EA023541B1 - Пептиды, связывающиеся с рецептором инсулиноподобного фактора роста 1 - Google Patents
Пептиды, связывающиеся с рецептором инсулиноподобного фактора роста 1 Download PDFInfo
- Publication number
- EA023541B1 EA023541B1 EA201291416A EA201291416A EA023541B1 EA 023541 B1 EA023541 B1 EA 023541B1 EA 201291416 A EA201291416 A EA 201291416A EA 201291416 A EA201291416 A EA 201291416A EA 023541 B1 EA023541 B1 EA 023541B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- polypeptide
- present
- polypeptides
- polynucleotide
- sequence
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 127
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 113
- 230000027455 binding Effects 0.000 title abstract description 29
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 title abstract description 3
- 101710184277 Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 title abstract description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 90
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 43
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 31
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 claims abstract description 25
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 26
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 7
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 abstract 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 5
- 102400000827 Saposin-D Human genes 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 4
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 3
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 3
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 2
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 241001290610 Abildgaardia Species 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000701832 Enterobacteria phage T3 Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 101100438624 Gallus gallus AGTPBP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001657788 Orya Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920002730 Poly(butyl cyanoacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004155 blood-retinal barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000004378 blood-retinal barrier Effects 0.000 description 1
- 210000004781 brain capillary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004858 capillary barrier Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- SKOLWUPSYHWYAM-UHFFFAOYSA-N carbonodithioic O,S-acid Chemical compound SC(S)=O SKOLWUPSYHWYAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000006880 cross-coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007185 extracellular pathway Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000002977 intracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000003168 reconstitution method Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/61—Fusion polypeptide containing an enzyme fusion for detection (lacZ, luciferase)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Раскрываются полипептиды, связывающиеся с рецептором инсулиноподобного фактора роста 1, и полинуклеотиды, кодирующие такие полипептиды. Также раскрываются способы получения полипептидов с использованием клеточных систем экспрессии и бесклеточных систем, а также способы использования полипептидов для получения слитых белков. Раскрытые полипептиды могут обеспечивать возможность доставки терапевтических агентов через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ).
Description
Настоящее изобретение относится к пептидам, связывающимся с рецептором инсулиноподобного фактора роста 1, кодирующим их полинуклеотидам, а также способам их получения и применения.
Предпосылки создания изобретения
Последние достижения в области биомедицинских исследований и высокопроизводительного скрининга лекарственных препаратов позволили предложить множество потенциальных терапевтических агентов для лечения заболеваний, связанных с центральной нервной системой. Однако многие из потенциальных терапевтических агентов оказываются неудовлетворительными при тестировании ίη νίνο из-за недостаточно эффективного транспорта через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ).
Терапевтические агенты могут транспортироваться через ГЭБ несколькими способами, включая насыщаемые транспортные системы, адсорбционный трансцитоз, когда транспортируемый терапевтический агент интернализуется клеткой в ГЭБ и доставляется на аблюминальную поверхность для высвобождения во внутриклеточный жидкостный компартмент мозга, трансмембранную диффузию, причем терапевтический агент растворяется в липидном бислое, из которого состоят мембраны составляющих ГЭБ клеток, а также внеклеточные пути, когда терапевтический агент использует остаточную проницаемость ГЭБ.
Опробовано несколько подходов к модификации терапевтических агентов для изменения их проникающей способности через ГЭБ, включая конъюгацию с белками, естественно проникающими через ГЭБ, такими как инсулин, инсулиноподобный фактор роста 1 и 2 (ЮР-1, ЮР-2), лептин и трансферрин (заявка на патент США № И8 2007/0081992), сшивку полипептидов с катионизированными антителами, связывающимися с определенными клеточными рецепторами, такими как инсулиновый рецептор (патент США № 7388079) или трансферриновый рецептор (патент США № 6329508; Ζ1ι;·ιη§ апб Рагбпбдс. Втат Ке8. 889:49-56, 2001); связывание терапевтических агентов с синтетическими полимерами, такими как поли(бутилцианоакрилат) или полиакриламид, покрытый полисорбатом 80 (заявка на патент США № 2002/0009491, заявка на патент США № 2002/0013266; заявка на патент США № 2006/0051317), и использование липосом или иммунолипосом.
Для всех используемых сегодня подходов к повышению эффективности транспорта терапевтических агентов через ГЭБ характерна невысокая эффективность из-за конкуренции с эндогенными лигандами, недостаточного транспорта терапевтического агента в паренхиму мозга и деградации терапевтических агентов вследствие доставки его в лизосомы.
Таким образом, существует потребность в разработке способов транспорта терапевтических агентов через ГЭБ.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 показано связывание отдельных лизатов фагов с ЮР1К и ΙΚ.
На фиг. 2 показано связывание слитого с АР белка с ЮР1К.
Краткое описание изобретения
Один аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный полипептид, содержащий полипептид с последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 1-13.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в 8ЕО ГО N0: 1-13.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид с последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 14-26, или его комплементарной последовательностью.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный вектор, содержащий полипептид с последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 14-26.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенную клетку-хозяина, содержащую вектор, составляющий предмет настоящего изобретения.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный слитый белок, содержащий полипептид с последовательностью, приведенной в 8Е0 ГО N0: 1-13, слитый со вторым полипептидом.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ экспрессии полипептида, включающий стадии:
a. обеспечения клетки-хозяина, составляющей предмет настоящего изобретения; и
b. культивирования клетки-хозяина в условиях, достаточных для экспрессии полипептида с последовательностью, приведенной в 8Е0 ГО N0: 1-13.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ доставки терапевтического агента через клетки эндотелия, включающий:
a) конъюгацию терапевтического агента с полипептидом, содержащим полипептид с последовательностью, приведенной в 8Е0 ГО N0: 1, 2, 4, 8 или 12, с образованием конъюгата;
b) приведение конъюгата в контакт с клетками эндотелия; и
c) измерение количества конъюгата, доставленного через клетки эндотелия.
- 1 023541
Подробное описание изобретения
Все упоминаемые в данном описании публикации, включая, без ограничений, патенты и заявки, включены в настоящий документ путем ссылки, как если бы они были полностью изложены непосредственно в настоящем документе.
Используемые в настоящем описании и в формуле изобретения формы единственного числа включают ссылки на множественные объекты, если иное не следует явно из контекста. Так, например, ссылка на полипептид подразумевает ссылку на один или более полипептидов и включает их эквиваленты, известные специалистам в данной области.
Все используемые в настоящем документе технические и научные термины, если только не дано иное их определение, имеют общепринятое значение, понятное любому специалисту в области настоящего изобретения. В настоящем документе описаны примеры композиций и способов, хотя для проверки или реализации на практики настоящего изобретения могут быть использованы любые композиции и способы, подобные или эквивалентные описанным в настоящем документе.
Термин полипептид обозначает молекулу, содержащую по меньшей мере два аминокислотных остатка, связанных пептидной связью с образованием полипептида. Малые полипептиды, содержащие менее 50 аминокислотных остатков, могут называться пептидами. Полипептиды могут также называться белками.
Термин полинуклеотид обозначает молекулу, содержащую цепочку нуклеотидов, ковалентно связанных через сахарофосфатный остов или через другую эквивалентную ковалентную химическую структуру. Двухцепочечные и одноцепочечные молекулы ДНК и РНК представляют собой типичные примеры полинуклеотидов.
Термин комплементарная последовательность обозначает вторую выделенную полинуклеотидную последовательность, антипараллельную первой выделенной полинуклеотидной последовательности и содержащую нуклеотиды, комплементарные нуклеотидам первой полинуклеотидной последовательности. Как правило, такие комплементарные последовательности при контакте с первой выделенной полинуклеотидной последовательностью в соответствующих условиях способны к образованию двухцепочечных полинуклеотидных молекул, таких как двухцепочечные молекулы ДНК или двухцепочечные молекулы РНК.
