EA018062B1 - Пестицидная композиция, содержащая синтетическое соединение, полезное в качестве агента образования клубней бобовых растений, и фунгицидное соединение - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к пестицидной композиции, содержащей, по меньшей мере, соединение (а) общей формулы (I) и фунгицидное соединение (b) в массовом соотношении в интервале от 1/1 до 1/10, а также к способу профилактической или лечебной борьбы с вредителями и болезнями культур и повышения их урожая посредством применения указанной композиции.

Description

Изобретение относится к новым пестицидным композициям, содержащим синтетическое соединение, полезное в качестве агента образования клубней бобовых растений и/или в качестве стимулятора роста растений, и фунгицидное соединение. Кроме того, изобретение относится к способу уничтожения или контроля вредителей и болезней посредством нанесения такой композиции на очаг заражения или место, которое может подвергнуться заражению.

В международной заявке на патент \УО 2005/063784 приведены описания способа получения синтетических липохитоолигосахаридов (Нросййо-ойдоссйапбек-ЬСО) и некоторых из таких соединений, названных синтетическими ЬСО факторами, которые полезны в качестве агента образования клубней бобовых растений и/или стимуляторов роста растений. Синтетические ЬСО факторы структурно отличаются от Ыоб факторов, выделенных из природных бактериальных организмов, и проявляют различные свойства. В частности, некоторые биологически активные синтетические соединения проявляют сильную абсорбцию в ультрафиолетовой области, что дает возможность легко их анализировать в процессе промышленного получения и обнаруживать и анализировать в продукте, предназначенном для продажи, а также обеспечивает их стабильность и сохранение в таких продуктах, предназначенных для тестирования. Кроме того, некоторые из таких синтезированных соединений проявляют более высокую стабильность, чем природные Ыоб факторы.

Кроме того, показана возможность объединения одного или нескольких таких синтетических соединений, полезных в качестве агента образования клубней бобовых растений и/или стимулятора роста растений, с известными фунгицидными или инсектицидными препаратами. Тем не менее, в указанной публикации не приведен ни конкретный потенциально фунгицидный компонент смеси, ни какое-либо массовое соотношение, при котором синтетический ЬСО фактор и фунгицидный компонент должны присутствовать в данной композиции.

В международной заявке на патент \УО 2005/062899 приведено описание смесей, содержащих природный Ыоб фактор и фунгицид. Природный Ыоб фактор, включенный в такую смесь, выделен очисткой из бактериальных источников или представляет собой синтетическую или биотехнологическую разновидность природных Ыоб-генных соединений. Однако при промышленном получении и кондиционировании природных Ыоб факторов приходится сталкиваться с проблемами двух типов:

(1) природные Ыоб факторы трудно анализировать простыми методами, такими как спектрометрические методы;

(2) они являются нестабильными в присутствии растений или в почвах, в частности, ввиду того, что содержат -СО-ΝΗ- связь, которая может разрушаться растением или микробиологическими ферментами, присутствующими в ризосфере.

Новые пестицидные композиции, приведенные в настоящем описании, продемонстрировали значительное улучшение действия в виде смеси по сравнению с индивидуальными обработками в отношении роста растения, мощности или урожая бобовых и небобовых растений или зерновых культур и/или фунгицидного действия. Получено также значительное улучшение действия с точки зрения эффективности и стабильности смесей, включающих природный №б фактор или синтетический или биотехнологический вариант такого природного №б фактора и фунгицид.

В сельском хозяйстве всегда проявлялся повышенный интерес к применению новых пестицидных смесей, демонстрирующих более широкий спектр активности.

Авторами настоящего изобретения были разработаны некоторые новые пестицидные композиции, которые обладают указанными выше характеристиками.

Соответственно настоящее изобретение относится к композиции, содержащей:

а) соединение формулы (I)

О-К8

где η равно 2 или 3;

А представляет собой -С(О)-;

В представляет собой фенилен;

С представляет собой -О-;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и О независимо друг от друга представляют собой заместитель ΝΗΚ²⁰;

КЗ-К⁷ представляют собой Н;

Я⁸ представляет собой заместитель, выбранный из Н, фукозила, метилфукозила, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃№1. 8О₃К, 8О^(С_1-8алкила)₄;

Я⁹ представляет собой Н;

Я²⁰ представляет собой С(О)С_1-6алкил;

- 1 018062 а также их возможные геометрические и/или оптические изомеры, энантиомеры и/или диастереоизомеры, соли;

Ь) фунгицидное соединение, выбранное из группы, включающей Ы-[2-(1,3-диметилбутил)фенил]-5фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, металаксил, карбендазим, пенцикурон, фенамидон, флуоксастробин, трифлоксистробин, пириметанил, ипродион, битертанол, флуквинконазол, ипконазол, прохлораз, протиоконазол, тебуконазол, триадименол, тритиконазол, карпропамид, толифлуанид, флуопиколид, изотианил, Ы-{2-[1,1'-би(циклопропил)-2-ил]фенил}-3-(дифторметил)-, 1-метил-1Н-пиразол-4карбоксамид, пропамокарб фосетилат, триазоксид, Ы-(3',4'-дихлор-5-фторбифенил-2-ил)-3(дифторметил)-1-метил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, Ы-{2-[3-хлор-5-(трифторметил)пиридин-2-ил]этил}2-(трифторметил)бензамид в массовом соотношении (а)/(Ь) от 1/1 до 1/10¹⁴.

Композиция согласно настоящему изобретению может обеспечивать синергический эффект. Такой синергический эффект дает возможность снижать количество химических веществ, распределяемых в окружающей среде, и снижать стоимость фунгицидной обработки.

В контексте настоящего изобретения термин синергический эффект имеет значение, определенное Колби в статье Са1си1а1юи о! И1е 8упсгд1511с и аШадошкйс гекроикек о! йетЫшбе сотЬтайопк ХУеебк, (1967), 15, р. 20-22.

В указанной статье приводится формула

где Е представляет собой ожидаемое ингибирование болезни в процентах, которое вызвано совместным применением двух фунгицидов в указанных дозах (например, равных х и у соответственно);

х представляет собой наблюдаемое ингибирование болезни в процентах, которое вызвано соединением (I) в определенной дозе (равной х);

у представляет собой наблюдаемое ингибирование болезни в процентах, которое вызвано соединением (II) в определенной дозе (равной у).

Когда при совместном применении наблюдаемое ингибирование, выраженное в процентах, составляет более Е, имеет место эффект синергизма.

Среди соединений могут быть отмечены предпочтительные соединения формулы (I), обладающие одновременно следующими характеристиками:

п равно 2 или 3;

А представляет собой -С(О)-;

В представляет собой фенилен;

С представляет собой -О-;

Ό представляет собой линейную основную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и С представляют собой ХНС(О)СН₃;

В^!-В⁷ представляют собой Н;

В⁸ представляет собой Н, 8О₃Н, 8О₃Ы, 8О₃Ыа, 8О₃К, 8О₃Ы(С1_-8алкил)₄, фукозил или метилфукозил.

Среди композиций согласно настоящему изобретению композиции, содержащие соединение (I), в котором А представляет собой карбонильную группу и которое может быть представлено формулой Да), являются особенно преимущественными:

где п равно 1, 2 или 3;

В представляет собой фенилен;

С представляет собой заместитель, выбранный из -О-;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и С независимо друг от друга представляют собой заместитель ΝΗΒ²⁰;

В^!-В⁷ представляют собой Н;

В⁸ представляет собой заместитель, выбранный из Н, фукозила, метилфукозила, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃№, 8О₃К, 8О^(С1_-8алкила)₄;

В⁹ представляет собой Н;

В²⁰ представляет собой С(О)С1_-6алкил, а также их возможные геометрические и/или оптические изомеры, энантиомеры и/или диастереоизомеры, соли;

при этом среди соединений, определенных выше, наиболее важными соединениями являются соли, более конкретно литиевые, натриевые, калиевые или тетраалкиламмониевые соли.

- 2 018062

Среди соединений формулы (1а) предпочтительными являются соединения, обладающие одной или несколькими из следующих характеристик, взятых по отдельности или в комбинации:

η равно 2 или 3;

Е и С представляют собой ИНС(О)СН₃;

КЗ-К⁷ представляют собой Н;

К⁸ представляет собой Н, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃Ыа, 8О₃К, 8О₃И(С1_-8алкил)₄, фукозил или метилфукозил.

Среди композиций согласно настоящему изобретению особенно преимущественными являются композиции, содержащие соединение (I), в котором С представляет собой атом кислорода и которое может быть представлено формулой (1с)

где η равно 2 или 3;

А представляет собой -С(О)-;

В представляет собой фенилен;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и С независимо друг от друга представляют собой заместитель ΝΗΚ²⁰;

КЗ-К⁷ представляют собой Н;

К⁸ представляет собой заместитель, выбранный из Н, фукозила, метилфукозила, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃№1. 8О₃К, 8О₃МС|_-8алкила)₄;

К⁹ представляет собой Н;

К²⁰ представляет собой С(О)С_1-6алкил;

а также их возможные геометрические и/или оптические изомеры, энантиомеры и/или диастереоизомеры, соли;

при этом среди соединений, определенных выше, наиболее важными соединениями являются соли, более конкретно литиевые, натриевые, калиевые или тетраалкиламмониевые соли.

Среди соединений формулы (1с) предпочтительными являются соединения, обладающие одной или несколькими из следующих характеристик, взятых по отдельности или в комбинации:

η равно 2 или 3;

А представляет собой -С(О)-;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

В представляет собой фенилен;

Е и С представляют собой ИНС(О)СН₃;

КЗ-К⁷ представляют собой Н;

К⁸ представляет собой Н, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃№1, 8О₃К, 8О^(С_1-8алкил)₄, фукозил или метилфукозил.

Среди композиций согласно настоящему изобретению особенно преимущественными являются композиции, содержащие соединение (I), в котором А представляет собой карбонильную группу и которое может быть представлено формулой (И)

где η равно 2 или 3;

В представляет собой фенилен;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и С независимо друг от друга представляют собой заместитель, выбранный ИНК²⁰, предпочтительно ИНС(О)СН₃;

КЗ-К⁷ представляют собой Н;

К⁸ представляет собой заместитель, выбранный из Н, фукозила, метилфукозила, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃№1, 8О₃К, 8О₃И(С1_-8алкила)₄;

К⁹ представляет собой Н;

К²⁰ представляет собой -С(О)ОС_!-6алкил;

а также его возможные геометрические и/или оптические изомеры, энантиомеры и/или диастереоизомеры, соли;

- 3 018062 при этом среди соединений, определенных выше, наиболее важными соединениями являются соли, более конкретно литиевые, натриевые, калиевые или тетраалкиламмониевые соли.

Среди композиций согласно настоящему изобретению особенно преимущественными являются композиции, содержащие соединение (I), в котором А представляет собой метиленовую группу и С представляет собой атом кислорода и которое может быть представлено формулой (1е)

где η равно 2 или 3;

В представляет собой фенилен;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и С представляют собой ЫНС(О)СН₃;

КЗ-К⁷ представляют собой Н;

В⁸ представляет собой заместитель, выбранный из Н, 8О₃Н, 8О₃Ы. 8О₃Ыа, 8О₃К, 8О₃Ы(С_1-8алкила)₄, фукозила или метилфукозила;

В⁹ представляет собой Н;

В²⁰ представляет собой С(О)С_1-6алкил, а также его возможные геометрические и/или оптические изомеры, энантиомеры и/или диастереоизоме ры, соли;

при этом среди соединений, определенных выше, наиболее важными соединениями являются соли, более конкретно, литиевые, натриевые, калиевые или тетраалкиламмониевые соли.

Среди предпочтительных композиций согласно настоящему изобретению также могут быть особо подчеркнуты композиции, содержащие соединение (I), в которых Е и С представляют собой ЫНС(О)СН₃, в частности соединения, где В⁸ представляет собой Н, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃Ыа, 8О₃К, и 8О₃Ы(С_1-8алкил)₄, или заместитель формулы

ΟΒ28 где В²⁶ представляет собой заместитель, выбранный из Н и СН₃, предпочтительно Н;

В²⁷ и В²⁸ независимо друг от друга представляют собой заместитель, выбранный из Н.

В качестве примеров композиций согласно настоящему изобретению, которые являются особенно преимущественными и предпочтительными, могут быть приведены композиции, содержащие соединение, выбранное из перечня соединений Ь1 представленных ниже формул:

- 4 018062

- 5 018062

где М, когда присутствует, представляет собой катион, выбранный из Н⁺, Ь1⁺, Να'. К⁺ и (С|_-Халкила).-Ц'.

Помимо композиций согласно настоящему изобретению, которые более подробно описаны выше, варианты комбинаций возможных заместителей, особенно для формул (I), (1а), (1с)-(1е), также составляют часть изобретения.

- 6 018062

Известно, что хитиновый олигомер, не содержащий липидной цепи, является неактивным, поэтому разложение Νοά факторов посредством разрушения амидной связи в ризосфере приводит к потере активности.

Для того чтобы снизить или даже предотвратить такое разложение, был получен ряд аналогичных соединений, некоторые из которых являются более стабильными, чем природные Νοά факторы. Примеры таких соединений (I) согласно изобретению описаны ниже.

Композиция согласно настоящему изобретению содержит фунгицидное соединение (Ь). Примеры подходящих фунгицидных компонентов смесей могут быть выбраны из следующих фунгицидных соединений, включающих №[2-(1,3-диметилбутил)фенил]-5-фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, металаксил, карбендазим, пенцикурон, фенамидон, флуоксастробин, трифлоксистробин, пириметанил, ипродион, битертанол, флуквинконазол, ипконазол, прохлораз, протиоконазол, тебуконазол, триадименол, тритиконазол, карпропамид, толифлуанид, флуопиколид, изотианил, №{2-[1,1'-би(циклопропил)-2ил]фенил}-3-(дифторметил)-, 1-метил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, пропамокарб фосетилат, триазоксид, №(3',4'-дихлор-5-фторбифенил-2-ил)-3-(дифторметил)-1-метил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, Ν-{2-[3хлор-5 -(трифторметил)пиридин-2 -ил] этил} -2-(трифторметил)бензамид.

Более предпочтительно фунгицидное соединение (Ь) выбирают из следующего перечня Ь2, включающего: протиконазол, металаксил, тебуконазол, трифлоксистробин и №[2-(1,3-диметилбутил)фенил]5 -фтор-1,3 -диметил-1Н-пиразол-4-карбоксамид.

Композиция согласно настоящему изобретению включает соединение общей формулы (I) (а) и фунгицидное соединение (Ь) в массовом соотношении (а)/(Ь от 1/1 до 1/10¹⁴. Предпочтительно массовое соотношение (а)/(Ь) составляет от 1/10 до 1/10¹³. Наиболее предпочтительно массовое соотношение (а)/(Ь) составляет от 1/10² до 1/10¹². Для некоторых областей применения, например, когда композиция применяют путем обработки семян, соотношение (а)/(Ь) преимущественно может составлять от 1/10² до 1/10⁸, предпочтительно от 1/10³ до 1/10⁶, наиболее предпочтительно от 1/10³ до 1/10⁵. Специалист в данной области сможет определить подходящие соотношения, соответствующие способам применения и соедине ниям.

Неограничивающие примеры подходящих смесей согласно настоящему изобретению могут включать смеси соединения, выбранного из перечня Ь1, с фунгицидным соединением, выбранным из перечня Ь2.

Композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере один другой фунгицидный активный ингредиент (с). Примеры подходящих компонентов для фунгицидной смеси могут быть выбраны из фунгицидных соединений (с) из группы, включающей Ν-[2-(1,3диметилбутил)фенил]-5-фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-, металаксил, карбендазим, пенцикурон, фенамидон, флуоксастробин, трифлоксистробин, пириметанил, ипродион, битертанол, флуквинконазол, ипконазол, метконазол, прохлораз, протиоконазол, тебуконазол, триадименол, тритиконазол, карпропамид, толилфлуанид, флуопиколид, изотианил, №{2-[1,1'-би(циклопропил)-2-ил]фенил}-3-(дифторметил)-, 1метил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, пропамокарб-фосетилат, триазоксид, №(3',4'-дихлор-5-фторбифенил2-ил)-3-(дифторметил)-1-метил-1Н-пиразо-4-карбоксамид и №{2-[3-хлор-5-(трифторметил)пиридин-2ил]этил}-2-(трифторметил)бензамид.

