EA021224B1 - Пиперидинильное производное как модулятор активности хемокинового рецептора - Google Patents

Abstract

В изобретении описывается соединение формулы (I)или его стереоизомеры или фармацевтически приемлемые соли. Помимо этого раскрываются способы лечения или предупреждения воспалительных заболеваний, таких как астма, и аллергических заболеваний, а также аутоиммунных патологий, таких как ревматоидный артрит и атеросклероз, с применением соединения по изобретению.

Description

Изобретение в целом относится к пиперидинильному модулятору активности хемокинового рецептора, содержащим его фармацевтическим композициям и способам его применения в качестве агента для лечения и предупреждения воспалительных заболеваний, аллергических и аутоиммунных заболеваний и, в частности, ревматоидного артрита и отторжения трансплантата.

Предпосылки создания изобретения

Хемокины представляют собой хемотаксические цитокины с молекулярной массой 6-15 кДа, которые высвобождаются весьма различными клетками для привлечения и активации, среди прочих типов клеток, моноцитов, макрофагов, Т и В лимфоцитов, эозинофилов, базофилов и нейтрофилов. Хемокины делят на два основных класса, СХС и СС, в зависимости от того, разделены ли два первых цистеиновых остатка единичной аминокислотой (СХС) или прилегают друг к другу (СС). СХС хемокины, такие как интерлейкин-8 (1Ь-8), нейтрофил-активирующий белок-2 (ΝΑΡ-2) и фактор роста меланомы (белок, стимулирующий рост меланомы) (ΜΟ8Α) являются хемотаксическими агентами главным образом для нейтрофилов и Т лимфоцитов, тогда как СС хемокины, такие как Κ.ΑΝΤΕ8, ΜΙΡ-1α, ΜΙΡ-1β, моноцитарные хемотаксические белки (МСР-1, МСР-2, МСР-3, МСР-4 и МСР-5) и эотаксины (-1 и -2) являются хемотаксическими для многих других типов клеток, среди которых макрофаги, Т лимфоциты, эозинофилы, дендритные клетки и базофилы.

Хемокины связываются со специфическими рецепторами клеточной поверхности, относящимися к семейству белков, состоящих из семи трансмембранных доменов и сопряжённых с О-белками, которые называются хемокиновыми рецепторами. При связывании своих лигандов (когнатное взаимодействие) хемокиновые рецепторы передают внутриклеточный сигнал через ассоциированные тримерные О белки, что в результате вызывает, среди прочих реакций, быстрое повышение внутриклеточной концентрации кальция, изменение формы клеток, повышенную экспрессию молекул клеточной адгезии, дегрануляцию клеток и стимуляцию клеточной миграции. Имеется по меньшей мере десять хемокиновых рецепторов человека, которые связывают или отвечают на СС хемокины со следующими характеристическими паттернами: ССК-1 (или СКК-1 или СС-СКК-1) [ΜΙΡ-1α, МСР-3, МСР-4, ΚΑΝΤΕ8]; ССК-2А и ССК-2В (или СКК-2Л/СКК-2В или СС-СКК- 2А/СС-СКК- 2В) [МСР-1, МСР-2, МСР-3, МСР-4, МСР-5]; ССК-3 (или СКК-3 или СС-СКК-3) [эотаксин-1, эотаксин-2, ΚΑΝΤΕ8, МСР-3, МСР-4]; ССК-4 (или СКК-4 или СС-СКК-4) [ΤΑΚΤ, Μϋϋ]; ССК-5 (или СКК-5 или СС-СКК-5) [ΜΙΡ-1α, ΚΑ.ΝΤΕ8, ΜΙΡ-1β]; ССК-6 (или СКК-6 или СС-СКК-6) [ΕΑΚΟ]; ССК-7 (или СКК-7 или СС-СКК7) [БЬС]; ССК-8 (или СКК-8 или СС-СКК-8) [Ι-309]; ССК-10 (или СКК-10 или СС-СКК-10) [МСР-1, МСР-3]; и ССК-11 [МСР-1, МСР-2 и МСР-4].

Показано, что помимо хемокиновых рецепторов млекопитающих, цитомегаловирусы, герпесвирусы и поксвирусы экспрессируют в инфицированных клетках белки со связывающими свойствами хемокиновых рецепторов. СС хемокины человека, такие как ΚΑΝΤΕ8 и МСР-3, могут вызывать быструю мобилизацию кальция при посредстве этих кодируемых вирусами рецепторов. Экспрессия рецепторов может являться разрешительной (пермиссивной) для инфекции, допуская нарушение (поломку) нормальной системы иммунного надзора и ответа на инфекцию. Помимо этого, хемокиновые рецепторы человека, такие как СХСК4, ССК2, ССК3, ССК5 и ССК8, могут действовать в качестве корецепторов для инфицирования клеток млекопитающих микробами, как в случае вирусов иммунодефицита человека (ВИЧ).

Хемокины и их когнатные рецепторы являются важными медиаторами воспалительных, инфекционных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний, включая астму и аллергические заболевания, а также аутоиммунные патологии, такие как ревматоидный артрит и атеросклероз (см. обзоры: Сайег, Ρ.Η., Сиггеи! Θρίηίοη ίη СЬеш1еа1 Вю1оду 2002, 6, 510; Τπνούί е! а1., Αηη. Керойк Μеά СЬет. 2000, 35, 191; 8аш1бег5 е! а1., Эгид Όίδε. Τοώ-κ 1999, 4, 80; ΡιόιικιοΚ е! а1., №11иге Μеά^с^ηе 1996, 2, 1174). Например, хемокин - макрофагальный воспалительный белок-1 (ΜΙΡ-1α) и его рецептор, СС хемокиновый рецептор 1 (ССК-1), играют главную роль в притягивании (привлечении) лейкоцитов к местам воспаления и последующей активации этих клеток. Когда хемокин ΜΙΡ-1α связывается с ССК-1, он вызывает быстрое повышение внутриклеточной концентрации кальция, повышенную экспрессию молекул клеточной адгезии, дегрануляцию клеток и стимуляцию миграции лейкоцитов.

Помимо этого, хемотаксические свойства ΜΙΡ-1 экспериментально продемонстрированы на людях. После интрадермальной инъекции ΜΙΡ-1α у пациентов наблюдался быстрый и заметный приток лимфоцитов к участку инъекции (Вгитте!, Μ.Ε., 1. Ιιηιηιιη. 2000, 164, 3392-3401).

Важность взаимодействия ΜIΡ-1α/ССΚ-1 была показана в экспериментах на генетически модифицированных мышах. У мышей ΜΙΡ-1α -/- имелось нормальное число лейкоцитов, но они не были способны рекрутировать моноциты в области вирусного воспаления после иммунизации. Недавно было показано, что мыши ΜΙΡ-1α -/- устойчивы к артриту, вызываемому антителами к коллагену. Аналогично, мыши ССК-1 -/- были неспособны рекрутировать нейтрофилы при иммунизации с помощью ΜΙΡ-1α ίη νίνο; более того, нейтрофилы периферической крови у ССК-1 пи11 мышей не мигрируют в ответ на ΜΙΡ1α, тем самым демонстрируя специфичность взаимодействия ΜΙΡ-1α /ССК-1. Жизнеспособность и общее нормальное здоровье ΜΙΡ-1α -/- и ССК-1 -/- животных заслуживает внимания, поскольку нарушение

- 1 021224 взаимодействия ΜΙΡ-1α /ССК-1 не вызывает физиологического кризиса. В целом эти факты приводят к выводу, что молекулы, которые блокируют действие ΜΙΡ-1α, могут быть полезными при лечении ряда воспалительных и аутоиммунных расстройств. В настоящее время правильность этой гипотезы подтверждена на различных животных моделях заболеваний, представленных ниже.

Известно, что уровень ΜΙΡ-1α повышен в синовиальной жидкости и крови больных ревматоидным артритом. Кроме того, в некоторых исследованиях продемонстрировано потенциальное терапевтическое значение взаимодействия ΜΙΡ-1α /ССК-1 при лечении ревматоидного артрита.

Следует заметить, что ССК-1 также является рецептором для хемокинов ΚΑΝΤΕ8, МСР-3, НСС-1, Ьки-1/НСС-2, НСС-4 и ΜΡΙΡ-1 (Сайег, Ρ.Η., Сигг. Θρίη Сйет. Βίο. 2002, 6, 510-525). Так как предполагалось, что новое соединение формулы (I) по данному описанию противодействует (антагонизм) ΜΙΡ-1α за счёт связывания с ССК-1 рецептором, вполне возможно, что это соединение является также эффективным антагонистом действия вышеуказанного лиганда, которое опосредуется ССК-1. Соответственно, когда в данном описании даётся ссылка на антагонизм ΜΙΡ-1α, следует полагать, что это выражение эквивалентно выражению антагонизм стимуляции хемокина ССК-1.

В последнее время несколько исследовательских групп сообщили о разработке низкомолекулярных антагонистов ΜΙΡ-1α (см. обзор Сагкоп, К.С. е1 а1., Αηη. Керогк Μеά. Сйет. 2004, 39, 149-158).

Сущность изобретения

Таким образом, настоящее изобретение включает антагонист или частичный агонист/антагонист ΜΙΡ-1α или ССК-1 рецепторной активности или его фармацевтически приемлемые соли.

Настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль.

Настоящее изобретение включает способ лечения ревматоидного артрита и отторжения трансплантата, заключающийся во введении нуждающемуся в таком лечении хозяину терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение включает способ лечения воспалительных заболеваний, заключающийся во введении нуждающемуся в таком лечении хозяину терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение включает пиперидинильное производное для применения в терапии.

Настоящее изобретение включает применение пиперидинильного производного для получения лекарственного препарата для лечения воспалительных заболеваний.

Подробное описание изобретения

В одном варианте настоящее изобретение включает соединение формулы (Ι)

или его стереоизомеры или фармацевтически приемлемые соли.

Настоящее изобретение включает пиперидинильное соединение, профиль которого имеет неожиданные преимущества по сравнению с профилями известных ингибиторов ССК-1 активности, например, пиперидинильных производных, описанных в патентной заявке США И82007/0208056 А1, опубликованной 6 сентября 2007 года и право на которую передано заявителю. Более предпочтительно, соединение имеет повышенный профиль безопасности с минимальным лекарственным взаимодействием и другие свойства, которые делают его привлекательным кандидатом для клинической разработки. Соответственно, именно эти неожиданные свойства, самостоятельно или в комбинации, делают соединение формулы (Ι) желательным для применения в качестве фармакологического агента.

В другом варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество соединения формулы (Ι).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу модуляции активности хемокина или рецептора хемокина, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (Ι).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу модуляции ССК-1 рецепторной активности, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (Ι).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения расстройств, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (Ι), причём указанное расстройство выбирают из остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистых заболеваний, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных забо- 2 021224 леваний, ВИЧ-инфекции, ВИЧ-ассоциированной деменции, псориаза, идиопатического лёгочного фиброза, трансплантационного артериосклероза, вызванной физическим или химическим воздействием травмы головы, нейропатической боли, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, язвенного колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, артросклероза, ревматоидного артрита, рестеноза, трансплантации органа, псориатического артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, колоректального рака, остеопороза, почечного фиброза и других типов раковых заболеваний, предпочтительно болезни Крона, псориаза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, остеопороза и почечного фиброза.

