EA025285B1 - Пенообразователь, содержащий гидрофобин - Google Patents
Пенообразователь, содержащий гидрофобин Download PDFInfo
- Publication number
- EA025285B1 EA025285B1 EA201390577A EA201390577A EA025285B1 EA 025285 B1 EA025285 B1 EA 025285B1 EA 201390577 A EA201390577 A EA 201390577A EA 201390577 A EA201390577 A EA 201390577A EA 025285 B1 EA025285 B1 EA 025285B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- unit
- activity
- hydrophobin
- endogluconase
- mannanase
- Prior art date
Links
- 101710091977 Hydrophobin Proteins 0.000 title claims abstract description 78
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 44
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 42
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 22
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 49
- 102100032487 Beta-mannosidase Human genes 0.000 claims description 20
- 108010055059 beta-Mannosidase Proteins 0.000 claims description 20
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 18
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 15
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 12
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 12
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 12
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 claims description 9
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 claims description 9
- 229920002907 Guar gum Polymers 0.000 claims description 6
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000665 guar gum Substances 0.000 claims description 6
- 235000010417 guar gum Nutrition 0.000 claims description 6
- 229960002154 guar gum Drugs 0.000 claims description 6
- 229920000591 gum Polymers 0.000 claims description 6
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 206010053317 Hydrophobia Diseases 0.000 claims description 4
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 claims description 4
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 244000250129 Trigonella foenum graecum Species 0.000 claims description 4
- 235000001484 Trigonella foenum graecum Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 claims description 4
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 claims description 4
- 235000001019 trigonella foenum-graecum Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008256 whipped cream Substances 0.000 claims description 4
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 claims description 3
- 241000207199 Citrus Species 0.000 claims description 3
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 3
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000011929 mousse Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000008886 Ceratonia siliqua Species 0.000 claims description 2
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 claims description 2
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 8
- 235000013912 Ceratonia siliqua Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 19
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 19
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 16
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 16
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 14
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 14
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 10
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 description 9
- 229920000161 Locust bean gum Polymers 0.000 description 9
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 9
- 239000000711 locust bean gum Substances 0.000 description 9
- 235000010420 locust bean gum Nutrition 0.000 description 9
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 9
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 7
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 6
- -1 endogluconase Proteins 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 5
- 101710112457 Exoglucanase Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000926 Galactomannan Polymers 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 3
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 2
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- 229920002581 Glucomannan Polymers 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 2
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 2
- LUEWUZLMQUOBSB-GFVSVBBRSA-N mannan Chemical class O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-GFVSVBBRSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 235000014594 pastries Nutrition 0.000 description 2
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- OMDQUFIYNPYJFM-XKDAHURESA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-2-(hydroxymethyl)-6-[[(2r,3s,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-3-[(2s,3s,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]methoxy]oxane-3,4,5-triol Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O1 OMDQUFIYNPYJFM-XKDAHURESA-N 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N (2s,3s,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[(2r,3s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](OC3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N 0.000 description 1
- 102100038776 ADP-ribosylation factor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108090000531 Amidohydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004092 Amidohydrolases Human genes 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 101710164820 Flotillin-2 Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000276484 Gadus ogac Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 235000017367 Guainella Nutrition 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000809413 Homo sapiens ADP-ribosylation factor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710096720 Hydrophobin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- AMFGWXWBFGVCKG-UHFFFAOYSA-N Panavia opaque Chemical compound C1=CC(OCC(O)COC(=O)C(=C)C)=CC=C1C(C)(C)C1=CC=C(OCC(O)COC(=O)C(C)=C)C=C1 AMFGWXWBFGVCKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091007187 Reductases Proteins 0.000 description 1
- 235000019485 Safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 108010027199 Xylosidases Proteins 0.000 description 1
- VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VJHCJDRQFCCTHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093941 acetylxylan esterase Proteins 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000000828 canola oil Substances 0.000 description 1
- 235000019519 canola oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 101150052795 cbh-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 108010080434 cephalosporin-C deacetylase Proteins 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000012716 cod liver oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003026 cod liver oil Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000002542 deteriorative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010091384 endoglucanase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010092450 endoglucanase Z Proteins 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- YQDHCCVUYCIGSW-LBPRGKRZSA-N ethyl (2s)-2-benzamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoate Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(=O)OCC)NC(=O)C1=CC=CC=C1 YQDHCCVUYCIGSW-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940046240 glucomannan Drugs 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000000707 layer-by-layer assembly Methods 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 1
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000213 tara gum Substances 0.000 description 1
- 235000010491 tara gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
- 108010083879 xyloglucan endo(1-4)-beta-D-glucanase Proteins 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/38—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
- A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/44—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by shape, structure or physical form
- A23G9/46—Aerated, foamed, cellular or porous products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L27/60—Salad dressings; Mayonnaise; Ketchup
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/06—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23P—SHAPING OR WORKING OF FOODSTUFFS, NOT FULLY COVERED BY A SINGLE OTHER SUBCLASS
- A23P30/00—Shaping or working of foodstuffs characterised by the process or apparatus
- A23P30/40—Foaming or whipping
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Grain Derivatives (AREA)
- Edible Oils And Fats (AREA)
- Seeds, Soups, And Other Foods (AREA)
- Seasonings (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к композиции пищевого продукта, содержащей гидрофобин, белок и/или полисахарид и соответствующий расщепляющий фермент, где активность расщепляющего фермента существенно снижена.
Description
Настоящее изобретение относится, в частности, к композициям пищевых продуктов, содержащим гидрофобии и полисахариды и/или белки.
Предшествующий уровень техники
Гидрофобины могут быть получены культивированием мицелиальных грибов, таких как гифомицеты (например, ТпсНойсгта). базидиомицеты и аскомицеты, которые секретируют гидрофобин в питательную среду. В качестве альтернативы гидрофобины могут быть получены при использовании рекомбинантной технологии. Например, клетки-хозяева, как правило микроорганизмы, могут быть модифицированы для экспрессии гидрофобинов. Как правило, питательная среда, содержащая гидрофобин, также содержит другие продукты процесса ферментации.
В ЕР 1626361 описывается, что гидрофобин очень эффективен при получении и стабилизации пен, например, в аэрированных пищевых продуктах, таких как мороженое. Многие пищевые продукты содержат полисахариды (такие как камедь плодов рожкового дерева, гуаровая камедь и карбоксиметилцеллюлоза) в качестве стабилизаторов или загустителей. Также пищевые продукты часто содержат белки, такие как молочные белки.
Краткое описание изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили и нашли решение не известной ранее проблемы, связанной с использованием гидрофобинов в пищевых продуктах, которые содержат полисахариды и/или белки. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что препараты гидрофобина, как правило, содержат дополнительно к гидрофобину различные побочные продукты процесса получения, которые включают ферменты, такие как маннаназа, целлюлаза и протеаза. В случае, когда эти ферменты присутствуют выше определенного количества, они могут расщепить соответствующие им белки/полисахариды, не оказывая при этом негативного воздействия на свойства гидрофобинов в конечном пищевом продукте. В результате это приводит к потере функциональности белков/полисахаридов, что, в свою очередь, оказывает негативное воздействие на качество пищевого продукта. Например, в случае, когда пищевой продукт содержит полисахарид в качестве загустителя, расщепление полисахарида приводит к тому, что полисахарид не способен обеспечить требуемую вязкость пищевому продукту.