Термин вектор обозначает полинуклеотид, который может удваиваться в биологической системе или перемещаться между такими системами. Полинуклеотиды-векторы, как правило, содержат элементы, такие как точки начала репликации, сигнал полиаденилирования или маркеры выбора, обеспечивающие дупликацию или сохранение таких полинуклеотидов в биологической системе. Примерами упомянутых биологических систем могут служить клетки, вирусы, животные, растения и реконструированные биологические системы, использующие биологические компоненты, способные к удвоению вектора. Полинуклеотидами, содержащими вектор, могут быть молекулы ДНК или РНК, либо их гибриды.
Термин вектор экспрессии обозначает вектор, который можно использовать в биологической системе или реконструированной биологической системе для прямой трансляции полипептида, закодированного полинуклеотидной последовательностью, присутствующей в векторе экспрессии.
Используемый в настоящем документе термин гематоэнцефалический барьер или ГЭБ обозначает границу раздела между кровью периферической системы кровообращения и головным и спинным мозгом, которая образована плотными соединениями в эндотелиальных плазматических мембранах капилляров мозга и создает исключительно плотный барьер, ограничивающий транспорт молекул в мозг, даже таких малых, как молекула мочевины с молекулярной массой 60 Да. Гематоэнцефалический барьер в головном мозге, гематоспинномозговой барьер в спинном мозге и гематоретинальный барьер в сетчатке представляют собой непрерывные капиллярные барьеры в центральной нервной системе (ЦНС) и собирательно именуются гематоэнцефалическим барьером.
Термин антитело обозначает молекулу, которая специфически связывается с антигеном, и включает димерные, тримерные и мультимерные антитела, а также химерные, гуманизированные и полностью человеческие антитела. Кроме того, антитело может представлять собой целое антитело или функциональный фрагмент молекулы антитела, такой как фрагмент, сохраняющий по меньшей мере ее функцию связывания с антигеном, включающие РаЬ, Р(аЬ'), Р(аЬ')2, 8сРу, 6δΡν и диатела. Например, фрагменты антитела могут быть получены с использованием протеолитических ферментов (например, целое антитело расщепляется папаином для получения фрагментов РаЬ, а обработка пепсином дает фрагменты Р(аЬ')2). Технологии получения и применения различных антител хорошо известны в данной области (под ред. Ли8иЬе1, с1 а1., Сштеп! Рто!осоН ίη Мо1еси1аг Вю1о§у, ίοΐιη \УПеу & δοηδ, 1пс., г. Нью-Йорк, 19872001; ЗатЬгоок, е1 а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога!огу Мапиа1, 2-е издание, Колд-Спринг-Харбор, штат Нью-Йорк, 1989; Наг1о\у апб Ьапе, Аηί^Ьοб^еδ, а ЬаЬога!огу Мапиа1, Колд-Спринг-Харбор, штат НьюЙорк, 1989; под ред. СоШдап, е1 а1., СиггеЩ РгоЮсоК ш 1ттипо1оду, 1ойп \УПеу & 8ощ, 1пс., г. НьюЙорк, 1994-2001; СоШдап е1 а1., СиггеШ Рго!осок ш Рго!еш Бшепсе, 1оЬп \УПеу & 8ош, г. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, 1997-2001; КоЫег е! а1., Иа!иге 256:495-497, 1975; патент США № 4816567, Циееп е! а1., Ргос. Νηΐ1. Асаб. δα. 86:10029-10033, 1989). Например, полностью человеческие моноклональные антитела, не
- 2 023541 включающие никаких последовательностей, не относящихся к человеку, могут быть получены с помощью трансгенных по человеческому иммуноглобулину мышей или с помощью библиотек фаговых дисплеев (ЬопЪетд е! а1., №Циге 368:856-859, 1994; Εί5ΐι\νί1ύ е! а1., №Циге Вю!есЬ, 14:845-851, 1996; Μβηάβζ е! а1., №1иге Оепейсз 15:146-156, 1997; Кпарр1к е! а1., 1. Мо1. Вю1. 296:57-86, 2000; КтеЪз е! а1., 1. 1ттипо1. МеШ. 265:67-84, 2001).
Молекула или препарат антитела специфически связывается с заданным антигеном, если они связываются с данным антигеном с более высокой аффинностью и специфическим, в противоположность неспецифическому, образом по сравнению с другим, отличающимся от первого, антигеном. Другими словами, специфическое связывание молекулы или препарата антитела можно использовать для различения двух разных полипептидов.
Используемый в настоящем документе термин рецептор инсулиноподобного фактора роста 1, или ΙΟΡ1Κ, обозначает ΙΟΡ1Κ человека (ОепВапк: ΝΡ_000866) с аминокислотной последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО ΝΟ: 27. Для получения зрелого белка про-полипептид ΙΟΡ1Κ расщепляется на альфа- и бета-цепи. Альфа-цепь включает аминокислотные остатки 31-740 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ: 27, а бета-цепь включает аминокислотные остатки 741-1367 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ: 27. Используемый в настоящем документе термин растворимый ΙΟΡ1Κ, или 8ΙΟΡ1Κ, обозначает внеклеточный домен ΙΟΡ1Κ (аминокислотные остатки 31-932 последовательности 8ЕО ГО ΝΟ: 27). Растворимый ΙΟΡ1Κ может представлять собой внеклеточный домен нерасщепленного про-полипептида или внеклеточный домен зрелого ΙΟΡ1Κ (аминокислотные остатки 31-740, образующие альфа-цепь, и аминокислотные остатки 741-932, образующие внеклеточную часть бета-цепи).
Используемый в настоящем документе термин конъюгат обозначает химерную молекулу, содержащую пептид, составляющий предмет настоящего изобретения, с аминокислотной последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО ΝΟ: 1-13, и терапевтический агент. Термин конъюгированный или конъюгирование означает, что терапевтический(-ие) агент(-ы) и пептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, физически связаны друг с другом, например, ковалентными химическими связями, физическими силами, такими как силы ван-дер-Ваальса или гидрофобные взаимодействия, путем инкапсулирования, встраивания или комбинаций этих способов. Терапевтический(-ие) агент(-ы) и пептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, могут быть связаны друг с другом химическими связями через спиртовую, кислотную, карбонильную тиоловую или аминогруппу с использованием хорошо известных способов химического синтеза (см., например, заявку на патент США № И82010/0028370). Терапевтический агент может быть связан с пептидами, составляющими предмет настоящего изобретения, через группу-линкер. Примерами линкеров являются глицин-обогащенные линкеры, такие как С1у38етС1у38ет (8ЕО ГО ΝΟ: 28) или С1у48егС1у48егС1у48ег (8ЕО ГО ΝΟ: 29). Если терапевтический агент и пептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, конъюгированы друг с другом через ковалентную связь или пептид и терапевтический агент представляет собой полипептид, то такой конъюгат как целое называется слитый белок. Таким образом, термин слитый белок обозначает полипептид, образованный из двух (или) более гетерологичных полипептидов, которые обычно не сливаются вместе в одной аминокислотной последовательности. Слитые белки могут в целом быть получены с использованием способов на основе рекомбинантных нуклеиновых кислот, т.е. путем транскрипции и трансляции продукта слияния рекомбинантных генов, где слияние включает сегмент, кодирующий полипептид, составляющий предмет настоящего изобретения, и сегмент, кодирующий гетерологичный полипептид.
Используемый в настоящем документе термин терапевтический агент обозначает молекулу, вводимую субъекту для получения желаемого терапевтического эффекта. Субъектов является человек или животное, включая млекопитающих и приматов. Примеры терапевтических агентов включают белки, антитела, пептиды, малые молекулы или полинуклеотиды. Терапевтические агенты также могут представлять собой токсины или радиоизотопы, когда предполагаемый терапевтический эффект состоит, например, в уничтожении раковых клеток.