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения воспалительных заболеваний, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения воспалительного заболевания кишечника, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения болезни Крона, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения псориаза, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения системной красной волчанки, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения рассеянного склероза, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения ревматоидного артрита, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения псориатического артрита, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения множественной миеломы, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения аллергии, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения печёночно-клеточной карциномы, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения остеопороза, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения почечного фиброза, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения воспалительных заболеваний, например, воспалительных заболеваний, которые по меньшей мере частично опосредуются ССК.-1, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу модуляции ССК.-1 активности, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В другом варианте настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для приготовления лекарственного препарата для лечения расстройства, причём указанное расстройство выбирают из остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистых заболеваний, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных заболеваний, ВИЧ-инфекции, ВИЧассоциированной деменции, псориаза, идиопатического лёгочного фиброза, трансплантационного арте- 3 021224 риосклероза, вызванной физическим или химическим воздействием травмы головы, нейропатической боли, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, язвенного колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, артросклероза, ревматоидного артрита, рестеноза, трансплантации органа, псориатического артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, колоректального рака, остеопороза, почечного фиброза и других типов раковых заболеваний, предпочтительно, болезни Крона, псориаза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, остеопороза и почечного фиброза.

В другом варианте настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в терапии.

В другом варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) и один или более активных ингредиентов.

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу модуляции активности хемокинов или хемокиновых рецепторов, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов.

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу модуляции ССК-1 рецепторной активности, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов.

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения расстройства, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов, причем указанное расстройство выбирают из остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечнососудистых заболеваний, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных заболеваний, ВИЧ-инфекции, ВИЧ-ассоциированной деменции, псориаза, идиопатического лёгочного фиброза, трансплантационного артериосклероза, травмы головы, вызванной физическим или химическим воздействием, нейропатической боли, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, язвенного колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, артросклероза, ревматоидного артрита, рестеноза, трансплантации органа, псориатического артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, колоректального рака, остеопороза, почечного фиброза и других типов раковых заболеваний, предпочтительно, болезни Крона, псориаза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, остеопороза и почечного фиброза.

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу лечения воспалительных заболеваний, предпочтительно воспалительных заболеваний, которые по меньшей мере частично опосредуются ССК-1, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов.

В другом варианте настоящее изобретение относится к способу модуляции ССК-1 активности, заключающемуся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов.

В другом варианте настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов, для приготовления лекарственного препарата для лечения расстройства, причём указанное расстройство выбирают из остеоартрита, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистых заболеваний, болезни Крона, застойной сердечной недостаточности, аутоиммунных заболеваний, ВИЧ-инфекции, ВИЧ-ассоциированной деменции, псориаза, идиопатического лёгочного фиброза, трансплантационного артериосклероза, травмы головы, вызванной физическим или химическим воздействием, нейропатической боли, воспалительного заболевания кишечника, альвеолита, язвенного колита, системной красной волчанки, нефротоксического сывороточного нефрита, гломерулонефрита, астмы, рассеянного склероза, артросклероза, ревматоидного артрита, рестеноза, трансплантации органа, псориатического артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, колоректального рака, остеопороза, почечного фиброза и других типов раковых заболеваний, предпочтительно болезни Крона, псориаза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, множественной миеломы, аллергии, например, дегрануляции кожных и тучных клеток в конъюнктиве, печёночно-клеточной карциномы, остеопороза и почечного

- 4 021224 фиброза.

Ещё в одном варианте настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции, состоящей из соединения формулы (I) и одного или более активных ингредиентов, в терапии.

Изобретение может быть воплощено в других специфических формах, не отступая от его сущности или его существенных признаков. Данное изобретение охватывает также все комбинации альтернативных аспектов изобретения, указанных в данном описании. Следует понимать, что все без исключения варианты настоящего изобретения можно использовать в сочетании с любым другим вариантом изобретения для описания дополнительных вариантов настоящего изобретения. Кроме того, любые элементы изобретения можно объединять с любыми другими элементами из любого варианта изобретения для описания дополнительных вариантов изобретения.

Определения

Соединения по данному описанию могут иметь асимметрические центры. Соединения по настоящему изобретению, содержащие асимметрически замещённый атом, можно выделять в оптически активной или рацемической форме. В данной области техники (области органического синтеза) хорошо известно, как приготовить оптически активные формы, например, разрешением (разделением) рацемических форм или синтезом из оптически активных исходных материалов. Многие геометрические изомеры олефинов, С-Ν двойные связи и т.п. также могут присутствовать в соединениях по данному описанию, и все такие устойчивые изомеры рассматриваются в данном изобретении. Описываются цис- и трансгеометрические изомеры соединений по настоящему изобретению, и их можно выделять в виде смеси изомеров или в виде отдельных изомерных форм. Если специально не указывается конкретная стереохимия или изомерная форма, то подразумеваются все хиральные, диастереомерные, рацемические формы и все геометрические изомерные формы структуры.

Один энантиомер соединения формулы I может проявлять повышенную активность по сравнению с другими. Поэтому все стереоизомеры рассматриваются как часть настоящего изобретения. При необходимости разделение рацемического продукта можно проводить методом ВЭЖХ с применением хиральной колонки или разделением с помощью агента для оптического расщепления, известного в уровне техники.

Выражение фармацевтически приемлемый применяется в данном описании по отношению к таким соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые, по мнению компетентного врача, пригодны для применения в контакте с тканями человека и животных, не проявляя токсичности, не вызывая раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, превышающих допустимое соотношение польза/риск.

Выражение фармацевтически приемлемые соли относится к производным раскрываемых соединений, исходное соединение для которых модифицируется образованием солей кислоты или основания. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но без ограничения, соли минеральных или органических кислот с основными остатками, такими как амины; соли щелочных или органических оснований с кислыми остатками, такими как остатки карбоновых кислот; и т.п. Фармацевтически приемлемые соли включают обычные нетоксические соли или четвертичные аммониевые соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксических неорганических или органических кислот. Например, такие обычные нетоксические соли включают соли, образованные из неорганических кислот, таких как хлористо-водородная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и т.п.; и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, пальмовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изэтионовая и т.п.

Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению можно синтезировать из исходного соединения, которое содержит основную или кислую группу, обычными химическими методами. Обычно такие соли можно получать по реакции свободной кислой или основной формы этих соединений со стехиометрическим количеством соответствующего основания или соответствующей кислоты в воде или в органическом растворителе или в их смеси; как правило, предпочтительны неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Списки соответствующих солей даны в справочнике КеттдЮп'з Рйагтасеийса1 8с1епсе5, 17'¹' еб., Маск РиЪйзЫпд Сотрапу, ЕазЮп, РА, 1985, р. 1418, его раскрытие вводится в данное описание в качестве ссылки.

Указанные ссылочные материалы вводятся в данное описание в качестве ссылки.

После получения соединения формулы I предпочтительно выделяют или очищают, получая композицию, содержащую некоторое количество, равное или превышающее 99 вес.%, соединения формулы I (практически чистое соединение I), которое затем используют или готовят из него препарат по данному описанию. Такие практически чистые соединения формулы I также рассматриваются в данном описании как часть настоящего изобретения.

Рассматриваются все стереоизомеры соединений по настоящему изобретению, либо в виде смеси, либо в чистом или практически чистом виде. Соединения по настоящему изобретению могут иметь асимметрические центры при любом углеродном атоме, включая любой из заместителей К, и/или прояв- 5 021224 лять полиморфизм. Соответственно соединения формулы I могут существовать в виде энантиомеров, диастереомеров или в виде их смеси. Рацематы, энантиомеры или диастереомеры могут использоваться в качестве исходных материалов. После получения энантиомерных продуктов их можно разделять обычными методами, например хроматографией или фракционной кристаллизацией.

Предполагается, что термины устойчивое (стабильное) соединение или устойчивая (стабильная) структура означают соединение, достаточно прочное, чтобы выдержать выделение из реакционной смеси с очисткой до приемлемой степени чистоты и приготовление эффективного терапевтического агента. Предполагается, что настоящее изобретение включает устойчивые соединения.

Предполагается, что выражение теоретически эффективное количество включает некоторое количество соединения по настоящему изобретению, самостоятельно или в комбинации заявляемых соединений, или некоторое количество соединения по настоящему изобретению в комбинации другими активными ингредиентами, эффективными для ингибирования ΜΙΡ-1α или для лечения или предупреждения воспалительных расстройств.

Термин лечение относится к лечению болезненного состояния у млекопитающего, в частности у человека, и включает: (а) предупреждение заболевания у млекопитающего, в частности, когда такое млекопитающее предрасположено к заболеванию, но заболевание у него ещё не диагностировано; (б) ингибирование заболевания, например, прекращение развития заболевания; и/или (в) ослабление заболевания, т.е ремиссию заболевания.

Синтез

Соединение формулы I получают как описано в нижеприведённом примере, схеме реакции и её описании, а также в релевантных литературных методиках, которые может применять специалист в области органического синтеза. Типичные реагенты и методики этих реакций приводятся ниже.

Пример. Стадия 1. трет- Бутил 3,3-диметил-4-оксопиперидин-1-карбоксилат

Раствор трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилата (52.47 г, 263 ммоль) в ТНР (ТГФ) (1000 мл) охлаждают до 0°С и прибавляют гидрид натрия (60% суспензия в минеральном масле) (22.12 г, 553 ммоль) четырьмя равными порциями с пятиминутными интервалами. Образовавшуюся суспензию перемешивают при 0°С в течение 45 мин (мин), а затем по каплям добавляют йодистый метил (41.2 мл, 658 ммоль). Смесь перемешивают 1 ч (ч или час), а затем оставляют нагреваться до комнатной температуры (г!). Через девяносто минут после того, как отставляют баню со льдом, наблюдается быстрый разогрев (20-40°С за 3 мин) и энергичное выделение газа. Снова подставляют баню со льдом и смесь оставляют перемешиваться в течение ночи, при этом она медленно нагревается до комнатной температуры. Реакцию прекращают, добавляя насыщенный раствор хлорида аммония (200 мл), затем прибавляют воду в количестве, достаточном для растворения выпавших солей. Фазы разделяют и органический слой упаривают в вакууме. Водный слой экстрагируют этилацетатом и эти вытяжки объединяют с остатком после упаривания органической фазы. К полученному раствору прибавляют 500 мл этилацетата и смесь промывают 2 раза (х) водой, один раз рассолом, сушат сульфатом натрия, а затем упаривают в вакууме, получают вязкое масло, которое твердеет при стоянии. Затвердевший продукт растворяют в 100 мл смеси гексанов при кипении и полученный раствор оставляют охлаждаться до комнатной температуры в течение ночи. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают небольшим количеством смеси гексанов, охлаждённой льдом, и сушат, получают титульное соединение в виде порошка (19,5 г, 86 ммоль, выход 32.6%). Μ8 (Е8+) = 172, 154.

