EA024145B1

EA024145B1 - Фармацевтическая композиция антимикотиков и пребиотиков и способ лечения кандидозных вагинитов

Info

Publication number: EA024145B1
Application number: EA201001536A
Authority: EA
Inventors: Александр Владимирович ДИКОВСКИЙ; Олег Валентинович ДОРОЖКО; Борис Анатольевич РУДОЙ
Original assignee: Александр Владимирович ДИКОВСКИЙ
Priority date: 2008-09-30
Filing date: 2008-09-30
Publication date: 2016-08-31
Also published as: WO2010039054A1; EA201001536A1; EP2343088A1; EP2343088A4; US20110202025A1; US8980303B2; CN102123736A; BRPI0823200A2

Abstract

Изобретение относится к медицине и фармакологии и представляет лекарственное средство в форме вагинальных суппозиториев для лечения и профилактики кандидозных вагинитов и вульвовагинитов, содержащее смесь по меньшей мере одного антимикотика из групп полиеновых антибиотиков или нитрофуранов и пребиотика - лактулозу со степенью полимеризации от 2 до 30 при следующей концентрации компонентов, % вес./об. в расчете на массу композиции: антимикотик из групп полиеновых антибиотиков или нитрофуранов - от 0,0001 до 5; лактулоза - от 0,1 до 40,0; вспомогательные вещества - остальное. Состав композиции при терапевтическом использовании позволяет добиться синергидного эффекта: стимуляции роста нормальной микрофлоры влагалища пребиотиками и ингибирования роста и элиминации патогенных грибов рода Candida современными антимикотиками. При этом в составы композиций преимущественно включены антимикотики, к которым представители нормальной микрофлоры - лактобациллы и бифидобактерии - не чувствительны. Заявлен также способ лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов грибковой или бактериальной этиологии, который осуществляется с использованием антимикотиков и пребиотиков в лекарственной форме для местной аппликации.

Description

(57) Изобретение относится к медицине и фармакологии и представляет лекарственное средство в форме вагинальных суппозиториев для лечения и профилактики кандидозных вагинитов и вульвовагинитов, содержащее смесь по меньшей мере одного антимикотика из групп полиеновых антибиотиков или нитрофуранов и пребиотика - лактулозу со степенью полимеризации от 2 до 30 при следующей концентрации компонентов, % вес./об. в расчете на массу композиции: антимикотик из групп полиеновых антибиотиков или нитрофуранов - от 0,0001 до 5; лактулоза - от 0,1 до 40,0; вспомогательные вещества - остальное. Состав композиции при терапевтическом использовании позволяет добиться синергидного эффекта: стимуляции роста нормальной микрофлоры влагалища пребиотиками и ингибирования роста и элиминации патогенных грибов рода Саисйба современными антимикотиками. При этом в составы композиций преимущественно включены антимикотики, к которым представители нормальной микрофлоры лактобациллы и бифидобактерии - не чувствительны. Заявлен также способ лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов грибковой или бактериальной этиологии, который осуществляется с использованием антимикотиков и пребиотиков в лекарственной форме для местной аппликации.

Область техники, к которой относится изобретение

Заявляемая группа изобретений относится к области медицины и фармакологии, а именно к созданию новой фармацевтической композиции антимикотиков и пребиотиков, позволяющей существенно повысить эффективность местной терапии кандидозных вагинитов и вульвовагинитов.

Предшествующий уровень техники

Кандидозный вульвовагинит - широко распространенное заболевание женщин репродуктивного возраста и одна из наиболее частых причин обращения женщин за медицинской помощью. Частота кандидозного вульвовагинита за последние 10 лет почти удвоилась и составляет в структуре инфекционных поражений вульвы и влагалища 30-45%.

Возбудителем кандидозного вульвовагинита являются дрожжеподобные грибы рода Сапб1ба. В настоящее время описано свыше 170 видов дрожжеподобных грибов. Самыми частыми возбудителями вульвовагинального кандидоза у 85-90% пациенток являются С.а1Ыеап8. Среди других видов Сапб1ба клиническое значение имеют С.д1аЬга1а (5-10%), С’ДгорюаПх (3-5%), С.рагар8бо818 (3-5%) и С.сги5С1 (13%).