Соответственно в первом аспекте настоящее изобретение относится к композиции, содержащей гидрофобин и остаточное количество фермента, характеризующейся ферментативной активностью, выбранной из группы, состоящей из детектируемой маннаназной активности менее чем 0,015 ММи, предпочтительно менее чем 0,01 мми;
детектируемой эндоглюконазной активности менее чем 0,1 ЕОИ, предпочтительно менее чем 0,05
ЕОИ;
детектируемой цистеинпротеазной активности менее чем 1,3 РИ, предпочтительно менее чем 1, более предпочтительно менее чем 0,5 РИ, или любой их комбинации.
Это позволяет композиции гидрофобина, имеющей остаточное содержание ферментов, не оказывать негативного воздействия на характеристики конечного пищевого продукта без необходимости проведения очистки.
Предпочтительно маннаназная активность составляет по меньшей мере 0,001 ММИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,005 ММи.
Предпочтительно эндоглюконазная активность составляет по меньшей мере 0,001 ЕОИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,005 ЕОИ, наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,01 ЕОИ.
Предпочтительно цистеинпротеазная активность составляет по меньшей мере 0,01 РИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,05 РИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,1 РИ.
Это позволяет композиции с небольшой ферментативной активностью, если требуется, не оказывать негативного воздействия на характеристики конечного продукта.
Предпочтительно гидрофобин представляет собой гидрофобин II класса, более предпочтительно гидрофобин представляет собой ΗΕΒ II.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к композиции пищевого продукта, содержащей по меньшей мере 0,001 мас.% гидрофобина (от общей массы продукта), предпочтительно по меньшей мере 0,005 мас.%, более предпочтительно по меньшей мере 0,01 и остаточное количество фермента, и характеризующейся ферментативной активностью, выбранной из группы, состоящей из детектируемой маннаназной активности менее чем 0,015 ММИ, предпочтительно менее чем 0,01 ММИ;
детектируемой эндоглюконазной активности менее чем 0,1 ЕОИ, предпочтительно менее чем 0,05
ЕОИ;
детектируемой цистеинпротеазной активности менее чем 1,3 РИ, предпочтительно менее чем 1, более предпочтительно менее чем 0,5 РИ;
или любой их комбинации.
Предпочтительно маннаназная активность составляет по меньшей мере 0,001 ММИ, более предпоч- 1 025285 тительно по меньшей мере 0,005 ММи.
Предпочтительно эндоглюконазная активность составляет по меньшей мере 0,001 БОИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,005 БОИ, наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,01 БОИ.
Предпочтительно цистеинпротеазная активность составляет по меньшей мере 0,01 РИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,05 РИ, более предпочтительно по меньшей мере 0,1 РИ.
Предпочтительно гидрофобин представляет собой гидрофобин II класса, более предпочтительно гидрофобин представляет собой НРБ II.
Предпочтительно композиция пищевого продукта содержит белок и/или полисахарид, выбранный из молочного белка, соевого белка, целлюлозы, производных целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, цитрусовых волокон, крахмала, производных крахмала, камеди плодов рожкового дерева, гуаровой камеди, камеди пажитника и камеди тара.
Предпочтительно композиция пищевого продукта представляет собой замороженное аэрированное кондитерское изделие, мусс, взбитые сливки, немолочные сливки, майонез, заправку, пастообразный продукт, суп, соус или напиток. Более предпочтительно композиция пищевого продукта представляет собой замороженное аэрированное кондитерское изделие.
Предпочтительно полисахарид представляет собой галактоманнан, а фермент представляет собой манназу.
Определения
Гидрофобины.
Гидрофобины - четко определенный класс белков (ХУеккеК, 1997, Αάν. М1сгоЬ. Рйукю. 38: 1-45; ХУокЮп, 2001, Аппи Ρеν. М1сгоЫо1. 55: 625-646), способных к самоагрегации на границе раздела гидрофобной/гидрофильной поверхностей и имеющих консервативную последовательность
Хп-С-Хз-э-С-С-Хп-за-С-Хе-гз-С-Хз-э-С-С-Хе-^-С-Хгл (ЗЕО Ю Νο. 1) где X представляет собой любую аминокислоту, а п и т независимо представляют собой целое число. Как правило, гидрофобин имеет длину вплоть до 125 аминокислот. Остатки цистеина (С) в консервативной последовательности являются частью дисульфидных мостиков. В контексте настоящего изобретения термин гидрофобин имеет более широкое значение, включающее функционально эквивалентные белки, которые также проявляют способность к самоагрегации на границе раздела гидрофобнойгидрофильной поверхностей с образованием в результате пленки белка, такие как белки, включающие последовательность
Хп-С-Х^-С-Х^-С-Хг.оо-С-Хмоо-С-Хги-С-Хо-э-С-Х^-С-Хгл (ЗЕО Ю Νο. 2) или ее частей, которые все еще обладают способностью к самоагрегации на границе раздела гидрофобной-гидрофильной поверхностей с образованием в результате пленки белка. В соответствии с определением настоящего изобретения самоагрегация может быть определена по адсорбции белка на тефлоне с использованием кругового дихроизма для определения присутствия вторичной структуры (как правило, α-спираль) (Эе Уосй! е! а1., 1998, Вюрйук. 1. 74: 2059-68).
Образование пленки может быть обнаружено при выдерживании листа тефлона в растворе белка с последующим по меньшей мере трехкратным промыванием водой или буфером (^ок!еп е! а1., 1994, ЕтЬо. 1. 13: 5848-54). Пленка белка может быть визуализирована любым подходящим способом, таким как мечение флюоресцентным маркером или путем использования флюоресцентных антител, хорошо известных в данной области техники, т и п, как правило, имеют значения в пределах от 0 до 2000, но более предпочтительно т и п в сумме равны менее 100 или 200. Определение гидрофобина в контексте настоящего изобретения включает слитые белки гидрофобина с другим полипептидом, а также конъюгаты гидрофобина с другими молекулами, такими как полисахариды.
Гидрофобины, идентифицированные к настоящему времени, как правило, подразделяют на класс I или класс II. Оба типа выявлены в грибах как секретируемые белки, самоагрегирующиеся на границе раздела гидрофобных-гидрофильных поверхностей в амфипатические пленки. Агрегаты гидрофобинов класса I, как правило, относительно не растворимы, в то время как агрегаты гидрофобинов класса II легко растворимы в различных растворителях. Предпочтительно гидрофобин представляет собой гидрофобин класса II. Предпочтительно гидрофобин растворим в воде, что означает, что гидрофобин имеет в воде по меньшей мере 0,1%, предпочтительно по меньшей мере 0,5%. Растворимость по меньшей мере 0,1% означает, что гидрофобин не осаждается при присутствии 0,1 г гидрофобина в 99,9 мл воды при центрифугировании при 30000 д в течение 30 мин при температуре 20°С.
Гидрофобин-подобные белки (например, чаплины (сйарйпк) также идентифицированы в нитчатых бактериях, таких как Асйпотусе1е и §1гер1отусек кр. (\УО01/74864; Та1Ьо!, 2003, Сигг. Вю1, 13:Р696Р698). Эти бактериальные белки в отличие от грибковых гидрофобинов могут образовывать только до одного дисульфидного мостика, поскольку они могут иметь только два цистеиновых остатка. Такие белки являются примером функциональных эквивалентов гидрофобинов с консенсусными последовательностями, показанными в 8Еф ГО №№ 1 и 2, и входят в объем настоящего изобретения.
Гидрофобины могут быть получены экстракцией любым подходящим способом из природных источников, таких как мицелиальные грибы. Например, гидрофобины могут быть получены культивирова- 2 025285 нием мицелиальных грибов, которые секретируют гидрофобии в питательную среду, или экстрагированием из грибного мицелия 60% этанолом. Особенно предпочтительно выделять гидрофобины из организма-хозяина, который естественным образом секретирует гидрофобины. Предпочтительными хозяевами являются гифомицеты (например, триходерма (ТпсЬобегта)), базидиомицеты и аскомицеты. Наиболее предпочтительными хозяевами являются пищевые организмы, такие как СтурЬопесЬта ра!акйса, секретирующий гидрофобин, названный крипарином (МасСаЬе аиб Уаи А1£еп, 1999, Арр. Εηνίτοη. МютоЬю1 65: 5431-5435).