Стадия 2. (±)-трет-Бутил 4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1-карбоксилат

Раствор 4-бромхлорбензола (136.6 г, 0.71 моль) в сухом ТГФ (1000 мл) охлаждают до -78°С, а затем по каплям прибавляют 1.6 М раствор н-бутиллития в смеси гексанов (466 мл, 0.75 моль) с такой скоростью, чтобы температура реакционной смеси была ниже -60°С. Полученную смесь перемешивают при -78°С в течение 1.5 ч, наблюдают выпадение осадка. К полученной суспензии по каплям прибавляют раствор трет-бутил 3,3-диметил-4-оксопиперидин-1-карбоксилата (73.7 г, 0.32 моль) в сухом (безводном) ТГФ (400 мл) с такой скоростью, чтобы температура реакционной смеси была ниже -60°С. Смесь перемешивают при -78°С в течение 2 ч, при этом образуется прозрачный раствор. К реакционной смеси прибавляют насыщенный раствор хлористого аммония (300 мл) и оставляют нагреваться до комнатной температуры. Органический слой отделяют, упаривают в вакууме досуха. Водный слой экстрагируют 2х этилацетатом (300 мл). Объединённые органические вытяжки прибавляют к остатку из первоначальной органической фазы и полученную смесь доводят до объёма 1200 мл этилацетатом. Полученный раствор промывают водой 2х (300 мл), один раз рассолом, сушат сульфатом натрия и упаривают в вакууме. По- 6 021224 лученный остаток растворяют в кипящем гексане (смесь гексанов) (300 мл) и образовавшуюся суспензию охлаждают до комнатной температуры. Белый осадок отфильтровывают, промывают смесью гексанов (2 х), сушат на воздухе, получают титульное соединение в виде порошка (93.7 г, выход 85%).

Стадия 3. (±)-4-(4-Хлорфенил)-3,3-диметилпиперидин-4-ол

К раствору (±)-трет-бутил 4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1-карбоксилата (93.7 г, 0.276 моль) в диоксане (100 мл) прибавляют 4 М раствор НС1 в диоксане (275 мл, 1.1 моль). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь упаривают в вакууме, а затем трижды (3х) концентрируют из хлористого метилена (200 мл) для удаления остатков НС1. Полученный остаток перемешивают в 1 М ΝαΟΗ (500 мл), образовавшуюся суспензию четырежды (4х) экстрагируют 500 мл этилацетата. Объединённые органические вытяжки промывают рассолом, сушат сульфатом натрия и упаривают в вакууме, получают титульное соединение (66.8 г, количественный выход) в виде твёрдого вещества.

Стадия 4. (§)-4-(4-Хлорфенил)-3,3-диметилпиперидин-4-ол

Суспензию (±)-4-(4-хлорфенил)-3,3-диметилпиперидин-4-ола (175 г) и Ь-винной кислоты (0.9 эквив) в МЕК (3.22 л) нагревают до кипения. Прибавляют воду (100 мл). Образовавшийся раствор кипятят 1 ч, затем оставляют охлаждаться до комнатной температуры и перемешивают при комнатной температуре 48 ч. Полученную суспензию отфильтровывают, объединённые осадки сушат в вакууме, получают 123.4 г соли винной кислоты. Этот продукт объединяют с продуктом из другого опыта, проведённого в том же масштабе, и объединённые осадки ресуспендируют в МЕК (2.55 л) и воде (0.25 л). Полученный раствор нагревают до кипения и прибавляют дополнительное количество воды (0.2 л) для растворения смеси. Раствор кипятят в течение 2 ч, а затем оставляют охлаждаться до комнатной температуры. Перемешивают при комнатной температуре 48 ч (етеекеиб). Полученный осадок отфильтровывают (объединяют осадки) и сушат, получают 219 г соли. Соль делят на две равные порции. Каждую порцию суспендируют в воде (2 л), прибавляют 50% ΝαΟΗ, выпадает свободное пиперидиновое основание. После фильтрования и сушки выделяют 126.3 г титульного соединения (выход ~72%, >99% ее)

Стадия 5. трет-Бутил (К)-1-((§)-4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1-ил)-3-метил1 -оксобутан-2 -илкарбамат

В трёхгорлую круглодонную (КВ) колбу на 3 л помещают (К)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3метилбутановую кислоту (39.8 г, 183 ммоль), СН₂С1₂ (1.6 л), (8)-4-(4-хлорфенил)-3,3-диметилпиперидин4-ол (40.0 г, 167 ммоль), ЕЭС (70.4 г, 367 ммоль) и НОВ! (56.2 г, 416 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 30 мин при г!. Прибавляют триэтиламин (ТЭА, ТЕА, 93 мл, 668 ммоль). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, промывают №-ьСО₃, (3х300 мл, примечание: после первой промывки с помощью №-ьСО₃, фильтруют в вакууме и полученный фильтрат снова экстрагируют СН₂С1₂), 1Ν НС1 (3х300 мл), водой (400 мл) и рассолом (300 мл). Полученный раствор сушат Να₃δΟ.·ι и упаривают, получая полутвёрдый продукт (106 г, теоретический выход 73.2 г). Полутвёрдый продукт используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 6. (К)-2-Амино-1 -((8)-4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1 -ил)-3 -метилбутан-1-он-НС1

В КВ колбу на 1000 мл помещают трет-бутил (К)-1-((8)-4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3диметилпиперидин-1-ил)-3-метил-1-оксобутан-2-илкарбамат (65 г, 148 ммоль) и раствор хлористого водорода (4 М НС1 в диоксане, 720 мл, 2880 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при г! в течение 2.5 ч, упаривают, получают гель. Гель упаривают совместно с метанолом (8х100 мл), а затем с СН₂С1₂ (7х 100 мл), получают твёрдое вещество (первоначальный вес 57 г, НС1 соль).

Стадия 7. Фенил (К)-1-((8)-4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1-ил)-3-метил-1оксобутан-12-илкарбамат

- 7 021224

Синтез карбамата проводят в двух отдельных колбах. Приводимые в данном описании количества представляют собой общее количество для проведения экспериментов в двух колбах. (К)-2-амино-1-((8)4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1-ил)-3-метилбутан-1-он-НС1 (20 г, 53.3 ммоль) и ПЕРЕД (18.61 мл, 107 ммоль) в СН₂С1₂ (15 мл) перемешивают при й, а затем из капельной воронки по каплям прибавляют фенилхлорформиат (6.71 мл, 53.3 ммоль) в 10 мл хлористого метилена. По окончании прибавления реакционную смесь перемешивают один ч, прибавляют ещё 0.2 эквив. ПЕРЕА, а затем раствор фенилхлорформиата в хлористом метилене. Органический слой отделяют, промывают 1Ν НС1, насыщенным водным раствором NаНСΟз и рассолом; сушат, а затем отгоняют растворитель и получают масло. К маслу при перемешивании при П прибавляют 25 мл ΜβΟΝ, перемешивают 10 мин, выпадает осадок. Прибавляют эфир (50 мл) и образовавшуюся смесь перемешивают 5 мин. Прибавляют ещё 25 мл эфира и продолжают перемешивать ещё в течение 15 мин. Полученный осадок отфильтровывают, промывают эфиром, получают 13 г сырого твёрдого продукта, который используют далее без дополнительной очистки. Фильтрат упаривают, остаток очищают хроматографией на силикагеле (элюент: 9:1 до 3:1 до 1:1 смесь гексанов/ЕЮАс до 100% ЕЮАс). получая дополнительно 6.72 г продукта (общий массовый выход 19.7 г, выход 81%).

Стадия 8. Соединение формулы I

Фенил (К)-1 -((8)-4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-3,3-диметилпиперидин-1 -ил)-3 -метил-1-оксобутан12-илкарбамат (16.0 г, 34.9 ммоль), 1-амино-2-метилпропан-2-ол (3.42 г, 38.3 ммоль) и П1РЕА (6.70 мл,

38.3 ммоль) перемешивают в ΜβΟΝ (30 мл) в атмосфере азота при й. Образовавшуюся суспензию кипятят при перемешивании, сначала образуется бесцветный раствор, а через 20 мин выпадает осадок. Кипятят при перемешивании 1.5 ч, прибавляют 20 мл ацетонитрила и ещё 0.1 эквив. 1-амино-2-метилпропан2-ола и П1РЕА. Реакционную смесь перемешивают ещё 1.5 ч. Нагреватель отставляют и охлаждают до й. По охлаждении до й прибавляют воду (~240 мл) для осаждения продукта и полученную текучую суспензию перемешивают в течение ночи. Полученный осадок отфильтровывают, дважды промывают водой, а затем сушат в высоком вакууме в течение 6 ч, получают 15.4 г твёрдого продукта. Этот продукт (и плюс ~1 г из пилотной партии) при перемешивании при й суспендируют в 50 мл ацетона, а затем прибавляют трёхкратный объём воды (150 мл). Текучую суспензию перемешивают в течение ночи. Полученный твёрдый продукт отфильтровывают, дважды промывают водой, сушат в течение 48 ч, получают 15.2 г Соединения формулы I в виде твёрдого вещества.

'Н ЯМР (500 МГц, метанол-б₄, ротамерный) δ м.д. 7.47 (дд, 1=15.4, 8.8 Гц, 4Н), 7.31 (дд, 1=8.5, 5.2 Гц, 4Н), 4.71 (дд, 1=12.1, 6.1 Гц, 2Н), 4.54 (ддд, 1=12.9, 2.5, 2.2 Гц, 1Н), 3.98-4.08 (м, 2Н), 3.58-3.68 (м, 2Н), 3.48 (дд, 1=12.9, 1.4 Гц, 1Н), 3.13-3.21 (м, 2Н), 3.06-3.14 (м, 4Н), 2.70 (тд, 1= 43.6, 4.7 Гц, 1Н), 2.61 (тд, 1=13.5, 5.0 Гц, 1Н), 2.09 (дкв, 1 =13.2, 6.6 Гц, 1Н), 1.95 (дкв, 1=13.3, 6.7 Гц, 1Н), 1.60 (ддд, 1=43.9, 2.5, 2.3 Гц, 1Н), 1.51 (ддд, 1=14.2, 2.6, 2.5 Гц, 1Н), 1.16 (с, 6Н), 1.14 (б, 1= 1.7 Гц, 6Н), 1.05 (д, 1=7.2 Гц, 3Н), 0.98 (б, 1=7.2 Гц, 3Н), 0.94 (д, 1=6.6 Гц, 3Н), 0.91 (д, 1=6.6 Гц, 3Н), 0.82 (с, 3Н), 0.81 (с, 3Н), 0.79 (с, 3Н), 0.75 (с, 3Н).

¹³С ЯМР (126 МГц, метанол-б₄) δ м.д. 173.6, 173.3, 161.1, 160.8, 144.8, 144.6, 133.82 (2С, с), 130.2 (4С, с), 128.3 (4С, с), 76.0, 76.0, 71.7, 71.7, 55.9, 55.2, 55.1, 51.8 (2С, с), 51.1, 43.0, 40.4, 39.9, 39.3, 34.8, 33.7, 33.1, 32.4, 27.2 (2С, с), 27.1 (2С, с), 23.1, 22.8, 21.4, 21.1, 20.3, 19.8, 17.9, 17.7, т/ζ: 454.2 [М+]+.