Когда в композиции присутствует третий активный ингредиент (с), который определен выше, данное соединение может присутствовать в количестве, обеспечивающем массовое соотношение (а), (Ь), (с) от 1/1/1 до 1/10 /10 . Предпочтительно массовое соотношение (а)/(Ь)/(с) составляет от 1/10 /10 до 1/10¹²/10¹² В некоторых применениях, например, когда композицию применяют путем обработки семян, соотношение (а)/(Ь)/(с) может преимущественно составлять от 1/10²/10² до 1/10⁸/10⁸, предпочтительно от 1/10³/10³ до 1/10⁶/10⁶, наиболее предпочтительнее от 1/10³/10³ до 1/10⁵/10⁵. Специалист в данной области сможет определить подходящие соотношения, соответствующие способам применения и соединениям.

Неограничивающие примеры подходящих смесей согласно настоящему изобретению могут включать соединение, выбранное из перечня Ь1, с первым фунгицидным соединением, выбранным из перечня Ь2, и вторым фунгицидом, отличным от первого фунгицида, выбранным из перечня Ь2.

Композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать другой дополнительный компонент, например подложку, носитель или наполнитель, приемлемые с точки зрения сельскохозяйственного применения.

В настоящем описании термин подложка означает природный или синтетический, органический или неорганический материал, с которым объединяется активный материал для более легкого нанесения, в частности, на части растения. Поэтому такая подложка обычно является инертной и должна быть приемлемой для сельскохозяйственного применения. Подложка может быть твердой или жидкой. Примеры подходящих подложек включают глины, природные или синтетические силикаты, диоксид кремния, смолы, воски, твердые удобрения, воду, спирты, в частности бутанол, органические растворители, минеральные и растительные масла и их производные. Также могут использоваться смеси таких подложек.

Композиция также может содержать другие дополнительные компоненты. В частности, композиция может дополнительно содержать поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активное вещество может представлять собой эмульгатор, диспергирующее вещество или смачивающий агент ионогенного

- 7 018062 или неионогенного типа или смесь таких поверхностно-активных веществ. Могут быть приведены, например, соли полиакриловой кислоты, соли лигносульфоновой кислоты, соли фенолсульфоновой или нафталинсульфоновой кислот, продукты реакции поликонденсации этиленоксида с жирными спиртами, жирными кислотами или жирными аминами, замещенные фенолы (в частности, алкилфенолы или арилфенолы), соли сложных эфиров сульфоянтарной кислоты, производные таурина (в частности, алкилтаураты), сложные эфиры фосфорной кислоты и полиоксиэтилированных спиртов или фенолов, сложные эфиры жирных кислот и многоатомных спиртов и производные указанных выше соединений, содержащие сульфатную, фульфонатную и фосфатную функциональные группы. Обычно присутствие по меньшей мере одного поверхностно-активного вещества имеет большое значение, когда активное вещество и/или инертная подложка являются растворимыми в воде и когда средой для применения является вода. Предпочтительно содержание поверхностно-активного вещества может составлять от 5 до 40% из расчета на массу композиции.

Также могут быть включены дополнительные компоненты, например, защитные коллоиды, адгезивы, загустители, тиксотропные добавки, добавки, повышающие проницаемость, стабилизаторы, связующие соединения. В целом, активные вещества могут объединяться с любой твердой или жидкой добавкой, которая соответствует обычным методам получения препаратов.

Как правило, композиция согласно изобретению может содержать от 0,05 до 99% (мас.) активного ингредиента, предпочтительно от 10 до 70% (мас.).

Композиции согласно настоящему изобретению могут использоваться в различных формах, таких как препарат с дозатором для получения аэрозоля, суспензия капсул, концентрат для холодного туманообразования, распыляемый порошок, концентрат эмульсии, эмульсия типа масло-в-воде, эмульсия типа вода-в-масле, инкапсулированная гранула, мелкозернистая гранула, текучий концентрат для обработки семян, газ (под давлением), газогенерирующий препарат, гранула, концентрат для горячего туманообразования, макрогранула, микрогранула, порошок, диспергируемый в масле, текучий концентрат, смешиваемый с маслом, жидкость, смешиваемая с маслом, паста, растительный стержень, порошок для сухой обработки семян, зерно, покрытое пестицидом, растворимый концентрат, растворимый порошок, раствор для обработки семян, концентрат суспензии (текучий концентрат), жидкость для ультрамалообъемного (УМО) опрыскивания, суспензия для ультрамалообъемного (УМО) опрыскивания, вододиспергируемые гранулы или таблетки, вододиспергируемый порошок для обработки взвесью, растворимые в воде гранулы или таблетки, растворимый в воде порошок для обработки семян и смачивающийся порошок.

Такие композиции включают не только композиции, которые готовы для нанесения на растение или семена, подлежащие обработке, или внесения в борозду почвы с помощью подходящего устройства, такого как устройство для опрыскивания или распыления, но также концентрированные коммерческие композиции, которые необходимо разбавлять перед нанесением на культуру.

Пестицидные композиции согласно настоящему изобретению могут применяться для лечебного или профилактического контроля фитопатогенных грибов культур, а также для повышения урожая, увеличения роста или мощности растения.

Таким образом, в соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения предоставлен способ лечебного или профилактического контроля фитопатогенных грибов культур и повышения урожая, роста и мощности растения, где указанный способ отличается тем, что композицию, которая определена выше, применяют путем обработки семян, листьев, путем нанесения на стебель или на семена, растение и/или плоды растения орошением/погружением (хемигацией) или внесением в почву, в частности в борозду и/или на инертную подложку (например, неорганические субстраты (например, песок, минеральный войлок, стекловату, вспененные минеральные вещества (например, перлит, вермикулит, цеолит, керамзит)), пемзу, пирокластические материалы/туф, синтетические органические субстраты (например, полиуретан), органические субстраты (например, торф, компосты, опавшую листву (например, кокосовые волокна, древесное волокно/древесная щепа, древесная кора)) и/или жидкий субстрат (например, плавучие гидропонные системы, метод питательной пленки, аэропоники), в котором растение выращивается или должно выращиваться.

Композиция, когда используется против фитопатогенных грибов, содержит эффективное и нефитотоксичное количество фунгицидного соединения. Выражение эффективное и нефитотоксичное количество означает количество композиции согласно изобретению, которое достаточно для контроля и уничтожения вредителей и болезней, присутствующих или способных появиться на культурах, и которое не вызывает какого-либо симптома фитотоксичности на указанных культурах. Такое количество может изменяться в широких пределах в зависимости от видов вредителей и болезней, подлежащих уничтожению или контролю, типа культуры, климатических условий и соединений, включенных в композицию согласно изобретению.

Такое количество может определяться с помощью методических полевых испытаний, которые может осуществить специалист данной области.

Способ обработки согласно настоящему изобретению может быть использован для обработки материала размножения, такого как клубни или корневища, а также семян, саженцев или пикированных сеянцев, растений или пикированной рассады. Такой способ обработки также может применяться для обра

- 8 018062 ботки корней. Способ обработки согласно настоящему изобретению также может применяться для обработки надземных частей растения, таких как стволы, стебли или цветоножки, листья, цветы и плоды целевого растения.

Растения, которые могут защищаться способом согласно изобретению, могут представлять собой бобовые или небобовые растения.

Среди растений, которые могут защищаться способом согласно настоящему изобретению, могут быть указаны хлопчатник; лен; виноградная лоза; плодовые или овощные культуры, такие как Козасеае §р. (например, односемянный плод, такой как яблоки и груши, а также косточковый плод, такой как абрикосы, миндаль и персики), ШЬезюШае ер., 1ид1ап6асеае ер., Ве1и1асеае ер., ЛпасатШасеае ер., Радасеае ер., Могасеае ер., О1еасеае ер., Лсйшбасеае ер., Ьаитасеае ер., Мизасеае ер. (например, банановые деревья и плантации), ВиЫасеае ер., Тйеасеае ер., 81етсийсеае ер., РШасеае ер. (например, лимоны, апельсины и грейпфрут); 8о1аиасеае ер. (например, томаты), ЬШасеае ер., Лз1етасеае ер. (например, салаты), ИшЬеШЕетае ер., СтисШегае ер., СйепороШасеае ер., СисигЬйасеае ер., РарШопасеае ер. (например, горох), Козасеае ер. (например, земляника); основные зерновые культуры, такие как Сгатшае ер. (например, кукуруза, газонные травы или зерновые, такие как пшеница, рис, ячмень и тритикале), ЛЧегасеае ер. (например, подсолнечник), Стисйетае ер. (например, рапс), РаЬасае ер. (например, арахис), РарШоиасеае ер. (например, соя), 8о1аиасеае ер. (например, картофель), СйеиороШасеае ер. (например, свекла); садовые культуры и лесные насаждения; а также генетически модифицированные гомологи указанных культур.

Среди бобовых культур могут быть приведены соя, горох, конские бобы, арахис, бобы, люпин, люцерна или клевер.

Среди болезней растений или культур, которые могут контролироваться способом согласно настоящему изобретению, могут быть приведены следующие.

Различные виды настоящей мучнистой росы, такие как мучнистая роса, вызываемая грибами рода блумерия (ВШтепа), например возбудителем Вйнпепа дтат1И18;

мучнистая роса, вызываемая грибами рода подосфера (Робозрйаета), например возбудителем Робозрйаета 1еисо1т1сйа;

мучнистая роса, вызываемая грибами рода сферотека (8рйаетоШеса), например возбудителем 8рйаетоШеса Гийдшеа;

мучнистая роса или оидиум, вызываемая грибами рода унцикула (ИпсшШа), например возбудителем ИпстШа песаЮг.

Различные виды ржавчин, такие как ржавчины яблони, груши вызванные грибами рода гимноспорангиум (Сутиозротаидшт), например возбудителем Сутпозрогапщит заЬшае;

ржавчины, вызываемые ржавчинными грибами рода гемилия (НетПе1а), например возбудителем Нетйе1а уазйИпх;

ржавчины сои, вызванные грибами рода факопсора (Рйакорзога), например возбудителем Рйакорзота рас11уг1н/1 или Рйакорзота те1Ьот1ае;

ржавчины злаков, вызванные грибами рода пуциния (Рисаша), например возбудителем Рисшша тесоибйа;

ржавчины, вызванные грибами рода уромицес (Итотусез), например возбудителем Итотусез аррепШси1а1из.

Болезни, вызванные грибами класса оомицетов (Оотусе1е). такие как болезни, вызванные грибами рода бремия (Втеш1а), например возбудителем ложной мучнистой росы Втет1а 1асШсае;

пероноспорозы, вызванные грибами рода пероноспора (Регопозрога), например возбудителем Регопозрога р131 или Р.Ьтаззюае;

фитофторозы, вызванные грибами рода фитофтора (Рйу1орйШота), например возбудителем Рйу1орйШота шГезйшз;

ложные мучнисто-росяные болезни, вызванные грибами рода плазмопара (Р1азторага), например возбудителем Р1азторага уШсо1а;

пероноспорозы, вызванные грибами рода псевдопероноспора (Рзеиборетопозрота), например возбудителем Рзеиборетопозрота 1ιιιιηι.ι1ί или Рзеиборетопозрота сиЬеи81з;

питиозные болезни, вызванные грибами рода питиум (РуШшт), например возбудителем РуШшт иШтит.

Пятнистости листьев, окаймленные пятнистости листьев и болезни увядания листьев, такие как альтернариозы, вызванные грибами рода альтернария (ЛИетпапа), например возбудителем ЛЙегпапа зо1ап1;

церкоспорозы, вызванные грибами родом церкоспора (Сегсозрога), например возбудителем Сегсозрога Ьейсо1а;

кладоспориозы, вызванные грибами рода кладоспориум (С1аШозрогит), например возбудителем С1аШозротшт сисише^^ηиш;

- 9 018062 болезни, вызванные грибами рода колиоболюс (СосЫю Ьо1ик), например возбудителем Сосй11оЬо1ик кабгик;

болезни, вызванные грибами рода коллетотрихиум (Со11с1о1пс1шт). например возбудителем Со11сЮ1пс11ит ПпбетШНапшт;

болезни, вызванные грибами рода циклониум (Сус1осоп1ит), например возбудителем Сус1осошит о1еадтит;

диапортозы, вызванные грибами рода диапорте (Э|арог1Не). например возбудителем Э|арог1Не с11г1; болезни, вызванные грибами рода эльсиное (Е1кшое), например возбудителем Е1ктое Гатеейн;

болезни, вызванные грибами рода глоеоспориум (61оеокрогшт), например возбудителем 61оеокрогшт 1аебсо1ог;

болезни, вызванные грибами рода гломерелла (С1отеге11а), например возбудителем С1отеге11а стди1а!а;

болезни, вызванные грибами рода гиньярдия (6шдпагб1а), например возбудителем

6шдпагб1а Ыб^еШ;

лептосфериозы, вызванные грибами рода лептосферия (ЬерФкрНаеДа), например возбудителем БерЮкрНаепа таси1апк или Б-ерЮкрНаепа побогит;

болезни, вызванные грибами рода магнапорте (МадпаройНе), например возбудителем Мадпароййе дпкеа;

болезни, вызванные грибами рода микосферелла (Мусокрйаеге11а), например возбудителем Мусокрйаегейа дгат1шсо1а, МусокрНаеге11а агасЫб1со1а или МусокрНаегейа Ггрепык;

пятнистости феосфереллезные, вызванные грибами рода феосферия (РйаеокрйаеДа), например возбудителем РНаеокрНаепа побогит;

пятнистости гельминтоспориозные, вызванные грибами рода пиренофора (Ругепорйога), например возбудителем Ругепорйога 1егек;

рамуляриозы, вызванные грибами рода рамулярия (Кати1аДа), например возбудителем Кати1апа со11о-судш;

ринхоспориозы, вызванные грибами рода ринхоспориум (Кйупсйокрогшт), например возбудителем КНупсйокрогшт кесаБк;

септориозы, вызванные грибами рода септория (§ер1ог1а), например возбудителем 8ер1опа арб или 8ер1оДа КсорегакБ тифулезы, вызванные грибами рода тифула (ТурНи1а), например возбудителем ТурНи1а шсагпа1а;

паршовые болезни, вызванные грибами вентурия (УепШДа), например Уепйша таециаПк.

Болезни корней и стеблей, такие как болезни, вызванные грибами рода кортициум (Согйсшт), например возбудителем Согйсшт дгаттеагит;

фузариозы, вызванные грибами рода фузариум (Еикагшт), например возбудителем Еикагшт охукрогит;

офиоболёзы, вызванные грибами рода геуманномицес (Саеитаппотусек), например возбудителем Саеитаппотусек дгатйнк;

ризоктониозы, вызванные грибами рода ризоктония (КЫ/ос1оша), например возбудителем ШнхосЮша ко1аш;

болезни, вызванные грибами рода тапезия (Тареыа), например возбудителем Тареыа асиГогпнк;

корневые гнили, вызванные грибами рода тиелавиопсис (ТЫе1ау1орк1к), например возбудителем Т1пе1а\зорк1к Ьак1со1а.

Болезни колоса и метелки, такие как альтерназиозы, вызванные грибами рода альтернария (АЙегпаДа), например возбудителями АИегпапа крр.;

плесени аспергиллёзные, вызванные грибами рода аспергиллиус (АкрегдШик), например возбудителем АкрегдШик Дауик;

кладоспорилёзы, вызванные грибами рода кладоспориум (С1абокрогшт), например возбудителями С1абокрогшт крр.;

спорыньёвые болезни, вызванные грибами рода клавицепс (С1ау1серк), например возбудителем С1ау1серк ршригеа;

фузариозы, вызванные грибами рода фузариум (Еикагшт), например возбудителем Еикапиш си1тогит;

гиббереллёзы, вызванные грибами рода гибберелла (С1ЬЬеге11а), например возбудителем С1ЬЬеге11а хеае;

болезни, вызванные грибами рода монографелла (Моподгарйе11а), например возбудителем МоподгарйеНа пгуаНк.

Г оловни и твердые головни, такие как пыльные головни, вызванные грибами рода сфацелотека (8рйасе1оШеса), например возбудителем 8рНасе1о1Неса геШапа;

- 10 018062 твердые головни, вызванные грибами рода тиллетиа (ТШейа), например возбудителем ТШеба сапек; пыльные головни стеблей, вызванные грибами рода уроцистис (ЦгосукЕк), например возбудителем ИгосукДк оссийа;

пыльные головни стеблей, вызванные грибами рода устилаго (ИкШадо), например возбудителем ИкШадо пиба.

