EA032679B1 - Человеческие анти-vegfr-2/kdr-антитела - Google Patents

Человеческие анти-vegfr-2/kdr-антитела Download PDF

Info

Publication number
EA032679B1
EA032679B1 EA201500363A EA201500363A EA032679B1 EA 032679 B1 EA032679 B1 EA 032679B1 EA 201500363 A EA201500363 A EA 201500363A EA 201500363 A EA201500363 A EA 201500363A EA 032679 B1 EA032679 B1 EA 032679B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
ser
cdr
sequence
gly
Prior art date
Application number
EA201500363A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201500363A1 (ru
EA201500363A8 (ru
Inventor
Чжэньпин Чжу
Дан Лу
Жанна Полонская
Original Assignee
Кадмон Корпорейшн, Ллк
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кадмон Корпорейшн, Ллк filed Critical Кадмон Корпорейшн, Ллк
Publication of EA201500363A1 publication Critical patent/EA201500363A1/ru
Publication of EA201500363A8 publication Critical patent/EA201500363A8/ru
Publication of EA032679B1 publication Critical patent/EA032679B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

Изобретение относится к антителам, которые связываются с VEGFR-2. Антитела используются для лечения неопластических заболеваний, гиперпролиферативных процессов, ангиогенных нарушений и могут применяться в качестве монотерапии или в сочетании с другими агентами.