Значительное повышение заболеваемости кандидозным вульвовагинитом обусловлено действием ряда предрасполагающих факторов, таких как длительный и бесконтрольный прием антибиотиков, кортикостероидов, цитостатиков, оральных контрацептивов, лучевая терапия, тяжелые инфекционные заболевания, эндокринные нарушения, иммунодефицитные состояния и др. При назначении антибиотиков широкого спектра не учитывается, что они подавляют не только патогенные бактерии, но и находящиеся на слизистой влагалища сапрофиты: лактобациллы и бифидобактерии. В результате рН влагалищного содержимого повышается (сдвигается в щелочную сторону), а процессы самоочищения нарушаются. Кроме того, грибы рода Сапб1ба обладают способностью использовать некоторые антибиотики в качестве питательных субстратов. При этом создаются благоприятные условия для активного размножения Сапб1ба в половых органах женщины.

Изменению рН влагалищного секрета способствуют и гормональные препараты. Значительное увеличение заболеваемости кандидозным вагинитом связано, главным образом, с применением оральных контрацептивов. Выявлено, что при приеме гормональных препаратов повышается концентрация гликогена в клетках вагинального эпителия, происходит его разрыхление, рН сдвигается в щелочную сторону и происходит снижение неспецифической резистентности. У 20% женщин, принимающих оральные контрацептивы, изменяется толерантность к глюкозе, что способствует кандидозной инфекции.

Беременность, в связи с изменением гормонального фона, также способствует развитию кандидозов. О связи кандидозного вульвовагинита с беременностью свидетельствует резкое уменьшение (на 60%) частоты положительных результатов выделения грибов в послеродовом периоде.

Развитию кандидозного вульвовагинита способствует использование белья из синтетических тканей, плотно облегающего тело и создающего микроклимат с повышенной влажностью и температурой.

Грибы рода Саиб1ба могут быть выделены из влагалища практически здоровых женщин при отсутствии клинических признаков кандидозного вульвовагинита (носительство). При определенных условиях под действием экзогенных и/или эндогенных факторов эти грибы становятся патогенными. При наличии существенных факторов риска, например, при беременности, всякое обнаружение во влагалище грибов рода Сапб1ба свидетельствует о наличии кандидозного вульвовагинита, а не о носительстве. Это подтверждается результатами исследования, в котором только у 2% беременных с высевами С.а1Ысап8 из влагалища было установлено отсутствие каких-либо патологических изменений.

Существуют данные, что при рецидивирующем кандидозном вульвовагините постоянным резервуаром грибов и источником реинфекции влагалища служит желудочно-кишечный тракт. В тех случаях, когда грибы высеваются из влагалища, они почти всегда обнаруживаются и в фекалиях, причем у большинства и влагалищные, и интестинальные штаммы идентичны. Обычно кандидоз возникает эндогенно, как следствие дисбиозов, метаболических расстройств и дисфункций иммунной системы.

Учитывая, что штаммы С.а1Ысап8, выделенные у больных кандидозным вульвовагинитом и у носителей, существенно не различаются, можно сделать заключение о ведущей роли иммунной системы в развитии кандидозного вульвовагинита.

В настоящее время известно несколько классов антимикотиков для лечения кандидозных вульвовагинитов. Это имидазолы: клотримазол, миконазол, оксиконазол, бифоназол, эконазол, омоконазол, фентиконазол, изоконазол, терконазол, тиоконазол, кетоконазол; циклопирокс; аллиламины: нафтифин; полиеновые антибиотики: амфотерицин, нистатин, леворин и натамицин; триазолы: флуконазол, итраконазол и другие фунгицидные и фунгистатические препараты.

Указанные антимикотики входят в состав лекарственных форм, которые используют для местного и системного лечения кандидозных вагинитов и вульвовагинитов, а также в составе кремов, эмульсий и гелей для нанесения на кожу и слизистые оболочки в местах грибковых поражений.

Известны пребиотики - неперевариваемые элементы пищевых продуктов, которые в организме человека стимулируют рост и развитие доминантных видов бактерий в микробиоценозе толстого кишечника. Это лактобациллы и бифидобактерии, которые используют пребиотики в качестве источников углеводов (И8 № 6455068, 2002).