В настоящем изобретении представлены выделенные полипептиды, которые связываются с ΙΟΡ1Κ, полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, векторы, содержащие полинуклеотиды, выделенные клетки-хозяева, полипептиды, которые могут быть получены при экспрессии полинуклеотидов, способы экспрессии полипептидов, составляющие предмет настоящего изобретения, и способы использования полинуклеотидов и полипептидов, составляющих предмет настоящего изобретения. Полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, связываются с ΙΟΡ1Κ и путем трансцитоза переносятся через клетки эндотелия. Поскольку ΙΡΟ1Κ экспрессируется на клетках эндотелия в гематоэнцефалическом барьере (ГЭБ), полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, могут обеспечивать возможность доставки терапевтических агентов через ГЭБ.
Один аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный полипептид, содержащий полипептид с последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО ΝΟ: 1-13.
Полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, могут быть получены путем химического синтеза, такого как твердофазный синтез пептидов, в автоматическом синтезаторе пептидов. В альтернативном варианте осуществления полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения,
- 3 023541 могут быть получены на основе полинуклеотидов, кодирующих эти полипептиды с использованием бесклеточных систем экспрессии, таких как системы экспрессии на основе лизата ретикулоцитов, системы экспрессии на основе экстракта из пшеничных зародышей и системы экспрессии на основе экстракта ЕксйейсЫа сой. Полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, также могут быть получены путем экспрессии и выделения из клеток-носителей нуклеотидной последовательности, составляющей предмет настоящего изобретения, с использованием хорошо известных специалистам способов, таких как рекомбинантная экспрессия легко выделяемых полипептидов с аффинными метками. Специалисту в данной области также известны иные способы получения полипептидов, составляющих предмет настоящего изобретения.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный слитый белок, содержащий полипептид с последовательностью, приведенной в 8ЕО ГО N0: 1-13, слитый со вторым полипептидом. Указанный второй полипептид может представлять собой лидерную последовательность или секреторную последовательность. Указанный второй полипептид может представлять собой терапевтический агент, слитый с пептидами, составляющими предмет настоящего изобретения. Терапевтический агент и составляющий предмет настоящего изобретения пептид могут быть слиты друг с другом различными способами. С-Конец или Ν-конец пептида, составляющего предмет настоящего изобретения, может быть непосредственно связан с Ν-концом или С-концом, соответственно, терапевтического агента через амидную связь или пептидный линкер. Терапевтические агенты могут быть связаны с пептидом, составляющим предмет настоящего изобретения, с использованием хорошо известного в данной области химического кросс-сочетания.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид, кодирующий полипептид, составляющий предмет настоящего изобретения.
Составляющие предмет настоящего изобретения полинуклеотиды могут быть получены путем химического синтеза, такого как твердофазный синтез полинуклеотидов, в автоматическом синтезаторе полинуклеотидов. В альтернативном варианте осуществления полинуклеотиды, составляющие предмет настоящего изобретения, могут быть получены с использованием других способов, таких как ПЦРдупликация, векторная дупликация или способы манипуляции ДНК с использованием рестрикционных ферментов. Способы производства или получения полинуклеотидов с известной заданной последовательностью хорошо известны специалистам в данной области.
Полинуклеотиды, составляющие предмет настоящего изобретения, также могут содержать по меньшей мере одну некодирующую последовательность, такую как транскрибируемые, но нетранслируемые последовательности, сигналы терминации, сайты связывания рибосомы, последовательности, стабилизирующие мРНК, интроны и сигналы полиаденилирования. Полинуклеотидные последовательности также могут включать в себя дополнительные последовательности, кодирующие дополнительные аминокислоты. Такие дополнительные полинуклеотидные последовательности могут, например, кодировать маркер или метку, например, гексагистидиновый пептид (СеШ/ е! а1., Ргос. Ναΐΐ. ЛсаТ δα. (США) 86:821-284, 1989) или гемаглютининовую пептидную метку (ΑίΠοη е! а1., Се11 37:767-778, 1984), облегчающие очистку слитых белков. Примерами полинуклеотидов являются полинуклеотиды с последовательностью, приведенной в 8Е0 ГО N0: 14-26.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой вектор, содержащий выделенный полинуклеотид с последовательностью, приведенной в 8Е0 ГО N0: 14-26. Векторы, составляющие предмет настоящего изобретения, используют для сохранения полинуклеотидов, удвоения полинуклеотидов или индукции экспрессии полипептидов, кодируемых вектором, составляющим предмет настоящего изобретения, в биологических системах, включая реконструированные биологические системы. Векторы могут иметь хромосомальное, эписомальное и вирусное происхождение. К ним могут относиться векторы, полученные из бактериальных плазмид, бактериофагов, транспозонов, эписом дрожжей, вставочных элементов, хромосомальных элементов дрожжей, бакуловирусов, паповавирусов, таких как 8У40, вирусов коровьей оспы, аденовирусов, вирусов птичьей оспы, вирусов псевдобешенства, пикорнавирусов и ретровирусов, а также векторы, полученные из комбинаций указанных выше элементов, такие как космиды и фагмиды.
Векторы, составляющие предмет настоящего изобретения, могут быть приготовлены в виде микрочастиц с вспомогательными веществами, липидами, буферными веществами или иными эксципиентами, в зависимости от конкретного применения.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения вектор представляет собой вектор экспрессии. Векторы экспрессии, как правило, включают в себя элементы последовательности нуклеиновых кислот, которые позволяют контролировать, регулировать, активировать или допускать экспрессию полипептидов, кодируемых данным вектором. Указанные элементы могут содержать сайты связывания энхансера транскрипции, сайты инициации РНК-полимеразы, сайты связывания рибосом и другие сайты, способствующие экспрессии закодированных полипептидов в данной системе экспрессии. Указанные системы экспрессии могут представлять собой хорошо известные специалистам в данной области клеточные или бесклеточные системы. Также хорошо известны элементы последовательности нуклеиновых кислот и последовательности исходного вектора, пригодные для использования в процессе экспрессии
- 4 023541 закодированных полипептидов. Пример полученного на основе плазмиды вектора экспрессии, который можно использовать для экспрессии полипептидов, составляющих предмет настоящего изобретения, содержит точку начала репликации Е. сой, ген хлорамфеникол-ацетилтрансферазы (САТ), промотор Т7 бактериофага, сигнальную последовательность ре1В и последовательность терминатора Т7.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой выделенную клеткухозяина, содержащую вектор, составляющий предмет настоящего изобретения. Типичные примеры клеток-хозяев включают клетки архей; бактериальные клетки, такие как §1гер1ососс1, §1арйу1ососс1, Еи1егососс1, Е. сой, §1гер1отусе8, цианобактерии, В. 8иЬйЙ8 и 5. аигеи8; клетки грибов, такие как К1иуеготусе8, §ассйаготусе8, Ва81Йотусе1е, СапФйа а1Ысаи8 или АкрегдШик; клетки насекомых, такие как Эго^орййа §2 и §ройор!ега §Г9; клетки животных, такие как СНО, СО§, НеЬа, С127, 3Т3, ВНК, 293, СУ-1, клетки меланомы Боуэса и миеломы; и клетки растений, такие как клетки голосемянных или покрытосемянных растений. Клетки-хозяева для реализации способов, составляющих предмет настоящего изобретения, могут быть представлены в виде отдельных клеток или популяций клеток. Популяции клеток могут представлять собой популяцию выделенных или культивированных клеток либо популяцию клеток, присутствующих в матриксе, таком как ткань.
Введение полинуклеотида, такого как вектор, в клетку-хозяина можно осуществить способами, хорошо известными специалистам в данной области (Όανίδ е1 а1., Ва8ю Ме1йоЙ8 ίη Мо1еси1аг Вю1оду, 2-е изд., Арр1е1оп & Ьапде, г. Норуолк, штат Коннектикут, 1994; §атЬгоок е1 а1., Мо1еси1аг С1ошп§: А ЬаЬога1огу Мапиа1, 3-е изд., Со1й §ргшд НагЬог ЬаЬога1огу Рге88, Колд-Спринг-Харбор, штат Нью-Йорк, 2001). К этим способам относятся трансфекция с использованием фосфата кальция, трансфекция с обработкой ОЕЛЕ-декстраном. микроинъекция, трансфекция через катионные липиды, электропорация, трансдукция, введение при соскабливании, баллистическое введение и инфицирование.
