EA026105B1

EA026105B1 - Способ получения мангиферина

Info

Publication number: EA026105B1
Application number: EA201500621A
Authority: EA
Inventors: Джаваншир Иса оглы Исаев; Гамид Мехти оглы Гурбанов
Original assignee: Джаваншир Иса оглы Исаев
Priority date: 2015-01-23
Filing date: 2015-01-23
Publication date: 2017-03-31
Also published as: EA201500621A1

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, касается получения биологически активных веществ из растительного сырья, в частности получения вещества ксантонового характера - мангиферина, предназначенного для использования в производстве лекарственных препаратов. Сущность изобретения состоит в способе получения мангиферина путем экстракции растительного сырья, в качестве которого используют корневища или листья касатика медведева (İris medwedewii), 90%-ным метиловым спиртом. Сырье предварительно обрабатывают гексаном, экстракт упаривают, обрабатывают горячей водой для очистки и из водного раствора н-бутанолом извлекают технический мангиферин. Перекристаллизацию целевого продукта осуществляют из 90%-ного метилового спирта. Технический эффект заявляемого изобретения состоит в том, что разработана технология получения мангиферина высокой чистоты и с высоким выходом целевого продукта из нового вида растительного сырья - İris medwedewii с более высоким содержанием мангиферина.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, касается получения биологически активных веществ из растительного сырья, в частности получения вещества ксантонового характера - мангиферина, предназначенного для использования в производстве лекарственных препаратов.

Известно, что мангиферин - ксантоновый гликозид фенольной природы, обладает высокой биологической активностью, широко распространен в растительном мире и введен как лекарственный препарат антивирусной активности - алпизарин в научную медицину. Мангиферин оказывает кардиотоническое, диуретическое, психотропное, противотуберкулезное, гидрохолеретическое действие и стимулирует активность центральной нервной системы; он способен устранять гиперкалиемию, снижать токсические проявления калия, обладает иммуностимулирующими свойствами. Обладает выраженной противовирусной активностью в отношении ДНК-содержащих вирусов, в том числе вируса простого герпеса, УапсеИа ζοδΐβτ (вирус опоясывающего лишая и ветрянной оспы), цитомегаловирусов. Поэтому получение мангиферина и поиск источников для его производства является актуальным в настоящее время.

Известны способы получения мангиферина из различного вида растительного сырья, изученного на содержание ксантоновых гликозидов (кора и листья мангового дерева, надземные и подземные части разновидностей копеечника, аномеррана, афлойя и горечавки) путем экстракции сырья каким-либо органическим растворителем, упаривания, очистки от сопутствующих веществ, кристаллизации и сушки. Способы в зависимости от перерабатываемого сырья и используемого экстрагента позволяют получить мангиферин с определенным % выходом на перерабатываемое сырье.

Однако известные методы не могут обеспечить все возрастающий спрос потребительского рынка лекарственных препаратов подобного типа из-за ограниченных доступных сырьевых баз, невысокого выхода и чистоты целевого продукта.

Известен способ (1) получения мангиферина из надземной части растений рода копеечник, например Нейукагит а1ршит Ь. или Нейукагит йауексеик Кеде1 е1 8сЬта1Ь, путем экстракции растительного сырья смесью ацетон-вода при комнатной температуре, упаривания, фильтрации, подкисления фильтрата серной кислотой до рН 2 и кипячения смеси в течение 0,5 ч, охлаждения, фильтрования, очистки раствора дихлорэтаном, извлечения действующего вещества экстракцией бутанолом, насыщенным водой, упаривания бутанольных извлечений, охлаждения, отделения осадка технического мангиферина, сушки и перекристаллизации из смеси диоксан-вода. Выход мангиферина составляет около 1 мас.% от исходного растительного сырья.

Недостатком данного способа является низкий выход целевого продукта.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является известный (2) способ, по которому экстракцию растительного сырья, в качестве которого используют надземную часть копеечника альпийского (Нейукагит а1ршит Ь), или копеечника желтеющего (Н. йауексеик Кеде1 е1 8сЬта1Ь), или листья мангового дерева (Маидйета шйюа Ь), проводят 82-96%-ным этиловым или 50-90%ным метиловым спиртом. Очистку сконцентрированного и обработанного горячей водой экстракта осуществляют хлорсодержащим растворителем, например хлороформом, а перекристаллизацию технического продукта проводят из 60-80%-го этилового спирта. При этом выход мангиферина на привозное изза границы сырье (листья мангового дерева) - 3,5%.

Недостатком указанного способа является невысокий выход мангиферина, несмотря на высококачественное сырье (листья мангиферина), а также недоступность такого вида сырья из-за необходимости его ввоза из заграницы и ограниченная сырьевая база копеечника.

Задача изобретения состоит в разработке способа получения мангиферина из нового растительного сырья, расширяющего доступную сырьевую базу для производства мангиферина и повышению выхода целевого продукта.

Сущность изобретения состоит в способе получения мангиферина путем экстракции растительного сырья, в качестве которого используют корневища или листья касатика медведева (1г1к тей\уейе\ун). 90%-ным метиловым спиртом. Сырье предварительно обрабатывают гексаном, экстракт упаривают, обрабатывают горячей водой для очистки и из водного раствора н-бутанолом извлекают технический мангиферин. Перекристаллизацию целевого продукта осуществляют из 90%-ного метилового спирта.

Сопоставительный анализ заявляемого изобретения и прототипа показал, что заявляемое решение отличается новыми существенными признаками: новым видом сырья, предварительной очисткой от балластных веществ гексаном и использование для перекристаллизации 90%-го метилового спирта. Род касатиковых - 1пк - насчитывает около 400 видов растений, произрастающих по всему северному полушарию, за исключением Арктики. Только в Азербайджане произрастают 20 видов касатика. Известно, что различные виды касатиков в разных регионах мира в нативном виде применяют как диуретические, кардиотонические иммуномодулированные, антимикробные, антивирусные средства. Поэтому использование в качестве сырья корневищ или листьев касатика медведева (1г1к тейетейетеп), исследованных авторами изобретения, позволяет расширить сырьевую и доступную базу для производства мангиферина. Предварительная очистка сырья гексаном позволяет повысить чистоту и выход целевого продукта. Зависимость выхода мангиферина от предварительной обработки сырья с гексаном представлена в табл. 1.

- 1 026105

Таблица 1

	Корневище	Листья
№	При	Без	При	Без
опыта	обработке	обработки	обработке	обработки
	гексаном	гексаном	гексаном	гексаном
1	4,31	3,24	1,24	1,07
2	4,29	3,18	1,23	1,08
3	4,30	3,34	1,24	1,02
4	4,33	3,11	1,25	1,03

5	4,31	3,28	1,23	1,00
6	4,32	3,09	1,25	1,07

Опытным путем было установлено, что наилучшим экстрагентом для выделения ксантоновых гликозидов из данного вида сырья, в отличие от прототипа, а также для повышения чистоты целевого продукта является 90% метиловый спирт. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию новизна. Сопоставительный анализ с другими техническими решениями показал, что заявляемое изобретение соответствует критерию изобретательский уровень, т.к. используемые в изобретении приемы экстракции, очистки и применяемые реагенты для осуществления способа не являются пионерскими, однако совокупность всех признаков заявляемого решения дает новый технический эффект, заключающийся в получении мангиферина высокой чистоты из нового вида сырья, расширяющего доступную сырьевую базу. Способ осуществляется следующим образом.

Воздушно-сухие и измельченные корневища или листья касатика медведева для очистки сырья от малополярных примесей заливают гексаном в соотношении сырье:экстрагент 1:5 и оставляют на 5 ч, затем гексановый экстракт отгоняют с полученим сухого остатка. Сырье в виде сухого остатка заливают 90%-ным метиловым спиртом, нагревают до 50°С и многократно настаивают при непрерывном перемешивании. Экстракты отфильтровывают и объединяют. Из объединенных спирто-водных извлечений под вакуумом отгоняют спирт и остаток упаривают. К водному остатку добавляют горячую воду (95°С) и отстаивают при температуре 5-10°С для выпадания остатока смол и других балластных веществ. Раствор суммы ксантоновых гликозидов декантируют, осадок фильтруют, промывают очищенной водой и объединяют с фильтратом. Из водного раствора сумму ксантоновых гликозидов извлекают н-бутанолом, насыщенным водой, порциями. Бутанольные извлечения упаривают в вакууме, помещают в холодильник и оставляют для кристаллизации на 12 ч при 5-10°С. Осадок фильтруют, промывают охлажденным метиловым спиртом и сушат на воздухе. Получают технический мангиферин. Технический мангиферин растворяют при кипении в 90%-ном метиловом спирте, фильтруют, спиртовый раствор упаривают до первоначального объема и оставляют на кристаллизацию (10 ч при комнатной температуре). Готовый продукт отделяют фильтрованием и сушат. В итоге получают конечный продукт на исходное сырье - 4,31% корневиша или 1,24% для листьев, содержащего 98% мангиферина.

Качественное содержание мангиферина в исходном сырье определяли хроматографическим методом с последующим определением разделяемых веществ с использованием ВЭЖХ в модификации авторов изобретения. Отличия использованной методики касаются в основном способов элюирования и последующего определения веществ.

г (точная навеска) измельченного сырья заливают 50 мл 60% этанола и экстрагируют на водяной бане в течение 1 ч. Отфильтровывают через бумажный фильтр и повторяют экстракцию еще дважды по 30 мин. Объединенный экстракт упаривают досуха и остаток растворяют в небольшом количестве 70% этанола (полученный объем - 15 мл). 0,04 мл спиртового экстракта микропипеткой наносят на бумагу для хроматографии (марка \νΐι;·ιΙιη;·ιη) и, для отделения мангиферина от его изомеров, разгоняют с помощью двумерной бумажной хроматографии (система 1: бутанол-кислота уксусная-вода в соотношении 4:1:5; система 2:2% кислота уксусная). Затем на высушенной хроматограмме под УФ-светом в парах аммиака, проявляются два-три ярко-оранжевых и желто-зеленых пятна, одно из которых - мангиферин.

Для количественного определения мангиферина пятна вырезают, измельчают, смывают вещества абсолютным метанолом (20 мл) в течение 6 ч и отфильтровывают в градуированные пробирки. После фильтрования объем доводят до метки метанолом. Количественное определение мангиферина проводят методом ВЭЖХ на приборе ЛдПсШ серии 1100 при длине волны 257 нм, мобильная фаза (метанол-дист. вода в соотношении 80:20), объем инжекции в прибор 10 мл, температура колонки - комнатная, скорость потока 1 мл/мин. Колонка: АдПеи! 2отЬах 8В-С18 (4,6x250 мм, 5 мкм).

- 2 026105

Количесвенное содержание мангиферина в процентах расчитывают по формуле _х_ Адтрге · τι_ί[α · 2 · 15 · 20 · 100 ' ^ίαηιρίε ’ 25 ’ 10'0.04 где А_8атр1е - площадь пика образца; А,„| - площадь пика стандарта; т_8атр1е - масса сырья, в г; - масса стандарта, в г.

Приготовление стандартного раствора мангиферина: 0,0118 г (точная навеска) поместили в 25 мл мерную колбу и растворили в небольшом количестве метанола и объем довели до метки метанолом. 2 мл полученного раствора перенесли в 10 мл мерную колбу и объем раствора довели до метки метанолом. Раствор используют свежеприготовленным.

Для статистической обработки полученных результатов количественное определение каждого образца было проведено 6 раз. Полученные результаты показаны в табл. 2.

Таблица 2

Название сырья 1г18 к. ΜβάνβΟβννί	Содержание мангиферина, в %-ах	Метрологическая характеристика
	4,31 4.29 4.30	Х=4,31%; 8=0,0141;
Корневища	4,33	8»= 0,00576;
	4,31	г_я= 0,01479;
	4,32	А= +0,343%
	1,24	Х= 1,24%;
	1,23	8= 0,00894;
Листья	1,24	8«= 0,00365;
	1,25	е„= 0,00938;
	1,23 1,25	А= ±0,756%

Примеры конкретного выполнения способа

Пример 1.

1,0 кг измельченной до 10 мм частиц корневищ касатика медведева для очистки от балластных веществ (эфирные и жирные масла, смолы и т.п.) помещают в 10 л колбу, заливают 5 л гексаном и оставляют на 5 ч. Гексановый экстракт отгоняют и получают 125,4 г сухого остатка. Обработанное гексаном сырье - сухой остаток заливают 10 л 90%-ным метиловым спиртом, нагревают до 50°С и при постоянном перемешивании выдерживают в течение 3 ч. Экстракт отфильтровывают, получают 6,4 л спиртового экстракта. Отжатое сырье еще трижды экстрагируют в тех же условиях по 2 ч. Получают 30,6 л спиртоводных извлечений. Спирто-водные извлечения объединяют, под вакуумом отгоняют спирт и упаривают до получения 1 л водного остатка. К водному остатку добавляют 1 л горячей воды (95°С) и отстаивают в течение 13 ч при температуре 5-10°С для осаждения остатка смол и других балластных веществ. Надосадочный раствор, представляющий собой сумму ксантоновых гликозидов, декантируют, осадок фильтруют и промывают 0,1 л очищенной воды. Из водного раствора сумму ксантоновых гликозидов извлекают н-бутанолом, насыщенным водой, порциями по 500 мл по 3 раза и по 200 мл по 4 раза. Бутанольные извлечения объединяют, в вакууме отгоняют бутанол и упаривают до 100 мл. Сгущенные извлечения помешают в холодильник и оставляют для кристаллизации на 12 ч при 5-10°С. Выпавший кристаллический осадок отфильтровывают, промывают охлажденным метиловым спиртом 3 раза по 100 мл и сушат на воздухе. Получают 44,7 г технического мангиферина. Технический мангиферин растворяют при кипении в 90%-ном метиловом спирте, фильтруют. Спиртовый раствор упаривают до 1/2 первоначального объема и оставляют на кристаллизацию (10 ч при комнатной температуре). Готовый продукт - мелкокристаллический порошок от желтого до светло-коричневого цвета, не растворим в воде, отделяют фильтрованием и сушат. В итоге получают конечный продукт: 43,1 г из корневищ или 1,23 г из листьев, содержащий 98% мангиферина.

- 3 026105

Пример 2.

1,0 кг измельченной до 5 мм частиц листьев касатика Медведева заливают 5 л гексаном и оставляют на 3 ч, затем гексановый экстракт отгоняют, получают 3,6 л гексана и 98,5 г сухого остатка. Обработанное гексаном сырье заливают 10 л 90%-ного метилового спирта, нагревают до 50°С при постоянном перемешивании в течение 2 ч. Экстракт отфильтровывают, получают 7,2 л спиртового экстракта, отжатое сырье еще трижды экстрагируют в тех же условиях по 2 ч. Получают 30,6 л спирто-водных извлечений. Из объединенных спирто-водных извлечений под вакуумом отгоняют метиловый спирт и получают 1 л водного остатка. К водному остатку добавляют 1 л горячей воды 95°С, отстаивают в течение 13 ч при температуре 5-10°С для выпадания остатка смол и других балластных веществ. Раствор суммы ксантоновых гликозидов декантируют, осадок фильтруют и промывают 0,1 л очищенной водой. Из водного раствора сумму ксантоновых гликозидов извлекают н-бутанолом, насыщенным водой, порциями по 500 мл по 3 раза и по 200 мл по 4 раза. Бутанольные извлечения упаривают в вакууме до 100 мл, помешают в холодильник и оставляют для кристаллизации на 12 ч при 5-10°С. Осадок фильтруют, промывают охлажденным метиловым спиртом 3 раза по 100 мл, сушат на воздухе. Получают 13,1 г технического мангиферина. Технический мангиферин растворяют при кипении в 90%-ном метиловом спирте, фильтруют, спиртовый раствор упаривают до 1/2 первоначального объема и оставляют на кристаллизацию (10 ч при комнатной температуре). Готовый продукт отделяют фильтрованием и сушат. В итоге получают 12,4 г конечного продукта, содержащего 98% мангиферина.

Технический эффект заявляемого изобретения состоит в том, что разработана технология получения мангиферина высокой чистоты и с высоким выходом целевого продукта из нового вида растительного сырья - ΪΓΪ8 тсй\усйс\\й с более высоким содержанием мангиферина.

Литература.

1. Патент §И № 950395 от 22.08.80. Способ получения мангиферина.

2. Патент РФ № 2032413 от 06.09.1991. Способ получения мангиферина (прототип).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ получения мангиферина путем экстракции растительного сырья 90%-ным метиловым спиртом, упаривания экстракта, обработки его водой, очистки и перекристаллизации, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют корневища или листья касатика Медведева - ίπδ тсй\усйс\уи. сырье перед экстракцией обрабатывают гексаном, очистку экстракта осуществляют горячей водой и из водного раствора н-бутанолом извлекают технический мангиферин, а перекристаллизацию целевого продукта осуществляют 90%-ным метиловым спиртом.