- 1 024145

В химическом отношении пребиотики представлены короткоцепочечными олиго и дисахаридами (фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды, мальтоолигосахариды, лактулоза и т.д.), которые входят в состав многих пищевых продуктов. При попадании в организм олигосахариды не расщепляются в верхних отделах желудочно-кишечного тракта и достигают толстого кишечника в неизмененном виде. Здесь они утилизируются бифидобактериями и лактобациллами, за что получили наименование бифидогенных факторов.

Стимуляция роста индигенной микрофлоры кишечника связана с ингибированием роста патогенной микрофлоры, повышением барьерных функций слизистых оболочек кишечника и резистентностью к колонизации кишечника посторонней микрофлорой, включая патогенные грибы и дрожжи.

В норме вагинальная микрофлора также включает грампозитивные и грамнегативные аэробные и анаэробные виды микроорганизмов. Доминирующим видом вагинальной микрофлоры являются лактобациллы. Для них оптимальными условиями культивирования являются анаэробные при низких значениях рН (5,5-6,5).

У здоровых женщин вагинальная микрофлора полноценно обеспечивает механизм защиты от суперинфицирования влагалища патогенными бактериями и грибами, поддерживая низкие значения рН.

При микробиологическом обследовании здоровых женщин репродуктивного возраста лактобациллы в составе вагинальной микрофлоры определяются в 97,8%, из них Ьас1оЬасШи8 ас1ЙорЫ1и5 в 86,7%; бифидобактерии в 62,2%, из них ВШйоЬас1егшт айо1е8сеиЙ8 в 20,0% случаев. По разным данным лактобациллы присутствуют в содержимом вагины в 70-100% случаев.

Снижение титра лактобацилл во влагалище является результатом снижения конкуренции за питательные субстраты и происходит в связи с повышением значений рН в условиях интенсивного роста и размножения оппортунистической микрофлоры, которая в нормальных условиях подавляется продуцентами молочной кислоты.

Защитные свойства нормофлоры влагалища против экзогенных патогенов реализуются различными способами: за счет антагонистической активности, конкуренции за субстраты, способности продуцировать лизоцим, адгезивных свойств, но главные механизмы, безусловно, продукция молочной кислоты и перекиси водорода.

Таким образом, главной терапевтической проблемой в лечении кандидозных вульвовагинитов является восстановление нормальной микрофлоры влагалища, когда физиологические механизмы колонизации слизистой оболочки сапрофитами способствуют подавлению роста потенциальных патогенов, в роли которых чаще всего выступают грибы рода СапШба.

Антимикотики подавляют рост грибов и способствуют элиминации возбудителя, однако не создают условий для восстановления нормальной микрофлоры влагалища, что при постоянной физиологической суперинфекции кандидами провоцирует рецидивы вагинальных кандидозов.

Для восстановления нормальной микрофлоры в процессе лечения кандидозных вульвовагинитов предлагалось использование пребиотика лактулозы в форме вагинальных тампонов (И8 № 377518, 1973).

Однако недостатком данного изобретения является использование лактулозы в форме сиропа, которая имеет более 40% примесей других сахаридов (лактоза, фруктоза, галактоза), которые стимулируют рост условно-патогенных и патогенных видов микроорганизмов.

Предлагаемая лекарственная форма тампонов, пропитанных жидким сиропом лактулозой, неудобна в использовании, так как в момент аппликации часть лактулозы выдавливается из ткани и пачкает белье. Кроме того, использование тампонов, пропитанных сиропом лактулозы, опасно, так как может вызвать массовое размножение и лизис патогенных микроорганизмов внутри тампона и всасывание бактериальных эндо и экзотоксинов слизистой оболочкой влагалища.

В тампонах, пропитанных сиропом лактулозы, нет антисептических компонентов, поэтому элиминация кандид происходит медленно в процессе восстановления нормофлоры влагалища и конкурентного ингибирования роста грибов, учитывая конкуренцию за питательные субстраты в микробной ассоциации, представленной бациллами, бактериями и грибами.

Раскрытие сущности изобретения

Технической задачей данного изобретения является создание эффективной фармацевтической композиции и способа лечения кандидозного вульвовагинита. Технический результат, обеспечивающий решение поставленной задачи, состоит в том, что предлагается фиксированная фармацевтическая композиция антимикотиков и пребиотиков для местной аппликации, например, в лекарственной форме вагинальных суппозиториев. Состав композиции, при лечении кандидозных вульвовагинитов, позволяет добиться синергидного терапевтического эффекта: стимуляции роста нормальной микрофлоры влагалища пребиотиками при ингибировании роста и элиминации патогенных грибов рода СапШба современными антимикотиками.