Полезность.

Было показано, что соединение формулы (I), как правило, является модулятором активности хемокиновых рецепторов. Предполагается, что раз соединение формулы (I) проявляет активность в качестве модулятора активности хемокиновых рецепторов, то оно может применяться при лечении человеческих болезней, ассоциирующихся с хемокинами и их когнатными (своими) рецепторами.

Сравнительные фармакологические характеристики.

Ниже представлены анализы и результаты сравнения фармакологических характеристик соединения из Примера 1 и соединений из Патентной заявки США И82007/0208056А1 (аналогичной Международной патентной заявке \УО 2007/092681).

Соединение по настоящему изобретению (соединение 1) сравнивают с другими соединениями, которые, как было обнаружено, представляют собой полезные ингибиторы ССК-1 активности и являются особенно эффективными. Например, поразительное преимущество перед другими соединениями показано ниже, в Таблицах 1 и 2.

- 8 021224

Анализ связывания ССК1 с ТНР-1 у человека.

Для исследования конкурентных реакций с радиолигандами ТНР-1 клетки моноцитарного лейкоза в конечной концентрации 1х10⁵ смешивают с Ь§ \УСЛ Р§ гранулами (100 мкг) (ЛтсгШат. Са!.#: ΡΡΝΟ 0260) в 40 мкл аналитического буфера (КРМ1 1640 без фенола красного, 50 мМ НЕРЕ8, 5 мМ МдС1₂, 1 мМ СаС1₂, 0.1% ΒδΑ). Смесь клетки ТНР-1/гранулы добавляют в каждую лунку 384-луночного аналитического планшета (Регк1пЕ1тег, Са!. #:6007899), содержащую тестируемое соединение в 3-кратном серийном разведении с конечной концентрацией в интервале от 8 мкМ до 0.14 мкМ. В реакционную смесь добавляют [¹²⁵Ι]-ΜΙΡ-1α (Регк1пЕ1тег, Са! # ΝΕΧ298) в конечной концентрации 0.1 нМ в 20 мкл аналитического буфера. В некоторые лунки в избытке добавляют немеченый М1Р-1а для определения неспецифического связывания. Герметично закрытые планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 12 ч, затем анализируют с помощью программы ЬЕАЭкеекег™.

Результаты конкурентного анализа определяют как зависимость ингибирования (в процентах от ингибирования радиолиганда, специфически связанного в отсутствие тестируемого соединения (процент от общего сигнала)) от концентрации тестируемого соединения (в интервале концентраций). После поправки на неспецифическое связывание определяют значения 1С₅₀. Величину 1С₅₀ определяют как концентрацию тестируемого соединения, требующуюся для уменьшения специфического связывания [¹²⁵1]-М1Р-1 на 50%, и рассчитывают по четырёхпараметрическому логистическому уравнению для получения нормализованных данных. К₁, величины определяют, применяя уравнение Ченга-Пруссова к значениям 1С₅₀, где К₁ = 1С₅₀/(1+концентрация лиганда/КД Величина К,| для [¹²⁵Ι]- М1Р-1а в клетках ТНР-1 равна 0.1 нМ. Каждый эксперимент проводят в двойном повторе.

Анализ методом локальной фиксации потенциала (электрофизиология, метод ра!ей-е1атр (пэтчкламп)) ЬЕКС.

Цельноклеточный ра!ей-е1атр используют для непосредственного измерения ЬЕКС следового тока в клетках НЕК-293, стабильно экспрессирующих клонированную α субъединицу калиевого канала ЬЕКС. Эффекты соединений рассчитывают, количественно определяя ингибирование пикового следового тока. Эксперименты проводят с применением водного буфера с рН 7.4 при комнатной температуре. В аналитическом буфере отсутствует белок. Указанные концентрации тестируемого соединения представляют собой номинальные уровни свободного лекарства.

Анализ натриевых и кальциевых каналов Ь-типа.

Цельноклеточный ра!ей-е1атр используют для непосредственного измерения тока ионов натрия внутрь клеток НЕК-293, экспрессирующих натриевый канал сердца человека, δί'.'Ν5Α. После достижения эффекта в равновесном состоянии в присутствии лекарства определяют зависимость скорости, стимулируя при частотах 1 Гц и 4 Гц. Эксперименты проводят в водном буфере при рН 7.4 при комнатной температуре. Буфер не содержит белка и указанные концентрации лекарства представляют собой номинальные уровни свободного лекарства. Тестируемое изделие оценивают вплоть до концентрации 10 мкМ (безбелковый буфер). Зависимость скорости ингибирования определяют, стимулируя при частотах 1 Гц и 4 Гц.

Помимо потенциала взаимодействия с кальциевым каналом Ь-типа цельноклеточный метод ра!сЬс1атр (фиксации потенциала) используют для непосредственного измерения тока ионов кальция внутрь клеток НЕК-293, стабильно экспрессирующих клонированный кальциевый канал Ь-типа сердца человека (а1С) и его β субъединицы. Эффекты соединений рассчитывают, измеряя ингибирование пикового тока. Эксперименты проводят в водном буфере при рН 7.4 при комнатной температуре. Буфер не содержит белка и указанные концентрации лекарства представляют собой номинальные уровни свободного лекарства.

Электрокардиография анестезированных кроликов.

Исследование доза-эффект тестируемых соединений проводят на анестезированных кроликах для определения электрофизиологических показателей сердца на основе анализов ионных каналов.

Эксперименты проводят на закрытом сердце анестезированных (пропофол-фентанил) самцов кроликов. В ходе исследования электрокардиограмму (ЭКГ) (на поверхности тела) и внутрисердечную электрограмму (гисограмму) непрерывно записывают и регистрируют, используя систему Ро№МаЬ и систему электрофизиологического мониторинга Ргиска, соответственно. Тестируемое соединение готовят в день исследования в носителе ПЭГ400:этанол: вода (1:1:1) в концентрации дозирования 30 мг/мл. Тестируемое соединение (п=3) или носитель (п=3) вводят внутривенно через 5 мин с помощью инфузионного насоса в возрастающих дозах 3, 10 и 30 мг/кг. Интервалы между дозами составляют 10 мин и включают 5-минутное вливание тестируемого агента и 5-минутный перерыв. Пробы крови отбирают перед инфузией лекарства (базовая линия) и сразу же по окончании каждой инфузии. В случае дозы 30 мг/кг дополнительные образцы крови отбирают через 10, 10 и 30 мин по окончании инфузии.

Интервал РК, длительность ЦК§ и интервал ЦТ являются усреднёнными от 1 минутного периода регистрации ЭКГ в момент взятия пробы крови. Интервал ЦТ корректируют по частоте сердечных сокращений по формулам РгШепсш (ОТсГ) и Уап бег ^а!ег (ЦТсу). Интервалы АН и НУ, представляющие проводимость в узле А-У и проводимость в системе Гиса-Пуркинье, соответственно, определяют вруч- 9 021224 ную по электрограмме пучка Гиса (гисограмме). Результаты выражают как процентное изменение по сравнению с фоном (среднее ± 8ЕМ) для РК, фР8. АН и НУ интервалов, а также δ изменение по сравнению с фоном перед вливанием лекарства (среднее ± 8ЕМ) для фТс интервалов. Изменения > 10% в РК, φΚδ и АН интервалах и 20% в НУ интервале, а также >10 мсек в фТс интервале считаются значимыми, на основании опыта на модели.

Как показано в табл. 1, результаты ίη νίνο демонстрируют повышенный профиль безопасности соединения I. В частности, хотя ίη νίίτο Κι соединения I ниже по сравнению с другими соединениями, у соединения I также имеется Уровень Без Наблюдаемых Эффектов (ΝΘΕΕ) у кролика 10 мг/кг. Хотя соединение из примера 491 имеет аналогичный ΝΘΕΕ, у него наблюдается повышенное абсолютное пролонгирование интервала РТ, а также пониженная свободная часть циркулирующего лекарства по сравнению с соединением I.

Таблица 1. Ш νίνο и ίη νίνο сердечно-сосудистый профиль безопасности

Ιη νίΐπ» ЕР эффект	Соединение I	ЕХ8491*	ЕХ# 572*
ССК1 К· (нМ)	0.7	2.1	1.5
ЬЕКС, % инг. @ 30 мкМ	29%	27%	32%
Иа, % ннг.	12% @ 10 мкМ	13% @ 10 мкМ	25% @ 10 мкМ
Са, % ннг.	29% @30 мкМ	22% @ 10 мкМ	19% @ 30 мкМ
Связывание белка. Человек	81% (кролик 87%)	95% (кролик 94%)	84% (кролик 87%)
Ιη νίνο ЕР эффект
ОТсГ, дельта	12 мсек	17 мсек	22 мсек
ОТ эффект Доза Стах: Суммарное лекарство/Свободное лекарство	30 мг/кг 202/26 мкМ	30 мг/кг 138.5/5.5 мкМ	10 мг/кг 48.6/6.3 мкМ
ΝΟΕί доза, Стах: Суммарное лекарство/Свободное	10 мг/кг 65.2/8.5 мкМ	10 мг/кг 77/3.1 мкМ	Не идентифицировано <10 мг/кг <48.6/6А мкМ

(*)- Примеры из патентной заявки США, показанные ниже:

Анализ трансактивации РХК

В качестве среды для клеточных культур используют ИМЕМ. Липофектамин 2000, РВ8, термоинактивированная фетальная бычья сыворотка (РВ8), трипсин-ЭДТА (ΕΌΤΚ) (0.25%) и пенициллинстрептомицин получают от СШСО/ШуНгодеп (СатНЪаб, СА). Фетальную бычью сыворотку (ЕВ8), адсорбированную на системе древесный уголь-декстран, получают от Нускпе (Εοβαιι ИТ). Клетки НерС2 получают из АТСС (Мапа88а8, УА). Человеческую РХК-рсИЫАЗ (пкДНКЗ) и репортёрный ген люциферазы, содержащий промотор СУР3А4, СУРЗА-Ьис, получают в компании Вп5Ю1-Муег5 8дшЪЪ. Белые 384луночные планшеты для тканевых культур (ТС) получают от Реткш Е1тег (ΈοδΙοιτ МА). Субстрат для люциферазы (Шеабу-Ок) получают от Рготеда (Маά^8οη, XVI). Контрольные соединения рифампицин, мифепристон и сульфинпиразон §1дта (δί. Εουίδ, МО).

Культуру клеток НерО2 высевают в колбах Т175, используя среду ИМЕМ, содержащую 10% РВ8. Трансфекционная смесь содержит 1 мкг/мл плазмидной ДНК РХК-рсНХАЗ, 20 мкг/мл плазмидной ДНК СурЗА-Ьис, 90 мкл/мл липофектамина 2000 и бессывороточную среду. После инкубации при комнатной температуре в течение 20 мин трансфекционную смесь (1 мл на колбу) добавляют к клеткам в свежей среде (20 мл на колбу) и колбы инкубируют при 37°С (5% СО₂) в течение ночи.