Плодовые гнили и плесени, такие как аспергиллезные плесени, вызванные грибами рода аспергиллус (АкрегдШик), например возбудителем АкрегдШик Дауик;

гнили, вызванные грибами рода ботритис (Во1гу118). например возбудителем Во1губк стегеа;

плесени, вызванные грибами рода пенициллиум (РешсШшт), например возбудителем РешсШшт ехрапкит;

склеротиниозы, вызванные грибами рода склеротиния (8с1егобша), например возбудителем 8с1его!1ша кс1егобогит;

вертициллезы, вызванные грибами рода вертицилиум (УеШсШит), например возбудителем УегйсШит а1Ьоа!гит.

Болезни, характеризующиеся гнилью, плесенью, увяданием, разложением и выпреванием растений, которые передаются через семена и почвы, такие как фузариозные гнили, вызванные грибами рода фузариум, например возбудителем Рикапит си1тогит;

фитофторозные гнили, вызванные грибами рода фитофтора (РЬуФрйШога), например возбудителем РНуЮрЫНога сасЮгиш;

полегания, вызванные грибами рода питиум (РуШшт), например возбудителем РуШшт иШтит;

ризоктониозы, вызванные грибами рода ризоктония (РЫхосЮша), например возбудителем Р1пхос1оша ко1ап1;

склероциальные гнили, вызванные грибами рода склеротиум (8с1его!шт), например возбудителем 8с1егоШ.пп го1Гкп;

болезни, вызванные грибами рода микродихум (МюгобосЫит), например возбудителем МюгобосЫит п1уа1е.

Раковые болезни растений, кустистости и отмирания верхних побегов растений, такие как болезни, вызванные грибами рода нектриа (ЫесДта), например возбудителем Иес1па даШдепа.

Болезни растений, характеризующиеся завядание, гниением или прекращением роста, такие как монилиозы, вызванные грибами рода монилиниа (МопШша), например возбудителем МопШша 1аха.

Скручивания или курчавости листьев, такие как болезни, вызванные грибами рода тафрина (Тарйппа), например возбудителем Тарйппа беГогтапк.

Некрозы древесных растений, такие как эска-болезни, вызываемые, например, возбудителем Р1аетоп1е11а с1атубокрога.

Болезни цветов и семян, такие как болезни, вызванные грибами рода ботритис (Вобубк), например возбудителем ВоНубк стегеа.

Болезни клубней, такие как резоктониозы, вызванные грибами рода ризоктония (РЫхосЮша), например возбудителем РЫхосЮша ко1апк

Фунгицидная композиция согласно настоящему изобретению также может применяться против болезней, вызываемых грибами, которые могут произрастать на лесоматериале или внутри него. Термин лесоматериал означает все типы древесных пород и все типы обработки такой древесины, предназначенной для конструирования, например, тяжелую древесину, древесину высокой плотности, ламинированную древесину и фанеру. Способ обработки древесины согласно изобретению состоит, главным образом, в контактировании с одним или несколькими соединениями согласно настоящему изобретению или композиции согласно изобретению; причем он включает, например, непосредственное нанесение, опрыскивание, погружение, инъекцию или любые другие подходящие способы.

Композиция согласно настоящему изобретению также может применяться для обработки генетически модифицированных организмов соединениями или агрохимическими композициями согласно изобретению. Генетически модифицированные растения представляют собой растения, в геном которых был стабильно введен гетерологический ген, кодирующий заданный белок. Выражение гетерологический ген, кодирующий заданный белок, по существу, означает гены, которые придают трансформированному растению новые агрономические свойства, или гены, улучшающие агрономическое качество трансформированного растения.

Доза активного вещества, обычно используемая для обработки согласно настоящему изобретению, как правило и преимущественно, при обработке листьев составляет от 10 до 800 г/га, предпочтительно от 50 до 300 г/га. Если возможно применение орошения/капельного введения/введения в борозду, доза может быть ниже, особенно на искусственных субстратах, таких как минеральный войлок или перлит. При обработке семян доза применения активного вещества, обычно и преимущественно, составляет от 0,5 до 200 г на 100 кг семян, предпочтительно от 1 до 150 г на 100 г семян. Следует понимать очевидно, что дозы, указанные выше, приведены в качестве иллюстративных примеров изобретения. Специалисту в

- 11 018062 данной области будет понятно, как привести величину дозы в соответствие с природой культуры, подлежащей обработке.

ΙΙ-1. Структура соединений (I) согласно изобретению.

Синтезированы соединения, содержащие метазамещенную бензамидную группу. Предпочтительно сохранять одинаковое общее количество атомов в цепи (16), а также ненасыщенность цис-типа в положении 9. На практике для получения исходных веществ липидная цепь может присоединяться к ароматическому кольцу через атом кислорода

Получены также аналог 4, содержащий метазамещенную бензиламинную функциональную группу, и Ν-ацетилированный аналог 5, который дает возможность производить возврат общего изменения природного соединения к исходному состоянию. Указанные аналоги были получены в сульфатированных сериях

Два других сульфатированных аналога: один, содержащий полностью насыщенную цепь, и другой, содержащий ненасыщенную цепь алкинового типа, дают возможность изучить влияние ненасыщенности Ζ типа в положении 9, присутствующей в природном соединении

Наконец, два сульфатированных аналога, в одном из которых замещение на ароматическом кольце находится в орто-положении, в другом - в пара-положении, дают возможность изучить влияние ненасыщенности транс-типа, находящейся в природном соединении в положении 2

И, наконец, был получен аналог фукозильного пентамера, содержащий метазамещение в цепи

- 12 018062

Ссылки в биологических испытаниях сделаны на следующие соединения:

III. 1 Примеры получения различных основных олигосахаридных структур макромолекулы.

Основные олигосахаридные структуры, соответствующие формуле (I), могут быть получены биотехнологическими способами, такими как, например, применение рекомбинантных бактериальных клеток, таких как, например, рекомбинантные клетки ЕксБепсЫа со11, содержащие гетерологический ген микоризы. Например, введение поб.ВС генов из ΑζοιΊιίζοόίιιιη саиНпобапк в ЕксНепсЫа со11 дает возможность получить тетра-Л-ацетилхитопентаозу (8ата1п Е., е! а1. СагЬоБубг. Век., 1997, 302, 35-42). Применение побВС из В^оЬшт теШоЕ дает возможность получить три-Л-ацетилхитотетраозу. Кроме того, применение дополнительных генов, таких как, например, побН (микоризная сульфотрансфераза) или побЬ (микоризная О-ацетилтрансфераза) дает возможность вводить модификации на конкретные гидроксильные группы (8атат Е, е! а1., 1. Вю1ес1то1.. 1999, 72, 33-47). Другие комбинации микоризных или немикоризных генов дают возможность получить различные хитоолигосахаридные цепи, которые могут использоваться в качестве исходных веществ для ацилирования с целью получения молекул формулы (I) с различными модификациями на гидроксильных или аминогруппах.

Основные олигосахаридные структуры макромолекул также могут быть получены стандартным химическим синтезом с использованием методов и стратегий, которые являются классическими и хорошо описаны в химии углеводородов. Описание новых подходящих методик можно найти во многих руководствах и ссылках и, например, в публикации СагЬоЕубга!ек ш СЕетщЕу апб Вю1оду, Еббогк.: В. Етк!, С.\У. Най, Р. 81пау, ^беу-УСН, ХУетНеип; 2000. Точный подбор подходящих защитных групп, которые могут вводиться в точно выбранные положения на гидроксильных или аминогруппах и последовательно или одновременно удаляться с целью высвобождения любой данной группы для селективной модификации, дает возможность вводить специфические модификации в основную олигосахаридную цепь, включая, например, ацилирование, алкилирование или гликозилирование специфических гидроксильных групп или ацилирование и алкилирование специфических аминогрупп.

Защитные группы, которые могут использоваться для защиты аминов и которые могут удаляться последовательно или одновременно, включают, например, фталимидную, тетрахлорфталимидную, азидо, трет-бутилоксикарбонильную, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонильную и трихлорацетильную группы. Защитные группы, которые могут использоваться для защиты спиртов и которые могут удаляться последовательно или одновременно, включают, например, ацетильную, бензильную, п-метоксибензильную, триметилсилильную, триэтилсилильную, трет-бутилдиметилсилильную и трет-бутилдифенилсилильную группы, а также циклические ацетали, такие как, например, метилиден-, этилиден-, изопропилиден-, бензилиден- или п-метоксибензилиденацетали. Классические способы и условия использования защитных групп можно найти, например, в публикации РгсИесбпд Сгоирк, Р.1. Коаепккц 2^пб ЕбШоп, Сеогд ТЫете УеВ1ад, 8!ийдай, 2000 или РгсИесбме Сгоирк т Огдашс 8упШек1к, Т.^. Сгеепе, Р.С.М. ^и!к, 3^гб ЕбШоп, ^беу, Ле\у Уогк, 1999.

Основные олигосахаридные структуры могут быть получены контролируемой сборкой упорядоченной структуры из моносахаридных структурообразующих блоков, содержащих конкретно выбранные защитные группы в нужных положениях. Такая сборка упорядоченной структуры может быть осуществлена в соответствии со способами, которые являются классическими и стандартно применяются в области химического синтеза олигосахаридов. Последовательное удаление защитных групп с последующей модификацией высвобожденных гидроксильных или аминогрупп дает возможность получения молекулы, соответствующей формуле (I). Примеры введения других сахаров, представленных фукозильным фрагментом, можно без труда найти в предшествующем уровне, включая, например, публикации Α.Σ. 21шп е! а1., Викк. С1ет. Ви11., 1998, 47, 496-501, 1.8. ИеЬепЕат е! а1., 1. Огд. С1ет., 1996, 61, 64786479. Классические способы сборки упорядоченной структуры из моносахаридов включают, например, активацию аномерных трихлорацетимидатной, О-пентенильной, алкилтио-, арилтио-, сульфоксидо-, галогено- или фосфатогрупп. Большое количество примеров синтеза олигосахаридов можно обнаружить во множестве литературных ссылок, в ряде монографий, указанных выше, или, например, в публикации С1усокаепсе, СНепийгу апб СЕетюа1 Вю1оду, Еббогк: В. Бгакег-Ве1б, К. Та!ки1а, 1. ТЫет, 8рппдегУегкад, ВеВ1т Не1бе1Ьегд, 2001.

Известно, что соединения формулы (I) могут быть химически синтезированы в соответствии с конкретной методикой, описанной ниже (на данной схеме Р^ХН на аминогруппах может также представлять собой защитную группу, такую как, например, фталимидо- или тетрахлорфталимидозащитная группа, или Ν₂, если в положении 2 карбогидрата находится азидогруппа). Р'-Р²⁰ представляют собой либо временно введенные защитные группы, либо перманентно введенные модификации, которые желательны в конечной основной цепи, такие как, например, ацильные, алкильные и гликозильные группы. Х^!-Х⁴

- 13 018062 представляют собой аномерные, способные активироваться удаляемые группы, такие как, например, трихлорацетимидатная, О-пентенильная, алкилтио-, арилтио-, сульфоксидо-, галогено- или фосфатогруппы. Два моносахарида с правильно подобранной схемой размещения защитных групп могут объединяться вместе в соответствии с одной из стандартных методик гликозилирования. Правильно выбранная защитная группа (Р⁶) может быть селективно удалена из нужного положения полученного дисахарида в условиях, которые не будут влиять на другие защитные группы. Присоединение другого моносахарида в только что освобожденное положение будет приводить к получению трисахарида. После удаления правильно выбранной защитной группы (Р¹⁰) из полученного трисахарида в условиях, которые не будут влиять на другие защитные группы, может быть проведено присоединение другого моносахарида в только что освобожденное положение с получением тетрасахарида. После удаления правильно выбранной защитной группы (Р¹⁴) из полученного тетрасахарида в условиях, которые не будут влиять на другие защитные группы, может быть осуществлено присоединение другого моносахарида в только что освобожденное положение с получением пентасахарида. Удаление любой правильно выбранной защитной группы из гидроксильной или аминогруппы полученного пентасахарида в условиях, которые не будут влиять на другие защитные группы, дает возможность осуществить специфическую химическую модификацию, такую как, например, ацилирование, алкилирование или гликозилирование, в данном положении. Такой процесс можно повторять много раз, когда необходимо ввести все желаемые модификации в основную цепь. Последнее удаление оставшихся защитных групп дает возможность получения желаемой основной цепи макромолекулы

Сочетание

2. Снятие защиты

Сочетание

2. Снятие защиты

1. Специфическое снятие защиты на данной ОН или ЦН₂ 2. Химическая модификация в атом положении 3. Повторение 1 и 2 в другом положении 4, ....

, 5. конечное снятие защиты

ОР¹ ____________________вСочетание

2. Снятие защиты

Характерные примеры такой стратегии могут быть найдены в предшествующем уровне, например в публикации К.С. №со1аои е! а1., 1. Ат. Сйет. 8ос., 1992, 114, 8701.

Известно также, что соединения формулы (I) могут быть химически синтезированы в соответствии с другой конкретной методикой, описанной ниже (на данной схеме Р^ХН на аминогруппах также может представлять собой защитную группу, такую как, например, фталимидо-, тетрахлорфталимидозащитную группу или Ν₂, если в положении 2 карбогидрата находится азидогруппа). Р'-Р¹⁶ представляют собой либо временно введенные защитные группы, либо постоянно введенные модификации, которые желательны в конечной основной цепи, такие как, например, введенные ацильные, алкильные и гликозильные группы. Х^!-Х⁴ представляют собой аномерные, способные активироваться удаляемые группы, такие как, например, трихлорацетимидатная, О-пентенильная, алкилтио-, арилтио-, сульфоксидо-, галогено- или фосфатогруппы. Υ^!-Υ⁴ представляют собой либо защитные группы, либо другие стабильные группы, которые могут трансформироваться в способные активироваться удаляемые группы, такие как, например, трихлорацетимидатная, О-пентенильная, алкилтио-, арилтио-, сульфоксидо-, галогено- или фосфатогруппы. Два моносахарида, содержащие правильно подобранную схему защиты, могут связываться в соответствии со стандартной методикой гликозилирования. Активация правильно выбранной защитной группы (Υ¹) дает возможность введения аномерной активируемой группы X², которая даст возможность связывания полученного дисахарида с другим моносахаридом. Активация правильно подобранной группы (Υ²) даст возможность введения аномерной активируемой группы X³, которая позволит связать полученный трисахарид с другим моносахаридом. Активация правильно выбранной группы (Υ⁴) даст возможность введения аномерной активируемой группы X³, которая позволит связать полученный тетрасахарид с другим моносахаридом с получением пентасахарида. Удаление любой правильно выбранной защитной группы из гидроксильной или аминогруппы полученного пентасахарида в услови- 14 018062 ях, которые не влияют на другие защитные группы, даст возможность ввести в данное положение специфические химические модификации, такие как, например, ацилирование, алкилирование или гликозилирование. Этот процесс можно повторять множество раз, когда это необходимо, для введения всех желаемых модификаций в основную структуру макромолекулы. Последнее удаление оставшихся защитных групп даст возможность получить желаемую основную структуру

Сочетание

Сочетание

Активация

Специфическое снятие защиты на данной ОН или МН_г

2. Химическая модификация в этом положении

3. Повторение 1 и 2 в другом положении

4.

5, Конечное снятие защиты

Характерные примеры такой стратегии могут быть найдены в предшествующем уровне, в том числе, например, в публикации Ό. ТаШег е! а1., 1. СНет. 8ос, СНет. Соттип., 1994, 1827; 1.8. ПеЬеийат е! а1., 1. Огд. Сйет., 1997, 62, 4591-4600.

Помимо двух основных примеров, приведенных выше, которые заключаются в добавлении моносахарида на каждом цикле стадий, типичные примеры других стратегий также могут быть обнаружены в предшествующем уровне, такие как, например, добавление полученного подходящим способом дисахарида вместо моносахарида. Такой способ включает получение, описанное, например, в публикациях 8. 1ке8Ййа е! а1., Те!гайебгоп Ье!!., 1994, 3123; Ь.Х. ^апд е! а1., 1. СНет. 8ос, Регкш Ттаиз. 1, 1994, 621.