Структура полипептидов или фрагментов, составляющих предмет настоящего изобретения, может быть модифицирована для таких целей, как повышение специфичности, стабильности, растворимости субстрата и т.п. Например, можно получить модифицированный полипептид, в котором последовательность аминокислот изменена, например, путем аминокислотной замены, делеции или вставки. Ожидается, что выделенная замена лейцина на изолейцин или валин, аспартата на глутамат, треонина на серин, или другая аналогичная замена аминокислоты на близкую по структуре аминокислоту (т.е. консервативные мутации) в большинстве, но не во всех, случаях не окажет большого влияния на биологическую активность получаемой молекулы.
Консервативными называют замены, проводимые внутри семейства аминокислот с близкой структурой боковых цепей. Генетически кодируемые аминокислоты можно разделить на четыре семейства: (1) кислотные (аспартат, глутамат); (2) основные (лизин, аргинин, гистидин); (3) неполярные (аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан); и (4) незаряженные полярные (глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серин, треонин, тирозин). Фенилаланин, триптофан и тирозин иногда объединяют в одну группу ароматических аминокислот. Альтернативно, набор аминокислот может быть разделен на следующие группы: (1) кислые (аспартат, глутамат); (2) основные (лизин, аргинин, гистидин), (3) алифатические (глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серин, треонин), причем серин и треонин можно необязательно сгруппировать в отдельную группу алифатических гидроксильных аминокислот; (4) ароматические (фенилаланин, тирозин, триптофан); (5) амидные (аспарагин, глутамин); и (6) серосодержащие (цистеин и метионин) (§1гуег (ред.), Вюсйет18йу, 2-е издание, \УН Ргеетап апй Со., 1981). Чтобы быстро определить возможность получения функционального гомолога в результате изменения аминокислотной последовательности полипептида или его фрагмента, можно оценить способность модифицированного полипептида или фрагмента вызывать отклик аналогично немодифицированному полипептиду или фрагменту с использованием описанных в настоящем документе тестов. Пептиды, полипептиды или белки с более чем одной заменой также могут быть легко проверены аналогичным образом.
Полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, можно также приготовить в виде смеси с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Для этих целей можно использовать различные водные носители, например, 0,4%-ый солевой раствор, 0,3%-ый глицин и т.п. Указанные растворы стерильны и обычно не содержат твердых примесей. Стерилизацию указанных растворов можно проводить с использованием общепринятых, хорошо известных способов стерилизации (например, фильтрованием). Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для имитирования физиологических условий, например, агенты для корректировки и поддержания рН. Концентрация полипептидов, составляющих предмет настоящего изобретения, в такой фармацевтической композиции может значительно варьироваться, например, от менее чем приблизительно 0,5%, обычно по меньшей мере приблизительно 1%, до 15 или 20 вес.%, и определяется, в первую очередь, на основании объема жидкости, ее вязкости и иных факторов в соответствии с конкретным выбранным режимом введения. Специалисты в данной области легко определят соответствующие терапевтически эффективные дозировки.
Определенную дозировку можно, при необходимости, вводить повторно через соответствующие промежутки времени, выбранные лечащим врачом или иным специалистом в соответствующей области
- 5 023541 (например, медицинской сестрой, ветеринаром или ветеринарным фельдшером) в период лечения.
Полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, могут быть лиофилизированы для хранения и впоследствии перед использованием восстановлены в соответствующем носителе. Этот способ зарекомендовал себя как эффективный для стандартных белковых препаратов. Способы лиофилизации и восстановления хорошо известны специалистам.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой способ экспрессии полипептида, включающий стадии обеспечения клетки-хозяина, составляющей предмет настоящего изобретения; и культивирования клетки-хозяина в условиях, достаточных для экспрессии по меньшей мере одного полипептида, составляющего предмет настоящего изобретения.
Клетки-хозяева могут культивироваться в любых условиях, обеспечивающих поддержание или увеличение численности данного типа клеток и достаточных для экспрессии полипептида. Условия культивирования, среды и соответствующие способы обработки, достаточные для экспрессии полипептидов, хорошо известны специалистам в данной области. Например, многие типы клеток млекопитающих можно культивировать в аэробных условиях при 37°С с использованием соответствующим образом буферизованной среды ΌΜΕΜ, тогда как клетки бактерий, дрожжей и другие виды клеток можно культивировать при 37°С в условиях соответствующей атмосферы в среде ЬВ.
Экспрессия полипептида в рамках способов, составляющих предмет настоящего изобретения, может быть подтверждена с использованием различных хорошо известных способов. Например, экспрессия полипептида может быть подтверждена с использованием проявляющих реагентов, таких как антитела, с использованием, например, РАС8-анализа или иммунофлуоресцентных способов детектирования или электрофорезом в ПААГ с додецилсульфатом натрия, или ВЭЖХ.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ доставки терапевтического агента через клетки эндотелия, включающий:
a) конъюгацию терапевтического агента с полипептидом, содержащим полипептид с последовательностью, приведенной в 8ΕΟ ГО N0: 1, 2, 4, 8 или 12, с образованием конъюгата;
b) приведение конъюгата в контакт с клетками эндотелия; и
c) измерение количества конъюгата, доставленного через клетки эндотелия.
Полипептиды, составляющие предмет настоящего изобретения, облегчают доставку терапевтического агента через клетки эндотелия путем связывания полипептидов, составляющих предмет настоящего изобретения, с ЮР1К. Пептиды выбирают таким образом, чтобы конъюгированный с ними терапевтический агент не препятствовал связыванию полипептидов, составляющих предмет настоящего изобретения, с ЮР1К. В настоящем изобретении описана конъюгация белка с молекулярной массой приблизительно 100 кДа (921 аминокислота) с полипептидами, составляющими предмет настоящего изобретения, без потери трансцитозной активности. Другие полипептиды сравнимых размеров, вероятно, также могут быть успешно конъюгированы с полипептидами, составляющими предмет настоящего изобретения, и доставляться через клетки эндотелия в мозг.
Эффективность доставки конъюгата через клетки эндотелия может быть измерена ίη νίΐτο или ίη νίνο с помощью хорошо известных способов. Типичные измерения ίη νίΐτο можно провести с использованием поляризованных монослоев клеток эндотелия, измеряя трансцитоз конъюгата с применением, например, антител к конъюгату. Измерения ίη νίνο можно провести у пациента с использованием, например, радиоактивно меченых конъюгатов, измеряя их распределение в мозге после введения. Между результатами измерения ίη νίΐτο и ίη νίνο наблюдали хорошую корреляцию. Например, в работе Ретег с1 а1. продемонстрирована хорошая корреляция (К=0,94) между коэффициентами проницаемости ряда соединений и соответствующими коэффициентами переноса через гематоэнцефалический барьер ίη νίνο у грызунов при использовании совместных культур астроцитов и клеток эндотелия мозга крыс (Ретег еΐ а1., Вташ Кек. 1150:1-13, 2007).
Настоящее изобретение далее будет описано со ссылкой на конкретные неограничивающие примеры.
Пример 1. Выявление связывающихся с ЮР1К пептидов.
Фаговый пэннинг.
Библиотеки фагов р1Х со случайными пептидами генерировали следуя способам, описанным в заявке на патент США № И82010/0021477, и использовали их в качестве источника пептидов, связывающихся с ЮР1К человека. На данной библиотеке провели пэннинг в растворе по биотинилированной форме очищенного растворимого ЮР1К (кЮРТК) с гексагистидиновой меткой на С-конце (Κ&Ό 8у5ΐет5, г. Миннеаполис, штат Миннесота) в течение трех циклов. Биотинилирование кЮР1К проводили с помощью реагента ΕΖ-Ыик 8ι.ι1Γο-ΝΗ8-Τί.’-ΒίοΙίη формата Ш-ХУефН в микротрубках (Р1егсе, г. Рокфорд, штат Иллинойс). Из-за большого размера кЮР1К (~330 кДа) для 1 цикла очистки использовали гранулы ТеКа1шк Ανίάίη благодаря их приблизительно 10-кратной связывающей способности, по сравнению с магнитными гранулами Ωνηαΐ.
