EA030249B1 - 2,4-замещенные пиримидиндиамины для применения при дискоидной волчанке - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к способу лечения дискоидной красной волчанки, включающему местное введение субъекту, имеющему дискоидную красную волчанку, но не имеющему системной красной волчанки, эффективного количества соединения формул I и/или IIили их фармацевтически приемлемой солевой формы.

Description

Изобретение относится к способу лечения дискоидной красной волчанки, включающему местное введение субъекту, имеющему дискоидную красную волчанку, но не имеющему системной красной волчанки, эффективного количества соединения формул Ι и/или ΙΙ

1 II

или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

030249 Β1

030249

Перекресная ссылка на родственные заявки

Данная заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США 61/451531, поданной 10 марта 2011 года, которая включена в данный документ во всей ее полноте.

Область техники

Настоящее раскрытие имеет отношение к соединениям, пролекарствам, их солям и фармацевтическим композициям, содержащим их, а также способам применения этих соединений, пролекарств и их композиций при лечении дерматологических расстройств, таких как кожная коллагеновая болезнь, например кожное волчаночное расстройство, такое как дискоидная красная волчанка.

Предпосылки изобретения

1АК-киназы (Янус-киназы) представляют собой семейство цитоплазматических белков, являющихся тирозинкиназами, которое включает 1АК1, 1АК2, 1АК3 и ΤΥΚ2. Каждая из 1АК-киназ является избирательной по отношению к рецепторам для определенных цитокинов, хотя определенный цитокин или сигнальные пути могут воздействовать на многие 1АК-киназы. В результате исследований показано, что 1АК3 связывается с общей гамма-цепью (ус) различных цитокиновых рецепторов.

В частности, 1АК3 избирательно связывается с рецепторами и является частью цитокинового сигнального пути для 1Ь-2, 1Ь-4, Ш-7, Ш-9, Ш-15 и Ш-21. 1АК1 взаимодействует, в том числе, с рецепторами для цитокинов Ш-2, Ш-4, Ш-7, Ш-9 и Ш-21, в то время как 1АК2 взаимодействует, в том числе, с рецепторами для Ш-9 и ΤΝΕ-α. После связывания определенных цитокинов с их рецепторами (например, Ш-2, Ш-4, Ш-7, Ш-9, Ш-15 и Ш-21) происходит олигомеризация рецепторов, что приводит в результате к приближению цитоплазматических концевых сегментов связанных 1АК-киназ и способствует трансфосфорилированию остатков тирозина на 1АК-киназе. Это трансфосфорилирование приводит к активации 1АК-киназы.

Фосфорилированные 1АК-киназы связывают различные δΤΑΤ-белки (трансдуктор сигналов и активатор транскрипции). δΤΑΤ-белки, которые являются ДНК-связывающими белками, активированными путем фосфорилирования остатков тирозина, функционируют и как сигнальные молекулы, и как транскрипционные факторы и в конечном итоге связываются со специфическими последовательностями ДНК, присутствующими в промоторах цитокин-чувствительных генов. ^ΑК/8ΤΑΤ-сигналинг вовлечен в опосредование многих аномальных иммунных реакций, таких как аллергии, астма, аутоиммунные заболевания, например отторжение трансплантата (аллотрансплантата), ревматоидный артрит, боковой амиотрофический склероз и рассеянный склероз, глазные расстройства и заболевания, а также солидные и гематологические злокачественные новообразования, такие как лейкоз и лимфомы.

Расстройства, связанные с соединительной тканью, представляют собой группу заболеваний, которые поражают широкое разнообразие органов, и их иногда называют коллагеновыми болезнями. Этот класс заболеваний включает в себя множество различных воспалительных расстройств, таких как васкулит, дискоидная красная волчанка (ОЬЕ), системная красная волчанка (8ЬЕ), прогрессирующий системный склероз, полимиозит/дерматомиозит, ревматическая полимиалгия, узелковый полиартериит и гранулематоз Вегенера. Эти заболевания являются различными заболеваниями, которые с клинической точки зрения дифференцировали друг от друга для целей диагностики, прогнозирования и лечения.

Красная волчанка является общей категорией заболеваний, которая включает как системные, так и кожные заболевания. Системная форма заболевания может иметь кожные, а также системные проявления. Тем не менее, также существуют формы заболевания, которые являются только кожными без системного поражения. Например, 8ЬЕ является воспалительным расстройством неизвестной этиологии, которое возникает преимущественно у женщин и характеризуется суставными симптомами, эритемойбабочкой, рецидивирующим плевритом, перикардитом, генерализованной аденопатией, спленомегалией, а также поражением €.'N8 и прогрессирующей почечной недостаточностью. Сыворотки большинства пациентов (более 98%) содержат антинуклеарные антитела, в том числе антитела к ДНК. В основном высокие титры антител к ДНК являются характерными для 8ЬЕ. Традиционным лечением этого заболевания являлось введение кортикостероидов или иммуносупрессоров.

Существуют три формы кожной волчанки: хроническая кожная волчанка (также известная как дискоидная красная волчанка или ЭЬЕ), подострая кожная волчанка и острая кожная волчанка. ЭЬЕ является обезображивающим хроническим расстройством, поражающим преимущественно кожу, с резко очерченными пятнами и бляшками, где обнаруживается эритема, закупорка фолликулов, чешуйки, телеангиэктазия и атрофия. Состояние часто возникает вследствие воздействия солнечного излучения, и ранние очаги являются эритематозными круглыми чешуйчатыми папулами от 5 до 10 мм в диаметре, в которых обнаруживается закупорка фолликулов. Очаги ЭЬЕ появляются чаще всего на щеках, носу, коже волосистой части головы и ушах, но они также могут распространяться на верхнюю часть туловища, разгибательные поверхности конечностей и на слизистую оболочку рта. В случае отсутствия лечения центральный очаг атрофируется и оставляет рубец. В отличие от 8ЬЕ при ЭЬЕ почти всегда отсутствуют антитела к двухцепочечной ДНК (например, тест на связывание ДНК).

Традиционные средства для лечения ЭЬЕ включали кортикостероидные мази или кремы для местного применения, например триамцинолона ацетонид, флуоцинолон, флурандренолид, бетаметазона ва- 1 030249

лерат или бетаметазона дипропионат. В резистентные бляшки можно ввести кортикостероид при помощи внутрикожной инъекции. Тем не менее, длительное применение кортикостероидов самих по себе может привести к серьезным побочным эффектам, таким как атрофия кожи, стрии, легкое образование гематом и разрывов кожи, дерматит, телеангиэктазия и повышенная восприимчивость к инфекции. Другие возможные средства для лечения 1)1 .Е включают ингибиторы кальциневрина, такие как крем пимекролимус или мазь такролимус. При случаях, которые являются в особенности резистентными, можно осуществлять лечение с помощью системных противомалярийных лекарственных средств, таких как гидроксихлорохин (плаквенил). Однако при использовании этого лекарственного средства существует риск значительной токсичности для сетчатки, что приводит к ретинопатии бычьего глаза. Даже после отмены лекарственного средства потеря зрения может прогрессировать и не существует лекарственной терапии для того, чтобы способствовать устранению повреждения сетчатки.

1)ЕЕ является обезображивающим заболеванием, по отношению к которому существующие виды терапии оказались неудовлетворительными. Также существует потребность в средствах для лечения других кожных форм волчанки, например острых и подострых форм.

Краткое описание изобретения

Согласно одному из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен способ лечения дискоидной красной волчанки, включающий местное введение субъекту, имеющему дискоидную красную волчанку, но не имеющему системной красной волчанки, эффективного количества соединения формул I и/или II

или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения предложен фармацевтический состав для лечения дискоидной красной волчанки, содержащий

основу для местного применения; растворитель, смешивающийся с водой; вещество, способствующее проникновению; смягчающее вещество;

поверхностно активное вещество и антиоксидант,

где указанный состав представляет собой лекарственную форму для местного применения.

Эти и другие варианты осуществления описаны более подробно ниже.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 представляет собой фотографию, которая иллюстрирует некоторые обезображивающие очаги 1)ЕЕ, которые появляются на конечностях.

Фиг. 2 представляет собой фотографию, которая иллюстрирует дискоидное рубцевание и гипопигментацию на затылочной области головы субъекта.

Фиг. 3 представляет собой фотографию, которая иллюстрирует эффекты, связанные с атрофией кожи, вызванной местным применением глюкокортикоида.

Фиг. 4 представляет собой таблицу, которая иллюстрирует активность и повреждение в кожных очагах ЭБЕ, и при помощи которой показано, как оценить тяжесть ЭБЕ. Такие оценки полезны для наблюдения активности заболевания и оценивания реакции на средства для лечения.

Сокращения.

АСЕЕ - острая кожная красная волчанка,

ССЕЕ - хроническая кожная красная волчанка,

СОХ - циклооксигеназа,

ΌΕ8 - синдром сухого глаза,

1)1ЕЕ - медикаментозная красная волчанка,

ЭБЕ - дискоидная красная волчанка,

БЕ - красная волчанка,

8СЕЕ - подострая кожная красная волчанка,

- 2 030249

§ЬЕ - системная красная волчанка,

8ТЛТ - трансдуктор сигналов и активатор транскрипции.

Подробное описание изобретения

Определения.

В контексте данного документа следует применять следующие определения, если не указано иное.

"Кортикостероиды" представляют собой стероидные гормоны, которые вырабатываются в коре надпочечников. Кортикостероиды вовлечены в широкий ряд физиологических систем, например реакция на стресс, иммунный ответ и регуляция воспаления, метаболизм углеводов, катаболизм белков, уровень электролитов в крови и поведение. Примеры кортикостероидов включают кортизол, преднизон и преднизолон. Кортикостероиды можно вводить либо перорально, парентерально (например, путем инъекции) или путем непосредственного местного применения к очагу на коже, и их можно объединить с соединениями формулы I и/или II в комбинированном составе. "Кортикостероиды для местного применения" применяют местно непосредственно к коже, но длительное использование кортикостероидов для местного применения вызывает безобразную атрофию кожи.

"Кожный" или "дермальный" относится к коже, которая является тканью, образующей внешнее покрытие тела позвоночных. Кожа (которую также иногда называют "кожным покровом") в сочетании со слизистыми оболочками (в частности, оболочками рта, носа, полости рта и века) помогает защитить организм от внешней среды. Кожа состоит из двух слоев (дермы и эпидермиса), самый наружный из которых у многих животных (в том числе людей) может быть, по меньшей мере, частично покрыт волосами. Наряду со слизистыми оболочками глаза, носа и рта ее функция является в основном защитной и сенсорной.

"Кожная волчанка" или "кожная красная волчанка" относится к кожным проявлениям красной волчанки в соответствии с классификацией кожных заболеваний, относящихся к красной волчанке, по Оййаш. Ко1ййе1б с1 а1., СНшс8 ίη Ώοπηαίοίοβν 24:348-362 (2006). В этой системе волчаночные заболевания кожи делятся на специфические для красной волчанки и неспецифические для красной волчанки кожные заболевания, при которых обнаруживаются отличительные гистологические изменения.

"Дискоидная красная волчанка" или "ОБЕ" (также известная как хроническая кожная красная волчанка или ССЬЕ) часто является обезображивающим хроническим расстройством, поражающим преимущественно кожу с четко очерченными пятнами и бляшками, где обнаруживается эритема, закупорка фолликулов, чешуйки, телеангиэктазия и атрофия. Состояние часто возникает вследствие воздействия солнечного излучения, и ранние очаги представляют собой эритематозные круглые чешуйчатые папулы от 5 до 10 мм в диаметре и в них обнаруживается закупорка фолликулов. Очаги ОБЕ появляются чаще всего на щеках, носу, коже волосистой части головы и ушах, но они также могут распространяться на верхнюю часть туловища, разгибательные поверхности конечностей и на слизистую оболочку рта. В отличие от §ЬЕ при ОБЕ почти всегда отсутствуют антитела к двухцепочечной ДНК (например, тест на связывание ДНК). В некоторых вариантах осуществления способов, раскрытых в данном документе, соединения формул I и II применяют для лечения субъектов с ОБЕ. отрицательных по антителам к двухцепочечной ДНК (άδ-ΌΝΆ).

Как правило, "хроническую кожную красную волчанку" (ССЬЕ) подразделяют на классическую дискоидную красную волчанку (ОЬЕ), дискоидную красную волчанку у детей, генерализованную дискоидную красную волчанку, локализованную дискоидную красную волчанку, глубокую красную волчанку, волчаночный панникулит (глубокую красную волчанку), красную волчанку слизистых оболочек, отечную красную волчанку, ознобленную красную волчанку, перекрестный синдром красной волчанки с красным плоским лишаем, бородавчатую красную волчанку (гипертрофическую красную волчанку) и другие редкие варианты. Классическая ОБЕ является наиболее распространенной формой ССЬЕ, и у большинства пациентов, которые имеют очаги ОБЕ классического типа, никогда не развиваются признаки системной красной волчанки. Классическая ОБЕ проявляется как четко очерченное красно-пурпурное пятно папулы с поверхностной чешуйкой. Очаг увеличивается в размерах до монетообразной или дисковидной бляшки с периферической гиперпигментацией. Плотно прилегающие чешуйки распространяются на расширенные волосяные фолликулы. Центр очага становится вдавленным, с рубцами, депигментацией и телеангиэктазией. Бляшки могут сливаться с образованием больших обезображивающих очагов. Волосяной фолликул может закупориться толстыми чешуйками, которые при расслаивании открывают ороговевающие выступы, причем при этом симптоме они напоминают обойные гвозди. Гистопатологические характеристики включают гиперкератоз и закупорку фолликулов, утрату живого базального эпидермиса и атрофический шиповатый слой. В базальном слое могут также появляться отек, разжижение, утолщение базальной мембраны, повышенная меланиновая пигментация и недержание пигмента. В дерме обнаруживают инфильтрацию мононуклеарных клеток макрофагов и Т-лимфоцитов, при этом в хронических очагах плазматические клетки приводят к отложению муцина.

"Медикаментозная красная волчанка" (ОББЕ) является разновидностью аутоиммунного заболевания, которое возникает как побочный эффект длительного применения некоторых лекарственных препаратов. Симптомы ОББЕ аналогичны симптомам §ЬЕ и могут включать в себя усталость, небольшое повышение температуры, потерю аппетита, боли в мышцах, артрит, язвы рта и носа, сыпь на лице, повы- 3 030249

шенную чувствительность к солнечному свету, плеврит, перикардит и феномен Рейно. Язвы и сыпь являются примерами кожных проявлений ΌΙΕΕ. У пациента, у которого нет основной дисфункции иммунной системы, симптомы проходят в период от нескольких дней до нескольких месяцев после отмены лекарственного средства, являющегося виновником. Наиболее распространенными лекарственными средствами, вызывающими ΌΙΕΕ, являются гидралазин, прокаинамид, хинидин, изониазид, дилтиазем и миноциклин. Некоторые из этих лекарственных средств (например, прокаинамид, хлорпромазин и хинидин) вызывают продуцирование антинуклеарных антител против димера гистонов Н2А-Н2В. Гидралазин приводит к образованию антинуклеарных антител к Н1 и комплексу Н3-Н4. ΌΙΕΕ обычно возникает в период от нескольких месяцев до нескольких лет после начала использования лекарственных средств в отличие от вспышек 8ЬЕ, которые появляются в период от нескольких часов до нескольких дней после начала использования лекарственного средства.

ΌΙΕΕ диагностируют у пациента, который имеет один или несколько клинических симптомов 8ЬЕ (например, боли в суставах, лимфаденопатия, сыпь, лихорадка); антинуклеарные антитела присутствуют; пациент не имел в анамнезе 8ΕΕ перед использованием лекарственного средства, являющегося виновником; лекарственное средство, являющееся виновником, было принято в любое время от 3 недель до 2 лет до появления симптомов, и клиническое улучшение является быстрым при отмене препарата, в то время как антинуклеарные антитела и другие серологические маркеры медленно уменьшаются до более нормальных уровней.

" Эпителиальные поверхности" относятся к ткани, состоящей из эпителиальных клеток, которые покрывают поверхности тела. Эпителиальные поверхности включают внешние поверхности, такие как кожа и слизистая оболочка рта и носа, а также оболочки внутренних поверхностей тела. "Внешними" эпителиальными поверхностями являются поверхности, находящиеся на поверхности тела (например, кожа и оболочки носа и рта) и которые являются доступными для непосредственного применения кремов или мазей к поверхности без использования инструментов (например, эндоскопов или скальпелей).

"Красная волчанка" (ΕΕ) является общим термином для группы аутоиммунных заболеваний. Симптомы ΕΕ могут оказывать влияние на многие различные системы организма, в том числе суставы, кожу, почки, клетки крови, сердце и легкие. ΕΕ может проявляться как системное заболевание (имеющее как кожные, так и другие проявления) или как исключительно кожное заболевание (которое поражает только кожу). Системная форма ΕΕ известна как системная красная волчанка (8ΕΕ). Среди кожных форм ΕΕ различают острую кожную красную волчанку, подострую кожную красную волчанку и хроническую кожную красную волчанку (дискоидная волчанка, описанная выше).

Острая кожная красная волчанка (ΆΟΕΕ) может быть либо локализованной, либо генерализованной. Локализованная ΆΟΕΕ характеризуется эритемой на поверхности скуловых возвышенностей лица и переносицы (покраснение в виде бабочки), в то время как носогубные складки, как правило, не затронуты. Сыпь ΆΟΕΕ может характеризоваться мелкими поверхностными чешуйками и сопровождаться отеком, однако особенно тяжелые случаи могут привести к везикулобуллезным изменениям кожи. Гистопатологические изменения включают в себя скудный кожный клеточный инфильтрат, фокальную колликвационную дистрофию базального эпидермиса и верхний дермальный отек. В самых тяжелых формах может появиться эпидермальный некроз.

Подострую кожную красную волчанку (8ΟΕΕ) подразделяют на две морфологические разновидности: кольцевую 8ΟΕΕ и папулосквамозную 8ΟΕΕ. Кольцевую 8ΟΕΕ также называют окаймленной волчанкой, симметричной красной волчанкой, аутоиммунной кольцевой эритемой и ползучей красной волчанкой. 8ΟΕΕ проявляется эритематозными пятнами и папулами, которые впоследствии развиваются в папулосквамозные или кольцевые бляшки. У большинства пациентов будет проявляться тенденция к развитию преимущественно одного типа очагов, хотя у некоторых будут проявляться элементы обоих одновременно. 8ΟΕΕ характеризуется повышенной светочувствительностью с очагами чаще всего на шее и верхней части груди, верхней части спины, плечах, разгибательных поверхностях рук и предплечий и тыльной поверхности кистей (суставы, как правило, не затронуты). Редко поражается лицо и кожа волосистой части головы. Гистопатологические признаки включают гиперкератоз, дегенерацию базального слоя клеток и инфильтрацию мононуклеарных клеток в кожно-эпидермальное соединение и дерму.