В качестве альтернативы гидрофобины могут быть получены при использовании рекомбинантной технологии. Например, клетка-хозяин, как правило микроорганизм, может быть модифицирована для экспрессии гидрофобинов, и затем гидрофобины могут быть выделены и использованы в соответствии с настоящим изобретением. Технологии введения в клетку-хозяин конструкций нуклеиновой кислоты, кодирующих гидрофобины, хорошо известны в данной области техники. Клонированы более 34 генов, кодирующих гидрофобины, из более чем 16 видов грибов (см., например, ^096/41882, в которой приведены последовательности гидрофобинов, идентифицированных в Адапсик Ыкротик; и \Уок1е1Т 2001, Аппи Ре\'. МютоЬю1. 55:625-646). Рекомбинантная технология также может быть использована для модификации последовательностей гидрофобинов или синтеза новых гидрофобинов, обладающих желаемыми/улучшенными свойствами.
Как правило, подходящую клетку-хозяин или микроорганизм трансформируют конструкцией нуклеиновой кислоты, кодирующей желаемый гидрофобин. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, может быть встроена в подходящий вектор экспрессии, кодирующий необходимые для транскрипции и трансляции элементы, и таким образом они будут экспрессированы в подходящих условиях (например, в нужной ориентациии и в правильной рамке считывания и с подходящими нацеливающими и экспрессионными последовательностями). Способы, необходимые для конструирования таких векторов экспрессии, хорошо известные специалисту в данной области техники.
Для экспрессирования последовательности, кодирующей полипептид, может быть использовано множество экспрессионных систем. Такие экспрессионные системы включают, без ограничения, бактерии, грибы (включая дрожжи), системы клеток насекомого, системы клеточной культуры растений и растения, при этом все трансформированы подходящими векторами экспрессии. Предпочтительными являются хозяева, которые относятся к пищевым, признанные безопасными (ОКА8).
Подходящие виды грибов включают дрожжи, такие как (но не ограничиваются ими) рода 8ассЬатотусек, К1и^еттусек, ИсЫа, Напкепи1а, Сапб1ба, 5>сЫ/о кассЬаготусек и т.п., и мицелиальные виды, такие как (но не ограничиваются ими) рода АкретдШик, ТпсЬобегта, Мисог, Ыеитокрога, Рикатшт и т.п.
Последовательности, кодирующие гидрофобины, предпочтительно по меньшей мере на 80% идентичны аминокислотному составу гидрофобина, идентифицированного в природе, более предпочтительно идентичны по меньшей мере на 95 или 100%. Однако специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение, может сделать консервативные замены или другие изменения в аминокислотной последовательности, не снижающие биологической активности гидрофобина. Для целей настоящего изобретения такие гидрофобины, имеющие такой высокий уровень идентичности гидрофобинам, встречающимся в природе, также входят в объем термина гидрофобины.
Гидрофобины могут быть очищены от культуральной среды или клеточных экстрактов, например, способом, описанным в ^001/57076, который включает адсорбцию гидрофобина, присутствующего в гидрофобин-содержащем растворе на поверхности с последующим контактированием поверхности с поверхностно-активным веществом, таким как Т\\ееп 20, для элюирования гидрофобина с поверхности; см. также Со11еп е!. а1., 2002, ВюсЫт ВюрЬук Ас!а. 1569: 139-50; Са1оп)е е! а1., 2002, Сап. 1. М1сгоЪю1. 48:1030-4; АккоЬп е! а1., 2001, Арр1 МютоЬю1 Вю1есЬпо1. 57:124-30 и Ое Упек е! а1., 1999, Еиг 1. ВюсЬет. 262: 377-85.
Гидрофобин вводят в такой форме и таком количестве, чтобы стабилизировать газовую фазу, то есть гидрофобин специально вводят в продукт с целью получения преимуществ, обеспечиваемых применением гидрофобина, заключающихся в придании стабилизирующих свойств пене. Следовательно, когда ингредиенты, содержащие грибковые загрязнения, которые могут содержать полипептиды гидрофобина, добавляются или содержатся в продукте, то это не является добавлением гидрофобина по изобретению.
Как правило, гидрофобин вводят в продукт по изобретению в выделенной форме, обычно, по меньшей мере, частично очищенного, например по меньшей мере 10%-ной чистоты по сухому веществу. Термин выделенная форма означает, что гидрофобин не вводится как часть организма, встречающегося в природе, такого как гриб, который естественным образом экспрессирует гидрофобины. Вместо этого гидрофобин, как правило, экстрагируют из природного источника или получают рекомбинантой экспрессией в организме-хозяине.
Получение гидрофобина.
Гидрофобин может быть получен из Т. гек с последующей тепловой обработкой и/или ультрафильтрацией для снижения уровня полипептидов.
В качестве альтернативы или в комбинации с тепловой обработкой и/или ультрафильтрацией гидрофобин может быть получен из Т. гек за счет снижения или предотвращения продуцирования термоста- 3 025285 бильного полипептида ЕСУ.
В первом способе гидрофобин может быть получен из клетки-хозяина ТпсНобегта следующим образом: введение гена, кодирующего гидрофобин в клетку-хозяин ТпсНобсгта. имеющего дефектный ген ед15 и один или более эндогенных генов, кодирующих дополнительные функциональные белки; инкубирование клетки-хозяина в среде, подходящей для продуцирования гидрофобина и дополнительных функциональных белков; и воздействие на гидрофобин и дополнительные функциональные белки повышенной температурой, достаточной для, по существу, инактивации дополнительных белков; при этом повышенная температура недостаточна для инактивации гидрофобина и обычно недостаточна для инактивации ЕСУ целлюлазы, продуцированной функциональным геном ед15 депе; при этом гидрофобины получены в активной или функциональной форме, по существу, при отсутствии активности от дополнительных белков.
Во втором способе гидрофобин может быть получен из клетки-хозяина ТпсНобегта способом, включающим продуцирование гидрофобина и одного или более дополнительных функциональных белков в клетках-хозяевах ТпсНобегта, содержащих ген, кодирующий гидрофобин, дефектный ген ед15 и ген или гены, кодирующие один или более дополнительных функциональных белков; воздействие на смесь белков, полученную из клеток-хозяев, повышенной температурой, достаточной для, по существу, инактивации одного или более дополнительных функциональных белков, но недостаточной для инактивации гидрофобина и ЕСУ целлюлазы, продуцированной функциональным геном ед15; при этом гидрофобины получены в активной или функциональной форме, по существу, при отсутствии активности от дополнительных функциональных белков.
В третьем способе гидрофобин может быть получен из клетки-хозяина ТпсНобегта следующим образом: воздействие на смесь белков, полученную из клеток-хозяев ТпсНобегта, содержащих ген, кодирующий гидрофобин, дефектный ген ед15 и один или более генов, кодирующих дополнительные функциональные белки, повышенной температурой для инактивации одного или более дополнительных функциональных белков; с получением, таким образом, гидрофобина в активной или функциональной форме при отсутствии активности от дополнительных функциональных белков.
В случае любого из указанных выше способов, в некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения ген ед15 изначально дефектен в клетках-хозяевах, естественным образом содержащих ген ед15. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения ген ед15 изначально удален в клеткаххозяевах, естественным образом содержащих ген ед15. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения ген ед15 удален гомологичной рекомбинацией.