Каждый из 384 полученных в результате пэннинга отдельных фаголизатов проверили на специфичность связывания с кЮР1К, используя фаговый твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Вкратце, на стенки лунок иммунологических планшетов В1аск Μαχίκοτρ (№тс. г. Рочестер, штат Нью- 6 023541
Йорк) сорбировали по 100 мкл/лунку 5 мкг/мл раствора 8ЮР1К (Κ&Ό 8у51сш5. г. Миннеаполис, штат Миннесота), затем добавляли в лунки по 25 мкл фаголизата и определяли прохождение реакции с помощью антитела апй-М13-НКР (ΕΜΌ Вюкаепсек, г. Гибстаун, штат Нью-Джерси) и субстрата пероксидазы (КосЬе, г. Индианаполис, штат Индиана), фиксируя сигнал спектрофотометром для чтения планшетов ΤΕΚΑΝ. В качестве отрицательного контроля использовали неродственный белок, достоверно не проходящий через ГЭБ. Положительные лизаты определяли как клоны, для которых специфический сигнал 8ЮР1К втрое превышал фоновый сигнал отрицательного контроля. Всего было получено 13 клонов с уникальными пептидными последовательностями, достоверно связывающиеся с 8ЮР1К (табл. 1). 3 из этих 13 клонов (клоны 5, 13 и 16) перекрестно взаимодействовали с рецепторами инсулина.
Пептиды из клонов 5-14, 16 и 17 клонировали внутри рамки считывания как слитые белки пептида и щелочной фосфатазы-Шкб (рерйбе-АР) в модифицированный вектор рЕТ20Ь+, содержащий клонированный ген хлорамфеникол-ацетилтрансферазы (САТ). Полученные слитые белки типа рерйбе-АР экспрессировали в бактериях и очищали с помощью системы очистки Νί-ΝΤΑ (ΕΜΌ Вюкшепсек, г. Гибстаун, штат Нью-Джерси) согласно инструкциям производителя. Аминокислотная последовательность использованной щелочной фосфатазы приведена в 8ΕΟ ΙΌ N0: 30.
Таблица 1а. Полипептидные последовательности выявленных связывающихся с ЮР1К пептидов
| Пептидная последовательность | Номер клона | 5Е<2 1Б ΝΟ пептида |
| ТССБГРЕБСКССНР | 5 | 1 |
| АЕСЕИРКЬТЪЕЬСОЗ | б | 2 |
| РГСУЗСбРЬРУРСТУ | 7 | 3 |
| РУС Р 5 ГСУ Б^УУС Р т | 8 | 4 |
| ЕТСАУУЗЬЗЕЪБСРБ | 9 | 5 |
| ЬЗСУБРТЪКТЬУСНУ | 10 | 6 |
| НТСГУРТЬМРРЕЬСГО | 11 | 7 |
| ЗЫСРРЬПМРЬТЕЬСУМ | 12 | 8 |
| ИНСТРЬТ01АБРС311Н1ЬЕСТУ | 13 | 9 |
| УЕСБТР51ТГ5РСЬЕАЬГИЫТС5Р | 14 | 10 |
| МГСАИНТЪНТСРСЬТРСЬТЬРС1У | 15 | 11 |
| АССР5 РМР РУБРС ΡΥ5ΑΙУфЬСРЕ | 16 | 12 |
| ББ I БЕ ГЬНОЫШЪУЫНУН | 17 | 13 |
Эффективность связывания очищенных слитых белков рерйбе-АР с 8ЮР1К оценивали методом иммуноферментного анализа (ИФА) по связыванию с иммобилизованным 8ЮР1К. Вкратце, бактерии, трансформированные каждым из векторов экспрессии слитых белков рерйбе-АР, выращивали в течение ночи, и на следующий день культуры центрифугировали при скорости 4500 об/мин и температуре 4°С. Супернатант собирали, и 75 мкл каждого супернатанта тестировали на связывание с 2 мкг/мл 81СР1К, иммобилизованного на планшетах для иммуноферментного анализа. Связанные пептиды определяли с помощью субстрата АйорЬок (КосЬе, г. Индианаполис, штат Индиана) согласно рекомендациям производителя с использованием спектрофотометра для чтения планшетов Мо1еси1аг Ое\зсе5 М5. Слитые белки пептидных клонов 7 и 10 экспрессировались плохо. Все остальные слитые белки рерйбе-АР связывались с 5ЮР1К (фиг. 2).
Таблица 1Ь. Полинуклеотидные последовательности связывающихся с ЮР1К пептидов
| Номер клона | 5Е0 1Б ΝΟ: | Последовательность |
| 5 | 14 | АССССТТСТСАТТТТССССАСТТСТСТССТССТТСТСАТССС |
| 6 | 15 | ССТСАСТСТСАСТСССССТСССТТАСССТССАССТТТСТСАСТСТ |
| 7 | 16 | ССТТТТТСТТАТТСТССТСС6ССССТССССТАТССТТСТАССТАТ |
| 8 | 17 | ССТСТСТеТСССТСеТТТТСТТАТСАТСАСТАТСТСТСТССбАСТ |
| 9 | 18 | ТТТАССТСТССТСТТТАТТССТТеТСТСАССТССАТТСТАСССАТ |
| 10 | 19 | ТТСАСТТСТТАТбАТСССАСССТеССТАССТТСТАТТОТСАТеТТ |
| 11 | 20 | САТАССТСТТТТТАТССТАСССТСАТСССТССТСАССТСТСТТТССАТ |
| 12 | 21 | АСТААТТСТССТСССТТССАТАТСССССТСАСТСАССТТТСТСТТАТС |
| 13 | 22 | ТСССАТТСТАСТССССТСАСССАСАТТССТСАТССАОСССАСАСТАТТА ТТСАТАТТТТССАОТСТАСТСТТ |
| 14 | 23 | СТТСАСТСТСАТАСССССТСТАТТАСТТТТТССССАССССТССАССССС ТСТТТТССААТАССТСТТСТССТ |
| 15 | 24 | АТСАССТСТСССТСССАТАСТТТССАТАСССАТССАССССТТАСТСССС АССТСАСССТСССТТСТАТТТАТ |
| 16 | 25 | ССССССТСТСССАСТСССАТССС6ССССТССАТССАСССТТТТАТАСТС СТАТТСТССАССТСТСТАСеСАС |
| 17 | 26 | САТСАСАТАСАССААТТТСТТСАТСААСТССАСААССТАСТАААСААТС ТТСАС |
- 7 023541
Пример 2. Характеристики связывающихся с 1СР1К пептидов.
Выявленные связывающиеся с 1СР1К пептиды клонировали внутри рамки считывания к С-концу домена 1дС белка С (РС) в модифицированный вектор рЕТ17Ь (ΕΜΌ СйетюаП, г. Гибстаун, штат НьюДжерси), имеющий независимый от лигирования сайт клонирования (Ь1С), получив слитые белки РСрерОбе. Связывающийся с 1дС домен белка С стабилен, что облегчило выделение слитого белка из бактериальных лизатов. Аминокислотная последовательность использованного домена 1дС белка С приведена в §ЕЦ ГО N0: 31. Слитые белки РС-рерббе экспрессировали в индуцированных 1 мМ 1РТС бактериях и очищали на гранулах 1дС Зерйатоке (СЕ Неаййсате Ьйе Зшепсек, г. Пискатауэй, штат НьюДжерси) из бактериальных лизатов, очищенных центрифугированием в режиме 16000§ при 4°С в течение 20 мин.