Сущность изобретения состоит в выполнении фармацевтической композиции антимикотиков и пребиотиков для профилактики и лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов в лекарственной форме, пригодной для местной аппликации.

В разных случаях реализации фармацевтической композиции антимикотиков и пребиотиков в качестве антимикотиков используют антибиотики и фунгицидные препараты, выбранные из группы азолов:

- 2 024145 терконазол, тиоконазол, бутоконазол, кетоконазол, клотримазол, миконазол, омоконазол, фентиконазол, оксиконазол, бифоназол, эконазол, изоконазол; аллиламинов: нафтифин, тербинафин; полиеновых антибиотиков: амфотерицин В, натамицин, нистатин, леворин; нитрофуранов: нифуратель, фуразолидон, а также их фармацевтически приемлемые комбинации.

Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит не менее одного антимикотика в концентрациях от 0,0001 до 5% вес./об., в расчете на массу композиции.

В разных случаях реализации фармацевтической композиции она содержит фармацевтически приемлемые концентрации пребиотиков, выбранные из групп природных или синтетических сахаридов и олигосахаридов: лактулоза, фруктоолигосахара, галактоолигосахара, ксилоолигосахара, мальтоолигосахара, изомальтоолигосахара, имеющие степень полимеризации от 2 до 30, а также их комбинации.

Предпочтительно фармацевтическая композиция содержит содержит пребиотики в концентрациях от 0,1 до 40,0% вес./об. в расчете на массу композиции.

В разных случаях реализации фармацевтическая композиция антимикотиков и пребиотиков для профилактики и лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов производится в лекарственной форме: суппозиториев, пессариев, глобул, мягких капсул, тампонов, кремов, гелей, эмульсий и других форм для местной аппликации.

Сущность изобретения в части способа лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов грибковой или бактериальной этиологии состоит в использовании фармацевтической композиции антимикотиков и пребиотиков в лекарственной форме для местной аппликации, который основан на ингибировании роста патогенных грибов и дрожжей антимикотиками с одновременной стимуляцией роста нормальных представителей микрофлоры влагалища.

Предпочтительно при реализации способа лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов грибковой или бактериальной этиологии с использованием фармацевтической композиции антимикотиков и лребиотиков, фармацевтическая композиция антимикотиков и пребиотиков используется для местной терапии в лекарственной форме: суппозиториев, глобул, пессариев, тампонов, мягких желатиновых капсул, таблеток, кремов, мазей, гелей, суспензий, растворов и т.д.

При этом предусмотрено использование антимикотиков, не подавляющих рост и размножение лактобацилл и бифидобактерий, являющихся доминантными видами в микробиоценозах влагалища.

Процесс приготовления заявляемой фармкомпозиции в лекарственной форме суппозиториев предусматривает подготовку заданных количеств антимикотика и пребиотика, смешивания компонентов, добавления к расплавленной суппозиторной основе, пригодной для изготовления вагинальных суппозиториев, отливку суппозиториев и упаковку в блистеры. В составы суппозиториев могут вводиться дополнительные компоненты, улучшающие фармацевтические и потребительские свойства свечей (эмульгаторы, ароматизаторы и т.д.).

На фиг. 1, 2 изображены диаграммы терапевтической эффективности азолов: терконазол, тиоконазол, бутоконазол, кетоконазол, клотримазол, миконазол, омоконазол, фентиконазол, оксиконазол, бифоназол, эконазол, изоконазол (здесь и далее указаны ниже горизонтальной оси) с пребиотиками (здесь и далее обозначенными различной штриховкой столбцов диаграмм) на 7 день терапии экспериментального вагинита у крыс;

на фиг. 3 - диаграммы терапевтической эффективности азолов: терконазол, тиоконазол, бутоконазол, кетоконазол, клотримазол, миконазол, омоконазол, фентиконазол, оксиконазол, бифоназол, эконазол, изоконазол (указаны ниже горизонтальной оси) с пребиотиками на 14 день терапии экспериментального вагинита у крыс;