Description

Область техники
Изобретение относится к антителам, которые связываются с VEGFR-2. Эти антитела используются для лечения неопластических заболеваний и гиперпролиферативных процессов и могут применяться в качестве монотерапии или в сочетании с другими агентами.
Перекрестные ссылки на родственные заявки
В настоящей заявке заявляется приоритет по заявке на патент США № 61/710420, поданной 5 октября 2012 г., полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Уровень техники
Ангиогенез представляет собой весьма сложный процесс развития новых кровеносных сосудов, который включает пролиферацию, миграцию и инфильтрацию тканей капиллярными эндотелиальными клетками из ранее существовавших кровеносных сосудов, объединение клеток в тубулярные структуры, присоединение вновь сформированных тубулярных комплексов к замкнутой сосудистой системе и созревание вновь сформированных капиллярных сосудов.
Ангиогенез имеет важное значение для нормальных физиологических процессов, включая эмбриональное развитие, фолликулярный рост и заживление ран. Чрезмерный ангиогенез также приводит к неоваскуляризации при неопластических заболеваниях и при неопухолевых патологиях, таких как возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия и неоваскулярная глаукома. Доказано, что антиангиогенная терапия с применением ранибизумаба (Луцентис), направленная на сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), эффективно задерживает прогрессирование ВМД (возрастная макулярная дегенерация). Однако неоваскуляризация сложна, и похоже в ее развитии участвует множество ангиогенных механизмов. Поэтому существует необходимость разработки агентов и терапий для лечения заболеваний, ассоциированных с неоваскуляризацией.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение предлагает человеческие антитела и их фрагменты, которые связываются с VEGFR-2 (KDR). В некоторых вариантах реализации изобретения антитела блокируют связывание лигандов (например, одного или более из VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D или VEGF-E) с VEGFR-2. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела нейтрализуют активацию VEGFR-2. Антитела используются для лечения неопластических заболеваний, в том числе, например, солидных и несолидных опухолей и гиперпролиферативных процессов. Таким образом, изобретение предлагает способы нейтрализации активации KDR, способы ингибирования роста опухоли, в том числе ингибирования ангиогенеза, ассоциированного с опухолью, и способы лечения заболеваний, связанных с нарушением ангиогенеза. Настоящее изобретение предлагает наборы человеческих антител или фрагменты антител, которые связываются с рецепторами VEGR.
В одном из вариантов реализации изобретения предлагается изолированный вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательности CDR-1H, CDR-2H и CDR-3H, при этом (i) последовательность CDR-1H - это GFTFSWYX1MX2 (SEQ ID NO: 185), где X1 - V или I, Х2 - G или L, (ii) последовательность CDR-2H - это SIX1X2SGGX3TX4YADSVKG (SEQ ID NO: 186), где X1 - Y или G, Х2 - Р или S, X3 - А или F, X4 - N или D, и (iii) последовательность CDR-3H - это GNYFDY (SEQ ID NO: 3) или GLAAPRS (SEQ ID NO: 11).
В одном из вариантов реализации изобретения предлагается изолированный вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR-1L, CDR-2L или CDR-3L, при этом (i) последовательность CDR-1L - это X1GX2X3LX4X5X6X7X8S (SEQ ID NO: 187), где X1 - S, Q или Т, Х2 - D, Е или Q, X3 - K, S, N, I или А, Х4 - G или R, Х5 - D, S, Н, Е или N, X6 - Е, Y, Q, R или N, X7 - Y, F или S и Х8 - А или S, или SGSX1SNX2X3X4X5X6X7X8 (SEQ ID NO: 188), где X1 - S или Т, Х2 - I или L, X3 Е или G, X4 - Т, S или N, X5 - N или Y, X6 - Т, Р, А или Y, X7 - V или L и Х8 - N, I или Y, или X1GX2SX3DX4GX5YDYVS (SEQ ID NO: 189), где X1 - А или Т, Х2 - S или Т, X3 - Н, S или N, X4 - I или V и Х5 - S или А, (ii) последовательность CDR-2L - это XiX2X3X4X5PS (SEQ ID NO: 190), где X1 - Q, D, T, Y, S или А, Х2 - D, N, S, Т, V или V, Х3 - D, N, S, Т или Y, Х4 - Q, K, N или L и Х5 - R или L, и (iii) последовательность CDR-3L - это QX1WX2X3X4X5X6X7X8 (SEQ ID NO: 191), где X1 - А или Т, Х2 - D или G, X3 - R или нет амиинокислоты, Х4 - S, F на N, Х5 - S, Т на N, Х6 - S, Т или Р, Х7 - А, V, L, I или Y и Х8 - V или L, или AX1WDDX2LX3X4X5X6 (SEQ ID NO: 192), где X1 - A, S или Т, X2 - N или S, X3 N, I или G, X4 - G или S, X5 - P, W или V и X6 - V или L, или MYSTITX1LL (SEQ ID NO: 193), где X1 - А или Т.
В одном из вариантов реализации изобретения предлагается изолированный вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR-1L, CDR-2L или CDR-3L, при этом (i) последовательность CDR-1L - это RASX1X2X3X4X5X6X7YX8X9 (SEQ ID NO: 194), где X1 - Q, Е, или Н, Х2 - S, R или N, Х3 - V, I или L, X4 - S, R, G или N, X5 - S или N, X6 - S, N, W или D, Х7 - G или нет амиинокислоты, Х8 - L или F и Х9 - A, G, М или S, (ii) последовательность CDR-2L - это GASXiRAT (SEQ ID NO: 195), где X1 - S, T, I или N, и (iii) последовательность CDR-3L - это QQX1X2X3X4X5X6X7X8 (SEQ ID NO: 196), где X1 - F или Y, X2
- 1 032679
D, G или Y, X3 - S, T или N, X4 - S, L или W, X5 - Р или нет аминокислоты, X6 - Р или Т, Х7 - L, I, V, Р, W или Y и Х8 - Т или S.
В одном из вариантов реализации изобретения антитело представляет собой антитело, указанное в табл. 2. В одном из вариантов реализации изобретения антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий последовательность SEQ ID NO: 4. В одном из вариантов реализации изобретения антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий SEQ ID NO: 28. В другом варианте реализации настоящего изобретения антитело содержит домен легкой цепи, имеющий SEQ ID NO: 32.
В одном из вариантов реализации изобретения антитело используется в способе нейтрализации активации VEGFR2, который предполагает приведение клетки в контакт с эффективным количеством антитела.
В другом варианте реализации настоящего изобретения антитело используется в способе ингибирования ангиогенеза у субъекта, при котором предполагается введение эффективного количества антитела. В некоторых таких вариантах реализации изобретения антитело вводят с эффективным количеством антагониста, ассоциированного с rho-киназой 2 (ROCK 2).
В другом варианте реализации настоящего изобретения антитело используют в способе для лечения опухоли или подавления роста опухоли у субъекта, при котором предполагается введение эффективного количества антитела. В некоторых таких вариантах реализации изобретения антитело вводят с эффективным количеством антагониста рецептора эпидермального фактора роста (EGFR). В некоторых таких вариантах реализации изобретения антитело вводят с эффективным количеством антагониста рецептора fms-подобной тирозинкиназы (flt-1). В некоторых таких вариантах реализации изобретения антитело вводят с эффективным количеством антагониста rho-ассоциированной киназы (ROCK). В дополнительных таких вариантах реализации изобретения антитело вводят с эффективным количеством антагониста матричных металлопротеиназ.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1А-С иллюстируют последовательности вариабельных участков тяжелой цепи, легкой цепи лямбда и легкой цепи каппа, соответственно, анти-VEGFR2-антител по данному изобретению, определенных с помощью фагового дисплея у человека;
фиг. 2 - связывание антител по настоящему изобретению с VEGFR2 (вверху) и конструкцией, содержащей домены 2 и 3 в VEGFR2 (в середине). Нижняя панель иллюстрирует блокирование лигандов (VEGF165);
фиг. 3 - Mab 101 и 102 по настоящему изобретению, которые ингибируют VEGF-стимулированное фосфорилирование VEGFR2, AKT и MAPK в эндотелиальных клетках аорты свиньи (РАЕ), избыточно экспрессирующих KDR (человеческий VEGFR2);
фиг. 4 - связывание с hVEGFR2 и блокирование VEGF^-лигандов с помощью Mab 104, 105, 106 и 108. Подобные результаты были получены для Mab 103, 107, 109 и 110 в отдельном эксперименте. Такие Mab содержат домен вариабельного участка тяжелой цепи Mab 101, объединенный с доменами вариабельного участка легкой цепи;
фиг. 5 - Mab 105 и 106 по настоящему изобретению, которые ингибируют VEGF-стимулированное фосфорилирование VEGFR2, AKT и MAPK в эндотелиальных клетках аорты свиньи (РАЕ), избыточно экспрессирующих KDR (человеческий VEGFR2).
Подробное описание сущности изобретения
В одном аспекте настоящее изобретение предлагает новые антитела VEGFR2 или антигенсвязывающие фрагменты таких антител, использование которых эффективно для ингибирования VEGFR2зависимой трансдукции сигнала. Используемый в настоящем документе термин ингибирование рецептора означает уменьшение и/или инактивацию естественной киназной активности рецептора для трансдукции сигнала. Достоверным анализом для определения ингибирования VEGFR2 является снижение фосфорилирования рецептора.
Настоящее изобретение не ограничивается каким-либо конкретным механизмом ингибирования VEGFR2. Механизм действия одного антитела не обязательно тот же, что другого. Некоторые возможные механизмы включают предотвращение связывания VEGF лиганда с внеклеточным связывающим доменом VEGFR2 и предотвращение димеризации и олигомеризации рецепторов. В то же время другие механизмы не могут быть исключены.
Антитела представляют собой белки, которые распознают и связываются со специфическим антигеном или веществом. В предпочтительных вариантах реализации изобретения антитела по настоящему изобретению связывают KDR, по меньшей мере, так же сильно, как природный лиганд. Аффинность, представленная константой равновесия для диссоциации антигена с антителом (Kd), измеряет силу прочности связывания между антигенной детерминантой и участком связывания антител. Авидность является мерой прочности связывания между антителом и его антигеном. Авидность связана как с аффинностью между антигенной детерминантой и антигенсвязывающим участком антитела, так и с количеством участков связывания (валентность) на антителе. Например, одновалентное антитело (к примеру, Fab) имеет один участок связывания для конкретного эпитопа. Антитело IgG имеет два антигенсвязывающих участка. Типичные значения K (обратная константа диссоциации Kd) составляют 105 до 1011 л/моль. Считается,
- 2 032679 что любое значение K ниже чем 104 л/моль указывает на связывание, которое является неспецифическим.
Антитела по настоящему изобретению ингибируют активацию VEGFR2. Одним из показателей ингибирования VEGFR2 является сниженная тирозинкиназная активность рецептора. Ингибирование тирозинкиназы может быть определено с использованием известных методов, таких как измерение уровня аутофосфорилирования рецептора. Ингибирование VEGFR2 также может наблюдаться в результате ингибирования или регулирования процессов фосфорилирования природных или синтетических субстратов VEGFR2 и других компонентов пути сигнальной трансдукции VEGFR2. Фосфорилирование может быть обнаружено, например, с использованием антитела, специфичного для фосфотирозина в анализе ELISA или при вестерн-блоте. Некоторые исследования тирозинкиназной активности описаны в Panek et al., J. Pharmacol. Exp. Thera., 283: 1433-44 (1997) и Batley et al., Life Sci., 62: 143-50 (1998).
Также могут быть проведены исследования in vivo. Например, ингибирование рецепторной тирозинкиназы можно обнаружить при анализе митоза с использованием клеточных линий, стимулированных рецептором лиганда в присутствии и в отсутствие ингибитора. Например, клетки HUVEC (АТСС), стимулированные VEGF, могут быть использованы для анализа ингибирования VEGFR. Другой способ включает анализ ингибирования роста VEGF-экспрессирующих опухолевых клеток с использованием, например, опухолевых клеток человека, введенных мышам. См. патент США № 6365157 (Rockwell et al.).
Настоящее изобретение предлагает анти-VEGFR2-антитела, в том числе нуклеиновые кислоты, кодирующие такие антитела, и композиции, содержащие такие антитела. В одном из вариантов реализации изобретения предлагается изолированный вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательности CDR-1H, CDR-2Н и CDR-3H, при этом (i) последовательность CDR-1H - это GFTFSWYX1MX2 (SEQ ID NO: 185), где X1 - V или I, X2 - G или L, (ii) последовательность CDR-2H - это SIX1X2SGGX3TX4YADSVKG (SEQ ID NO: 186), где X1 - Y или G, X2 - Р или S, X3 - А или F, X4 - N или D, и (iii) последовательность CDR-3H - это GNYFDY (SEQ ID NO: 3) или GLAAPRS (SEQ ID NO: 11).
В одном из вариантов реализации изобретения предлагается изолированный вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR-1L, CDR-2L или CDR-3L, при этом (i) последовательность CDR-1L - это XiGX2X3LX4X5X6X7X8S (SEQ ID NO: 187), где X1 - S, Q или Т, X2 - D, Е или Q, X3 - K, S, N, I или А, Х4 - G или R, Х5 - D, S, Н, Е или N, X6 - Е, Y, Q, R или N, X7 - Y, F или S и Х8 - А или S, или SGSX|SNX2X3,X4X5X6X-X8 (SEQ ID NO: 188), где X1 - S, или Т, Х2 - I или L, X3 Е или G, X4 - Т, S или N, X5 - N или Y, X6 - Т, Р, А или Y, X7 - V или L и Х8 - N, I или Y, или XiGX2SX3DX4GX5YDYVS (SEQ ID NO: 189), где X1 - А или Т, Х2 - S или Т, X3 - Н, S или N, X4 - I или V и X5 - S или А, (ii) последовательность CDR-2L - это XiX2X3X4X5PS (SEQ ID NO: 190), где X1 - Q, D, T, Y, S или A, X2 - D, N, S, T или V, X3 - D, N, S, T или Y, X4 - Q, K, N или L и Х5 - R или L, и (iii) где последовательность CDR-3L - это QX1WX2X3X4X5X6X7X8 (SEQ ID NO: 191), где X1 - А или T, X2 - D или G, X3 - R или нет амиинокислоты, Х4 - S, F или N, X5 - S, T или N, X6 - S, Т или Р, Х7 - А, V, L, I или Y и Х8 - V или L, или AX1WDDX2LX3X4X5X6 (SEQ ID NO: 192), где X1 - A, S или Т, Х2 - N или S, X3 - N, I или G, X4 - G или S, X5 - Р, W или V и X6 - V или L, или MYSTITX1LL (SEQ ID NO: 193), где X1 А или Т.
В одном из вариантов реализации изобретения предлагается изолированный вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий CDR-1L, CDR-2L или CDR-3L, при этом (i) последовательность CDR-1L - это RASX1X2X3X4X5X6X7YX8X9 (SEQ ID NO: 194), где X1 - Q, E или H, X2 - S, R или N, X3 - V, I или L, X4 - S, R, G или N, X5 - S или N, X6 - S, N, W или D, X7 - G или нет амиинокислоты, X8 - L или F и X9 - A, G, M или S, (ii) последовательность CDR-2L - это GASX1RAT (SEQ ID NO: 195), где X1 - S, T, I или N, и (iii) последовательность CDR-3L - это QQX1X2X3X4X5X6X7X8 (SEQ ID NO: 196), где X1 - F или Y, X2 D, G или Y, X3 - S, T или N, X4 - S, L или W, X5 - P или нет аминокислоты, X6 - Р или Т, Х7 - L, I, V, Р, W или Y и X8 - Т или S.
В одном из вариантов реализации изобретения предлагается антитело, которое содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий одну, две, три, четыре, пять или шесть последовательностей вариабельного домена CDR легкой цепи и вариабельного домена тяжелой цепи, указаных выше.
Предлагаются неограничивающие примеры последовательностей VEGFR2-связывающих антител. Как описано в настоящем документе, из библиотек фагового дисплея Fab человека идентифицированы два нейтрализующих антитела, которые связываются с человеческим VEGFR2, блокируют связывание лиганда VEGFA с hVEGFR2 и подавляют фосфорилирования VEGFR2 и нисходящую сигнальную трансдукцию, стимулированную VEGFA. Табл. 1 показывает аминокислотные последовательности CDR и вариабельные домены антител. Kds Mab 101 и Mab 102 составляют около 6,6 мМ и 1,7 нМ соответственно.
- 3 032679
Таблица 1
Антитела аминокислотных последовательностей, SEQ ID NO
Mab CDRHl CDR- H2 CDRНЗ VH домен CDRL1 CDR- L2 CDR- L3 vL домен
101 1 2 3 4 5 6 7 8
102 9 10 11 12 13 14 15 16
Тяжелая цепь Mab 101 была перегруппирована с генами к лёгкой цепи (к-библиотека) и генами λ лёгкой цепи (λ-библиотека). 20 уникальных вариантов λ лёгкой цепи были найдены путем пэннинга λбиблиотеки с VEGFR2 человека и VEGFR2 мыши. 22 уникальных варианта к лёгкой цепи были найдены путем пэннинга к-библиотеки с VEGFR2 человека и VEGFR2 мыши. В табл. 2 указаны аминокислотные последовательности CDR и вариабельные домены легких цепей. Kd Mab 105, 106 и 107 увеличивались приблизительно в 10-кратном размере (0,24 нМ, 0,22 нМ и 0,12 нМ соответственно). Подобно родительскому антителу эти антитела связываются с VEGFR2, блокируют связывание VEGFA с VEGFR2 и подавляют VEGFA-стимулируванное фосфорилирование VEGFR2, AKT и MAPK. (фиг. 4).
Некоторые из антител, включая Mab, 138, 139, 140 и 146, также перекрестно реагируют с VEGFR2 мыши. Эти антитела также ингибировали VEGFA-стимулированное фосфорилирование VEFGR2 и молекул нисходящей сигнальной трансдукции, включая MAPK.
Таблица 2 _________________к и λ легкие цепи SEQ ID NO _____________
Mab Легк ая цепь CDR -LI SEQ I CDR -L2 DNO CDR -L3 vL Mab Легк ая цепь CDR -L1 SEQI CDR -L2 DNO CDR -L3 VL
103 λ 17 18 19 20 124 к 101 102 103 104
104 λ 21 22 23 24 125 к 105 106 107 108
105 λ 25 26 27 28 126 к 109 110 111 112
106 λ 29 30 31 32 127 к ИЗ 114 115 116
107 λ 33 34 35 36 128 к 117 118 119 120
108 λ 37 38 39 40 129 к 121 122 123 124
109 λ 41 42 43 44 130 к 125 126 127 128
110 λ 45 46 47 48 131 к 129 130 131 132
111 λ 49 50 51 52 132 к 133 134 135 136
112 λ 53 54 55 56 133 к 137 138 139 140
113 λ 57 58 59 60 134 к 141 142 143 144
114 λ 61 62 63 64 135 к 145 146 147 148
115”1 λ 65 66 67 68 136 к 149 15θΊ 151 152
116 λ 69 70 71 72 137 к 153 154 155 156
117 λ 73 74 75 76 138 к 157 158 159 160
118 λ 77 78 79 80 139 к 161 162 163 164
119 λ 81 82 83 84 140 к 165 166 167 168
120 λ 85 86 87 88 141 к 169 170 171 172
121 λ 89 90 91 92 142 к 173 174 175 176
122 λ 93 94 95 96 143 к 177 178 179 180
123 к 97 98 99 100 144 к 181 182 183 184
В изобретении предлагается изолированное антитело VEGFR2 и связывающие фрагменты VEGFR2, которые содержат одну, две или три CDR тяжелой цепи и одну, две или три CDR лёгкой цепи, выбранных из последовательностей, отраженных в табл. 1 и 2. При выборе более чем одной CDR из последовательностей, представленых в табл. 1 и 2, в антителе по настоящему изобретению не следует выбирать различные CDR из тех же моноклональных антител, представленных в этих таблицах. Они могут быть выбраны из двух или более вариабельных доменов антитела, представленых в таблицах. Конкретные варианты реализации изобретения включают, но не ограничиваются, следующие. В одном из вариантов реализации изобретения изолированное антитело VEGFR2 содержит одну, две или три CDR тяжелой цепи, имеющую SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3. В одном из вариантов реализации изобретения антитело содержит одну, две или три CDR легкой цепи, имеющую SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7. В другом варианте реализации изобретения антитело содержит одну, две или три CDR лёгкой цепи, имеющие последовательности, отраженные в табл. 1 или 2. Неограничивающие примеры включают вариабельный участок легкой цепи, содержащий одну или более из SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, одну или несколько SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 31 или одну или несколько SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации изо
- 4 032679 бретения антитело VEGFR2 содержит вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело VEGFR2 содержит вариабельный домен легкой цепи, содержащий SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31 или SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела содержат один из вышеупомянутых вариабельных доменов тяжёлой цепи и один из вышеупомянутых вариабельных доменов легкой цепи. В некоторых вариантах реализации изобретения антитела VEGFR2 или их связывающие фрагменты содержат одну или больше CDR или один или больше вариабельный домен с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичную последовательностям CDR и вариабельного домена, указанным в табл. 1 или 2.
Термин идентичность относится к количеству или проценту идентичных положений, распределенных между двумя аминокислотами или последовательностями нуклеиновых кислот, принимая во внимание количество пропусков. Для оптимального выравнивания двух последовательностей должна быть введена длина каждого пропуска. Термин по существу, идентичные относится к аминокислотным последовательностям, которые отличаются только консервативными заменами аминокислот, например заменой одной аминокислоты на другую того же класса (например, валина на глицин, лизина на аргинин и т. д.) или одной или более неконсервативными заменами, делецией или вставками, расположенными в положениях аминокислотной последовательности, которые не разрушают функцию белка. Предпочтительно, чтобы аминокислотная последовательность была сходной с другой аминокислотной последовательностью по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 85% и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 90%. Способы и компьютерные программы для определения сходства последовательностей являются общедоступными, в том числе, но не ограничиваясь, пакет программ GCG (Devereux et al., Nucleic Acids Research 12: 387, 1984), BLASTP, BLASTN, FASTA (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403 (1990) и программа ALIGN (версия 2.0). Для определения сходства также может быть использован известный алгоритм Смита Ватермана (Smith Waterman). Программа BLAST является общедоступной в NCBI и других источниках (BLAST Manual, Altschul, et al., NCBI NLM NIH, Bethesda, MD. 20894; BLAST 2.0 at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/. При сравнении последовательностей эти методы учитывают различные замены, делеции и другие модификации. Консервативные замены обычно включают замены в пределах следующих групп: глицин, аланин; валин, изолейцин, лейцин; аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, аспарагин, глутамин; серин, треонин; лизин, аргинин и фенилаланин, тирозин.