В случае любого из указанных выше способов, в некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения один или более дополнительных белков представляет собой термостабильный белок. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения один или более дополнительных белков выбраны из группы, состоящей из целлюлазы, гемицеллюлазы и протеазы. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения один или более дополнительных белков выбраны из группы, состоящей из экзоцеллобиогидролазы, эндоглюконазы и β-глюкозидазы.
В случае любого из указанных выше способов, в некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения повышенная температура представляет собой температуру 90°С или более. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения воздействие повышенной температуры составляет 5 мин или более. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения воздействие повышенной температуры составляет 60 мин или более.
ТпсНобегта теекеГ' относится к мицелиальным грибам рйу1ит АксотусоН. Этот организм ранее классифицировался как ТпсНобегта 1опд|ЬгасЫа1ит и также как Нуросгеа )есоппа.
Т. тее8е1 ЕСУ целлюлаза относится к полипептиду, имеющему аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 33 или родственному полипептиду. Родственный полипептид имеет по меньшей мере около 70, по меньшей мере около 75, по меньшей мере около 80, по меньшей мере около 85, по меньшей мере около 90, по меньшей мере около 91, по меньшей мере около 92, по меньшей мере около 93, по меньшей мере около 94, по меньшей мере около 95, по меньшей мере около 96, по меньшей мере около 97, по меньшей мере около 98 или даже по меньшей мере около 99%, или более идентичности аминокислотной последовательности 8ЕС ГО N0: 33, имеет эндоглюконазную активность на целлюлозном субстрате и термостабилен при использовании исследований, описанных в настоящем документе. ЕСУ может быть указан в описании настоящей патентной заявки как ЕС5.
Т. тее8е1 ед15 ген относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей ЕСУ целлюлазу, или родственному полипептиду, как указано выше. Нуклеотидная последовательность приведенного в качестве примера гена ед15 приведена как 8ЕС ГО N0: 32.
Термостабильный в отношении полипептида относится к способности полипептида сохранять биологическую активность после воздействия заранее заданной повышенной температуры в течение заранее заданного периода времени. Биологическая активность может представлять собой ферментативную активность, связывающую активность, поверхностно-активное свойство или любую другую активность или свойство, характерное для полипептида. Полипептид считается термостабильным, если он сохраняет, по меньшей мере, половину исходной активности после воздействия заранее заданной повы- 4 025285 шенной температуры в течение заранее заданного периода времени. В широком смысле, заранее заданные температура и время представляют таковые, которые требуются для, по существу, инактивации Т. ГСС5С1 целлюлаз, иных чем ЕСУ. Эти условия легко могут быть определены при проведении исследования целлюлазной активности в клетке-хозяине Т. гсс5С1 с удаленным геном ед15.
В некоторых случаях белок считается термостабильным, если он сохраняет, по меньшей мере, половину (то есть по меньшей мере 50%) своей биологической активности после воздействия температуры по меньшей мере около 70, по меньшей мере около 75, по меньшей мере около 80, по меньшей мере около 85, по меньшей мере около 90 или даже по меньшей мере около 95°С в течение по меньшей мере около 3, по меньшей мере около 5, по меньшей мере около 10, по меньшей мере около 15, по меньшей мере около 20, по меньшей мере около 30, по меньшей мере около 45 или даже по меньшей мере около 60 мин. В одном примере заранее заданная температура составляет около 90°С или более, и заранее заданное время составляет около 5 мин или более. В другом примере заранее заданная температура составляет около 90°С или более, и заранее заданное время составляет около 60 мин или более. Термостабильные полипептиды включают полипептиды, которые обратимо денатурированы при повышенной температуре, в результате чего после указанного выше воздействия сохраняется, по меньшей мере, половина (то есть по меньшей мере 50%) их биологической активности.
По существу, свободный от активности (или аналогичные фразы) означает, что специфическая активность или не детектируется в композиции пищевого продукта, содержащей гидрофобин, или присутствует в количестве, которое не оказывает негативного воздействия на свойства гидрофобина.
Делеция гена относится к удалению его из генома клетки-хозяина.
Дефект гена в широком смысле относится к любой химической или генетической манипуляции, которая, по существу, предотвращает экспрессию функционального генного продукта, например белка, в клетке-хозяине. Приведенные в качестве примера способы, вызывающие дефект, включают полную или частичную делецию любой части гена (включая последовательность, кодирующую полипептид, промотор, энхансер или другой регуляторный элемент, или мутагенез того же (включая замены, вставки, делеции и их комбинации) для, по существу, предотвращения экспрессии функционального генного продукта.
Функциональный ген представляет собой ген, который можно использовать как клеточный компонент для получения активного генного продукта, как правило, белка. Функциональные гены являются противоположностью дефектным генам, которые модифицированы таким образом, что они не могут быть использованы клеточные компонентами для получения активного генного продукта. Приведенные в качестве примера функциональные гены включают без ограничения целлюлазы, иные чем ЕСУ, гемицеллюлазы, протеазы, амилазы, липазы, пергидролазы, эстеразы, пектатлиазы, пектиназы, лакказы, оксидазы, редуктазы, амидазы и другие ферменты, структурные белки, поверхностно-активные белки, связывающие белки и тому подобное.
Клетки-хозяева Т. гее§е1 были модифицированы для предотвращения продуцирования термостабильной ЕСУ целлюлазы, если они были генетически или химически изменены для предотвращения продуцирования полипептида ЕСУ, который демонстрирует термостабильную целлюлазную активность, например, как определено при использовании указанного выше исследования. Такие модификации включают без ограничения делецию гена ед15, дефект гена ед15, модификацию гена ед15, такую что кодируемый ЕСУ полипептид больше не является термостабильным, модификацию гена ед15 такую, что кодируемый ЕСУ полипептид больше не демонстрирует целлюлазную активность, модификацию гена ед15 такую, что кодируемый ЕСУ полипептид больше не секретируется, и их комбинации.
Расщепляющие ферменты.
Используемый в описании настоящей патентной заявки термин расщепляющий фермент относится к ферменту, который разрушает белок или полисахарид. Композиции пищевого продукта по настоящему изобретению содержат один или более белков и/или полисахаридов и по меньшей мере один соответствующий расщепляющий фермент. Используемый в описании настоящей патентной заявки термин соответствующий означает, что композиция пищевого продукта содержит фермент, разрушающий белок и/или полисахарид, который также присутствует в композиции пищевого продукта. Таким образом, например, протеаза является соответствующим расщепляющим ферментом для белка (например, молочный белок), целлюлаза - для целлюлозных материалов (например, карбоксиметилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза), маннаназа - для полисахаридов на основе маннозы (например, камедь плодов рожкового дерева и гуаровая камедь), амилаза - для крахмалов и производных крахмала, таких как мальтодекстрины, ксиланаза - для ксиланов.
Целлюлоза и гемицеллюлоза являются самыми распространенными растительными материалами, полученными фотосинтезом. Они могут быть расщеплены и использованы в качестве источника энергии множеством микроорганизмов (например, бактерии, дрожжи и грибы), которые продуцируют внеклеточные ферменты, способные гидролизовать полимерные субстраты до мономерных сахаров (Аго е! а1. (2001) 1. Βΐο1. Сйет. 276:24309-14).