ΙΙΙ-2. Синтез различных ароматических цепей.

Связывание бензамидных ЬСО с аминотетрамером проводят с использованием бензоилхлорида (ацилирование), и бензильных ЬСО с использованием бензальдегида (восстановительное алкилирование).

ΙΙΙ-2.1. Синтез ароматических цепей, метазамещенных ундец-42-енилокси цепью.

В соответствии со схемой реакции, представленной ниже, получают сложный метиловый эфир 15, который можно подвергнуть восстановлению до альдегида или омылению до кислоты (ацилхлоридный предшественник).

Для этого 1-йодундец-42-ен 13 используют для алкилирования метил-3-гидроксибензоата. Сложный эфир 15 выделяют с выходом 76%

- 15 018062

Преобразование сложного эфира в альдегид 17 проводят в две стадии:

Кроме того, ацилхлорид 19 получают омылением сложного эфира 15 с последующим взаимодействием с оксалилхлоридом

ΙΙΙ-2.2. Синтез ароматических цепей, метазамещенных ундеканоилокси- и ундец-4-инилокси цепями.

Аналогичная методика с использованием 1-бромундекана или 1-йодундец-4-ина в безводном ДМФА с последующим омылением и образованием хлорида приводит к получению хлорангидридов 23 и 27

ΙΙΙ-2.3. Синтез ароматических цепей, ортозамещенных или паразамещенных ундец-4Ζ-енилокси цепью.

- 16 018062

Хлорангидриды кислот 31 и 35 получают аналогично из соединений 29 и 33, которые получены, как реакцией Виллиамса 1-йодундец-4Ζ-ена 13 с метил-2выходом 66% и с метил-4-гидроксибензоатом с выхоописано выше, связыванием в соответствии с гидроксибензоатом 28 (или метилсалицилатом) дом 79%

Реакции омыления и преобразования в хлорангидрид являются количественными в обоих случаях.

ΙΙΙ-3. Ν-ацилирование сульфатированного тетрамера СО-ГУ (ΝΗ₂, 8) с использованием различных бензоилхлоридов но

он

СО-ΐνίΝΗΐ, 8)

ΙΙΙ-3.1. Связывание с 3-(ундец-4Ζ-енилокси)бензоилхлоридом 19

Связывание может быть осуществлено путем растворения исходного вещества в смеси ДМФА-вода в присутствии гидрокарбоната натрия. В таких условиях ацилированию подвергается только свободный амин. При использовании 6 экв. хлорангидрида и после взаимодействия в течение 18 ч достигается конверсия примерно 60%, но реакция является высокоселективной. В результате выделяется 33% целевого продукта 3. Чистота продукта контролируется с помощью ВЭЖХ.

Ультрафиолетовый (УФ) спектр поглощения продукта 3 существенно отличается от справочного спектра соединения 12, главным образом, вследствие присутствия в соединении 3 абсорбционного пика при 289 нм. Такой пик благодаря бензамидной группе не появляется у соединения 12. Это идеально иллюстрирует УФ-свойства некоторых из соединений согласно настоящему изобретению, позволяющие их легко анализировать в отличие от Νοά факторов.

В отличие от соединения 12 соединение 3 также имеет характеристическую флуоресценцию при 345 нм, когда оно облучено при 289 нм.

ΙΙΙ-3.2. Связывание с 3-(ундеканоилокси)бензоилхлоридом 23 и 3-(ундец-4-инилокси) бензоилхлоридом 27.

Связывание проводят в соответствии с методикой, описанной для предыдущего производного, т.е. растворением в смеси ДМФА-вода с использованием нескольких эквивалентов хлорангидрида.

- 17 018062

В таких условиях насыщенный аналог 6 получают с выходом 32% (и 47% конверсией) и аналог 7, содержащий тройную связь, с выходом 31% (и 70% конверсией). Чистота также контролируется с помощью ВЭЖХ.

ΙΙΙ-3.3. Связывание с 2-(ундец-42-енилокси)бензоилхлоридом, 31 и 4-(ундец-42енилокси)бензоилхлоридом 35.

Два указанных аналога получают в соответствии с аналогичной методикой с выходом 48% для ортозамещенного производного 8 и с выходом 40% для паразамещенного производного 9. Для двух указанных реакций используют 4 экв. хлорангидрида. Чистоту также контролируют с помощью ВЭЖХ

несульфатированного тетрамера ΟΘ-ΐν(ΝΗ₂) с 3-(ундец-42ΙΙΙ-4. Ν-Ацилирование енилокси)бензоилхлоридом 19

Реакцию, как описано выше, проводят в смеси ДМФА-вода, в которой растворимы исходное вещество и хлорангидрид. Для облегчения конечной очистки реакцию проводят в присутствии основной смолы Эо\усх® (НСО₃ ^-).

По завершении взаимодействия реакционную смесь разбавляют смесью ацетонитрил/вода и предполагаемый продукт очищают фильтрованием через смолу, пропуская через кислотную смолу Эо\усх® (Η⁺), концентрированием и промывкой твердого остатка этилацетатом и затем водой. Таким образом, целевой продукт 2 выделяют с выходом 22%.

- 18 018062

ΙΙΙ-5. Ν-ацилирование фукозилированного пентамера СО-У(ИН₂, Еис) с помощью 3-(ундец-42енилокси)бензоилхлорида 19

Реакцию, как описано выше, проводят в смеси ДМФА-вода, в которой растворимы исходное вещество и хлорангидрид. Для облегчения конечной очистки реакцию проводят в присутствии основной смолы Эо\усх®® (НСО₃ ^-).

По завершении взаимодействия реакционную смесь разбавляют смесью ацетонитрил/вода и предполагаемый продукт очищают фильтрованием через смолу, пропуская через кислотную смолу Эо\усх®® (Н⁺), с последующим упариванием смеси и промывкой твердого остатка этилацетатом и затем водой. Таким образом целевой продукт 10 выделяют с выходом 28%.

ΙΙΙ-6. Восстановительное алкилирование сульфатированного тетрамера с помощью 3-(ундец-42енилокси)бензальдегида.

ΙΙΙ-6.1. Алкилирование тетрамера СО-[У(ИН₂, 8)

Реакцию восстановительного алкилирования проводят в безводном ДМФА в присутствии бромида лития. При использовании 12 экв. альдегида и 15 экв. цианоборогидрида натрия с помощью хроматографии на силикагеле через 24 ч целевой связанный продукт 4 получают с выходом 71%.

ΙΙΙ-6.2. Ν-ацетилирование связанного продукта, полученного в результате восстановительного алкилирования

Реакцию проводят в смеси этилацетат-метанол-вода с добавлением уксусного ангидрида в присутствии гидрокарбоната натрия. По истечении 12 ч исходное вещество 4 удаляют, пропуская смесь через Н' смолу. После очистки на силикагеле выделяют ожидаемый продукт 5 с выходом 77%. Чистоту контролируют с помощью ВЭЖХ.

Ιν. Примеры соединений.

В ароматических производных кольцо нумеруется в соответствии с официальной номенклатурой.

Для описания ЯМР спектра для СО и ЬСО сахара нумерацию начинают от восстанавливающегося конца

IV III II I <^ОН ЯНАс Г^0Н ЯНАс

ЯНК² А_ои ЯНАс ^ОК¹

Традиционную нумерацию адоптируют на каждом сахаре.

- 19 018062

2-Ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(№3-(ундец-42 енилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-О-глюкопиранозил}2-дезокси-Э-глюкопираноза (2)

7,2 мг СО-Ι ν(ΝΗ₂) растворяют в 200 мкл воды и 500 мкл ДМФА и затем нагревают до 400°С. Затем добавляют 36 мг смолы Оо\\ех® (1x2-100) (НСО₃ ^-) с последующим добавлением 160 мкл раствора соединения 19 в перегнанном ТГФ (26 мкмоль). Затем тремя порциями в течение 48 ч добавляют 108 мг смолы НСО₃ ^- и 480 мкл раствора соединения 19 в перегнанном ТГФ (78 мкмоль). Реакционную смесь разбавляют 3 мл смеси ацетонитрил/вода (1/1), реакционную смесь собирают, оставляя смолу, и затем фильтруют через вату для удаления оставшихся в реакционной смеси шариков смолы. Фильтраты пропускают через смолу Оо\\ех® 50x8-100 Н⁺, фильтрат упаривают, полученный твердый остаток промывают этилацетатом и затем водой. Получают 2 мг продукта в виде белого порошка (выход 22 %).

® ЯМР (400 МГц, 20/1 ДМСО-б6/Ц₂0) δ (м.д.): 7,40-7,31 (м,

ЗН, АгН-2, АгН-6 и АгН-5), 7,04 (м, 1Н, АгН-4), 5,41-5,35 (м,

2Н, СН=СН), 4,87 (д, 0,7Н, Л1,2=2,3 Гц, Η-Ια¹) , 4,52 (д, 1Н,

7=8,3 Гц, Ηι-1β^ιν), 4,42 (д, 0,ЗН, 7=8,0 Гц, Η^β¹) , 4,33 (2д,

2Н, 7=8,ЗНг, Η-Ιβ¹¹'¹¹¹) , 3,98 (т, 2Н, 7=6,0 Гц, АгОСН₂-СН₂) ,

3,78-3,05 (м, 24Н, другие атомы Н сахаров), 2,16 (дт, 2Н, 7=5,8 и 7=6,7 Гц, СН₂-СН=СН), 1,97 (дт, 2Н, Л=6,0 и 7=6,2 Гц, СН=СНСН₂), 1,81/1,81/1,79 (Зс, 9Н, ЗСОСН₃) , 1,80-1, 72 (м, 2Н, АгОСН₂СН₂-СН₂) , 1,28-1,13 (и, 8Н, 4СН₂) , 0,81 (т, ЗН, СН₃, 7=6,5 Гц).

Масс-спектр: положительная ионизация в электроспрее (Ε8Ι) т/х=1183,5 |М+№|'.

Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(№3(ундец-42-енилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (3)

мг ίΌ-ΐνίΝΗ^,δ) (17 мкмоль) растворяют в 100 мкл воды и 250 мкл ДМФА. Затем добавляют 3 мг гидрокарбоната натрия (34 мкмоль) и 20 мкл раствора соединения 19 в ТГФ с концентрацией 0,25 г/мл (16,4 мкмоль). Реакционную смесь нагревают до 60°С и к смеси добавляют 100 мкл раствора соединения 48 и 10 мг гидрокарбоната натрия шестью порциями в течение 18 ч. После упаривания смеси полученный остаток очищают на колонке с силикагелем в смеси дихлорметан (ДХМ)/метанол (5/1), значительно разбавляя его для удаления липидной цепи (элюирование: смесь этилацетат/метанол/вода=7/2/1). Получают 6,5 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 33%).

*Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-СОзОЭ (1/2)) δ (м.д,): 7,48 и 7,41 (Μ, 2Н, АгН-2 и АгН-6), 7,36 (дд, 1Н, АгН-5, 7₅,₆=7,7 Гц и

Д₅,4=8,1 Гц), 7,07 (ддд, 1Н, АгН-4, ₂« 7₄,₆=1,4 Гц), 5,41(м,

2Н, СН=СН) , 5,03 (д, 0,8Н, Η-Ια¹, 2=3,2 Гц), 4,68-4,59-4,50 (Зд, ЗН, Η-1β^ΙΙ1ΙΙΙ'^ιν, л_1л2=8,4 Гц, 8,5 Гц и 8,7 Гц), 4,56(д,

0,2Н, Н-1 β¹, 71,2=7,7 Гц), 4,25-3, 30 (м, 26Н, СН₂-ОАг, другие атомы Н сахаров), 2,25 (тд, 2Н, СН₂-СН=СН-СН₂, 7=6,7 Гц и 7=6,2

Гц), 2,10-1,90 (м, 11Н, СН₂-СН=СН-СН₂ и 3 СН₃СО) , 1,83 (тт,2Н,

АгО-СН₂-СН₂-СН₂, 7=6,7 Гц), 1,35-1,20 (м, 8Н, 4СН₂) , 0,88(м,

ЗН, СН₃) .

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т/х=1139,4 |Μ-Να|.

УФ: 289 нм флуоресценция: /.„: 289 нм; /._ет: 345 нм.

- 20 018062

Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(№3(ундец-42-енилокси)бензил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (4)

мг №-Γν(ΝΗ₂8) (12 мкмоль) растворяют в 0,5 мл ДМФА и добавляют 12 мг бромида лития. В полученную смесь добавляют 2 мг цианоборогидрида натрия (32 мкмоль) и 100 мкл раствора соединения 17 в ТГФ с концентрацией 73 мг/мл (26 мкмоль). Реакционную смесь нагревают до 40°С и выдерживают при этой температуре в течение 4 ч. Каждые 2 ч добавляют 2 экв. альдегида и 2,5 экв. цианоборогидрида натрия, т.е. всего 12 экв. альдегида и 15 экв. цианоборогидрида натрия. Хотя реакция не завершается, реакцию останавливают разложением избытка цианоборогидрида натрия 0,5н. хлористо-водородной кислотой. Когда выделение газа прекращается, реакционную среду разбавляют водой и лиофилизуют. Остаток переносят в воду, рН снова доводят до щелочного, добавляя 5 мг гидрокарбоната натрия (59 мкмоль), и полученную смесь дважды выпаривают с метанолом. Твердый белый остаток очищают на колонке с силикагелем в смеси ДХМ/метанол (5/1), значительно разбавляя его для удаления липидной цепи (элюирование: смесь этилацетат/метанол/вода 5/2/1, затем 4/1/1). Получают 10 мг продукта в виде белых игольчатых кристаллов (выход 71%).

=4 ЯМР (400 МГц, ДМСО-СЦ₃ОО (2/1)) δ (м.д.): 7,31 (дд, 1Н,

АгН-5, О₄,₅=8,2 Гц и О₅,₆=7,8 Гц), 7,02 (м, 2Н, АгН~2 и АгН-6),

6,90 (дд, 1Н, АгН-4, Л₄,6=2,3 Гц), 5,51 (м, 2Н, СН=СН) , 5,08 (д,

0,8Н, Н-1 а¹ , 01,2=3,1 Гц), 4,67 (м, 2,2Н, Η-Ιβ¹'¹¹'^1Ы) , 4,47 (д,

1Н, Н-1 β^ιν, σι,2=8,0 Гц), 4,06 (т, 2Н, СН₂-ОАг, 0=6,3 Гц), 3,94 (С, 2Н, ΝΗ-СНг-Аг) , 4,25-3, 45 (м, 23Н, другие атомы Н сахаров),

2,45 (дд, ΙΗ, Η₂ ^Ιν, 01,2«0₂,з=8,8 Гц), 2,31-2,12 (2м, 4Н, СН₂СН=СН-СН₂), 2,07-2,04-2,01 (Зс, 9Н, 3 СН₃СО), 1,89 (тт, 2Н, АсОСН₂-СН₂-СН₂-СН=СН, σ=6,9 Гц) , 1,45-1,25 (м, 8Н, 4 СН₂), 0,97 (т,

ЗН, СНз, σ=6,8 Гц).

¹³С ЯМР (50 МГц, ДМСО-СОзОЦ (2/1)) δ (м.д.): 172 (3 СН₃СО) ,

160 (АгС-3), 132-131-130 (АгС-1, АгС-5, СН=СН), 122 (АгС-6),

115 (АгС-2, АгС-4), 105 (С-1 β^ΙΙ'^ΙΙΙ'^ιν) , 98 (С-1 (З¹) , 92 (С-1 а¹),

82-53 (21 С сахаров и Аг-СНз-ΝΗ) , 68 (СН₂-0Аг) , 33-23 (10 СН₂ и

СН₃СО) , 14 (СН₃) ·

Масс-спектр: отрицательная Е8Е 111//=1125,4 [М-№].

Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(№3(ундец-42-енилокси)бензил)ацетамидо-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (5) у-^ОН ΝΗΛί <^0Н ИНАс

мг гидрокарбоната натрия и 15 мкл уксусного ангидрида добавляют в раствор 13 мг соединения 4 (11 мкмоль) в 0,3 мл смеси этилацетат/метанол/вода (1/1/1). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Смесь упаривают, полученное масло переносят в смесь этилацетат/метанол/вода (1/1/1) и добавляют смолу Довекса (50x8-100 Н+). Смесь фильтруют и к полученному фильтрату добавляют смолу АтЬегШе !В120№1+. Смесь фильтруют и концентрируют, продукт очищают хроматографией в смеси этилацетат/метанол/вода (4/1/1). Получают 10 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 77%).

- 21 018062 ^ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-СОзОО (2/1)} δ (м.д,}: 7,25-7,18 (2 τ, 1Н, АгН-5, σ₅,₄=7,8 Гц и 6₅,б=7,9 Гц), 7,10-6,85 (м, 2Н, АгН-2 иАгН-6), 6,82-6,75 (2 д, 1Н, АгН-4), 5,40 (м, 2Н, СН=СН), 5,06 (д, О,бН, Н-1¹, 61,2=3,4 Гц), 4,75-4, 35 (м, 3,4Н, Н-1 β¹'^1Т-^1Г1'^Ιν) , 4,30-4,05 (м, 2Н, Η-βδ,Ρ¹), 4,00-3,30 (м, 25Н, другие атомы Н сахаров и СН2-ОДг) , 3,80 (с, 2Н, МАс-СН2-Аг) , 2,90 (м, 1Н, Н2^ιν) , 2,23-2,03 (2м, 4Н, СН2-СН=СН-СН₂) , 1, 99-1,90 (м, 12Н,

СН₃С0) , 1,80 (тт, 2Н, АгО-СН_г-СН_г-СН_г-СН=СН, 6=6, 9 Гц}, 1,35-

1,20 (м, 8Н, 4 СН_г), 0,87 (м, ЗН, СН₃) ;

¹³С ЯМР (50 МГц, ДМСО-СОзСЮ (2/1)) δ (м.д.): 176 (СНзСОИ) ,

174-173-173 (3 СН₂СО), 161 (АгС-3), 141 (АгС-1), 132-130-129127 (АгС-2, АгС-4, АгС-5, АгС-6, СН=СН) , 103 (3 С-1 β¹'¹¹'”} ,

100 (С-1 β¹), 92 (С-Ια¹), 82-50 (24 С сахаров, Аг-СН_г-КН и СН₂ОАг), 33-23 (10 СН₂ и 3 СН₃СО), 14 (СН₃) .

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т/х=1067,4 |Μ-Να|^-.

Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(Ы-3(ундеканоилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-2-дезокси-в-О-глюкопиранозил]-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (6)

мг №-Ιν(ΝΗ₂,8) (17 мкмоль) растворяют в 100 мкл воды и 250 мкл ДМФА. Затем к полученной смеси добавляют 6 мг гидрокарбоната натрия (71 мкмоль) и 25 мкл раствора соединения 23 в ТГФ с концентрацией 210 мг/мл (17 мкмоль). Реакционную смесь нагревают до 60°С и добавляют 200 мкл раствора хлорида и 16 мг гидрокарбоната натрия восемью порциями в течение 24 ч. Смесь упаривают и полученный остаток очищают на колонке с силикагелем в растворе ДХМ/метанол (5/1, значительно разбавляя его для удаления липидной цепи (элюирование: смесь этилацетат/метанол/вода=4/1/1). Получают 6,3 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 32%).

³Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-СЭзОО (1/3)) δ (м.д.); 7,44 (м, 2Н,

АгН-2 и АгВ-6), 7,39 (дд, 1Н, АгН-5, 6₅,4«6₅,₆=7,9 Гц), 7,10 (ддд, 1Н, АгН-4, 04,6--74.2-2,1 Гц), 5,05 (д, 0,7Н, Н-1а

61.2=3,0'Гц), 4,70-4,40 (м, 3,ЗН, Н-1 , 4,_221Н

6а¹), 4,10-3,20 (м, 24Н, СН₂-ОАг и другие атомы Н сахара), 2,031,99-1,96 (Зс, 9Н, СНзСО) , 1,80 (м, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂),1,35-

1,25 (м, 8Н, 4 СН_г), 0,92 (т, ЗН, СН₃, 6=6,5 Гц).

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: 111//=1141,5 |Μ-Να|^-.

Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(Ы-3(ундец-4-инилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (7)

мг СО-[У(ЯН₂,§) (16 мкмоль) растворяют в 100 мкл воды и 250 мкл ДМФА. Затем добавляют 5 мг гидрокарбоната натрия (60 мкмоль) и 25 мкл раствора соединения 27 в ТГФ с концентрацией 190 мг/мл (16 мкмоль). Реакционную смесь нагревают до 60°С и добавляют 200 мкл раствора хлорида и 16 мг гидрокарбоната натрия восемью порциями в течение 24 ч. Смесь упаривают и полученный остаток очищают на колонке с силикагелем в смеси ДХМ/метанол (5/1) в колонку с силикагелем, значительно разбавляя его для удаления липидной цепи (элюирование: смесь этилацетат/метанол/вода=4/1/1). Получают 5,7 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 31%).

- 22 018062 ’Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-СОзОЦ (1/2)) δ (м.д.): 7,43 (м, 2Н,

АгН-2 и АгН-6), 7,37 (дд, 1Н, АгН-5, ¢5,4=8,1 Гц и 1;.._г>-8,0 Гц),

7,10 (ддд, 1Н, АгН-4, 0₄,₂=σ₄,6=2,0 Гц) , 5,04 (д, 0,7Н, Н-1 а¹

0т,₂=3,3 Гц), 4, 65-4,59 (2 д, 2Н, Н-1 β¹¹'¹¹¹, ¢1.2=8,4 Гц и ¢1.2=8,5 Гц), 4,54 (д, 0,ЗН, Н-1 β¹, ¢^2=7,9 Гц), 4,49 (д, 1Н,

Н-1 β^ιν, ¢1,2=8,7 Гц), 4,23 (дд, 1Н, Н-ба¹, Ц_6а,_6ь=11,1 Гц и ¢68,5=3,7 Гц), 4,12 (г, 2Н, СН₂-0Аг, Д₆,₂=Гц) , 4,10-3,40 (м, 21Н, Другие атомы Н сахаров), 2,35-2,13 (2м, 4Н, СН.-СсС-СН,) , 2,021,98-1,96 (Зс, ЭН, 3 СН₅СО), 1,92 (м, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂) ,

1, 45-1,25 (м, 8Н, 4 СН₂) , 0,88 (т, ЗН, СН₃, ¢=6,7 Гц) ;

¹³С ЯМР (62,5 МГц, ДМСО-СЦзОЦ (1/2)) δ (м.д.): 173 (3

СН₃СО) , 170 (МСОАг) , 158 (АгС-3) , 137 (АгС-1), 131 (АгС-5), 121 (АгС-б), 119 (АгС-4), 115 (АгС-2), 103 (С-1 β¹¹'¹¹¹'), 96 (С-1 β¹), 92 (С-1 а¹), 82-50 (20 атомов С сахаров, С=С и СН₂-0Аг),

33-16 (7 СН₂ и 3 СН₃СО), 15 (СН₃) .

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т/х=1137.1 |Μ-Να|^-. Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(№2(ундец-42-енилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (8) мг СО-^(ЫН₂,8) (11 мкмоль) растворяют в 100 мкл воды и 250 мкл ДМФА. Затем добавляют 2 мг гидрокарбоната натрия (24 мкмоль) и 15 мкл раствора соединения 31 в ТГФ с концентрацией 115 мг/мл (6 мкмоль). Реакционную смесь нагревают до 60°С и далее добавляют 105 мкл раствора хлорида и 6 мг гидрокарбоната натрия семью порциями в течение 18 ч. Смесь упаривают и остаток очищают на колонке с силикагелем в смеси ДХМ/метанол (5/1), значительно разбавляя его для удаления липидной цепи (элюирование: смесь этилацетат/метанол/вода=9/2/1). Получают 6,2 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 48%, конверсия 50%).

^ХН ЯМР (400 МГц, ДМСО-СОзОЭ (1/2)) δ (м.д.): 7,99 (дд, 1Н,

АгН-6, ¢6,5=7,5 Гц и ¢6,4 = 1,8 Гц), 7,55 (ддд, 1Н, АгН-4, ¢4.3=8,3

Гц и ¢4,5=7,8 Гц), 7,20 (д, 1Н, АгН-3), 7,10 (дд, 1Н, АгН-5),

5,52 (м, 2Н, СН=СН) , 5,06 (д, 0,7Н, Н-1 а¹, 01,2=3,0 Гц), 4,70-

4,60-4,53 (4д наложенные, 3, 6Н, Н-1 β¹'¹¹’¹¹¹'¹⁷) 4,20-3, 40 (м,

25Н, другие атомы Н сахаров и СН₂-ОАг), 2,33-2,11 (2м, 4Н, СН₂СН=СН-СН_г), 2,03-2,01-2,00 (Зс, 9Н, 3 СН₃СО), 2,05 (м, 2Н, АгОСН₂-СН₂-СН₂) , 1, 50-1,20 (м, 8Н, 4 СН₂) , 0,94 (т, ЗН, СН₃, ¢=6,8

Гц) ;

¹³С ЯМР (62,5 МГц, ДМСО-СЭзОО (1/2)) δ (м.д.): 172 (3

СН_ЭСО), 171 (МСОАг) , 158 (АгС-1), 133 (АгС-4, СН=СН), 129 (АгС6), 122 (АгС-5,), 114 (АгС-3), 103 (С-1 β¹¹'^ΣΙ1'^Ιν) , 96 (С-1 β¹), (С-1 а¹), 82-50 (все другие атомы С сахаров и СН₂ОАг) , 33-24 (7 СН₂ и 3 СН₃СО), 15 (СН₃),

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т//=1139,5 |Μ-Να|^-.

Натриевая соль 2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокси-2-(№4(ундец-42-енилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-6-О-сульфо-О-глюкопиранозы (9)

Н1 >н

- 23 018062 мг ΟΘ-ΐν(ΝΗ₂,8) (11 моль) растворяют в 100 мкл воды и 250 мкл ДМФА. Затем добавляют 2 мг гидрокарбоната натрия (24 мкмоль) и 15 мкл раствора соединения 35 в ТГФ с концентрацией 115 мг/мл (6 мкмоль). Реакционную смесь нагревают до 60°С и затем добавляют 105 мкл раствора хлорида и 6 мг гидрокарбоната натрия семью порциями в течение 17 ч. Смесь упаривают, полученный остаток очищают на колонке с силикагелем в смеси ДХМ/метанол (5/1), значительно разбавляя его для удаления липидной цепи (элюирование: смесь этилацетат/метанол/вода=9/2/1). Получают 5,2 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 40%, конверсия 60%).

^ТН ЯМР (400 МГц, ДМСО-СОзОО (1/2)) δ (м.д.): 7,89 (д, 2Н,

АгН-2 и АгН-6, Д₂,з^кА,5=8,8 Гц) , 7,04 (д, 2Н, АгН-3 и АгН-5),

5,48 (м, 2Н, СН-СН) , 5,05 (д, 0,6Н, Н-1 а¹, Д1,₂=3,1 Гц), 4,69-

4,55-4,50 (4д наложенные, 3, 6Н, Н-1 в¹'¹¹'¹¹¹'), 4,30-3, 40(м,

23Н, другие атомы Н сахаров), 4,10 (г, СН₂-ОАг, 0=6,3Гц).,

2,28-2,09 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 2,02-1, 99-1,97 (Зс, 9Н,3

СН₃СО), 1,89 (м, 2Н, АгО-СН₂~СН₂-СН₂) , 1,45-1,25 (м, ΘΗ, 4 СН₂),

0,93 (т, ЗН, СНз, 0=7,0 Гц);

¹³С ЯМР (62,5 МГц, ДМСО-СЭзОО (1/2)) δ (м.д.): 172(3

СН₃СО), 169 (ЫСОАг), 163 (АгС-1), 132-130-129 (АгС-2, АгС-6,

СН=СН), 115 (АгС-3, АгС-5), 103 (С-1 β¹¹'^Ι1Σ-^Ιν) , 97 (С-1 β¹) , 92 (С-1 α¹), 83-50 (все другие атомы С сахаров и СН₂ОАг), 33-23 (7

СН₂ и 3 СН₃СО), 15 (СН₃).

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т/х=1139.5 |Μ-Να|^-.

2-Ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-4-О-{2-ацетамидо-4-О-[2-ацетамидо-2-дезокси-4-О-(2-дезокеи-2-(№ 3-(ундец-42-енилокси)бензоил)амино-в-О-глюкопиранозил)-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-в-Оглюкопиранозил}-2-дезокси-в-О-глюкопиранозил]-2-дезокси-6-О-(-в-Е-фукопиранозил)-Оглюкопираноза (10)

Фукозильный пентамер СО-V(NΗ₂, Еис) (7,3 мг, 6,4 мкмоль) растворяют в Н₂О (140 мкл), в полученный раствор добавляют ДМФА (350 мкл) и смесь нагревают до 30°С. К смеси добавляют смолу Довекса 1x2-100 (НСО₃ ^-) с последующим добавлением раствора (ТГФ, 110 мкл) хлорангидрида 19 (6 мг). Реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч, в ходе которых три раза добавляют смолу и раствор хлорангидрида. Затем реакционную смесь разбавляют смесью Η^/ΟΗ^Ν (1/1, 2 мл), нагревают до 56°С и надосадочную жидкость фильтруют через вату. Шарики и волокна смолы в колбе несколько раз экстрагируют при 56°С смесью Η^/ΟΗ^Ν (4/1, 7/3, 3/2, 1/1, 2/3, 3/7 и ^!/₄ по 2 мл). Различные фракции пропускают через смолу Довекса 50x8-100 (Н+), затем объединяют и упаривают. Остаток последовательно промывают ЕЮАс (3x1 мл) и И₂О (3x1 мл) и затем снова растворяют в смеси Η^/ΟΗ^Ν (1/1, 10 мл) при нагревании до 56°С и последующей обработкой ультразвуком. Затем раствор лиофилизуют и получают целевой продукт в виде белого порошка (2,5 мг, 28%).

Исходное вещество, удерживаемое на кислотной смоле, затем элюируют (2,3 мг, 31%), используя водный раствор аммиака Щ₂О, 2%).

- 24 018062 ^ТН ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб/ОзО 20/1) δ (м.д.): 7,43-7, 30 (м,

ЗН, АгН-2, АгН-6 и АгН-5); 7,05 (м, 1Н, АгН-4); 5,45-5,32 (м, 2Н, СН=СН); 4,84 (д, 0,8Н, Ц_1г2=1,9 Гц, Н-1 а¹); 4,66 (д, О,ЗН, й1,₂<1,0 Гц, Н-1Гис-С1сЫАс) , 4,65 (д, 0,2Н, 0ι,₂<1,0 Гц, Н-1ГисС1сКАс β), 4,52 (д, Н, 0=8,5 Гц, Н-1 β^ιν) , 4, 45/4,35/4, 33 (4д,

4Н, 0=8,5 Гц, Н-1 β¹¹'}, 4,42 (д, 0,2Н, 0=7,0 Гц, Н-1 β¹) ; 3,99 (т, 2Н, 0-6,1 Гц, АгОСН₂-СН₂), 3,88 (дт, 1Н, Н-5Гис), 3,78-3,05 (м, ЗЗН, другие атомы Н сахаров), 2,17 (дт, 2Н, 0=6,0 и 0=6,8 Гц, СН₂-СН=СН), 1,99 (дт, 2Н, Л=5,9 и 0=6,2 Гц, СН=СН-СН₂) ,

1,82/1,81/1,81/1,79 (4с, 12Н, 4 С0СН₃), 1,80-1,72 (м, 2Н, АгОСН₂-СН₂), 1,31-1,15 (м, 8Н, 4 СН₂) , 1,08 (д, О, 6Н, 0=5,6-6,9 Гц, Н-6Гис-С1сМАс β), 1,05 (д, 2,4Н, 05,6=6,5 Гц, Н-6ГисΟΙοΝΑο), 0,82 (т, ЗН, СН₃, Л=6,5 Гц).

Метил-3 -(ундец-42-енилокси)бензоат (15)

850 мг соединения 14 (6,15 ммоль) и 900 мг К₂СО₃ (6,51 ммоль) добавляют в 1,7 г соединения 13 (6,07 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). После взаимодействия в течение 4 ч при 90°С реакционную смесь концентрируют, остаток переносят в ДХМ и затем промывают водой. Получают 1,87 г желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле в смеси пентан/этилацетат (50/1). Получают 1,37 г желтого масла (выход 76%).