Антитела по настоящему изобретению также включают те, связующие характеристики которых были улучшены путем прямой мутации, способов созревания аффинности, фагового дисплея или перестановки цепей. Аффинность и специфичность могут быть изменены или улучшены путем мутации CDR и скрининга антигенсвязывающих участков, имеющих желаемые характеристики. CDR мутируют различными способами. Один из способов заключается в рандомизации отдельных остатков или комбинации остатков таким образом, что в популяции идентичных антигенсвязывающих участков все двадцать аминокислот обнаруживаются в определенной позиции. Кроме того, мутации индуцируются в диапазоне остатков CDR при ПЦР, допускающей ошибки (см., например, Hawkins et al., J. Mol. Biol., 226: 889-896 (1992)). Например, векторы фагового дисплея, содержащие гены вариабельного участка легкой цепи, могут быть размножены в мутаторных штаммах Е. coli (см., например, Low et al., J. Mol. Biol., 250: 359368 (1996)). Эти способы мутагенеза являются типовыми способами, известными специалисту в данной области техники.
Для минимизации иммуногенности антител, которые связываются с рецепторами VEGF, в настоящем изобретении предлагаются антитела, которые содержат вариабельную и постоянную последовательности доменов человека.
Антитела могут быть любого класса иммуноглобулинов или могут сочетать представителей любого класса иммуноглобулинов, например IgG, IgM, IgA, IgD или IgE и их подклассы. Для оптимизации эффекторных функций может быть выбран класс антитела (например, комплемент-зависимая цитотоксичность (КЗЦ) и антителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ)) природных антител.
Некоторые варианты реализации изобретения включают использование VEGFR2-связывающих фрагментов антител. Fv является наименьшим фрагментом, который содержит полный вариабельный домен тяжелой и легкой цепи, включая все шесть гипервариабельных петель (CDR). Не имея постоянных доменов, вариабельные домены нековалентно связаны. Тяжелые и легкие цепи могут быть соединены в одну полипептидную цепь (одноцепочечный Fv или оцБу) с помощью линкера, который позволяет VH и VL доменам ассоциировать с образованием антигенсвязывающего участка. В одном из вариантов реализации изобретения линкером является (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3. Поскольку фрагменты оцБу лишены постоянных доменов целых антител, они значительно меньше, чем целые антитела. Фрагменты оцБу также свободны от взаимодействий постоянного домена нормальной тяжелой цепи с другими биологическими молекулами, что может быть нежелательно в некоторых вариантах реализации изобретения.
Также могут быть использованы фрагменты антитела, содержащие VH, VL и в некоторых случаях CL, CH1 или другие постоянные домены. Моновалентные фрагменты антител, образованные ферментаци
- 5 032679 ей с помощью папаина, относятся к Fab и не имеют шарнирной области тяжелой цепи. Фрагменты, образованные ферментацией с помощью папаина, относятся к F(ab')2, сохраняют шарнирную область тяжелой цепии и являются двухвалентными. Такие фрагменты могут быть также получены рекомбинантным путем. В данной области техники известны многие другие подходящие антигенсвязывающие фрагменты антител, которые включают, без ограничения, диатела, триатела, однодоменные антитела и другие одновалентные и многовалентные формы.
Кроме того, в изобретении предлагаются поливалентные антигенсвязывающие белки, которые могут быть в форме, без ограничения, антител, их антигенсвязывающих фрагментов и белков, содержащих все или часть антиген-связывающих сегментов антител. Поливалентные антиген-связывающие белки могут быть моноспецифичными, биспецифичными или мультиспецифичными. Термин специфичность относится к числу различных типов антигенных детерминант, с которыми может связываться определенная молекула. Если молекула иммуноглобулина связывается только с одним типом антигенной детерминанты, такая молекула иммуноглобулина является моноспецифичной. Если молекула иммуноглобулина связывается с разними типами антигенных детерминант, такая молекула иммуноглобулина является мультиспецифичной.
Например, биспецифичное поливалентное одноцепочечное антитело позволяет распознать два различных типа эпитопов. Оба эпитопа могут быть на одном и том же антигене (например, VEGFR2). Кроме того, один эпитоп может быть на одном антигене (например, VEGFR2), а второй эпитоп - на другом ан тигене.
В одном варианте реализации изобретения поливалентное одноцепочечное антитело включает вариабельный фрагмент легкой цепи, связанный с вариабельным фрагментом тяжелой цепи (аналогичный оцБу). который дополнительно связан с помощью другого пептидного линкера по меньшей мере с одним другим антиген-связывающим доменом. Как правило, пептидный линкер состоит из пятнадцати аминокислотных остатков. В предпочтительном варианте реализации изобретения количество VL и VH доменов является эквивалентным. Например, двухвалентное одноцепочечное антитело может быть представлено следующим образом: Vl-L1-Vh-L2-Vl-L3-Vh, или Vl-L1-Vh-L2-Vh-L3-Vl, или Vh-L1-Vl-L2-Vh-L3-Vl, или Vh-L1-VL-L2-VL-L3-Vh. Поливалентные одноцепочечные антитела, которые являются трехвалентными или характеризуются большей валентностью, имеют один или несколько фрагментов антитела, присое диненных к двухвалентному одноцепочечному антителу с дополнительными пептидными линкерами. Один из примеров трехвалентного одноцепочечного антитела VL-L1-Vh-L2-VL-Li-Vh-L2-VL-Li-Vh.
Два одноцепочечных антитела могут быть объединены с образованием диатела, также известного как двухвалентный димер. Диатела имеют две цепи. Каждая цепь диатела включает домены VH, связанные с доменами VL с помощью короткого линкера, состоящего из около 5-10 аминокислотных остатков, например (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser), (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2. Такие линкеры являются достаточно короткими для предотвращения внутрицепочечного спаривания между доменами на одной и той же цепи. Поэтому происходит движущее межцепочечное спаривание между комплементарными доменами на разных цепях и воссоздается два антигенсвязывающих участка. Структура диатела является жесткой и компактной с антигенсвязывающими участками, которые располагаются на противоположных концах молекулы. Диатела могут быть моноспецифичными или биспецифичными.
Три одноцепочечных антитела могут быть объединены с образованием тритела, также известных как трехвалентные тримеры. В некоторых вариантах реализации изобретения тритела создаются с карбоксиконца домена VL или VH, непосредственно сливаясь с аминоконцом домена VH или VL, т.е. без какой-либо линкерной последовательности. Тритело имеет три головки Fv из полипептидов, расположенных циклически голова к хвосту. Возможная конформация молекулы тритела является плоской с тремя участками связывания, расположенными в плоскости под углом 120° друг от друга. Тритела могут быть моноспецифичными, биспецифичными или триспецифичными.
Подразумевается, что анти-VEGFR2-антитела по настоящему изобретению, которые используются с целью профилактики или лечения млекопитающих, могут быть введены в виде композиции, дополнительно содержащей фармацевтически приемлемый носитель. Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, например, одно или больше веществ из нижеперечисленных: вода, физиологический раствор, фосфатно-солевой буфер, декстроза, глицерин, этанол и тому подобные, а также их комбинации. Фармацевтически приемлемые носители могут дополнительно содержать незначительные количества вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, консерванты или буферы, которые увеличивают срок хранения или эффективность антител.
В способах настоящего изобретения терапевтически эффективное количество антитела по настоящему изобретению вводят млекопитающему, нуждающемуся в этом. Термин введение, используемый в настоящем документе, означает доставку антител настоящего изобретения млекопитающему любым способом, в результате которого можно достичь искомого результата. Введение может осуществляться, например, внутривенно или внутримышечно. Несмотря на то, что человеческие антитела по настоящему изобретению особенно пригодны для введения человеку, они могут быть введены также другим млекопитающим. Термин млекопитающее, используемый в настоящем документе, предусматривает обозначение, но не ограничивается, человека, лабораторных, домашних и сельскохозяйственных животных.
- 6 032679
Терапевтически эффективное количество означает такое количество антитела по настоящему изобретению, которое при введении млекопитающему обеспечивает эффективное достижение желаемого терапевтического эффекта, заключающегося в ингибировании активности киназы. Например, в зависимости от заболевания, необходимое количество антитела может составлять 0,1; 1,0; 3,0; 6,0 или 10,0 мг/кг. Для IgG с молекулярной массой 150000 г/моль (два связывающих участка), эти дозы соответствуют приблизительно 18 нМ, 180 нМ, 540 нМ, 1,08 мкМ, и 1,8 мкМ связывающих участков для объема крови 5 л.
Антитела по настоящему изобретению могут быть использованы для ингибирования роста опухоли, ангиогенеза, связанного с ростом опухоли или других патологических состояний, связанных с ангиогенезом. Опухоли, при которых может быть назначено лечение, включают первичные опухоли, метастатические опухоли и резистентные опухоли. Резистентные опухоли включают опухоли, которые не отвечают или являются устойчивыми к лечению с применением монотерапии химиотерапевтическими агентами, монотерапии антителами, монотерапии излучением или их комбинации. Резистентные опухоли также включают опухоли, которые, как представляется, подавляются лечением с применением таких агентов, но рецидивируют в течение пяти лет, иногда десяти лет или больше после прекращения терапии. Антитела являются эффективными для лечения васкуляризированных опухолей и опухолей, которые не васкуляризированы или пока еще являются в значительной степени неваскуляризированными.
Примеры солидных опухолей, которые могут быть соответствующим образом пролечены, включают карциному молочной железы, карциному легких, колоректальный рак, карциному поджелудочной железы, глиому и лимфому. Некоторые примеры таких опухолей включают эпидермоидные опухоли, плоскоклеточные опухоли, такие как опухоли головы и шеи, толстого кишечника, простаты, молочной железы, легких, в том числе мелкоклеточные и немелкоклеточные опухоли легкого, поджелудочной железы, щитовидной железы, яичников и печени. Другие примеры включают саркому Капоши, опухоли ЦНС, нейробластомы, капиллярные гемангиобластомы, менингиомы и метастазы головного мозга, меланому, желудочно-кишечные и почечные карциномы и саркомы, рабдомиосаркому, глиобластому, предпочтительно мультиформную глиобластому и лейомиосаркому. Примеры васкуляризированных раков кожи, при лечении которых являются эффективными антагонисты по настоящему изобретению, включают плоскоклеточную карциному, базально-клеточную карциному и рак кожи, которые можно лечить путем подавлени роста злокачественных кератиноцитов, таких как злокачественные кератиноциты человека.
Примеры несолидных опухолей включают лейкоз, множественную миелому и лимфому. Некоторые примеры лейкозов включают острый миелолейкоз (ОМЛ), хронический миелолейкоз (ХМЛ), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ), эритроцитарный лейкоз или моноцитарный лейкоз. Некоторые примеры лимфом включают ходжкинскую и неходжкинскую лимфому.
Антитела по настоящему изобретению также могут быть использованы для лечения или профилактики патологических состояний, характеризующихся избыточным ангиогенезом, с наличием, например, васкуляризации и/или воспаления, таких как атеросклероз, ревматоидный артрит (РА), гемангиома, ангиофиброма и псориаз. Другие неограничивающие примеры неопухолевых ангиогенных заболеваний включают ретинопатию недоношенных (ретролентальная фиброплазия), отторжение трансплантата роговицы, инсулинзависимый сахарный диабет, рассеянный склероз, миастению гравис, болезнь Крона, аутоиммунный нефрит, первичный билиарный цирроз печени, острый панкреатит, отторжение аллографа, аллергическое воспаление, контактный дерматит и замедленные аллергические реакции, воспалительные заболевания кишечника, септический шок, остеопороз, остеоартрит, дефекты когнитивных функций, вызванные воспалением нейронов, синдром Ослера-Вебера, рестеноз, грибковые, паразитарные и вирусные инфекции, в том числе цитомегаловирусную инфекцию.
Глазные болезни с избыточным ангиогенезом включают неоваскулярную глаукому, пролиферативную ретинопатию, в том числе пролиферативную диабетическую ретинопатию и макулярную дегенерацию. Настоящее изобретение предполагает способы и соединения для лечения заболеваний и расстройств со стороны органа зрения. В одном варианте реализации настоящее изобретение предполагает лечение возрастной макулярной дегенерации (ВМД), которая проявляется в сухой и влажной формах. Влажная форма ВМД вызывает потерю зрения из-за неправильного роста кровеносных сосудов (неоваскуляризации). Кровотечение, просачивание и рубцевание этих кровеносных сосудов сетчатки в конечном итоге вызывает необратимое повреждение фоторецепторов. Сухая форма вызывает атрофию ретинального пигментного эпителиального слоя, что приводит к потере зрения из-за гибели фоторецепторов (палочек и колбочек) в центральной части глаза. В другом варианте реализации настоящее изобретение предлагает способ лечения хориоидальной неоваскуляризации (ХНВ). Хориоидальная неоваскуляризация - это процесс, при котором новые кровеносные сосуды проростают в сосудистую оболочку глаза через мембрану Бруха и вторгаются в субретинальное пространство, Хориоидальная неоваскуляризация является симптомом, в том числе, возрастной макулярной дегенерации, миопии и травмы глаза. В другом варианте реализации настоящее изобретение предлагает способ лечения диабетического макулярного отека (ДМО). В другом варианте реализации настоящее изобретение предлагает способ лечения макулярного отека, который является вторичным по отношению к окклюзии ветки вены сетчатки (ОВВС) или
- 7 032679 окклюзии центральной вены сетчатки (ОЦВС). Другие заболевания, которые можно лечить согласно данному изобретению, включают, без ограничения, неоваскуляризацию радужной оболочки, увеит, неоваскулярную глаукому и ретинит недоношенных (РН). Способ лечения может быть профилактическим, т.е. для предотвращения образования новых сосудов роговицы после трансплантации или для модулирования процесса заживления раны при трабекулэктомии.
Антитела и антигенсвязывающие фрагменты по настоящему изобретению могут с успехом вводиться вместе с другими пациентам, нуждающимся в этом. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения антитело VEGFR-2 по настоящему изобретению вводят субъекту в комбинации с противоопухолевым агентом. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело VEGFR-2 по настоящему изобретению вводят субъекту в комбинации со вторым ингибитором ангиогенеза. В некоторых вариантах реализации изобретения антитело VEGFR-2 по настоящему изобретению вводят с противовоспалительным агентом или иммунодепрессантом.
Противоопухолевые агенты включают цитотоксические химиотерапевтические агенты, целевые низкомолекулекулярные агенты, биологические молекулы и излучение. Неограничивающие примеры химиотерапевтических агентов включают цисплатин, дакарбазин (DTIC), дактиномицин, иринотекан, мехлорэтамин (азотистый иприт), стрептозоцин, циклофосфамид, кармустин (BCNU), ломустин (CCNU), доксорубицин (адриамицин), даунорубицин, прокарбазин, митомицин, цитарабин, этопозид, метотрексат, 5-фторурацил, винбластин, винкристин, блеомицин, паклитаксел (таксол), доцетаксел (таксотер), алдеслейкин, аспарагиназу, бусульфан, карбоплатин, кладрибин, дакарбазин, флоксуридин, флударабин, гидроксимочевину, ифосфамид, интерферон-α, лейпролид, мегестрол, мелфалан, меркаптопурин, пликамицин, митотан, пегаспаргас, пентостатин, пипоброман, пликамицин, стрептозоцин, тамоксифен, тенипозид, тестолактон, тиогуанин, тиотепу, урацил иприт, винорелбин, хлорамбуцил, таксол и их комбинации.
Целевые низкомолекулекулярные агенты и биологические молекулы включают, без ограничения, ингибиторы компонентов пути сигнальной трансдукции, такие как модуляторы тирозинкиназ и ингибиторы рецепторных тирозинкиназ, и агенты, которые связываются с опухоль-специфичными антигенами. Неограничивающие примеры рецепторов факторов роста, участвующих в онкогенезе, включают рецепторы для тромбоцитарного фактора роста (PDGFR), инсулиноподобного фактора роста (IGFR), фактора роста нервов (NGFR) и фактора роста фибробластов (FGFR), и рецепторы семейства рецепторов фактора роста эпидермиса, в том числе EGFR (erbBl), HER2 (erbB2), ErbB3 и ErbB4.
Антагонисты EGFR включают антитела, которые связываются с EGFR или с лигандом EGFR и ингибируют связывание лиганда и/или активацию рецептора. Например, агент может блокировать образование рецепторных димеров или гетеродимера с другими представителями семейства EGFR. Лиганды для EGFR включают, например, EGF, TGF-α амфирегулин, гепарин-связывающий EGF (HB-EGF) и бетарекуллулин. Антагонист EGF может извне связываться с внеклеточным сегментом EGFR, который способен или не способен ингибировать связывание лиганда или изнутри с доменом тирозинкиназы. Антагонисты EGFR дополнительно включают агенты, которые ингибируют EGFR-зависимую сигнальную трансдукцию, например, путем ингибирования функции компонента EGFR пути сигнальной трансдукции. Примеры антагонистов EGFR, которые связываются с EGFR, включают, без ограничения, биологические молекулы, такие как антитела (и их функциональные эквиваленты), специфичные к EGFR, и низкомолекулярные ингибиторы киназы, которые действуют непосредственно на цитоплазматическом домене EGFR.
Низкомолекулярные и биологические ингибиторы включают ингибиторы рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), в том числе гефитиниб, эрлотиниб и цетуксимаб, ингибиторы HER2 (например, трастузумаб, трастузумаб эмтансин (трастузумаб-DM1, T-DM1) и пертузумаб), антитела анти-VEGF и фрагменты (например, бевацизумаб), антитела, которые ингибируют CD20 (например, ритуксимаб, ибритумомаб), анти-VEGFR-антитела (например, рамуцирумаб (IMC-1121В), IMC-1C11, и CDP791), антитела анти-PDGFR и иматиниб. Низкомолекулярные ингибиторы киназы могут быть специфическими для конкретной тирозинкиназы или быть ингибиторами двух или более киназ. Например, соединение N-(3,4дихлор-2-фторфенил)-7-({[(3aR,6aS)-2-метилоктагидроциклопента[с]пиррол-5-ил]метил}окси)-6-(метилокси)хиназолин-4-амин (также известное как XL647, EXEL-7647 и KD-019) является in vitro ингибитором нескольких рецепторных тирозинкиназ (RTK), в том числе EGFR, EphB4, KDR (VEGFR), Flt4 (VEGFR3) и ErbB2, а также ингибитором киназы SRC, и участвует в пути, который приводит к невосприимчивости опухолей к определенным TKI. В одном из вариантов реализации изобретения субъекту, нуждающемуся в лечении, вводят rho-киназный ингибитор с формулой I и KD-019.
Дазатиниб (BMS-354825; Bristol-Myers Squibb, New York) является еще одним перорально биодоступным, конкурентным за АТФ-участок ингибитором Src. Дазанатиб также воздействует на BCR-ABL (одобрен FDA для применения у пациентов с хроническим миелоидным лейкозом (ХМЛ) или острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ с положительной филадельфийской хромосомой (Ph+)), а также на с-Kit, PDGFR, C-FMS, EphA2 и SFKs. Два других пероральных тирозинкиназных ингибитора Src и BCR-ABL это бозутиниб (SKI-606) и саракатиниб (AZD0530).
- 8 032679
Поскольку VEGFR2 опосредует большинство последующих эффектов VEGF в ангиогенезе, он может подойти в качестве второго ингибитора ангиогенеза. Анти-VEGFR-2-антитела по настоящему изобретению могут вводиться вместе с антителами, которые нейтрализуют другие рецепторы, участвующие в росте опухоли или ангиогенезе.