Относительную аффинность связывания слитых белков РС-рерОбе с 81СР1К измеряли методом иммуноферментного анализа. Определение величин Кб проводили с использованием программного обеспечения СгаркРаб Рикш 4 по уравнению для одного сайта связывания. По 100 мкл раствора 2 мкг/мл 81СР1К (К&И 8у81еш8, г. Миннеаполис, штат Миннесота) в солево-фосфатном буфере Дульбекко (ЭРВЗ (-/-)) в течение ночи сорбировали на стенки 96-луночных планшетов В1аск Мах18отр (Νιιικ, г. Рочестер, штат Нью-Йорк) при 4°С. Затем планшеты промывали буфером ТВ8Т и блокировали лунки 200 мкл/лунку буфером §1атбп§ В1оск Т20 (ТВ§) (Р1етсе, г. Рокфорд, штат Иллинойс) в течение 1 ч при комнатной температуре при встряхивании со скоростью 300 об/мин. В лунки добавили по 75 мкл/лунку очищенных растворов слитых белков РС-рерббе в последовательных разведениях, начиная с концентрации 40 мкМ, и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч при перемешивании со скоростью 300 об/мин; затем объем раствора в лунке доводили до 100 мкл буфером §1атбп§ В1оск Т20. Планшеты трижды промывали буфером ТВ8Т, в каждую лунку вносили по 100 мкл/лунку меченых пероксидазой антител кролика (1:5000) (Коск1апб, г. Гилбертсвилль, штат Пенсильвания), планшеты снова промывали и детектировали сигнал, используя по 100 мкл/лунку субстрата пероксидазы (Коске, г. Индианаполис, штат Индиана). Интенсивность хемилюминесценции определяли спектрофотометром для чтения планшетов Мо1еси1аг Иеуюек М5.
Для проведения конкурентного анализа к буферу 81атбп§ В1оск Т20, используемому для доведения объема жидкости в лунке до 100 мкл, добавляли инсулиноподобный фактор роста 1 (1СР-1) (К&И §у81еш8, г. Миннеаполис, штат Миннесота) до конечной концентрации 400 нМ.
Характеристики слитых белков РС-рерббе приведены в табл. 2. Большинство пептидов связывались с относительной аффинностью в области низкой концентрации в мкМ (0,75-8 мкМ). Слитый белок с пептидом клона 17 отличался тем, что кривая профиля связывания для него имела колоколообразную форму. Такое поведение аналогично связыванию инсулина с инсулиновым рецептором и 1СР-1 к 1РС1К, лигандов, которые при связывании индуцируют конформационные сдвиги в рецепторах и имеют отрицательные профили кооперативности при более высоких концентрациях лигандов. Результаты конкурентного анализа с использованием 1СР-1 представлены в табл. 2.
Таблица 2
Пример 3. Модель ГЭБ щ уйто.
Избранные связывающиеся с 81СР1К пептиды дополнительно изучили на модели гематоэнцефалического барьера ш уйто и модели клеток эндотелия микрососудов мозга крысы.
Клетки эндотелия капилляров мозга крысы подготовили, следуя работе Ретеге е1 а1., 1. №итосйет. 93:279-289, 2005. Вкратце, мозг 6-8-недельных самцов крыс линии Зргадие Иа^1еу разворачивали на
- 8 023541 хроматографической бумаге 3ММ для удаления оболочек головного мозга, разрезали сагиттально, отсекали белое вещество и оставляли только кору, которую затем тщательно измельчали. Измельченную кору головного мозга переносили в полипропиленовую коническую пробирку объемом 50 мл, содержащую 20 мл модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (ΌΜΕΜ) с добавлением 39 ед./мл ДНКазы I (\Уог11ппд1оп, г. Лейквуд, штат Нью-Джерси) и 0,7 мг/мл коллагеназы типа 2 (\Уог11ипд1оп, г. Лейквуд, штат Нью-Джерси) в конечной концентрации, и инкубировали при 37°С, осторожно перемешивая, в течение 1,25 ч. После быстрого центрифугирования полученную пеллету повторно растворяли в 20 мл 20% раствора В8А (81дта, г. Сент-Луис, штат Миссури) в ΌΜΕΜ, центрифугировали, и выделенную обогащенную микрососудами пеллету расщепляли второй раз в 20 мл среды ΌΜΕΜ с добавлением 39 ед./мл ДНКазы I и 1 мг/мл коллагеназы/диспазы (КосЬе, г. Индианаполис, штат Индиана) при 37°С в течение 1
ч. Продукт расщепления быстро центрифугировали, полученную в результате пеллету повторно растворяли в 2 мл среды ΌΜΕΜ и затем наносили поверх 33% непрерывного градиента Регсо11, центрифугировали, и обогащенную фракцию микрососудов извлекали и еще раз быстро центрифугировали. Пеллету с клетками повторно растворяли в 10 мл полной среды для выращивания клеток эндотелия микрососудов мозга крыс (ΌΜΕΜ, 20% полученной из плазмы сыворотки (РИ8), 100 мкг/мл гепарина, 2 мМ Ьглутамина, 100 ед./мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина, 0,25 мкг/мл амфотерицина) и высевали на 10 см чашки Петри на 4 ч при 37°С в атмосфере 5% СО2. Через 4 ч оставшиеся незакрепленными клетки отсасывали пипеткой и подсчитывали в гемацитометре с трипановым синим. Клетки высевали в верхней камере мембран Тгап5\\е11 (размер пор 0,4 мкм, диаметр 1,12 см, Сотшпд, г. Актон, штат Массачусетс), обработанных 400 мкг/мл коллагена типа IV (81дша, г. Сент-Луис, штат Миссури) и 100 мкг/мл фибронектина (81дша, г. Сент-Луис, штат Миссури) с плотностью 6x105 клеток/мл, 500 мкл на лунку. В нижнюю камеру помещали 1 мл питательной среды. В обе камеры добавляли 4 мкг/мл пуромицина (С1ойесЬ, г. Маунтин-Вью, штат Калифорния) и инкубировали планшеты при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение ночи. На следующий день питательную среду заменяли на свежую полную культуральную среду с добавлением 4 мкг/мл пуромицина, и клетки снова помещали в инкубатор на ночь. На следующий день питательную среду заменяли на свежую полную культуральную среду, замену производили еще раз через два дня. Культуры клеток оценивали визуально до достижения степени слияния колоний 100%, приблизительно через 6-7 дней после посева. Разработанная ίη νίΙΐΌ модель ГЭБ имела высокое трансэндотелиальное электрическое сопротивление (>100 Ом-см2), измеренное с помощью системы Μί11^11-ΕΚ8 ^ПИроте, г. Биллерика, штат Массачусетс), и очень низкую проницаемость для Ναфлуоресцеина (приблизительно 1-5 х10-6 см/с)
В верхнюю камеру с моделью ГЭБ ίη У11то добавляли 25 мкг очищенных слитых белков рерйбе-АР, и трансцитозированные слитые белки рерйбе-АР определяли через 15 и 30 минут в нижней камере с помощью иммуноферментного анализа. Вкратце, 75 мкл каждого образца переносили на планшеты, покрытые моноклональными антителами мыши к антибактериальной щелочной фосфатазе в концентрации 5 мкг/мл (81дша, г. Сент-Луис, штат Миссури). Планшет инкубировали в течение 1 ч, промывали, проявляли сигнал с помощью субстрата АйорЬок (КосЬе, г. Индианаполис, штат Индиана) согласно рекомендациям производителя и измеряли результат с использованием спектрофотометра для чтения планшетов Μо1еси1а^ Иеуюек Μ5 с длиной волны возбуждения 440 нм и длиной волны излучения 550 нм. Полученные результаты приведены в табл. 2.
После приведенного полного описания настоящего изобретения специалисту в данной области будет понятно, что возможны множество изменений и модификаций, не выходящих за пределы сущности или объема прилагаемой формулы изобретения.