Целлюлазы представляют собой ферменты, гидролизующие целлюлозу (в-1,4-глюкан или β-Ό- 5 025285 глюкозидные связи) с образованием в результате глюкозы, целлобиозы, целлоолигосахаридов и тому подобное. Целлюлазы традиционно делят на три основных класса: эндоглюконазы (ЕС 3.2.1.4) (ЕС), экзоглюканазы или целлобиогидролазы (ЕС 3.2.1.91; СВН) и β-глюкозидазы (β-Όглюкозидглюкогидролаза; ЕС 3.2.1.21; ВС) (КпоМек е! а1. (1987) Т1ВТЕСН 5:255-61 и ЗсЬи1еш (1988) Мебюбк Еп/уто1. 160:234-43). Эндоглюконазы главным образом воздействуют на аморфные части целлюлозного волокна для гидролиза внутренних р-1,4-глюкозидных связей в областях с низкой кристалличностью. Целлобиогидролазы гидролизуют целлобиозу из редуцируемых или нередуцируемых концов целлюлозы и способны расщеплять кристаллическую целлюлозу (№уа1ашеп апб Репйба (1995) Мусо!а 303-319). Считается, что присутствие целлобиогидролазы (СВН) в целлюлазной системе требуется для эффективной солюбилизации кристаллической целлюлозы (Зиитпакк1 е! а1. (2000) Се11и1оке 7:189-209). рглюкозидаза освобождает Ό-глюкозные звенья из целлобиозы, целлоолигосахаридов и других глюкозидов (Ргеег (1993) Τ ΒίοΙ. СЬет. 268:9337-42). Также β-глюкозидазы продемонстрировали катализ гидролиза алкильных и/или арильных β-Ό-глюкозидов, таких как метил-в-Э-глюкозид и рнитрофенилглюкозид, а также глюкозидов, содержащих только углеводные остатки, таких как целлобиоза.
Целлюлазы, как известно, получают при использовании множества бактерий, дрожжей и грибов. Определенные грибы продуцируют полные целлюлазные системы, включающие экзоцеллобиогидролазы или целлюлазы СВН типа, эндоглюконазы или целлюлазы ЕС типа и β-глюкозидазы или целлюлазы ВС типа. Другие грибы и бактерии экспрессируют мало или совсем не экспрессируют целлюлазы СВН типа. ТпсЬобегта гееке! (также указанная как Нуросгеа .(есогша) экспрессирует большое число целлюлаз, включая две СВН, то есть СВН1 (Се17а) и СВН11 (Се16а), по меньшей мере восемь ЕС, то есть ЕС1 (Се17Ь), ЕС11 (Се15а), ЕС111 (Се112а), ЕС1У (Се161а), ЕСУ (Се145а), ЕСУ1 (Се174а), ЕОУП (Се161Ь) и ЕСУШ (Се15Ь), и по меньшей мере пять ВСк, то есть ВС1 (Се13а), ВС2 (Се11а), ВС3 (Се13Ь), ВС4 (Се13с) и ВС5 (Се11Ь). ЕС1У, ЕСУ1 и ЕСУШ обладают также ксилоглюканазной активностью.
Используемый в описании настоящей патентной заявки термин целлюлаза относится к ферменту, гидролизующему β-1,4-глюкан- или β-Ό-глюкозидные связи с образованием в результате, например, глюкозы, целлобиозы, целлоолигосахаридов и тому подобного из целлюлозы. Целлюлазы включают, например, эндоглюконазы, экзоглюканазы, β-глюкозидазы и тому подобное.
Маннаназа.
Маннаназа представляет собой ферменты, разрушающие соединения, известные как маннаны, включая полисахаридные галактоманнаны (например, камедь плодов рожкового дерева (ЬВС), гуаровая камедь, камедь тара и камедь пажитника) и глюкоманнан.
Протеаза.
Протеазные ферменты (также называемые пептидаза или протеиназа) представляют собой класс ферментов, разрушающих белки. Особое значение имеют протеазные ферменты, разрушающие молочные белки, соевые белки и желатин.
Эндоглюконаза (ЕС) представляет собой целлюлазу, действующую главным образом на аморфные части целлюлозного волокна для гидролиза внутренних β-1,4-глюкозидных связей в областях с низкой кристалличностью.
Гемицеллюлаза и ксиланаза используют взаимозаменяемо в отношении, как правило, ферментов, способных гидролизовать глюкозидные связи в полисахаридах, содержащих сахара с 5 атомами углерода. Такие ферменты включают, например, маннаназы, арабинаназы, глюкуронидазы, ацетилксиланэстеразы, арабинофуранозидазы, ксилозидазы и тому подобное.
ММи=маннаназа-манозная единица (Маппапаке Маппоке Ипй).
ММи представляет собой количество маннаназы на 1 мг гидрофобина, которая продуцирует (при условиях рН 7,0; 0,24% камедь плодов рожкового дерева (ЬВС) при температуре 50°С) редуцирующие сахара, соответствующие 1 мкмоль Ό-маннозы за 1 мин.
ЕСи (эндоглюконазная единица) представляет собой количество эндоглюконазы на 1 мг гидрофобина, которая продуцирует 1 мкмоль редуцирующих сахаров в 1 мин. Измерение в данном случае проводят относительно стандарта целлюлазы Шуа/уте.
Протеазная единица (РИ) соответствует количеству цистеинпротеазы на 1 мг гидрофобина, гидролизующей 1 мкмоль сложного этилового эфира Ν-бензоил-Ь-аргинина (ВАЕЕ) 1 мин при рН 6,2 при температуре 25°С. Измерение в данном случае проводят относительно стандарта папаина (31дта).
Подробное описание изобретения
Композиции пищевых продуктов по настоящему изобретению могут представлять собой продукты, которые обычно хранят и/или подают при комнатной температуре (не скоро портящиеся продукты), при пониженной температуре (например, около 4°С) или замороженными (при температуре ниже 0°С, как правило, при температуре около -18°С).
В одном конкретном предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения композиция пищевого продукта представляет собой замороженное аэрированное кондитерское изделие, такое как мороженое или замороженный йогурт. В другом варианте воплощения настоящего изобретения компо- 6 025285 зиция представляет собой мусс, взбитые сливки или немолочные сливки. Другие предпочтительные композиции пищевых продуктов включают майонезы, заправки, пастообразные продукты, супы, соусы и напитки, кондитерские изделия и выпечку.
Как правило, композиция пищевого продукта содержит по меньшей мере 0,001 мас.% гидрофобина (от общей массы продукта), предпочтительно по меньшей мере 0,005 мас.%, более предпочтительно по меньшей мере 0,01, такое как около 0,05 мас.%. Как правило, продукт содержит менее чем 1 мас.% гидрофобина, более предпочтительно менее чем 0,1 мас.%. Гидрофобин может быть из единственного источника или множества источников, например, представлять собой смесь двух или более различных гидрофобинов.
Композиции пищевых продуктов содержат белки и/или полисахариды. Предпочтительные белки включают молочные белки и соевый белок. Предпочтительные полисахариды включают галактоманнаны (такие как камедь плодов рожкового дерева, гуаровая камедь, камедь тара, камедь пажитника), глюкоманнаны, маннаны, целлюлозу (карбоксиметилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, волокна цитрусовых).
Композиции пищевых продуктов по настоящему изобретению предпочтительно содержат воду. Содержание воды может варьировать (в зависимости от уровня других ингредиентов) и, как правило, составляет 5-99,5 мас.% от общей массы продукта, предпочтительно 20-95 мас.%.