Клетки в каждой колбе отмывают РВ8 и добавляют 2 мл трипсин-ЭДТА (0.25%) и инкубируют пять минут при 37°С, 5% СО₂. Затем по колбам энергично постукивают, чтобы разрушить клеточные агрегаты. Добавляют 8 мл ИМЕМ, содержащей 5% РВ8, адсорбированной на системе древесный уголь- 10 021224 декстран, всю смесь переносят в конические пробирки. Затем клетки центрифугируют при 1000 грт (об/мин) в течение 5 мин. Клеточный осадок ресуспендируют до конечного содержания ~7х10⁶ клеток/мл в среде для замораживания (ΌΜΕΜ, содержащей 20% сыворотки и 10% ΌΜδΟ). Аликвоты клеточной суспензии (5 мл) помещают в полипропиленовые пробирки на 15 мл. Клетки медленно замораживают, помещая их на ночь в герметизированный пенополистиролом контейнер при -80°С. Через 24 ч виалы переносят в низкотемпературную морозильную камеру (-140°С) для длительного хранения.

Виалы с криоконсервированными клетками быстро размораживают на тёплой водяной бане в течение пяти минут. Клетки собирают и разводят до 50 мл в конической виале на 50 мл. Оттаявшие клетки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин, осаждают клетки, а супернатант отбрасывают. Затем клетки ресуспендируют в свежей Среде II (ΌΜΕΜ, содержащей 5% ΡΒδ, адсорбированную на системе древесный уголь-декстран, 1% пенициллина/стрептомицина, 100 мкМ заменимых аминокислот, 1 мМ пирувата натрия и 2 мМ Ь-глутамина), считают с помощью счётчика клеток Оиауа Се11 СоиШег и разводят до плотности 1.6х 10⁵ клеток/мл той же самой средой.

В лунки 1-23 рядов обработанных клеточными культурами белых 384-луночных планшетов, содержащие 0.25 мкл тестируемого соединения, растворённого в 100% ΌΜδΟ, добавляют пятьдесят микролитров клеточной смеси. В лунки 24 ряда добавляют пятьдесят микролитров среды II. Планшеты инкубируют при 37°С (5% СО₂) в течение 24 ч, затем в каждую лунку добавляют 5 мкл реагента А1атаг В1ие (Тгек ΌίαβηοδΙίοδ. Са! #00- 100). Планшеты инкубируют ещё в течение 2 ч при 37°С, 5% СО₂, а затем один час при комнатной температуре. Флуоресценцию считывают при длинах волн Ех525/Ет598. После измерения флуоресценции в каждую лунку добавляют 25 мкл субстрата люциферазы (81еабу-О1о, Рготеда). Планшеты инкубируют в течение пятнадцати минут при комнатной температуре, после чего считывают люминесценцию на планшет-ридере Рйета81аг (ΒΜΟ ЬаЫесй).

Рифампицин (10 мкМ), хорошо известный агонист РХК, вводят в каждый планшет в качестве внутреннего стандарта и позитивного контроля. Затем выражают данные в виде контроля в процентах (% СТКЕ), где контрольный сигнал представляет собой сигнал от 10 мкМ рифампицина, а сигнал холостого опыта (холостой сигнал) представляет собой сигнал носителя (растворителя) ΌΜδΟ (ДМСО). %СТРЬ = ((Сигнал соединения - Холостой сигнал)/(Контрольный сигнал -Холостой сигнал))*100.

Соединения тестируют в десяти концентрациях (2.5 нМ - 50 мкМ, серийное разведение 1:3). Результаты анализа регистрируют как ЕС₅₀, концентрацию соединения, при которой наблюдается 50% максимального отклика, и как Утах, оЬ§, максимальный отклик (наивысший % СТКЕ), наблюдаемый для этого соединения.

ЕС₅₀ определяется как концентрация, соответствующая половине максимального отклика, определяется на кривой, построенной по 20 точкам с применением четырёхпараметрической логистической регрессионной модели. Помимо этого, соединения могут также характеризоваться с помощью ЕС₂₀ или ЕС50.

Результаты анализа на НерО2 цитотоксичность.

Соединения тестируют в десяти концентрациях (2.5 нМ - 50 мкМ, серийное разведение 1:3). Результаты анализа регистрируют как ГС50, определяемую как концентрация, соответствующая ингибированию 50%, эту величину находят на кривой, построенной по 20 точкам с применением четырёхпараметрической логистической регрессионной модели.

Ш νίΐτο анализы метаболизма.

Условия анализа А.

Тестируемое соединение получают в виде исходного 3.5 мМ раствора в 100% ДМСО (ΌΜδΟ). Соединение разводят, получая 50 мкМ раствор в ацетонитриле (АСЫ), содержащий 1.4% ДМСО, который затем используют в качестве 100х исходного раствора для инкубации с микросомами. Каждое соединение тестируют в двойном повторе отдельно для каждого из трёх видов в наборе для анализа Метаболическая Стабильность - человека, крысы и мыши или в качестве индивидуального вида в наборах Метаболическая Стабильность - собака или Метаболическая Стабильность - обезьяна. Растворы соединения, ΝΑΌΡΗ и микросомы смешивают с целью инкубации в три стадии:

152 мкл суспензии микросом печени, концентрация белка 1.1 мг/мл в 100 мМ ΝηΡ,, рН 7.4, 6.6 мМ ΜβΤ’Γ буфера, предварительно нагревают при 37°С.

1) 1.7 мкл раствора соединения с концентрацией 50 мкМ (98.6% АСЫ, 1.4% ΌΜδΟ) добавляют в ту же самую пробирку и преинкубируют при 37°С в течение 5 мин.

2) Реакцию инициируют, добавляя 17 мкл предварительно нагретого 10 мМ ΝΑΌΡΗ в 100 мМ ΝηΡ,, рН 7.4.

3) Компоненты реакции тщательно перемешивают и 75 мкл сразу же переносят в 150 мкл раствора для тушения/прекращения реакции (временная точка ноль, Т₀). Реакционные смеси инкубируют при 37°С в течение 10 мин, а затем другую аликвоту 75 мкл переносят в 150 мкл раствора для тушения. В качестве раствора для тушения для прекращения метаболических реакций применяют ацетонитрил, содержащий 100 мкМ ΌΜΝ (ЦУ(УФ)-стандарт для введения количественного контроля).

4) Погашенные смеси центрифугируют при 1500 об/мин (~500 X д) в центрифуге А11едга Х-12, ро- 11 021224 тор 8X4750 γοϊογ (Весктап СоиНег 1пс., Ри11ейоп,СА), в течение пятнадцати минут для осаждения денатурированных микросом. Затем экстракт супернатанта, содержащий смесь исходного соединения и его метаболитов, в объёме 90 мкл переносят в отдельный 96-луночный планшет для иУ(УФ)-ЬС/М8-М8 анализа с целью определить процентное содержание исходного соединения, остающегося в смеси.

Аяалнз метаболической стабильности - Компоненты реакции
Компоненты реакции	Конечная концентрация в анализе метаболической стабильности
Соединение (Субстрат)	0.5 мкМ
Буфер Ъ1аР^ рН 7.4	100мкМ
ОМ8О	0.014%
Ацетонитрил	0.986%
Микросомы (человека, крысы, мыши) (В№Сеп№$(}	белок 1 мг/мл ρΐΌΐβίπ
ΝΑΟΡΗ	1.0 мМ
МбС12	6.66 мМ
Время инкубации при 37° С	0 минут и 10 минут
Гасящий/Стоп раствор (САИ +100 мкМ ΟΜΝ)	150 мкл
Проба реакционной смеси	75 мкл
Седиментация денатурированных микросом	15 минут
υν- ЬС/М5 анализ супернатанта	0.17 мкМ

Условия анализа В

Тестируемое соединение получают в виде 20 мМ раствора в ДМСО (ΌΜ8Ο). Соединение разводят, получая 300 мкМ раствор в ацетонитриле (АСЫ), содержащий 1.5% ДМСО, который затем используют в качестве 100х исходного раствора для инкубации с микросомами. Каждое соединение тестируют в двойном повторе отдельно для каждого из трёх видов в наборе для анализа Метаболическая Стабильность человека, крысы и мыши или в качестве индивидуального вида в наборах Метаболическая Стабильность - собака или Метаболическая Стабильность - обезьяна. Растворы соединения, ΝΑΌΡΗ и микросом печени смешивают с целью инкубации в три стадии:

1. 450 мкл суспензии микросом печени, концентрация белка 1.1 мг/мл в 100 мМ Ν;·ιΡ,. ρΗ 7.4, 6.6 мМ МдС1₂ буфера, предварительно нагревают при 37°С.

2. 5 мкл раствора соединения с концентрацией 300 мкМ (98.5% АСЫ, 1.5% ΌΜ8Ο) добавляют в ту же самую пробирку.

3. Реакцию инициируют, добавляя 50 мкл предварительно нагретого 5 мМ раствора ΝΑΌΡΗ в 100 мМ ЫаР₁, ρΗ 7.4.

Компоненты реакции тщательно перемешивают и 150 мкл сразу же переносят в 150 мкл раствора для регистрации показания во временной точке ноль. Реакционные смеси инкубируют при 37°С в течение 10 мин, а затем другую аликвоту 150 мкл переносят в 150 мкл и отбирают для инкубации. Взятые аликвоты смешивают с 300 мкл АСЫ, содержащего 100 мкМ ΌΜΝ в качестве ИУ(УФ)-стандарта для детекции.

Компоненты реакции	Конечная концентрация в анализе Метаболической стабильности
Соединение (субстрат)	3 мкМ
Буфер ΝαΡϊ, рН 7,4	100 мМ
ОМ8О	0.015%
АСЫ	0.985%
Микросомы (человека, крысы, мыши) (ВО/ОеШеЛ)	белок 1 мг/мл
ΝΑϋΡΗ	0.5 мМ
меС12	6.66 мМ
Время инкубации при 37’ С	0 минут и 10 минут
ГасящиЙ/Стоп раствор (АСМЧ00 мкМ ϋΜΝ)	300 мкл
Проба реакционной смеси	150 мкл
Седиментация денатурированных микросом	15 минут
ЦУ- ЕС/М8 анализ супернатанта	1,0 мкМ

Погашенные смеси центрифугируют при 1500 об/мин (~500 X д) в центрифуге А11едга Х-12, ротор 8X4750 γοϊογ (Весктап СоиИег 1пс., Ри11ейоп,СА), в течение пятнадцати минут для осаждения денатурированных микросом. Затем экстракт супернатанта, содержащий смесь исходного соединения и его мета- 12 021224 болитов, в объёме 110 мкл переносят в отдельный 96-луночный планшет для υν(ΥΦ)-ΡΕ/Μ8-Μ8 анализа с целью определить процентное содержание исходного соединения, остающегося в смеси.

Как показано ниже, в табл. 2, соединение Ι можно также позитивно отличать (характеризовать) по двум критическим показателям, ΡXΚ трансактивации и стабильности микросом печени человека.

Продукт ΡXΚ трансактивации позволяет предсказывать возможные лекарственные взаимодействия. Если соединение активирует этот рецептор, другие лекарства могут метаболизироваться быстрее, чем обычно, что приводит к пониженным уровням и пониженной эффективности лекарств. Очевидно, что это нежелательное свойство соединения, предполагаемого для разработки.