на фиг. 4 - диаграммы терапевтической эффективности композиций аллиламинов, полиенов нитрофуранов с пребиотиками на 7 день терапии экспериментального вагинита у крыс;

на фиг. 5 - диаграммы терапевтической эффективности композиций аллиламинов, полиенов нитрофуранов с пребиотиками на 14 день терапии экспериментального вагинита у крыс;

на фиг. 6 - диаграммы содержания Саиб1ба хрр. до и после терапии (здесь и далее обозначено различной штриховкой) у пациенток с вульвовагинальным кандиозом в трех группах (одна группа - контрольная);

на фиг. 7 - диаграммы содержания вагинальных лактобацилл до и после терапии у пациенток с вульвовагинальным кандиозом в трех группах (одна группа - контрольная).

На фиг. 1-5 приняты сокращения:

ФОС - фруктоолигосахара (КайШие НР, ОгаГО. Ве1дшш);

ГОС-галактоолигосахара (ОЬдошаГе 55, УакШ .Гараи);

КОС - ксилоолигосахара Ху1ооЬдо-95Р, 8ииГогу);

МОС - мальтоолигосахара (МаЙоГеГгаохе, СНетох СтЬН, Сегтаиу); иМОС - изомальтоолигосахара (1МО, СНетох СтЬН, Сегтаиу);

Лактулоза - (5>1дта-А1бпсЬ И8А).

По вертикальной оси на фиг. 1-7 отложены значения содержания соответствующей микрофлоры в 1д КОЕ/мл.

- 3 024145

Примеры

1. Отработка составов экспериментальных суппозиториев.

В качестве примеров представлены вагинальные суппозитории, в составе которых антимикотики натамицин и нифуратель комбинируются с пребиотиком лактулозой с использованием различных суппозиторных основ и следующим соотношением компонентов.

Состав суппозиториев № 1.

Компоненты	Масса в мг
Натамицин	100
Лактулоза	200
Кремофор КН40*	200
Витепсол	1500
ИТОГО	2000

Состав суппозиториев № 2

Компоненты	Масса в мг
Натамицин	100
Лактулоза	200
Кремофор КН40*	200
ПЭГ 1500	1500
ИТОГО	2000

Состав суппозиториев № 3

Компоненты	Масса в мг
Нифуратель	200
Лактулоза	200
Кремофор КН40*	200
Витепсол	1500
ИТОГО	2000

Состав суппозиториев № 4

Компоненты	Масса в мг
Нифуратель	200
Лактулоза	200
Кремофор
КН40*	200
ПЭГ 1500	1500
ИТОГО	2000

* Кремофор КН40 (полиоксил) - гидрированное касторовое масло (ΡοΙίοχνΙ - 40 Нубгодепа1еб СаЧог Θίΐ) согласно указаниям европейской (ЕРЬ) и американской (И8Р) фармакопеи.

Суппозитории № 1 и 3 были приготовлены на суппозиторной основе Витепсол (\УПер5о1 Н15, ^35), суппозитории № 2 и 4 - на основе полиэтиленгликоля (РЕО 1500).

2. Исследование терапевтической эффективности композиций на экспериментальных моделях.

Для моделирования в эксперименте кандидозной вагинальной инфекции и изучения вопросов, связанных с лечением кандидоза, была использована ранее описанная модель инфекции на крысах (Ие ВегпагбЕ р., е! а1., 1999). Овариоэктомированные самки крыс линии \УЕ1аг (80-100 г) получали ежедневно в течение пяти дней 0,5 мг эстрадиола бензоата в виде подкожной инъекции. На шестой день крысы интравагинально были инфицированы 0,1 мл суспензии клеток штамма С. а1Ысап8 АТСС 10231, содержащей 10.7 дрожжевых клеток. Суспензию клеток вводили экспериментальным животным интравагинально с помощью шприца со специальной канюлей. Штамм С. а1Ысаи8 АТСС 10231 перед введением куль- 4 024145 тивировали на жидкой питательной среде, содержащей 1% дрожжевого экстракта, 2% пептона и 2% глюкозы, в качалке (200 об/мин) при температуре 30°С. После 48 ч инкубации клетки собирали центрифугированием, отмывали, ресуспендировали в 0,9% растворе Ναί'Ί. а затем использовали для вагинального инфицирования крыс.