"Слизистые оболочки" (или "слизистая") представляют собой оболочки в основном энтодермального происхождения, покрытые эпителием, который участвует в абсорбции и секреции. Они выстилают полости, которые подвергаются воздействию внешней среды, и внутренние органы. Они неразрывны с кожей в нескольких местах, таких как ноздри, полость рта, губы, веки, уши, область половых органов и анус.

"Нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (Ν8ΆΙΌ)" относится к типу противовоспалительного средства, которое действует путем ингибирования продукции простагландинов. Ν8ΆΙΌ оказывают противовоспалительное, анальгезирующее и жаропонижающее действие. Примеры Ν8ΆΙΌ включают ибупрофен, кетопрофен, пироксикам, напроксен, сулиндак, аспирин, холина салицилат, дифлюнисал, фенопрофен, индометацин, меклофенамат, салсалат, толметин и салицилат магния. Эти средства можно вводить перорально, парентерально (например, путем инъекции) или путем непосредственного местного применения к воспаленным областям и их можно объединять с соединениями форму- 4 030249

лы I и/или II в комбинированном составе.

"Фармацевтически приемлемая соль" относится к биологически совместимой соли соединения, которую можно использовать в качестве лекарственного средства, причем эти соли получают из различных органических и неорганических противоположно заряженных ионов, хорошо известных в данной области техники.

"Фармацевтически эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" относится к количеству соединения, достаточному для лечения указанного расстройства или заболевания или одного или нескольких его симптомов, и/или для предупреждения возникновения заболевания или расстройства. "Лечение" включает остановку дальнейшего развития заболевания, а также устранение расстройства путем индуцирования регрессии очагов или, в некоторых примерах, излечение расстройства.

Используемое в данном документе выражение "значительно сокращает очаги ΌΕΕ" означает статистически значимое (например, р<0,05) сокращение очагов ЭЬЕ согласно измерению при помощи стандартной дерматологической методики. Например, сокращение очагов ΌΕΕ можно оценить путем подсчета количества вылеченных очагов или общей площади поверхности вылеченного очага или очагов.

"Субъект" относится к человеку и субъектам, не относящимся к людям.

"Системная красная волчанка" или "8ЬЕ" является воспалительным аутоиммунным расстройством, которое встречается преимущественно у женщин и характеризуется различными суставными симптомами, эритемой-бабочкой, рецидивирующим плевритом, перикардитом, генерализованной аденопатией, спленомегалией, а также поражением €N8 и прогрессирующей почечной недостаточностью. Сыворотки большинства пациентов (более 98%) содержат антинуклеарные антитела, в том числе антитела к ДНК. В основном высокие титры антител к ДНК являются характерными для 8ЬЕ.

Доставка "при местном применении" относится к применению содержащего лекарственное средство состава к коже для непосредственного лечения кожных расстройств или кожных проявлений заболевания с тем, чтобы в значительной степени направить фармакологический эффект лекарственного средства к поверхности кожи или в кожу. Лекарственные формы для местного применения являются, как правило, полужидкими системами, но могут включать ряд других лекарственных форм, таких как пены, спреи, порошки, содержащие лекарственное средство, растворы и адгезивные системы, содержащие лекарственное средство. Доставка при местном применении предусматривает местнодействующие средства для местного применения, которые наносятся, распыляются или иным образом распределяются на кожных тканях с целью покрытия пораженного участка, или местнодействующие средства для внутреннего применения, которые применяют к слизистой оболочке перорально, вагинально или на аноректальные ткани для местного действия. Лекарственные средства для местного применения, раскрытые в данном документе, можно вводить в любой лекарственной форме для местного применения, например в виде твердого (порошок, аэрозоль или пластырь), жидкого (лосьон, жидкая мазь, раствор, эмульсия, суспензия, аэрозоль) или полужидкого средства (мазь, крем, паста, гель, желе или суппозиторий).

Соединения.

Объектом настоящего изобретения являются соединения, пролекарства, соответствующие солевые формы, а также способы применения данных соединений, пролекарств и солевых форм при лечении кожных ЬЕ, например ΌΕΕ.

Соединения I и II, а также их солевые формы и фармацевтические композиции, содержащие их, описаны более подробно ниже. Соединение I также называют Ν2-(3-аминосульфонил-4-метилфенил)-5фтор-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамином. Соединение II также называют 5-фтор№-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-№-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамином

11

В целях краткости описания в любом варианте осуществления, где соединения I и II называют конкретно, вариант осуществления также включает солевую форму и/или фармацевтическую композицию, содержащую соединение I и/или соединение II, которое используют.

Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединение II является пролекарством соединения I, и что соединение II не обязательно должно быть фармакологически неактивным до превращения в соединение I. Механизм, посредством которого метоболизируется пропионильная прогруппа, не является определяющим, и может быть обусловлен, например, гидролизом в кислой среде желудка и/или ферментами, присутствующими в пищеварительном тракте, и/или тканях, или органах тела, на- 5 030249

пример эстеразами, амидазами, липазами, фосфатазами, в том числе АТФазами и киназами, цитохромом Р450 печени и т.п. В определенных вариантах осуществления, описанных в данном документе, соединения I и/или II применяют для лечения дерматологических или кожных расстройств, таких как ОЬЕ, и, следовательно, их можно вводить непосредственно в кожу. В случае введения неактивного пролекарства, оно может быть активировано ферментами (такими как эстеразы) в коже или его вводят местно вместе с другим веществом, которое активирует лекарственное средство (например, депо активирующего вещества в пластыре или дополнительное вещество, которое смешивается с пролекарством до местного применения). В некоторых вариантах осуществления введение может включать не только местное введение, но также инъекцию и т.п., например внутрикожную или внутриочаговую инъекцию. В альтернативном случае эти активные средства можно вводить системно.

Специалисту в данной области будет понятно, что соединения I и II могут характеризоваться явлением таутомерии, конформационной изомерии и/или геометрической изомерии. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает любые таутомерные формы, формы конформационных изомеров и/или геометрических изомеров соединений, а также смеси этих многообразных изомерных форм. Атропоизомеры являются стереоизомерами, возникающими вследствие пространственно затрудненного вращения вокруг одинарных связей, где препятствие для вращения является достаточно сильным, чтобы обеспечить выделение конформеров (ЕНе1 Е.Ь.; АПеп δ.Η. §1егеосйеш151гу о! Огдаше Сошроипйк; Айеу & δοηκ: №\у Уогк, 1994; Сйар1ег 14). Атропоизомерия является важной, потому что она вносит элемент хиральности при отсутствии стереогенных атомов. Настоящее изобретение предназначено для охвата атропоизомеров, например, в случаях ограниченного вращения вокруг связей между основной структурой 2,4-пиримидиндиамина и группами, присоединенными к ней, или, например, вокруг связей между сульфонамидом и фенильным кольцом, к которому он прикреплен. Соединения I и II могут быть в форме солей. Такие соли включают соли, подходящие для фармацевтических целей ("фармацевтически приемлемые соли"), соли, подходящие для ветеринарных целей и т.п. Такие соли можно получить из кислот или оснований, как хорошо известно в данной области техники. Примерами солей, описанных в данном документе, являются соли натрия, соли калия, соли аргинина, соли холина и соли кальция, но, в общем, для способов, описанных в данном документе, можно использовать любые фармацевтически приемлемые соли. Поскольку и соединение I, и соединение II имеют как основные группы, например атомы азота пиримидина, и кислотные группы, например кислотные протоны на сульфонамиде и/или азотах при N2 и N4 пиримидиндиаминовой системы, данные соединения могут образовывать фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты или основания.

В одном варианте осуществления соль является фармацевтически приемлемой солью. Как правило, фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли, которые сохраняют в основном одну или несколько желаемых фармакологических активностей исходного соединения и которые пригодны для введения людям. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты, образованные неорганическими кислотами или органическими кислотами. Неорганические кислоты, подходящие для образования фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты, включают в качестве примера, а не ограничения, гидрогалоидные кислоты (например, хлористо-водородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, иодисто-водородную кислоту и т.д.), серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т.п. Органические кислоты, подходящие для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты, включают в качестве примера, а не ограничения, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, пропионовую кислоту, капроновую кислоту, циклопентанпропионовую кислоту, гликолевую кислоту, щавелевую кислоту, пировиноградную кислоту, молочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, яблочную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, пальмитиновую кислоту, бензойную кислоту, 3-(4гидроксибензоил)бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, алкилсульфоновые кислоты (например, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 1,2-этандисульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту и др.), арилсульфоновые кислоты (например, бензолсульфоновую кислоту, 4-хлорбензолсульфоновую кислоту, 2-нафталинсульфоновую кислоту, 4толуолсульфоновую кислоту, камфорсульфоновую кислоту и т.п.), 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1карбоновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, 3-фенилпропионовую кислоту, триметилуксусную кислоту, трет-бутилуксусную кислоту, лаурилсерную кислоту, глюконовую кислоту, глутаминовую кислоту, гидроксинафтойную кислоту, салициловую кислоту, стеариновую кислоту, муконовую кислоту и т.п.

Фармацевтически приемлемые соли также включают соли, образованные в случае, когда кислотный протон, присутствующий в исходном соединении либо заменяется ионом металла (например, ионом щелочного металла, ионом щелочно-земельного металла или ионом алюминия), либо образует координационную связь с органическим основанием (например, этаноламином, диэтаноламином, триэтаноламином, Ν-метилглюкамином, морфолином, пиперидином, диметиламином, диэтиламином, триэтиламином, аммиаком и др.).

Соединения I и II, а также их соли, могут также быть в виде сольватов, например гидратов и Νоксидов, которые хорошо известны в данной области техники.

Способы.

- 6 030249

Настоящее изобретение предусматривает 2,4-замещенные пиримидиндиаминовые соединения I и II, их пролекарства, соли и фармацевтические композиции для применения при лечении заболеваний и/или расстройств кожи и/или слизистых оболочек, в частности очагов, вызванных ИЬЕ. В частности, соединения I и II вводят отдельно или в комбинации с другими средствами. Как описано выше, соединения I и/или II можно вводить в исходной и/или солевой форме, а также в виде их фармацевтических составов, и они могут включать активирующие средства для активации соединения II, являющегося пролекарством, с получением соединения I.

В контексте данного документа и как хорошо известно в данной области техники, "лечение" является подходом, направленным на получение благоприятных или желаемых результатов, в том числе клинических результатов. В рамках настоящего изобретения благоприятные или желаемые результаты могут без ограничения включать одно или несколько из смягчения или уменьшение интенсивности одного или нескольких симптомов, снижения степени состояния, включая заболевание, стабилизированный (то есть без ухудшения) статус патологического состояния, включая заболевания, предупреждение распространения болезни, задержка или замедление развития состояния, в том числе заболевания, или его прогрессирования, уменьшение интенсивности или временное облегчение, в том числе болезни, состояние и ремиссию (частичную или полную), поддающиеся обнаружению либо не поддающиеся обнаружению. Соединения I и II (по меньшей мере, в качестве источника соединения I) являются сильнодействующими и поэтому могут вводиться местно (например, местно или путем инъекций в кожу или слизистую оболочку) при очень низких дозах, что, таким образом, сводит к минимуму системные побочные эффекты. Считается, что данное лечение также позволяет избежать побочных эффектов, вызванных более традиционными средствами для лечения (например, кортикостероидами), и является весьма эффективным из-за его непосредственного применения к пораженным участкам.

Соединения I и II являются сильнодействующими и селективными ингибиторами ΙΆΚ-киназ 1 и, в частности, ΙΆΚΙ/3-цитокин-зависимого сигналинга, действующего в Т- и В-клетках, и §ук-зависимого сигналинга в макрофагах, дендритных клетках и В-клетках. Например, соединение I характеризуется полумаксимальной эффективной концентрацией (ЕС₅₀) в анализах на клетках человека в отношении ΙΆΚ3 и §ук в диапазоне от 0,18 и 0,14 мкМ соответственно и обладает низким действием или не оказывает действия на другие цитокины (Ш-1 β и ΤΝΡα) или сигналинг при помощи рецепторов с тирозинкиназной активностью (ΚΤΚ) и не является выраженным ингибитором пролиферации клеток. Соединение I является особенно избирательным в отношении цитокиновых сигнальных путей, содержащих ΙΆΚ3. Как следствие этой активности, соединения могут быть использованы в ряду ίη νίίτο, ίη νΐνο и ех νΐνο контекстов для регуляции или ингибирования активности ΙΆΚ-киназы, сигнальных каскадов, в которых ΙΆΚкиназы играют некоторую роль, а также биологических реакций, на которые воздействуют такие сигнальные каскады. Например, в одном варианте осуществления соединения можно использовать для ингибирования ΙΆΚ-киназы или ίη νίίτο, или ίη νΐνο, практически в любом типе клеток, экспрессирующих ΙΆΚ-киназу (например, гемопоэтические клетки). Их также можно использовать для регуляции каскадов сигнальной трансдукции, в котором ΙΆΚ-киназы, в частности ΙΆΚ3, играют некоторую роль. Такие ΙΆΚзависимые каскады сигнальной трансдукции без ограничения включают сигнальные каскады цитокиновых рецепторов, которые характеризуются общей гамма-цепью, как, например, сигнальные каскады рецепторов Ш-4, Ш-7, Ш-5, Ш-9, ЕШ-15 и Ш-21 или Ш-2, Ш-4, Ш-7, Ш-9, ЕШ-15 и Ш-21. Соединения также можно применять ίη νίίτο или ίη νΐνο для регуляции и, в частности, ингибирования клеточных или биологических реакций, вызванных такими ΙΆΚ-зависимыми каскадами сигнальной трансдукции. Такие клеточные или биологические реакции без ограничения включают активацию Ш-П/ганю^ СИ23, опосредованную Ш-2 пролиферацию Т-клеток и т.д. Важно отметить, что данные соединения могут быть использованы для ингибирования ΙΆΚ-киназ ίη νΐνο в качестве терапевтического подхода к лечению или предупреждению заболеваний, опосредованных, полностью или частично, активностью ΙΆΚ-киназ. Такие заболевания называют "заболеваниями, опосредованными ΙΆΚ-киназой".

Без ограничения теорией полагают, что описанные в данном документе соединения являются эффективными при лечении таких кожных заболеваний благодаря, по меньшей мере, частично их ΙΆΚингибиторной активности. Примеры заболеваний, которые опосредованы, по меньшей мере, частично ΙΆΚ-киназами, которые можно лечить или предупреждать в соответствии с данными способами, включают заболевания и расстройства кожи или слизистых оболочек, включая, но без ограничения, очаги кожной ЬЕ, такой как ИЬЕ, АСЬЕ, §СЬЕ или ИШЕ, которые присутствуют на коже и слизистых оболочках. Тем не менее, в результате вышеупомянутых активностей, хотя описанные в данном документе способы направлены на лечение кожи и слизистых оболочек, введение данных соединений и/или составов может принести иной терапевтический эффект, а именно в других тканях или органах тела. Один вариант осуществления относится к способу лечения расстройства или заболевания кожи или слизистых оболочек (например, ИЬЕ, АСЬЕ, §СЬЕ или ОШЕ), при котором также получают вторичный эффект. Например, применение активных средств к очагам ИЬЕ на веке также может служить эффективным средством для лечения сухости глаз, синдрома сухого глаза, увеита, аллергического конъюнктивита, глаукомы или розацеа (глаза).

Синдром сухого глаза (ИЕ§), известный еще как сухой кератоконъюнктивит (ШСБ), сухой кератит,

- 7 030249

кератит нитчатый или ксерофтальмия, является заболеванием глаза, вызванным сниженной выработкой слез или повышенным испарением слезной пленки, часто встречающимся у людей и некоторых животных. Увеит и иридоциклит относится к воспалению среднего слоя глаза ("увеальный тракт"), и общепринято, что они могут относиться к любому воспалительному процессу, поражающему внутреннюю часть глаза. Аллергический конъюнктивит является воспалением конъюнктивы (оболочки, покрывающей белую часть глаза) вследствие аллергии. Глаукома относится к группе заболеваний, которые влияют на зрительный нерв, и приводит к утрате ганглиозных клеток сетчатки характерным образом, т.е. по типу оптической невропатии. Повышенное внутриглазное давление является важным фактором риска для развития глаукомы (выше 22 мм рт.ст. или 2,9 кПа), и воспалительные процессы, например увеит, могут вызвать такое повышение внутриглазного давления.

При помощи раскрытого лечения БЬЕ, АСЬЕ, §СЬЕ или Б1ЬЕ также можно лечить симптомы розацеа, которое представляет собой хроническое воспалительное состояние, характеризующееся лицевой эритемой, которая также может поражать глаза и нос (ринофима).

В одном варианте осуществления соединения I и/или II применяют для лечения любого из упомянутых выше глазных заболеваний и/или расстройств совместно с лечением БЬЕ. В одном варианте осуществления соединения I и/или II применяют в виде солевой формы. В определенном варианте осуществления соединение II применяют в виде солевой формы. В одном варианте осуществления соль соединения II выбрана из натриевой соли, калиевой соли, кальциевой соли, аргининовой соли и холиновой соли.

Совместное введение.

При использовании для лечения очагов на коже и/или слизистых оболочках соединения I и II можно вводить отдельно, в виде смесей и/или в комбинации с другими средствами, используемыми для активации пролекарства или лечения заболеваний и/или расстройств кожи. Соединения I и II можно вводить в смеси или в комбинации с веществами, используемыми для лечения других расстройств или заболеваний, такими как, если называть некоторые, стероиды, мембранные стабилизаторы, ингибиторы 5липоксигеназы (5ЬО), ингибиторы синтеза и рецепторов лейкотриена, ингибиторы переключения изотипа или синтеза ^Е, переключения изотипа ^С или синтеза ^С. β-агонисты, ингибиторы триптазы, аспирин, ингибиторы циклооксигеназы (СОХ), метотрексат, анти-ΤΝΕ лекарственные средства, ритуксан, ингибиторы РБ4, ингибиторы р38, ингибиторы РБЕ4 и антигистаминные средства. Соединения I и II можно вводить рег 5С в виде пролекарств или в виде фармацевтических композиций, содержащих активное соединение и/или пролекарство.

Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, можно вводить совместно (одновременно или последовательно) с рядом других средств для лечения, применяемых к коже, например антибактериальными средствами (например, бактробан или клеоцин), противопсориазными лекарственными препаратами (такими как миканол), противогрибковыми средствами (например, ламизил, лотримин и низорал); средствами для лечения акне (такими как препараты для местного применения на основе перекиси бензоила); средствами для лечения себорейного дерматита (например, каменноугольный деготь), кортикостероидами, ретиноидами (например, ретин-А и тазорак), которые представляют собой гели или кремы, полученные из витамина А, которые используют для лечения патологических состояний, в том числе акне, и средства для лечения бородавок (например, салициловая кислота). Любое из этих средств может быть представлено в композициях для местного применения или в косметических композициях, например в лосьонах, мазях, кремах, гелях, мылах, шампунях или липких аппликаторах, таких как пластыри.

Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, можно также совместно вводить (одновременно или последовательно) с рядом других средств для лечения, которые не применяют к коже, например средств, которые вводят системно, например перорально или парентерально. Примеры таких системных средств лечения включают в себя другие лекарственные средства от волчанки (например, гидроксихлорохин (плаквенил), кортикостероиды (например, преднизон), антибиотики (например, эритромицин, тетрациклин и диклоксациллин), противогрибковые средства (такие как кетоконазол и дифлукан), противовирусные средства (например, валтрекс, ацикловир и фамвир), кортикостероиды, иммуносупрессоры (например, цитоксан, азатиоприн, метотрексат, мофетил) и биопрепараты (например, ритуксан, энбрел, хумира, ремикад, стелара и амевив).

Определенные иммуносупрессивные виды терапии, которые можно использовать в комбинации с соединениями I и II, включают, например, меркаптопурин, кортикостероиды, такие как преднизон, метилпреднизолон и преднизолон, алкилирующие вещества, такие как циклофосфамид, ингибиторы кальциневрина, такие как циклоспорин, сиролимус и такролимус, ингибиторы инозинмонофосфат дегидрогеназы ДМРБН), такие как мофетил, микофенолата мофетил и азатиоприн, и средства, разработанные для подавления клеточного иммунитета при сохранении гуморального иммунного ответа пациента интактным, в том числе различные антитела, например антилимфоцитарный глобулин (АБС), антитимоцитарный глобулин (АТС), моноклональные антитела к Т-клеткам (ОКТЗ), и облучение. Эти разнообразные средства можно использовать в соответствии с их стандартными или общими дозировками, как указано в инструкциях по применению, прилагаемых к коммерчески доступным формам лекарственных средств (см. также информацию по назначению в издании 2006 г. Настольный справочник врача), раскрытие ко- 8 030249

торых включено в данное описание посредством ссылки. Азатиоприн в настоящее время доступен от §айх РЬаттасеийсак под торговым названием азасан; меркаптопурин в настоящее время доступен от Са1с РЬаттасеийсак под торговым названием пуринетол; преднизон и преднизолон в настоящее время доступны у Кохаие ЬаЬогаЮпсм метилпреднизолон в настоящее время доступен от ΡΓί/ег; сиролимус (рапамицин) в настоящее время доступен от ХУуеШ-АуегЦ под торговым названием рапамун; такролимус в настоящее время доступен от Рифката под торговым названием програф; циклоспорин в настоящее время доступен от ΝονηΠΕ под торговым названием сандимун и от АЬЬой под торговым названием генграф; ΙΜΡΌΗ-ингибиторы, такие как микофенолата мофетил и микофеноловая кислота, в настоящее время доступны от КосЬе под торговым названием целлцепт и от ΝονηηΕ под торговым названием мифортик; азатиоприн в настоящее время доступен от С1ахо §тйй К1ше под торговым названием имуран, и антитела в настоящее время доступны у Ог11ю Вю1есН под торговым названием ортоклон, от ΝονηηΕ под торговым названием симулект (базиликсимаб) и от КосЬе под торговым названием зенанпакс (даклизумаб).

В одном варианте осуществления соединение формулы I и/или II или фармацевтически приемлемую соль вводят или в комбинации или дополнительно вместе с офтальмологическим составом лекарственного средства, такого как антигистаминный, антибиотический, противовоспалительный, противовирусный лекарственный препарат или препарат для лечения глаукомы. В частности, такие комбинированные препараты являются пригодными для лечения случаев ΌΕΕ, при которых поражается главным образом кожа вокруг глаз (например, веки), и их можно ввести в глаз или вокруг глаза, например, в каплях или мазях. При приготовлении этих комбинированных составов соединение формулы I и/или II, включая фармацевтически приемлемую соль, можно объединять с глазными антибиотиками (например, сульфацетамидом, эритромицином, гентамицином, тобрамицином, ципрофлоксацином или офлоксацином), офтальмологическими кортикостероидами (например, преднизолоном, фторметолоном или дексаметазоном, офтальмологическими нестероидными противовоспалительными средствами (например, ибупрофеном, диклофенаком, кеторолаком или флурбипрофеном), офтальмологическими антигистаминными средствами (например, ливостином, патанолом, кромолином, аломидом или фенирамином); офтальмологическими противовирусными глазными препаратами (например, трифтортимидином, аденином, арабинозидом или идоксуридином), офтальмологическими препаратами для лечения глаукомы (например, бета-блокаторами, такими как тимолол, метипранолол, картеолол, бетаксолол или левобунолол), офтальмологическими аналогами простагландинов (например, латанопростом), офтальмологическими холинергическими агонистами (например, пилокарпином или карбахолом), офтальмологическими альфаагонистами, такими как бромонидин или иопидин; офтальмологическими ингибиторами карбоангидразы (например, дорзоламидом) и офтальмологическими адренергическими агонистами (например, эпинефрином или дипивефрином).

Фармацевтические композиции

Фармацевтические композиции, содержащие соединения I и II, описанные в данном документе, можно получить при помощи стандартных способов смешивания, растворения, гранулирования, дражирования, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания или лиофилизации. Композиции можно составить обычным способом с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, разбавителей, наполнителей или вспомогательных веществ, которые облегчают переработку активных соединений в препараты, которые могут быть использованы фармацевтически и, в частности, локально или местно.

Соединения I и II могут быть составлены в фармацевтических композициях рег ке или в форме гидрата, сольвата, Ν-оксида или фармацевтически приемлемой соли, как описано в данном документе. Как правило, такие соли лучше растворяются в водных растворах, чем соответствующие свободные кислоты и основания, но также могут образовываться соли, имеющие более низкую растворимость, чем соответствующие свободные кислоты и основания.

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит соединения I и/или II и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, разбавитель, консервант или стабилизатор или их смеси.

В одном варианте осуществления соединения приведены в качестве нетоксичных фармацевтически приемлемых солей, как указано ранее. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений по данному изобретению включают соли присоединения кислоты, такие как соли, образованные с хлористоводородной кислотой, фумаровой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой, малеиновой кислотой, янтарной кислотой, уксусной кислотой, лимонной кислотой, винной кислотой, угольной кислотой или фосфорной кислотой. Соли аминогрупп могут также включать четвертичные аммониевые соли, в которых атом азота аминогруппы несет подходящую органическую группу, например алкильную, алкенильную, алкинильную или аралкильную группу. Кроме того, если соединения, описанные в данном документе, содержат кислотный фрагмент, подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли металлов, такие как соли щелочных металлов, например натриевые или калиевые соли, и соли щелочно-земельных металлов, например кальциевые или магниевые соли.

Фармацевтически приемлемые соли, описанные в данном документе, можно получить обычными

- 9 030249

способами, например путем взаимодействия свободного основания продукта с одним или несколькими эквивалентами подходящей кислоты в растворителе или среде, в которой соль нерастворима, или в растворителе, таком как вода, которую удаляют ίη уасио, или при помощи лиофилизации, или обменом анионов имеющейся соли на другой анион на подходящей ионообменной смоле.

Соединения I и II можно вводить перорально, парентерально (например, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно, 1СУ, путем внутриполостной инъекции или инфузии, подкожной инъекции или при помощи имплантата), посредством ингаляционного спрея, назального, вагинального, ректального, сублингвального, уретрального (например, уретрального суппозитория) или местного путей введения (например, гель, мазь, крем, аэрозоль и т.д.), и их можно составлять по отдельности или совместно в подходящих дозированных составах, содержащих традиционные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества, наполнители и основы, подходящие для каждого пути введения. В дополнение к лечению теплокровных животных, таких как мыши, крысы, лошади, крупный рогатый скот, овцы, собаки, кошки, обезьяны и т.д., описанные в данном документе соединения могут быть эффективными по отношению к людям.

Фармацевтические композиции для введения соединений I и II могут быть удобно представлены в форме для однократной дозировки, и их можно получить любым из способов, хорошо известных в области техники, связанной с фармацией. Фармацевтические композиции можно получить, например, путем однородного и тщательного смешивания активного ингредиента с жидким носителем или тонко измельченным твердым носителем или обоими и затем, если необходимо, формованием продукта в нужный препарат и/или помещением его в соответствующую упаковку. В составах для местного применения описанных соединений данную композицию помещают в соответствующий контейнер (например, мягкую тубу с крышкой для дозирования мазей и кремов). В альтернативном случае изделие для дозирования может содержать устройство для дозирования лекарственного средства (например, флакон или пипетку, которая обеспечивает дозирование регулируемой предварительно определенной дозы лекарственного средства к целевому участку). В фармацевтической композиции активное целевое соединение включают в количестве, достаточном для получения желаемого терапевтического эффекта. Например, фармацевтические композиции, описанные в данном документе, могут находиться в форме, подходящей для практически любого способа введения, включая, например, местное, внутриглазное, пероральное, трансбуккальное, системное, назальное, инъекционное, трансдермальное, ректальное, вагинальное и т.д., или в форме, подходящей для введения путем ингаляции или инсуффляции.

Для местного введения ΙΆΚ-селективное соединение(ия) или пролекарств(а) можно составить в виде растворов, гелей, мазей, кремов, суспензий и т.п., которые хорошо известны в данной области техники. Помимо того, что они подходят для введения в кожу, растворы, гели, мази, кремы и суспензии также хорошо подходят для введения непосредственно к глазу. Один вариант осуществления представляет собой фармацевтический состав, содержащий соединения I и/или II, где состав выбран из раствора, геля, мази, крема и суспензии. В одном аспекте такие составы, составленные для местного введения, включают терапевтически эффективное количество соединений I и/или II или их фармацевтически приемлемую соль, такую как хлористо-водородная соль или соль безилата в случае соединения I и в качестве примера лизиновую, холиновую или аргининовую соль соединения II. Конкретные варианты составов для использования в способах, описанных в данном документе, включают терапевтически эффективное количество соединения, основу для местного применения, антиоксидант, смягчающее вещество и эмульгатор. Специалисту в данной области техники будет понятно, что терапевтически эффективное количество соединения может варьировать, но обычно терапевтически эффективное количество составляет от 0,1 до 10% (вес./вес.).

Основа для местного применения может содержать полиэтиленгликоль, имеющий выбранную молекулярную массу. Отдельные варианты осуществления включают полиэтиленгликоль, имеющий молекулярную массу от 3000 до 8000 Да, в качестве основы для местного применения.

В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой мазь и может дополнительно включать смешивающийся с водой растворитель, такой как полиалкиленгликоль, имеющий среднюю молекулярную массу от 200 до 600 Да. В некоторых вариантах осуществления смешивающийся с водой растворитель включает РЕС-400, а еще более предпочтительно РЕС-400, практически не содержащий примесей. В некоторых вариантах осуществления РЕС-400, практически не содержащий примесей, содержит менее 65 частей на миллион формальдегида, менее 10 частей на миллион формальдегида или 1 часть на миллион или менее формальдегида.

Составы для местного применения для использования, описываемого в данном документе, также могут включать в себя вещество, способствующее проникновению, такое как диметил изосорбид, пропиленгликоль или их комбинацию; смягчающее вещество, такое как вода, поверхностно-активное вещество, такое как моностеарат сорбитан, моностеарат полиэтиленгликоля, Ό-α-токофериловый сукцинат полиэтиленгликоля 1000, композицию, содержащую стеарат гликоля/стеарат РЕС32/стеарат РЕС6 и комбинации поверхностно-активных веществ, антиоксидант, такой как бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, аскорбиновую кислоту, токоферол и их комбинации с определенными вариантами осуществления, включающими бутилированный гидрокситолуол в качестве антиоксиданта и

- 10 030249

дополнительный краситель, например от 0,05 до 0,25% (вес./вес.) карамельного красителя.

В определенных вариантах терапевтически эффективное количество составляет от 0,1 до 10% (вес./вес.), и фармацевтический состав также содержит от 15 до 40% (вес./вес.) основы для местного применения, такой как полиалкиленгликоль со средним молекулярным весом от 4000 до 5000 Да; от 25 до 50% (вес./вес.) смешивающегося с водой растворителя, такого как полиалкиленгликоль со средней молекулярной массой от 300 до 500 Да, от 10 до 20% (вес./вес.) вещества, способствующего проникновению, например диметилизосорбида, от 3 до 15% (вес./вес.) смягчающего вещества, такого как вода, от 3 до 9% (вес./вес.) поверхностно-активного вещества, такого как моностеарат полиэтиленгликоля, и от 0,5 до 1,5% (вес./вес.) бутилированного гидрокситолуола в качестве антиоксиданта.

В другом варианте осуществления фармацевтический состав содержит от 0,2 до 6% (вес./вес.) соединения I или его фармацевтически приемлемой соли; от 30 до 40% (вес./вес.) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой от 4000 до 5000 Да, от 30 до 40% (вес./вес.) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой от 300 до 500 Да, 15% (вес./вес.) диметилизосорбида, от 3 до 5% (вес./вес.) воды , 5% (вес./вес.) моностеарата полиэтиленгликоля; 1% (вес./вес.) бутилированного гидрокситолуола и 0,05% карамели.

В еще одном варианте осуществления фармацевтический состав содержит 1% (вес./вес.) соединения I; от 25 до 40% (вес./вес.) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 4500 Да и от 30 до 45% (вес./вес.) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 400 Да.

В еще одном варианте осуществления фармацевтический состав содержит 3% (вес./вес.) соединения I; 32% (вес/вес) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 4500 Да и 38 до 42% (вес./вес.) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 400 Да.

В еще одном варианте осуществления фармацевтический состав содержит 6% (вес./вес.) соединения I; 35% (вес/вес) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 4500 Да и 33 до 35% (вес./вес.) полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой 400 Да.

В одном варианте осуществления состав представляет собой раствор. В другом варианте осуществления состав представляет собой гель. В другом варианте осуществления состав представляет собой суспензию. В еще одном варианте осуществления состав представляет собой крем или мазь. Один вариант осуществления представляет собой любой из вышеупомянутых составов в наборе для местного или локального введения. В одном варианте осуществления композиция представляет собой жидкость, например однородную жидкость или суспензию, реализуемую во флаконе, при помощи которого осуществляется дозирование состава в виде капель или жидкой пленки (например, из наконечника аппликатора, который контактирует с целевым участком кожи для дозирования жидкости в основном только на целевом участке кожи, подлежащем обработке). В одном варианте осуществления состав представляет собой крем или мазь, продаваемый в тубе, которая обеспечивает дозирование состава к целевому участку кожи. В другом варианте осуществления соединение находится в вязкой жидкости (например, карбоксиметилцеллюлозе, гидроксипропилметилцеллюлозе, полиэтиленгликоле, глицерине, поливиниловом спирту или каплях, содержащих масло) для втирания в кожу или закапывания в глаза. Составы могут содержать консерванты или не содержат консервантов (например, в одноразовой емкости).

Для местного применения кремы, мази, желе, гели, растворы или суспензии и т.д. соединений I и II можно использовать для изготовления композиции или лекарственного препарата, в том числе лекарственных препаратов для местного введения. В некоторых вариантах осуществления соединения I и II можно составить для местного введения при помощи полиэтиленгликоля (РЕО). Такие композиции могут необязательно содержать дополнительные фармацевтически приемлемые ингредиенты, такие как разбавители, стабилизаторы и/или вспомогательные вещества. В конкретных вариантах осуществления составы для местного применения составлены для лечения кожных заболеваний и/или расстройств, таких как кожная волчанка, например хроническая кожная волчанка, например ЭЙЕ.

Системные составы включают составы, предназначенные для введения путем инъекции, например подкожной, внутривенной, внутримышечной, интратекальной или внутрибрюшинной инъекции, а также составы, которые предназначены для трансдермального, чресслизистого, перорального или легочного введения.

Применимые препараты для инъекций включают стерильные суспензии, растворы или эмульсии активного соединения(ий) в водной или масляной средах. Композиции также могут содержать вещества для составления, такие как суспендирующее, стабилизирующее и/или диспергирующее вещество или активирующие вещества для активации пролекарства. Составы для инъекции могут быть представлены в форме для однократной дозировки, например в ампулах, или в многодозовых контейнерах и могут содержать дополнительные консерванты. Их также можно предоставлять в шприцах, например шприцах с иглами для введения лекарственного средства в кожу, например непосредственно в очаг ИЬЕ.

В альтернативном случае перед использованием состав для инъекций можно предоставить в форме порошка для повторного растворения в подходящей среде, без ограничения включая стерильную апирогенную воду, буфер, раствор декстрозы и т.д. Порошок может включать активирующее вещество для пролекарства, которое активирует пролекарство при растворении порошка в среде. С этой целью активное соединение(ия) можно высушить любым известным в данной области техники способом, например

- 11 030249

лиофилизацией, и повторно растворить перед использованием.

Для чресслизистого введения в составе используют смачивающие вещества, подходящие для проникновения через барьер. Такие смачивающие вещества известны в данной области техники и включают диметилсульфоксид (ΌΜδΟ) и диметилизосорбид. Однако смачивающие вещества также можно использовать для улучшения доставки активных веществ в кожу.

Для перорального введения фармацевтические композиции могут находиться в форме, например, леденцов, таблеток или капсул, полученных обычными способами с фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, такими как связующие вещества (например, предварительно желатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза), наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или гидрофосфат кальция), смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или крахмалгликолат натрия) или смачивающие вещества (например, лаурилсульфат натрия). На таблетки можно нанести покрытие при помощи способов, хорошо известных в данной области техники, например сахарами, пленками или энтеросолюбильными покрытиями. Кроме того, фармацевтические композиции, содержащие 2,4-замещенный пиримидинамин в качестве активного ингредиента или его пролекарство в форме, подходящей для перорального применения, могут включать, например, пастилки, леденцы, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, или сиропы, или эликсиры. Композиции, предназначенные для перорального применения, можно получить в соответствии с любым способом, известным в данной области техники для производства фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или несколько веществ, выбранных из группы, включающей подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, с тем, чтобы получить лучшие с фармацевтической точки зрения и приятные на вкус препараты. Таблетки содержат активный ингредиент (в том числе пролекарства) в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами, пригодными для изготовления таблеток. Эти вспомогательные вещества могут быть, например, инертными разбавителями, такими как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующими и разрыхляющими веществами (например, кукурузным крахмалом или альгиновой кислотой), связующими веществами (например, крахмалом, желатином или аравийской камедью) и смазывающими веществами (например, стеаратом магния, стеариновой кислотой или тальком). Таблетки могут быть без покрытия или их можно покрыть при помощи известных способов, чтобы задержать дезинтеграцию и абсорбцию в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, можно использовать материал, обеспечивающий временную задержку, такой как моностеарат глицерина или дистеарат глицерина. Они также могут быть покрыты при помощи способов, описанных в патентах США №№ 4256108, 4166452 и 4265874, с получением осмотических терапевтических таблеток для контролируемого высвобождения. Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, также могут быть в форме эмульсий масло-в-воде.