Неограничивающие примеры VEGF-связывающих агентов включают антитела VEGF и уловители VEGF (т.е. лиганд-связывающие домены VEGF-рецепторов. Двумя примерами антител (в том числе фрагментов VEGF-связывающего антитела) являются бевацизумаб (авастин), антитело, которое связывается с VEGF-A; и ранибизумаб (Луцентис), Fab, полученный из бевацизумаба. В большинстве случаев уловитель VEGF представляет собой белок, который содержит связывающие VEGF домены одного или нескольких белков рецептора VEGF. VEGF-уловители включают, без ограничения, растворимый VEGFR-1, растворимый нейропилин 1 (NRP1), растворимый VEGFR-3 (который связывает VEGF-C и VEGF-D) и афлиберцепт (зальтрап, эйлеа; VEGF-уловители R1R2), содержащие сегменты внеклеточных доменов рецепторов VEGFR1 и VEGFR2 фактора роста эндотелия сосудов человека, слитых с постоянной областью (Fc) человеческого IgG1. Конберцепт (KH902) представляет собой слитый белок, который содержит внеклеточный домен 2 VEGFR-1 (Flt-1) и внеклеточный домен 3, 4 VEGFR-2 (KDR), слитый с Fc-сегментом человеческого IgG1. Несколько уловителей VEGF, содержащих KDR и FLT-1-Ig-подобные домены в различных комбинациях описаны в патенте США 8216575. Белки DARP (акроним для синтезированных белков с анкириновым повтором) являются генетически сконструированными миметическими белками антитела, которые, как правило, характеризуются высокой специфичностью и аффинностью при связывании с белками-мишенями. DARPin® MP0112 представляет собой ингибитор фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF) и проходит клинические испытания для лечения влажной макулодистрофии и диабетического макулярного отека.
Согласно данному изобретению экспрессия VEGF может быть целенаправленной. Например, ингибитор VEGF, PTC299 действует на VEGF посттранскрипционно, путем селективного связывания 5'- и 3'нетранслируемых областей (UTR) VEGF информационной РНК (иРНК), тем самым предотвращая трансляцию VEGF. Пегаптаниб (Макуген) является РНК-аптамером, направленым против VEGF-165.
В патологический ангиогенез вовлечен фактор роста плаценты (PlGF). PlGF структурно связан с VEGF и является также лигандом для VEGFR-1. Следовательно, уловители VEGF, содержащие внеклеточный домен VEGFR1 (см. выше) пригодны для воздействия на PLGF. Антиангиогенные агенты дополнительно включают те, которые связываются с рецептором VEGFR-1/Flt-1. В некоторых вариантах реализации изобретения антиген-связывающие белки, которые связываются с внеклеточным доменом VEGFR-1, блокируют связывание одного или обеих его лигандов: VEGF и PlGF, и/или нейтрализируют VEGF-индуцированную или PlGF-индуцированную активацию VEGFR-1.
PDGF состоит из четырех полипептидных цепей, которые образуют гомодимеры PDGF-AA, BB, CC, DD, так же как и гетеродимер PDGF-AB. Рецепторы PDGF (PDGFR)-a и -β опосредуют функции PDGF. В частности, PDGFRa связывается с PDGF-AA, -ВВ, -АВ и -СС, в то время как PDGFRβ взаимодействует с -ВВ и -DD. Неограничивающие примеры PDGF-связывающих агентов включают антитела анти-PDGF и PDGF-уловители. Агенты, которые воздействуют на PDGF, включают Fovista™ (E10030, Ophthotech), пегилированный аптамер, воздействующий на PDGF-B и АХ102 (Sennino et al., 2007, Cancer Res. 75 (15): 7359-67), ДНК-олигонуклеотидный аптамер, который связывает PDGF-B.
Агенты, которые воздействуют на рецепторы PDGF, включают рамурикумаб (IMC-3G3, антитело анти-PDGFRa человеческий IgGi), креноланиб (СР-868596), селективный ингибитор PDGFRa (IC50=0,9 нМ) и PDGFRβ (IC50=1,8 нМ) и нилотиниб (Tasigna®), ингибитор PDGFRa и PDGFRβ и других тирозинкиназ.
Ингибиторы ангиогенеза включают внутриклеточные агенты, которые блокируют сигнальную трансдукцию, опосредованную, например, VEGF, PDGF, лигандами рецепторов VEGF или PDGF, или комплимент. Внутриклеточные агенты, которые ингибируют ингибиторы ангиогенеза, включают следующие, но без ограничения. Сунитиниб (Сутент; SU11248) является панспецифичным низкомолекулярным ингибитором VEGFR1-VEGFR3, PDGFRa и PDGFRβ, рецептора фактора стволовых клеток (cKIT), Flt-3 и рецептора колониестимулирующего фактора-1 (CSF-1R). Аксинитиб (AG013736; Инлита) еще один низкомолекулярный ингибитор тирозинкиназы, который ингибирует VEGFR-1-VEGFR-3, PDGFR и cKIT. Цедираниб (AZD2171) является ингибитором VEGFR-1-VEGFR-3, PDGFRβ и cKIT. Сорафениб (Нексавар) еще один низкомолекулярный ингибитор нескольких тирозинпротеинкиназ, в том числе VEGFR, PDGFR и Raf киназ. Пазопаниб (Вотриент; (GW786034) ингибирует VEGFR-1, -2 и -3, cKIT и PDGFR. Форетиниб (GSK1363089; XL880) ингибирует VEGFR2 и МЕТ, подобно кабозантинибу (Кометрик; XL184). Понатиниб (Инклусиг; АР24534) ингибирует VEGFR, PDGFR и cKIT. Тивозаниб (AV-951) ингибирует VEGFR-1, VEGFR-2 и VEGFR-3 в пикомолярных концентрациях. СР-547632 является потенциальным ингибитором VEGFR-2 и киназ основного фактора роста фибробластов (FGF). Е-3810 ((6-(7((1-аминоциклопропил)метокси)-6-метоксихинолин-4-илокси)-№метил-1-нафтамид) ингибирует
VEGFR-1, -2 и -3 и FGFR-1 и -2 киназы в наномолярных концентрациях. Бриваниб (BMS-582664) является ингибитором VEGFR-2, который также подавляет передачу сигналов рецептора FGF. CT-322 (Аднек
- 9 032679 тин) представляет собой небольшой белок на основе домена фибронектина человека, который связывается с VEGFR2 и ингибирует активацию VEGFR2. Вандетаниб (Капрелас, Зактима; ZD6474) является ингибитором VEGFR2, EGFR и RET тирозинкиназ. Х-82 (Xcovery) является низкомолекулярным индолиноновым ингибитором передачи сигнала через рецепторы факторов роста VEGFR и PDGFR.
В некоторых вариантах реализации изобретения анти-VEGFR-антитела по настоящему изобретению вводят в комбинации с ингибиторами матриксных металлопротеиназ. Матриксные металлопротеазы (ММР), такие как ММР-14, ММР-16 и ММР-24, отщепляют компоненты внеклеточного матрикса (ВКМ) и базальных мембран, тем самым позволяя раковым клеткам проникать и инфильтрировать нижележащий стромальный матрикс. Кроме того, некоторое количество рецепторов факторов роста, молекулы клеточной адгезии, хемокины, цитокины, апоптотические лиганды и ангиогенные факторы являются субстратами ММР. Таким образом, активность ММР может вызвать активацию факторов роста, подавление апоптоза опухолевых клеток, разрушение хемокиновых градиентов в результате иммунного ответа хозяина, или высвобождение ангиогенных факторов. ММР могут ускорять рост опухоли, способствуя высвобождению факторов пролиферации клеток, таких как инсулинподобные факторы роста, которые связываются со специфическими связывающими белками (IGFBP) (Manes et al., 1997. J. Biol. Chem. 272: 25706-25712).
Повышенный уровень коллагеназы, в том числе ММР-2, обнаруживали при меланоме, раке толстой кишки, молочной железы, легких, простаты и мочевого пузыря. Как правило, эти повышенные уровни коррелируют с более высокой степенью дифференцировки опухоли и инвазивности. Уровни ММР-2 значительно возрастают в сыворотке пациентов с метастатическим раком легких. У пациентов с высоким уровнем ММР-2 снижается эффективность химиотерапии. Уровень ММР-14, которая расщепляет proMMP-2 для освобождения активной ММР-2, повышается при многочисленных видах рака и может способствовать росту опухолей, опухолевой эмболии, а также подвижности, инвазивности и метастазированию рака (например, опухоли ЦНС (например, глиомы), рака головы и шеи, ротовой полости, гортани, хондросаркомы, рака молочной железы). Уровень ММР-16 и ММР-24 также повышается при многочисленных видах рака и может способствовать росту опухолей, инвазивности и метастазированию рака (например, рака молочной железы, гортани, яичника, яичек, меланомы, опухолей головного мозга (например, астроцитомы, глиобластомы, глиомы).
В некоторых вариантах реализации изобретения анти-VEGFR-антитела по настоящему изобретению вводят в комбинации с антагонистами ММР-14, включая, но не ограничиваясь, антитела анти-MMP14, описанные в патентах США 7745587 и 8106168. В одном варианте реализации изобретения антитело является человеческим моноклональным антителом DX-2400 (Dyax Corp). Комбинированное введение с таким антителом может быть применено для лечения рака человека, в том числе, но не ограничиваясь, рака шейки матки, желудка, легких, молочной железы, толстой кишки, головы и шеи, злокачественных опухолей головного мозга и меланомы.
В другом варианте реализации изобретения антитело VEGFR2 по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с одним или несколькими соответствующими адъювантами, такими как, например, цитокины (IL-10 и IL-13, например) или другие иммунные стимуляторы. Однако следует иметь в виду, что введение терапевтически эффективным способом одного лишь антитела анти-KDR является достаточным для предотвращения, подавления или уменьшения прогрессирования опухоли.
Противовоспалительные средства и иммунодепрессанты включают стероидные препараты, такие как глюкокортикоиды (например, дексаметазон), FK-506 (такролимус), циклоспорин, финголимод, интерфероны, такие как IFN[J> или IFNy, белок, связывающий фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α), такой как инфликсимаб (Ремикейд), этанерцепт (Энбрел) или адалимумаб (Хумира) и микофеноловая кислота.
Некоторые варианты реализации изобретения включают введение антитела по настоящему изобретению и второго агента, а именно доцетаксела при солидных опухолях, в том числе раке молочной железы и мочевого тракта, раке почки; паклитаксела (солидные опухоли, аденокарцинома желудка), FOLFRI (т.е. иринотекан, фолиновая кислота, 5-фторурацил) при колоректальном раке, капецитабина (рак молочной железы), FOLFOX (т.е. оксалиплатин, лейковорин, 5-фторурацил) (рак желудка, пищевода, гастроэзофагеальный рак), эрибулина (рак молочной железы), FOLFIRI (т.е. иринотекана, левофолинат, 5фторурацил) (колоректальный рак), карбоплатина (НМРЛ), митоксантрона и преднизолона (рак простаты), OFF (оксалиплатин фолиевой кислоты, 5-фторурацил) (колоректальный рак), иринотекана и цетуксимаба (колоректальный рак) и дакарбазина (злокачественная меланома).
Антитела и антиген-связывающие фрагменты по настоящему изобретению могут быть конъюгированы с агентом, например цитотоксическим лекарственным средством, цитотоксическим ферментом или радиоизотопом. Этот способ включает в себя введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, связывающего белка отдельно или в соединении с агентом (например, цитотоксическим лекарственным средством). Например, антитела VEGFR2 или их фрагменты могут быть использованы для доставки наночастиц, содержащих агенты, такие как токсины, в VEGFR2-ассоциированью клетки или ткани, например опухоли.
Связывающие белки VEGFR2 могут быть использованы непосредственно in vivo для элиминиции антиген-экспрессирующих клеток посредством естественной комплементзависимой цитотоксичности
- 10 032679 (КЗЦ) или антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ). Связывающие белки, описанные в настоящем документе, могут включать в себя комплемент-связывающий эффекторный домен, например сегменты Fc из IgG1, -2, или -3 или соответствующие сегменты IgM, которые связывают комплемент.
Если антитело VEGFR-2 по настоящему изобретению вводят со вторым агентом, первый и второй агенты могут вводиться последовательно или одновременно. Каждый агент может быть введен в одной или нескольких дозах. Дозы могут вводиться по любой схеме, в том числе, без ограничения, два раза в день, ежедневно, еженедельно, раз в две недели и раз в месяц.
Изобретение также включает дополнительное введение. Дополнительные введение означает, что второй агент вводят пациенту в дополнение к первому агенту, который уже применяется для лечения заболевания или симптома заболевания. В некоторых вариантах реализации изобретения дополнительное введение включает введение второго агента пациенту, для которого применение первого агента было неефективным или недостаточно эффективным при лечении заболевания или симптома заболевания. В других вариантах реализации изобретения дополнительное введение включает введение второго агента пациенту, заболевание которого эффективно пролечено применением первого агента.
В одном варианте реализации настоящего изобретения антитело или его антиген-связывающий фрагмент вводят путем инъекции, низкомолекулярное средство вводят перорально. В одном таком варианте реализации изобретения антитело вводят один раз в неделю или два раза в месяц, а низкомолекулярное средство вводят ежедневно.
В одном из вариантов реализации настоящего изобретения антитело или его антиген-связывающий фрагмент вводят путем инъекции, а ингибитор ROCK2 вводят перорально. В предпочтительном варианте реализации изобретения агенты вводят один раз в день. Согласно данному изобретению если субъекту для лечения глазных заболеваний вводят ингибитор ROCK или антитело VEGFR2, для редуцирования или предотвращения образования рубцов субъекту можно вводить антагонист TGF-β. Например, в одном из вариантов реализации изобретения, если для лечения патологии органа зрения вводят ингибитор ROCK, паралельно применяют антагонист TGF-β. В другом варианте реализации изобретения, если для лечения патологии органа зрения субъекту вводят антагонист VEGF, паралельно применяют антагонист TGF-β. В другом варианте реализации изобретения, если для лечения патологии органа зрения вводят антагонист VEGF и ингибитор ROCK, паралельно применяют также антагонист TGF-β. При глазных заболеваниях, связанных с неоваскуляризацией, просачивание новых кровеносных сосудов влечет за собой образование рубцов (например, дископодобных). Изобретение включает введение антагониста TGF-β, а также антагониста VEGF и ингибитора ROCK2 субъекту для лечения неоваскуляризации при глазных заболеваниях.
Приемлемые антагонисты TGF-α включают, без ограничения, следующие: (i) антитела анти-TGF-a и их антигенсвязывающие фрагменты, такие как антитела пан-TGF-a GC-1008 (Genzyme), анти-TGF-α1 антитела метелимумаб (САТ-192) (Cambridge Antibody Technology) и антиген-связывающие фрагменты этих антител, (ii) растворимые рецепторы TGF-α или их лиганд-связывающие фрагменты, такие как Р144, синтетический пептид, охватывающий аминокислоты 730-743 из мембранного проксимального лиганд-связывающего домена рецептора TGF-α III типа (Esparza-Lopez et al., 2001, J. Biol. Chem. 276(18): 14588-96), и рецептор TGF-α II типа-Fc (IgGi) слияния (Smith, J. et al., 1999, Circulation Res. 84:1212-22), (iii) пептиды, которые связываются с рецепторами TGF-β и блокируют одну или несколько изоформ TGF-β, например пептиды из 25 аминокислот TGF-βι. TGF-[J>2 и TGF-[L. описанных Huang et al., 1997, J. Biol. Chem. 272:27155-59, которые связываются с рецепторами TGF-β, и (iv) антисмысловые агенты, которые ингибируют синтез TGF-β, например трабедерсен (Antisense Pharma GmbH), олигонуклеотид, который ингибирует синтез TGF-βΣ. Дополнительные антагонисты описаны в WO 2006/052568, WO 02/094833, WO 04/048382, WO 04/048381, WO 04/050659, WO 04/021989, WO 04/026871 и WO 04/026307.
В некоторых вариантах реализации изобретения дозу соединения или композиции вводят субъекту каждый день, через день, каждые два дня, каждый третий день, раз в неделю, два раза в неделю, три раза в неделю или раз в две недели. В других вариантах реализации изобретения две, три или четыре дозы соединения или композиции вводят субъекту каждый день, каждые два дня, каждый третий день, раз в неделю или раз в две недели. В некоторых вариантах реализации изобретения доза(дозы) соединения или композиции вводят в течение 2 дней, 3 дней, 5 дней, 7 дней, 14 дней или 21 дня. В некоторых вариантах реализации изобретения дозу соединения или композиции вводят в течение 1 месяца, 1,5 месяца, 2 месяцев, 2,5 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев или более.
Способы введения включают, но не ограничиваются, парентеральный, внутрикожный, интравитриальный, внутримышечный, интраперитонеальный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный, пероральный, сублингвальный, интраназальный, интрацеребральный, интравагинальный, трансдермальный, ректальный пути, через слизистые, путем ингаляции или местно, в частности, в уши, нос, глаза или на кожу. Способ введения определяется на усмотрение врача. В большинстве случаев введение приведет к поступлению соединения в кровоток. Для лечения глазных заболеваний предпочтительным является интраветриальное введение биологических агентов.
В конкретных вариантах реализации изобретения может быть желательным местное введение со- 11 032679 единения. Это может быть достигнуто, например, но не ограничиваясь, местными инфузиями, местной апликацией, путем инъекций, при помощи катетера или имплантата (пористого или непористого) или желатинового материала, включая мембраны, например сиаластические мембраны или волокна. В таких случаях введение может осуществляться селективно в местные ткани без существенного попадания соединения в кровоток.
Также может быть применено введение в легкие, например, путем использования ингалятора или небулайзера; в составе с аэрозольным агентом или через перфузии в фтороуглеводород или синтетический сурфактант легких. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение формируется в виде свечей, с традиционными вяжущими средствами и наполнителями, такими как триглицериды.
В другом варианте реализации изобретения соединение поставляется в везикуле, в частности липосоме (см. Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Bacterial infection, Lopez-Berestein and Fidler (eds.) Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez Berestein, ibid., pp. 317-327; см. большей частью там же).
В другом варианте реализации изобретения соединение поставляется в системе контролируемого высвобождения (см., например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). Примеры систем контролируемого высвобождения, которые могут использоваться, описаны в обзоре Langer, 1990, Science 249:1527-1533. В одном варианте реализации изобретения может быть использован насос (см. Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). В другом варианте реализации изобретения могут использоваться полимерные материалы (см. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; См. также Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105).
Описанные выше схемы введения предоставляются только в иллюстративных целях и не должны рассматриваться как ограничивающие. Средний специалист в данной области техники легко поймет, что все дозы находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Следует понимать и ожидается, что изменения принципов изобретения, описанного в настоящем документе, могут быть сделаны специалистом в данной области техники, и предполагается, что такие модификации должны быть включены в объем настоящего изобретения.
В настоящей заявке упоминаются различные публикации. Эти публикации включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей их полноте для более полного описания состояния области техники, к которой относится настоящее изобретение. Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение, и их не следует рассматривать как ограничивающие каким-либо образом объем настоящего изобретения.
Примеры
Пример 1. Идентификация антител, которые связываются с доменами 2 и 3 VEGFR и блокируют связывание лиганда.
Два антитела, которые связываются с человеческим VEGFR2 и нейтрализуют его (табл. 1), были выделены из библиотек Fab фагового дисплея человека. Антитела блокируют связывание лиганда VEGFA с hVEGFR2 (фиг. 2). Антитела также связывают эндотелиальные клетки аорты свиньи (РАЕ), экспрессируя KDR, и ингибируют VEGFA-стимулируванное фосфорилирование VEGFR2, AKT и MAPK. (фиг. 3). Табл. 1 иллюстрирует аминокислотные последовательности CDR и вариабельные домены антител. Kds Mab 101 и Mab 102 составляют около 6,6 мМ и 1,7 нМ соответственно.
Тяжелые цепи Mab 101 были переставлены с генами к лёгкой цепи (к-библиотека) и генами λ лёгкой цепи (λ-библиотека). 20 уникальных вариантов λ. лёгкой цепи были найдены путем пэннинга λбиблиотеки с VEGFR2 человека и VEGFR2 мыши. 22 уникальных варианта к лёгкой цепи были найдены путем пэннинга к-библиотеки с VEGFR2 человека и VEGFR2 мыши. Табл. 2 иллюстрирует аминокислотные последовательности CDR и вариабельные домены легких цепей. Уровни Kd Mab 105, 106 и 107 увеличивались приблизительно в 10 раз (0,24 нМ, 0,22 нМ и 0,12 нМ соответственно) (табл. 3). Эти антитела и антитело Mab101, из которого их получают, связываются с доменами 2 и 3 VEGFR и структурами, содержащими эти домены.
- 12 032679
Таблица 3 Результаты связывания антител
Антитело loVs'1 kd ioV KD нМ
107 55,8 0,934 0,167
109 30,6 3,80 1,24
104 79,2 1,13 0,165
110 44,9 3,10 0,69
108 71,9 1,75 0,244
105 24,3 0,591 0,243
101 29,8 5,93 1,81
Подобно родительскому антителу эти антитела связываются с VEGFR2, блокируют связывание VEGFA с VEGFR2 (фиг. 4) и подавляют VEGFA-стимулируванное фосфорилирование VEGFR2, AKT и МАРК (фиг. 5).
Некоторые из антител, включая Mab, 138, 139, 140 и 146, также перекрестно реагируют с VEGFR2 мыши.
Таблица 4
Перекрестная реактивность
hVEGFR2 mVEGFR2
Антитело lOVs’1 kd ioV KD нМ ioW kd ioV KD нМ
138 19,7 1,42 0,72 23,4 5,90 2,55
139 14,6 1,75 1,20 13,0 3,17 2,44
106 35,6 0,512 0,144
Mab 138, 139 и 140 ингибировали VEGFA-стимулированное фосфорилирование VEFGR2 и молекул нисходящей сигнальной трансдукции, включая MAPK.
Пример 2. Подавление роста опухоли in vivo.
6-8-недельные мыши NOD-SCID, подобранные по полу (самки), подвергались облучению 3,5 гр из источника γ-лучей137 с мощностью дозы около 0,9 гр/мин. Также мышам внутривенно инокулировали 2х107 HL60 клеток. Через три дня после инокуляции опухоли группы мышей получали лечение с применением разных доз Mab 106 два раза в неделю с документированием времени выживания.