Композиции пищевых продуктов по настоящему изобретению могут содержать масло/жир. Подходящие масла/жиры включают кокосовое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, масло канолы (рапсовое масло), оливковое масло, пальмовое масло, арахисовое масло (масло земляного ореха), сафлоровое масло, кунжутное масло, соевое масло, подсолнечное масло, молочный жир и рыбий жир (например, жир печени трески). Дополнительно, композиции пищевых продуктов могут содержать другие ингредиенты, которые необходимы и/или желательны в продукте. Традиционно используемые ингредиенты для пищевых продуктов представляют собой эмульгаторы, ароматизаторы, красители, консерванты; сахара, например сахароза, фруктоза, декстроза, лактоза, кукурузные сиропы, сахарные спирты; фруктовые или овощные пюре, экстракты, кусочки или сок.
Композиция пищевого продукта может быть неаэрированной или аэрированной, то есть газ намеренно вводят в композицию. Газ может представлять собой любой газ, но предпочтительно, особенно в контексте пищевых продуктов, пищевой газ, такой как воздух, азот, оксид азота или диоксид углерода. Степень аэрирования определяют в единицах объема как взбитость, % к:
[(объем аэрированного продукта - исходный объем смеси)/исходный объем смеси] х 100, где объемы аэрированного продукта и неаэрированной смеси представляют собой объемы фиксированной массы продукта или исходной смеси соответственно.
Взбитость аэрированного продукта может варьировать в зависимости от заданных характеристик продукта. Предпочтительно взбитость составляет по меньшей мере 10%, более предпочтительно по меньшей мере 25 или 50%. Предпочтительно взбитость составляет менее чем 400%, более предпочтительно менее чем 300 или 200%. Для замороженных аэрированных кондитерских изделий взбитость наиболее предпочтительно составляет от 70 до 150%. Для взбитых сливок или немолочных сливок и родственных продуктов взбитость наиболее предпочтительно составляет от 100 до 160%.
Аэрированные продукты по настоящему изобретению стабильны благодаря присутствию гидрофобина, что означает, что они сохраняют форму и свойства с течением времени. Стабильность пены определяют в процентах от начальной взбитости, которая сохраняется в течение заданного периода времени после аэрирования.
Далее настоящее изобретение будет описано со ссылкой на следующие неограничивающие примеры и чертеж.
Чертеж представляет собой график результатов плавления мороженого по примеру 1.
Пример 1.
Мороженое получали при использовании состава, приведенного в таблице. Воду с температурой 80°С добавляли в танк, снабженный турбомиксером. Сухие сахара смешивали со стабилизаторами и добавляли в танк с последующим добавлением сухого обезжиренного молока, жидких Сахаров, масла и ароматизаторов. Смесь перемешивали в течение около 10 мин при температуре 60-70°С. Затем смесь гомогенизировали при 150 бар и пастеризовали при температуре 82°С в течение 25 с в пластинчатом теплообменнике. Затем смесь охладили до температуры 4°С в пластинчатом теплообменнике и выдерживали в течение ночи в танке для созревания при температуре 4°С при деликатном перемешивании.
Для составов 2-4, содержащих гидрофобин, этот белок добавляли в смесь за 5 мин до перемещения в питатель и обработки во фризере для мороженого.
Смеси аэрировали (целевая взбитость 100%) и замораживали в скребковом теплообменнике (скребковый теплообменник Сгерасо \УО4). снабженном рядами из 15 открытых взбивающих механизмов. Частично замороженное мороженое перемещали из фризера в 500-мл картонные коробки.
- 7 025285
Составы
| 1-Контроль | 2- | 3- | 4- | |
| Количество ингредиента в смеси (масс.%) |
| Белок обезжиренного молока | 8,22 | 8,22 | 8,22 | 8,22 |
| Сахароза | 11,5 | 11,5 | 11,5 | 11,5 |
| 1_Р9 кукурузный сироп | 10 | 10 | 10 | 10 |
| Камедь плодов рожкового дерева (Ι.ΒΘ) | 0,3 | 0,3 | 0,3 | 0,3 |
| Гидрофобии (ΗΡΒΙΙ) | 0 | 0,2 | 0,2 | 0,2 |
| Вода | до 100 | до 100 | до 100 | до 100 |
Использовали три различных препарата гидрофобина и также получили контрольный образец без препарата гидрофобина.
Определяли маннаназную активность каждого препарата гидрофобина измерением гидролиза 1,4-βΌ-маннозидных связей в камеди плодов рожкового дерева при рН 7,0 и при температуре 50°С. Активность выразили в ММи. Была определена следующая активность ферментов:
| Пример | 1 без гидрофобина | 2 | 3 | 4 |
| Маннаназная активность (ΜΜΙΙ) | 0,00 | 0,00 | 0,0014 | 0,13 |
Также измерили маннаназную активность гидрофобина, используемого в ЕР 1626361. Он был получен от УТТ Βίοίοαίιηοίοβν. Финляндия. Он был очищен от ТпсНобегта гее8е1, по существу, как описано в \νϋ00/58342 и Ипбег е1 а1., 2001, В1отасгото1еси1е8 2: 51 1-517. Активность составила по меньшей мере 0,019 мми.
Определяли скорость плавления мороженого при постоянной температуре окружающей среды следующим образом. Сетку из нержавеющей проволоки размером 25x25 см с 3 мм отверстиями с толщиной проволоки 1 мм поместили на 60° воронку с длиной носика 2 см, подвешенную над емкостью для сбора (достаточно большого объема для сбора всего тестируемого образца). Емкость для сбора поместили на весы для взвешивания материала, собранного в емкость. Весы были подключены к системе регистрации данных для записи собранной массы. Устройство, состоявшее из сетки, воронки, емкости и весов, поместили в шкаф с постоянной температурой 20°С. Шкаф способен вмещать вплоть до 12 таких наборов устройств одновременно.
Образцы мороженого в форме прямоугольных блоков размером 14,5x9x3,8 см выдерживали в морозильнике при температуре -25°С и затем взвешивали на обнуленных весах с сеткой (одна из самых больших плоских граней образца контактировала с сеткой). Затем образцы разместили в случайном порядке в доступном положении в шкафу для плавления. Как только все образцы поместили на воронки, система передачи данных записывала количество материала, собранного за каждую минуту. Из массы образцов, собранных за этот период, рассчитали процент потери массы образца при использовании следующей формулы.
% Потери массы = х100, где М1=масса, зарегистрированная на весах (граммы) в момент времени ΐ;
М0=масса, зарегистрированная на весах (граммы) в начале анализа, ΐ=0 мин;
Р=начальная масса продукта (граммы).
Из чертежа видно, что наилучшее (самое медленное плавление) продемонстрировал контрольный образец (пример 1). Примеры 2 и 3 плавились немного быстрее, но все еще имели приемлемые скорости плавления, при этом пример 4 продемонстрировал значительно более быстрое плавление. Стабилизатор (камедь плодов рожкового дерева), присутствующий в составе мороженого, не оказал эффекта снижения скорости плавления. Однако в случае, когда присутствует маннаназа (из препарата гидрофобина), она разрушает маннановый скелет камеди плодов рожкового дерева, снижая, таким образом, молекулярную
- 8 025285 массу и ухудшая, таким образом, способность к медленному плавлению. Эти данные показали, что приемлемое плавление может быть достигнуто при существенном снижении активности расщепляющего фермента.