Ιη νίνο скрининг показывает, что соединение Ι является несущественным активатором этого рецептора по сравнению со всеми, кроме одного, перечисленными соединениями.

Наконец, соединения тестируют в анализе стабильности микросом печени человека, который позволяет точно прогнозировать ίη νίνο клиренс соединения. С целью разработки соединения менее чем с 70% выпадают из дальнейшего рассмотрения.

Таким образом, что сочетание низкого риска ΡXΚ трансактивации со 100% остающегося соединения в анализе метаболизма микросом человеческой печени показывает, что соединение Ι имеет лучшие фармакологические характеристики по сравнению с другими известными и сходными по структуре ССК1 антагонистами.

Таблица 2. Индукция потенциала и метаболическая стабильность ΡXΚ/Суρ 3Α4-Ιη νίίτο

Пример №*	ССК1 Κΐ (нМ)	РХКЕСм (мкМ)	% остающийся при печёночном мккросомальном метаболизме (человек) (условия анализа)
Соединение I	0,7	>25	100% (В)
#1356	3.7	1.83	100% (А)/100% (В)
#1083	2.6	1.9 (ЕСИ)	13% (А)
#460	0.7	0.53	47% (А)/16% (В)
#466	2.6	1.12 (ЕС№)	67% (А)/33% (В)
#850	0.5	10.2 (ЕС«,)	99% (А)
#897	2.1	>50 (ЕСМ)	59% (А)

(*)- Соединения из примеров в патентной заявке США И82007/0208056

Пр. 1356	О
Пр. 460	У 1 он
Пр. 466	αΎ^ι |Ι 1 он О
Пр. 850	О
Пр. 897	О

Хемокиновые рецепторы млекопитающих предоставляют мишень для вмешательства в функцию или для стимуляции функции иммунных клеток млекопитающего, такого как человек. Соединения, которые ингибируют или стимулируют рецепторную функцию, особенно применимы для модуляции функ- 13 021224 ции иммунных клеток для терапевтических целей.

В соответствии с этим настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), которое, как полагают, применимо для предупреждения и/или лечения большого ряда воспалительных, инфекционных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний, включая астму и аллергические заболевания, инфицирование патогенными микробами (которое, по определению, включает вирусы), а также аутоиммунные патологии, такие как ревматоидный артрит и атеросклероз.

Например, соединение по настоящему изобретению, которое ингибирует одну или более функций хемокинового рецептора млекопитающего (например, человеческого хемокинового рецептора), можно вводить для ингибирования (т.е. уменьшения или предупреждения) воспалительного или инфекционного заболевания. В результате ингибируется один или более воспалительных процессов, таких как эмиграция лейкоцитов, адгезия, хемотаксис, экзоцитоз (например, ферментов, гистамина) или высвобождение медиаторов воспаления.

Аналогично, соединение по настоящему изобретению, которое ингибирует одну или более функций хемокинового рецептора млекопитающего (например, человеческого хемокина), при введении для стимуляции (индукции или усиления) иммунной или воспалительной реакции, такой как эмиграция лейкоцитов, адгезия, хемотаксис, экзоцитоз (например, ферментов, гистамина) или высвобождение медиаторов воспаления, приводит к благотворной стимуляции воспалительных процессов. Например, эозинофилы могут рекрутироваться для борьбы с паразитарными инфекциями. Помимо этого, лечение вышеуказанных воспалительных, аллергических и аутоиммунных заболеваний с помощью соединения по данному описанию, которое стимулирует одну или более функций хемокинового рецептора млекопитающего, можно также рассматривать, если рассматривают доставку соответствующего соединения для того, чтобы вызвать потерю экспрессии рецептора на клетках за счёт индукции интернализации хемокинового рецептора или доставки соединения таким способом, который приводит к неверному направлению миграции клетки.

Помимо приматов, таких как человек, различных других млекопитающих можно лечить методом по настоящему изобретению. Например, можно лечить млекопитающих, включая, но без ограничения, коров, овец, лошадей, собак, кошек, морских свинок, крыс или другие виды жвачных, овечьих, лошадиных, псовых, кошачьих, грызунов или мышиных. Однако, метод можно практически применять также и для других видов, таких как птицы. Субъектом, которого лечат вышеуказанными методами, является млекопитающее мужского или женского рода, у которого желательна модуляция активности хемокинового рецептора. Предполагается, что термин модуляция по данному описанию охватывает антагонизм, агонизм, частичный антагонизм и/или частичный агонизм.

Заболевания или состояния человека или представителя другого вида, которого можно лечить ингибиторами функции хемокинового рецептора, включают, но без ограничения: воспалительные или аллергические заболевания и состояния, включая респираторные аллергические заболевания, такие как астма, аллергический ринит, аллергические заболевания лёгких, аллергический пневмонит, эозинофильный целлюлит (например, синдром Уэллса), эозинофильные пневмонии (например, синдром Лёффлёра, хроническая эозинофильная пневмония), эозинофильный фасциит (например, болезнь Шульмана), аллергическая реакция замедленного типа, интерстициальные лёгочные болезни (ШИ) (например, идиопатический лёгочный фиброз или ШО, ассоциированные с ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, анкилозирующим спондилитом, системным склерозом, синдромом Шёгрена, полимиозитом или дерматомиозитом); системные анафилактические, или аллергические, реакции, лекарственную аллергию (например, на пенициллин, цефалоспорин), синдром эозинофилии-миалгии, вызванный потреблением содержащего примеси триптофана, аллергии, вызванные укусами насекомых; аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит, псориатический артрит, рассеянный склероз, системная красная волчанка, тяжёлая псевдопаралитическая миастения, юношеский диабет; гломерулонефрит, аутоиммунный тиреоидит, болезнь Бехчета; отторжение трансплантата (например, при трансплантации), включая отторжение аллотрансплантата или болезнь трансплантат-против-хозяина; воспалительные заболевания кишечника, такие как болезнь Крона и язвенный колит; спондилоартропатии; склеродермию; псориаз (включая псориаз, опосредуемый Т-клетками) и воспалительные дерматозы, такие как дерматит, экзема, атопический дерматит, аллергический контактный дерматит, крапивница; васкулит (например, некротизирующий, кожный и аллергический васкулит); эозинофильный миозит, эозинофильный фасциит; раковые заболевания с лейкоцитарной инфильтрацией кожи или органов. Можно лечить другие заболевания или состояния, при которых необходимо ингибировать нежелательные воспалительные реакции, включая, но без ограничения, реперфузионное повреждение, атеросклероз, некоторые злокачественные заболевания кроветворной системы, цитокин-индуцированную цитотоксичность (например, септический шок, эндотоксический шок), полимиозит, дерматомиозит. Инфекционные заболевания или состояния человека или других видов животных, которые можно лечить с применением ингибиторов функции хемокиновых рецепторов, включают, но без ограничения, ВИЧ.

Заболевания или состояния человека или других видов, которые можно лечить с помощью промоторов функции хемокиновых рецепторов, включают, но без ограничения: иммунодепрессию (подавление иммунитета), такую, которая наблюдается у индивидуумов с синдромами иммунодефицита, например, в

- 14 021224 случае СПИДа или других вирусных инфекциях, у индивидуумов, проходящих лучевую терапию, химиотерапию, терапию аутоиммунных заболеваний или лекарственную терапию (например, терапию кортикостероидами), которая вызывает иммунодепрессию; иммунодепрессию, вызванную врождённой недостаточностью рецепторной функции или другими причинами; инфекционные заболевания, такие как паразитарные заболевания, включая, но без ограничения, заражение гельминтами, такими как нематоды (круглые черви) (трихуриаз, энтеробиоз, аскаридоз, анкилостомоз, стронгилоидоз, трихиноз, филяриоз); трематодами (сосальщиками) (шихостомоз, клонорхоз), цестодами (ленточными червями) (эхинококкоз, тениаринхоз, цистицеркоз); синдром блуждающей личинки (личиночный гельминтоз) (например, Тохосага), эозинофильный гастроэнтерит (например, Лткакг 5р. (анизакис), РЬосаиета 5р. (фоканема)), кожная мигрирующая личинка (ползучая сыпь) (анкилостома бразильская, анкилостома канинум (собак)). В связи с этим соединения по настоящему изобретению применимы для предупреждения и лечения большого ряда воспалительных, инфекционных или иммунорегуляторных расстройств и заболеваний.

Помимо этого, лечение вышеуказанных воспалительных, аллергических и аутоиммунных заболеваний также можно рассматривать для промоторов функции хемокиновых рецепторов при рассмотрении доставки соответствующего соединения с целью вызвать потерю экспрессии рецептора на клетках за счёт индукции интернализации хемокинового рецептора или доставки соединения таким способом, который приводит к неверному направлению миграции клетки.

В другом аспекте настоящее изобретение можно применять для оценки возможных специфических агонистов или антагонистов рецептора, сопряжённого с О-белком. Настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для подготовки и проведения скрининга на соединения, которые модулируют активность хемокиновых рецепторов. Помимо этого, соединение по данному изобретению применимо для установления или определения сайта связывания других соединений с хемокиновыми рецепторами, например, с помощью конкурентного ингибирования или в качестве эталона в анализе для сравнения этого соединения с известной активностью с соединением с неизвестной активностью. При разработке новых анализов и протоколов соединение по настоящему изобретению можно было бы использовать для тестирования их эффективности. Конкретно, такое соединение можно было бы включать в продажный набор, например, применения в фармацевтическом исследовании, включающем вышеперечисленные заболевания. Соединение по настоящему изобретению применимо также для оценки возможных специфических модуляторов хемокиновых рецепторов. Помимо этого, соединение по данному изобретению можно применять для изучения специфичности рецепторов, сопряжённых с О-белками, которые, предположительно, не являются хемокиновыми рецепторами, либо в качестве примеров соединений, которые не связываются, либо в качестве структурных вариантов соединений, активных к этим рецепторам, которые могут способствовать определению специфических сайтов взаимодействия.

Соединение формулы (I) применяется для лечения или предупреждения расстройств, выбранных из ревматоидного артрита, остеоартрита, септического шока, артросклероза, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистых эффектов, гемодинамического шока, сепсис-синдрома, реперфузионного постишемического поражения, малярии, болезни Крона, воспалительных заболеваний кишечника, микобактериальных инфекций, менингита, псориаза, застойной сердечной недостаточности, фиброзных заболеваний, кахексии, отторжения трансплантата, аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний кожи, рассеянного склероза, радиационного поражения, гипероксидного поражения лёгких (альвеолярного эпителия), ВИЧ, ВИЧ деменции, инсулиннезависимого сахарного диабета, астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, идиопатического лёгочного фиброза, буллёзного пемфигоида, гельминтных паразитарных инфекций, аллергического колита, экземы, конъюнктивита, трансплантации, семейной эозинофилии, эозинофильного целлюлита, эозинофильной пневмонии, эозинофильного фасциита, эозинофильного гастроэнтерита, лекарственной эозинофилии, муковисцидоза (кистозного фиброза), синдрома Черга-Страусс, лимфомы, болезни Ходжкина, карциномы толстой кишки, синдрома Фелти, саркоидоза, увеита, болезни Альцгеймера, гломерулонефрита и системной красной волчанки.