Жидкие препараты для перорального введения могут находиться в форме, например, эликсиров, растворов, сиропов или суспензий или они могут быть предоставлены в виде сухого продукта для смешивания с водой или другим подходящим носителем перед использованием. Такие жидкие препараты можно получить обычными способами с фармацевтически приемлемыми добавками, такими как суспендирующие агенты (например, сироп на основе сорбита, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые жиры), эмульгаторами (например, лецитином или аравийской камедью), неводными основами (например, миндальным маслом, жирными сложными эфирами, этиловым спиртом, егеторйоге™ или фракционированными растительными маслами) и консервантами (например, метил- или пропил-пгидроксибензоатами или сорбиновой кислотой). При необходимости препараты могут также содержать буферные соли, консерванты, ароматизаторы, красители и подслащивающие средства.

Препараты для перорального введения можно составить соответствующим образом для обеспечения контролируемого высвобождения активного соединения или пролекарства, что является хорошо известным.

Для трансбуккального введения композиции могут иметь форму таблеток или пастилок, полученных обычным способом.

Для ректального и вагинального путей введения активное соединение(ия) можно приготовить в виде растворов (для удерживающих клизм), суппозиториев или мазей, содержащих традиционные основы для суппозиториев, такие как масло какао или другие глицериды.

Активное соединение(ия) или пролекарств(а) можно удобно доставлять в форме аэрозольного спрея из упаковок под давлением или распылителя с применением подходящего пропеллента, например дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, фторуглеродов, двуокиси углерода или другого подходящего газа. При введении пролекарства его можно совместно доставить и затем смешать с активирующим веществом, например, для активации соединения II с получением соединения I. В случае аэрозоля под давлением единицу дозирования можно определить с помощью клапана для доставки отмеренного количества. Капсулы и картриджи для применения в ингаляторе или инсуффляторе (например, капсулы и картриджи, состоящие из желатина) можно составить так, что они содержат порошкооб- 12 030249

разную смесь соединения и подходящую порошкообразную основу, такую как лактоза или крахмал.

Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильных водных или масляных суспензий для инъекций. Эти суспензии можно получить в соответствии с известными способами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих веществ и суспендирующих веществ, которые были упомянуты выше. Стерильный препарат для инъекций также может представлять собой стерильный раствор для инъекций или суспензию в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе. Среди приемлемых сред и растворителей, которые можно использовать, можно назвать воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Соединения I и II можно также вводить в форме суппозиториев для ректального или уретрального введения лекарственного средства. В определенных вариантах осуществления соединения можно составить в виде уретральных суппозиториев, например, для использования при лечении нарушений репродуктивной функции, в особенности у мужчин, например для лечения тестикулярной дисфункции.

В соответствии с настоящим изобретением 2,4-замещенные пиримидиндиаминовые соединения можно использовать для получения композиции или лекарственного препарата, включая лекарственные препараты, пригодные для ректального или уретрального введения. Настоящее изобретение также относится к способам получения композиций, включающих 2,4-замещенные пиримидиндиаминовые соединения в форме, которая подходит для уретрального или ректального введения, в том числе суппозиториев.

К числу устройств, которые можно использовать для введения определенных примеров соединений I и II, относятся хорошо известные в данной области техники, такие как дозирующие ингаляторы, распылители жидкости, ингаляторы с сухим порошком, опрыскиватели, пенообразователи, тепловые испарители и т.п. Другая подходящая методика для введения определенных 2,4-замещенных пиримидиндиаминовых соединений включает электрогидродинамические распылители. Спреи, аэрозоли, губчатые аппликаторы и пенные дозаторы можно использовать для введения соединений либо рег 8е, либо в составах непосредственно в кожу, либо путем внутрикожной инъекции непосредственно в очаги кожной ЬЕ, например очаги ОБЕ.

Обычно составы для введения в кожу содержат фармацевтически эффективное количество 2,4пиримидиндиаминового соединения, раскрытого в данном документе, например от приблизительно 0,0001 до приблизительно 1,0 % (вес./вес.)или более. В некоторых составах фармацевтически эффективное количество соединения составляет от 0,0003 до приблизительно 0,1% (вес./вес.), например от приблизительно 0,003 до приблизительно 0,5% (вес./вес.) или от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,03% (вес./вес.). В других примерах соединение присутствует в количестве по меньшей мере 2, 3 или 5% (вес./вес.).

В некоторых примерах офтальмологическая композиция, содержащая раскрытое здесь 2,4пиримидиндиаминовое соединение для внутриглазного введения включает вещество, регулирующее тоничность, буферный раствор или и то, и другое. В некоторых примерах офтальмологических композиций вещество, регулирующее тоничность, представляет собой простой углевод или сахарный спирт. Как известно специалистам в данной области техники, вещества, регулирующие тоничность, можно использовать в композициях по настоящему изобретению для регуляции тоничности композиции предпочтительно до такой, как у нормальных слез. Примеры подходящих веществ, регулирующих тоничность, включают без ограничения хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, хлорид кальция, углеводы, такие как глюкоза, фруктоза, галактоза, многоатомные спирты, такие как сахарные спирты, включая в качестве примера маннит, сорбит, ксилит, лактит, изомальт, мальтит и их комбинации. Композиции, содержащие буферный раствор, включают в некоторых примерах фосфат, цитрат или и то, и другое.

2,4-Замещенное пиримидиндиаминовое соединение(ия) или пролекарств(а), описанные в данном документе, или их композиции обычно используют в количестве, эффективном для достижения желаемого результата, например в количестве, эффективном для лечения или предупреждения определенного состояния, подлежащего лечению. Соединение(ия) можно вводить в терапевтических целях для достижения терапевтического эффекта или в профилактических целях для достижения профилактического эффекта. Под терапевтическим эффектом подразумевают устранение или уменьшение интенсивности основного заболевания, подлежащего лечению и/или устранение или уменьшение интенсивности одного или нескольких симптомов, связанных с основным заболеванием, вследствие чего пациент сообщает об улучшении самочувствия или состояния, несмотря на то, что пациент все еще может страдать основным заболеванием. Например, введение соединения пациенту, страдающему от ОБЕ. обеспечивает терапевтический эффект не только в случае устранения или смягчения кожного очага, но также, когда пациент сообщает о снижении тяжести или продолжительности симптомов, связанных с ЭЬ-Е. Терапевтический эффект также включает остановку или замедление прогрессирования заболевания, независимо от того, достигнуто существенное изменение симптомов или нет.

Для введения с профилактической целью соединение можно вводить пациенту с риском развития одного из ранее описанных состояний. Например, если неизвестно, есть ли у пациента аллергия на конкретное лекарственное средство, соединение можно вводить перед введением лекарственного средства, чтобы избежать или смягчить аллергическую реакцию на лекарственное средство. В альтернативном

- 13 030249

случае можно применять введение с профилактической целью для того, чтобы избежать появления симптомов у пациента с диагнозом основного заболевания. Например, соединение можно вводить страдающему аллергией до ожидаемого контакта с аллергеном. Соединения также можно вводить в профилактических целях здоровым людям, которые систематически подвергаются воздействию агентов, известных в связи с вышеописанными болезнями, с целью предупреждения возникновения расстройства. Например, соединение можно вводить здоровому индивидууму, который систематически подвергается воздействию аллергена, который, как известно, вызывает аллергическую реакцию в глазах, такого как пыльца, в попытке защитить индивидуума от развития аллергии.

Количество вводимого соединения будет зависеть от ряда факторов, включая, например, конкретное состояние, подлежащее лечению, способ введения, тяжесть патологического состояния, подлежащего лечению, а также возраста и веса пациента, биодоступности определенного активного соединения и т.д. Определение эффективной дозы находится в пределах возможностей специалиста в данной области техники. Квалифицированный специалист будет в состоянии определить оптимальную дозу для конкретного индивидуума. Эффективные дозы могут быть рассчитаны сначала в анализах ίη νίίτο. Например, начальная доза для применения на животных может быть составлена для достижения концентрации активного соединения в циркулирующей крови или сыворотке, которая равна или выше 1С₅₀ для конкретного соединения, как измерено в анализе ίη νίίτο, например в анализах ίη νίίτο, описанных в примерах 3 и 4 в данном документе. Сходным образом начальную дозу пролекарства для системного применения у животных можно составить для достижения концентрации метаболита активного соединения в циркулирующей крови или сыворотке, которая равна или превышает 1С₅₀ для конкретного соединения в анализе ίη νίίτο. Расчет дозы для достижения такой концентрации в циркулирующей крови или сыворотке с учетом биодоступности конкретного соединения находится в пределах компетенции специалистов в данной области. Применительно к руководству следует читать Ρίη§1 & Αοοάϋωγ, "Сеиега1 Ргтс1р1е5," В: Οοοώηαη аиб Сбтаи'5 ТНе РНагтасси11са1 Ва818 ο£ ΤΗοΓαρουΙιοδ, СНарЮг 1, рр. 1-46, 1а1с51 ο6ίίίοη, Ροι^αιηοη Рге88 и приведенным там ссылкам.

Начальные дозы также можно рассчитать на основании данных ίη νίνο с использованием животных моделей, таких как описанные в примере 9. Животные модели, используемые для тестирования эффективности соединений для лечения или предупреждения различных заболеваний, описанных выше, хорошо известны в данной области техники. Величины дозы для системного введения обычно будут находиться в диапазоне от приблизительно 0,0001, или 0,001, или 0,01 мг/кг в сутки до около 100 мг/кг в сутки, но могут быть выше или ниже, в зависимости от, среди других факторов, активности соединения, его биодоступности, способа введения и различных факторов, рассмотренных выше. Величину дозы для системного введения и интервал можно регулировать индивидуально для обеспечения уровней соединения(ий) в плазме, которые являются достаточными для поддержания терапевтического или профилактического эффекта. Например, соединения можно вводить один раз в неделю, несколько раз в неделю (например, через день), один раз в день или несколько раз в день в зависимости, среди прочего, от способа введения, конкретного симптома, подлежащего лечению, и решения лечащего врача. В случаях локального введения или селективного поглощения, например локального местного введения, эффективная локальная концентрация активного соединения(ий) может быть не связанной с концентрацией в плазме. Квалифицированные специалисты смогут оптимизировать эффективные локальные дозы без излишнего экспериментирования. Ввиду очень высокого терапевтического индекса местного применения к коже дозы могут быть увеличены сверх общих системных доз без значительных дополнительных проблем, связанных с побочными эффектами и токсичностью.

Предшествующее раскрытие, относящиеся к требованиям к дозировке применительно к 2,4замещенным пиримидиндиаминовым соединениям, имеет отношение к дозам, необходимым применительно к пролекарствам, при этом с пониманием, очевидным специалисту в данной области техники, что количество вводимого пролекарств(а) будет также зависеть от множества факторов, включая, например, биологическую доступность конкретного пролекарств(а), показатель превращения и эффективность соединения активного лекарственного средства при выбранном пути введения, совместного введения активирующего вещества и т. д. Определение эффективной дозы пролекарств(а) для конкретного применения и способа введения находится в пределах компетенции специалиста в данной области техники.

Для местного или внутриглазного введения эффективными дозами могут быть те дозы, при которых не наблюдается существенной системной циркуляции соединений, возникающей в результате введения в кожу или глаз, например, где состав для местного применения применяют непосредственно к кожному очагу, и локализованная доза в значительной степени использована до достижения существенной системной циркуляции.

Дополнительные соединения, которые можно использовать вместо соединений I и II в раскрытых способах, специально рассматриваются в данном документе и описываются в патенте США № 7491732, выданном Агдабе еί а1. 17 февраля 2009 года, и публикации заявки на патент США № 2007/0203161, опубликованной 30 августа 2007 года, оба документа из которых включены в данный документ посредством ссылки.

Синтез соединений.

- 14 030249

Соединения I и II, а также соли ΙΙΙ-νΐΙ, синтезируют, как описано ниже, или по аналогии с синтезами, описанными ниже. Альтернативные синтезы будет понятны специалисту в данной области техники.

Пример 1

I. №-(3-Аминосульфонил-4-метилфенил)-5-фтор-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин.

4-Нитрофенол (1,00 г, 7,19 ммоль), пропаргил бромид (80 мас.% в толуоле;0,788 мл, 7,09 ммоль) и К₂СО₃ (1,08 г, 7,84 ммоль) объединяли и перемешивали в ацетоне (16,0 мл) при 60°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (200 мл). 4-(проп-2инилокси)нитробензол выделяли в виде белого твердого вещества фильтрацией под вакуумом (1,12 г). ¹Н ЯМР (СЭС1з): δ 8,22 (ά, 1=9,0 Гц, 2Н), 7,05 (ά, 1=9,0 Гц ,2Н), 4,80 (ά, 1=2,4 Гц, 2Н), 2,59 (I, 1=2,4 Гц, 1Н).

4-(Проп-2-инилокси) нитробензол (0,910 г, 5,13 ммоль), железо (1,42 г, 25,3 ммоль) и НН₄С1 (0,719г, 12,8 ммоль) энергично перемешивали в смеси ЕЮН/вода (1:1, 55 мл ) при 70°С в течение 15 мин. Реакционную смесь фильтровали в горячем состоянии через диатомовую землю и концентрировали ΐη уасио. Остаток суспендировали в 10% 2Ν аммиачном растворе метанола в дихлорметане, обрабатывали ультразвуком и фильтровали через диатомовую землю. Концентрирование дало 4-(проп-2-инилокси) анилина в виде масла, который использовали без дальнейшей очистки. ¹Н ЯМР (СОС1₃): δ 6,82 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 6,64 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 4,61 (ά, 1=2,4 Гц, 2Н), 2,50 (ΐ, 1=2,4 Гц, 1Н).

4-(Проп-2-инилокси) анилин (0,750 г, 5,10 ммоль) и 2,4-дихлор-5-фторпиримидин (1,27 г, 0,760 ммоль, коммерчески доступный от Зщша-АШпсй из Милуоки, Висконсин, США) перемешивали в МеОН/вода (4:1, 35 мл) при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли Е1ОАс (200 мл) и промывали 1Ν НСЛ (50 мл) и солевым раствором (50 мл). Органический слой высушивали (М§8О₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель, концентрацию гексанов изменяли до Е1ОАс:гексаны (1:10)) с получением 2-хлор-5фтор-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-4-пиримидинамина в виде светло-коричневого твердого вещества (0,514 г). ‘Н ЯМР (СОС1₃): δ 8,03 (ά, 1=2,7 Гц, 1Н), 7,53 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,02 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 6,86 (8, 1Н), 4,71 (ά, Д=2,4 Гц, 2Н), 2,55 (ΐ, I 2,4 Гц, 1Н); ЬСМ8: чистота: 99%; М8 (ш/е): 279 (МН⁴)·

2-Хлор-5-фтор-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-4-пиримидинамин (0,514 г, 1,85 ммоль), 3(аминосульфонил)-4-метиланилин (0,689 г, 3,70 ммоль, полученный восстановлением коммерчески доступного 2-метил-5-нитробензолсульфонамида или синтезированный, как описано ниже) и трифторуксусную кислоту (0,186 мл, 2,41 ммоль) объединяли с 1РгОН (6,0 мл) в герметичном сосуде и нагревали при 100°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли 1Ν НСЛ (80 мл). №-(3-аминосульфонил-4-метилфенил)-5-фтор-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин (I) выделяли в виде белого твердого вещества путем фильтрации с отсасыванием (0,703 г). ‘Н ЯМР (ОМ8О^6): δ 10,08 (Ь8, 2Н), 8,19 (ά, 1=4,5 Гц, 1Н), 7,89 (8, 1Н), 7,74 (άά, 1=2,4 и 8,4 Гц, 1Н), 7,58 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,32 (Ь8, 2Н), 7,23 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 6,97 (ά, 1=8,4 Гц, 2Н), 4,79 (ά, 1=2,1 Гц, 2Н), 3,59-3,55 (ш,1Н), 2,53 (8, 3Н); ЕСМЗ:чистота: 97%; М3(ш/е):428 (МН+).

II. 5-Фтор-Л2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-Х4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4пиримидинамин.

2-(3-Аминосульфонил-4-метилфенил)-5-фтор-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамин, I, (0,200 г, 0,467 ммоль), ОМАР (40 мг, 0,33 ммоль)) и триэтиламин (0,118 мл, 0,847 ммоль) перемешивали в ТНЕ (6,0 мл). Пропионовый ангидрид (0,180 мл, 1,40 ммоль) добавляли к раствору по каплям. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Раствор разбавляли этилацетатом (50 мл) и промывали водой (5x25 мл) и солевым раствором (10 мл). Органический слой высушивали (М§8О₄), фильтровали и выпаривали. Остаток суспендировали в этилацетате (25 мл), обрабатывали ультразвуком, и твердое вещество собирали при помощи фильтрации с получением 5-фтор-Л2(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-Ж-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина,

II, (0,20 г). ‘Н ЯМР (ОМ8О^6): δ 12,01 (8, 1Н), 9,44 (8, 1Н), 9,26 (8, 1Н), 8,16 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н), 8,06 (άά, 1=0,3 и 3,3 Гц, 1Н), 8,00 (άά, 1=2,1 и 7,8 Гц, 1Н), 7,69 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,19 (ά, 1=8,4 Гц, 1Н), 6,95 (ά, 1=8,7 Гц, 2Н), 4,77 (ά, 1=2,1 Гц, 2Н), 3,56 (I, 1=2,1 Гц, 1Н), 2,49 (8, 3Н), 2,24 (ц, 1=7,2 Гц, 2Н), 0,89 (I, 1=7,2 Гц, 3Н); ЕСМЗ: чистота: 98%; М8(ш/е): 484(МН+).

- 15 030249

III. Мононатриевая соль 5-фтор-Х2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-Ж-[4-(проп-2инилокси) фенил]-2,4-пиримидиндиамина.

5-Фтор-Х2-(4-метил-3-пропиониламиносульфонилфенил)-Х4-[4-(проп-2-инилокси)фенил]-2,4пиримидиндиамина, II, (0,125 г, 0,258 ммоль) суспендировали в ацетонитриле (1,5 мл) и воде (1,5 мл) и охлаждали на бане со льдом. Раствор 1Ν ΝαΟΗ водн. (0,260 мл) добавляли по каплям. Реакционную смесь перемешивали до тех пор, пока она не стала прозрачной, фильтровали через стекловату и лиофилизировали с получением натриевой соли II. ¹Н ЯМР (ΏΜ3Ο-ά6): δ 9,17 (Ъ§, 2Η), 8,01 (ά, 1=3,6 Гц, 1Η), 7,89 (δ, 1Η), 7,78-7,69 (т, 3Η), 6,99-6,92 (т, 3Η), 4,76 (ά, 1=2,1 Гц, 1Η), 2,43 (δ, 3Η), 1,95 (ц, 1=7,2 Гц, 2Η), 0,86 (ί, 1=7,2 Гц, 3Η); ЬСМ3: чистота: 98%; М3(т/е): 484 (МН+).

Следующие соединения получали аналогично приведенным выше.

IV. Калиевая соль 5-фтор-Х2-[4-метил-3-^-пропиониламиносульфонил)фенил]-Ж-[4-(проп-2инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина.

¹Н ЯМР (ΏΜ3Ο-ά6): δ 9,16 (δ, 1Η), 9,14 (δ, 1Η) 8,01 (ά, 1=3,6 Гц, 1Η), 7,85 (ά, 1=2,1 Гц, 1Η), 7,75-7,70 (т, 3Η), 6,97-6,92 (т, 3Η), 4,76 (ά, 1=1,8 Гц, 2Η), 3,55 (ί, 1=2,4 Гц, 1Η), 2,42 (δ, 3Η) 1,91 (ц, 1=7,5 Гц, 2Η), 0,85 (ί, 1=7,5 Гц, 3Η); ЬСМ3: чистота: 97%; М3 (т/е): 484 (исходное, МН+).

V. Кальциевая соль 5-фтор-Х2-[4-метил-3-^-пропиониламиносульфонил)фенил]-Ж-[4-(проп-2инилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина.

¹Н ЯМР (ΏΜ3Ο-ά6) δ 9,16 (δ, 2Η), 8,00 (ά, 1=3,6 Гц, 1Η), 7,88 (ά, 1=1,8 Гц, 1Η), 7,75-7,69 (т, 3Η),

6.97- 6,92 (т, 3Η), 4,76 (ά, 1=1,8 Гц, 2н), 3,55 (ί, 1=2,1 Гц, 1Η), 2,43 (δ, 3Η), 1,94 (ц, 1=7,5 Гц, 2Η), 0,87 (ί, 1=7,5 Гц, 3Η); ЬСМ3: чистота: 98%; М3 (т/ζ): 484 (исходное, ΜΗ+).

VI. Аргининовая соль 5-фтор-Х2-[4-метил-3-^-пропиониламиносульфонил)фенил]-Ж-[4-(2пропинилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина.

¹Н ЯМР (ϋ₂Ο): δ 7,61 (ά, 1=3,9 Гц, 1Η), 7,57-7,55 (т, 1Η), 7,36-7,31 (т, 1Η), 7,12 (ά, 1=8,7 Гц, 2Η), 6,88 (ά, 1=8,7 Гц, 1Η), 6,72 (ά, 1=9,0 Гц, 2Η), 4,77-4,75 (т, 2Η), 3,60 (ί, 1=6,0 Гц, 1Η), 3,09 (ί, 1=6,9 Гц, 2н), 2,84-2,81 (т, 1Η), 2,35 (δ, 3Η), 2,03 (ц, 1=5,7 Гц, 2Η), 1,80-1,72 (т, 2Η), 1,61-1,48 (т, 2Η), 0,855 (ί, 1=7,5 Гц, 3Η); ЬСМ3: чистота: 98%; М3 (т/ζ): 484 (исходное, МН+).

VII. Холиновая соль 5-фтор-Х2-[4-метил-3-^-пропиониламиносульфонил)фенил]-Ж-[4-(2пропинилокси)фенил]-2,4-пиримидиндиамина.

¹Н ЯМР (ϋΜ3Ο-ά6): δ 9,16 (δ, 2Η), 8,00 (ά, 1=3,6 Гц, 1Η), 7,85 (ά, 1=1,8 Гц, 1Η), 7,75-7,69 (т, 3Η),

6.97- 6,90 (т, 3Η), 5,27 (ί, 1=4,8 Гц, 1Η), 4,76 (ά, 1=1,8 Гц, 2Η), 3,86-3,77 (т, 2Η), 3,56-3,54 (т, 1Η), 3,403,54 (т, 2Η), 3,08 (δ, 9Η), 2,42 (δ, 3Η); ЬСМ3: чистота: 99%; М3 (т/ζ): 484 (исходное, МН+).

Пример 2.

1 СР5О₃Н

110°С 24М г НуРО/С »

2. ЕЮАс ΝΗ₄ΟΗ *

5-Амин-2-метилбензолсульфонамид.

4-Метилнитробензол (20 ммоль) обрабатывали при 0°С хлорсульфоновой кислотой (5,29 мл, 80 ммоль), а затем после доведения гомогенного раствора до комнатной температуры перемешивали при 110°С в течение 24 ч. Полученную суспензию затем выливали в воду со льдом (100 г), экстрагировали диэтиловым эфиром (3x75 мл), и органическую фазу промывали водой (75 мл), затем высушивали над безводным сульфатом натрия. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного сульфонилхлорида, который растворяли в этилацетате и перемешивали с гидроксидом аммония в течение ночи при комнатной температуре. После того как этилацетатный слой отделяли, водный слой экстрагировали этилацетатом. Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, и растворитель удаляли под пониженным давлением. Полученное масло очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель, гексаны, затем 10, 20, до 50% этилацетата в гексане с получением 3-аминосульфонил-4-метилнитробензола, ЬСМ3: чистота: 95%, М3 (м/е): 217 (МН+).

К раствору 3-аминосульфонил-4-метилнитробензола в дихлорметане и метаноле добавляли 10% Ρά/С, и смесь встряхивали в атмосфере водорода при 50 фунт/кв. дюйм в течение 15 мин. Смесь фильтровали через диатомовую землю, и отфильтрованный осадок промывали метанолом. Объединенные органические растворители концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который затем очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии (этилацетат:гексан 1:1) с получением 3-аминосульфонил-4-метиланилина, ЬСМ3: чистота: 87%, МС (м/е): 187 (МН+).

Пример 3. Анализ при помощи линии В-клеток Κатοδ, стимулированной П.-4.

Одним из способов анализа ингибирования 1ЛК является обнаружение воздействия соединения I и II на активацию продуктов гена, регулирующего последующие звенья сигнальных каскадов. В Каикж/П ,4 анализе В-клетки стимулировали при помощи цитокина интерлейкина-4 (П.-4), что приводило к активации 1ЛК/3ТЛТ-пути посредством фосфорилирования киназ семейства 1ЛК, 1ЛК1 и 1ЛК3, которые, в свою очередь, фосфорилировали и активировали транскрипционный фактор 3Ш-6. Один из генов, активируемых активированным 3ίαί-6, является геном рецептора СЭ23 с низким сродством к ^Е. Для изучения влияния ингибиторов на 1ЛК1 и 1ЛК3-киназы стимулировали человеческие В-клетки Κатοδ при по- 16 030249

мощи человеческого 1Ь-4. От 20 до 24 ч после стимуляции клетки окрашивали для выявления повышенной регуляции СИ23 и анализировали с помощью проточной цитометрии (РАС8). Уменьшение количества присутствующих СИ23 по сравнению с контрольными условиями указывало на то, что тестируемое соединение активно ингибирует ΙΆΚ-киназы. Иллюстративный анализ этого типа описан более подробно ниже.

В-клетки, стимулированные цитокином интерлейкином-4 (1Ь-4), активировали 1АК/§1аТ-путь посредством фосфорилирования киназ семейства 1АК, ίΛΚ-1 и ίΛΚ-3. которые, в свою очередь, фосфорилировали и активировали транскрипционный фактор §ТаТ-6. Один из генов, активируемых активированным §ТаТ-6, является геном рецептора СИ23 с низким сродством к 1дЕ. Для изучения влияния ингибиторов (например, 2,4-замещенных пиримидиндиаминовых соединений, описанных в данном документе) на ΙΆΚ1- и ,ТАК3-киназы стимулировали человеческие В-клетки Каток при помощи человеческого 1Ь-4.

В-клеточная линия Каток была приобретена из АТСС (АТСС, № по каталогу СКЬ-1596). Клетки культивировали в среде ΚΡΜΣ 1640 (Се11дго, МеФаТеск, 1пс, Херндон, Вирджиния, № по каталогу 10040-СМ) с 10%-ной фетальной бычьей сывороткой (РВ§), инактивированной нагреванием (ЙКИ Вюкаепсек, 1пс, Ленекса, Канзас, № по каталогу 12106-500М) в соответствии с протоколом для культивирования от АТСС. Клетки поддерживали при плотности 3,5х10⁵. За день до эксперимента В-клетки Каток разводили до 3,5х10⁵ клеток/мл, чтобы обеспечить то, чтобы они находились в фазе логарифмического роста.

Клетки осаждали центрифугированием и суспендировали в среде КРМ1 с добавлением 5% сыворотки. 5х10⁴ клеток использовали на точку в 96-луночном планшете для тканевых культур. Клетки предварительно инкубировали с соединением или средовым контролем ИМ8О (Зщта-АИпск Сент-Луис, Миссури, № по каталогу И2650) в течение 1 ч при 37°С в инкубаторе. Затем клетки стимулировали при помощи 1Ь-4 (РергоТеск 1пс., Роки Хилл, Нью-Джерси, № по каталогу 200-04) при конечной концентрации 50 ед./мл в течение 20-24 ч. Затем клетки центрифугировали и окрашивали при помощи антител к СИ23РЕ (ВИ Ркагтгпдеп, Сан-Диего, Калифорния, № по каталогу 555711) и анализировали с помощью РЛС8. Обнаружение проводили с использованием проточного цитометра системы ВИ Ь§К I, приобретенного от ВесЮп Июкшкоп Вюкшепсек, Сан-Хосе, Калифорния. 1С₅₀, рассчитанный на основе результатов этого анализа, представлен в табл. 1.

Пример 4. Анализ пролиферации первичных человеческих Т-клеток, стимулированных 1Ь-2.

Активность соединений, описанных в данном документе, в отношении .ТАК может быть дополнительно охарактеризовали путем анализа действия соединений I и II, описанных в данном документе, на пролиферативный ответ первичных человеческих Т-клеток. В этом анализе первичные человеческие Тклетки, полученные из периферической крови и предварительно активированные посредством стимуляции Т-клеточного рецептора и СИ28, пролиферировали в культуре в ответ на цитокин интерлейкин-2 (ГЬ2). Этот пролиферативный ответ зависел от активации 1АК1- и 1АК3-тирозинкиназ, которые фосфорилировали и активировали транскрипционный фактор §ТаТ-5. Первичные человеческие Т-клетки инкубировали с соединениями I и II в присутствии ^-2 в течение 72 ч, и в ходе анализа измеряли конечную внутриклеточную концентрацию АТФ для оценки жизнеспособности клеток. Снижение пролиферации клеток по сравнению с контрольными условиями являлось показателем ингибирования сигнального пути 1АКкиназы. Иллюстративный анализ этого типа описан более подробно ниже.

Первичные человеческие Т-клетки, полученные из периферической крови и предварительно активированные путем стимуляции Т-клеточного рецептора и СИ28, пролиферировали ш уПго в ответ на цитокин интерлейкин-2 (ТЬ-2). Этот пролиферативный ответ зависел от активации тирозинкиназ .ТАК-1 и .ТАК-3, которые фосфорилировали и активировали транскрипционный фактор 8ТаТ-5.

Первичные человеческие Т-клетки получали следующим образом. От здоровых добровольцев получали цельную кровь, смешивали в соотношении 1:1с РВЗ, наслаивали на Исок Нурасще (Атегккат Ркагташа ВюТеск, Пискатауэй, Нью-Джерси, № в каталоге 17-1440-03) при соотношении 2:1 кровь/РВ§:РюоП и центрифугировали в течение 30 мин при 4°С при 1750 об/мин. Получали лимфоциты на поверхности раздела сывороткаЫсок и дважды промывали 5 объемами РВЗ. Клетки ресуспендировали в среде Иссель (Оетгш Вю-ргойисТк, Вудленд, Калифорния, № в каталоге 400-103), содержащей 40 ед./мл рекомбинантного ТЬ-2 (К апй И ЗукТетк, Миннеаполис, Миннесота, № в каталоге 202-ТЬ (20 мкг)) и высевали в колбу, предварительно покрытую 1 мкг/мл антител к СИ3 (ВИ Ркагтгпдеп, Сан-Диего, Калифорния, № в каталоге 555336) и 5 мкг/мл антител к СИ28 НттипоЮск Весктап Соикег оГ Вгеа СакГогта, № в каталоге ΣΜ1376). Первичные Т-клетки стимулировали в течение 3-4 дней, затем перемещали в новую колбу и выдерживали в КΡМI с добавлением 10% РВ§ и 40 ед./мл ΣΕ-2.

Первичные Т-клетки дважды промывали РВЗ с целью удаления ТЕ-2 и ресуспендировали в среде Иссель при 2х10⁶ клеток/мл. 50 мкл клеточной суспензии, содержащей 80 ед./мл [0-2, добавляли в каждую лунку 96-луночного плоскодонного черного планшета. Для нестимулированной контрольной группы ТЬ-2 исключили из последнего ряда на планшете. Соединения последовательно разводили в диметилсульфоксиде (ИМ8О, чистота 99,7%, тестированные культуры клеток, Зщта-АИпск Сент-Луис, Миссури, № в каталоге И2650) от 5 мМ при 3-кратных разведениях, а затем развели 1:250 в среде Иссель. До- 17 030249

бавляли в двух повторностях 50 мкл соединения 2Х на лунку, и клетки оставляли для пролиферации в течение 72 ч при 37°С.

Пролиферацию измеряли с использованием люминисцентного анализа жизнеспособности клеток Се11ТПег-С1о® (Рготеда), при помощи которого определяли число жизнеспособных клеток в культуре на основе количества присутствующего АТФ как показателя метаболически активных клеток. Обеспечивали оттаивание подложки и оставляли нагреваться до комнатной температуры. После смешивания реагента Се11 ТПег-С1о и разбавителя в каждую лунку добавляли 100 мкл. Планшеты перемешивали на орбитальном встряхивателе в течение двух минут для стимуляции лизиса и инкубировали при комнатной температуре еще в течение 10 мин, чтобы обеспечить уравновешивание сигнала. Обнаружение проводили с использованием \Уа11ас Ую1ог 2 1420 тиШ1аЪе1 соииТег, приобретенного у Регкт Ε1те^, Шелтон, Коннектикут. ТС₅₀, рассчитанные на основе результатов этого анализа представлены в табл. 1.

Пример 5. Линия эпителиальных клеток А549, стимулированная ΙΡΝγ.

Активность соединений, описанных в данном документе, в отношении 6ΆΚ можно охарактеризовать при помощи анализа воздействия соединений Ι и ΙΙ, описанных в данном документе, на эпителиальные клетки легкого А549 и клетки И937. Эпителиальные клетки легкого А549 и клетки И937 активируют поверхностную экспрессию ТСАМ-1 (СЭ54) в ответ на ряд разнообразных стимулов. Поэтому, используя экспрессию ЮАМ-1 в качестве показателя, действия тестируемого соединения на различные сигнальные пути можно оценить на клетках того же типа. Стимуляция при помощи ΙΦ-1 β посредством ΙΦ-1 β рецептора активирует ТКАРб/ЯРкВ-путь, приводя к активации ТСАМ-1. ΙΡΝγ активирует ЮАМ-1 посредством активации 1АК1/ТАК2-пути. Активацию ЮАМ-1 можно определить количественно с помощью проточной цитометрии по кривой дозы для соединения и рассчитанным значениям ΕС5₀.

Примеры анализов этого типа описаны более подробно ниже и в примере б.

Эпителиальные клетки легкого А549 активируют поверхностную экспрессию ЮАМ-1 (СЭ54) в ответ на различные стимулы. Поэтому, используя экспрессию ЮАМ-1 в качестве показателя, можно оценить воздействия соединения на различные сигнальные пути в клетках того же типа. ΙΡΝγ активирует ЮАМ-1 посредством активации 1АК/81а1 пути. В этом примере оценивали активацию ЮАМ-1 ΙΡΝγ.

А549 линия эпителиальных клеток карциномы легкого взята из американской коллекция типовых культур. Стандартное выращивание осуществили со средой Р12К (МеФа1еск Фс.. Ленекса, Канзас, кат. № 10-025-СУ) с 10%-ной фетальной бычьей сывороткой, 100 МΕ пенициллина и 100 нг/мл стрептомицина (полная среда Р12К). Клетки инкубировали в увлажненной атмосфере 5% СО₂ при 37°С. Перед использованием в анализе А549 клетки отмыли РВ8 и обрабатывали трипсином (МеФа1еск Фс, кат. № 25052-СП для отделения клеток. Взвесь отмытых клеток трипсина нейтрализовали с использованием полной среды Р12К и центрифугировали для осаждения клеток. Осадок клеток ресуспендировали в полной среде Р12К при концентрации 2,0х10⁵/мл. Клетки высеяли при 20000 на лунку в 100 мкл общего объема, в плоскодонной чашке для выращивания тканевых культур и оставили прикрепиться в течение ночи.

На второй день клетки А549 предварительно инкубировали с 2,4-замещенным пиримидиндиаминовым тестируемым соединением или ОМ8О (контроль) (Ыдта-АИпск Сент-Луис, Миссури, каталог № Ό2650) в течение 1 ч. Затем клетки активировали ΦΝγ (75 нг/мл) (Рерго1еск Фс, Роки Хилл, НьюДжерси, кат. № 300-02) и оставили для выращивания на 24 ч. В последнем тесте диапазон доз соединения составлял от 30 мкм до 14 нМ в 200 мкл среды Р12К, содержащей 5% РВ8, 0,3% ОМ8О.

На третий день клеточную среду удалили, и клетки промывали 200 мкл РВ8 (фосфатно-солевой буферный раствор). Каждую лунку трипсинизировали для диссоциации клеток, затем нейтрализовали добавлением 200 мкл полной среды Р12К. Клетки осадили и окрашивали при помощи конъюгированного с АРС мышиного антитела к ЮАМ-1 (СЭ54) человека (ΒΌ РкагтФдеп, Сан-Диего, Калифорния, № в каталоге 559771) в течение 20 мин при 4°С. Клетки отмыли ледяным буферным раствором РАС8 (РВ8+2% РВ8), и поверхностную экспрессию ЮАМ-1 анализировали с помощью проточной цитометрии. Обнаружение проводили с использованием проточного цитометра системы ВО Ь8К Ι, приобретенной от ВО Вюкаеисек, Сан-Хосе, Калифорния. События закрыли для активного разброса и рассчитали среднее геометрическое (ВесФи-ПккФкои С’еПОией версия программного обеспечения 3.3, Франклин Лейке, НьюДжерси). Средние геометрические величины разместили в виде зависимости от концентрации соединения для получения кривой доза-эффект. Ю50, рассчитанные на основе результатов этого анализа, представлены в табл. 1.

Пример б. Анализ И937 ΦΝγ ЮАМ1 РАС8.

И937 моноциты человека активируют поверхностную экспрессию ЮАМ-1 (СЭ54) в ответ на ряд различных стимулов. Поэтому, используя экспрессию ЮАМ-1 в качестве показателя, можно оценить воздействия соединения на сигнальные пути в клетках того же типа. ΦΝγ активирует ЮАМ-1 посредством активации 1АК/8ТАТ-пути. В этом примере оценивали активацию ЮАМ-1 при помощи ΦΝγ.

И937 линию моноцитов человека получили из АТСС, Роквилл Мэриленд, каталог № СКЕ-1593,2, и культивировали в КРМ1-1640, содержащей 10% (об./об.) РС8. Клетки И937 выращивали в 10% КРМР Затем клетки высеяли при концентрации 100000 клеток на 1б0 мкл в плоскодонные 9б-луночные планшеты. Тестируемые соединения затем разбавляли следующим образом: 10 мМ тестируемого соединения

- 18 030249

развели 1:5 в ΌΜ8Ο (3 мкл 10 мМ тестируемого соединения в ΌΜ8Ο, 12 мкл) с последующими 1:3 последовательными разведениями тестируемого соединения в ΌΜ8Ο (6 мкл тестируемого соединения последовательно разводили в 12 мкл ΌΜ8Ο с получением 3-кратного разбавления). Затем 4 мкл испытуемого соединения переместили к 76 мкл 10% ΚΡΜI,получив в результате 10Х раствор (100 мкМ испытуемого соединения, 5% ΌΜ8Ο). В контрольных лунках 4 мкл ΌΜ8Ο разбавляли в 76 мкл 10% ΚΡΜΣ.

Анализ проводили в двух повторностях с 8 точками (8 3-кратных разведений концентраций от 10 мкл) и 4 лунками исключительно с ΌΜ8Ο (контрольные лунки) при стимулированных условиях и 4 лунками исключительно с ΌΜ8Ο при условиях без стимуляции.

Разбавленное соединение на планшете 2Х смешали с использованием Μи1ί^тек (Весктап СоиНег, Бреа, Калифорния), а затем 20 мкл разбавленного соединения переместили в 96-луночный планшет, содержащий 160 мкл клеток, которые затем снова дважды смешали на низких скоростях. Клетки и соединения затем предварительно инкубировали в течение 30 мин при 37°С с 5% СΟ₂. 10Х активирующую смесь получили, подготовив 100 нг/мл раствора !ΡΝγ человека в 10% ΚΡΜΣ. Клетки и соединение затем стимулировали 20 мкл активирующей смесью !ΡΝγ с получением конечной концентрации 10 нг/мл ΣΡΝγ, 10 мкМ испытуемого соединения и 0,5% ΌΜ8Ο. Клетки выдерживали в условиях для активации в течение 18-24 ч при температуре 37°С с 5% СО₂.

Клетки переместили в 96-луночный планшет с закругленным днищем для окрашивания и затем выдерживали на льду в течение всего срока процедуры окрашивания. Клетки центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин при 4°С, после чего супернатант удалили. После удаления супернатанта 1 мкл конъюгированного АРС мышиного анти-IСΑΜ-1 антитела добавляли на 100 мкл буферного раствора БАС8. Затем клетки инкубировали на льду в темноте в течение 30 мин. После инкубации 150 мкл буферного раствора РАС8 добавляли, и клетки центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин при 4°С, после чего супернатант удалили. После удаления супернатанта добавляли 200 мкл буферного раствора РАС8, и клетки ресуспендировали. После суспендирования клетки центрифугировали при 1000 об/мин в течение 5 мин при 4°С. Супернатант удалили до ресуспендирования клеток в 150 мкл буферного раствора БАС8.

Обнаружение проводили с использованием проточного цитометра системы ΒΌ Б8К I, приобретенной от ΒΌ Вюзшепсез Сан-Хосе, Калифорния. Живые клетки закрыли для активного разброса и рассчитали среднее геометрическое IСАΜ-АΡС (ВесЩп-Эюктзоп СеИриез!, программное обеспечение версии 3.3, Франклиин Лейке, Нью-Джерси). Проанализировали % живых клеток и экспрессию IСАΜ-1. Анализы для тестируемых соединений проводили параллельно с контрольным соединением с известной активностью. ЕС₅₀ для контрольной смеси, как правило, составляет 40-100 нМ. !С₅₀, рассчитанные на основе результатов данного анализа, представлены в табл. 1._

Таблица 1
Соединение	Пример 3	Пример 4	Пример 5	Пример 6
I	0,056	0,181	11,338	0,565
II	9,655
III	3,972
IV	2,318	5,560
V	0,373			25,126
VI	0,104	0,262	4,973	0,424
VII	0,022	0,053		0,140

Пример 7. Фармацевтические составы.

Данный пример описывает фармацевтические композиции, содержащие соединение I или II (которые, следует понимать, также включают их соли). Такие композиции получают согласно способам, известным специалистам в данной области техники, и дополнительные композиции будут очевидны специалистам в данной области техники при рассмотрении данного примера и дополнительного описания в данном документе.

Таблица 2

Состав №.	Компоненты состава
1	50 мМ фосфатныйбуферный раствор, рН 7,4, 0,05% Ъл/ееп 80, 0,5%1ЧаС1
2	50 мМ фосфатный буферный раствор, рН 7,4, 0,36% НРМС, 0,2% глицерин, 1% РЕС400, 0,35% 1ЧаС1
3	5мМ фосфатный буферный раствор, рН7,4, 0,36% НРМС, 0,2% глицерин, 1% РЕС400, 5% СгеторЬог Е1_Р, 4,3% маннитол
4	10 мМ цитратный буферный раствор, рН5,8, 4,2% маннитол
5	ЮмМ цитратный буферный раствор, рН5,8, 4,2% маннитол, 0,36% НРМС, 0,2% глицерин
6	0,3% тилоксапол, 0,5% СагЬоро! 974Р, 2,25% маннитол, 50мМ фосфатный буферный раствор, рН6,5, 230 мОсм/кг
7	0,3% тилоксапол, 0,1% СагЬоро! 974Р, 2,25% маннитол, 50мМ фосфатный буферный раствор, рН6,5, 230 мОсм/кг

Каждую из указанных выше композиций 1-7 готовят с соединением I или II в трех дозировках с

- 19 030249

концентрацией 0,001, 0,003 и 0,01% (вес./вес.). Каждую композицию готовят путем добавления указанного количества вещества, регулирующего тоничность (маннитол), в колбу, нагревая до приблизительно 50°С в приблизительно половинном конечном объеме указанного буферного раствора (фосфатного или цитратного). После нагревания соответствующее количество соединения I или II добавляют вместе с дополнительными вспомогательными веществами (глицерином и/или РЕ0400), как указано. Добавляют очищенную воду в достаточном количестве. Полученную смесь перемешивают до гомогенности (около 5 мин) и затем фильтруют через стерилизующий фильтр мембраны в стерильный сосуд. При необходимости рН регулировали добавлением 1,0 Ν ΝαΟΗ.

Дополнительно композиции, имеющие более высокую концентрацию соединения I или II (например, 0,03 вес.%), могут включать поверхностно-активное вещество и необязательно стабилизирующий полимер. Применительно к композициям 6 и 7 предпочтительные поверхностно-активные вещества включают тритон Х114 и тилоксапол, которые являются коммерчески доступными у компании §1дтаЛ1йпсН (Сент-Луис, Миссури) и Ргеккиге СНет1са1 Сотрапу (Питтсбург, Пенсильвания) соответственно. Предпочтительные стабилизирующие полимеры включают карбомер СагЬоро1 974Р (коммерчески доступный от йиЬп/ок Виклифф, Огайо).

Композиции 6 и 7 получают диспергированием карбомера сначала в буферном растворе, содержащем поверхностно-активное вещество при 10Х их конечной концентрации (например, 3% тилоксапола в 50 мМ фосфатного буферного раствора при рН 6,5 с 2,5% маннитолом и 5% карбомером 974Р). Соединение I или II затем диспергируют в этом предконцентрате также при 10Х его конечной концентрации. Смесь гомогенизируют с получением конечной композиции путем 10-кратного разбавления отфильтрованного предконцентрата в подходящем буферном растворе.

Способы разработки и тестирования лекарственных средств для местного применения описаны, например, в Кетшдкоп, ТНе §с1епсе апй Ргасйсе о£ Рйагтасу (2Г’¹ еййюп), радек 872-882 (2006). Лекарственное средство разработано для доставки лекарственного средства на желаемую глубину поверхности кожи, избегая при этом нежелательной системной абсорбции лекарственного средства. К композиции можно добавлять различные вещества, способствующие проникновению, такие как спирт, алкил метилсульфоксид, пирролидон, лаурокапрам, диметилформамид, тетрагидрофурфуриловый спирт, амфифильное вещество или другие разнородные усилители, такие как клофибриновая кислота, гексаметилен лаурамид, протеолитические ферменты, терпены или сесквитерпены. Вещества, способствующие проникновению, улучшают доставку лекарственного средства в кожу.

В одном конкретном примере композиции используется система 60:20:20 этанол:пропиленгликоль:вода с пропиленгликолем, достаточным для поддержания 0,5-2% активного соединения.

Общепринятыми ингредиентами, которые можно использовать для введения соединения в состав для местного применения, являются наполнители, например гидрофобные наполнители, такие как углеводороды, жидкий парафин (минеральное масло, жидкий парафин, парафиновое масло), белый петролатум (технический вазелин, вазелин), желтый вазелин (технический вазелин), сквалан (пергидросквален, спинацин) и силиконы, такие как жидкие полидиметилсилоксаны (диметикон, силастик, силиконовое масло медицинского качества), спирты, такие как лауриловые спирты (1-лауриловый, додециловый спирты), миристиловые спирты (тетрадеканоловые, тетрадециловые спирты), цетиловый спирты (гексадеканоловые, этиловые, пальмитиловые спирты), стеариловые спирты (стеноловые, цитостеариловые спирты), олеиловые спирты (оценол), стерины, такие как сложные эфиры стерина; ланолин, такие как водный ланолин, ланум, безводный ланолин (например, ланолин, безводный ланум, агнин), полусинтетические ланолины;карбоновые кислоты, такие как лауриновая кислота, миристиновая кислота, пальмитиновая кислота, стеариновая кислота, олеиновая кислота, сложные эфиры и сложные полиэфиры, такие как сложные эфиры холестерина (стеарат), моноэфиры этиленгликоля, сложные моноэфиры пропиленгликоля, сложные моноэфиры глицерина, глицерилмоностеарат, сложные моноэфиры сорбита, сложные моноэфиры сорбитана, диэфиры сорбита, сорбитана, сложные полиэфиры (пролетов, арлацели), глицерилтристеарат, свиной жир, миндальное масло, кукурузное масло, касторовое масло, хлопковое масло, оливковое масло, соевое масло, гидрогенизированное масло, сульфатированные масла, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, простые эфиры и простые полиэфиры, такие как полиэтиленполипропиленгликоли (плюроники).

Смешиваемые с водой наполнители, которые могут быть использованы в качестве сорастворителей, включают полиолы и полигликоли, такие как пропиленгликоль (1,2-пропандиол), глицерин (глицерол), жидкий полиэтиленгликоль, твердый полиэтиленгликоль (жесткий макрогол, карбовакс), 1,2-фенолгексантриол, раствор сорбита, сложные эфиры и сложные полиэфиры, такие как сложные моноэфиры полиоксиэтилен сорбитана (стеарат-твинс) и сложные полиэфиры полиоксиэтилен сорбитана (твинс), простые эфиры и простые полиэфиры, такие как полиэтиленгликоль моноцетил эфир (цетомакрогол 1000) и полиэтилен-полипропиленгликоль (плюроники).

К композиции можно добавить различные вещества для структурной матрицы, например углеводороды, такие как белый вазелин (вазелиновое масло, вазелин), желтый вазелин (технический вазелин), парафин (парафин, твердый парафин), микрокристаллический воск, церезин (минеральный воск, очи- 20 030249

щенный озокерит), силиконы, такие как коллоидальный диоксид кремния (саЪ-Ο-δίΙ), бентонит (коллоидный силикат алюминия) и вигум (коллоидный силикат магния и алюминия), полиолы и полиглоколы, такие как твердый полиэтиленгликоль (жесткий макрогол, карбовакс), спирты, такие как цетиловые спирты (гексадеканолэтал, пальмитиловые спирты), стеариловые спирты (стеноловые, цетостириловые спирты); стероидные и сложные эфиры стерина, такие как холестерин (холестерин), ланолин, безводный ланолин и полусинтетические ланолин, карбоновые кислоты, такие как лауриновая кислота, миристиновая кислота, пальмитиновая кислота, стеариновая кислота, олеиновая кислота и сложные эфиры или сложные полиэфиры, такие как пчелиный воск, белый пчелиный воск (беленый пчелиный воск), карнаубский воск, мирицин, эфиры холестерина (стеарат), полиоксиэтилен сорбитан, свиной жир или гидрогенизированные масла.

Композиции могут дополнительно включать суспендирующие, желирующие вещества или вещества, вызывающие вязкость, например силиконы, такие как коллоидальный диоксид кремния (саЪ-0-δίΙ), бентонит (коллоидный силикат алюминия) или вигум (коллоидный силикат магния и алюминия), поликарбоксилаты, полисульфаты или полисахариды, такие как агар, альгинаты, карраген, аравийская камедь, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксивиниловые полимеры, желатин, пектин, камедь, полиакриловые кислоты.

Некоторые варианты осуществления могут включать в себя эмульгатор вода-в-масле, такой как сложный эфир стерина или стерола, например холестерол (холестерин), ланолин (водный ланолин, ланум), безводный ланолин (ланолин, безводный ланум, агнин) или полусинтетический ланолин, карбоновые кислоты, такие как Να+, К+, этаноламиновые соли лауриновой кислоты, миристиновую кислоту, пальмитиновую кислоту, стеариновую кислоту, олеиновую кислоту, или эфир, или полиэфир, такой как полиэтилен, полипропиленгликоль (плюроники). Если необходим эмульгатор масло-в-воде (м/в), примерами сложных эфиров и сложных полиэфиров, таких как сложные моноэфиры полиоксиэтиленсорбитан (стеарат-твинс), полиоксиэтиленовые эфиры этилен (полиэтиленгликольстеарат моноэфиры гликолей, Муг(), сложные полиэфиры полиоксиэтилен сорбитана (твинс), простые эфиры и простые полиэфиры, такие как эфир полиэтиленгликоль моноцетила (цетомакрогол 1000) или полиэтиленполипропиленгликоли (плюроники) и другие, такие как лаурилсульфат натрия, бура (борат натрия), этаноламин или триэтаноламин.

Подходящие поверхностно-активные вещества для использования в композициях без ограничения включают неионные поверхностно-активные вещества, такие как поверхностно-активное вещество-190 (диметиконсополиол), полисорбат 20 (Ъуссп 20), полисорбат 40 (Ъуссп 40), полисорбат 60 (Ъуссп 60), полисорбат 80 (Еуееи 80), лаурамид ЭЕА. кокамид ЭЕА и кокамидмоноэтаноламид, амфотерные поверхностно-активные вещества, такие как олеилбетаин и кокамидопропилбетаин (велветекс ВК-35), и катионные поверхностно-активные вещества, как фосфолипид РТС (кокамидопропилфосфатидил РОдимоний хлорид). Также можно использовать соответствующие комбинации или смеси таких поверхностно-активных веществ.

Подходящие увлажнители для использования в композициях настоящего изобретения без ограничения включают молочную кислоту и другие гидроксикислоты и их соли, глицерин, пропиленгликоль, бутиленгликоль, натрий РСА, Карбовакс 200, Карбовакс 400 и Карбовакс 800. Подходящие смягчающие вещества для использования в композициях настоящего изобретения без ограничения включают РРО-15 стеариловый эфир, ланолиновый спирт, ланолин, производные ланолина, холестерин, вазелин, изостеариловый неопентаноат, октилстеарат, минеральное масло, изоцетиловый стеарат церафил 424 (миристилмиристат), октилдодеканол, диметикон (Эо\у Сопипд 200-100 ср8)„ фенилтриметикон (Эо\у Сопипд 556), Эо\у Сопипд 1401 (циклометикон и диметиконол) и циклометикон (Эо\у Сопипд 344) и миглиол 840 (производства Ηιιΐδ; пропиленгликоль/дикапрат). Кроме того, соответствующие комбинации и смеси любых из этих увлажняющих веществ и смягчающих веществ можно использовать в соответствии с настоящим изобретением.

Композиция может также включать консерванты и противомикробные вещества, такие как хлорид бензалкония, бензойная кислота, бензиловый спирт, бронопол, хлоргексидин, хлоркрезол, имидазолидинил мочевины, эфиры парабена, фенол, феноксиэтанол, сорбат калия или сорбиновая кислота, антиоксиданты, такие как α-токоферол, аскорбиновая кислота, аскорбил пальмитат, бутилированный гидроксианизол, аскорбат натрия, метабисульфит натрия, хелатирующие агенты, такие как лимонная кислота или этилендиаминтетрауксусная кислота; буферные растворы, такие как лимонная кислота и соли, фосфорная кислота и соли, Η₃ΡΟ₄/ΝαΗ₂ΡΟ₄, глицин, уксусная кислота, триэтаноламин или борная кислоту; увлажнители, такие как глицерин (глицерол), пропиленгликоль (Е 1520), триацетат глицерина (Е1518), сорбит (Е420), ксилит и малит (Е965), полидекстрозу (Е1200), квиллайю (Е999), молочную кислоту, мочевину или хлорид лития и/или изолирующий антиоксидант, такой как лимонная кислота и ее соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (версен, ΞΩΤΑ).

Определенным вариантом осуществления местного лечения может быть мазь, которая представляет собой полутвердый препарат, предназначенный для наружного нанесения на кожу или слизистую оболочку. В конкретном примере основой мази является вазелин. Мазь не содержит достаточного количества воды для разделения на вторую фазу при комнатной температуре. Водорастворимые мази могут быть

- 21 030249

приготовлены с полиэтиленгликолем. Мази представляют собой идеальные смягчающие средства с хорошим проникновением в кожу и прилипанием к поверхностям. Мазь находится в удобном контейнере, таком как тюбик или баночки.

Кроме того, лекарственной формой для местного применения является крем, в котором соединения растворяют или суспендируют в водных легкоудаляемых или смягчающих основах. Кремы могут быть композициями или вода-в-масле, или масло-вводе. Несмешиваемые соединения можно объединять с помощью механического перемешивания или тепла с использованием способов влажной камеди, сухой камеди, бутылки и стакана. В некоторых вариантах осуществления крем является эмульсией типа маслов-воде или водной дисперсией микрокристаллических длинноцепочечных жирных кислот или спиртов, которые смываются водой и являются более приемлемыми косметически и эстетически.

В других вариантах осуществления активные ингредиенты предназначены для введения в виде пасты, которую можно считать мазью, к которой добавляли высокий процент нерастворимых твердых частиц, например, до 50 вес.%. Паста намного жестче, чем мазь, из-за наличия твердых веществ, образующих состоящую из частиц матрицу сверху и под уже присутствующей структурой мази. Ингредиенты, такие как крахмал, оксид цинка, карбонат кальция и тальк, используются в качестве твердой фазы. Паста обеспечивает особенно хороший защитный барьер на коже. Как мазь паста образует цельную относительно водонепроницаемую пленку на поверхности кожи, в отличие от мази пленка является непрозрачной и поэтому эффективным солнцезащитным фильтром. Таким образом, пасты особенно эффективны для защиты кожи от ультрафиолетового излучения, которое может ухудшить состояние, которое лечат (например, ИЬЕ).

В других вариантах осуществления активное вещество содержится в геле, желе или лосьоне. Гели представляют собой полутвердые системы, состоящие из дисперсии малых или больших молекул в водном жидком носителе, переводя в желеобразное состояние путем добавления гелеобразующего вещества. Среди гелеобразующих веществ используют синтетические макромолекулы, такие как карбомер 934, и производные целлюлозы, такие как карбоксиметилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Гели совместимы со многими веществами и могут содержать вещества, способствующие проникновению для улучшения доставки в кожу. Гели могут быть или однофазными гелями, в которой макромолекулы равномерно распределены по всей жидкости без видимых границ между дисперсными макромолекулами и жидкостью или гелями двойной фазы, в которых гелевая масса состоит из хлопьев малых отдельных частиц, которые часто называют магмами. Желе содержит водорастворимое основание, полученное из природных камедей, таких как трагакант, пектин, альгинат или бороглицерин, или из синтетических производных природных веществ, таких как метилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза. Лосьон представляет собой прозрачный раствор, содержащий 25-50% спирта, который необязательно содержит антисептик или смягчающее вещество. Другими необязательными ингредиентами, которые могут быть добавлены к лосьону, являются экстракт гамамелиса, ментол, глицерин, борная кислота, квасцы или калия оксихинолин.

В другом варианте осуществления соединение наносят в виде порошка, который содержит очень мелких размеров частицы, которые создают большую площадь поверхности на единицу веса для покрытия большой площади поверхности тела и обеспечения рассеивания света. Альтернативно, соединение применяют в растворе, который представляет собой жидкие препараты растворимых химических веществ, растворенных в растворителе, таком как вода, спирт или пропиленгликоль. В других примерах оно является эмульсией, которая представляет собой двухфазный препарат, в котором одна фаза (дисперсная или внутренняя фаза) тонко диспергирована в другой (непрерывной или внешней фазе). Дисперсная фаза может иметь либо гидрофобное основание (масло-в-воде) или водное основание (вода в масле). Поскольку существуют две несовместимые фазы в тесной связи, эмульсии, как правило, содержат физическую стабилизирующую систему, такую как поверхностно-активное вещество (ионное или неионное), полимер (неионные полимеры, полиэлектролиты, или биополимеры) или их смеси.

Для вариантов осуществления, в которых соединение содержится в суспензии, лекарственная форма содержит две фазы. Непрерывная или внешняя фаза является, как правило, жидкой или полутвердой, в то время как дисперсная или внутренняя фаза состоит из частиц, которые являются в значительной степени нерастворимыми, но диспергированными в непрерывной фазе. Нерастворимое вещество может быть предназначено для физиологического действия, например, при помощи наружного покрытия. Хотя взвешенная система может отделиться от постоянной, скорость осаждения может быть снижена путем изменения состава с целью сохранения достаточно однородного состава, по меньшей мере, на период времени, необходимый для введения требуемой дозы после встряхивания контейнера.

Соединение можно также вводить в виде аэрозоля, который зависит от мощности сжатого или сжиженного газа для вытеснения содержимого из контейнера.

Пропелленты в контейнере отвечают за создание надлежащего давления внутри контейнера и вытеснение продукта, когда клапан открывают, и они способствуют распылению или пенообразованию продуктов. Фармацевтические аэрозоли для местного применения используют углеводород (пропан, бутан и изобутан) и сжатые газы, такие как азот, двуокись углерода и закись азота.

Любая из этих лекарственных форм может содержать отдельные депо соединений Ι/ΙΙ и вспомога- 22 030249

тельное вещество (например, вещество для активации соединения II с целью образования соединения I).

Пример 9. Мышиная модель кожной волчанки.

Этот пример описывает использование мышиных моделей для проверки средств лечения кожной волчанки (например, ЭЬЕ), включая выбор схемы приема лекарств для лечения, профилактики и комбинированного лечения. Животные модели используют для проверки заявленных соединений, а также комбинированных составов, таких как описанные в данном документе. В отдельных примерах составы для местного применения, которые содержат соединения I и/или II, наносят на кожу животного, и оценивают терапевтический ответ. После введения состава животному кожу исследуют на очевидность уменьшения числа или тяжести кожных поражений.

Хотя не найдено ни одной модели животного происхождения для идеальной имитации ЭЬЕ, МКЬ/ЬРК мышиная линия оказалась полезной в качестве инструмента исследования. Для исследования проявлений кожной волчанки использовали трансгенные или нокаут-формы этих аутоиммунных мышей. У МКЬ/ ЬРК мыши мутация приводит к ЬРК чередованию в гене Рек и дефекту апоптоза в результате аномальной пролиферации лимфоцитов с нарушенной функцией и выработкой автоантител.

У этих животных развиваются спонтанные волчаночноподобные очаги на коже, которые являются элементарными в начале жизни и с возрастом мышей становятся все более серьезными (ОкогейЫ аий Ι)ιιΙζ. Ьирик 19:1029-1035 (2010)).

Альтернативной мышиной моделью является ТСКа-/-мышь, подвергнутая лечению фторурацилом и ультрафиолетовыми лучами спектра В с тем, чтобы вызвать очаги кожной волчанки (Ригикага аий ΥοкЫтаки, АиЮипишпПу Ре\ае\ук 4:345-350 (2005)).

Тем не менее, в настоящее время предпочтительной мышиной моделью для демонстрации и тестирования эффективность раскрытых на сегодняшний день средств лечения является использование подверженных волчанке (ΝΖΒχΝΖ^) мышей Р_ь как описано в Ошйиса еГ а1., 1оигпа1 о£ Е\рептеп1а1 Мей1сте 207:2931-2942 (2010), который включен посредством ссылки. У этих подверженных волчанке мышей развивается хроническое поражение кожи, напоминающие хроническую красную волчанку человека после соскоба липкой лентой.

Подверженные волчанке (ΝΖΒχΝΖ^) мыши Р₁ доступны от 1асккоп ЬаЬогаГогу и могут быть использованы при возрасте 18-22 недель. Мыши С57ВЬ/6 и 129 доступны в качестве контрольной группы (например, от Скаг1ек ВАег). Площади 3x3 см области спины мышей бреют, а соскоб липкой лентой осуществляется с помощью 10 резких снятий липкой ленты. В коже наблюдается увеличение количества РИС и нейтрофилов и обильный клеточный инфильтрат, сопровождающийся повышенной экспрессией ΣΕΝ-регулируемых и провоспалительных генов. Приблизительно через три недели после соскоба липкой лентой мыши имеют выраженную гиперплазию эпидермиса с гиперкератозом, заполненные кератином углубления или кисты, кожный фибросклероз и дегенеративные изменения подкожно-жировой клетчатки. Эти изменения аналогичны тем, которые наблюдаются у людей с хронической красной волчанкой.

В процессе исследования мышь подвергают воздействию тестируемого вещества, используя различные пути, дозировки и схемы приема. В конкретных примерах лекарственные вещества, описанные в данном документе, наносят местно на участки, с которых снимали или будут снимать соскоб липкой лентой. Кроме того, тестируемое лекарственное средство вводят системно. Препарат вводят один или несколько раз через определенные промежутки времени до или после соскоба липкой лентой (например, ежедневно после соскоба липкой лентой или после появления очагов на кожи). Реакцию на лекарственное средство можно оценить путем измерения таких признаков болезни, как количество, площадь поверхности или появление кожных поражений. Даже если количество или площадь поражения не уменьшаются, тяжесть поражений (например, уровни эритемы) можно измерить в оценке реакции на тестируемые средства для лечения. Гистологический анализ образцов кожи также выполняют и располагают от 1 до 3 на основе следующих критериев: (а) толщина эпидермис, (Ь) степень изъязвления, (с) интраэпителиальное воспаление, (й) кожное воспаление и (е) воспаление подкожной клетчатки.

Гистологические классификации выглядит следующим образом: 0 - нормальная архитектура кожи, несколько кожных лейкоцитов и нормальное состояние придатков; 1 - умеренное воспаление, незначительная гиперплазия эпидермиса и признаки пролиферации дермальных фибробластов; 2 - умеренное воспаление, выраженная эпидермальная гиперплазия (двух-четырехкратное увеличение толщины эпителия) с гиперкератозом, выраженный лейкоцитарный нейтрофильный кожный инфильтрат с несколькими макрофагами, умеренный фибросклероз дермы, сокращение числа придатков и незначительные дегенеративные изменения подкожной жировой ткани и 3 - сильное воспаление, выраженная эпидермальная гиперплазия предстательной железы (более чем четырехкратное увеличение эпителиальной толщины) с гиперкератозом, образование углублений и кист, заполненных кератином, диффузные разрыва эпидермального слоя (изъязвления), обширные кожные инфильтраты с обильным нейтрофилами и макрофагами, выраженный кожный фибросклероз, исчезновение придатков и очевидные дегенеративные изменения подкожной жировой ткани. Для получения общей оценки заболевания оценивают и суммируют различные параметры. Клеточные инфильтраты можно обрабатывать с использованием проточной цитометрии.

- 23 030249

Пример 10. Способы лечения и комбинированные составы.

Субъектов, которых будут лечить заявленными составами, отбирают на основе клинической картины кожной красной волчанки, такой как ΌΕΕ, ЛСЬЕ, §СЬЕ или ЭГЕЕ. Этот пример конкретно касается лечения ЭБЕ, но подобный способ лечения можно использовать и для других форм кожной волчанки, например ЛСЕ-Е. 8СБЕ или ЭГБЕ. Заявленные композиции, как правило, применяют местно к очагам ЭБЕ на коже, например исключительно к очагам ЭБЕ на коже, хотя их также можно применять к большей части кожи или системно.

Лечение можно продолжать в течение по меньшей мере недели, месяца или года, а у некоторых субъектов лечение может растянуться на несколько лет, продолжительность заболевания или всю жизнь субъекта.

В отдельных случаях субъектов отбирают для сопутствующего лечения другими фармацевтическими или нефармацевтическими воздействиями, такими как плаквенил для системного применения или кортикостероиды для местного применения. В других случаях соединения I и/или II вводят при отсутствии другого лечения БЕ или ЭБЕ, такого как плаквенил для системного применения или кортикостероид для системного или местного применения. В других вариантах осуществления способ включает назначение лечения субъекту с ЭБЕ, который не имеет антител к ДНК, например антител к άδ-ΌΝΑ.

Субъекта отбирают по постановке диагноза кожная красная волчанка, например хроническая кожная красная волчанка, такая как ЭБЕ. В этом конкретном примере отбирают субъекта, который не имеет §ЬЕ (например, не имеющего антител к άδ-ΌΝΑ или системных проявлений §ЬЕ, таких как воспаление почек, легких, центральной нервной системы или любого органа, кроме кожи или слизистых оболочек глаз, носа и рта). В других примерах субъект имеет только кожные проявления заболевания на поверхности тела и не имеет очагов на любых других органах тела. Терапевтически эффективное количество соединения содержится в составе с вазелиновым гелем и композицию наносят непосредственно на очаги кожной красной волчанки, такие как чешуйчатые папулы на туловище и разгибательных поверхностях конечностей и/или коже головы. Фармацевтическую композицию наносят на очаги ежедневно, например 2-4 раза в день в течение нескольких дней, например по меньшей мере одной недели. Местное нанесение композиции на очаги продолжают до тех пор, пока очаги, к которым композицию применяют, не регрессируют или исчезают или их прогрессирование задерживается или останавливается.

В других примерах терапевтическое соединение содержится в эффективном количестве в солнцезащитном составе и наносится на кожу перед воздействием ультрафиолетового излучения с целью защиты от воздействия ультрафиолетового излучения, которое является часто толчком к вспышке кожных волчаночных поражений. Солнцезащитный состав может содержать, например, эффективное количество РАВА или оксида цинка, чтобы свести к минимуму воздействие на кожу ультрафиолетового излучения.

Также используют комбинированные средства для лечения, которые сочетают соединения формулы I и/или II (который включают их соли) с другим веществом, которым лечат кожную волчанку или другое патологическое состояние, например состояние, связанное с сухостью глаз. Комбинированные составы для лечения кожной волчанки (например, ЭБЕ) включают в себя комбинированные составы, которые включают кортикостероид для местного применения, например кортикостероид группы I, II, III, IV, V, VI или VII, например любой из следующих:

Группа I (очень мощные: до 600 раз сильнее, чем гидрокортизон): клобетазола пропионат 0,05% (дермоват), бетаметазона дипропионат 0,25% (дипролен), галобетазола пропионат 0,05% (ультрават), дифлоразона диацетат 0,05% (псоркон).

Группа II:

флуоцинонид 0,05% (лидекс), галцинонид 0,05% (халог), амцинонид 0,05% (циклокорт), дезоксиметазон 0,25% (топикорт).

Группа III:

триамцинолонацетонид 0,5% (кеналог, крем аристокорт), мометазона фуроат 0,1% (мазь эколон), флутиказона пропионат 0,005% (кутиват), бетаметазон дипропионат 0,05% (дипрозон).

Группа IV:

флуоцинолона ацетонид 0,01-0,2% (синалар, синемол, флуонид), гидрокортизона валерат 0,2% (весткорт), гидрокортизона бутират 0,1% (локоид), флурандренолид 0,05% (кордран),

триамцинолона ацетонид 0,1% (кеналог, мазь аристокорт А), мометазона фуроат 0,1% (крем элокон, лосьон).

Группа V:

- 24 030249

триамцинолона ацетонид 0,1% (кеналог, крем аристокорт, лосьон), флутиказона пропионат 0,05% (крем кутивейт), дезонид 0,05% (тридезилон, мазь дезовен), флуоцинолона ацетонид 0,025% (синалар, крем синемол), гидрокортизона валерат 0,2% (крем весткорт).

Группа VI:

преднисарбат 0,05% (крем, мазь акловат),

триамцинолона ацетонид 0,025% (крем аристокорт А, лосьон кеналог), флуоцинолона ацетонид 0,01% (шампунь Капекс, дермасмуз), дезонид 0,05% (крем, лосьон дезовен),

Группа VII:

гидрокортизон 2,5% (крем, лосьон, мазь хитон), гидрокортизон 1% (множество безрецептурных брендов).

В некоторых примерах субъекту ставят диагноз заболевания в дополнение к кожной волчанке, в котором дополнительное нарушение не вызвано красной волчанкой или не является проявлением, или не связано с красной волчанкой.

Например, субъекту с кожными волчаночными поражениями век также могут поставить диагноз сухости глаз, и субъекту назначают комбинированное лечение. В одном примере у субъекта обнаружен мейбомит, который были бы реагировать на местное применение кортикостероидов, таких как 1% офтальмологическая суспензия преднизолона ацетата. Соединения формулы I и/или II (которые включают соли) суспендируют в составе с преднизолоном и закапывают или наносить на глаз от 2 до 4 раз в день. В других примерах, если сухость глаз связана с сезонной аллергии или другими воспалительными заболеваниями, глазные капли вводят с составом или в составе, который включает антигистаминные препараты (например, фенирамин, эмедастин или азеластин), противоотечные средства (такие как тетрагидрозолина гидрохлорид или нафазолин) или нестероидные противовоспалительные средства (например, непафенак или кеторолак), кортикостероиды (например, фторметолон или лотепреднол), стабилизаторы тучных клеток (например, азеластин, кромал, эмедастин, кетотифен, лодоксамин, недокромил, олопатадин или пемироласт). Если сухость глаз связана с инфекционно-бактериальным заболеванием (например, инфекцией мейбомиевой железы или инфекцией роговицы), глазные капли, которые вводят с комбинированным составом или в комбинированном составе, могут содержать подходящие антибиотики (такие как ципрофлоксацин, эритромицин, гентамицин, офлоксацин, сульфацетамин, тобрамицин или монофлоксацин). Если сухость глаз связана с вирусной инфекцией, глазные капли вводят с комбинированным составом или в комбинированном составе с антивирусным агентом, таким как трифлуридин или идоксуридин.

Другой пример комбинированной терапии имеет отношение к субъекту, у которого диагностируют как кожные волчаночные очаги на лице, так и/или глазную розацею после обнаружения раздраженных глаз и лицевой эритемы с телеангиэктазией. Субъекта лечат глазными каплями, содержащими соединения формулы I и/или II или составом для местного применения, который наносят на лицо, и субъекта также лечат перорально антибиотиком, например тетрациклиновым антибиотиком, таким как миноциклин. Альтернативно, композиция для местного применения для лечения кожных ЬЕ, например гель для лечения ВЬЕ, также содержит средство для местного применения для лечения розацеа, такое как метронидазол гель.

В другом примере субъект предъявляет кожную волчанку и другое ранее существовавшее аутоиммунное заболевание, и его лечат составом для местного применения, содержащим соединения формулы I и/или II. Субъекту также назначают лечение (например) пероральными кортикостероидами для системного применения, такими как снижающаяся доза преднизолона.

Пример 11. Аппликаторы для местного применения и лекарственные формы.

Композиции по настоящему изобретению могут быть использованы в приспособлении для нанесения, которое позволяет наносить композицию на целевой участок на кожу без применения композиции к нецелевым участкам кожи. Например, можно использовать приспособление, которое позволяет наносить композицию без предварительного нанесения композиции пальцами. Подходящие приспособления включают шпатели, палочки, шприцы без игл и пластыри. Использование лопатки или тампонов и т. п. может потребовать приспособления для введения в контейнер, содержащий композицию. Использование шприца или пластырей на клейкой основе может сопровождаться заполнением шприца или пластыря составом. Композицию затем можно местно распределить при помощи лопаток или тампонов или можно выдавить из шприца на кожу человека.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция, содержащая соединение и активирующее вещество, содержится в пластыре. Некоторые примеры пластырей хорошо известны (например, см. патенты США. №№ 296006, 6010715, 5591767, 5008110, 5683712, 5948433 и 5965154).

Такие пластыри, как правило, имеют адгезивный слой, который наносится на кожу человека, депо или резервуар для хранения фармацевтического вещества, и внешнюю поверхность, которая предотвращает утечку фармацевтического средства из депо. Внешняя поверхность пластыря, как правило, неприлипающая.

- 25 030249

В соответствии с настоящим изобретением соединение для лечения кожной волчанки встроено в пластырь, так что соединение остается стойким в течение длительного периода времени. Соединение можно встраивать в полимерную матрицу, которая стабилизирует его и позволяет соединению диффундировать из матрицы и пластыря. Соединение также можно включать в адгезивный слой пластыря, так что после нанесения пластыря на кожу соединение может диффундировать на кожу или даже в кожу или сквозь кожу. В соответствии с таким вариантом осуществления клеящий состав предпочтительно содержит активирующее вещество, как описано в данном документе. В одном варианте осуществления клеящий слой можно активировать нагреванием, при этом температуры около 37°С вызывают медленное сжижение клеящего состава, так что соединение диффундирует из пластыря на кожу, в кожу или сквозь кожу. Клеящий состав может оставаться липким в случае хранении при температуре менее 37°С, а после нанесения на кожу клеящий состав теряет свою липкость, так как он разжижается. Введение соединения прекращается, как только пластырь не прилипает к коже.

Альтернативно, соединение можно содержать в одной или нескольких лунках или карманах, расположенных возле поверхности пластыря, который будет контактировать с кожей. В одном варианте осуществления соединение хранят в лунках в высушенном или лиофилизированном состоянии. Хранение таких пластырей в охлажденной атмосфере (например, приблизительно 4°С) поддерживает устойчивость соединения. Пластырь можно удалить из прохладной атмосферы, когда это необходимо, и нанести на кожу человека, где соединение можно растворить при смешивании с жидкостью, такой как вода или физиологический раствор. Жидкости могут быть представлены отдельно или как компонент пластыря. Например, жидкость может быть предусмотрена на коже человека, так что когда пластырь, содержащий высушенное соединение, взаимодействует с жидкостью, соединение подвергается воздействию жидкости и растворяется. Солюбилизированное соединение может затем впитываться в кожу. В качестве другого примера пластырь может содержать одну или несколько лунок или карманы для удержания жидкости в пластыре. Жидкость может быть вытеснена из лунок или карманов, чтобы вызвать смешивание жидкости с высушенным соединением. Например, жидкость может содержаться в кармане пластыря, а в некоторых вариантах осуществления содержит вещество для усиления или активации соединения. Давление, оказываемое на пластырь, приводит к разрыву кармана и выпуску жидкости так, что она смешивается с высушенным соединением. Композиция, содержащая соединение, может таким образом диффундировать из пластыря. В другом примере жидкость, такую как гель или крем, который содержит воду, можно наносить на кожу в целевом участке. Пластырь, содержащий высушенное соединение, затем наносят на кожу, где жидкость смешивается с соединением, и композиция выходит из пластыря и на кожу.

В пластырях, содержащих лунки сухого соединения, лунки герметизированы таким образом, что соединение остается в лунках, пока соединение не применяют.

Соответственно скважины герметизируют мембраной или пленкой, которая предохраняет соединение от диффундирования из скважин в сухом состоянии соединения, но которая позволяет соединению диффундировать из скважины, когда его растворяют. Мембрана может быть или пористой, или непористой. В одном варианте осуществления мембрана включает целлюлозу или крахмал, и, в частности, мембрана может содержать поливиниловый спирт, полиэтиленоксид и гидроксипропилметилцеллюлозу. Мембрана тонкая (толщиной от около 1 мкм до около 1 мм) и растворяется при контакте жидкости. Таким образом, гель или крем, помещенные на кожу человека, или жидкость, направленная из кармана в пластыре, могут контактировать с целлюлозной мембраной и вызывать растворение мембраны. После растворения жидкость смешивается с высушенным веществом и растворяет вещество. Композиция затем диффундирует из пластыря и на кожу субъекта.

Кроме того, трансдермальный пластырь может включать в себя множество маленьких игл, которые проходят сквозь роговой слой, но не распространяются в дерму с разрывом кровяных сосудов. Иглы могут быть между 20 мкм и длиной 1 мм при распрямлении с кожной поверхности пластыря. Таким образом, игла проходит сквозь роговой слой, но заканчивается перед дермой, где расположены капиллярные русла. Иглы могут быть сплошными или полыми. Полые иглы могут иметь просвет, проходящий вдоль их длины, так что композиция может проходить из депо в пластыре к концу иглы в эпидермисе. Можно использовать твердые иглы, чтобы позволить составу диффундировать вдоль наружной поверхности иглы в эпидермис.

При использовании аппликатор для местного нанесения наносят приклеенным на целевой участок кожи, который имеет одно или несколько кожных волчаночных поражений, и аппликатор остается на месте, пока соединение в пластыре не введут в кожное поражение. Аппликатор для местного применения (например, пластырь) обеспечивает пролонгированное высвобождение лекарственного средства в течение длительного периода времени, например нескольких часов или даже по меньшей мере одного дня или дольше.

Пример 12. Другие лекарственные формы и добавки.

Состав для местного применения может быть получен в различных формах. Твердые вещества, как правило, плотные и нетекучие обычно разрабатываются в виде брикета или палочки или в виде аэрозоля, твердые вещества могут быть непрозрачным или прозрачным и необязательно могут содержать раство- 26 030249

рители (включая воду и спирт), эмульгаторы, увлажнители, смягчающие вещества, отдушки, контрастные вещества/красители, консерванты и активные ингредиенты. Кремы и лосьоны часто похожи друг на друга, отличаясь в основном своей вязкостью (кремы, как правило, гуще и более вязкие, чем лосьоны), и лосьоны, и кремы могут быть непрозрачными, полупрозрачными или прозрачными и часто содержат эмульгаторы, растворители (включая воду и спирт) и вещества, регулирующие вязкость. Лосьоны и кремы также могут необязательно содержать увлажнители и смягчающие средства (особенно в случае ухода за кожей), а также ароматизаторы, контрастные вещества/красители, консерванты и активные ингредиенты. Гели/сыворотки могут быть получены с диапазоном вязкости от густых (высокой вязкости) до редких (низкой вязкости) и отличаются в основном от лосьонов и кремов тем, что гели/сыворотки обычно скорее прозрачные, чем непрозрачные. Подобно лосьонам и кремам гели/сыворотки часто содержат эмульгаторы, растворители (включая воду и спирт) и регуляторы вязкости, а также могут содержать увлажнители и смягчающие вещества, отдушки, контрастные вещества/красители, консерванты и активные ингредиенты. Водные жидкости более редкие, чем кремы, лосьоны или гели, и, как правило, прозрачные; жидкости обычно не содержат эмульгаторов. Жидкие продукты для местного применения часто содержат другие растворители в дополнение к воде (включая спирты) и могут также содержать регуляторы вязкости, увлажнители и смягчающие вещества, отдушки, контрастные вещества/красители/пигменты, консерванты и активные ингредиенты.

Подходящие эмульгаторы для использования в композициях без ограничения включают инкрокват ТМ§ бегеновый (метосульфат бегентримония, цетеариловый спирт), неионные эмульгаторы, например, полиоксиэтиленолеиловый эфир, РЕС-40 стеарат, цетеарет-12, 20 (например, В-эумульгин 1 производства Непке1), цетеарет-20 (например, эумульгин В-2 производства Непке1), цетеарет-30, ланетт О (производства компании Непке1; цетилстеариловый спирт), стеарат глицерина (например, кутина СМ§ производства Непке1), РЕС-100 стеарат, арлацель 165 (стеарат глицерина и РЕС-100 стеарат), стеарет-2, стеарет-20 или их комбинации/смеси, а также катионные эмульгаторы, например стеарамидопропил диметиламин и бегентримониум метосульфат или их комбинации/смеси. Кроме того, катионные эмульгаторы предпочтительно соединяют или смешивают с неионными эмульгаторами с целью получения стабильных эмульсий форм выпуска в виде устойчивой эмульсии, содержащих высокие концентрации соли стронция.

Подходящие вторичные активные ингредиенты для использования в композициях без ограничения включают альфа-оксикислоты, солнцезащитные средства, дезодоранты, анти-акне лекарственные средства, витамины (особенно витамины А и С) и минеральные вещества, а также различные рецептурные и безрецептурные препараты. Композиции, раскрытые в данном документе, могут иметь несколько активных ингредиентов, в аналогичном составе для местного применения и комбинации активных ингредиентов, таких как перечисленные выше, могут быть использованы в зависимости от патологического состояния или состояний, подлежащих лечению.

В композициях по настоящему изобретению можно использовать подходящие ароматизаторы и красители, такие как ΡΌ & С Кей № 40 и ΡΌ & С Уе11о\у № 5. Другие примеры ароматизаторов и красителей, подходящих для использования в продуктах для местного применения, известны в данной области техники.

Другие подходящие дополнительные и вспомогательные ингредиенты, которые могут быть включены в составы без ограничения, включают абразивы, абсорбенты, предотвращающие слипание, противопенные вещества, антистатические вещества, вяжущие (например, гамамелис, спирт и растительные экстракты, такие как экстракт ромашки), связующие/вспомогательные вещества, буферные растворяющие вещества, хелатирующие вещества (например, версен ЕЭТА). пленкообразующие вещества, кондиционирующие вещества, придающие непрозрачность вещества, регуляторы рН (например, лимонную кислоту и гидроксид натрия), а также защитные вещества. Примеры каждого из этих компонентов, а также примеры других подходящих ингредиентов в композиции продукта для местного применения, можно найти в публикации по парфюмерно-косметическим и душистым веществам (СТРА) (см., например, СТРА Сокшебс ШдгеФеШ: НапйЬоок, 2пй еФбоп, ейк. 1оНп А. ХУепптдег апй Ο.Ν. МсЕ^еп, 1г. (СТРА, 1992)).

Кроме того, различные типы продукции, в том числе косметические, могут быть получены в каждой из описанных выше форм (например, твердых веществ, кремов, лосьонов, гелей и жидкостей).

Например, моющие средства (для лица и тела), шампуни/кондиционеры, средства для лечения волос/красители/средства для завивки/выпрямители, антиперспиранты/дезодоранты, средства макияжа и другие средства для лица, рук и тела можно приготовить в любой из пяти основных форм продукта: твердых веществ, кремов, лосьонов, гелей или жидкостей. Стандартные продукты твердой формы включают косметические средства, такие как губная помада, румяна и пудра, средства макияжа, карандашиантиперспиранты и дезодорирующие карандаши, а также моющие средства, такие как мыло и стиральные порошки. Другие примеры продуктов твердой формы включают таблетки и суппозитории для лечения кожных волчаночных очагов на слизистых оболочках (например, рта или ануса). Стандартные продукты в форме крема и лосьоны включают продукты на основе альфа-гидроксильной кислоты (АНА), увлажняющие средства и солнцезащитные средства, шампуни/кондиционеры и другие средства по уходу

- 27 030249

за волосами и косметические средства, например корректирующие средства и тональные кремы. Стандартные гелевые продукты включают гели для бритья и после бритья. Стандартные жидкие продукты жидкой формы включают анти-акне растворы, лосьоны после бритья, растворы для полоскания рта/горла и тонизирующие средства/укрепляющие средства/ кондиционеры для кожи.

Другие методики и материалы для получения составов в различных формах также описаны в АпШопу Ь.Ь. НипИпд (еб.), "А Тогши1агу о£ Созшебс Ргерагабопз (νοί. 2)- Сгеашз, Ьобопз апб МПкз," М1се11е Ргезз (Епд1апб, Ν.Τ 1993). См., например, главу 7, с. 5-14 (масла и гели), главу 8, с. 15-98 (основы и эмульсии); главу 9, с. 101-120 ("универсальные продукты"); главу 10, с. 121-184 (очищающие маски, кремы, лосьоны); главу 11, с. 185-208 (увлажняющие, быстровпитывающие и дневные кремы); главу 12, с. 209-254 (смягчающие вещества), глава 13, с. 297-324 (средства для ухода за кожей лица); главу 14, с. 325-380 (средства для ухода за руками); главу 15, с. 381-460 (кремы и лосьоны для тела и кожи) и главу 16, с. 461-484 (средства для детей); содержание которых включено в данный документ посредством ссылки.

Пример 13. Пример состава для местного применения.

Состав для местного применения может быть получен различной силы и с использованием различных концентраций вспомогательного вещества, как описано в данном документе. В табл. 2 приведен список вспомогательных веществ, используемых в этом примере, и функции каждого вспомогательного вещества без ограничения какой-либо конкретной теорией.

Таблица 3

Список вспомогательных веществ и их функции

Вспомогательное вещество	Функция
РЕС400, гликофурол	растворитель
РЕС8000, РЕ04500, РЕС3350	основа для местного применения
Те1озе®63, 5рап®, Мус®,ТРОЕ	поверхностно-активное вещество
ϋΜΙ, РО	вещество, способствующее проникновению
Н2О	смягчающее вещество
внт	антиоксидант
карамель	красящая добавка

Согласно табл. 3 РЕС400, задействованный в рабочих примерах, представлял собой в высшей степени рафинированный полиэтиленгликоль 400, коммерчески доступный от Сгоба ^с., Эдисон, НьюДжерси. Кроме того, рафинированный диметилизосорбид (ЭМ^, который также имеется у Сгоба Щс., как правило, использовали в этих примерах.

Для получения композиций вспомогательные вещества и соединения I добавляли в стеклянный контейнер и нагрели и/или разрушили ультразвуком при 65-70°С, чтобы растворить АРI полностью.

Затем образец охлаждали до комнатной температуры. Ингредиенты для двух типичных композиций, приготовленных с помощью этого способа, приведены ниже в табл. 4 и 5.

Таблица 4

Компонент	Уровень	Вес. %	Вес (г) на кг
Соединение 1	СМР	3,0	30
в высшей степени рафинированный полиэтиленгликоль 400	ΝΡ	39,95	399,5
полиэтиленгликоль4500	ΝΡ	32,0	320
бутилированный гидрокситолуол гранулированный	ΝΡ	1,0	10
муризюо-РА-зс	--	5,0	50
в высшей степени рафинированный диметилизосорбид		15,0	150
дистиллированная вода	изр	4,0	40
карамель	ΝΡ	0.05	0.5
	Итог	100	1000

- 28 030249

Таблица 5

Компонент	Уровень	Вес. %	Вес (г) на кг
Соединение 1	СМР	6,0	60
в высшей степени рафинированный полиэтиленгликоль 400	ΝΡ	33,95	339,5
полиэтиленгликоль4500	ΝΡ	35,0	350
бутилированный гидрокситолуол гранулированный	ΝΡ	1,0	10
МУРи5100-РА-5С	--	5,0	50
в высшей степени рафинированный диметилизосорбид		15,0	150
дистиллированная вода	ΙΙ5Ρ	4,0	40
карамель	ΝΡ	0,05	0,5
	Итог	100	1000

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения дискоидной красной волчанки, включающий местное введение субъекту, имеющему дискоидную красную волчанку, но не имеющему системной красной волчанки, эффективного количества соединения формулы I и/или II

   или их фармацевтически приемлемой солевой формы.
2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный субъект имеет очаги дискоидной волчанки, и соединение наносят местно на очаги дискоидной волчанки.
3. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что дискоидная красная волчанка представляет собой дискоидную красную волчанку у детей, генерализованную дискоидную красную волчанку или локализованную дискоидную красную волчанку.
4. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанный субъект не имеет антител к ДНК.
5. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что субъект не имеет антител к дц-ДНК.
6. 6. Способ по п.2, отличающийся тем, что указанное соединение также вводят субъекту системно для лечения дискоидной волчанки.
7. 7. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная фармацевтически приемлемая солевая форма представляет собой соль соединения формулы II.
8. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что указанная соль соединения II выбрана из натриевой соли, калиевой соли, кальциевой соли, соли аргининовой кислоты и холиновой соли.
9. 9. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное соединение формулы I и/или II или его фармацевтически приемлемую солевую форму вводят либо в комбинации, либо дополнительно вместе с противовоспалительным, антигистаминным, антибиотическим или противовирусным лекарственным препаратом.
10. 10. Фармацевтический состав для лечения дискоидной красной волчанки, содержащий

    основу для местного применения; растворитель, смешивающийся с водой; вещество, способствующее проникновению; смягчающее вещество;

    поверхностно-активное вещество и антиоксидант,

    где указанный состав представляет собой лекарственную форму для местного применения.
11. 11. Фармацевтический состав по п.10, отличающийся тем, что указанная лекарственная форма для

    местного применения представляет собой раствор, гель, мазь, крем, суспензию или аппликатор на клейкой основе.

    - 29 030249
12. 12. Фармацевтический состав по п.10 или 11, отличающийся тем, что указанное соединение имеет формулу I.
13. 13. Фармацевтический состав по любому из пп.10-12, содержащий

    0,1 до 10 мас.% соединения формулы I и/или соединения формулы II; от 15 до 40 мас.% основы для местного применения;

    от 25 до 50 мас.% растворителя, смешивающегося с водой; от 10 до 20 мас.% вещества, способствующего проникновению; от 3 до 15 мас.% смягчающего вещества;

    от 3 до 9 мас.% поверхностно-активного вещества и от 0,5 до 1,5 мас.% антиоксиданта.
14. 14. Фармацевтический состав по любому из пп.10-13, отличающийся тем, что:

    ΐ) основа для местного применения представляет собой полиалкиленгликоль со средней молекулярной массой от 4000 до 5000 Да; и/или

    ίί) растворитель, смешивающийся с водой, представляет собой полиалкиленгликоль с молекулярной массой от 300 до 500 Да; и/или

    ΐΐΐ) вещество, способствующее проникновению, представляет собой диметилизосорбид, пропиленгликоль или их комбинацию; и/или

    ΐν) смягчающее вещество представляет собой воду; и/или

    ν) поверхностно-активное вещество представляет собой моностеарат сорбитан, моностеарат полиэтиленгликоля (ПЭГ), сукцинат Ώ-α-токоферилового полиэтиленгликоля 1000, композицию, содержащую стеарат гликоля/стеарат ПЭГ32/стеарат ПЭГ6, или их комбинацию; и/или

    νΐ) антиоксидант представляет собой бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, аскорбиновую кислоту, токоферол или их комбинацию.