Список последовательностей <110> ипПеуег РЬС <120> ПЕНООБРАЗОВАТЕЛИ, СОДЕРЖАЩИЕ ГИДРОФОБИИ <130> 03088(С)ЕР <140> ЕР10188160.5 <141> 2010-10-20 <1б0> 2 <170> РаСеп1:1п νβΓδΐοη 3.5 <2Ю> 1 <211> 15 <212> РИТ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Гипотетическая консервативная последовательность <220>
<221> ПОВТОР <222> ¢1)..(1) <223> η повторы, где η является целым числом и Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (3) . . (3) <223> 5-9 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (б). . (б) <223> 11 - 39 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (8) . . (3) <223> 8 - 23 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (10)..(10) <223> 5-9 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (13)..(13) <223> 6-18 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (15)..(15) <223> т повторы, где т является целым числом и Хаа представляет любую аминокислоту <40ΰ> 1
Хаа Суз Хаа Суз Суз Хаа Суз Хаа Суз Хаа Суз Суз Хаа Суз Хаа 15 10 15
- 9 025285 <210> 2 <211> 17 <212> ΡΚΤ <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Приведенная в качестве примера последовательность для иллюстрации изобретения <220>
<221> ПОВТОР <222> (1),,(1) <223> η повторы, где η является целым числом и Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (3),.(3) <223> 1-50 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (5),.(5) <223> 0-5 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (7) , . (7) <223> 1 - 100 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (9), . (9) <223> 1 - 100 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (11) , ,(11) <223> 1-50 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (13) . , (13) <223> 0-5 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (15) , , (15) <223> 1-50 повторы, где Хаа представляет любую аминокислоту <220>
<221> ПОВТОР <222> (17) , , (17) <223> т повторы, где η является целым числом и Хаа представляет любую аминокислоту <400> 2
Хаа Суэ Хаа Суэ Хаа Суэ Хаа Суэ Хаа Суэ Хаа Суэ Хаа Суэ Хаа Суэ 15 10 15
Хаа
- 10 025285
Claims (11)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Композиция для применения в пищевых продуктах, содержащая гидрофобии и остаточное количество фермента, характеризующаяся ферментативной активностью, выбранной из группы, состоящей из детектируемой маннаназной активности менее чем 0,015 ММИ (маннаназа-манозная единица); детектируемой эндоглюконазной активности менее чем 0,1 БОИ (эндоглюконазная единица); детектируемой цистеинпротеазной активности менее чем 1,3 РИ (протеазная единица) или любой их комбинации, причем остаточное количество фермента обеспечивается за счет инактивированных ферментов.
- 2. Композиция по п.1, где маннаназная активность составляет по меньшей мере 0,001 ММИ (маннаназа-манозная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,005 ММИ (маннаназа-манозная единица).
- 3. Композиция по п.1, где эндоглюконазная активность составляет по меньшей мере 0,001 БОИ (эндоглюконазная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,005 БОИ (эндоглюконазная единица), наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,01 БОИ (эндоглюконазная единица).
- 4. Композиция по п.1, где цистеинпротеазная активность составляет по меньшей мере 0,01 РИ (протеазная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,05 РИ (протеазная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,1 РИ (протеазная единица).
- 5. Композиция по п.1, где гидрофобин представляет собой гидрофобин II класса, более предпочтительно гидрофобин представляет собой НРБ II.
- 6. Пищевой продукт, содержащий белок и/или полисахарид, по меньшей мере 0,001 мас.% гидрофобина (относительно общей массы продукта) и остаточное количество фермента и характеризующийся ферментативной активностью, выбранной из группы, состоящей из детектируемой маннаназной активности менее чем 0,015 ММИ (маннаназа-манозная единица); детектируемой эндоглюконазной активности менее чем 0,1 БОИ (эндоглюконазная единица); детектируемой цистеинпротеазной активности менее чем 1,3 РИ (протеазная единица) или любой их комбинации, причем остаточное количество фермента обеспечивается за счет инактивированных ферментов.
- 7. Пищевой продукт по п.6, где маннаназная активность составляет по меньшей мере 0,001 ММИ (маннаназа-манозная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,005 ММИ (маннаназаманозная единица).
- 8. Пищевой продукт по п.6, где эндоглюконазная активность составляет по меньшей мере 0,001 БОИ (эндоглюконазная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,005 БОИ (эндоглюконазная единица), наиболее предпочтительно по меньшей мере 0,01 БОИ (эндоглюконазная единица).
- 9. Пищевой продукт по п.6, где цистеинпротеазная активность составляет по меньшей мере 0,01 РИ (протеазная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,05 РИ (протеазная единица), более предпочтительно по меньшей мере 0,1 РИ (протеазная единица).
- 10. Пищевой продукт по любому из пп.6-9, где белок и/или полисахарид выбраны из группы, состоящей из молочного белка, соевого белка, целлюлозы, производных целлюлозы, микрокристаллической целлюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, цитрусовых волокон, крахмала, производных крахмала, камеди плодов рожкового дерева, гуаровой камеди, камеди пажитника и камеди тара.
- 11. Пищевой продукт по любому из пп.6-10, представляющий собой замороженное аэрированное кондитерское изделие, мусс, взбитые сливки, немолочные сливки, майонез, заправку, пастообразный продукт, суп, соус или напиток, при этом более предпочтительно пищевой продукт представляет собой замороженное аэрированное кондитерское изделие.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP10188160 | 2010-10-20 | ||
| PCT/EP2011/067825 WO2012052335A1 (en) | 2010-10-20 | 2011-10-12 | Foaming agents comprising hydrophobin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201390577A1 EA201390577A1 (ru) | 2013-08-30 |
| EA025285B1 true EA025285B1 (ru) | 2016-12-30 |
Family
ID=43567788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201390577A EA025285B1 (ru) | 2010-10-20 | 2011-10-12 | Пенообразователь, содержащий гидрофобин |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20130216655A1 (ru) |
| EP (1) | EP2629629B1 (ru) |
| JP (1) | JP2013539983A (ru) |
| CN (1) | CN103153086B (ru) |
| AU (1) | AU2011319559B2 (ru) |
| BR (1) | BR112013008689A2 (ru) |
| CA (1) | CA2813281A1 (ru) |
| EA (1) | EA025285B1 (ru) |
| MX (1) | MX343646B (ru) |
| WO (1) | WO2012052335A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201302305B (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2640844B1 (en) * | 2010-11-16 | 2021-03-24 | 1087 Systems, Inc. | System for identifying and sorting living cells |
| US10570181B2 (en) * | 2014-08-19 | 2020-02-25 | The University Court Of The University Of Edinburgh | Synthetic multiphase systems |
| WO2016071912A1 (en) | 2014-11-05 | 2016-05-12 | Insuline Medical Ltd. | Drug tracking device |
| CN104761746A (zh) * | 2015-03-19 | 2015-07-08 | 苏州市景荣科技有限公司 | 一种pvc材料复合型发泡剂 |
| US10287366B2 (en) | 2017-02-15 | 2019-05-14 | Cp Kelco Aps | Methods of producing activated pectin-containing biomass compositions |
| US11833333B2 (en) | 2017-07-12 | 2023-12-05 | Insuline Medical Ltd | Drug tracking device |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001057076A1 (en) * | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Applied Nanosystems B.V. | Method of purifying a hydrophobin present in a hydrophobin-containing solution |