Claims (11)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Выделенный полипептид, содержащий полипептид с последовательностью, представленной в 8ΕΟ ГО ΝΟ: 1-13.
- 2. Выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид, кодирующий полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в 8ΕΟ ГО ΝΟ: 1-13.
- 3. Выделенный полинуклеотид, содержащий полинуклеотид с последовательностью, представленной в 8ΕΟ ГО ΝΟ: 14-26, или его комплементарной последовательностью.
- 4. Выделенный вектор, содержащий полинуклеотид с последовательностью, представленной в 8ΕΟ ГО ΝΟ: 14-26.
- 5. Вектор по п.4, представляющий собой вектор экспрессии.
- 6. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.4.
- 7. Выделенный слитый белок, содержащий полипептид с последовательностью, приведенной в 8ΕΟ ГО ΝΟ: 1-13, слитый со вторым полипептидом.
- 8. Слитый белок по п.7, где второй полипептид является иммуноглобулином или его фрагментом.
- 9. Способ экспрессии полипептида, включающий стадии:a) обеспечения клетки-хозяина по п.6 иb) культивирования клетки-хозяина в условиях, достаточных для экспрессии полипептида с после- 9 023541 довательностью, приведенной в 5Ер ГО ΝΟ: 1-13.
- 10. Способ доставки терапевтического агента через клетки эндотелия, включающий:a) конъюгацию терапевтического агента с полипептидом, содержащим полипептид с последовательностью, приведенной в 8Ер ГО ΝΟ: 1,2, 4, 8 или 12, с образованием конъюгата;b) приведение конъюгата в контакт с клетками эндотелия иc) измерение количества конъюгата, доставленного через клетки эндотелия.
- 11. Способ по п.10, где клетки эндотелия образуют гематоэнцефалический барьер.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US34893710P | 2010-05-27 | 2010-05-27 | |
| PCT/US2011/037904 WO2011150061A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-05-25 | Insulin-like growth factor 1 receptor binding peptides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201291416A1 EA201291416A1 (ru) | 2013-06-28 |
| EA023541B1 true EA023541B1 (ru) | 2016-06-30 |
Family
ID=45004356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201291416A EA023541B1 (ru) | 2010-05-27 | 2011-05-25 | Пептиды, связывающиеся с рецептором инсулиноподобного фактора роста 1 |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8415306B2 (ru) |
| EP (1) | EP2575846B1 (ru) |
| JP (1) | JP5864556B2 (ru) |
| KR (1) | KR101898502B1 (ru) |
| CN (1) | CN103025341B (ru) |
| AU (1) | AU2011258301B2 (ru) |
| BR (1) | BR112012030084B1 (ru) |
| CA (1) | CA2800744C (ru) |
| CY (1) | CY1116757T1 (ru) |
| DK (1) | DK2575846T3 (ru) |
| EA (1) | EA023541B1 (ru) |
| ES (1) | ES2550040T3 (ru) |
| HK (1) | HK1183234A1 (ru) |
| HR (1) | HRP20151084T1 (ru) |
| HU (1) | HUE026269T2 (ru) |
| IL (1) | IL223030A (ru) |
| ME (1) | ME02206B (ru) |
| MX (1) | MX337134B (ru) |
| NZ (1) | NZ603611A (ru) |
| PL (1) | PL2575846T3 (ru) |
| PT (1) | PT2575846E (ru) |
| RS (1) | RS54278B1 (ru) |
| SG (1) | SG186068A1 (ru) |
| SI (1) | SI2575846T1 (ru) |
| SM (1) | SMT201500222B (ru) |
| UA (1) | UA107596C2 (ru) |
| WO (1) | WO2011150061A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201209689B (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA120048C2 (uk) * | 2014-03-06 | 2019-09-25 | Нешнл Рісеч Каунсіл Оф Канада | Антигензв'язуючий фрагмент антитіла, який специфічно зв'язується з рецептором інсуліноподібного фактора росту 1 (igf1r) |
| MX2016011561A (es) | 2014-03-06 | 2017-04-13 | Nat Res Council Canada | Anticuerpos especificos para el receptor del factor de crecimiento similar a insulina 1 y usos de los mismos. |
| EP3114140B1 (en) * | 2014-03-06 | 2019-02-27 | National Research Council of Canada | Insulin-like growth factor 1 receptor -specific antibodies and uses thereof |
| MX2018006823A (es) | 2015-12-21 | 2018-11-29 | Brainon Inc | Una composicion para mejorar la memoria, capacidad de aprendizaje y capacidad cognitiva. |
| KR101706296B1 (ko) | 2015-12-21 | 2017-02-13 | 주식회사 브레인온 | 기억력, 학습력, 인지력 향상용 조성물 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040034888A1 (en) * | 1999-05-06 | 2004-02-19 | Jingdong Liu | Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement |
| US20040086942A1 (en) * | 2000-09-26 | 2004-05-06 | Lowman Henry B | Ige receptor antagonists |
| US20050085419A1 (en) * | 1999-07-23 | 2005-04-21 | The Regents Of The University Of California | Anti-growth factor receptor avidin fusion proteins as universal vectors for drug delivery |
| US20070083334A1 (en) * | 2001-09-14 | 2007-04-12 | Compugen Ltd. | Methods and systems for annotating biomolecular sequences |
| WO2008143679A2 (en) * | 2006-06-01 | 2008-11-27 | Verenium Corporation | Nucleic acids and proteins and methods for making and using them |
| US20090130105A1 (en) * | 2007-08-28 | 2009-05-21 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions that bind multiple epitopes of igf-1r |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US6329508B1 (en) | 1989-09-07 | 2001-12-11 | Alkermes, Inc. | Transferrin receptor reactive chimeric antibodies |
| JPH06228199A (ja) * | 1992-11-27 | 1994-08-16 | Takeda Chem Ind Ltd | 血液脳関門通過可能なペプチド結合体 |
| EP1006184A1 (en) * | 1998-12-03 | 2000-06-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | IGF-1 receptor interacting proteins (IIPs) genes coding therefor and uses thereof |
| US20090087878A9 (en) | 1999-05-06 | 2009-04-02 | La Rosa Thomas J | Nucleic acid molecules associated with plants |
| CA2385533C (en) | 1999-10-04 | 2008-03-25 | Shearwater Corporation | Polymer stabilized neuropeptides |
| US20020009491A1 (en) | 2000-02-14 | 2002-01-24 | Rothbard Jonathan B. | Compositions and methods for enhancing drug delivery across biological membranes and tissues |
| WO2003082206A2 (en) * | 2002-03-26 | 2003-10-09 | Centocor, Inc. | Multiple sclerosis-related immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses |
| US7388079B2 (en) * | 2002-11-27 | 2008-06-17 | The Regents Of The University Of California | Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor |
| US20050026823A1 (en) | 2003-06-20 | 2005-02-03 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Use of the chaperone receptor-associated protein (RAP) for the delivery of therapeutic compounds to the brain and other tissues |
| US8017151B2 (en) | 2004-09-07 | 2011-09-13 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center | Amphiphilic polymer-protein conjugates and methods of use thereof |
| AU2006259536A1 (en) * | 2005-06-15 | 2006-12-28 | Schering Corporation | Anti-IGF1R antibody formulations |
| US8053569B2 (en) * | 2005-10-07 | 2011-11-08 | Armagen Technologies, Inc. | Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins |
| AU2008343589A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-07-09 | Centocor Ortho Biotech Inc. | Design and generation of human de novo pIX phage display libraries via fusion to pIX or pVII, vectors, antibodies and methods |
-
2011
- 2011-05-25 ES ES11787324.0T patent/ES2550040T3/es active Active
- 2011-05-25 CN CN201180025866.2A patent/CN103025341B/zh active Active
- 2011-05-25 EP EP11787324.0A patent/EP2575846B1/en active Active
- 2011-05-25 JP JP2013512202A patent/JP5864556B2/ja active Active
- 2011-05-25 SG SG2012086617A patent/SG186068A1/en unknown
- 2011-05-25 KR KR1020127033486A patent/KR101898502B1/ko active IP Right Grant
- 2011-05-25 HU HUE11787324A patent/HUE026269T2/en unknown
- 2011-05-25 DK DK11787324.0T patent/DK2575846T3/en active
- 2011-05-25 SI SI201130557T patent/SI2575846T1/sl unknown
- 2011-05-25 AU AU2011258301A patent/AU2011258301B2/en active Active
- 2011-05-25 RS RS20150591A patent/RS54278B1/en unknown
- 2011-05-25 US US13/115,523 patent/US8415306B2/en active Active
- 2011-05-25 MX MX2012013710A patent/MX337134B/es active IP Right Grant
- 2011-05-25 BR BR112012030084A patent/BR112012030084B1/pt active IP Right Grant
- 2011-05-25 CA CA2800744A patent/CA2800744C/en active Active
- 2011-05-25 UA UAA201214969A patent/UA107596C2/ru unknown
- 2011-05-25 WO PCT/US2011/037904 patent/WO2011150061A1/en active Application Filing
- 2011-05-25 PL PL11787324T patent/PL2575846T3/pl unknown
- 2011-05-25 PT PT117873240T patent/PT2575846E/pt unknown
- 2011-05-25 EA EA201291416A patent/EA023541B1/ru unknown
- 2011-05-25 NZ NZ603611A patent/NZ603611A/en unknown
- 2011-05-25 ME MEP-2015-146A patent/ME02206B/me unknown
-
2012
- 2012-11-14 IL IL223030A patent/IL223030A/en active IP Right Grant
- 2012-12-20 ZA ZA2012/09689A patent/ZA201209689B/en unknown
-
2013
- 2013-09-13 HK HK13110609.7A patent/HK1183234A1/zh unknown
-
2015
- 2015-09-22 SM SM201500222T patent/SMT201500222B/xx unknown
- 2015-10-05 CY CY20151100883T patent/CY1116757T1/el unknown
- 2015-10-13 HR HRP20151084TT patent/HRP20151084T1/hr unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040034888A1 (en) * | 1999-05-06 | 2004-02-19 | Jingdong Liu | Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement |
| US20050085419A1 (en) * | 1999-07-23 | 2005-04-21 | The Regents Of The University Of California | Anti-growth factor receptor avidin fusion proteins as universal vectors for drug delivery |
| US20040086942A1 (en) * | 2000-09-26 | 2004-05-06 | Lowman Henry B | Ige receptor antagonists |
| US20070083334A1 (en) * | 2001-09-14 | 2007-04-12 | Compugen Ltd. | Methods and systems for annotating biomolecular sequences |
| WO2008143679A2 (en) * | 2006-06-01 | 2008-11-27 | Verenium Corporation | Nucleic acids and proteins and methods for making and using them |
| US20090130105A1 (en) * | 2007-08-28 | 2009-05-21 | Biogen Idec Ma Inc. | Compositions that bind multiple epitopes of igf-1r |
Non-Patent Citations (13)
| Title |
|---|
| GenBank_BH949877, odh88h09.b1 B.oleracea002 Brassica oleracea genomic, genomic survey sequence, 01 October 2002, [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between nucleotides 252-296, that is 58.7% to the claimed SEQ ID NO: 18 * |
| GenBank_DU585809,OO__Ba0077K13.r OO__Ba Oryza officinalis genomic clone 00__Ba0077K13 3-, genomic survey sequence, 11 October 2005 [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between nucleotides 177-221, that is 59.1% identical to the claimed SEQ ID NO: 16 * |
| GenBank_GE143208, CAHN4032.fwd CAHN Emiliania huxleyi CCMP1516 day 4 post innoculation L Emiliania huxleyi cDNA clone CAHN4032 5-, mRNA sequence. 02 October 2008 [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between 152-196, that is 57.8% identical to the claimed SEQ ID NO: 15 * |
| GenBank_GE672416, CBTZ1479.g1 B.anynana_embryo_2-10kb Bicyclus anynana cDNA clone CBTZ1479, mRNA sequence. 01 December 2008 [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between nucleotides 253-209. that is 61.8% identical to the claimed SEQ ID NO: 17 * |
| Swiss-Prot_Q16GG0, Hypothetical protein, 31 October 2006, [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 463-477, that is 54.1% identical to the claimed SEQ ID NO:3 * |
| Swiss-Prot_Q1D7Z1, Hypothetical protein, 28 November 2006, [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 66-81 that is 59.8% the claimed SEQ ID NO: 1 * |
| UniProt Q4R3V0, Testis cDNA clone: QtsA-14031, similar to human AT rich interactive domain 3B (BRIGHT- like) (ARID3B), Version 1,19 July 2005 [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 8-31, that is 47.9% identical to the claimed SEQ ID NO: 11 * |
| UniProt_A4SDD3, dTDP-4-dehydrorhamnose reductase, Version 1,15 May 2007, [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between a region between amino acid residues 224-238, that is 58.5% identical to the claimed SEQ ID NO: 5 * |
| UniProt_A5K399, Dynein beta chain, putative, Version 1,10 July 2007 [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: region between amino acid residues 4241-4258, that is 57% identical to the claimed SEQ ID NO: 13 * |
| UniProt_B1MGX5, Putative uncharacterized protein, Version 1.29 April 2008 [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 201-224 that is 47.8% identical to the claimed SEQ ID NO: 12 * |
| UniProt_B6KB79, Putative uncharacterized protein, Version 1, 16 December 2008, [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 339-354, that is 57.3% identical to the claimed SEQ ID NO: 8 * |
| UniProt_D2CJE7, NADH-ubiquinone oxidoreductase chain 5, Version 1, 09 February 2010, (online]'[Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 274-288, that is 58% identical to the claimed SEQ ID NO: 6 * |
| UniProt_Q4DH57, Putative uncharacterized protein, Version 1,13 September 2005, [online]. [Retrieved on 2011.08.26]. Retrieved from the Internet: a region between amino acid residues 337-366, that is 45.3% identical to the claimed SEQ ID NO: 10 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101317100B1 (ko) | 세포-침투성 펩티드로서 유용한 펩티드 | |
| US20120028880A1 (en) | Vegfr-1/nrp-1 targeting peptides | |
| SE509359C2 (sv) | Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel | |
| JP2013531973A5 (ru) | ||
| JP2685742B2 (ja) | 組織型及びウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子インヒビター及びそれを使用する固相分析方法 | |
| JP4551058B2 (ja) | モジュラートランスフェクション系 | |
| EA010055B1 (ru) | ВЫДЕЛЕННАЯ НУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД Sp35, ПОЛИПЕПТИД Sp35 И СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ И ПОЛИПЕПТИДА | |
| EA023541B1 (ru) | Пептиды, связывающиеся с рецептором инсулиноподобного фактора роста 1 | |
| US20220265843A1 (en) | Extracellular vesicle-mediated delivery to cells | |
| KR20210035806A (ko) | 가용화된 아피라제, 방법 및 용도 | |
| KR960015442B1 (ko) | 맥관인자 | |
| US20030077757A1 (en) | Method of treating aging-related disorders | |
| JP6778923B2 (ja) | 薬剤送達用複合体 | |
| ES2315011T3 (es) | Polipeptidos de semaforina. | |
| CN117866902B (zh) | 具有抗il-17a活性的基因修饰干细胞及其制备方法以及药物组合物 | |
| CN110759975B (zh) | 一种多肽以及具有强adcc效应的抗体和应用 | |
| RU2791992C2 (ru) | Солюбилизированные апиразы, способы и применение | |
| JP2011507552A (ja) | カニクイザルトール様受容体３ | |
| CN117866902A (zh) | 具有抗il-17a活性的基因修饰干细胞及其制备方法以及药物组合物 | |
| TW200418979A (en) | Physiologically active polypeptide and its antibody and use thereof |