлять in vivo, например, внутри тела субъекта, или in vitro, например, в биологическом образце, содержащем пролиферативные клетки субъекта.

В предпочтительном варианте реализации данного аспекта указанные пролиферативные клетки представляют собой раковые клетки, такие как, без ограничения, клетки колоректального рака, рака молочной железы, рака легкого, особенно немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака предстательной железы, глиобластомы, лимфомы клеток мантии (MCL), хронического миелоидного лейкоза (CML), острого миелоидного лейкоза (AML) или их осложнений.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования циклинзависимой киназы (CDK), включающий обработку указанной киназы эффективным количеством соединения формулы (I) согласно любым вариантам реализации, описанным в настоящем документе, или солью или композицией указанного соединения. Указанный способ ингибирования CDK можно осуществлять in vivo, например, внутри тела субъекта, или in vitro, например, в биологическом образце, содержащем пролиферативные клетки субъекта.

В предпочтительном варианте реализации данного аспекта указанные циклинзависимые киназы представляют собой CDK4, CDK6 или их комбинацию.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id) или (Ie) согласно любым вариантам реализации, описанным в настоящем документе, или фармацевтически приемлемой соли или композиции указанного соединения в производстве лекарственного средства для лечения заболевания или нарушения, связанного с активностью CDK. Указанная активность CDK предпочтительно представляет собой активность CDK4, CDK6 или их комбинации.

В одном варианте реализации данного аспекта указанное заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из колоректального рака, рака молочной железы, рака легкого, в частности немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака предстательной железы, глиобластомы, лимфомы клеток мантии

- 4 032693 (MCL), хронического миелоидного лейкоза (CML) и острого миелоидного лейкоза (AML).

В другом варианте реализации данного аспекта указанное заболевание или нарушение представляет собой заболевание или состояние, связанное с воспалением, такое как артрит, в частности ревматоидный артрит, или кистозный фиброз.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения соединения формулы (I), включающий стадию приведения во взаимодействие промежуточного соединения Е с промежуточным соединением G

Е G (I) где R¹-R⁵ определены в любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе, и X³представляет собой Cl, Br или I.

В одном варианте реализации данного аспекта указанный способ дополнительно включает стадии превращения промежуточного соединения С в промежуточное соединение D и приведения во взаимодействие промежуточного соединения D с пиримидиновым соединением Н с получением промежуточного соединения Е

X²

где R^x и R^y независимо представляют собой ^-^-алкил, ^-Cw^nr, Q-Cs-циклоалкил или, в качестве альтернативы, вместе образуют C2-C4-алкиленовую группу, причем каждый из них необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из С1-С4-алкила, галогена или фенила; и где каждый X¹, X² и X³ независимо представляет собой Cl, Br или I при условии, что промежуточное соединение D сочетается с соединением Н селективно по положению X , а не X , предпочтительно с селективностью более 90:10, более предпочтительно с селективностью более 95:5 и наиболее предпочти2 тельно только по положению X .

В одном варианте реализации данного аспекта указанный способ дополнительно включает стадии превращения исходного вещества S1 в промежуточное соединение А и превращения промежуточного соединения А в промежуточное соединение С

где X¹ представляет собой Cl, Br, I или MeSO₃-; и где R² и R³ такие, как определено в любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе.

В другом варианте реализации данного аспекта указанный способ дополнительно включает превращение промежуточного соединения А в промежуточное соединение С, в качестве альтернативы, включает превращение промежуточного соединения А в спиртовое промежуточное соединение В с последующим восстановлением спиртового промежуточного соединения В с получением промежуточного

- 5 032693 они вместе образуют С/Сд-алкиленовую группу таким образом, что ^{R2a R2b} - образованная в промежуточном соединении С, представляет собой R², который определен в любом из вариантов реализации, описанных в настоящем документе.

В одном варианте реализации данного аспекта указанный способ дополнительно включает стадию получения промежуточного соединения G посредством приведения во взаимодействие пиридинальдегидного соединения S2 и пиперазинового соединения S3 с получением промежуточного соединения F, с последующим превращением промежуточного соединения F в промежуточное соединение G

где X⁴ выбран из группы, состоящей из Cl, Br, I и -NO₂; и где указанное превращение промежуточного соединения F в промежуточное соединение G включает замещение X⁴ на NH2, когда X⁴ представляет собой Cl, Br или I; или, в качестве альтернативы, восстановление нитрогруппы (-NO2) до аминогруппы (-NH₂), когда X⁴ представляет собой -NO₂.

Соединения, предложенные в настоящем изобретении, также подходят для изучения киназ в биологических и патологических процессах, изучения сигнальных путей, опосредованных такими киназами, а также для сравнительной оценки новых ингибиторов киназ.

Если не указано иное, предполагается, что термин алкил в контексте настоящего документа включает разветвленные и неразветвленные насыщенные алифатические углеводородные группы, содержащие 1-8 атомов углерода, предпочтительно 1-6, более предпочтительно 1-4 атома углерода. Термин охватывает, без ограничения, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, трет-бутил, изобутил, пентил, гексил или подобные.

Если не указано иное, термин алкилен в контексте настоящего документа относится к бивалентному насыщенному алифатическому радикалу, полученному из алкана путем удаления двух атомов водорода. Примеры включают, без ограничения, метилен (-CH₂-), этилен (-CH₂CH₂-), пропилен (-CH2CH2CH2-) или подобные.

Если не указано иное, термин циклоалкил в контексте настоящего документа, используемый сам по себе или в составе другой группы, включает насыщенный циклический углеводородный радикал, содержащий 3-8 атомов углерода, образующих кольцо. Примеры включают, без ограничения, циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Если не указано иное, термин арил в контексте настоящего документа, используемый сам по себе или в составе другой группы, относится к моноциклическому или бициклическому ароматическому радикалу, содержащему 6-10 атомов углерода в кольцевой части (например, фенил и нафтил, в том числе 1нафтил и 2-нафтил).

Галоген в контексте настоящего документа относится к фтору (F), хлору (Cl), брому (Br) и йоду (I).

Кроме того, указанные алкильные, алкиленовые, циклоалкильные и циклоалкилметильные группы необязательно могут быть независимо дополнительно замещены одним или более, предпочтительно 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена и С₁-С₄-алкила.

Соединения согласно настоящему изобретению, в целом, относят к органическим основаниям, которые способны вступать в реакцию с кислотами, в частности фармацевтически приемлемыми кислотами, с получением фармацевтически приемлемых солей.

В контексте настоящего документа термин фармацевтически приемлемая соль относится к таким солям, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями человека и низших животных без вызывания излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и подобного, а также соответствуют разумному соотношению польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли хорошо известны в данной области (см., например, S.M. Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19, который включен в настоящий документ посредством ссылки). Фармацевтически приемлемые соли соединений согласно настоящему изобретению включают соли, полученные из подходящих неорганических и органических солей. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных солей присоединения кислот являются соли аминогруппы, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и хлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, виннокаменная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или путем использования других способов, применяемых в данной области, например ионного обмена. Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипинат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формат, фумарат, глюкогептонат, глицерофосфат, глюконат, гемисуль

- 6 032693 фат, гептаноат, гексаноат, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, п-толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и подобные. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли включают гидрохлоридные соли.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть получены в форме сольватов. Термин сольват в контексте настоящего документа обозначает физическую связь соединения согласно настоящему изобретению со стехиометрическим или нестехиометрическим количеством молекул растворителя. Например, одна молекула соединения связывается с одной или более, предпочтительно одной-тремя молекулами растворителя. Также возможно, что несколько (например, 1,5 или 2) молекул соединения делят одну молекулу растворителя. Такая физическая связь может включать водородную связь. В конкретных случаях возможно выделение сольватов в виде кристаллического твердого вещества. Молекулы растворителя в сольвате могут находиться в упорядоченном расположении и/или в неупорядоченном расположении. Примеры сольватов включают, без ограничения, гидраты, этаноляты, метаноляты и изопропаноляты. Способы сольватации, в цело, известны в данной области.

Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть получены в форме пролекарств. Термин пролекарство в контексте настоящего документа относится к производному соединения, которое может преобразовываться in vivo в исходное соединение, например путем гидролиза в крови. Типичные примеры пролекарств согласно настоящему изобретению включают, без ограничения, амидные или фосфорамидные формы активного аминового соединения, например соединения формулы (II)

где R⁶ представляет собой ацильную группу (например, ацетил, пропионил, формил и т.д.) или фосфорильную группу (например, группу -Р(=О)(ОН)₂); или в качестве альтернативы, когда R¹ или R³ в активном соединении представляет собой водород, соответствующие амидные или фосфорамидные соединения могут выступать в качестве пролекарства. Такие амидные и фосфорамидные соединенияпролекарства могут быть получены согласно стандартным способам, известным в данной области.

Когда для применения в терапии терапевтически эффективные количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых солей или сольватов могут быть введены в виде сырого химического вещества, возможно представление активного ингредиента в виде фармацевтической композиции. Соответственно в настоящем изобретении дополнительно предложены фармацевтические композиции, которые включают любые соединения согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, и один или более, предпочтительно один-три фармацевтически приемлемых носителя, разбавителя или других вспомогательных вещества. Указанный носитель (носители), разбавитель (разбавители) или другие вспомогательные вещества должны быть приемлемы в том смысле, что должны быть совместимы с другими ингредиентами состава и не должны оказывать вредоносного воздействия на субъект, подвергающийся лечению.

Термин фармацевтически приемлемый в контексте настоящего документа относится к свойству таких соединений, веществ, композиций и/или лекарственных форм, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями пациентов без вызывания излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соответствуют разумному соотношению польза/риск и являются эффективными для их целевого применения.

Фармацевтические составы могут быть представлены в виде единичных лекарственных форм, содержащих заданное количество активного ингредиента на однократную дозу. Как правило, фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению вводят с частотой от одного раза каждые 1-5 суток до примерно 1-5 раз в сутки или, в качестве альтернативы, путем непрерывной инфузии. Такое введение можно применять в качестве терапии хронического или острого заболевания. Количество активного ингредиента, которое может быть объединено с веществами-носителями с обеспечением единичной дозированной лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от состояния, подвергающегося лечению, тяжести этого состояния, времени введения, пути введения, скорости выведения используемого соединения, длительности лечения и возраста, пола, массы тела и состояния здоровья пациента. Предпочтительными являются единичные дозированные лекарственные формы, содержащие суточную дозу активного ингредиента или часть дозы, как указано выше, или ее подходящую фракцию. В целом, лечение начинают с малых доз, которые значительно меньше оптимальной дозы соединения. После этого дозу понемногу увеличивают до достижения оптимального эффекта в сложившихся обстоятельствах. В целом, наиболее желательно введение соединения при таком уровне концентрации, который, в целом,

- 7 032693 позволит достичь эффективных результатов без вызывания существенных пагубных или вредоносных побочных эффектов.

Когда композиции согласно настоящему изобретению содержат комбинацию соединения согласно настоящему изобретению и одного или более, предпочтительно одного или двух дополнительных терапевтических или профилактических агентов, указанные соединение и дополнительный агент обычно присутствуют в дозировках от примерно 10 до 150% и более предпочтительно от примерно 10 до 80% от дозы, обычно вводимой в режиме монотерапии.

Фармацевтические составы могут быть адаптированы для введения любым подходящим путем, например пероральным (включая буккальный или сублингвальный), ректальным, назальным, местным (включая буккальный, сублингвальный или чрескожный), вагинальным или парентеральным (включая подкожные, внутрикожные, внутримышечные, интраартикулярные, внутрисуставные, интрастернальные, интратекальные, внутриочаговые, внутривенные или интрадермальные инъекции или инфузии) путем. Такие составы могут быть получены любым способом, известным в области фармацевтики, например путем связывания активного ингредиента с носителем (носителями) или вспомогательным веществом (веществами). Предпочтительными являются пероральное введение или введение путем инъекции.

Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут быть представлены в виде форм с отдельными единицами, таких как капсулы или таблетки; порошки или гранулы: растворы или суспензии в водных и неводных растворах; съедобные пены или кремы или жидкие эмульсии типа масло в воде или эмульсии типа вода в масле.

Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы активный ингредиент лекарственного средства может быть объединен с пероральным нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и подобные. Порошки получают путем измельчения соединения до подходящего мелкого размера и смешивания с также измельченным фармацевтическим носителем, таким как пищевой углевод, например крахмал или маннитол. Также могут присутствовать ароматизатор, диспергирующий агент и краситель.

Капсулы получают путем приготовления порошкообразной смеси, как описано выше, и заполнения сформированных желатиновых оболочек. К указанной порошковой смеси могут быть добавлены вещества, способствующие скольжению, и смазывающие вещества, такие как коллоидный диоксид кремния, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или твердый полиэтиленгликоль, перед проведением операции заполнения. Также могут быть добавлены агент для улучшения расщепления или солюбилизирующий агент, такой как агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия, для улучшения доступности лекарственного средства при принятии капсулы внутрь.

Более того, при желании или необходимости также возможно введение в смесь подходящих связующих агентов, смазывающих веществ, агентов для улучшения расщепления и красителей. Подходящие связующие вещества включают крахмал, желатин, натуральные сахара, такие как глюкоза или беталактоза, сахаристые вещества из кукурузы, натуральные и синтетические смолы, такие как аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль и подобные. Смазывающие вещества, используемые в указанных лекарственных формах, включают олеат натрия, хлорид натрия и подобные. Вещества для улучшения расщепления включают, без ограничения, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бетонит, ксантановую камедь и подобные. Таблетки получают, например, путем приготовления порошкообразной смеси, гранулирования или комкования, добавления смазывающего вещества и вещества для улучшения распадаемости и прессования в таблетки. Порошкообразную смесь получают путем смешивания подходящим образом измельченного соединения с разбавителем или основанием, описанным выше, и необязательно со связующим агентом, таким как карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желирующий или поливинилпирролидон, замедлителем образования раствора, таким как парафин, ускорителем поглощения, таким как четвертичная соль, и/или поглощающим веществом, таким как бетонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошкообразную смесь можно гранулировать путем смачивания связующим агентом, таким как сироп, крахмальная паста, крахмальная слизь, или растворами целлюлозных или полимерных веществ и продавливания через решетку. В качестве альтернативы гранулированию порошкообразную смесь можно пропустить через таблетировочную машину, в результате чего получают заготовки неправильной формы, которые разбивают на гранулы. Гранулы могут быть смазаны для предотвращения прилипания к формообразующим головкам путем добавления стеариновой кислоты, стеаратной соли, талька или минерального масла. Затем смазанную смесь прессуют в таблетки. Соединения согласно настоящему изобретению также можно объединять с легкосыпучим инертным носителем и прессовать в таблетки напрямую без прохождения стадий гранулирования или комкования. Может быть обеспечена прозрачная или матовая защитная оболочка, состоящая из герметизирующего покрытия из шеллака, покрытия из сахаристого или полимерного материала и покрытия из воска. К указанным покрытиям могут быть добавлены красители для различения различных единичных дозировок.

Жидкости для перорального применения, такие как растворы, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в дозированных лекарственных формах для того, чтобы их определенное количество содержало заранее заданное количество соединения. Сиропы можно получить путем растворения соединения

- 8 032693 в подходящим образом ароматизированном водном растворе, в то время как эликсиры получают с использованием нетоксичного носителя. Также могут быть добавлены солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этоксилированные изостеариловые спирты или полиоксиэтиленсорбитоловые эфиры, консерванты, вкусовые добавки, такие как масло перечной мяты или натуральные подсластители, или сахарин, или другие искусственные подсластители и подобные.

Там, где это уместно, единичные дозированные лекарственные формы для перорального введения могут быть микроинкапсулированы. Указанная лекарственная форма также может быть составлена для пролонгирования или замедления высвобождения, например, путем нанесения оболочки или заключения частиц в полимеры, воски или подобные.

Следует понимать, что в дополнение к отдельно упомянутым выше ингредиентам, составы могут содержать другие агенты, стандартные в данной области, относящиеся к конкретному типу состава, например агенты, подходящие для перорального введения, могут включать вкусовые добавки.

Термин субъект или пациент включает как человека, так и других млекопитающих животных, предпочтительно человека.

Термин терапевтически эффективное количество относится к такому количеству соединения или композиции, которое при введении субъекту для лечения заболевания является достаточным для осуществления такого лечения заболевания. Терапевтически эффективное количество может варьировать, среди прочего, в зависимости от соединения, заболевания и его тяжести, а также возраста, массы тела или других особенностей субъекта, подвергающегося лечению. Когда термин применяют к отдельному активному ингредиенту, вводимому самому по себе, такой термин относится только к этому ингредиенту самому по себе. Когда термин применяют к комбинации, он относится к объединенным количествам активных ингредиентов, которые приводят к терапевтическому эффекту, вне зависимости от того, вводят их в комбинации, серийно или одновременно.

В некоторых вариантах реализации термин лечить или лечение относится к (i) ингибированию заболевания, нарушения или состояния, т.е. остановке его развития; (ii) облегчению заболевания, нарушения или состояния, т.е. вызыванию регрессии заболевания, нарушения или состояния; или (iii) предотвращению заболевания, нарушения или состояния от возникновения у субъекта, который может быть предрасположен к указанному заболеванию, нарушению или состоянию, но еще не получил диагноз, свидетельствующий о его наличии. Таким образом, в некоторых вариантах реализации лечить или лечение относится к уменьшению интенсивности симптомов заболевания или нарушения, которое может включать уменьшение интенсивности одного или более физических показателей, что, тем не менее, может быть незаметно для субъекта, подвергающегося лечению. В некоторых вариантах реализации термин лечить или лечение включает модулирование заболевания или нарушения физическим (например, стабилизация различимого симптома) или физиологическим образом (например, стабилизация физического показателя) или и то, и другое. В некоторых других вариантах реализации термин лечить или лечение включает отсрочку дебюта заболевания или нарушения.

Способы

Сокращения.

В настоящей заявке могут быть использованы следующие сокращения:

B₂pin₂ - бис-(пинаколато)дибор,

МеОН - метанол,

LDA - диизопропиламид лития,

LiHMDS - лития бис-(триметилсилил)амид [LiN(SiMe₃)₂],

Pd(dppf)Cl₂ - [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П),

Pd₂(dba)₃ - трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0),

Xantphos - 4,5-бис-(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен, nBu₃P - три-н-бутилфосфин,

ДХМ - дихлорметан,

ТГФ - тетрагидрофуран,

DIEA-DIPEA - диизопропилэтиламин, насыщ. - насыщенный водный раствор, вод. - водный,

FCC - колоночная флэш-хроматография с использованием силикагеля,

ТФУ - трифторуксусная кислота,

к.т. - комнатная температура,

ДМФА - N.N-диметилформамид.

ДМСО - диметилсульфоксид,

DMA - Ν,Ν-диметилацетамид,

EtOAc - этилацетат, ч - час (часов).

Химический синтез.

Синтез соединений формулы (I).

- 9 032693

Синтез соединений формулы (I) проиллюстрирован при помощи общих схем синтеза 1-4.

1. Синтез индазольного промежуточного соединения С (схема 1).

Производят реакцию между подходящим 5-галоген-2-нитробензальдегидным исходным веществом S1 (X¹ - Cl, Br или I) и первичным амином (R³NH₂) в присутствии фосфина, например три-бутилфосфина, с получением индазольного производного A (Genung N.L·. et al. Org. Lett. 2014 16, 3114-3117), которое, в свою очередь, депротонируют по положению 3 при помощи сильного основания, например LDA, с последующей реакцией с алкилирующим реагентом R²X (X, например, Cl, Br, I или метансульфонат) с получением промежуточного соединения C с требуемыми R², R³ и R⁴ на нужных местах. В качестве альтернативы, возможно проведение реакции между депротонированным соединением А с альдегидом или кетоном с получением спиртового аддукта, который восстанавливают (например, при помощи диалкилсилана) с получением требуемого промежуточного соединения C

Схема 1

2. Синтез пиримидинзамещенного индазольного промежуточного соединения Е (схема 2).

Проводят реакцию боронирования промежуточного соединения С в присутствии катализатора (например, палладиевого катализатора) с получением бороната промежуточного соединения D, который объединяется с галогензамещенным пиримидиновым производным Н с получением 5-(пиримидин-3-ил)индазольного промежуточного соединения Е.

Схема 2

X²

3. Синтез 2-амино-5-пиперазинилметилпиридинового промежуточного соединения G (схема 3).

6-галоген- или 6-нитрозамещенное пиридин-3-карбальдегидное исходное вещество S2 и 1-R¹замещенное пиперазиновое исходное вещество S3 вступают в реакцию восстановительного аминирования с получением 2-амино-5-пиперазинилметилпиридинового промежуточного соединения F, которое, в свою очередь, превращается в 2-амино-5-пиперазинилметилпиридиновое промежуточное соединение G путем замещения галогена или восстановления нитрогруппы на пиридиновом кольце. Схема 3

4. Синтез соединений формулы (I) (схема 4).

Приведение во взаимодействие пиримидинзамещенного индазольного промежуточного соединения Е с 2-амино-5-пиперазинметилпиридиновым промежуточным соединением G в присутствии катализатора (например, палладиевого катализатора) позволяет получить соединение формулы (I)

Схема 4

Примеры

Следующие неограничивающие примеры дополнительно иллюстрируют конкретные аспекты настоящего изобретения. Указанные соединения получены согласно общим схемам синтеза, описанным

- 10 032693 выше.

Пример 1. К-(5-((4-Этилпиперазинил)метил)пиридин-2-ил-5-фтор-4-(3-изопропил-2-метил-2Ниндазол-5-ил)пиримидин-2-амин

Синтез соединения 1.

В качестве иллюстративного примера синтез промежуточных соединений Е, промежуточного соединения G и соединения 1 показан на схемах 5-7 соответственно. На следующих схемах реакций некоторые конкретные реагенты или условия реакций приведены исключительно для лучшего понимания, но такие конкретные реагенты или условия не рассматриваются как каким-либо образом ограничивающие. Как будет понятно специалисту в данной области, любая конкретная стадия схемы реакции может быть осуществлена с использованием различных эквивалентных условий в различных аспектах, таких как реагенты, температура, катализатор и/или растворители и т.д.

Схема 5

Схема 6

Схема 7

Е

Промежуточное соединение А.

В круглодонную колбу вместимостью 500 мл, продуваемую и находящуюся в инертной атмосфере азота, помещали 5-бром-2-нитробензальдегид (30,0 г, 130,4 ммоль, 1,0 экв.), метанамин (71,5 мл, 1,1 экв.) и пропан-2-ол (300 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 4 ч при 80°С. Смесь охлаждали до к.т. и добавляли трибутилфосфин (98 мл, 3,0 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 12 ч при 80°С и затем экстрагировали 500 мл этилацетата. Полученную смесь последовательно промывали 300 мл NH₄Cl (вод.) и 300 мл солевого раствора. Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Осадок помещали в колонку с силикагелем и элюировали этилацетатом/петролейным эфиром (1:4). Это приводило к получению 32 г (неочищ.) 5-бром-2-метил-2Н-индазола А в виде красного масла: МС m/z MH⁺=211.

Промежуточное соединение В.

В трехгорлую круглодонную колбу вместимостью 1 л, продуваемую и находящуюся в инертной атмосфере азота, помещали 5-бром-2-метил-2Н-индазол А (32,0 г, 128,9 ммоль, 1,0 экв., 85%) в тетрагидрофуране (300 мл). К указанному раствору добавляли LDA (97,5 мл, 1,5 экв., 2 М) при -78°С. Раствор

- 11 032693 перемешивали при 0-5°С в течение 10 мин, затем охлаждали до -78°С. К указанному раствору добавляли пропан-2-он (11,3 г, 194,7 ммоль, 1,5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 12 ч при 25°С. Затем реакционную смесь гасили 100 мл водного бикарбоната натрия. Полученный раствор экстрагировали 3x500 мл этилацетата, и органические слои объединяли, высушивали над безводным Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали под вакуумом, и осадок помещали в колонку с силикагелем и элюировали этилацетатом/петролейным эфиром (1:10 к 1:2). Это приводило к получению 20 г (58%) 2-(5бром-2-метил-2Н-индазол-3-ил)пропан-2-ола B в виде желтого масла: МС m/z M⁺=269.

Промежуточное соединение С.

В круглодонную колбу вместимостью 500 мл помещали 2-(5-бром-2-метил-2Н-индазол-3ил)пропан-2-ол В (20,0 г, 74,3 ммоль, 1,0 экв.), триэтилсилан (86,6 г, 744,4 ммоль, 10,0 экв.), трифторуксусную кислоту (85,0 г, 752,0 ммоль, 10,0 экв.) и дихлорметан (200 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 12 ч при 25°С. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Раствор доводили до рН 8 при помощи бикарбоната натрия (вод., 2 М). Полученный раствор экстрагировали 3x100 мл этилацетата, и органические слои объединяли и промывали 1 x 100 мл солевого раствора. Смесь высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Осадок помещали в колонку с силикагелем и элюировали этилацетатом/петролейным эфиром (1:20 к 1:10). Это приводило к получению 8 г (43%) 5-бром-2-метил-3-(пропан-2-ил)-2Н-индазола С в виде желтого масла: МС [М+1]⁺=253-255 и [M+CH₃CN+H]⁺=294-296.

Промежуточное соединение D.

В круглодонную колбу вместимостью 100 мл, продуваемую и находящуюся в инертной атмосфере азота, помещали 5-бром-2-метил-3-(пропан-2-ил)-2Н-индазол (1,9 г, 7,5 ммоль, 1,0 экв.), 4,4,5,5тетраметил-2-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1,3,2-диоксаборолан (2,3 г, 9,0 ммоль, 1,2 экв.), KOAc (1,47 г, 15,0 ммоль, 2,0 экв.), 1,4-диоксан (40 мл) и воду (10 мл). К указанному раствору добавляли Pd(dppf)Cl₂ (612 мг, 0,75 ммоль, 0,1 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 12 ч при 90°С и затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Осадок помещали в колонку с силикагелем и элюировали этилацетатом/петролейным эфиром (1:5). Это приводило к получению 2,5 г (неочищ.) 2-метил-3-(пропан-2-ил)-5-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-2Н-индазола D в виде твердого белого вещества: МС m/z MH⁺=301.

Промежуточное соединение Е.

В круглодонную колбу вместимостью 100 мл, продуваемую и находящуюся в инертной атмосфере азота, помещали 2-метил-3-(пропан-2-ил)-5-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-2Н-индазол (2,5 г, 7,5 ммоль, 1,0 экв., 90%), 2,4-дихлор-5-фторпиримидин (1,7 г, 9,9 ммоль, 1,2 экв.), карбонат калия (2,3 г, 16,7 ммоль, 2,0 экв.), 1,4-диоксан (40 мл) и воду (10 мл). К указанному раствору добавляли Pd(dppf)Cl₂ (680 мг, 0,83 ммоль, 0,10 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 ч при 80°С и затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под вакуумом. Осадок помещали в колонку с силикагелем и элюировали этилацетатом/петролейным эфиром (1:2). Это приводило к получению 1,2 г (48%) 5(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)-2-метил-3-(пропан-2-ил)-2Н-индазола E в виде твердого грязно-белого вещества: МС m/z МН⁺=305; ^lH NMR (300 МГц, CDCl₃, ppm): δ 1,58 (d, 6H), 3,48-3,57 (m, 1H), 4,19 (s, 3H), 7,24 (d, 1H), 8,03-8,07 (m, 1H), 8,47 (d, 1H), 8,68 (s, 1H).

Промежуточное соединение F.

NaBH(OAc)₃ (14,4 г, 68,0 ммоль, 1,1 экв.) добавляли по порциям в течение 30 мин к раствору Nэтилпиперазина (7,7 г, 67,5 ммоль, 1,1 экв.) и 6-бромпиридин-3-карбальдегида (11,6 г, 62,5 ммоль, 1,0 экв.) в 150 мл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивали в течение 48 ч, затем разбавляли CH2Cl2 и избытком 2 н. NaOH (вод.). Слои разделяли, и водную фазу экстрагировали CH2Cl2. Экстракты CH₂Cl₂ объединяли, высушивали (Na₂SO₄) и концентрировали с получением 1-(6-бром-пиридин-3илметил)-4-этилпиперазина F в виде масла: МС m/z MH⁺=285.

Промежуточное соединение G.

Бис-(триметилсилил)амид лития (LiHMDS) (1 M раствор в ТГФ, 12,7 мл, 12,7 ммоль, 1,2 экв.) добавляли к раствору промежуточного соединения F (3,0 г, 10,6 ммоль, 1,0 экв.), дициклогексилфосфинобифенила (0,227 г, 0,64 ммоль, 0,06 экв.) и Pd₂(dba)₃ (0,291 г, 0,32 ммоль, 0,03 экв.) в 15 мл ТГФ. Смесь нагревали при 50°С в течение 3 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через фильтровальную среду Dicalite®. Фильтрат концентрировали, и осадок разбавляли в CH₂Cl₂ и дважды экстрагировали 10% HCl (вод.). HCl-экстракты объединяли и промывали EtOAc, и водную фазу подщелачивали 1,0 н. NaOH и затем четырежды экстрагировали CH2Cl2. Органические экстракты объединяли, высушивали над Na2SO4 и концентрировали с получением 1,2 г 5-(4-этил-пиперазинил-1-илметил)пиридин-2-иламина G в виде желтовато-коричневого твердого вещества: МС m/z МН⁺=221.

Соединение I.

Смесь 5-(2-хлор-5-фторпиримидин-4-ил)-2-метил-3-(пропан-2-ил)-2Н-индазола (Е) (700 мг 2,3 ммоль, 1,3 экв.), 5-((4-этилпиперазин-1-ил)метилпиридин-2-амина (G) (389 мг, 1,8 ммоль, 1,0 экв.), Cs₂CO₃ (2,3 г, 7,2 ммоль, 4,0 экв.), Pd₂(dba)₃ (0,164 г, 0,18 ммоль, 0,1 экв.) и Xantphos (0,104 г, 0,18 ммоль, 0,1 экв.) в 10 мл 1,4-диоксана дегазировали N₂, затем нагревали при перемешивании при 110°С в течение

- 12 032693

ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, затем фильтровали через фильтровальную среду Dicalite®, и фильтровальный слой тщательно промывали CH₂Cl₂. Фильтрат концентрировали, и осадок очищали при помощи колоночной хроматографии на силикагеле с использованием градиента CH₂Cl₂-2% NH₃/MeOH с получением 0,475 г Н-(5-((4-этилпиперазин-ил)метил)пиридин-2-ил-5-фтор-4-(3-изопропил2-метил-2Н-индазол-5-ил)пиримидин-2-амина (1). МС m/z MH⁺ 489; ЯМР (300 МГц, CDCl₃, ppm): δ 0,97 (t, 3H, J=7,1 Hz), 1,51 (d, 2H, J=7,0 Hz), 2,27-2,51 (наложившиеся m, 10Н), 3,33 (s, 3H), 3,54-3,68 (m, 1H), 4,15 (s, 3H), 7,64-8,71 (наложившиеся m, 7H), 10,00 (s, 1H).

Соединение I и другие избранные примеры (соединения 2-31) согласно настоящему изобретению перечислены в табл. 1; все указанные соединения получены или могут быть получены согласно способам, описанным выше.

Таблица 1

Избранные примеры соединений

Пример	Структура	Название
1				[A	^.F			А-(5-((4-этилпиперазин-
	N		Ά H	ΪΓ			1 -ил)метил)пиридин-2-
	ΕΓ^Νχ			ί	A V		ил)-5-фтор-4-(3изопропил-2-метил-2Ниндазол-5-

					Me—	Me	-N Me	ил)пиримидин-2-амин
2					^F			А-(5-((4-этилпиперазин-
	N	О	A			p	1 -ил)метил)пиридин-2-
					if			ил)-5-фтор-4-(7-фтор-3 -
						V		изопропил-2-метил-2Н- индазол-5-
					Me—	Me	-N Me	ил)пиримидин-2-амин
3					ll			тУ-(5-((4-этилпиперазин-
			LA	A	H		Л	1 -ил)метил)пиридин-2-
	Et ^x			'Ν Ν' H	ί	V		ил)-4-(7-фтор-3- изопропил-2-метил-2Н-
						-N	индазол-5-
					Me—	Me	Me	ил)пиримидин-2-амин
4					^^F			4-(3 -циклопентил-2-
	ΕΓ^Νχ	V-		ΪΓ H	A		мeτил-2H-индaзoл-5-ил)- А-(5-((4-этилпиперазин-
				H	H	V	-N Me	1 -ил)метил)пиридин-2ил)-5 -фторпиримидин-2-
							амин
5		A''*⁴			^f			4-(3 -циклопентил-7 -
	ΕΓ^Νχ	Q	Ά H	Г π			фтор-2-метил-2Ниндазол-5 -ил)-#-(5-((4-
					V	-M	этилпиперазин-1 - ил)метил)пиридин-2-ил)-

							N Me	5 -фторпиримидин-2-амин
6								4-(3 -циклопентил-7 -
	-Ν.			.A,·	jl		.F	фтор-2-метил-2Н-
	Et ^x			N N H	ί	V		индазол-5-ил)-А-(5-((4этилпиперазин-1 -
						-N	ил)метил)пиридин-2-
							Me	ил)пиримидин-2-амин

- 13 032693

7		jX	''Χ nN/ ХАЛ\| ^Η L 1 V / ^ν<1 '^Ме	4-(3 -циклопропил-2мeτил-2H-индaзoл-5-ил)#-(5-((4-этилпиперазин- 1 -ил)метил)пиридин-2ил)-5 -фторпиримидин-2амин
8		jX	^Ν nN/ ^Α\γ ^Η L A χ '^Me	4-(3 -циклопропил-7 фтор-2-метил-2Ниндазол-5 -ил)-#-(5-((4этилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2-ил)5 -фторпиримидин-2-амин
И	Ϋ		Χ^Ν nX^F Ii x x 1 ^ΧχΧχ ^H LA γ> / ^N—6 Me	5 -фтор-4-(3 -изопропил-2мeτил-2H-индaзoл-5-ил)А(5-((4изопропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
12	Ϋ		XX nXX 1 л к £ _ _FXxnxY ^H LA p / ^N—< Me	5 -фтор-4-(7-фтор-3 изопропил-2-метил-2Ниндазол-5-ил)-#-(5-((4изопропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
13	Ϋ		XX nX^f Li 1 1 XNNXk ^H LA / ⁿ/X Me	4- (3 -циклопентил-2мeτил-2H-индaзoл-5-ил)- 5- фтор-#-(5-((4изопропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
14	Ϋ		XX nX^f UXv ^H LA / ^N/X Me	4-(3 -циклопентил-7 фтор-2-метил-2Ниндазол-5 -ил)-5 -φτορ-TV(5-((4изопропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
15		ΧΧ ν£	XX n nXX L x x A X>XXN ^H LA XX / ⁿ—f Me	5 -фтор-4-(3 -изопропил-2мeτил-2H-индaзoл-5-ил)#-(5-((4- пропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
16		ΧΧ Ν^£	XX n YV^F UaX/ ^H LA p / ⁿ-—< Me	5 -фтор-4-(7-фтор-3 изопропил-2-метил-2Ниндазол-5 -ил)-#-(5-((4пропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
17		X'	NX nN^/Fί x x A \ΑγχνΑ ^H LA p / ^N/X Me	4- (3 -циклопентил-2мeτил-2H-индaзoл-5-ил)- 5- фтор-#-(5-((4пропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
18		<Х	V^N nX<^F I j x 1 f \χχ^/Α^: ^H LA / ⁿ/X Me	4-(3 -циклопентил-7 фтор-2-метил-2Ниндазол-5-ил)-5-фтор-#(5-((4-пропилпиперазин- 1 -ил)метил)пиридин-2- ил)пиримидин-2-амин
19		JX	^N ⁿ^X^F x\x ^H LA XX / ^NEt Me	4-(3 -этил-2-метил-2Ниндазол-5 -ил)-#-(5-((4этилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2-ил)5 -фторпиримидин-2-амин
20	Ε^'	JX	A ⁿX~A XX/ ^H LA V' / ⁿ Et Me	4-(3 -этил-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)#-(5-((4-этилпиперазин- 1 -ил)метил)пиридин-2- ил)-5 -фторпиримидин-2амин
21	ЕГ^		'X nX<^F ΛΑιΧ ^H LA ΎΧ / ⁿ/X Me	4-(3-(втор-бутил)-2метил-2Н-индазол-5-ил)#-(5-((4-этилпиперазин1 -ил)метил)пиридин-2ил)-5 -фторпиримидин-2амин

- 14 032693

22					.F		4-(3 -(втор-бутил)-7-фтор-
			X J H	]f		2-метил-2Н-индазол-5 - ил)-#-(5-((4-
				H		этилпиперазин-1 - ил)метил)пиридин-2-ил)-

						/—N ( Me	5 -фторпиримидин-2-амин
28		''Х		Ν^<ΐ>Αι	.F		4-(3-
	N		A J			(цикл опропил мети л)- 7 -
	ЕГ ^х				\|f		фтор-2-метил-2Н-
				H			индазол-5 -ил)-#-(5-((4-
						Kn	этилпиперазин-1 -
						/ Me	ил)метил)пиридин-2-ил)- 5 -фторпиримидин-2-амин
29					,F		4-(3 -циклопропил-2-этил-
	Et'^N-	V-	'n<A	\|f		7-фтор-2Н-индазол-5 -ил)- А-(5-((4-этилпиперазин-
				H	H	/ ⁿ ⁷ Me	1 -ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин
30					.F		4-(3-(втор-бутил)-2-
	ЕГ^Г'-		k J	\|f		метил-2Н-индазол-5-ил)- А-(5-((4-этилпиперазин-
				H	\|l	/ ^N ( Me	1 -ил)метил)пиридин-2ил)-5 -фторпиримидин-2-
						амин
31		''X	aZ^N		,F		4-(3 -(втор-бутил)-7-фтор-
	еЛ-	V	zk H	\|f	^y^F	2-метил-2Н-индазол-5 - ил)-#-(5-((4-
				H	vS V_M	этилпиперазин-1 - ил)метил)пиридин-2-ил)-

						/—N ( Me	5 -фторпиримидин-2-амин

Биологические анализы.

Соединения формулы I представляют собой новые ингибиторы CDK4/6, которые были или могут быть оценены на предмет их активности согласно методикам, описанным ниже.

Биохимический анализ.

Циклин D1 добавляли к свежеприготовленному реакционному буферу [20 мМ Hepes (pH 7,5), 10 мМ MgCl₂, 1 мМ EGTA, 0,02% Brij 35, 0,02 мг/мл BSA, 0,1 мМ Na₃VO₄, 2 мМ DTT, 1% ДМСО]. CDK4 или CDK6 помещали в субстратный раствор и осторожно перемешивали. Соединения тестировали в режиме 10-доз IC₅₀ с 3-кратным разбавлением, начиная с 10 мкМ. Соединения, разбавленные в ДМСО, добавляли к реакционной смеси киназ при помощи акустической технологии (Echo550; нанолитровый диапазон) и инкубировали в течение 20 мин при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли ³³Р-АТР (1 мкМ) для инициации реакции. Реакционную смесь киназ инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционные смеси точечно наносили на ионообменную бумагу Р81, и детектировали активность киназ при помощи метода связывания на фильтрах. Кривые соотносили с нелинейной кривой регрессии с использованием четырехпараметрического логистического уравнения (GraphPad Prism). В указанных условиях определили, что в анализах CDK4 и CDK6 для соединения I значение IC₅₀составило <1,0 нМ.

Анализ клеток.

Опухолевые клетки человека MCF7 высевали на прозрачный полистироловый 96-луночный микрокультуральный планшет (плоскодонный 96-луночный планшет Corning® Costar®, Cat.# 3997) в общем объеме 90 мкл/лунку. Спустя 24 ч инкубации во влажной камере при 37°С с 5% CO₂ и 95% воздуха в каждую лунку в двух параллелях добавляли 10 мкл 10Х серийно разбавленного Соединения I в питательной среде (10-кратный ответ на дозу). Спустя 72 ч содержания культуры во влажной камере при 37°С, в атмосфере 5% CO₂ и 95% воздуха высеянные клетки и Cell Titer-Glo® (Promega G7571) переносили в комнатную температуру для отстаивания на 30 мин. 100 мкл реагента Cell Titer-Glo® добавляли в каждую лунку. Планшет встряхивали в течение двух минут и затем оставляли для отстаивания на 10 мин. Среду/реагент Cell Titer Glo® переносили в белый полистироловый 96-луночный микрокультуральный планшет (плоскодонный 96-луночный планшет Corning® Costar®, Cat.# 3917) перед считыванием люминесценции на микропланшетном ридере Tecan GENios. Процент ингибирования роста клеток вычисляли относительно необработанных контрольных лунок. Все тесты проводили в двух параллелях для каждого уровня концентрации. Значение IC₅₀ для тестируемых агентов оценивали при помощи Prism 6.05 путем выравнивания полученных данных с использованием следующего четырехпараметрического логистического уравнения ,, Тор - Bottom „ Г - —-------+ Ло/fcwi где Top представляет собой максимальный % контрольного поглощения, Bottom представляет собой минимальный % контрольного поглощения при наивысшей концентрации агента, Y представляет собой % контрольного поглощения, X представляет собой концентрацию агента, IC₅₀ представляет собой

- 15 032693 концентрацию агента, которая ингибирует рост клеток на 50% по сравнению с контрольными клетками, и n представляет собой наклон кривой. В указанных условиях определили, что для соединения I значение IC₅₀ составило <2 μΜ.

В табл. 2 приведены обобщенные биохимические данные и данные, полученные на клетках MCF7 для трех заявленных ингибиторов CDK4/6 32, 33 и 34. Данные были получены в аналитических условиях, описанных в настоящем документе.

Таблица 2

Биохимические и клеточные данные для известных ингибиторов CDK4/6

	32	33	34
	1С₅₀ (мкМ)	1С₅₀(мкМ)	1С₅₀ (мкМ)
клетки MCF7	10	<2	10
Биохимический анализ CDK4	< 0.005	< 0.001	< 0.001
Биохимический анализ CDK6	< 0.002	< 0.001	< 0.002

Специалисту в данной области будет очевидно, что соединения, композиции и/или способы согласно настоящему изобретению можно осуществить с большим количеством различных модификаций в пределах объема изобретения. Следовательно, различные варианты реализации настоящего изобретения, описанные в настоящем документе, являются лишь иллюстративными и не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего изобретения каким-либо образом. Все литературные источники, упомянутые в настоящем документе, включены в него во всей полноте посредством ссылки.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) (I) или его фармацевтически приемлемая соль, где

R¹ представляет собой водород, CrCs-алкил или C₃-C₇-циклоалкил;

R² и R³, каждый независимо, представляют собой водород, C^Cg-алкил, C₃-C₇-циклоалкил или C₃-C₇-циклоалкилметил;

R⁴ представляет собой водород, галоген, CrCs-алкил или C₃-C₇-циклоалкил; и

R⁵ представляет собой водород или галоген.
2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹ представляет собой C1-C6алкил; R² представляет собой CpQ-алкил, C3-C₆-циклоалкил или C₃-C₆-циклоалкилметил; R³ представляет собой C₁-C₆-алкил или C₃-C₆-циклоалкил.
3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹ представляет собой метил, этил, пропил или изопропил; R² представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, циклопропил, циклопентил, циклопропилметил или циклопентилметил; R³ представляет собой метил, этил, пропил, изо пропил или циклопропил.
4. Соединение по любому из пп.1-3 или его фармацевтически приемлемая соль, описанное формулой (Ia), где R⁴ расположен в положении 7 индазолового кольца (1а)
5. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где R⁴ представляет собой водород или галоген; R⁵ представляет собой водород или фтор.

- 16 032693
6. Соединение по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹ представляет собой метил или этил; R² представляет собой изопропил, циклопропил, циклопропилметил или циклопентил; R³ представляет собой метил или этил; R⁴ представляет собой водород или фтор; R⁵ представляет собой водород или фтор.
7. Соединение по любому из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранные из груп пы, состоящей из

8. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранные из списка, представ- ленного ниже в таблице

Пример Структура Название 1 ^н 1 Λ / ^Ν Me—Me Me Л/-(5-((4-этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фтор-4-(3-изопропил-2метил-2Н-индазол-5ил)пиримидин-2-амин 2 ^H L Λ / ^N Me—Me Me Л/-(5-((4-этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фтор-4-(7-фтор-3изопропил-2-метил-2Ниндазол-5-ил)пиримидин-2амин 3 ^H L 1 /- N Me—( Me Me Л/-(5-((4-этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-4(7-фтор-3-изопропил-2метил-2Н-индазол-5ил)пиримидин-2-амин 4 ^H L Λ / ⁿΛΎ Me 4-(3-цикпопентил-2-метил2Н-индазол-5-ил)-Л/-(5-((4этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 5 _e1,nA ^H L 1 / ^N/—( Me 4-(3-цикпопентил-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/(5-((4-этил пиперазин-1 ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 6 ^H / ^N/γ Me 4-(3-цикпопентил-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/(5-((4-этил пиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 7 _e1,nJ ^H L A / ^NY Me 4-(3-цикпопропил-2-метил2Н-индазол-5-ил)-Л/-(5-((4этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 8 NY<^F ^H IL Λ /— N ^Μθ 4-(3-циклопропил-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/(5-((4-этил пиперазин-1 ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин

- 17 032693

11 ^Ν<:7ΧϊΓ^Γ я —< Me 5-фтор-4-(3-изопропил-2- метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/(5-((4-изопропилпиперазин- 1-ил)метил)пиридин-2- ил)пиримидин-2-амин 12 A AAVt' V> /—N —6 Me 5-фтор-4-(7-фтор-3изопропил-2-метил-2Ниндазол-5-ил)-Л/-(5-((4изопропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 13 YY^YYY n^<Y<^f A 4¾ /—N Ay Me 4-(3-цикпопентил-2-метил- 2Н-индазол-5-ил)-5-фтор-Л/(5-((4-изопропилпиперазин- 1-ил)метил)пиридин-2- ил)пиримидин-2-амин 14 I^N^YrY^N ^Ν<ΪΓΧΥ^Ρyj LA_NA_NA_rvF 1 ^H L 1 /—N /—r Me 4-(3-цикпопентил-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)-5фтор-Л/-(5-((4- изопропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 15 ^'N^'Y'^N ^N<?XY^FA\/^NY Y^ Ν^ΥγΥ ^H IL A —ζ Me 5-фтор-4-(3-изопропил-2метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/(5-((4-пропил пиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 16 Ia_n%Vy^f ^H IL 1 /-N —i Me 5-фтор-4-(7-фтор-3изопропил-2-метил-2Ниндазол-5-ил)-Л/-(5-((4пропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 17 YnYYn V_NA_NI^ ^H IL 1 / ^NAy Me 4-(3-цикпопентил-2-метил2Н-индазол-5-ил)-5-фтор-Л/(5-((4-пропил пиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 18 Yn'YYn n^V^F V_nA_nX^f ^H IL Λ /- N /—( Me 4-(3-цикпопентил-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)-5фтор-Л/-(5-((4- пропилпиперазин-1 ил)метил)пиридин-2ил)пиримидин-2-амин 19 Ι'^'ν^ΥΥΥ ⁿ^V^F _EtA ГА_мА_мА-ч, ^H IL A / ^N Et Me 4-(3-этил-2-метил-2Ниндазол-5-ил)-Л/-(5-((4этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 20 ^nYYn ^Ν<Χ|Γ^Ρ _aA VAAy ^H IL Λ / ^N Et Me 4-(3-этил-7-фтор-2-метил- 2Н-индазол-5-ил)-Л/-(5-((4этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 21 ^N^Y^P _EtA ΙΑΛΥ ^H IL 1 / ^N/—( Me 4-(3-(втор-бутил)-2-метил- 2Н-индазол-5-ил)-Л/-(5-((4этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 22 ^nYYn ^n<^Y^F _EtA UA\y ^H IL Λ V' / ⁿ/У Me 4-(3-(втор-бутил)-7-фтор-2метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/(5-((4-этил пиперазин-1 ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин

- 18 032693

28 еА- О α) Η Α Υτ / ^Ν ^ζ Me 4- (3-(цикпопропилметил)-7фтор-2-метил-2Н-индазол- 5- ил)-Л/-(5-((4этилпиперазин-1ил)метил)пиридин-2-ил)-5фторпиримидин-2-амин 29 .F 4-(3-цикпопропил-2-этил-7- e.'ⁿ- V фтор-2Н-индазол-5-ил)-Л/- Η (5-((4-этил пиперазин-1- ΥΤ / ^Ν ил)метил)пиридин-2- ' Me ил)пиримидин-2-амин 30 _XF 4-(3-(втор-бутил)-2-метил- еА- Μ •nA A 2Н-индазол-5-ил)-Л/-(5-((4- Η (ί этилпиперазин-1- γτ / ⁿ ил)метил)пиридин-2-ил)-5- ' Me фторпиримидин-2-амин 31 _XF 4-(3-(втор-бутил)-7-фтор-2- еА- Μ Α ¹ 'νΎ метил-2Н-индазол-5-ил)-Л/- Η (5-((4-этил пиперазин-1- ya / ^N ил)метил)пиридин-2-ил)-5- ' Me фторпиримидин-2-амин

9. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, имеющее структуру
10. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, опосредованного активностью циклинзависимой киназы (CDK), содержащая соединение по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемую соль и одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, разбавителей и/или носителей.
11. Способ лечения заболевания, нарушения или состояния, опосредованного активностью по меньшей мере одной циклинзависимой киназы (CDK), причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции по п.10.
12. Способ по п.11, в котором по меньшей мере одна CDK представляет собой CDK4, CDK6 или их комбинацию.
13. Способ по п.11, в котором указанное заболевание или нарушение представляет собой рак.
14. Способ по п.13, в котором указанный рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака молочной железы, рака легкого, в частности немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), рака предстательной железы, глиобластомы, лимфомы клеток мантии (MCL), хронического миелоидного лейкоза (CML), острого миелоидного лейкоза (AML) и их осложнений.
15. Способ по п.11, в котором указанное заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение, связанное с воспалением, выбранное из артрита и кистозного фиброза.
16. Способ по любому из пп.11-15, дополнительно включающий введение указанному субъекту второго терапевтического агента, выбранного из группы, состоящей из другого ингибитора CDK, ингибитора HER2, ингибитора mTOR и ингибитора EGFR.
17. Способ получения соединения формулы (I), включающий стадию приведения во взаимодействие промежуточного соединения Е с промежуточным соединением G где R¹ -R⁵ определены в любом из пп.1-8, X³ представляет собой Cl, Br или I.
18. Способ по п.17, дополнительно включающий стадии превращения промежуточного соединения С в промежуточное соединение D и приведения во взаимодействие промежуточного соединения D с пиримидиновым соединением Н с получением промежуточного соединения Е

- 19 032693 где R^x и R^y независимо представляют собой С1-С₆-алкил, С₆-Сю-арил, С₃-С₈-циклоалкил или, в качестве альтернативы, вместе образуют С₂-С₄-алкиленовую группу, причем каждый из них необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из С₁-С₄-алкила, галогена или фенила; и где каждый X¹, X² и X³ независимо представляет собой Cl, Br или I.
19. Способ по п.17 или 18, дополнительно включающий стадии превращения исходного вещества S1 в промежуточное соединение А и превращения промежуточного соединения А в промежуточное со-

18.
20. Способ по п.19, где указанное превращение промежуточного соединения А в промежуточное соединение С, в качестве альтернативы, включает превращение промежуточного соединения А в спирто- вое промежуточное соединение В с последующим восстановлением спиртового промежуточного соеди нения В с получением промежуточного соединения С