⁴Н ЯМР (250 МГц, С0С1з) δ (м.д.):

7,60 (ддд, 1Н, АгН-6,

6(=,5=8,0 Гц и Об,4^6,2=0, 5 Гц), 7,52 (дд, 1Н, АгН-2, О₂,4=3,0 Гц),

7,31 (дд, 1Н, АгН-5, 05,4=8,0 Гц), 7,07 (ддд, 1Н, АгН-4), 5,38 (м, 2Н, СН=СН) , 3,98 (т, 2Н, СН₂-ОАг, σ=6, 3 Гц), 3,89 (с, ЗН,

ОСН₃), 2,22-1,99 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,83 (тт, 2Н, АгО-СН₂СН₂-СН₂-СН=СН, 0=6,8 Гц), 1, 55-1,20 (м, 8Н, 4 СН₂) , 0,84 (т, ЗН, СН₃, 0=7,5 Гц};

¹³С ЯМР (62,5 МГц, С0С1₃) δ (м.д.): 131-129-128 (С-5,

СН=СН), 122 (С-6), 120 (С-4), 115 (С-2), 66 (СН_г-ОАг), 52 (СН₃О) , 32-22 (7 СН₂), 14 (СН₃) .

Масс-спектр: положительная Ε8Ι: т/х=327.2 |Μ+Ν;·ι|'.

Высокое разрешение. Вычислено для С.’|₉.Н₂₈О₃,№1: 327,193614. Найдено: 327,193200.

Элементный анализ:

Вычислено

Найдено

С 74,9674,68

Н 9,279,37

О 15,7715,79

Инфракрасный спектр (см^-1): 2970-2950-2927-2858-1726-1586-1446-1288-1228-756.

3-(Ундец-42-енилокси)бензиловый спирт (16)

мг алюмогидрида лития (922 мкмоль) при 0°С добавляют к 140 мг соединения 15 (460 мкмоль) в эфире (3 мл). После взаимодействия в течение 1 ч 30 мин реакционную смесь разбавляют эфиром и гидролизуют двумя каплями воды. Смесь фильтруют через целит, сушат над №₂8О₄ и упаривают, получая 127 мг бесцветного масла (выход 99%).

- 25 018062 ^τΗ ЯМР (250 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 7,18 (дд, 1Н, АгН-5, О₅,«=8,0 Гц и Д₅,4=8,3 Гц), 6,84 (м, 2Н, АгН-2 и АгН-4), 6,75 (дд, 1Н, АгН-4, О₄,₂=2,9 Гц), 5,32 (м, 2Н, СН=СН), 4,58 (с, 2Н,

СН₂ОН), 3,89 (т, 2Н, СН—Онг, 0=6,3 Гц), 2,16-1,95 (2 м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,76 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂-СН=СН, 0=6,8 Гц),

1,45-1,18 (м, 8Н, 4 СН₂), 0,84 (т, ЗН, СН₃, 0=6,3 Гц);

¹³С ЯМР (62,5 МГц, С0С1₃) δ (м.д.): 159 (С-3), 142 (С-1),

131-130-128 (С-5, СН=СН), 119 {С-6}, 114 (С-4), 113 (С₂) , 67 (СН₂-ОАг), 65 (СН₂ОН), 32-23 (7 СН₂) , 14 (СНз).

Масс-спектр: положительная Ε8Ι: т/х=299.2 |Μ+Να|'.

Высокое разрешение. Вычислено для Ο’|₈Η₂₈ϋ₂Να: 299,198700. Найдено: 299,199250. Инфракрасный спектр (см^-1): 3329, 3005, 2940, 2925, 2855, 1669, 1602, 1452, 1264. 3 -(Ундец-42-енилокси)бензальдегид (17) о

мл безводного ДХМ и 190 мг РСС (881 мкмоль) в атмосфере аргона последовательно добавляют к 120 мг спирта 16 (434 мкмоль), высушенного совместным выпариванием с толуолом. Реакционную смесь нагревают до температуры кипения ДХМ и кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавляют эфиром и фильтруют через флорисил. После упаривания смеси получают 118 мг желтого масла (выход 99%).

³Н ЯМР (250 МГц, СЦС1₃) δ (м.д.) : 9,95 (с, 1Н, СНО), 7,42 (м, 2Н, АгН-6 и АгН-5), 7,36 (д, 1Н, АгН-2, О₂.₄-2,9 Гц), 7,15 (Μ, 1Н, АгН-4), 5,39 (м, 2Н, СН=СН), 3,99 (т, 2Н, СН₂-ОАг, σ=6,3 Гц), 2,21-1,99 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,84 (тт, 2Н, АгОСН₂-СН₂-СН₂-СН=СН, σ=6,8 Гц), 1,40-1,15 (м, ЗН, 4 СНз), °'⁸⁴ Ш

ЗН, СНз, 0=6,6 Гц) ;

¹³С ЯМР (62,5 МГц, ΟϋΟ1₃) (м.д.): 192 (СНО), 160 (С-3), 138 (С-1), 131-130-128 (С-5, СН=СН), 123 (С-6), 122 (С-4), 113 (С2), 67 (СН₂-ОАг) , 52 (СН₃О), 32-23 (7 СН₂) , 14 (СН₃) .

Масс-спектр: химическая ионизация (С1) 1% раствора в ДХМ; пик мелкодисперсной десорбции; М+1=275.

Инфракрасный спектр (см^-1): 3005-2940-2927-2855-2723-1700-1599-1452-1263-787.

3-(Ундец-42-енилокси)бензойная кислота (18)

мл 1н. раствора гидроксида натрия (4,0 ммоль) небольшими порциями добавляют к раствору 1,14 г соединения 15 (3,74 ммоль) в метаноле (30 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Добавляют дополнительные 4 мл 1н. раствора гидроксида натрия и смесь кипятят с обратным холодильником еще 1 ч 30 мин. После выпаривания растворителя реакционную смесь подкисляют 0,5н. НС1 и экстрагируют ДХМ. Получают 1,04 г желтого масла (выход 96%).

’Н ЯМР (200 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 10,00-9,00 (уш.Д, 1Н,

СО2Н),	7, 69 (	: Дг	1Н, АгН-6, 0(5,5=7,8 Гц), 7,60 (д, 1Н, АгН-2,
^2,4=2,	4 Гц) ,	7,35 (дд, 1Н, АгН-5, О5,4=8,3 Гц), 7,14 (дд, 1Н,
АгН-4)	, 5,40	(м,	2Н, СН=СН) , 4,00 (т, 2Н, СНг-ОАг, 0=6,3 Гц),
2,21-2	,00 (2	м,	4Н, СН2-СН=СН-СН2) , 1,85 (тт, 2Н, АЮ-СН2-СН2-
сн2-сн=	=СН, 0=	6,8	Гц) , 1, 35-1,05 (м, 8Н, 4 СНг) , 0,85 (т, ЗН,
СН3,	=6,5 Гц)

^ПС ЯМР (50 МГц, С0С1₃) δ (м.д.): 172 (СО₂Н) , 159 (С-3),

131-130-130-128 (С-1, С-5, СН=СН), 121-122 (С-4, С-6), 115 (С2), 67 (СН₂-ОАг}, 32-23 (7 СН₂), 14 (СН₃) .

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т/х=289,1 [М-Н]^-.

- 26 018062

Высокое разрешение. Вычислено для С1₈Н₂₅О₃: 289,180370. Найдено: 289,180730.

Элементный анализ: Вычислено Найдено

С 74,75 74,29

Н 9, 02 9, 01

Инфракрасный спектр (см^-1): 2970-2950-2925-2854-1695-1585-1286-757.

-(Ундец-42-енилокси)бензоилхлорид (19)

мл оксалилхлорида (11, ммоль) и две капли безводного ДМФА в атмосфере аргона добавляют к 100 мг высушенного с толуолом соединения 18 (345 мкмоль) в 20 мл безводного ДХМ. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем упаривают, получая 106 мг целевого продукта в виде желтого масла (выход 99%).

% ЯМР (250 МГц, СЦС1з) δ (м.д.): 7,71 (ддд, 1Н, АгН-6,

О₆,5=8,3 Гц, 06,4=2,4 Гц и σ₆,2=0,9 Гц), 7,57 (дд, 1Н, АгН-2,

О₂.4=1,6 Гц), 7,39 (дд, 1Н, АгН-5, Ц₅,₄=8,3 Гц), 7,20 (ддд, 1Н,

АгН-4), 5,40 (м, 2Н, СН=СН) , 3,99 (т, 2Н, СН₂-ОАг, 0=6,3 Гц),

2,23-2,00 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,85 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂СН=СН, Ц=7,0 Гц), 1,28-1,15 (м, 8Н, 4 СН₂) , 0,85 (т, ЗН, СН₃,

0=6,5 Гц).

Метил-3-(ундецилокси)бензоат (21)

350 мг соединения 14 (2,30 ммоль) и 330 мг К₂СО₃ (2,39 ммоль) добавляют к смеси 554 мг 1-бромундекана (2,35 ммоль) и безводного ДМФА (7 мл). После взаимодействия в течение 16 ч при 90°С реакционную смесь концентрируют, переносят в ДХМ и промывают водой. Получают 607 мг желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле в смеси пентан/этилацетат (60/1). Выделяют 579 мг целевого связанного продукта в форме желтого масла (выход 82%).

⁴Н ЯМР (200 МГц, С0С1з) δ (м.д.): 7,62 (м, 1Н, АгН-6),7,55 (м, 1Н, АгН-2), 7,34 (дд, 1Н, АгН-5, О₅,,=8,1 Гц и /УРГц),

7,10 (ддд, 1Н, АгН-4, 0,.6=2,8 Гц и 0,.2=0,8 Гц), 4,00 (т,2Н,

СН_г-ОАг, 0=6,6 Гц), 3,92 (с, ЗН, ОСН₃), 1,80 (тт, 2Н, АгО-СНгСН₂-СН₂, 0=6,6 Гц и Л=6,4 Гц), 1,52-1,20 (м, 16Н, 8 СН_г) ,0,89 (т, ЗН, СНз, σ=6,7 Гц);

¹³С ЯМР (62,5 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 167 (СО₂СН₃), 159 (С-3),

131 (С-1), 129 (С-5), 122 (С-6) , 120 (С-4), 115 (С-2), 68 (СНгОАг), 52 (СНзО), 32-23 (9 СН₂) , 14 (СН₃) .

Масс-спектр: положительная Ε8Ι: ш/х=329.2 |Μ+Ν;·ι|'.

Высокое разрешение. Вычислено для С1дН₃₀О₃№: 329,209264. Найдено: 329,207940.

Инфракрасный спектр (см^-1): 2950-2925-2854-1727-1586-1446-1287-1228-756. 3-(Ундецилокси)бензойная кислота (22)

600 мкл 1н. раствора гидроксида натрия (600 мкмоль) небольшими порциями добавляют к 112 мг соединения 21 (366 мкмоль) в метаноле (4 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. После выпаривания растворителя реакционную смесь подкисляют 0,5н. НС1 и экстрагируют ДХМ. Получают 107 мг целевой кислоты в виде твердого белого вещества (выход 99%).

- 27 018062

ЯМР (250 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 7,70 (д, 1Н, АгН-6,

5=7,8 Гц), 7,62 (м, 1Н, АгН-2), 7,38 (дд, 1Н, АгН-5, σ₅,₄=8,0 Гц), 7,16 (дд, 1Н, АгН-4, .1,,2=2,1 Гц), 4,02 (т, 2Н, СН₂-ОАг,

Ц=6,5 Гц), 1,99 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂, Ц=6, 6 Гц), 1,55-1,20 (м, 16Н, 8 СН₂), 0,89 (т, ЗН, СН₃, Ц=6,5 Гц) ;

¹³С ЯМР (62,5 МГц, СОС1з) 5 (м.д.): 171 (СО₂Н) , 159 (С-3),

130 (С-1), 129 (С-5), 122 (С-6), 121 (С-4), 115 (С-2), 68 (СН₂ОАг) , 32-23 (9 СН₂), 14 (СН₃) .

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: ιη/ζ=29Ε2 [М-Н]^-.

Высокое разрешение. Вычислено для С₁₈Н₂₇О₃: 291,96020. Найдено: 291,196560.

Инфракрасный спектр (см^-1): 2950-2920-2850-2700-2400-1680-1603-1455-1420-1312-1247-757. Температура плавления: 88°С.

3-(Ундеканоилокси)бензоилхлорид (23)

мл оксалилхлорида (11,5 ммоль) и две капли безводного ДМФА в атмосфере аргона добавляют к раствору 93 мг высушенной в толуоле кислоты 22 (318 мкмоль) в 20 мл безводного ДХМ. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и упаривают, получая 99 мг желтого масла (выход 99%).

Метил-3-(ундец-4-инилокси) бензоат (25)

325 мг соединения 14 (2,14 ммоль) и 300 мг К₂СО₃ (2,17 ммоль) добавляют к 600 мг соединения 24 (2,16 ммоль) в безводном ДМФА (7 мл). После взаимодействия в течение 6 ч при 90°С реакционную смесь концентрируют, промывают ДХМ и затем переносят в воду. Получают 639 мг продукта в виде желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле в смеси пентан/этилацетат (50/1). Получают 429 мг продукта в виде желтого масла (выход 66%).

А ЯМР (200 МГц, ΟϋΟ1₃) δ (м.д.): 7,63 (м, 1Н, АгН-б), 7,57 (Μ, 1Н, АгН-2), 7,31 (дд, 1Н, АгН-5, 4=8,1 Гц и Ц₅,₆=7,8 Гц),

7,11 (ддд, 1Н, АгН-4, Л₄,₆=2,4 Гц и Ц₄,₂=0, 8 Гц), 4,11 (т, 2Н,

СН₂-ОАг, Л=6,2 Гц), 3,92 (с, ЗН, ОСН₃) , 2,39-2,15 (2м, 4Н, СН₂С=С-СН₂), 1,98 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂-С^С, Ц=б, 5 Гц), 1,521,23 (м, 8Н, 4 СН₂), 0,88 (т, ЗН, СН₃, Ц=6,7 Гц), “С ЯМР (62,5 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 167 (СО₂СН₃) , 159 (С-3),

131 (С-1), 129 (С-5), 122 (С-6), 120 (С-4), 115 (С-2), 81-79 (С=С), 67 (СН₂-ОАг), 52 (СН₃О) , 31-15 (7 СН₂) , 14 (СН₃) .

Масс-спектр: положительная Ε8Ι: тУ=325,1 |Μ+Να|'.

Высокое разрешение. Вычислено для С₁₉Н₂₆О₃№: 325,77964. Найдено: 325,78070.

Инфракрасный спектр (см^-1): 2950-2931-2857-1726-1586-1446-1288-1228-756. 3-(Ундец-4-инилокси)бензойная кислота (26)

300 мкл 1н. раствора гидроксида натрия (300 мкмоль) небольшими порциями добавляют к смеси 48 мг соединения 25 (157 мкмоль) и метанола (2 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч 30 мин. После выпаривания растворителя реакционную смесь подкисляют 0,5н. НС1 и экстрагируют ДХМ. Получают 45 мг продукта в виде бледно-желтого масла (выход 99%).

- 28 018062 ’-Н ЯМР (250 МГц, СЦС1₃) δ (м.д.): 11,00-10,00 (уш.д, 1Н,

СО₂Н), 7,72 (д, 1Н, АгН-6, О₆,₅=7,7 Гц), 7,64 (м, 1Н, АгН-2),

7,38 (дд, 1Н, АгН-5, Ц₅,4=8,1 Гц), 7,17 (дд, 1Н, АгН-4, 0.,7=2,7

Гц), 4,13 (τ, 2Н, СН₂-ОАг, Ц=6,1 Гц), 2,39-2,15 (2м, 4Н, СН₂С=С-СН₂), 1,99 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂-ОС, 0=6,5 Гц), 1,50-

1,20 (м, ЗН, 4 СН₂), 0,88 (т, ЗН, СН₃, 0=6,7 Гц);

^ПС ЯМР (62,5 МГц, С0С1₃) δ (м.д.): 172 (СО₂Н) , 159 (С-3),

131 (С-1), 129 (С-5), 123 (С-6), 121 (С-4), 115 (С-2), 81-79 (С=С), 67 (СН₂-ОАг) , 31-15 (7СН₂), 14 (СН₃) .

Масс-спектр: отрицательная Ε8Ι: т/х=287.1 [М-Н]^-.

Высокое разрешение. Вычислено для С1₈Н₂₃О₃: 287,164719. Найдено: 287,164820.