Бактериологическое исследование вагинального содержимого крыс проводили каждые двое суток после инфицирования животных штаммом С.а1Ысап5 10231, путем высева 1 мкл вагинального секрета на агаровые пластинки со средой Сабуро, содержащей 50 мкг/мл хлорамфеникола. Затем агаровые пластинки культивировали при 35°С в течение 48 ч с подсчетом пигментированных колоний С.а1Ысаи5. Кинетику развития экспериментального кандидозного вагинита у крыс мониторировали бактериологически по изменению титров дрожжевых клеток в вагинальном содержимом контрольной и опытных групп.

Таким образом, на модели овариоэктомированных крыс удалось получить популяцию экспериментальных животных, у которых была воспроизведена кандидозная инфекция слизистой оболочки влагалища. Этих животных в дальнейшем использовали для оценки терапевтической активности предлагаемых композиций антимикотиков и пребиотиков. Для оценки терапевтической эффективности каждой композиции использовали 5 крыс с бактериологически подтвержденной кандидозной инфекцией влагалища, контрольная группа животных (10 крыс) содержалась без лечения.

Местную терапию экспериментального кандидозного вагинита у крыс, с бактериологически подтвержденной инфекцией влагалища, проводили различными композициями в лекарственной форме: вагинальные суппозитории. При этом для крыс готовили специальные глобулы, имитировавшие вагинальные суппозитории, содержавшие в 50 раз меньшие дозы активных компонентов, чем рекомендованные для включения в состав официнальных вагинальных суппозиториев с антимикотиками для человека. Состав суппозиторной массы композиций не меняли.

В табл. 1 указаны составы композиций антимикотиков и пребиотиков, использованные для изготовления суппозиториев и глобул для крыс.

Таблица 1

Композиции антимикотиков и пребиотиков для лечения экспериментального вагинального кандидоза у крыс

Антимикотики, мг	Концентрация пребиотиков (мг) *
ФО С 25	ГОС 30	КО с 30	МО с 20	иМО С 20	Лактулоза 20
Азолы** : -эконазол	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
-терконазол	1,6	1,6	1,6	1,6	1,6	1,6
-миконазол	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0
Аллил амины: -тербинафин	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0
-пафтифип	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0
Полнены: -натамицин	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0
-нистатин	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0
-леворин	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0
Нитрофураны: -нифуратель	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0	5,0
-фуразолидон	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0

* - ФОС - фруктоолигосахара (КаГГШпе НР, Отайт, Ве1дшш); ГОС-галактоолигосахара (О1щота1е 55, УакШ,

1арап); КОС - ксилоолигосахара Ху1оойдо-95Р,

8ип1оту); МОС - мальтоолигосахара (Ма11о1е1гао5е,

Сйешок СшЬН, Оегтапу); иМОС - изомальтоолигосахара (1МО, Сйеток ОтЬН, Оегтапу); Лактулоза - (δί§та-АИпск υδΑ);

**- все другие азолы, включали в состав композиций в аналогичных концентрациях 1,0-2,0 мг.

Глобулы с антимикотиками ежедневно с 6-го по 12 день эксперимента вводили экспериментальным крысам вагинально. Эффективность лечения оценивали по результатам бактериологического исследования вагинального содержимого крыс на наличие грибов С. а1Ысап8. Контролем в каждой группе служили 10 крыс, не получавшие лечения, которых каждые 48 ч бактериологически обследовали на наличие кан- 5 024145 дид в вагинальном содержимом. Результаты антимикотического действия композиций при вагинальном введении крысам представлены на диаграммах (фиг. 1-5). Представленные данные свидетельствуют о том, что все изученные композиции при местной терапии в составе экспериментальных суппозиториев активно подавляли развитие кандидозной вагинальной инфекции у крыс. Через двое суток лечения титры кандид в вагинальном содержимом снизились в 10.4-10.5 раз, в то время как у контрольных животных титры кандид при бактериологическом обследовании оставались без изменений (фиг. 1, 2, 4). Еще через 7 дней лечения, при обследовании на 14 сутки эксперимента, инфекция практически купировалась и в отделяемом влагалища крыс удавалось выделить только отдельные колонии С.а1Ысап8 (фиг. 3, 5). У более чем 60% экспериментальных животных, получивших лечение, при обследовании на 14 сутки выделить кандиды бактериологическими методами было практически невозможно.