В другом аспекте соединение формулы (I) применяется для лечения или предупреждения воспалительных расстройств, выбранных из ревматоидного артрита, остеоартрита, артросклероза, аневризмы, лихорадки, сердечно-сосудистых эффектов, болезни Крона, воспалительных заболеваний кишечника, застойной сердечной недостаточности, рассеянного склероза, аутоиммунных заболеваний, воспалительных кожных заболеваний.

В другом аспекте изобретения соединение применяют для лечения или предупреждения воспалительных расстройств, выбранных из ревматоидного артрита, остеоартрита, артросклероза, болезни Крона, воспалительных заболеваний кишечника и рассеянного склероза.

Комбинированная терапия для предупреждения и лечения воспалительных, инфекционных и иммунорегуляторных расстройств и заболеваний, включая астму и аллергические заболевания, а также аутоиммунные патологии, такие как ревматоидный артрит и артросклероз, и патологии, указанные выше, иллюстрируется комбинацией соединения формулы (I) по данному изобретению и других соединений, заведомо применяемых в таких случаях. Например, для лечения или предупреждения воспаления соединение по данному изобретению можно применять в сочетании с противовоспалительным или обезболи- 15 021224 вающим (аналгетик) агентом, таким как агонист опиатов, ингибитор липоксигеназы, ингибитор циклооксигеназы-2, ингибитор интерлейкинов, такой как ингибитор интерлейкина-1, ингибитор фактора некроза опухолей, анагонист ΝΜΌΑ, ингибитор оксида азота или ингибитор синтеза оксида азота, нестероидный противовоспалительный агент, ингибитор фосфодиэстеразы или противовоспалительный агент, подавляющий синтез провоспалительных цитокинов, например, в сочетании с таким соединением, как ацетаминофен, аспирин, кодеин, фентанил, ибупрофен, индометацин, кеторолак, морфин, напроксен, фенацетин, пироксикам, стероидный аналгетик, суфентанил, сунлиндак, интерферон альфа и т.п. Аналогично, соединение по настоящему изобретению можно вводить с агентом, ослабляющим боль; потенцирующим агентом, таким как кофеин, Н2-антагонист, симетикон, гидроксид алюминия или магния; противозастойным, противоотёчным агентом, таким как фенилэфрин, фенилпропаноламин, псевдофедрин, оксиметазолин, эпинефрин, нафазолин, ксилометазолин, пропилгекседрин или леводезоксиэфедрин; противокашлевым агентом, таким как кодеин, гидрокодон, карамифен, карбетапентан или декстрометаморфан; диуретиком; и седативным или неседативным антигистаминным агентом. Также соединение формулы (I) можно использовать в комбинации с другими лекарствами, которые применяются для лечения/предупреждения/подавления или ослабления заболеваний или состояний, для лечения/предупреждения которых применимо соединение по настоящему изобретению. Такие другие лекарства можно вводить таким способом и в таком количестве, которые обычно применяются в этом случае, одновременно или последовательно с соединением по настоящему изобретению. Если соединение формулы (I) применяют одновременно с одним или более других лекарств, помимо соединения формулы (I) может применяться фармацевтическая композиция, содержащая эти другие лекарства. Соответственно, фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают такие композиции, которые, помимо соединения формулы (I), содержат также один или более активных ингредиентов.

Примеры других активных ингредиентов, которые можно объединять с соединением по настоящему изобретению, либо вводить отдельно, либо в тех же самых фармацевтических композициях, включают, но без ограничения: (а) антагонисты интегрина, такие как антагонисты селектинов, Κ.ΆΜ и УЪЛ-4; (б) стероиды, такие как беклометазон, метилпреднизолон, бетаметазон, преднизон, дексаметазон и гидрокортизон; (в) иммуносупрессоры (иммунодепрессанты), такие как циклоспорин, такролимус, рапамицин и другие иммуносупрессоры типа РК-506; (г) антигистаминные агенты (антагонисты Н1- гистамина), такие как бромфенирамин, хлорфенирамин, дексхлорфенирамин, трипролидин, клемастин, дифенгидрамин, дифенилпиралин, трипеленнамин, гидроксизин, метдилазин, прометазин, тримепразин, азатадин, ципрогептадин, антазолин, фенирамин, пириламин, астемизол, терфенадин, лоратадин, цетиризин, фексофенадин, дескарбэтоксилоратадин и т.п.; (д) нестероидные антигистаминные агенты, такие как Ь2агонисты (тербуталин, метапротеренол, фенотерол, изоэтарин, альбутерол, битолтерол и пирбутерол), теофиллин, кромолин-натрий, атропин, ипратропия бромид, антагонисты лейкотриена (зафирлукаст, монтелукаст, пранлукаст, иралукаст, побилукаст, 8КБ-102, 203), ингибиторы биосинтеза лейкотриена (зилеутон, ΒΑΥ-1005); (е) нестероидные противовоспалительные агенты (НПВП, ΝδΑΓΟ), такие как производные пропионовой кислоты (альминопрофен, бенксапрофен, буклоксовая кислота, карпрофен, фенбуфен, фенопрофен, флурпрофен, флурбипрофен, ибупрофен, индопрофен, кетопрофен, миропрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, пранопрофен, супрофен, тиапрофеновая кислота и тиоксапрофен), производные уксусной кислоты (индометацин, ацеметацин, альклофенак, клиданак, диклофенак, фенклофенак, фенклозовая кислота, фентиазак, фурофенак, ибуфенак, изоксепак, окспинак, сулиндак, тиопинак, толметин, зидометацин и зомерипак), производные фенаминовой кислоты (флуфенаминовая кислота, меклофенаминовая кислота, мефенаминовая кислота, нифлуминовая кислота и толфенаминовая кислота), производные бифенилкарбоновой кислоты (дифлунизал и флуфенизал), оксикамы (изоксикам, пироксикам, судоксикам и теноксикам), салицилаты (ацетилсалициловая кислота, сульфасалазин) и пиразолоны (апазон, безпиперилон, фепразон, мофебутазон, оксифенбутазон, фенилбутазон); (ж) ингибиторы циклооксигеназы-2 (СОХ-2); (з) ингибиторы фосфодиэстеразы типа IV (ΡΌΕ-[ν); (и) другие антагонисты хемокиновых рецепторов; (к) агенты, понижающие содержание холестерина, такие как ингибиторы НМО-СОА редуктазы (ловастатин, симвастатин и правастатин, флувастатин, аторвастатин и другие статины), секвестранты желчных кислот (холестирамин и колестипол), никотиновая кислота, производные фенофиброевой кислоты (гемфиброзил, клофибрат, фенофибрат и бензофибрат) и пробукол; (л) антидиабетические агенты, такие как инсулин, сульфонилмочевины, бигуаниды (метформин), ингибиторы α-глюкозидазы (акарбоза) и глитазоны (троглитазон и пиоглитазон); (м) препараты интерферонов (интерферон альфа-2а, интерферон-2В, интерферон альфа-Ш, интерферон бета-1а, интерферон бета-2Ь, интерферон гамма 1Ь); (н) антивирусные соединения, такие как эфавиренз, невирапин, индинавир, ганцикловир, ламивудин, фамцикловир и зальцитабин; (о) другое соединение, такое как 5-аминосалициловая кислота и ее пролекарства, антиметаболиты, такие как азатиоприн и 6-меркаптопурин, и цитотоксические противораковые химиотерапевтические агенты. Весовое соотношение соединения формулы (I) ко второму активному ингредиенту может варьироваться и зависит от эффективных доз каждого ингредиента.

Обычно применяют эффективную дозу каждого ингредиента. Так например, если соединение формулы (I) комбинируют с НПВП (ΝδΑΓΟ), весовое отношение соединения по настоящему изобретению к

- 16 021224

НПВП обычно составляет примерно от 1000:1, примерно до 1:1000 или же примерно от 200:1, примерно до 1:200. Комбинация соединения формулы (I) и других активных ингредиентов обычно находится в вышеуказанном интервале, но в каждом случае берут эффективную дозу каждого активного ингредиента.

Соединение вводят млекопитающему в терапевтически эффективном количестве. Под терапевтически эффективным количеством понимают количество соединения формулы I, которое при введении его млекопитающему, индивидуально или в комбинации с терапевтически эффективным агентом эффективно предупреждает или уменьшает интенсивность тромбоэмболического болезненного состояния или прогрессирования заболевания.

Дозировка и рецептура

Соединение по настоящему изобретению можно вводить в виде таких пероральных лекарственных форм, как таблетки, капсулы (каждая из которых включает препараты с пролонгированным высвобождением или с отсроченным высвобождением), пилюли, порошки, гранулы, эликсиры, настойки, суспензии, сиропы и эмульсии. Его также можно применять в виде лекарственных форм для внутривенного (болюс или инфузия), интраперитонеального, подкожного или внутримышечного введения, все эти лекарственные формы хорошо известны рядовому специалисту в области фармации. Его можно вводить самостоятельно, но обычно его вводят с фармацевтическим носителем, выбранным с учётом пути введения и стандартной фармацевтической практики.

Лекарственная схема для применения соединения по настоящему изобретению, несомненно, меняется в зависимости от известных факторов, таких как фармакодинамические характеристики конкретного агента и его способ и путь введения; вид, возраст, пол, состояние здоровья, медицинское состояние и масса реципиента; характер и интенсивность симптомов; вид конкурентного (одновременного) лечения; частота лечения; путь введения, почечная и печёночная функция пациента и ожидаемый эффект. Врач или ветеринар могут определить и назначить эффективное количество лекарства, необходимое для предупреждения, противодействия или прекращения прогрессирования тромбоэмболического расстройства.

В качестве руководства суточная пероральная доза каждого активного ингредиента при применении для идентичных эффектов составляет примерный интервал от 0.001 до 1000 мг/кг массы тела, или, примерно, от 0.01 до 100 мг/кг массы тела в день, или же примерно 1.0-20 мг/кг/день. Интервал доз для внутривенного введения составляет примерно 1-10 мг/кг/минута при инфузии с постоянной скоростью. Соединение по данному изобретению можно вводить в виде однократной суточной дозы или общую суточную дозу можно вводить в виде небольших (дробных) доз два, три или четыре раза ежедневно.

Соединение по настоящему изобретению можно вводить в интраназальной форме в подходящих интраназальных растворителях, или трансдермальным методом, используя трансдермальные пэтчи (пластыри). При введении в виде трансдермальной системы доставки введение дозы, естественно, является скорее непрерывным, нежели прерывистым (дробным) в продолжение лекарственной схемы.

Соединение обычно вводят в смеси с подходящими фармацевтическими разбавителями, эксципиентами или носителями (все вместе в данном описании они называются фармацевтическими носителями), соответствующим образом выбранными с учётом предполагаемой формы введения, а именно формы пероральных таблеток, капсул, эликсиров, сиропов и т.п., и на основании обычной фармацевтической практики.

Например, для перорального применения в виде таблетки или капсулы активный компонент лекарства можно смешивать с пероральным нетоксическим фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как лактоза, крахмал, сахароза, метилцеллюлоза, стеарат магния, дикальцийфосфат, манит, сорбит и т.п.; для перорального введения в жидком виде компоненты перорального лекарства можно смешивать с любым пероральным нетоксическим фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т.п. Помимо этого, при желании или при необходимости, в смесь можно вводить подходящие связующие, смазки, разрыхлители и красители. Подходящие связующие включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, сахаристое вещество из кукурузы, природные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, камедь трагаканта, или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазки, используемые в этих лекарственных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Разрыхлители включают, но без ограничения, крахмал, метилцеллюлозу, агар-агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п.

Соединение по настоящему изобретению можно также вводить в виде липосомных систем доставки, таких как малые моноламеллярные везикулы, большие моноламеллярные везикулы и мультиламеллярные везикулы. Липосомы могут быть образованы из различных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин и фосфатидилхолины.

Соединение по настоящему изобретению можно также связывать с растворимыми полимерами в качестве носителей нацеленных лекарств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламид-фенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксид-полилизин, замещённый пальмитоильными остатками. Помимо этого, соединения по настоящему изобретению могут быть связаны с полимерами класса биоразрушаемых полимеров, применяемыми для достижения контролируемого высвобождения лекарства, например, с полимолочной кис- 17 021224 мыми для достижения контролируемого высвобождения лекарства, например, с полимолочной кислотой, полигликолевой кислотой, сополимерами полимолочной и полигликолевой кислот, полиэпсилонкапролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианоацилатами и сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Лекарственные формы (фармацевтические композиции), пригодные для введения, могут содержать примерно от 1 мг до примерно 100 мг активного ингредиента на единичную (разовую) лекарственную дозу. В этих фармацевтических композициях активный ингредиент обычно присутствует в количестве 0.5-95 вес.% от общего веса композиции.

Желатиновые капсулы могут содержать активный ингредиент и порошкообразные носители, такие как лактоза, крахмал, производные целлюлозы, стеарат магния, стеариновая кислота и т.п. Аналогичные разбавители можно применять для приготовления прессованных таблеток. Как таблетки, так и капсулы можно получать в виде продуктов с пролонгированным высвобождением, чтобы обеспечить непрерывное высвобождение лекарственного средства в течение нескольких часов. Прессованные таблетки могут быть покрыты сахаром или плёнкой, чтобы замаскировать неприятный вкус и защитить таблетку от окружающей среды, или энтеросолюбильной оболочкой для селективного расщепления в желудочнокишечном тракте.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения могут содержать краситель и корригент (запаха и вкуса), чтобы быть более привлекательными для пациента.

Обычно вода, подходящее масло, солевой (физиологический) раствор, водный раствор декстрозы (глюкозы) и растворы аналогичных сахаров и гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоли являются подходящими носителями для парентеральных растворов. Растворы для парентерального введения могут содержать водорастворимую соль активного ингредиента, соответствующие стабилизаторы, и, при необходимости, буферы. Антиоксиданты, такие как бисульфит натрия, сульфит натрия или аскорбиновая кислота, либо индивидуально, либо в смеси, являются подходящими стабилизаторами. Также применяются лимонная кислота и её соли и натрий ЭДТА. Помимо этого, растворы для парентерального введения могут содержать консерванты, такие как бензалкония хлорид, метил- или пропилпарабен и хлорбутанол.

Подходящие фармацевтические носители описаны в Репипфоп'з Рйагтасеийса1 8с1спсс5. Маек РиЪйкнщ Сотрапу, стандартном руководстве по фармации.

Типичные применяемые фармацевтические лекарственные формы для введения соединений по настоящему изобретению проиллюстрированы ниже.

Капсулы.

Большое число стандартных капсул (капсул со стандартной дозой) можно приготовить, помещая в каждую стандартную разъёмную твёрдую желатиновую капсулу 100 мг порошка активного ингредиента, 150 мг лактозы, 50 мг целлюлозы и 6 мг стеарата магния.

Мягкие желатиновые капсулы.

Можно приготовить смесь активного ингредиента в усвояемом масле, таком как соевое масло, хлопковое масло или оливковое масло, и ввести его с помощью нагнетательного насоса в желатин, получая мягкие желатиновые капсулы, содержащие 100 мг активного ингредиента. Капсулы следует промыть и высушить.

Таблетки.

Можно приготовить таблетки обычными способами так, чтобы стандартная лекарственная форма составляла 100 мг активного ингредиента, 0.2 мг коллоидного диоксида кремния, 5 мг стеарата магния, 275 мг микрокристаллической целлюлозы, 11 мг крахмала и 98.8 мг лактозы. Можно нанести подходящее покрытие, чтобы улучшить вкус или замедлить всасывание.

Лекарственный препарат для инъекций.

Композицию для парентерального введения, применимую для введения с помощью инъекции, можно приготовить, перемешивая 1.5 вес.% активного ингредиента в 10 об.% растворе полиэтиленгликоля в воде. Раствор следует сделать изотоническим с помощью хлористого натрия и стерилизовать.

Суспензия.

Водную суспензию для перорального применения можно приготовить таким образом, чтобы каждые 5 мл содержали 100 мг тонкоизмельчённого активного ингредиента, 200 мг натрий карбоксиметилцеллюлозы, 5 мг бензоата натрия, 1.0 г раствора сорбита, И.8.Р., и 0.025 мл ванилина.

Если соединение по изобретению смешивают с антикоагулянтами, ежедневная (суточная) доза может составлять, например, около 0.1-100 мг соединения формулы I и около 1-7.5 мг второго агента, антикоагулянта, на килограмм веса (массы) тела пациента. В таблетках соединение по данному изобретению обычно может присутствовать в примерном количестве 5-10 мг на стандартную (разовую) лекарственную форму, а второй агент, антикоагулянт, может присутствовать в примерном количестве 1-5 мг на стандартную лекарственную форму.

Если с соединением формулы I вводят два или более вышеуказанных вторых терапевтических агентов, как правило, количество каждого компонента в типичной суточной лекарственной форме может быть ниже по сравнению с обычной дозой агента при индивидуальном его введении из-за аддитивного

- 18 021224 или синергического эффекта терапевтических агентов при введении в комбинации. В частности, при введении в виде единой стандартной лекарственной формы существует возможность химического взаимодействия между активными ингредиентами в смеси. По этой причине, когда соединение формулы I и второй терапевтический агент смешиваются в виде единой стандартной лекарственной формы, их готовят таким образом, чтобы, хотя активные ингредиенты и объединены в виде единой стандартной лекарственной формы, но физический контакт между активными ингредиентами должен сводится к минимальному (т.е. уменьшен). Например, один активный ингредиент может покрываться энтеросолюбильной оболочкой. С помощью энтеросолюбильного покрытия одного из активных ингредиентов можно не только минимизировать контакт между объединёнными активными ингредиентами, но возможно также контролировать высвобождение одного из этих компонентов в желудочно- кишечном тракте таким образом, чтобы один из этих компонентов высвобождался скорее не в желудке, а в кишечнике. Один из активных ингредиентов может быть также покрыт материалом, который влияет на пролонгированное высвобождение в желудочно- кишечном тракте, а также служит для снижения физических контактов между смешиваемыми активными ингредиентами до минимума. Более того, соединение с пролонгированным высвобождением может быть покрыто дополнительной энтеросолюбильной оболочкой с тем, чтобы высвобождение этого компонента происходило только в кишечнике. Ещё один метод включает приготовление комбинированного продукта, в котором компонент покрывают полимером для пролонгированного высвобождения и/или высвобождения в кишечнике, а другой компонент также покрывают полимером, таким как гидроксипропилметилцеллюлозой (НРМР) с низкой вязкостью или другими подходящими материалами, известными в уровне техники, чтобы дополнительно разделить активные компоненты. Полимерное покрытие служит для создания дополнительного барьера для взаимодействия с другим компонентом.

Эти, а также другие пути минимизации контакта между компонентами комбинированных продуктов по настоящему изобретению, вводимыми либо в виде единой лекарственной формы, либо в отдельных формах одновременно одним и тем же способом. Один из активных ингредиентов может быть также покрыт материалом, который влияет на пролонгированное высвобождение в желудочно-кишечном тракте, а также служит для минимизации физического контакта между смешанными активными ингредиентами. Помимо этого, компонент с пролонгированным высвобождением дополнительно может быть покрыт энтеросолюбильной оболочкой с тем, чтобы высвобождение этого компонента происходило только в кишечнике. Ещё один подход включает приготовление комбинированного продукта, в котором один компонент покрыт полимером для пролонгированного высвобождения и/или высвобождения в кишечнике, а другой компонент также покрыт полимером, таким как гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС) с низкой вязкостью или другими подходящими материалами, известными в фармации, чтобы дополнительно разделить активные компоненты. Полимерное покрытие служит для создания дополнительного барьера между компонентами.

Эти, а также другие способы минимизации контакта между компонентами комбинированных продуктов по настоящему изобретению, вводимых либо в виде единой лекарственной формы, либо в виде раздельных форм, но одновременно одним и тем же способом, будут легко понятны специалисту в данной области техники с учётом данного описания.

Хотя изобретение описано подробно и со ссылками на его конкретные варианты, специалисту в данной области техники ясно, что в нём можно осуществлять различные изменения и модификации без отступления от его сущности и объёма.

Claims (13)

1. Соединение формулы (I) или его стереоизомер или фармацевтически приемлемая соль.

2. Фармацевтическая композиция для лечения и предупреждения воспалительных заболеваний, аллергических и аутоиммунных заболеваний, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Способ модуляции активности хемокина или хемокинового рецептора, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что активность хемокина и активность хемокинового рецептора представляют собой активность хемокина СС-1 и активность хемокинового рецептора ССК-1.

5. Способ лечения расстройства, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1, причём указанное расстройство выбирают из фиброзных заболеваний, интерстициальных лёгочных болезней, почечного фиброза, кистозного фиброза,

- 19 021224 идиопатического лёгочного фиброза и ревматоидного артрита.

6. Способ лечения воспалительных заболеваний, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

7. Способ лечения воспалительных заболеваний, которые, по меньшей мере частично, опосредуются ССК-1, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

8. Способ лечения воспалительных заболеваний, аллергических и аутоиммунных заболеваний у пациента, нуждающегося в терапии, заключающийся во введении указанному нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

9. Способ модуляции активности хемокина или хемокинового рецептора, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества композиции по п.2.

10. Способ модуляции активности ССК-1, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества композиции по п.2.

11. Способ лечения расстройства, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества композиции по п.2, отличающийся тем, что указанное расстройство выбирают из фиброзных заболеваний, интерстициальных лёгочных болезней, почечного фиброза, кистозного фиброза, идиопатического лёгочного фиброза и ревматоидного артрита.

12. Способ лечения воспалительных заболеваний, заключающийся во введении нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества композиции по п.2.

13. Способ приготовления лекарственного препарата для лечения фиброзных заболеваний, интерстициальных лёгочных болезней, почечного фиброза, кистозного фиброза, идиопатического лёгочного фиброза и ревматоидного артрита, заключающийся в приготовлении композиции по п.2 в применимой фармацевтической лекарственной форме.