Инфракрасный спектр (см^-1): 2954-2929-2855-2700-2400-1690-1592-1452-1414-1288-1247-756.

-(Ундец-4-инилокси)бензоилхлорид (27)

850 мкл оксалилхлорида (9,74 ммоль) и две капли безводного ДМФА в атмосфере аргона добавляют к раствору 80 мг высушенной в толуоле кислоты 26 (278 мкмоль) в 17 мл безводного ДХМ. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем упаривают, получая 85 мг продукта в виде желтого масла (выход 99%).

Метил-2-(ундец-42-енилокси)бензоат (29) мг соединения 28 (578 мкмоль) и 77 мг К₂СО₃ (557 мкмоль) добавляют к смеси 140 мг соединения 13 (500 мкмоль) и безводного ДМФА (2 мл). После взаимодействия в течение 8 ч при 90°С реакционную смесь концентрируют, переносят в ДХМ и затем промывают водой. Получают 137 мг желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле в смеси пентан/этилацетат (40/1). Получают 100 мг продукта в виде желтого масла (выход 66%).

^ХН ЯМР (250 МГц, С0С1₃) δ (м.д.): 7,79 (дд, 1Н, АгН-6,

5=8,1 Гц и 0(5,4=1,9 Гц), 7,43 (ддд, 1Н, АгН-4, О.,₃=8,5 Гц,

Л₄,5=7,3 Гц), 6,94 (м, 2Н, АгН-5 и АгН-3), 5,40 (Μ, 2Н, СН=СН) ,

4,02 (τ, 2Н, СНз-ОАг, 0=6,3 Гц), 3,89 (с, ЗН, ОСН₃) , 2,28-2,01 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂, σ=6,6 Гц), 1,89 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂, ^6,6 Гц}, 1,50-1,16 (м, 8Н, 4 СН2) _г 0,86 (т, ЗН, СН3, <1=6,6

Гц) ;

¹³С ЯМР (62,5 МГц, СЦС1з) δ (м.д.): 167 (С=О), 158 (С-2),

133 (С-4), 131 (СИ=СН), 128 (С-6), 120 (С-1), 119 (С-5), 113 (С-3), 68 (СН₂-ОАг), 52 (СН₃О) , 32-22 (7 СН₂) , 14 (СН₃) .

Масс-спектр: положительная Ε8Ι: т//=327,2 |М+№1|':

Высокое разрешение. Вычислено для С₁₉Н₂₈О₃,№1: 327,193914. Найдено: 327,192560. Инфракрасный спектр (см^-1): 3000-2962-2925-2855-1734-1601-1491-1456-1305-1250-754. 2-(Ундец-42-енилокси)бензойная кислота (30)

500 мкл 1н. раствора гидроксида натрия (500 мкмоль) небольшими порциями добавляют к смеси 80 мг соединения 29 (263 мкмоль) и метанола (3 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 24 ч. После удаления растворителя выпариванием реакционную смесь подкисляют 0,5н. НС1 и экстрагируют ДХМ. Получают 76 мг продукта в виде желтого масла (выход 99%).

- 29 018062

	’Н ЯМР (250 МГц, СРС1з) δ (м.д.): 12,00-10,00 (уш.Д, 1Н,
СО2Н)	, 8,	,16 (дд, 1Н, АгН-6, σ6,3=7,8 Гц и Д6, ,=1	,9 Гц),	7,54
(ддд,	, 1Н,	АгН-4, Д4,3=8,4 Гц и 04,5=7,6 Гц), 7,10 (ддд, 1Н	, АгН-
5, Оз,з-О,	8 Гц), 7,03 (дд, 1Н, АгН-3), 5,40 (м, 2Н,	СН=СН)	, 4,24
(т.	2Н,	СН2-ОАГ, Г=6, 4 Гц), 2,25 (м, 2Н, СНг-СН=	СН-СН2) ,	. 1,97
(м,	4Н,	АгО-СН2-СН2-СН2-СН=СН-СН2) , 1,35-1,10 (м,	8Н, 4	СН2) ,
0, 84	(т,	ЗН, СН3, σ=6, 6 Гц) ;
	1;С	ЯМР (62,5 МГц, СОС13) δ (м.д.): 165 (СО2Н	), 157	(С-2),
135	(С-4	), 134-132 (СН=СН), 127 (С-6), 122 (С-5)	, 117	(С-1) ,
112	(С-3)	, 69 (СН2-ОАе) , 32-22 (7 СН2), 14 (СН3) .

Масс-спектр: отрицательная ΕδΙ: ιη/ζ=289,2 [М-Н]^-.

Высокое разрешение. Вычислено для С1₈Н₂₅О₃: 289,180370. Найдено: 289,179060. 2-(Ундец-42-енилокси)бензоилхлорид (31)

о

800 мкл оксалилхлорида (9,17 ммоль) и две капли безводного ДМФА добавляют в атмосфере аргона к раствору 76 мг высушенной толуолом кислоты 30 (262 мкмоль) в 15 мл безводного ДХМ.

Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем концентрируют, получая 80 мг продукта в виде желтого масла (выход 99%).

*Н ЯМР (250 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 7,97 (дд, 1Н, АгН-б,

Гб,5=7, 9 Гц и Д₆,4=1,7 Гц), 7,46 (м, 1Н, АгН-4), 6,90 (м, 2Н,

АгН-5 и АгН-3), 5,30 (м, 2Н, СН=СН), 3,95 (т, 2Н, СН₂-ОАг,

Г-6,3 Гц), 2,20-1,90 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,79 (тт, 2Н, АгОСН_г-СН,-СН₂-СН-'СП, Д—6,6 Гц), 1,20-1,09 (м, 8Н, 4 СН₂) , 0,76 (т,

ЗН, СН₃, Д=6,7 Гц) .

Метил-4-(ундец-42-енилокси)бензоат (33)

мг соединения 32 (590 мкмоль) и 81 мг К₂СО₃ (590 мкмоль) добавляют к 150 мг соединения 13 (535 мкмоль) в безводном ДМФА (2 мл). После взаимодействия в течение 7 ч при 90°С реакционную смесь концентрируют, переносят в ДХМ и промывают водой. Получают 163 мг продукта в виде желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле в смеси пентан/этилацетат (80/1). Выделяют 129 мг целевого связанного продукта в виде желтого масла (выход 79%).

³Н ЯМР (250 МГц, СОС1₃) δ (м.д.): 7,97 (д, 2Н, АгН-2 и АгН6, Гц₂’Г₂,₃=8, 3 Гц), 6,89 (д, 2Н, АгН-3 и АгН-5), 5,39 (м, 2Н,

СН=СН) , 3,99 (т, 2Н, СЙ2-ОАГ, Г=6,3 Гц), 3,88 (с, ЗН, ОСН₃) ,

2, 22-2, 00 (2м, 4Н, СН₂-СН=СИ-СН₂) , 1,84 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СИ₂-СН₂,

Д=б, 8 Гц), 1,40-1,12 (м, 8Н, 4 СИ₂) , 0,85 (т, ЗН, СН₃, Д=6, 6

Гц) ;

¹³С ЯМР (62,5 МГц, СЦС1₃) δ (ы.д.): 167 (С=0) , 163 (С-4),

131 (С-2 и С-6), 130-128 (СН=СН) , 122 (С-1), 114 (С-5 и С-3) , (СН₂-ОАг), 52 (СН₃О), 32-23 (7 СН_г), 14 (СН₃) .

Масс-спектр: положительная Ε8Ι: ш^=327,2 [М+Ыа].

Высокое разрешение. Вычислено для С|₉Н₂₈О₃№1: 327,193914. Найдено: 327,192630. Инфракрасный спектр (см^-1): 3000-2962-2925-2855-1720-1607-1511-1435-1279-1254-846.

4-(Ундец-42-енилокси)бензойная кислота (34)

550 мкл 1н. раствора гидроксида натрия (550 мкмоль) небольшими порциями добавляют к смеси 109 мг соединения 33 (358 мкмоль) и метанола (4 мл). Раствор кипятят с обратным холодильником в течение 20 ч. После удаления растворителя выпариванием реакционную смесь подкисляют 0,5н. НС1 и экстрагируют ДХМ. Получают 102 мг продукта в виде твердого белого вещества (выход 98%).

- 30 018062 ^ХН ЯМР (250 МГЦ, СОС1з) δ (М.Д.): 12,00-11,00 (уш. Д, 1Н,

СО₂Н), 8,07 (д, 2Н, АгН-2 и АгН-6, Л₂,з»0₆,5=8,5 Гц), 6,94 (д,

2Н, АгН-3 И АгН-5), 5,42 (м, 2Н, СН-СН) , 4,03 (т, 2Н, СН₂-ОАг, σ=6,3 Гц), 2,26-2,03 (2м, 4Н, СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,88 (тт, 2Н, АгОСН₂-СН₂-СН₂, σ=6,8 Гц), 1,40-1,10 (Μ, 8Н, 4 СН₂), 0,89 (т, ЗН,

СН₃, Ц=6,6 Гц);

¹³С ЯМР (62,5 МГц, С0С1₃) δ (м.д.); 172 (СО₂Н) , 164 (С-4),

132 (С-2 и С-6), 131-128 (СН=СН) , 121 (С-1), 114 (С-3 и С-5), (СН₂-ОАг), 32-22 (7 СН₂) , 14 (СН₃).

Масс-спектр: отрицательная ΕδΙ: ιη/ζ=289,2 [М-Н]^-.

Высокое разрешение. Вычислено для С1₈Н₂₅О₃: 289,180370. Найдено: 289,178710.

4-(Ундец-42-енилокси)бензоилхлорид (35)

С1 мл оксалилхлорида (11,5 ммоль) и две капли безводного ДМФА добавляют в атмосфере аргона к раствору 101 мг высушенной толуолом кислоты 34 (348 мкмоль) в 18 мл безводного ДХМ. Реакционную среду перемешивают при комнатной температуре в течение двух и затем концентрируют, получая 107 мг продукта в виде желтого масла (выход 99%).

⁴Н ЯМР (250 МГц, С0С1з) δ (м.д.): 7,96 (д, 2Н, АгН-2 и АгН-

6, Гц), 6,99 (д, 2Н, АгН-3 и АгН-5), 5,43 (м, 2Н,

СН=СН), 4,10 (т, 2Н, СН_г-ОАг, 0=6,3 Гц), 2,27-2,03 (2 м, 4Н,

СН₂-СН=СН-СН₂) , 1,91 (тт, 2Н, АгО-СН₂-СН₂-СН₂, 0=6,7 Гц), 1,35-

1,12 (м, 8Н, 4 СН₂), 0,89 (Т, ЗН, СН₃, Л=6,6 Гц).

V. Тесты определения биологической активности.

У.1. Тесты определения биологической активности на бобовых умеренной климатической зоны галегоидной группы (Са1едо1б дгоир).

Образование клубней у бобовых растений умеренной климатической зоны галегоидной группы вызывается микоризой, которая продуцирует Ыоб факторы с гидрофобной цепью, содержащей двойную связь, сопряженную с карбонильной группой. Данная группа бобовых растений включает важные бобовые культуры, такие как люцерна, горох, фасоль, нут и клевер.

Композиции испытывают на люцерне для определения инициирования образования корневых клубней и на модели бобового Мебкадо 1гипса!и1а для определения индукцирования экспрессии симбиотического гена раннего образования клубней.

У.1.1. Тесты образования клубней на люцерне.

Сеянцы люцерны выращивают в стерильных (безбактериальных) условиях в пробирках на агаровой среде с пониженным содержанием азота (Петоп1-Саи1е! е( а1., Р1ап1 Р11укю1, 120, 83-92, 1999). Необработанные сеянцы или сеянцы, обработанные природными Ыоб факторами или синтетическими ЬСО, служат в качестве контроля.

У.1.2. Тесты индуцирования раннего образования клубней на Мебкадо !гипса!и1а.

Данные испытания проводят для определения, индуцируют ли композиции симбиотические реакции посредством активации того же пути метаболизма, что и природные Ыоб факторы. Испытания проводят на образце бобового растения Мебюадо !гипса!и1а. Активность композиции исследуют на растениях дикорастущего типа и на мутанте в гене ЭМИ, который изменен в трансдукции сигнала Ыоб фактора (Са!опа е( а1., Р1ап1 Се11, 12, 1647-1665, 2000). Соединение, которое служит для сравнения, представляет собой сульфатированный тетрамер 12, ацилированный с помощью цепи Ο16:2Δ2Ε,9Ζ, которая является аналогом природного Иоб фактора. Необработанные сеянцы или сеянцы, обработанные природными Ыоб факторами или только синтетическими ЬСО, служат в качестве контроля.

V. 1.2.1 Репортерный ген.

Обычно трудно определить регуляцию экспрессии конкретного гена во время биологического процесса, поскольку большинство специфических продуктов этих генов не являются легко выявляемыми или легко измеримыми. Для решения этой проблемы используется метод слияния с репортерными генами, т.е. генами, кодирующими легко выявляемый белок. Слияние заключается в объединении последовательности ДНК, содержащей области генного регулирования, которые желательно исследовать, с последовательностью ДНК репортерного гена. Полученную упорядоченную структуру затем вводят в растение посредством трансформации. Таким образом, если целевой ген экспрессирован, автоматически экспрессируется репортерный ген. Далее выявляется белок, кодируемый репортерным геном.

Для устранения неблагоприятного влияния на активность растения используют репортерные гены, которые не кодируют ни один из ферментов, обычно вырабатываемых растениями. Одним из наиболее

- 31 018062 распространенных ферментов является β-глюкуронидаза (д1исигошбаке-Си8) из ЕксЬепсЫа со11, гидролаза, которая катализирует расщепление большого множества β-глюкуронидов. В качестве коммерческого субстрата данного фермента можно использовать Х-С1ис (81дта В-4782): 5-бром-4-хлор-3индолилглюкуронид; полученный анион имеет синюю окраску.

У.1.2.2. Епоб11::СИ8А.

Гены бобовых растений, вовлеченные в модулирование, могут быть классифицированы на два основных типа: гены раннего клубнеобразования (еаВ1у поби1ш депек-ЕЛОЭ), которые активируются в первые дни инфицирования и активации процесса клубнеобразования; гены позднего клубнеобразования, которые не активируются до истечения нескольких дней после применения бактерий и не вмешиваются в процесс клубнеобразования до начала периода созревания клубней.

Был идентифицирован новый ген Мебюадо 1гипса!и1а, МШЛОЭП, кодирующий ВРВР (повторяющийся белок с повышенным содержанием пролина-ВереШВе рго1те-пс11 рго!ет) и транскрибируемый в течение первых стадий инфицирования образования клубней на узловых корнях и тканях (1оигпе! е! а1., Мо1. Р1ап!-М1сгоЬе [Шегас!., 14, 737-748, 2001). Используя трансгенное растение Мебюадо !гипса!и1а, экспрессирующее слияние М1ЕЛОО11::Си8А, можно определить, вызывает ли композиция, добавленная в культуральную среду растения, транскрипцию ЕЛОЭ11 гена.

Для биологического анализа транскрипции ЕЛОЭН, как и в тестах модуляции, используют среду Фореуса (ЕаЬгаеик), но без агара. Семена помещают на бумагу в углубления, содержащие культуральную среду. Сравнивают ответы трансгенных растений двух типов, содержащих слияние М1ЕЛОП11::СИ8: бобового растения 1ета1опд дикорастущего типа (^Пб-(уре-^Т) и растения с мутацией в ОМИ гене, который не способен преобразовывать сигнал Лоб фактора. Растения оставляют расти в течение 5 дней и затем всходы обрабатывают ЬСО в различных концентрациях. Спустя 6 ч всходы удаляют и выдерживают в водной среде, содержащей Х-С1ис, в течение от 1 до 2 ч. Затем подсчитывают количество корней, дающих характеристический ответ появления голубой окраски.

Данный тест является относительно чувствительным в той степени, что можно работать с концентрациями ЬСО, которые ниже концентраций, использующиеся в тестах образования клубней.

У.2 Тесты определения активности на других бобовых.