Таким образом, в условиях экспериментальной кандидозной инфекции у крыс, вызванной штаммом С. а1Ысап8 АТСС 10231, показана специфическая фунгицидная активность местной терапии грибковой инфекции фармкомпозициями антимикотиков и пребиотиков.

3. Клинические исследования композиций.

Клинические исследования проводили для подтверждения терапевтической эффективности и безопасности фармкомпозиции натамицина с лактулозой в лекарственной форме суппозитории и получения прямых клинических данных, подтверждающих синергидный эффект антимикотика натамицина с пребиотиком, у больных кандидозным вагинитом или вульвовагинитом.

В исследование было включено 30 пациенток в возрасте от 20 до 45 лет, с впервые выявленным кандидозным вагинитом или вульвовагинитом.

Диагностику кандидоза проводили на основании объективных клинических данных (осмотра слизистой влагалища в зеркалах), жалоб пациенток на выделения, жжение, раздражение слизистой влагалища. Часть больных предъявляла жалобы на дизурию и диспаренурию.

Диагноз подтверждали бактериологически: методом прямой микроскопии мазков содержимого влагалища и выделения грибов рода СапШба в чистой культуре.

Для анализа вагинального содержимого на хламидии, микоплазмы и уреаплазмы использовали полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

У всех 30 пациенток, включенных в данные клинические исследования, перед началом и после окончания курса лечения экспериментальными суппозиториями проводили микробиологическое исследование вагинального содержимого по определению в составе микрофлоры влагалища титров бифидобактерий и лактобацилл.

Материал анализировали в микробиологической лаборатории института акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта в г. Санкт-Петербурге.

Выделения из влагалища исследовали прямым посевом материала на твердые и жидкие питательные среды: кровяной агар, среду МРС, бульон и агар Сабуро. Пробы культивировали в аэробных и микроаэрофильных условиях (2-5% кислорода) при температуре 37°.

Идентификацию штаммов проводили на основании исследования морфологии колоний и клеток, культуральных, биохимических и тинкториальных свойств микроорганизмов.

Выделенные изоляты лактобацилл идентифицировали также по каталазной и оксидазной активности.

Количество бактерий в материале оценивали путем подсчета колоний на плотных питательных средах, которые представляли в виде 1д КОЕ/мл.

Все включенные в исследование пациентки с установленным диагнозом кандидозный вагинит были рандомизированы в три группы по 10 человек:

первая группа получала местное лечение вагинальными суппозиториями с натамицином и лактулозой один раз в день в течение 6 дней (состав № 1);

вторая группа также получала местное лечение с помощью вагинальных свечей с натамицином и лактулозой один раз в день в течение 6 дней (состав № 2);

контрольная группа получала местное лечение антимикотиком натамицин в суппозиториях пимафуцин, производства компании Яманучи Юроп, по 100 мг вагинально один раз в день в течение 6 дней.

В результате клинических исследований было подтверждено, что фармкомпозиция натамицина с лактулозой обладает высокой терапевтической эффективностью в отношении возбудителей кандидозных вагинитов (табл. 2, 3) и восстанавливает нормальную микрофлору влагалища (фиг. 7), что является определяющим критерием терапии кандидоза.

При анализе видового состава микрофлоры влагалища у пациенток первой группы после курса лечения экспериментальными суппозиториями с натамицином и лактулозой установлено, что элиминация грибов рода СапШба имела место в 100% случаев (см. табл. 2; фиг. 6), одновременно снижалась выраженность клинических симптомов кандидоза. Титры лактобацилл в вагинальном содержимом при бактериологическом исследовании увеличились в 1000 и более раз (фиг. 7).

Во второй группе успешная элиминации возбудителя зарегистрирована в 90% случаев (фиг. 2), в то же время в контрольной группе излечение от кандид после курса терапии отмечено только у 50% паци- 6 024145 енток (табл. 4; фиг. 6).

Включение в комплексную терапию антимикотиками лактулозы, позволяет сохранить и существенно увеличить количество лактобацилл во влагалищном содержимом, что, несомненно, повышает местный иммунитет и препятствует развитию грибковой инфекции. Представляется, что именно синергизм действия натамицина и лактулозы в адекватной суппозиторной основе повышает клиническую эффективность местной терапии кандидоза.

Таким образом, клинические данные объективно подтверждают эффективность предлагаемого способа лечения вагинальных кандидозов, исходя из концепции синергидного действия антимикотиков и пребиотиков в составе фиксированной композиции и нормализации микробиоценоза за счет увеличения степени колонизации слизистой влагалища молочнокислыми бациллами.

Наиболее удачной в клиническом отношении оказалась рецептура № 1, приготовленная на суппозиторной основе Витепсол. Рецептура № 2, выполненная на ПЭГ1500, была несколько менее эффективной, однако и в этом случае результаты значительно превышали показатели, зарегистрированные в контрольной группе (см. табл. 2-4).

Клиническая эффективность, отсутствие побочных эффектов, низкая частота рецидивов и комплаентность местной терапии экспериментальными суппозиториями делают предлагаемую фармкомпозицию новым перспективным средством и методом лечения кандидозных поражений слизистой влагалища.

Таблица 2

Результаты лабораторных исследований пациенток первой группы

Показатели	ВК, п=Х0
До лечения	После лечения
Выделение грибов рода СапсШа из вагинального содержимого	100%	0%
Лейкоциты в мазке из цервикального канала (от % до целого поля зрения)	60%	0%
Лейкоциты со слизистой влагалища от 20до 40 в поле зрения	60%	10%

Таблица 3

Результаты лабораторных исследований пациенток второй группы

Показатели	ВК, 11=10
Д» лечения	После лечения
Выделение грибов рода СапсНсЗа из вагинального содержимого	100%	10%
Лейкоциты в мазке из цервикального канале (от ½ до целого поля зрения)	60%	30%
Лейкоциты со слизистой влагалища от 20 до 40 в поле зрения	70%	30%

- 7 024145

Таблица 4

Результаты лабораторного исследования в контрольной группе

Показатели	ВК, п=10
До лечения	После лечения
Выделение грибов рода СапбМа из вагинального содержимого	100%	50%
Лейкоциты в мазке из цервикального канала ( от ‘/₂ до целого поля зрения)	60%	40%
Лейкоциты со слизистой влагалища от 20 до 40 в поле зрения	70%	70%

Промышленная применимость

Настоящее изобретение реализуется с помощью универсального оборудования, широко распространенного в промышленности.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Лекарственное средство для профилактики и лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов, выполненное в лекарственной форме, пригодной для местной аппликации, содержащее смесь по меньшей мере одного антимикотика из групп полиеновых антибиотиков или нитрофуранов и пребиотика - лактулозу со степенью полимеризации от 2 до 30, при следующей концентрации компонентов, % вес./об. в расчете на массу композиции: антимикотик из групп полиеновых антибиотиков или нитрофуранов - от 0,0001 до 5; лактулоза - от 0,1 до 40,00; вспомогательные вещества - остальное.
2. Лекарственное средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве полиеновых антибиотиков в составе лекарственного средства используют амфотерицин В, натамицин, нистатин, леворин, а в качестве нитрофуранов используют нифуратель, фуразолидон, а также их фармацевтически приемлемые комбинации.
3. Лекарственное средство для профилактики и лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов по п.1, отличающееся тем, что производится в лекарственной форме: суппозиториев, пессариев, глобул, мягких капсул, тампонов, кремов, гелей, эмульсий и для местной аппликации.
4. Способ лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов грибковой или бактериальной этиологии с использованием фармкомпозиций, содержащих один антимикотик из групп полиеновых антибиотиков, азолов, аллиламинов, нитрофуранов, а качестве пребиотика - лактулозу в лекарственной форме для местной аппликации, основанный на ингибировании роста патогенных грибов и дрожжей антимикотиками с одновременной стимуляцией роста нормальных представителей микрофлоры влагалища.
5. Способ лечения вагинозов, вагинитов и вульвовагинитов грибковой или бактериальной этиологии по п.4, отличающийся тем, что фармкомпозиция антимикотиков и пребиотиков используется для местной терапии в лекарственной форме: суппозиториев, глобул, пессариев, тампонов, мягких желатиновых капсул, таблеток, кремов, мазей, гелей, суспензий, растворов.