| EP1623631A1 (en) * | 2004-07-27 | 2006-02-08 | Unilever Plc | Aerated food products containing hydrophobin |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996041882A1 (en) | 1995-06-12 | 1996-12-27 | Proefstation Voor De Champignoncultuur | Hydrophobins from edible fungi, genes, nucleotide sequences and dna-fragments encoding for said hydrophobins, and expression thereof |
| US6407046B1 (en) * | 1998-09-03 | 2002-06-18 | Genencor International, Inc. | Mutant EGIII cellulase, DNA encoding such EGIII compositions and methods for obtaining same |
| DK1163260T3 (da) | 1999-03-25 | 2009-08-17 | Valtion Teknillinen | Fremgangsmåde til adskillelse af proteiner |
| JP4439641B2 (ja) * | 1999-11-19 | 2010-03-24 | キリンホールディングス株式会社 | 新規マンナナーゼ、その製造法および用途 |
| GB0007770D0 (en) | 2000-03-30 | 2000-05-17 | Biomade B V | Protein capable of self-assembly at a hydrophobic hydrophillic interface, method of coating a surface, method of stabilizing a dispersion, method of stabilizi |
| DE102004038685A1 (de) | 2004-08-10 | 2006-02-23 | Tkm Telekommunikation Und Elektronik Gmbh | Anordnung zur Identifikation und Lokalisation von Gegenständen |
| JP2006288242A (ja) * | 2005-04-07 | 2006-10-26 | Mitsui Chemicals Inc | Ｓ−アリル−ｌ−システインの製造方法 |
| JP5021650B2 (ja) * | 2005-09-23 | 2012-09-12 | ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ | 低減されたクリーミング性を有する気泡含有製品 |
| DE602005006829D1 (de) * | 2005-12-21 | 2008-06-26 | Unilever Nv | Gefrorene belüftete Süssspeisen |
| AU2007211713B2 (en) * | 2006-01-31 | 2011-09-01 | Unilever Plc | Aerated compositions comprising hydrophobin |
| BRPI0705417B1 (pt) * | 2006-12-20 | 2016-08-16 | Unilever Nv | produto alimentício aerado e processos para a produção de um produto alimentício aerado |
| US20100273983A1 (en) * | 2007-04-05 | 2010-10-28 | The University Of Queensland | Method of purifying peptides by selective precipitation |
| DK2205744T3 (en) * | 2007-10-03 | 2015-04-27 | Bp Corp North America Inc | Xylanases, nucleic acids encoding them, and methods of making and an-facing presence thereof |
| CN101827932B (zh) * | 2007-10-18 | 2013-03-13 | 荷兰联合利华有限公司 | 制备发泡剂的方法 |
| AU2008229927B2 (en) * | 2007-10-25 | 2009-08-06 | Unilever Plc | Aerated fat-continuous products |
| CA2740326C (en) * | 2008-10-16 | 2017-06-13 | Unilever Plc | Hydrophobin solution containing antifoam |
| KR20110137301A (ko) * | 2009-03-09 | 2011-12-22 | 바스프 에스이 | 수성상 증점을 위한 수용성 중합체 및 하이드로포빈의 상승 혼합물의 용도 |
-
2011
- 2011-10-12 US US13/878,491 patent/US20130216655A1/en not_active Abandoned
- 2011-10-12 CA CA2813281A patent/CA2813281A1/en not_active Abandoned
- 2011-10-12 AU AU2011319559A patent/AU2011319559B2/en not_active Ceased
- 2011-10-12 EP EP11772923.6A patent/EP2629629B1/en not_active Not-in-force
- 2011-10-12 WO PCT/EP2011/067825 patent/WO2012052335A1/en active Application Filing
- 2011-10-12 MX MX2013004428A patent/MX343646B/es active IP Right Grant
- 2011-10-12 JP JP2013534256A patent/JP2013539983A/ja active Pending
- 2011-10-12 BR BR112013008689A patent/BR112013008689A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-10-12 CN CN201180050589.0A patent/CN103153086B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-10-12 EA EA201390577A patent/EA025285B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-03-27 ZA ZA2013/02305A patent/ZA201302305B/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001057076A1 (en) * | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Applied Nanosystems B.V. | Method of purifying a hydrophobin present in a hydrophobin-containing solution |
| EP1623631A1 (en) * | 2004-07-27 | 2006-02-08 | Unilever Plc | Aerated food products containing hydrophobin |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ASKOLIN, NAKARI-SETL, TENKANEN: "Overproduction, purification, and characterization of the Trichoderma reesei hydrophobin HFBI.", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER-VERLAG, vol. 57, no. 1-2, 1 October 2001 (2001-10-01), pages 124 - 130, XP055005995, ISSN: 01757598 * |
| LINDER, M.B. SZILVAY, G.R. NAKARI-SETALA, T. PENTTILA, M.E.: "Hydrophobins: the protein-amphiphiles of filamentous fungi", FEMS MICROBIOLOGY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM; NL, vol. 29, no. 5, 1 November 2005 (2005-11-01), AMSTERDAM; NL, pages 877 - 896, XP005107912, ISSN: 0168-6445, DOI: 10.1016/j.femsre.2005.01.004 * |
| TCHUENBOU-MAGAIA, F.L. ; NORTON, I.T. ; COX, P.W.: "Hydrophobins stabilised air-filled emulsions for the food industry", FOOD HYDROCOLLOIDS, ELSEVIER BV, NL, vol. 23, no. 7, 1 October 2009 (2009-10-01), NL, pages 1877 - 1885, XP026145883, ISSN: 0268-005X, DOI: 10.1016/j.foodhyd.2009.03.005 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2813281A1 (en) | 2012-04-26 |
| MX2013004428A (es) | 2013-06-03 |
| EP2629629A1 (en) | 2013-08-28 |
| ZA201302305B (en) | 2014-09-25 |
| BR112013008689A2 (pt) | 2016-06-28 |
| EP2629629B1 (en) | 2015-05-13 |
| US20130216655A1 (en) | 2013-08-22 |
| WO2012052335A1 (en) | 2012-04-26 |
| CN103153086B (zh) | 2016-06-22 |
| JP2013539983A (ja) | 2013-10-31 |
| AU2011319559B2 (en) | 2015-02-19 |
| MX343646B (es) | 2016-11-08 |
| AU2011319559A1 (en) | 2013-05-02 |
| EA201390577A1 (ru) | 2013-08-30 |
| CN103153086A (zh) | 2013-06-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11459548B2 (en) | UDP-glycosyltransferases | |
| EA025285B1 (ru) | Пенообразователь, содержащий гидрофобин | |
| Kuddus | Enzymes in food biotechnology: production, applications, and future prospects | |
| Gomes et al. | Applications and benefits of thermophilic microorganisms and their enzymes for industrial biotechnology | |
| Soares et al. | Microorganism-produced enzymes in the food industry | |
| EA021636B1 (ru) | Трансформанты talaromyces | |
| US11293043B2 (en) | Steviol glycoside transport | |
| JP2022512740A (ja) | 食料製品において使用するための組換え成分および組成物 | |
| US20220110350A1 (en) | Steviol glycoside transport | |
| Meena et al. | Penicillium enzymes for the food industries | |
| BRPI0912975B1 (pt) | Uso de enzima pectinolítica, processo para tratamento enzimático de purê de frutas ou vegetais, processo para preparo de suco de fruta ou vegetal, cassete de expressão, vetor, célula hospedeira transformada, e preparado de polipeptídeo | |
| MX2012014993A (es) | Polipeptido que tiene actividad degradante de carbohidratos y usos de los mismos. | |
| Baeza et al. | Cold-active enzymes from cold-adapted yeasts | |
| EP3077517B1 (en) | Ice structuring protein | |
| WO2012078741A2 (en) | Novel fungal esterases | |
| Anisha | α-Galactosidases | |
| US6627429B1 (en) | Process for enzymatically modifying pectin | |
| Palomer et al. | Study of the strawberry Cel1 endo-β-(1, 4)-glucanase protein accumulation and characterization of its in vitro activity by heterologous expression in Pichia pastoris | |
| Amore et al. | Enzymes for food and beverage industries: current situation, challenges and perspectives | |
| CN111264634B (zh) | 一种植物油体乳液及应用 | |
| KR20230110867A (ko) | 균주 접종을 통해 유익성분을 함유하는 발효스프레드 및 이의 제조방법 | |
| Ventura-Sobrevilla et al. | CN Aguilar DIA-UAdeC, School of Chemistry, Universidad Autonoma de Coahuila, Saltillo, Mexico |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |