EA026453B1

EA026453B1 - Применение окисленного авидина для ингаляции

Info

Publication number: EA026453B1
Application number: EA201490401A
Authority: EA
Inventors: Рита Де Сантис
Original assignee: Сигма-Тау Индустрие Фармасьютике Риуните С.П.А.
Priority date: 2011-08-02
Filing date: 2012-07-25
Publication date: 2017-04-28
Also published as: CN103717239A; ES2729549T3; IL230597A0; CN103717239B; JP6019118B2; KR101966630B1; BR112014002593B1; US9872831B2; JP2014521675A; EA201490401A1; MX355177B; CA2842276A1; AU2012292229A1; UA114482C2; EP2739314A1; PL2739314T3; DK2739314T3; BR112014002593A2; EP2739314B1; US20140134106A1

Abstract

В изобретении описано применение окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции. Кроме того, предложен способ лечения легочных раковых заболеваний, легочных воспалительных заболеваний, выбранных из группы, включающей ХОБЛ, астму, альвеолит легких, муковисцидоз и дефицит альфа-1-антитрипсина. Способ предусматривает введение окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции, где за стадией ингаляции следует введение биотинилированного терапевтического средства. Также предложен набор для ингаляции, содержащий фармацевтическую композицию для ингаляции и распылитель, где указанная композиция включает а) окисленный авидин, b) стерильный буферный раствор с кислым рН и с) неионогенный агент. Изобретение обеспечивает эффективный способ непосредственной доставки к пораженным болезнью легким эффективного количества терапевтического средства.

Description

Изобретение относится к применению окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции. Также настоящее изобретение относится к способу лечения легочных заболеваний посредством введения окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции, где за стадией ингаляции следует введение биотинилированного терапевтического средства. Кроме того, изобретение относится к набору для ингаляции.

Уровень техники

Вдыхание распыленных терапевтических средств является распространенным способом доставки лекарственного средства для лечения легочных заболеваний, таких как астма или легочные инфекции, или других респираторных заболеваний. Тем не менее, такой способ введения обычно требует повторения лечебных процедур по несколько раз в день, что не всегда соответствует состоянию здоровья пациента, которое зависит от заболевания, которым страдает пациент, или от степени тяжести такого заболевания. Также частые ингаляции терапевтических средств являются причиной сильного стресса, сокращающего продолжительность жизни. Непрерывная небулайзерная терапия в2-агонистов является подходящей альтернативной терапией для пациентов, страдающих от тяжелой астмы (КааЬе Θ.Ο., е! а1., Апп. А11егду Акбипа 1ттипо1., 1998, 80, 499). Тем не менее, даже в этом случае терапия занимает много времени и приносит ряд неудобств в жизнь пациента.

В настоящее время серьезные легочные заболевания, такие как рак легких или муковисцидоз, лечат в основном при помощи системной терапии, которая, к сожалению, связана со значительными побочными эффектами.

Анатомия и физиология легких хорошо приспособлены для обработки экзогенными веществами путем их распыления с целью защиты органа. Также установлено, что в случае добровольного лечения путем ингаляции терапевтических средств, последние быстро выводятся, тем самым оказывая негативное влияние и ограничивая преимущество ингаляционной терапии.

Кроме того, хорошо известно, что в легких также присутствуют ферменты, нацеленные на детоксикацию органов в результате воздействия агрессивных внешних условий. Некоторые из указанных ферментов, которые имеют важное значение в функционировании легких, принадлежат к суперсемейству белков (т.е. АКК (а1боке!огебис1аке - альдокеторедуктаза)). АКК и короткоцепочечные дегидрогеназы/редуктазы (т.е. 8ЭКк) являются основными ферментами, которые катализируют окислительновосстановительные реакции с участием карбонила ксенобиотиков. Среди представителей суперсемейства 8ΌΚ карбонилредуктазы (т.е. СВКк) демонстрируют широкую субстратную специфичность для карбонилсодержащих ксенобиотиков (Ма!кипада Т., е! а1., ЭгидМе!аЬ. Рйа/тасокшеЕ 2006, 21, 1, 1).

Попытки местной доставки химиотерапевтических лекарственных средств при помощи аэрозоля недавно описывались в доклинических моделях рака легких, показывающих пониженную токсичность по сравнению с системным введением (Рике1е, 8.У., е! а1., 1. Рйатт. Рйаттасо1, 2006, 58, 3, 327).

Недавно сообщалось о составе для ингаляции в виде сухого порошка темозоломида. Для данного состава требуется уменьшение размера частиц для высвобождения 51% вводимой дозы (АУаибю/ Ν., е! а1., Рйагт. Ке8., 2011, 28, 762), а также присутствия биосовместимых и биоразлагаемых фосфолипидов, в качестве поверхностно-активных веществ, для стабилизации водной суспензии темозоломида (АУаибю/ Ν., е! а1., Еиг. 1. Рйагт. 8с1., 2010, 39, 402).

Фазу I клинических испытаний с участием цисплатина проводили для исследования безопасности и фармакокинетики цисплатина в виде аэрозольной липидной лекарственной формы нацеленного действия для ингаляции с замедленным высвобождением (8Ь1Т) у пациентов с карциномой легких. Тем не менее, в данном исследовании (^й!§еп В.Р.Н., е! а1., Сйп. Сапсег Кек., 2007, 13, 2414) наблюдался ряд побочных эффектов (т.е. тошнота, рвота, одышка, апатия и хрипота).

Лечение собак распылением 5-фторурацила показало, что лекарственное средство может достигать очень высоких концентраций преимущественно в трахее, в меньшей степени в бронхах и пищеводе и пониженной концентрации (т.е. на уровне одной пятидесятой от наблюдаемой в трахее) в лимфатические узлах на уровне бронхов (Та!китига Т., е! а1., Вг. 1. Сапсег, 1993, 68, 1146).

Тем не менее, диффузия таких небольших молекул аэрозольных лекарственных средств в крови остается актуальным вопросом вместе с потребностью в повторных введениях из-за непродолжительного периода полувыведения указанных молекул из легких.

Аэрозоль для доставки генов представляет собой другой давно используемый способ нацеленной терапии легочных заболеваний. После клонирования гена муковисцидоза наблюдался значительный интерес к неинвазивной доставке генов непосредственно к легочной поверхности при помощи аэрозоля. Данный подход может иметь применение при неоперабельном раке легких, а также наиболее ранних попытках, сосредоточенных, главным образом, на использовании невирусных векторов, преимущественно, катионных липидов и других вспомогательных веществ для приготовления составов (Эепктоте С.Ь., е! а1., 1. Сепе Меб., 1999, 1, 4, 251; Эепктоте С.Ь., е! а1., Мо1. Тйег., 2000, 1, 2, 180). К сожалению, поперечные силы распыления, недостаточное поглощение в легких и недостаточное время удерживания аэрозольных белковых терапевтических средств совместно с низкой экспрессией генетических векторов, как правило, приводят к слабому терапевтическому эффекту (8сйгсаг/, Ь.А., е! а1., Нит. Сепе Тйег., 1996, 7,

- 1 026453

731). Соответственно, в последние годы интерес к доставке в легкие биологически активных производных, содержащих белки, при помощи аэрозоля, снизился.

Хотя ингаляция терапевтических белков считалась предпочтительным решением для нацеленной терапии легких, определение состава белка, предполагаемого для распыления, остается важной задачей. Фактически, для успешного проникновения аэрозольного вещества вглубь легких требуется тщательный подбор добавок и выбор размера частиц (т.е. до 3 мкм) (С1ю1 ν.δ., е1 а1., Ргос. Νηΐΐ. АсаД. δει., 98, 20, 11103). Кроме того, в процессе распыления может быть изменена не только четвертичная, но также вторичная и третичная структуры белка. Для устранения данного недостатка Аракава Т. (Атакама Т.) с соавторами описали применение полиэтиленгликоля и/или поверхностно-активного вещества для сохранения указанной структурной конформации перед распылением (νθ 199503034).

В последнее время также были описаны привитые различными способами наночастицы нацеленного действия в легких, предназначенные для введения в форме аэрозоля, которые способны нести различные противораковые лекарственные средства, но также сообщалось, что они приводят к некоторым воспалительным недостаткам (ОаДеу Ь.А., е1 а1., Τοχίεοί. Арр1. РЬатшасок, 2006, 215, 1, 100).

Недавно была описана система доставки наночастиц на основе полимера путем ингаляции (νθ 2009121631), в которой частицы вводили мышам путем эндотрахеальной инстилляции.

Борлак Д. (Вог1ак 1.) с соавторами (ЕР2106806) описывают улучшенную систему доставки лекарственных средств в легкие, содержащую частицы на основе полимера, молекулярный линкер на основе малеимида, агент нацеленного действия, такой как антитело, низкомолекулярное соединение или белок (предпочтительно ковалентно связанный с линкером), лекарственное средство.

Такие наночастицы имеют средний размер от 150 до 180 нм. Согласно утверждениям авторов изобретения, в такой системе доставки используется преимущество молекулярного линкера, содержащего липофильный фрагмент, который нековалентно крепится к частицам полимерной матрицы, и второй фрагмент, содержащий малеимид, к которому можно привязать агент нацеленного действия. Также в соответствии с утверждениями авторов изобретения, агент нацеленного действия может являться частью связанной пары, такой как авидин-биотин. Тем не менее, конкретные варианты реализации с участием пары авидин-биотин не описаны в этом документе должным образом.

Ранее сообщалось, что составы на основе этанола подходят для распыления белков с биологической активностью, включая ферменты (С1ю1 ν.δ., е1 а1., Ргос. №11. НеаД. δει., 2001, 98, 20, 11103). Тем не менее, были описаны только очень непродолжительные периоды ингаляции этанола (т.е. 10 мин), поскольку более продолжительные ингаляции могут приводить к воспалительным побочным эффектам.

По этой причине, а также согласно описанию, приведенному выше в настоящем изобретении, физическое напряжение, присущее распылению, в сочетании с образованием большой площади границы раздела воздух-вода может дестабилизировать структуру многих белков.

Введение [^1П1п]-авидина и [^99тТс]-биотин-липосом через плевру было описано и признано лучшим способом нацеленного действия в среднестенных легочных узлах по сравнению с внутрибрюшинным введением (МеШпа Ь.А., е1 а1., №с1. МеД. Вю1, 2004, 31, 1, 41). Тем не менее, инъекция в плевральную полость подразумевает инвазивные процедуры и не подходит для обеспечения равномерного распределения в тканях легких. Фактически, цель работы Медина (МеД1па) заключалась в нацеленном действии в среднестенных легочных узлах. Кроме того, для улучшения фармакокинетических и фармакодинамических отличительных признаков требуется получение липосом с меченым биотином.

Таким образом, в медицине существует острая потребность в обеспечении конкретного способа непосредственной доставки к легким, пораженным болезнью, эффективного количества терапевтического средства для устранения ограничивающих факторов, связанных с пероральной доставкой (например, вопросы проницаемости лекарственных средств, эффекта первого прохождения); и/или другими системными способами доставки лекарственных средств, которые могут рассматриваться в случае отсутствия токсических побочных эффектов и/или быстрого выведения; и/или нестабильности терапевтических средств, связанной со способов их введения и/или метаболическими процессами; и/или необходимости многократного ежедневного введения терапевтических средств.

В настоящем изобретении было неожиданно обнаружено, что окисленный авидин, вводимый путем ингаляции, равномерно связывается с поверхностью эпителиальных клеток легких вплоть до альвеол, а также было установлено, что он ожидаемо связывается с верхними дыхательными путями (например, трахеей). Также было совершенно неожиданно обнаружено, что окисленный авидин не связывается с поверхностными тканями, такими как ткани кожи, глаз или мочевого пузыря, пока указанные поверхности остаются неповрежденными. Также было неожиданным, что при данном способе введения сохраняется химическая целостность белка.

- 2 026453

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к применению окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции. Также настоящее изобретение относится к способу лечения легочных заболеваний, включающему введение окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции, где за стадией ингаляции следует введение биотинилированного терапевтического средства. К указанным заболеваниям относятся астма, туберкулез, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), альвеолит легких, муковисцидоз и дефицит альфа-1-антитрипсина.

Биотинилирование белков, клеток и нуклеиновых кислот представляет собой биохимическую процедуру, хорошо известную в данной области техники. Биотинилирование можно проводить при помощи взаимодействия ряда различных коммерчески доступных реагентов с различными группами (т.е. первичными и вторичными аминными, сульфгидрильными и карбоксильными группами и т.п.). Реагенты для биотинилирования являются очень гибкими (большие межатомные расстояния для снижения стерических затруднений) или легко удаляемыми (для высвобождения активных фрагментов), а также широко используются нацеленного действия функциональных биотинилированных фрагментов в белках семейства авидина. В частности, биотинилирование белков широко используется для моноклональных антител и других функциональных белков (Вауег Е.А., е! а1., Ме!йойк Εηζνιηοΐ. 1990Б, 184, 138).

Подходящие биотинилированные противораковые терапевтические средства выбирают из группы, включающей, например, моноклональное антитело 1дО1, которое специфически связывается с рецептором эпидермального фактора роста (ЕОРК), такое как биотинилированный цетуксимаб (Наша Υ., е! а1., Сапсег Ке8., 2007, 67, 3809). Также биотинилированные противораковые терапевтические средства представляют собой, например, биотинилированные аддукты антитела к с-Ме! (8!е11а О.М., е! а1., ЕхрегЕ Ορίη. 1пуекйд. Огидк, 2010, 19, 11, 1381); к ФРГ (фактор роста гепатоцитов) (Окато!о У., е! а1., Мо1. Сапсег Тйег., 2010, 9, 10, 2785); к СТЬА4 (антиген 4 цитотоксических Т лимфоцитов) (Όί О1асото А.М., Сапсег 1ттипо1. 1ттипо!йег., 2009, 58, 8, 1297); к ФРЭС (фактор роста эндотелия сосудов) (Реггага Ν., е! а1., Βίосйет. Вюрйук. Кек. Соттип., 2005, 333, 2, 328); к ЕрСАМ (адгезивная молекула эпителиальных клеток) (ΚιΐΓΐζ ТЕ., е! а1., Ехрей. Ορίη. Вю1. Тйег., 2010, 10, 6, 951); к НЕК2 (рецептор эпидермального фактора роста человека) моноклональные антитела (8тйй В.Ь., е! а1., Вг. ί. Сапсег, 2004, 91, 6, 1190); к ФНО (фактор некроза опухоли) (Ва1ктШ Р., №т.Реу. Сапсег, 2009, 9, 5, 361), ТКА1Ь (ФНО-зависимый лиганд, индуцирующий апоптоз) (Ктт Т.Н., е! а1., Вюсопщд. Сйет., 2011) или другим цитокинам, таким как ИЛ-2 (интерлейкин-2) (Негйегшап К., Сапсег 1пуек!, 1989, 7, 5, 515; Ко!еп ТУ., е! а1., Су!окте, 2003, 24, 3, 57); Г-КСФ (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор) (Сауайош О., е! а1., Апйсапсег Эгидк, 2008, 19, 7, 689); ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) (Не О., е! а1., Сапсег 1ттипо1. 1ттипо!йег., 2011, 60, 5, 715); ИЛ-12 (Ретсйе! М.Ь., е! а1., ί. 1ттипо1. Ме!йойк, 2001, 248, 1-2, 91; АФтк 8., е! а1., Сапсег Кек, 2000, 60, 23, 6696); гамма-интерферон (Уетег Ь.М., Мо1.Вю!йег., 1991, 3, 4, 186). Как известно, такие терапевтические средства блокируют репликацию опухолевых клеток, вызывают гибель опухолевых клеток и/или стимулируют противораковый иммунный ответ. Тем не менее, с системным применением указанных соединений связаны токсические побочные эффекты. Следовательно, стабильная локализация биотинилированных терапевтического средства в легких при условии:

его доставки при помощи аэрозоля путем ингаляцией окисленного авидина, или при ингаляции комплекса биотинилированное терапевтическое средство/окисленный авидин, в случае совместимости распыления с целостностью и биологическим функционированием терапевтического средства или комплекса; или при его системной доставки (например, путем парентерального введения) путем ингаляцией окисленного авидина, позволит снизить терапевтическую дозу и минимальное системное воздействие указанных средств, таким образом улучшая их терапевтический индекс. Настоящее изобретение также относится к распыляемому окисленному авидину для применения для нацеленного действия в легких биотинилированных противораковых эффекторных клеток, вирусных или плазмидных векторов (ΌΆίτί 8., е! а1., 1тшипорйагтасо1., 1991, 21, 3, 199; Оепктоге С.Ь., Сигг. Сапсег Όπι§ Тагде!к, 2003, 3, 4, 275).

Настоящее изобретение также относится к аэрозольной доставке окисленного авидина в качестве подходящего способа кондиционирования легких для выявления противовоспалительных биотинилированных терапевтических средств. Подходящие противовоспалительные биотинилированные терапевтические средства включают, например, биотинилированные аддукты моноклональных антител к ФНО, к Ттеак, к ИЛ-6, к ИЛ-23, к ИЛ-17; ИЛ-10 или другие противовоспалительные цитокины (МагсЫ Е., е! а1., Сйек!, 2011) или хемокины (Рагйегшап М.М., е! а1., Ат. ί. Кекр1г. Се11 Мо1. Вю1, 2010; Таи1ег ί., е! а1., Сигг. Орш. Рйагтасо1., 2009, 9, 4, 384; НагИ Ό., е! а1., Сигг. Орт. Айегду СИп. 1ттипо1., 2009, 9, 1, 60; Вгеппап 8., е! а1., Еиг. Кекрт ί., 2009, 34,3, 655) для лечения астмы, альвеолита легких или других форм хронических воспалений легких. Также предполагается, что доставка биотинилированных ферментов, таких как альфа-1-антитрипсин, к легким путем распыления окисленного авидина позволяет лечить недостаточности первичной генетической информации (Вгапй Р., е! а1., Еиг. Кекрт ί, 2009, 34, 2, 354; Ое11ег Э.Е., е! а1., ί. Аегоко1 Мей. Ри1т. Эгид Эейу., 2010, 23 8ирр1 1, 855) и белка муковисцидозного трансмембранного

- 3 026453 регулятора проводимости (МТРП) для лечения муковисцидоза (§1оапе Р.А., е! а1., Сигг. Θρίη. Ри1т. Мей., 2010, 16, 6, 591; Рп//е11 К.А., Ат. 1. Кеври. Сгй. Саге Мей, 1995, 151, §54).

Система авидин-биотин известна в течение многих лет, как исключительное средство для качественных и количественных исследований взаимодействий между малыми молекулами и биологическими рецепторами (ХУПсНек. М., Мейюйз Еп/уто1.. 1990, 184, 14).

Авидин представляет собой гликопротеин с молекулярной массой примерно 68 кДа, содержащийся в белке яиц птиц и демонстрирующий высокое сродство к витамину Н, биотину. Его константа диссоциации (К_й ~10 ¹⁵ М) является самой низкой из известных в природе (Огееп, Ν/М., Айу. Рго!еш Спет., 1975, 29, 85; Ну1опеп У.Р., е! а1., ВюсНет. 1., 2003, 372, Р11, 219). Авидин состоит из четырех субъединиц одинаковой последовательности аминокислот, каждая из которых способна связываться с одной молекулой биотина. Гликозилирование составляет примерно 10% от его молекулярной массы при среднем содержании в субъединице от четырех до пяти остатков маннозы и трех остатков Ν-ацетилглюкозамина (ВгисЬ К.С., е! а1., ВюсЬет1в!гу, 1982, 21, 21, 5334).

В международной заявке на патент \УО 2009016031 под авторством заявителя впервые сообщалось о химически окисленном авидине, названном ОХау1йш_НАВА (в настоящем изобретении называемом окисленным авидином), который имел более высокую стабильность при введении в ткани по сравнению с авлдином дикого типа вследствие образования химических связей между альдегидными группами окисленного авидина и аминогруппами белков ткани. Указанный окисленный авидин можно вводить непосредственно в пораженную ткань индивидуально, что требует наличия второй стадии для доставки биотинилированного активного терапевтического средства, или в виде комплекса с терапевтическим средством. Важно отметить, что в указанном документе окисленный авидин вводили местно путем инъекции, что делает непрактичным однородное кондиционирование легких. Данная заявка на патент дает начало новому этапу исследований путем описания новых способов, подходящих для локализованного лечения солидных раковых опухолей и дегенеративных или генетических заболеваний. Также недавно сообщалось о переносимости окисленного авидина (Ре1гоп/е1Н Р., е! а1., Вавю СЬп. РЬагтасо1. Тохюо1., 2011, 233).

Тем не менее, даже указанное новое средство не позволяет решить проблему таких диффузных и/или неоперабельных легочных заболеваний, в частности, по причине особенности ткани легких, заключающейся в затруднительности лечения при помощи инъекций, а также непригодности хирургических процедур для достижения труднодоступных областей пораженной ткани. В частности, бронхиолоальвеолярный рак (БАР), также известный как рак выстилающих тканей легких, представляет собой форму неоплазии, затрагивающую поверхность бронхов и альвеол, которую можно лечить путем местной терапии при помощи аэрозольной доставки (Апат1 Υ., е! а1., 1. ТЬогас. Опсо1., 2009, 4, 8, 951).

Как отмечено выше, было установлено, что окисленный авидин способен эффективно достигать и связываться с тканями легких путем аэрозольного введения. Данный результат не предсказывался, исходя из данных международной заявки на патент \УО 2009016031, и дальнейшие исследования показали, что для связывания окисленного авидина с тканями требуется инъекция внутрь ткани. Фактически, осаждения окисленного авидина на неповрежденные ткани кожи или глаз недостаточно для связывания (фиг. 1). Также на мочевом пузыре свиней было подтверждено, что связывание окисленного авидина происходит только с белками ткани, подвергнутой хирургическому вмешательству (фиг. 2). Кроме того, было установлено, что распыленный окисленный авидин связывается с легкими, но не связывается с трахеей, что указывает на специфический и непредсказуемый характер связывания в данном органе (табл. 1).

Термины АуМшОХ, АуЩпОХ® и ОХау1йш_НАВА относятся к химически окисленному авидину в соответствии с примером 1 в \УО 2009016031. Выражение окисленный авидин относится к химически окисленному авидину, как определено в международной заявке на патент \УО 2009016031, т.е. к окисленному авидину, в котором по меньшей мере один остаток маннозы на молекулу авидина заменен на остаток следующей формулы но где указанный окисленный авидин содержит примерно от 8 до 15 альдегидных фрагментов и имеет термическую стабильность не менее 78°С. Альтернативно, выражение окисленный авидин также относится к соединению, которое получают путем окисления авидина в присутствии лиганда НАВА для предотвращения окисления остатков триптофана, которые участвуют в связывании биотина.

Выражение противораковое средство относится к средству, способному противостоять развитию опухолей. Неполный список противораковых средств состоит из химиотерапевтических лекарственных средств, моноклональных антител, радиоактивно меченых соединений, эффекторных клеток, токсинов, цитокинов, вирусных и плазмидных векторов, ингибиторов РНК и противораковых клеток.

- 4 026453

Термины аэрозоль, аэрозолированный, ингалируемый и распыленный относятся к одному и тому же способу образования небольших капель аэрозоля из медицинских растворов/суспензий для того, чтобы их можно было непосредственно и эффективно ингалировать через ротовую полость.

Выражения для кондиционирования легких, агент для кондиционирования легких и предварительно подготовленные легкие относятся к способу обеспечения взаимодействия клеток легких с биотинилированными терапевтическими средствами путем взаимодействия через окисленный авидин, который ингалируют заранее.

В частности, выражение для по существу полного кондиционирования легких обозначает, что после введения окисленный авидин обнаруживается по меньшей мере в 95% легких.

Таким образом, задачей настоящего изобретения является набор для ингаляции, содержащий фармацевтическую композицию для ингаляции, содержащую:

a) окисленный авидин,

b) стерильный буферный раствор с кислым рН, где указанный буфер предпочтительно представляет собой ацетат натрия, и, возможно,

c) неионогенный агент, выбранный из группы, включающей маннит, глицерин, глюкозу, лактозу, трегалозу, сахарозу, пропиленгликоль, сорбит, ксилит, полиэтиленгликоль, этанол и изопропанол;

при этом указанную фармацевтическую композицию доставляют путем ингаляции после распыления.

В предпочтительном варианте реализации кислый рН означает, что рН составляет от 5,0 до 6,9.

В более предпочтительном варианте реализации кислый рН означает, что рН составляет от 5,0 до

6,0.

В наиболее предпочтительном варианте реализации кислый рН означает, что рН составляет от 5,0 до 5,5.

В другом варианте; реализации указанная фармацевтическая композиция для ингаляции является лиофилизированной.

В предпочтительном варианте реализации окисленный авидин подходит для применения в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции.

В более предпочтительном варианте реализации окисленный авидин подходит для применения по существу полного кондиционирования легких путем ингаляции.

В другом варианте реализации за доставкой окисленного авидина следует введение терапевтического средства, где указанное терапевтическое средство является биотинилированным.

В предпочтительном варианте реализации указанная фармацевтическая композиция для ингаляции подходит для лечения следующих заболеваний: туберкулез, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), рака легких в целом и бронхиолоальвеолярного рака (БАР) в частности, астмы, альвеолита легких, воспалительных заболеваний легких, муковисцидоза и дефицита альфа-1-антитрипсина.

В другом предпочтительном варианте реализации указанная фармацевтическая композиция подходит для лечения первичного рака легких в множественной или метастатической формах.

В другом предпочтительном варианте реализации биотинилированное терапевтическое средство представляет собой биотинилированный аддукт противоракового средства.

В другом предпочтительном варианте реализации биотинилированное противораковое средство представляет собой биотинилированный аддукт хорошо известных противораковых лекарственных средсти, выбранных из группы, включающей моноклональные антитела к ЕОРК, к КЭА (карциноэмбриональному антигену), к МиС1 (муцину 1), к ЕрСАМ, к СМЕТ, к СТЬ4, ФНО, ТКА1Ь, Т\усак. гаммаинтерферон, Г-КСФ, ГМ-КСФ, ИЛ-2, ИЛ-12 или химиотерапевтические лекарственные средства.

В другом предпочтительном варианте реализации указанное противораковое средство представляет собой радиоактивное производное, выбранное из группы, включающей меченый биотин-ЭОТА (8Т2210). Последний описан в международной заявке на патент \УО 2002066075.

В другом предпочту тельном варианте реализации радиоизотоп, используемый для получения меченого биотин-ЭОТА, выбран из группы, включающей ⁵²Ре, ^52тМи, ⁵⁵Со, ⁶⁴Си, ⁶⁷Си, ⁶⁷Оа, ⁶⁸Оа, ^99тТс, ¹¹¹1и, ¹²³1, ¹²⁵1, ¹³¹1, ³²Р, ⁴⁷§с, ⁹⁰Υ, ¹⁰⁹Ρά, ¹¹¹А§, ¹⁴⁹Рт, ¹⁸⁶Ке, ¹⁸⁸Ке, ²¹¹А1, ²¹²РЬ, ²¹²Βί и ¹⁷⁷Ьи.

В другом более предпочтительном варианте реализации указанное противораковое средство представляет собой биотинилированный аддукт хорошо известных противораковых лекарственных средств, выбранных из группы, включающей вирусные и плазмидные векторы, ингибиторы РНК и противораковые клетки.

В другом предпочтительном варианте реализации биотинилированное средство представляет собой средство, подходящее для лечения воспалительных заболеваний легких, и биотинилированный аддукт хорошо известных противовоспалительных лекарственных средств, выбранных из группы, включающей моноклональные антитела к ФНО, к Тгеак, к ИЛ-17, к ИЛ-23, к ИЛ-6, к ИЛ-1, ИЛ-10 или хемокины.

В другом предпочтительном варианте реализации в случае генетических заболеваний легких терапевтическое средство представляет собой биотинилированный аддукт известного неполноценного белка, например, СРТСК, и альфа-1-антитрипсина при муковисцидозе.

В другом предпочтительном варианте указанная композиция является лиофилизированной или рас- 5 026453 творенной в стерильном буферном растворе.

В другом более предпочтительном варианте реализации указанный набор содержит указанную фармацевтическую композицию для ингаляции и распылитель.

Количество окисленного авидина, которое требуется для достижения терапевтического эффекта, изменяется в зависимости от пациента, получающего лечение, и конкретного расстройства или заболевания, подвергающегося лечению. Также оно зависит от эффективности используемого распылителя и осаждения капель аэрозоля в легких. Подходящие концентрации окисленного авидина в растворе для распыления находятся в диапазоне от 0,005% до 0,5 (мас./об.) (т.е. от 0,0 5 мг/мл до 5 мг/мл).

Для регулирования осмоляльности раствора для распыления можно использовать неионогенный агент. Примеры неионогенных агентов для регулирования осмоляльности, которые можно использовать в настоящем изобретении, выбраны из группы, включающей маннит, глицерин, глюкозу, лактозу, трегалозу, сахарозу, пропиленгликоль, сорбит, ксилит, полиэтиленгликоль, этанол и изопропанол.

Помимо неионогенного агента, описанного выше в настоящем изобретении, композиция согласно настоящему изобретению может содержать одно или более дополнительные подходящие вспомогательные вещества. Подходящие вспомогательные вещества включают агенты для изменения рН раствора и возможно консерванты.

Состав согласно настоящему изобретению можно размещать в подходящих емкостях, таких как ампулы с несколькими дозами или, предпочтительно, ампулы, содержащие одну дозу, для разового введения. Раствор для распыления согласно настоящему изобретению можно получать следующим образом: окисленный авидин из первой ампулы можно растворять путем добавления стерильного раствора ацетата натрия при рН 5,5, содержащегося во второй ампуле.

Составы согласно настоящему изобретению предназначены для введения путем распыления при помощи подходящего оборудования, которое способно получать очень мелкие капли жидкости для ингаляции в легкие. Подходящим оборудованием являются, например, струйные или ультразвуковые распылители.

Описание чертежей

Фиг. 1:

на фиг. 1 приведено удерживание комплекса окисленный авидин/¹¹¹1и-§Т2210 в тканях глаз (нанесение в виде капель), языка (в/м инъекция), конечностей (в/м инъекция), кожи тела (нанесение в виде капель), кожи головы (нанесение в виде капель).

Фиг. 2:

на фиг. 2 приведена связь 68-Са-8Т2210, введенного внутривенно, с хирургическим вмешательством, осуществленном в мочевом пузыре свиньи, для имитации удаления поверхностной карциномы мочевого пузыря человека (стрелка). Изображение было получено через 4 ч после инъекции 68-Са-8Т2210 при помощи позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ).

Фиг. 3:

на фиг. 3 показана химическая целостность окисленного авидина в течение 1 ч после распыления в 100 мМ растворе ацетата натрия при рН 5,5 и без вспомогательного вещества.

Фиг. 4:

на фиг. 4 приведено распределение ¹¹¹1и-§Т2210, введенного внутривенно, при Т = 2 часам и Т = 24 часам в различных органах мыши, которой делали инъекцию за 24 ч до ингаляции окисленного авидина или носителя.

Фиг. 5:

иммунохимия противоавидиновых антител в срезах легких у мышей через 24 ч после воздействия аэрозоля окисленного авидина.

Фиг. 6:

снимки ПЭТ ⁶⁴Си-8Т2210, введенного внутривенно мышам, которые подвергались воздействию аэрозоля окисленного авидина 24 ч ранее.

Фиг. 7:

клетки ЕСРК+ А431, инкубированные с биотинилированным цетуксимабом в дозах 5 мкг, 0,05 мкг, 0,05 нг и 0,05 пг/мл в течение 1 ч в ФСБ (фосфатно-солевом буфере) без (а) предварительной обработки или с (Ъ) предварительной обработкой окисленным авидином.

Фиг. 8:

на фиг. 8 показано ингибирование пролиферации А431 клеточной линии с биотинилированным цетуксимабом с предварительной обработкой и без предварительной обработки окисленным авидином.

Фиг. 9:

на фиг. 9 приведен цитофлуориметрический анализ индукции апоптоза биотинилированным цетуксимабом для двух клеточных линий, одна из которых имела высокий уровень экспрессии ЕСРК (т.е. А431), а вторая не экспрессировала ЕСРК (т.е. §КМе128), с обработкой и без обработки окисленным авидином.

Фиг. 10:

на фиг. 10 показано ингибирование пролиферации, вызванное биотинилированным цетуксимабом, с

- 6 026453 предварительной обработкой и без предварительной обработки ΆνίάίηΘΧ для клеток А431, А549 (т.е. клетки карциномы легких, имеющие низкий уровень экспрессии ЕОРК с мутацией ККА8) и 8КМе128.

Примеры

Пример 1.

Указанные участки Ва1Ь/с мышей массой примерно 20 г обрабатывали раствором авидина или окисленного авидина, полученного согласно процедуре, описанной в примере 1 международной заявки на патент \УО 2009016031 (3,0 мг/мл растворяли в 100 мМ растворе ацетата натрия, рН 5,5), предварительно образовавшего комплекс с ^П11п- 8Т2210. Через 24 ч после инъекции/нанесения мышей умерщвляли при помощи асфиксии, вызванной избытком СО₂, и обработанные участки анализировали при помощи гамма-счетчика. Данные представлены на фиг. 1 и выражены в виде % введенной дозы/100 мг ткани (%ВД/100 мг). Результаты показывают содержание большего статистически значимого количества комплекса окисленный авидин/^ш1п- 8Т2210 в тканях языка, мышц конечностей и местно обработанной кожи головы по сравнению с комплексом авидин/^ш1п-8Т2210. Тем не менее, нанесение комплекса окисленный авидин/^ш1п-8Т2210 или авидин/^ш1п-8Т2210 на нормальную кожу или в глаза не приводило к аналогичным результатам, указывая на то, что комплекс не связывается с внешними поверхностями тканей и, следовательно, для обеспечения связывающих свойств окисленного авидина, вводимого индивидуально или в виде комплекса с биотинилированным агентом, требуется хирургическая операция.

Пример 2.

Анестезированных самок свиней 40 кг подвергали хирургической операции для нанесения двух 2 см поверхностных повреждений на стенках мочевого пузыря. Затем через катетер закапывахи 30 мл раствора окисленного авидина (3,0 мг/мл растворяли в 100 мМ растворе ацетата натрия, рН 5,5) и оставляли реагировать на 1 час. Затем мочевой пузырь промывали солевым раствором и внутривенно вводили 0,5 мкг 68-Оа-8Т2210. Через 4 ч свиней подвергали процедуре ПЭТ. Результаты, приведенные на фиг. 2, показывают, что только участок, подвергнутый хирургическому вмешательству (т.е. участок с 2 мм повреждением), способен связывать окисленный авидин, в то время как неповрежденная ткань мочевого пузыря оказалась совершенно инертной к альдегидным фрагментам окисленного авидина. Тем не менее, эти удивительные данные соответствуют результатам из примера 1, в котором нехирургически поврежденные ткани оказались инертны к окисленному авидину.

Пример 3.

100 мМ раствор ацетата натрия с рН 5,5, содержащий окисленный авидин в концентрации 3,0 мг/мл, распыляли при помощи Ыо8е-Оп1у шЕхроке 8укХет (Зспед- ЕМКА Хесйпо1од1ек) в течение 1 ч при комнатной температуре. Размер частиц в растворе белка составлял 5 мкм. Распыленный раствор извлекали из пробирки Ра1соп и анализировали при помощи ВЭЖХ. Данные на фиг. 3 представляют собой аналогичные профили элюции для раствора окисленного авидина до и после распыления, что свидетельствует об идеальной стабильности белка. Данный результат не был гарантирован, поскольку многие белки и нуклеиновые кислоты нуждаются в обширных исследованиях для определения условий, позволяющих сохранить целостность и эффективность таких лекарственных средств в процессе распыления (Ое11егЭ.Е., еХ а1., I. Аегоко1 Меб. Ри1т. Эгид Эейу., 2010, 23 8ирр1 1, 855; Μ^^νΐο 8.Ν., еХ а1., Ат. I. Сйп. Опсо1., 2008, 31, 6, 573; СЬм ^.8., еХ а1., Ргос. №И. Асаб. 8с1., 98, 20, 11103).

Интересно отметить, что вопреки тому, что производные альдегидов являются весьма восприимчивыми к гидратации в присутствии воды, подобный процесс не наблюдался при распылении окисленного авидина. Фактически, было установлено, что количество альдегидных фрагментов на молекулу, определенное при помощи способа Ригра1б (СпекегЬеггу М.8., еХ а1., Апа1. Вюсйет., 1996, 234, 1, 50), являлось по существу одинаковым (с учетом изменчивости при исследовании) до и после распыления при рН 5,0 и рН 5,5 с присутствием и в отсутствие маннита в качестве вспомогательного вещества, как показано в данных табл. 1.

Таблица 1

	Количество СНО
Партия окисленного авидина	фрагментов	на молекулу
	До	После
	р аспьш ения	распыл ения
Состав с маннитом с рН 5,0	19,7	19,2
Состав с маннитом с рН 5,5	17,1	19,4
Состав с ацетатным буфером с рН 5,5	16,4	16,7

Пример 4.

Биологическую активность и биораспределение распыленного окисленного авидина для крыс оценивали путем измерения поглощения в легких и нецелевых органах 5 мкг меченого ^1Пиндием биотинЭОТА (т.е. ^1П1п-8Т2210), введенного внутривенно через 24 ч после ингаляции окисленного авидина, авидина (3,0 мг/мл раствор, 0,8 мл/мин, распыление в течение 1 ч) или носителя.

- 7 026453

Двадцать крыс Спрага-Доули делили на три группы. Каждая из групп получала следующее лечение: первую группу (состоящую из 4 крыс) подвергали распылению только носителя (т.е. 100 мМ раствора ацетата натрия с рН 5,5) и через 24 ч крысам внутривенно вводили 5 мкг ¹¹¹1и-§Т2210 в 0,5 мл солевого раствора;

вторую группу (состоящую из 8 крыс) подвергали распылению авидина (примерно 10 мг/кг) в 100 мМ раствора ацетата натрия с рН 5,5 и через 24 ч крысам внутривенно вводили 5 мкг ¹¹¹1и-§Т2210 в 0,5 мл солевого раствора;

третью группу (состоящую из 8 крыс) подвергали распылению окисленного авидина (примерно 10 мг/кг) в 100 мМ раствора ацетата натрия с рН 5,5 и через 24 ч крысам внутривенно вводили 5 мкг ^|н1п8Т2210 в 0,5 мл солевого раствора.

Всех крыс умерщвляли через 2 после внутривенного введения ¹¹¹1и-§Т2210, а затем образцы крови, селезенки, почек, печени, желудка, мозга, трахеи и тканей различных участков легких отбирали, взвешивали и исследовали при помощи гамма-счетчика (Регкт Е1тег). Данные выражали в виде % введенной дозы/грамм ткани (%ВД/г).

Как видно из табл. 2, ингаляция окисленного авидина позволяет статистически значимым образом увеличивать концентрацию ¹¹¹1и-§Т2210 в легких, в то время как в других органах не наблюдалось статистически значимых расхождений в концентрациях ¹¹¹1и-§Т2210 по сравнению с группами, получающими авидин или только носитель.

Таблица 2

Группа	“Чп-втггю %вд/г
Только носитель	Авидин	Окисленный авидин
Кровь	0.011+0,005	0,009±0,005	0,012+0,004
Селезенка	0.105+0,159	0,027+0,003	0,032+0,002
Почки	0.426+0,082	0,378±0,048	0,414±0,033
Печень	0,04б±0,009	0,041+0,007	0,051±0,005
Желудок	0,031±0,011	0,067+0,085	0,276+0,246
Мозг	0.002+0,001	0,002+0,000	0,002+0,000
Трохея	0.021+0,007	0,022+0,008	0,029+0,007
Легкие	0.024±0,004	0,023+0,006	0,054+0,009***
Легкие еп	0,024±0,004	0,023±0,006	0,053+0,008***
Легкие άχ (хвостовая доля)	0.024 + 0,004	0,022+0,006	0,055±0,009***
Легкие Лх	0,025+0,004	0,023+0,005	0,055+0,011***

(краниальная, средняя
и добавочная доли)

♦**1 р < 0,001 однсфакторный Апоча относительно авид+на

Пример 5.

С целью определения селективности и стабильности поглощения ¹¹¹1и-§Т2210 в легких проводили исследование биораспределения. Ва1Ь/с мышей массой примерно 20 г (5 мышей на группу) подвергали распылению (т.е. при помощи Ыо8е-Оп1у 1иЕхро8е 8у8(ет 8сйес.]-ЕМ1<А (есЬио1од1е8) окисленного авидина (3 мг/мл раствор) или только носителя (3 мл) в течение 1 ч; продолжительность в 1 ч соответствует дозе примерно 90 мг/кг. Через 24 ч всем мышам внутривенно вводили ¹¹¹1и-§Т2210 (т.е. 1 мкг в 0,2 мл солевого раствора) и после дополнительных 2 или 24 ч мышей умерщвляли при помощи асфиксии, вызванной избытком СО₂. Легкие и нецелевые органы отбирали, взвешивали и исследовали при помощи гамма-счетчика. Данные выражали в виде % введенной дозы/грамм ткани.

Результаты, приведенные на фиг. 4, демонстрируют специфичное и значительное поглощение ¹¹¹1и8Т2210 только в легких, которые были предварительно обработаны окисленным авидином.

Пример 6.

Ва1Ь/с мышей массой примерно 20 г подвергали распылению окисленного авидина согласно процедуре, описанной в примере 3, и через 24 ч умерщвляли при помощи асфиксии. Легкие удаляли и фиксировали формальдегидом и заливали парафином. Серийные срезы, полученные при помощи микротома, обрабатывали и инкубировали с кроличьим антиавидиновым антителом, конъюгированным с НКР (СеиеТех, И8А), а затем с субстратом ΌΑΒ.

На фиг. 5 показано присутствие окисленного авидина на бронхоэпителиальном уровне вплоть до концевых бронхиол. Было установлено, что данное распределение является однородным во всех отделах легких.

- 8 026453

Пример 7.

Ва1Ь/с мышей массой примерно 20 г подвергали распылению окисленного авидина или только носителя согласно процедуре, описанной в примере 5. Через 24 ч мышам внутривенно вводили 1 мкг ⁶⁴СиЗТ2210. Через 4 ч исследовали распределение ⁶⁴Си-ЗТ2210 при помощи снимков ПЭТ. На фиг. 6 показано присутствие радиоактивного сигнала в легких мыши, предварительно обработанных распыленным окисленным авидином, и отсутствие сигнала в легких мышей, получавших только носитель. Для обеих групп мышей наблюдаются сигналы в почках и мочевом пузыре. Данное наблюдение согласуется с процессом физиологического выведения 8Т2210 к данному моменту времени. Также для обеих групп мышей наблюдается радиоактивный сигнал в одной конечности, поскольку им предварительно одновременно с аэрозолем внутримышечно вводили окисленный авидин для обеспечения внутреннего положительного контроля в эксперименте.

Пример 8.

ЕСРР' клетки А431 глоскоклеточного рака инкубировали в ФБР в течение 1 ч с 1 мл моноклональных биотинилированных антител к ЕСРР (т.е. биотинилированного цетуксимаба) в диапазоне доз от 0,05 пг/мл до 5 мкг/мл. В одном из экспериментов клетки предварительно инкубировали с окисленным авидином, в то время как в первом эксперименте клетки обрабатывали только биотинилированным цетуксимабом.

После промывки связывание биотинилированного цетуксимаба определяли при помощи цитофлуориметрии после инкубации с мышиными антителами для человека, конъюгированными с фикоэритрином (ФЭ). Согласно фиг. 7 в присутствии окисленного авидина связывание биотинилированного цетуксимаба в малых дозах, таких как 0,05 нг и 0,05 пг/мл, с клетками А431 остается заметным.

Пример 9.

Данные, представленные на фиг. 8, демонстрируют, что противопролиферативная активность биотинилированного цетуксимаба (эксперимент проводили, как описано в примере 8) возрастает по меньшей мере в 3 раза из-за его иммобилизации за счет связывания с мембраносвязанным окисленным авидином даже при таких малых дозах, как 0,05 нг и 0,05 пг/мл. Ингибирование пролиферации измеряли при помощи исследования Се11 ТПег С1о\у. Рготеда. Данные выражали в виде % ингибирования пролиферации клеток при отсутствии окисленного авидина (т.е. белые столбцы) или в его присутствии (т.е. черные столбцы). Кроме того, как сообщалось ранее (Ре1гоп/еШ Р., е1 а1., Вакю С1ш. РЬагтасо1. Тох1со1., 2011, 233), окисленный авидин не влияет на пролиферацию клеток, что наблюдалось в сравнительном эксперименте с участием только среды (данные не приведены).

Пример 10.

Индукцию апоптоза биотинилированным цетуксимабом с предварительной обработкой или без предварительной обработки ΑνίάίηΟΧ исследовали на ЕСРР' клетках.

А431 (клетки вульварной плоскоклеточной карциномы, имеющие высокий уровень экспрессии ЕСРР с КРАЗ дикого типа) и ЕСРР^- клетках 8КМе128 (которые не экспрессируют ЕСРР). Клетки инкубировали в течение 15 мин с биотинилированным цетуксимабом (б-цетуксимаб) с предварительной обработкой или без предварительной обработки ΑνίάίηΟΧ. После промывки клетки инкубировали в полной среде в течение 18 ч. Положительные по аннексину V клетки исследовали при помощи цитофлуориметрии с использованием прибора I для определения апоптоза клеток аннексии ν-ФИТЦ (флуоресцеинизотиоцианат) (ВИ РЬагттдеп). Данные из фиг. 9 показывают, что проапоптозный эффект биотинилированного цетуксимаба возрастает по меньшей мере в 3 раза, в случае связывания ΑνίάίηΟΧ с мембраной ЕСРР^' клеток, но не в случае ЕСРР^- клеток, что указывает на специфичность проапоптозной активности биотинилированного цетуксимаба, привязанного при помощи ΑνίάίηΟΧ.

Пример 11.

Ингибирование пролиферации биотинилированным цетуксимабом с предварительной обработкой или без предварительной обработки ΑνίάίηΟΧ исследовали на клетках А431, А549 (т.е. клетки карциномы легких, имеющие низкий уровень экспрессии ЕСРР с мутацией ΚΚΑ3) и ЗКМе128. Для исследования влияния привязанного биотинилированного цетуксимаба на пролиферацию клеток 5х10⁵ клеток А431, А549 и ЗКМе128, с предварительной инкубацией и без предварительной инкубации с ΑνίάίηΟΧ, высеивали в 96-луночные титрационные планшеты (2x10 клеток на лунку) в среде ИМЕМ (модифицированной по способу Дульбекко среде Игла), содержащей 10% ЭТС (эмбриональной телячьей сыворотки). После адгезии трижды добавляли 100 мкл биотинилированного цетуксимаба в диапазоне от 0,05 пг/мл до 5 мкг/мл в среде ЭМЕМ, содержащей 1% ЭТС. Через 15 мин клетки промывали и культивировали в течение 48 ч в среде ЭМЕМ, содержащей 1% ЭТС. Жизнеспособность клеток определяли при помощи исследования Се11ТПег-С1о\у® (Рготеда). Данные из фиг. 10 показывают, что биотинилированный цетуксимаб способен ингибировать пролиферацию клеток, имеющих высокий уровень экспрессии ЕСРР (т.е. А431клетки вульварной карциномы) и имеющих низкий уровень экспрессии ЕСРР (т.е. мутация ΚРΑЗ, А549клетки аденокарциномы легкого у человека), но не ингибирует пролиферацию ЕСРР клеток (ЗКМе128). Удивительно, но данное влияние значительно улучшается при связывании биотинилированного цетуксимаба при помощи ΑνίάίηΟΧ с поверхностью таких ЕСРР' клеток.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции.
2. Применение по п.1 для по существу полного кондиционирования легких.
3. Способ лечения легочных раковых заболеваний, легочных воспалительных заболеваний, выбранных из группы, включающей ХОБЛ, астму, альвеолит легких, муковисцидоз и дефицит альфа-1антитрипсина, включающий введение окисленного авидина в качестве агента для кондиционирования легких путем ингаляции, где за стадией ингаляции следует введение биотинилированного терапевтического средства.
4. Способ лечения по п.3, отличающийся тем, что биотинилированное терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из радиоактивного агента, моноклональных антител, цитокинов, хемокинов, ферментов, химиотерапевтических лекарственных средств, вирусных или плазмидных векторов и клеток.
5. Способ лечения по п.4, отличающийся тем, что моноклональное антитело представляет собой биотинилированное производное моноклонального антитела, выбранное из группы, состоящей из моноклональных антител к ЕОРК, КЭА, МИС1, ЕрСАМ, сМЕТ, СТЬ4, ФНО, Т^еак, ИЛ-17, ИЛ-23, ИЛ-6, ИЛ1, ФНО и Т\\еак.
6. Способ лечения по п.4, отличающийся тем, что биотинилированный цитокин представляет собой биотинилированный аддукт цитокина, выбранного из группы, состоящей из ФНО, Тетеак, ТКА1Ь, гаммаинтерферона, Г-КСФ, ГМ-КСФ, ИЛ-2, ИЛ-12.
7. Способ лечения по п.4, отличающийся тем, что биотинилированный хемокин представляет собой биотинилированный аддукт хемокина, выбранного из группы, состоящей из хемокинов семейств СХС и СС.
8. Способ лечения по п.4, отличающийся тем, что биотинилированный фермент представляет собой белок-регулятор трансмембранной проводимости при муковисцидозе.
9. Способ лечения по п.4, отличающийся тем, что биотинилированный радиоактивный агент представляет собой биотин-ЭОТА, меченный радиоизотопом, выбранным из группы, включающей ⁵²Ре, ^52тМп, ⁵⁵Со, ⁶⁴Си, ⁶⁷Си, ⁶⁷Оа, ⁶⁸Оа, ^99тТс, 1п. ¹²³1, ¹²⁵1, ¹³¹1, ³²Р, ⁴⁷8с, ⁹⁰Υ, РТ Ад. ¹⁴⁹Рт, ¹⁸⁶Ке, ¹⁸⁸Ке, ²¹¹Αΐ, ²¹²РЬ, ²¹²Βί и ¹⁷⁷Ьи.
10. Набор для ингаляции, содержащий фармацевтическую композицию для ингаляции, включающую:

a) окисленный авидин,

b) стерильный буферный раствор с кислым рН и дополнительно включающую:

c) неионогенный агент, выбранный из группы, включающей маннит, глицерин, глюкозу, лактозу, трегалозу, сахарозу, пропиленгликоль, сорбит, ксилит, полиэтиленгликоль, этанол и изопропанол;

и распылитель.
11. Набор для ингаляции по п.10, в котором стерильный буферный раствор с кислым рН представляет собой ацетат натрия.
12. Применение набора по п.10 для лечения легочных раковых заболеваний, легочных воспалительных заболеваний, выбранных из группы, включающей ХОБЛ, астму, альвеолит легких, муковисцидоз и дефицит альфа-1-антитрипсина.