Все мыши, не получавшие лечения, погибли в течение около двух недель. Даже с высокой опухолевой нагрузкой время выживания мышей, пролеченных с применением Mab 106 в дозе 10 мг/кг, продолжалось до 28 дней.
Пример 3. Лечение рака толстой кишки у человека.
Пациенты с диагностированным раком толстой кишки были разделены на группы и получали стандартный режим химиотерапи. Две группы пациентов получали 5 мг/кг/неделю за неделю или 15 мг/кг/неделю в течение 4 месяцев.
Пациентам контрольной группы был назначен только режим стандартной химиотерапии. Опухолевая масса периодически оценивалась с помощью магнитно-резонансной томографии (МРТ). По сравнению с контрольной группой предполагается, что у пациентов, которые получили недельное лечение антителами, наблюдается значительное замедление роста опухоли или уменьшение ее размера, увеличение задержки прогрессирования или длительного выживания по сравнению с пациентами, которые не получали лечения антителами.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Kadmon Corporation LLC
<120> Антитела VEGFR2
<130> 15487/472WO
<140> <141> быть приписанным 2013-10-07
<150> <151> 61/710,420 2012-10-05
- 13 032679 <160> 196 <170> Версия патента 3.5 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>1
Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr <210> 2 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>2
Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ala <210>3 <211> 6 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>3
Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr <210>4 <211>115 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 4
Glu Val Gln Leu
Leu Glu Ser Gly Gly
Gly Leu Val Gln Pro
Gly Gly
Ser Leu Arg Leu
Ser Cys Ala Ala Ser
Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr 30
- 14 032679
Val Met Gly Trp Val 35 Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu Glu 45 Trp Val
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ala Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 5
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 6
Gln Asp Thr Asn Arg Pro Ser
5
<210> <211> <212> <213> 7 9 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 7
Gln Ala Trp Asp Ser Asn Thr Ala Val
- 15 032679
<210> 8
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 8
Gln 1 Ser Val Leu Thr 5 Gln Asp Pro Ala Val 10 Ser Val Ala Leu Gly 15 Gln
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Leu Val Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Thr Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Glu Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Asn Thr Ala Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105
<210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 9
Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr
5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека
- 16 032679 <400>10
Gly Ser Ser Gly Gly Phe <210> 11 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>11
Gly Leu Ala Ala Pro Arg Ser
<210> 12
<211> 116
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 12
Glu 1 Val Gln Leu Leu Glu 5 Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr
20 25 30
Ile Met Leu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Gly Ser Ser Gly Gly Phe Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Ala Ala Pro Arg Ser Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115 <210>13
- 17 032679 <211> 13 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 13
Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Ile
1 5 10
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 14
Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
1 5
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 15
Ala Ser Trp Asp Asp Asn Leu Asn Gly Pro Leu
1 5 10
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 16 113 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 16
Gln 1 Ser Ala Leu Thr 5 Gln Pro Pro Ser Val 10 Ser Glu Ala Pro Gly 15 Gln
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Ile Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
55 60
- 18 032679
Gly 65 Ser Lys Ser Gly Thr 70 Ser Gly Ser Leu Ala 75 Ile Ser Gly Leu Gln 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln
100 105 110
Pro
<210> 17
<211> 13
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 17
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr Pro Val Asn
1 5 10
<210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>18
Ser Thr Asp Gln Arg Pro Ser <210>19 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 19
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
1 5
<210> 20
<211> 111
<212> PRT
- 19 032679 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 20
Gln 1 Ser Ala Leu Thr Gln 5 Pro Pro Ser Ala 10 Ser Gly Thr Pro Gly 15 Gln
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Pro Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln
65 70 75 80
Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 21
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Glu Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 22
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser
5
- 20 032679 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 23
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 24 109 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 24
Gln 1 Ser Ala Leu Thr 5 Gln Pro Pro Ser Val 10 Ser Val Ser Pro Gly 15 Gln
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Glu Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 25
Ser Gly Asp Asn Leu Arg His Glu Tyr Ser Ser
1 5 10
- 21 032679
<210> <211> <212> <213> 26 7 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 26
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> <211> <212> <213> 27 9 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 27
Gln Ala Trp Gly Ser Ser Thr Val Val
5
<210> 28
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 28
Gln 1 Tyr Glu Leu Thr 5 Gln Pro Pro Ser Val 10 Ser Val Ser Pro Gly 15 Gln
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg His Glu Tyr Ser
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Gly Ser Ser Thr Val Val
85 90 95
- 22 032679
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln Pro
100 105 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 29
Ser Gly Glu Lys Leu Gly Asp Glu Tyr Ala Ser
5 10 <210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223>
PRT
Искусственная последовательность
Библиотека антител человека <400>
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser <210>
<211>
<212>
<213>
PRT
Искусственная последовательность <220>
<223>
Библиотека антител человека <400>
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Leu Leu 1 <210>
<211>
<212>
<213>
109
PRT
Искусственная последовательность <220>
<223>
Библиотека антител человека <400>
Gln Ser Val
Leu
Thr Gln Pro Pro Ser
Val
Ser
Val
Ser
Pro
Gly Gln
Thr Ala Ser
Ile
Thr Cys Ser Gly Glu
Glu
Tyr Ala
Lys
Leu
Gly
Asp
- 23 032679
Ser Trp Tyr 35 Gln Gln Lys Pro Gly Gln 40 Ser Pro Val Leu 45 Val Ile Tyr
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Leu Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 33
Ser Gly Glu Lys Leu Gly Asp Glu Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400>34
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser <210>35 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400> 35
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Leu Leu
5
- 24 032679 <210> 36 <211> 109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400> 36
Gln 1 Ser Glu Leu Thr 5 Gln Pro Pro Ser Val 10 Ser Val Ser Pro Gly 15 Gln
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Glu Lys Leu Gly Asp Glu Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Leu Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 37
Thr Gly Asp Lys Leu Gly Asp Gln Phe Ala Ser
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 38 7 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 38
Gln Asn Asp Lys Arg Pro Ser
- 25 032679 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>39
Gln Ala Trp Asp Phe Ser Ser Ala Leu
<210> 40
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 40
Gln Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val 10 Ser Val Ser Pro Gly 15 Gln
1 5
Thr Ala Thr Ile Thr Cys Thr Gly Asp Lys Leu Gly Asp Gln Phe Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ser Pro Ile Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Gln Asn Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asp Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala His Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Phe Ser Ser Ala Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105
<210>41 <211> 11 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека
- 26 032679 <400>41
Ser Gly Gln Ile Leu Gly Glu Arg Ser Ala Ser
510
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 42
Gln Ser Ser Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> <211> <212> <213> 43 8 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 43
Gln Thr Trp Asp Thr Ser Ile Leu
1 5
<210>44 <211> 108 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 44
Gln 1 Ser Ala Leu Thr 5 Gln Pro Pro Ser Val 10 Ser Val Ser Pro Gly 15 His
Thr Ala Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gln Ile Leu Gly Glu Arg Ser Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Leu Tyr
35 40 45
Gln Ser Ser Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ile Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ser Ile
65 70 75 80
- 27 032679
Asp Glu Ala Asp
Tyr Tyr Cys Gln Thr Trp Asp
8590
Thr Ser Ile Leu Phe
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro 105
100
<210> 45
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 45
Ser Gly Asp Ala Leu Gly Asn Asn Tyr Ala Ser
510 <210>46 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 46
Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser
5
<210> 47
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 47
Gln Thr Trp Asp Arg Asn Thr Pro Tyr Val
1 5 10
<210> 48
<211> 110
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 48
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
- 28 032679
Thr Ala Ile Ile 20 Thr Cys Ser Gly Asp 25 Ala Leu Gly Asn Asn 30 Tyr Ala
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Glu Thr Gln Thr Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Trp Asp Arg Asn Thr Pro Tyr
85 90 95
Val Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 49
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn Thr Leu Asn
1 5 10
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 50
Ala Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 51
Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ile Gly Pro Val
- 29 032679
<210> 52
<211> 113
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 52
Gln 1 Ser Ala Leu Thr Gln 5 Pro Pro Ser Val 10 Ser Gly Thr Pro Gly 15 Gln
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Thr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ile Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro
<210> 53
<211> 13
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 53
Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Ile
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 54 7 PRT Искусственная последовательность
- 30 032679 <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400>54
Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
<210> <211> <212> <213> 55 11 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> из библиотеки Fab человека
<400> 55
Ala Ser Trp Asp Asp Asn Leu Asn Gly Pro Leu
510
<210> 56
<211> 113
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 56
Gln 1 Tyr Glu Leu Thr Gln 5 Pro Pro Ser Val 10 Ser Glu Ala Pro Gly 15 Gln
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Ile Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln
100 105 110
Pro
- 31 032679
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 57 13 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 57
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ser Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 58 7 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 58
Thr Asn Ser Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 59
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 59
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val
1 5 10
<210> 60 <211> 113 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 60
Gln 1 Ser Glu Leu Thr Gln 5 Pro Pro Ser Ala 10 Ser Gly Thr Pro Gly 15 Gln
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
- 32 032679
Ile Tyr 50 Thr Asn Ser Gln Arg 55 Pro Ser Gly Val Pro 60 Asp Arg Phe Ser
Gly Leu Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln
100 105 110
Pro
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 61
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Ser Asn Tyr Val Tyr
1 5 10
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 62
Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 63
Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 64
- 33 032679 <211> 113 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 64
Gln 1 Ser Val Leu Thr Gln 5 Pro Pro Ser Ala 10 Ser Gly Thr Pro Gly 15 Gln
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Glu Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Gln
100 105 110
Pro
<210> 65
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 65
Thr Gly Ser Ser Asn Asp Ile Gly Ser Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека
- 34 032679 <400>66
Asp Val Asn Asn Arg Pro Ser
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 67
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Ala Leu Leu
<210> 68
<211> 112
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 68
Gln 1 Ser Glu Leu Thr 5 Gln Pro Asp Ser Val 10 Ser Gly Ser Pro Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Asn Asp Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Arg Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Ala Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Phe Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Ala Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
<210>69 <211>14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
- 35 032679 <223> Библиотека антител человека <400> 69
Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ser Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 70
Asp Val Asn Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 71
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu
1 5
<210> 72 <211> 112 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 72
Gln 1 Ser Ala Leu Thr Gln 5 Pro Asp Ser Val 10 Ser Gly Ser Pro Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Tyr His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
- 36 032679
70 7580
Gln Pro Asp Asp Glu 85 Ala Asp Tyr Phe Cys 90 Met Ser Tyr Thr Ile 95 Thr
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 73
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 73
Ala Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210>74 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>74
Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser <210>75 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>75
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu <210>76 <211> 112 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 76
- 37 032679
Gln 1 Ser Ala Leu Thr 5 Gln Pro Ala Ser Met 10 Ser Gly Ser Arg Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ala Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Lys His Leu Pro Gly Asn Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 77
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 77
Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 78
Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser
5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 79 9 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 79
- 38 032679
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu
5
<210> 80
<211> 112
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 80
Gln 1 Ser Val Leu Thr 5 Gln Pro Asp Ser Val 10 Ser Gly Ser Pro Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Lys His Leu Pro Gly Asn Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 81
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 81
Thr Gly Ser Ser His . Asp Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 82 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека
- 39 032679 <400>82
Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 83 9 PRT Искусственная последовательность из библиотеки Fab человека
<400> 83
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu
<210> 84
<211> 112
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 84
Gln 1 Ser Val Leu Thr 5 Gln Pro Ala Ser Val 10 Ser Gly Ser Pro Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Lys His Leu Pro Gly Asn Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210>85 <211>14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность
- 40 032679 <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400> 85
Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser 1 5 10
<210> <211> <212> <213> 86 7 PRT Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 86
Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> <211> <212> <213> 87 9 PRT Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 87
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu
1 5
<210> 88 <211> 112 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400> 88
Gln 1 Ser Val Leu Thr Gln 5 Pro Tyr Ser Val 10 Ser Gly Ser Pro Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Lys His Leu Pro Gly Asn Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
- 41 032679
Ser 65 Gly Ser Lys Ser Gly 70 Asn Thr Ala Ser Leu 75 Thr Ile Ser Gly Leu 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 89
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 89
Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 90
Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 91
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu
1 5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 92 112 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 92
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Asp Ser Val
Ser Gly Ser Pro Gly Gln
- 42 032679
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Lys His Leu Pro Gly Asn Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 93
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека
<400> 93
Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr Asp Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400>94
Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser <210>95 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> из библиотеки Fab человека <400> 95
- 43 032679
Met Ser Tyr Thr Ile Thr Thr Leu Leu
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 96 112 PRT Искусственная последовательность из библиотеки Fab человека
<400> 96
Gln 1 Ser Glu Leu Thr 5 Gln Pro Asp Ser Val 10 Ser Gly Ser Pro Gly 15 Gln
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser His Asp Ile Gly Ala Tyr
20 25 30
Asp Tyr Val Ser Trp Tyr Lys His Leu Pro Gly Asn Ala Pro Lys Phe
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Met Ser Tyr Thr Ile Thr
85 90 95
Thr Leu Leu Phe Gly Thr Gly Thr Arg Val Thr Val Leu Ser Gln Pro
100 105 110
<210> 97
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 97
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210>98 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 98
- 44 032679
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
5
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 99
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
5
<210> 100
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 100
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 101 <211> 12 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека
- 45 032679 <400> 101
Arg Ala Ser Glu Arg Ile Ser Ser Asn Tyr Leu Met
1 5 10
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 102
Gly Ala Ser Ile Arg Ala Thr
1 5
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 103
Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Leu Thr
1 5
<210> 104 <211> 109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 104
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Val Leu Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Arg Ile Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Met Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu
65 70 75 80
- 46 032679
Pro Glu Asp
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
90
Tyr Tyr Ser Ser Pro
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Met Lys Arg
100
105
<210> 105
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 105
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 106 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 106
Gly Ala Ser Ser Arg Ser Thr
5 <210> 107 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 107
Gln Gln Phe Asp Thr Leu Pro Ile Thr
5 <210> 108 <211> 109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Asn
20 25 30
- 47 032679
Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Arg 40 Pro Gly Gln Ala Pro 45 Arg Leu Leu
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ser Thr Gly Thr Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Thr Leu Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 109
<211> 13
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 109
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Ser Ser Gly Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 110 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>110
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr <210> 111 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 111
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Thr Ile Thr
5 <210> 112
- 48 032679 <211> 110 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>112
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ala Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Arg Leu
65 70 75 80
Glu Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser
85 90 95
Thr Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 113
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 113
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Gly
1 5 10
<210>114 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 114
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
5
- 49 032679 <210> 115 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 115
Gln Gln Phe Asp Asn Leu Pro Val Thr
5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 116 109 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 116
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Asn Leu Pro
85 90 95
Val Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Met Lys Arg
100 105
<210> 117
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 117
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
- 50 032679 <210> 118 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>118
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 119 9 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 119
Gln Gln Phe Asp Thr Ser Pro Leu Thr
<210> 120
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 120
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Thr Ser Pro
85 90 95
- 51 032679
Leu Thr Ile Gly Gly Gly Thr Arg Val Asp Ile Lys Arg
100 105 <210> 121 <211> 12 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>121
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
510 <210> 122 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>122
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr <210>123 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>123
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Leu Ser <210>124 <211>109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 124
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
- 52 032679
Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys 40 Pro Gly Gln Ala Pro 45 Arg Leu Leu
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 125
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 125
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Trp Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 126 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>126
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr <210>127 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>127
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Leu Thr <210> 128 <211>109
- 53 032679 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>128
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Trp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Ile Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 129
Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210>130 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 130
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
5
- 54 032679 <210> 131 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 131
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 132 109 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 132
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 133
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 133
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
- 55 032679 <210> 134 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>134
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr <210>135 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 135
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
5
<210> 136
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 136
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
- 56 032679
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100
105
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 137 12 PRT Искусственная последовательность
from Библиотека антител человека
<400> 137
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 138 7 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> from Библиотека антител человека
<400> 138
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> <211> <212> <213> 139 9 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> from Библиотека антител человека
<400> 139
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 140 <211> 109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> from Библиотека антител человека <400> 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
5 10 15
Glu Arg Ala Thr
Leu Ser Cys Arg Ala
Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
- 57 032679
Tyr Leu Ala Trp 35 Tyr Gln Gln Lys 40 Pro Gly Arg Ala Pro 45 Arg Leu Leu
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 141
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 141
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 142 7 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 142
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
5 <210> 143 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>143
Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro Pro Tyr Thr 1 510 <210>144 <211> 110
- 58 032679 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 144
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Asn Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 145
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 145
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 146 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>146
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr <210>147
- 59 032679
<211> <212> <213> <220> <223> 10 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 147
Gln Gln Phe Asp Asn Trp Pro Pro Trp Thr
5 10
<210> 148
<211> 110
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 148
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Asn Trp Pro
85 90 95
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 149
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 149
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Phe Gly
1 5 10
- 60 032679
<210> <211> <212> <213> 150 7 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 150
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> <211> <212> <213> 151 9 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 151
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Leu Thr
5
<210> 152
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 152
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Gly Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Phe Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
- 61 032679
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 <210> 153 <211> 12 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> from Библиотека антител человека <400>153
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
510 <210>154 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>154
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr <210>155 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>155
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Leu Ser <210>156 <211>109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 156
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
- 62 032679
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 157
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 157
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 158 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>158
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr <210>159 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 159
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Leu Ser
5
<210> <211> <212> <213> 160 109 PRT Искусственная последовательность
- 63 032679 <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 160
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Asp Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Val Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Thr
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 161
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 161
Arg Ala Ser Gln Ser Leu Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 162 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>162
Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr <210>163 <211>9
- 64 032679
<212> <213> PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 163
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 164 109 PRT Искусственная последовательность Библиотека антител человека
<400> 164
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 165
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 165
Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 166
- 65 032679 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 166
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> <211> <212> <213> 167 9 PRT Искусственная последовательность
<220> <223> Библиотека антител человека
<400> 167
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 168
<211> 109
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 168
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ala Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
- 66 032679 <210> 169 <211> 12 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> from Библиотека антител человека <400>169
Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp Tyr Leu Ala
510
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 170 7 PRT Искусственная последовательность
from Библиотека антител человека
<400> 170
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 171 9 PRT Искусственная последовательность
from Библиотека антител человека
<400> 171
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210>172 <211>109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> from Библиотека антител человека <400> 172
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Ala Thr 10 Leu Ser Val Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
- 67 032679
Met Tyr 50 Gly Ala Ser Ser Arg 55 Ala Thr Gly Phe Pro 60 Asp Arg Phe Ser
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 173
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 173
Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 174 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>174
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr <210>175 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400>175
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr <210>176 <211>109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека
- 68 032679 <400> 176
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Gly Thr 10 Leu Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 177
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Библиотека антител человека
<400> 177
Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 178 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Библиотека антител человека <400> 178
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
5
<210> <211> <212> <213> 179 9 PRT Искусственная последовательность
<220>
- 69 032679 <223> Библиотека антител человека <400>179
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr
<210> <211> <212> <213> 180 111 PRT Искусственная последовательность
<220>
<223> из библиотеки Fab человека <400> 180
Ile 1 Ala Asp Ile Gln 5 Met Thr Gln Ser Pro 10 Asp Thr Leu Ser Leu 15 Ser
Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Ser Val Ser
20 25 30
Ser Asp Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg
35 40 45
Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg
65 70 75 80
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser
85 90 95
Ser Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 181
<211> 12
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> from Библиотека антител человека
<400> 181
Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 182 <211>7 <212> PRT
- 70 032679 <213> Искусственная последовательность <220>
<223> from Библиотека антител человека <400>182
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 183 9 PRT Искусственная последовательность from Библиотека антител человека
<400> 183
Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro Pro Thr <210>184 <211>109 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> from Библиотека антител человека <400> 184
Asp 1 Ile Gln Met Thr 5 Gln Ser Pro Asp Thr Leu 10 Ser Leu Ser Pro 15 Gly
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser His Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Ser Ser Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Ile Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 185
- 71 032679 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> Вариант <222> (8)..(8)
<223> остаток- это V или I
<220>
<221> Вариант
<222> (10)..(10)
<223> остаток- это G или L
<400> 185
Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr Xaa Met Xaa
5 10
<210> <211> <212> <213> <220> 186 17 PRT Искусственная последовательность
<220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (3)..(3)
<223> остаток - это Y или G
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (4)..(4)
<223> остаток - это P или S
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (8)..(8)
<223> остаток - это A или F
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (10)..(10) 1
<223> остаток - это N или D
<400> 186
Ser Ile Xaa Xaa Ser Gly Gly Xaa Thr Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys
5 10 15
Gly <210> 187
- 72 032679 <211> 11 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (1)..(1) <223> остаток - это S Q или T <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (3)..(3) <223> остаток - это D E или Q <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (4)..(4) <223> остаток это K S N I или A <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (6)..(6) <223> остаток это G или R <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (7)..(7) <223> остаток это D S H E или N <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (8)..(8) <223> остаток - это E Y Q R или N <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (9)..(9) <223> остаток это Y F или S <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (10)..(10) <223> остаток - это A или S <400> 187
Xaa Gly Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser
5 10 <210> 188 <211> 13 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус
- 73 032679
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (4)..(4)
<223> остаток - это S или T
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (7)..(7)
<223> остаток - это I или L
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (8)..(8)
<223> остаток - это E или G
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (9)..(9)
<223> остаток - это T S или N
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (10)..(10)
<223> остаток - это N или Y
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (11)..(11)
<223> остаток - это T P A или Y
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (12)..(12)
<223> остаток - это V или L
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (13)..(13)
<223> остаток - это N I или Y
<400> 188
Ser Gly Ser Xaa Ser Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
510 <210>189 <211>14 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (1)..(1) <223> остаток - это A или T <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (3)..(3)
- 74 032679
<223> остаток - это S или T
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (5)..(5)
<223> остаток - это H S или N
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (7)..(7)
<223> остаток - это I или V
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (9)..(9)
<223> остаток - это S или A
<400> 189
Xaa Gly Xaa Ser Xaa Asp Xaa Gly Xaa Tyr Asp Tyr Val Ser
510 <210>190 <211>7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (1)..(1) <223> остаток это Q D T Y S или A <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (2)..(2) <223> остаток <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (3)..(3)
<223> остаток - это D N S T или Y
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (4)..(4)
<223> остаток - это Q K N или L
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (5)..(5)
<223> остаток - это R или L
<400> 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Ser
- 75 032679 <210> 191 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (2)..(2)
<223> остаток - это A или T
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (4)..(4)
<223> остаток - это D или G
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (5)..(5)
<223> остаток - это R или нет аминокислоты
<220>
<221> ВАРИАНТ <222> (6)..(6)
<223> остаток - это S F или N
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (7)..(7)
<223> остаток - это S T или N
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (8)..(8)
<223> остаток - это S T или P
<220>
<221> ВАРИАНТ <222> (9)..(9)
<223> остаток - это A V L I или Y
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (10)..(10)
<223> остаток - это V или L
<400> 191
Gln Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa
5
Xaa Xaa
Xaa <210> 192 <211> 11 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус
- 76 032679 <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (2)..(2)
<223> остаток - это V или L A S или T
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (6)..(6)
<223> остаток - это V или L N или
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (8)..(8)
<223> остаток - это V или L N I или G
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (9)..(9)
<223> остаток - это G или S
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (10)..(10)
<223> остаток - это P W или V
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (11)..(11)
<223> остаток - это V или L
<400>192
Ala Xaa Trp Asp Asp Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa
510 <210>193 <211>9 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (7)..(7) <223> остаток - это A или T <400> 193
Met Tyr Ser Thr Ile Thr Xaa Leu Leu
5
<210> <211> <212> <213> 194 13 PRT Искусственная последовательность
<220>
- 77 032679 <223>
консенсус <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (4)..(4) остаток это или <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (5)..(5) остаток это или <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (6)..(6) остаток это или <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (7)..(7) остаток это или <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (8)..(8) остаток это или <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (9)..(9) остаток это или <220>
<221>
<222>
<223>
<220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (10)..(10) остаток ВАРИАНТ (12)..(12) остаток a^s G или неи аминокислоты это L или <220>
<221>
<222>
<223>
ВАРИАНТ (13)..(13) остаток это A или <400>
194
Arg Ala Ser Xaa Xaa Xaa
Xaa
Xaa
Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa <210> 195 <211> 7 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
- 78 032679 <221> ВАРИАНТ <222> (4)..(4) <223> остаток это S T I или N <400> 195
Gly Ala Ser Xaa Arg Ala Thr
5 <210> 196 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>
<223> консенсус <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (3)..(3) <223> остаток это F или Y <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (4)..(4) <223> остаток это D G или Y <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (5)..(5) <223> остаток это S T или N <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (6)..(6) <223> остаток это S L или W <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (7)..(7) <223> остаток <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (8)..(8) <223> остаток это P или нет аминокислоты это P или T <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (9)..(9) <223> остаток это L I V P W или Y <220>
<221> ВАРИАНТ <222> (10)..(10) <223> остаток - это T или S <400> 196
Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

Claims (20)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Изолированное антитело или его фрагмент, который связывается с человеческим VEGFR2, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи, которая имеет последовательности CDR-1H, CDR-2H и CDR-3H, и вариабельный домен легкой цепи, которая имеет последовательности CDR-1L, CDR-2L и CDR-3L при этом (i) последовательность CDR-1H - GFTFSWYVMG, (ii) последовательность CDR-2H - SIYPSGGATNYADSVKG, (iii) последовательность CDR-3H - GNYFDY (SEQ ID NO: 3) и (iv) последовательности CDR-1L, CDR-2L и CDR-3L выбраны из группы, состоящей из
    SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7;
    SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23;
    SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27;
    SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 31;
    SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 35;
    SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38 и SEQ ID NO: 39;
    SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 и SEQ ID NO: 43;
    SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47;
    SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158 и SEQ ID NO: 159 и
    SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 163.
  2. 2. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит CDR-1L с последовательностью SEQ ID NO: 5, CDR-2L с последовательностью SEQ ID NO: 6 и CDR-3L с последовательностью SEQ ID NO: 7.
  3. 3. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4 и последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 4.
  4. 4. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит вариабельный домен легкой цепи с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8 и последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 8.
  5. 5. Изолированное антитело или его фрагмент, который связывается с человеческим VEGFR2, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи, которая имеет последовательности CDR-1H, CDR-2H и CDR-3H, и вариабельный домен легкой цепи, которая имеет последовательности CDR-1L, CDR-2L и CDR-3L при этом (i) последовательность CDR-1H - GFTFSWYIML, (ii) последовательность CDR-2H - SIGSSGGFTDYADSVKG, (iii) последовательность CDR-3H - GLAAPRS (SEQ ID NO: 3) и (iv) последовательности CDR-1L, CDR-2L и CDR-3L выбраны из группы, состоящей из
    SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7;
    SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 23;
    SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27;
    SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30 и SEQ ID NO: 31;
    SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34 и SEQ ID NO: 35;
    SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38 и SEQ ID NO: 39;
    SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42 и SEQ ID NO: 43;
    SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47;
    SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 158 и SEQ ID NO: 159 и
    SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 162 и SEQ ID NO: 163.
  6. 6. Изолированное антитело или фрагмент его по п.5, отличающееся тем, что антитело содержит CDR-1L с последовательностью SEQ ID NO: 13, CDR-2L с последовательностью SEQ ID NO: 14 и CDR3L с последовательностью SEQ ID NO: 15.
  7. 7. Изолированное антитело или фрагмент его по п.5, отличающееся тем, что антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12 и последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 12.
  8. 8. Антитело по п.5, отличающееся тем, что антитело содержит вариабельный домен легкой цепи с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16 и последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 16.
  9. 9. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит CDR-1L с последовательностью SEQ ID NO: 25, CDR-2L с последовательностью SEQ ID NO: 26 и CDR-3L с последовательностью SEQ ID NO: 27.
  10. 10. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит вариабельный домен легкой цепи с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28 и последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 28.
    - 80 032679
  11. 11. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит CDR-1L с последовательностью SEQ ID NO: 29, CDR-2L с последовательностью SEQ ID NO: 30 и CDR-3L с последовательностью SEQ ID NO: 31.
  12. 12. Антитело по п.1, отличающееся тем, что антитело содержит вариабельный домен легкой цепи с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 32 и последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 32.
  13. 13. Антитело по любому из пп.1-12, отличающееся тем, что антитело блокирует связывание VEGF с hVEGFR2.
  14. 14. Способ нейтрализации активации VEGFR2, включающий приведение клетки в контакт с эффективным количеством антитела по любому из пп.1-12.
  15. 15. Способ ингибирования ангиогенеза, включающий введение эффективного количества антитела по любому из пп.1-12.
  16. 16. Способ замедления роста опухоли, включающий введение эффективного количества антитела по любому из пп.1-12.
  17. 17. Способ по п.16, дополнительно включающий введение эффективного количества антагониста рецептора эпидермального фактора роста (EGFR).
  18. 18. Способ по п.16, дополнительно включающий введение эффективного количества антагониста рецептора fms-подобной тирозинкиназы (flt-1).
  19. 19. Способ по п.16, дополнительно включающий введение эффективного количества антагониста rho-ассоциированной киназы 2 (ROCK2).
  20. 20. Способ по п.16, дополнительно включающий введение эффективного количества антагониста матриксной металлопротеиназы.
EA201500363A 2012-10-05 2013-10-07 Человеческие анти-vegfr-2/kdr-антитела EA032679B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261710420P 2012-10-05 2012-10-05
PCT/US2013/063754 WO2014055998A1 (en) 2012-10-05 2013-10-07 Human anti-vegfr-2/kdr antibodies

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201500363A1 EA201500363A1 (ru) 2015-11-30
EA201500363A8 EA201500363A8 (ru) 2016-04-29
EA032679B1 true EA032679B1 (ru) 2019-07-31

Family

ID=50435514

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201500363A EA032679B1 (ru) 2012-10-05 2013-10-07 Человеческие анти-vegfr-2/kdr-антитела
EA201990403A EA039595B1 (ru) 2012-10-05 2013-10-07 Нуклеиновые кислоты, кодирующие человеческие анти-vegfr-2/kdr-антитела

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201990403A EA039595B1 (ru) 2012-10-05 2013-10-07 Нуклеиновые кислоты, кодирующие человеческие анти-vegfr-2/kdr-антитела

Country Status (9)

Country Link
US (2) US10023640B2 (ru)
EP (2) EP3685855B1 (ru)
JP (1) JP6449772B2 (ru)
CN (3) CN105007939B (ru)
CA (1) CA2926386C (ru)
EA (2) EA032679B1 (ru)
ES (2) ES2781974T3 (ru)
PL (1) PL3685855T3 (ru)
WO (1) WO2014055998A1 (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2995344C (en) * 2014-10-07 2021-05-04 Kadmon Corporation, Llc Human anti-vegfr-2/kdr antibodies
ES2882276T3 (es) * 2015-04-14 2021-12-01 Academia Sinica Anticuerpo humano anti-VEGFR2 para terapia antiangiogénica y terapia dirigida contra el cáncer
EP3316908A4 (en) * 2015-06-30 2019-03-06 Henlius Biotech Co., Ltd. VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR ANTI-RECEPTOR 2 (VEGFR2) ANTIBODY
KR101896882B1 (ko) 2015-11-30 2018-09-11 앱클론(주) Vegfr2에 특이적으로 결합하는 항체
US20170233480A1 (en) * 2015-12-31 2017-08-17 Development Center For Biotechnology Anti-vegfr antibody and uses thereof
CN110840893A (zh) 2018-12-13 2020-02-28 安罗格制药有限责任公司 含克莱拉尼的药物组合物及其用途
CN113480653B (zh) * 2021-08-06 2022-05-06 朱有建 一种含有γδT细胞的药物组合物在治疗癌症中的用途
KR20230109853A (ko) * 2022-01-14 2023-07-21 주식회사 파멥신 항-vegfr2(kdr) 개량 항체를 포함하는 융합단백질 및 이의 용도

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004023973A2 (en) * 2002-09-12 2004-03-25 Incyte Corporation Molecules for diagnostics and therapeutics
US7329737B2 (en) * 2004-08-03 2008-02-12 Dyax Corp. Antibodies that bind hK-1
WO2010045315A1 (en) * 2008-10-14 2010-04-22 Dyax Corp. Use of igf-ii/igf-iie binding for the treatment and prevention of systemic sclerosis associated pulmonary fibrosis
US7790862B2 (en) * 2006-06-13 2010-09-07 Zymogenetics, Inc. IL-17 and IL-23 antagonists and methods of using the same
US7910098B2 (en) * 2007-11-30 2011-03-22 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
WO2012004631A2 (en) * 2010-07-07 2012-01-12 Tubitak Recombinant antibody structures binding to and blocking the activity of vascular endothelial growth factor 2 (vegfr- 2 /kdr)
US8114968B2 (en) * 2008-03-03 2012-02-14 Dyax Corp. Metalloproteinase-12 specific monoclonal antibody
US8128932B2 (en) * 2009-08-17 2012-03-06 Shanghai Aosaiersi Biotech Co., Ltd. Anti-VEGFR monoclonal antibody, method of making and uses thereof
US20120202793A1 (en) * 2009-03-09 2012-08-09 Paul Sweetnam Rho kinase inhibitors
US20120213841A1 (en) * 2008-11-13 2012-08-23 Peyman Gholam A Ophthalmic drug delivery system and method

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5861499A (en) 1994-02-10 1999-01-19 Imclone Systems Incorporated Nucleic acid molecules encoding the variable or hypervariable region of a monoclonal antibody that binds to an extracellular domain
UA76461C2 (en) 2001-05-24 2006-08-15 Lilly Co Eli Pyrrazole derivatives as pharmaceutical agents, use thereof, a pharmaceutical composition on their basis
ATE475431T1 (de) * 2002-03-04 2010-08-15 Imclone Llc Kdr-spezifische humane antikörper und deren anwendung
UA80296C2 (en) 2002-09-06 2007-09-10 Biogen Inc Imidazolopyridines and methods of making and using the same
WO2004026871A1 (en) 2002-09-17 2004-04-01 Eli Lilly And Company Novel pyrazolopyridine derivatves as pharmaceutical agents
PL375974A1 (en) 2002-09-18 2005-12-12 Pfizer Products Inc. Triazole derivatives as transforming growth factor (tgf) inhibitors
AU2003291642A1 (en) 2002-11-22 2004-06-18 Eli Lilly And Company Pyrazoloazepine compounds as pharmaceutical agents
UA80571C2 (en) 2002-11-22 2007-10-10 Lilly Co Eli Quinolinyl-pyrrolopyrazoles
US7405299B2 (en) 2002-11-27 2008-07-29 Eli Lilly And Company Compounds as pharmaceutical agents
US7511056B2 (en) 2004-11-10 2009-03-31 Eli Lilly And Company TGF-β inhibitors
JP2009522302A (ja) 2005-12-30 2009-06-11 ダイアックス コーポレーション マトリックスメタロプロテイナーゼ結合タンパク質
US8216575B2 (en) 2006-03-31 2012-07-10 Chengdu Kanghong Biotechnologies Co., Ltd. Inhibition of neovascularization with a soluble chimeric protein comprising VEGF FLT-1 and KDR domains
CN101863980B (zh) * 2009-12-31 2013-05-08 中国药科大学 全人源抗血管内皮细胞生长因子受体2单链抗体

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004023973A2 (en) * 2002-09-12 2004-03-25 Incyte Corporation Molecules for diagnostics and therapeutics
US7329737B2 (en) * 2004-08-03 2008-02-12 Dyax Corp. Antibodies that bind hK-1
US7790862B2 (en) * 2006-06-13 2010-09-07 Zymogenetics, Inc. IL-17 and IL-23 antagonists and methods of using the same
US7910098B2 (en) * 2007-11-30 2011-03-22 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US8114968B2 (en) * 2008-03-03 2012-02-14 Dyax Corp. Metalloproteinase-12 specific monoclonal antibody
WO2010045315A1 (en) * 2008-10-14 2010-04-22 Dyax Corp. Use of igf-ii/igf-iie binding for the treatment and prevention of systemic sclerosis associated pulmonary fibrosis
US20120213841A1 (en) * 2008-11-13 2012-08-23 Peyman Gholam A Ophthalmic drug delivery system and method
US20120202793A1 (en) * 2009-03-09 2012-08-09 Paul Sweetnam Rho kinase inhibitors
US8128932B2 (en) * 2009-08-17 2012-03-06 Shanghai Aosaiersi Biotech Co., Ltd. Anti-VEGFR monoclonal antibody, method of making and uses thereof
WO2012004631A2 (en) * 2010-07-07 2012-01-12 Tubitak Recombinant antibody structures binding to and blocking the activity of vascular endothelial growth factor 2 (vegfr- 2 /kdr)

Also Published As

Publication number Publication date
US20150284464A1 (en) 2015-10-08
EP3685855B1 (en) 2023-11-22
EP3685855A1 (en) 2020-07-29
JP2015533126A (ja) 2015-11-19
CN116003600A (zh) 2023-04-25
CA2926386C (en) 2021-11-09
PL3685855T3 (pl) 2024-04-08
CN105007939B (zh) 2018-10-19
CA2926386A1 (en) 2014-04-10
ES2781974T3 (es) 2020-09-09
EP2903647A4 (en) 2016-08-17
US10023640B2 (en) 2018-07-17
CN109160950A (zh) 2019-01-08
CN109160950B (zh) 2022-10-04
US20180346579A1 (en) 2018-12-06
EA201500363A1 (ru) 2015-11-30
WO2014055998A1 (en) 2014-04-10
EA201500363A8 (ru) 2016-04-29
JP6449772B2 (ja) 2019-01-09
EA201990403A1 (ru) 2019-07-31
ES2966030T3 (es) 2024-04-18
EP2903647A1 (en) 2015-08-12
EA039595B1 (ru) 2022-02-15
EP3685855C0 (en) 2023-11-22
EP2903647B1 (en) 2020-01-01
US10364291B2 (en) 2019-07-30
CN105007939A (zh) 2015-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10364291B2 (en) Human anti-VEGFR-2/KDR antibodies
US8143025B2 (en) Antibodies against vascular endothelial growth factor receptor-1
RU2590711C2 (ru) Новое антитело против dr5
US20090246205A1 (en) Inhibition of macrophage-stimulating protein receptor (ron)
CN114502595A (zh) 针对脊髓灰质炎病毒受体(pvr)的抗体及其用途
US20230338524A1 (en) Human Anti-VEGFR-2/KDR Antibodies
WO2017175054A1 (en) Anti-vegfr-1 antibodies and uses thereof