Ьо!ик согшси1а!ик является кормовой культурой, у которой образование клубней вызывается микоризой, продуцирующей Лоб факторы, очень схожие с теми, которые продуцируются микоризой, вызывающей образование клубней сои: основная цепь молекулы хитинового олигемера содержит пять глюкозаминных остатков, Л-ацильная цепь, по существу, представляет собой вакценовую кислоту (С 18:1) и восстанавливающийся глюкозаминный остаток не является сульфатированным и О-замещен фукозильным остатком. Ьо!ик согшси1а!ук выбирают в качестве модельной системы, поскольку ее семена и всходы имеют небольшие размеры и с ними удобно работать.

У.2.1. Тест определения деформации корневого волоска на Ьо!ик согтси1а!ик.

Семена Ьо!ик согтси1а!ик (су Вобео) стерилизуют. Проросшие семена с ростками длиной примерно 1 см асептически переносят на планшеты с мягким агаром Фореуса. Планшеты герметично закрывают парафильмом и помещают вертикально на 2 дня в ростовую камеру для растений (при 25°С, 16-часовой световой период, относительная влажность 75%, тип источника света: ОкгатУИиога Ь 77, интенсивность света на уровне верхней части планшетов 30 мкЕ-м^-2-с^-1) для обеспечения возможности роста и развития корневых волосков у растения. Затем для покрытия корневой системы Ьо!ик сверху наливают 2 мл стерильного раствора производного Лоб фактора и через 30 мин избыток жидкости удаляют. Образцы дополнительно выдерживают в течение 16 ч в ростовой камере для растений. Корни пяти растений помещают между предметным стеклом и покровным стеклом и визуально обследуют с помощью светлопольного микроскопа после окрашивания метиленовым синим.

Для оценки ответа растения выбирают критерий четкого разветвления волоска (многочисленное разветвление более чем на одном сайте корневой системы), и растения, проявляющие такие четко выраженные реакции, классифицируют как +. Статистическую значимость (при Р=0,05) доли +-ответов вычисляют с использованием относительных сравнений на основе точного теста Фишера (ИкЕег’с Ехас! 1ек1, 8Α8 программное обеспечение).

У.3. Вычисление синергического эффекта.

Синергический эффект действия фунгицидов всегда имеет место, когда фунгицидная активность смеси активных соединений превосходит суммарные активности активных соединений, примененных индивидуально.

Ожидаемая активность данного совместного применения двух активных соединений может быть вычислена следующим образом (см. Со1Ьу, 8.В., Са1си1айпд 8упегд1к!ю и Ап1адошк!ю Векропкек оГ

- 32 018062

НегЫсШе СотЫпаНопз, ХУеебз 15, р. 20-22, 1967).

Если

X представляет собой эффективность активного соединения А, примененного в дозе т г/га;

Υ представляет собой эффективность активного соединения В, примененного в дозе п г/га;

Е представляет собой ожидаемую эффективность активных соединений А и В, совместно примененных в дозах т и п г/га соответственно, тогда

Χ.Υ

Ε = Χ + Υ----------100

Значение эффективности выражается в %, 0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность в 100% означает, что болезнь не наблюдается.

Если действительная фунгицидная активность превосходит вычисленное значение, активность совместного применения превосходит аддитивную эффективность, т.е. имеет место эффект синергизма. В этом случае эффективность, которая наблюдается в действительность, должна быть выше, чем значение ожидаемой эффективности (Е), вычисленное в соответствии с приведенной выше формулой.

У.4. Определение микробиологической активности ш У11го в отношении РешсШшт Ьгеу1саи1е.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ро!а1о-6ех!гозе ЬгоШ-РОВ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор РешсШшт Ьгеу1саи1е. После инкубирования в течение 7 дней в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность совместного применения активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
диметилбутил)фенил]-5-фтор- 1,3-диметил-1Н-пиразол-4~ карбоксамид	А1	0,3	37
Λ Чн МНАс. ΝΗΑς	В1	0,00003	0

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А1+В1	10000:1	0,3+0,00003	40	37

У.5. Определение микробиологической активности ш уШо в отношении Согю1из уегзюо1ог.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (РОВ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор Согю1из уегзюо1ог. После инкубирования в течение 3 дней в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

- 33 018062

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Ν- [2-(1,3- диметилбутил)фенил]-5-фтор- 1,3-диметил-1Н-пиразол-4карбоксамид	А1	0,01	97
;-0Н ННАс -ОН тлчд О<*1* ·%----—	В1	0,000001	22

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А1+В1	10000:1	0,01+0,000001	100	98

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Протиоконазол	А2	0,03	48
ОНО №1АС < даОг-№. ——-	В2	0,0000003	4

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А2+В 2	10000:1	0,003+0,0000003	79	50

ν.6. Определение микробиологической активности ίη νίΐΓΟ в отношении АНегпапа шаЛ.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ΡΌΒ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор АНегпапа шаЛ. После инкубирования в течение 4 дней в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

- 34 018062

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Тебуконазол	АЗ	3	97
Сг9——	В2	0,0003	19

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%>	Ожидаемое значение г вычисленное согласно формуле Колби
АЗ+В2	10000:1	3+0,0003	100	98

У.7. Определение микробиологической активности ш νίΙΐΌ в отношении Рупси1апа огухае.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (РОВ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор Рупси1апа огухае. После инкубирования в течение 5 дней (комбинация А3+В1) или в течение 3 дней (комбинация А4+В1) в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшетридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

Соединение	Код	Норма расхода (ч. /млн.)	Эффективность (%>
Тебуконазол	АЗ	0,3	96
1 ОН 1 У* %н НО-^ НнАс ’сн МНАС	В1	0,00003	5

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч. /млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение{ вычисленное согласно формуле Колби
АЗ+В1	10000:1	0,3+0,00003	99	96

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Трифлоксисгробин	А4	0,1	63
<0Н ΝΗΑο --ОН .. ЫНДс .0 0Мв	В1	0,0003	2

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.>	Наблюдаемая эффективность <%)	Ожидаемое Значение г вычисленное согласно формуле Колби
А4+В1	10000:1	0,1+0,00001	97	64

У.8. Определение микробиологической активности ш νίΙΐΌ в отношении 5>ер1опа 1г111с1.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (РОВ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле. Для инокулирования используют суспензию спор 5>ер1опа 1г111с1. После инкубирования в течение

- 35 018062 дней в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Ν-[2-(1, З-диметил&утил)фенил]5-фтор~1,3-диметил-1Н-пиразол4-карбоксамид	А1	0, 01	4
СН ·%------	В1	0,000001	1

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение г вычисленное согласно формуле Колби
А1+В1	10000:1	0,01+0,000001	24	5

ν.9. Определение микробиологической активности ίη νίΙΐΌ в отношении Во(гу(15 стегеа.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ΡΌΒ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор Во(гу(15 стегеа. После инкубирования в течение 5 дней (комбинация А1+В1), 4 дней (комбинация А3+В3) или 7 дней (комбинация А5+В1) в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного мик ропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

Соединение	Код	Норма расхода (ч. /млн.)	Эффективность (%>
Протиоконазол	Ά2	0, з	40
Р^ V-----	В1	0,00003	18

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность <*)	Ожидаемое Значение, вычисленное согласно формуле Колби
А2+В1	10000:1	0,3+0,00003	70	51

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.}	Эффективность (%)
Тебуконазол	АЗ	0,1	33
7 ЧИ НС ННЛс <он° .V,' ΝΗΛ, Ь---------	вз	0,00001	6

- 36 018062

Смесь	Соотношение в смеси	Норна расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значениег вычисленное согласно формуле Колби
АЗ+ВЗ	10000:1	0,1+0,00001	43	37

Соединение	Код	Норма расхода (ч. /млн.)	Эффективность (%)
Металаксил	А5	0,0003	4
<·ΟΗ МНАс ОМ» ”Ъ-----—	В1	0,00000003	10

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А5+В1	10000:1	0,0003+0,00000003	30	14

ν.10. Определение микробиологической активности ίη νίίΓΟ в отношении Р1пхос1аша 8о1аш.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ΡΌΒ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию мицелий Я1ихос1аша 8о1аш. После инкубирования в течение 3 дней (комбинации А1+В3, А3+В2), 7 дней (комбинация А2+В1), 4 дней (комбинация А4+В2) или 5 дней (комбинация А5+В1) в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

- 37 018062

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Ν-[2-(1,З-диметилбутил)фенил]- 5-фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол- 4-карбоксамид	А1	0, 003	79
^ОН /ЫН ^ОН НО-3^ МИДе <он НО-3^ МНАс	ВЗ	0,0000003	32

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч:. /млн.)	Наблюдаемая эффективность <%)	Ожидаемое значение г вычисленное согласно формуле Колби
Α13+Β3	10000 :1	0,003+0,0000003	93	86

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.}	Эффективность (%)
Протиоконазол	А2	0, 1	50
V——	В1	0,00001	9

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.}	Наблюдаемая эффективность (%>	Ожидаемое Значение г вычисленное согласно формуле Колби
А2+В1	10000:1	0,1+0,00001	72	55

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн,)	Эффективность ί%)
Тебуконаэол	АЗ	3	4

- 38 018062

НО^ но-	ъ	ИМАс он но-	н0' МНАС <	ЫНАс ^Аг-он 0503-Иа+	В2	0,0003	15

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода («./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%>	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
АЗ+В2	10000:1	3+0,0003	67	55

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эф фективно с ть <%)
Трифлоксистробин	А4	1	43
н° МНАС Азолй.	В2	0,0001	39

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч. /млн.)	Н аблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое Значение г вычисленное согласно формуле Колби
А4+В2	10000:1	1+0,0001	80	65

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Металаксил	А5	0,0003	80
/ΝΗ %Н НО-*^ ΝΗΛ: < НО-^ ΝΗΜ Ь-—	В1	0,00000003	41

Оавсь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А5+В1	10000:1	0,0003+0,00000003	93	88

ν.11. Определение микробиологической активности ίη νίίΓΟ в отношении Р11у1ор1111юга сгурфдеа.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ΡΌΒ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию мицелий Р11у1ор1111тога сгурЮдса. После инкубирования в течение 4 дней в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность определяют в каждой лунке с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность при совместном применении активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

- 39 018062

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%>
Протиоконазол	А2	3	19
.он ..... пн 1 он ”%·--------—	ВЗ	0,0003	16

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
Протиоконазол +1СО-СС150	10000:1	3+0,0003	61	32

ν.12. Определение микробиологической активности ίη νίΙΐΌ в отношении ИвШадо ауепае.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ΡΌΒ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор ИвШадо ауепае. После инкубирования в течение 5 дней в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность при совместном применении активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

Соединение	Кед	Норма расхода (ч. /млн.)	Эффективность (%)
Трифлоксистрабин	А4	1	92
<'0Н| НО-'*^ КНАс <0 МНАс	ВЗ	о,ооо1	15

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч. /млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А4+ВЗ	10000:1	1+0,0001	98	93

ν.13. Определение микробиологической активности ш νίΙΐΌ в отношении 01ЬЬеге11а /еае.

Определение микробиологической активности проводят в жидкой среде картофельно-декстрозного бульона (ΡΌΒ) с использованием титрационных микропланшетов.

Активное соединение используют в качестве технически активного вещества, растворенного в метаноле.

Для инокулирования используют суспензию спор 01ЬЬеге11а /еае. После инкубирования в течение 4 дней (комбинация А1+В3), 3 дней (комбинации А3+В1, А4+В1) или 5 дней (А4+В2) в темноте при встряхивании (10 Гц) оптическую плотность в каждой лунке оценивают с помощью титрационного микропланшет-ридера.

0% означает эффективность, которая соответствует эффективности контроля, в то время как эффективность 100% означает, что наблюдается отсутствие роста гриба.

Данные, представленные в таблицах ниже, четко показывают, что наблюдаемая активность комбинации активных соединений согласно изобретению превосходит вычисленную активность, т.е. имеет место эффект синергизма.

- 40 018062

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%>
Ы-[2-(1,3-диметилбутил)фенил]-5фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол-4карбоксамид	А1	1	39
НО-^ МНАс <о0 НО-^ ННДС	вз	0,0001	17

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
А1+ВЗ	10000:1	1+0,0001	58	49

Соединение	Код	Норма расхода (ч. /млн.)	Эффективность (%)
Тебуконазол	АЗ	0,01	9
НС- МИДе <00 гО'^ МИДе	В1	0,000001	4

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение, вычисленное согласно формуле Колби
АЗ+В1	10000:1	0,01+0,000001	40	13

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн,>	Эффективность (%)
Трифлоксистробин	А4	0,1	88
'ОН НО-·^ МНАС < у НЭ- ЫНАс °	В1	0,00001	12

Смесь	С оо ткошение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%>	Ожидаемое значение г вычисленное согласно формуле Колби
А4 + В1	10000:1	0,1+0,00001	98	89

Соединение	Код	Норма расхода (ч./млн.)	Эффективность (%)
Трифлоксистробин	А4	1	75
	В2	0,0001	16

Смесь	Соотношение в смеси	Норма расхода (ч./млн.)	Наблюдаемая эффективность (%)	Ожидаемое значение , вычисленное согласно формуле Колби
АЗ+В2	10000:1	1+0,0001	84	79

Claims (16)

1. Пестицидная композиция, содержащая: а) соединение общей формулы (I) где п равно 2 или 3;

Α представляет собой -С(О)-;

В представляет собой фенилен;

С представляет собой -О-;

Ό представляет собой линейную углеводородную цепь, содержащую 11 атомов углерода, которая является насыщенной или содержит ненасыщенную связь между 4 и 5 атомами углерода;

Е и С независимо друг от друга представляют собой заместитель ЛНВ²⁰;

В^!-В⁷ представляют собой Н;

В⁸ представляет собой заместитель, выбранный из Н, фукозила, метилфукозила, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃Ла, 8О₃К, 8О₃Л(С1_-8алкила)₄;

В⁹ представляет собой Н;

В²⁰ представляет собой С(О)С_1-6алкил;

а также их возможные геометрические и/или оптические изомеры, энантиомеры и/или диастереоизоме ры, соли;

Ь) фунгицидное соединение, выбранное из группы, включающей Л-[2-(1,3-диметилбутил)фенил]-5фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, металаксил, карбендазим, пенцикурон, фенамидон, флуоксастробин, трифлоксистробин, пириметанил, ипродион, битертанол, флуквинконазол, ипконазол, прохлораз, протиоконазол, тебуконазол, триадименол, тритиконазол, карпропамид, толифлуанид, флуопиколид, изотианил, Л-{2-[1,1'-би(циклопропил)-2-ил]фенил}-3-(дифторметил)-, 1-метил-1Н-пиразол-4карбоксамид, пропамокарб фосетилат, триазоксид, Л-(3',4'-дихлор-5-фторбифенил-2-ил)-3(дифторметил)-1-метил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, Л-{2-[3-хлор-5-(трифторметил)пиридин-2-ил]этил}2-(трифторметил)бензамид в массовом соотношении (а)/(Ь) от 1/1 до 1/10¹⁴.

2. Композиция по п.1, в которой Е и С представляют собой ЛНС(О)СН₃.

3. Композиция по любому из пп.1 или 2, где В⁸ представляет собой Н, 8О₃Н, 8О₃Ь1, 8О₃Ла, 8О₃К, 8О₃Л(С1_-8алкил)₄ или заместитель формулы в которой В²⁶ представляет собой заместитель, выбранный из Н и СН₃;

В²⁷ и В²⁸ представляют собой Н.

26 27 28

4. Композиция по п.3, где В , В и В представляют собой атом водорода.

5. Композиция по любому одному из пп.1-3, в которой соединение (I) соответствует одной из следующих формул:

- 42 018062

- 43 018062 где М, когда присутствует, представляет собой катион, выбранный из Н⁺, Ь1⁺, Να', К⁺ и (С₁₈алкил)₄Ы⁺.

6. Композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что фунгицидное соединение (Ь) выбирают из группы, включающей протиконазол, металаксил, тебуконазол, трифлоксистробин и Ν-[2-(1,3диметилбутил)фенил] -5 -фтор-1,3 -диметил-1Н-пиразол-4 -карбоксамид.

7. Композиция по любому одному из пп.1-6, дополнительно содержащая фунгицидное соединение (с), отличающееся тем, что фунгицидное соединение (с) выбирают из группы, включающей Ν-[2-(1,3диметилбутил)фенил]-5-фтор-1,3-диметил-1Н-пиразол-4-, металаксил, карбендазим, пенцикурон, фена

- 44 018062 мидон, флуоксастробин, трифлоксистробин, пириметанил, ипродион, битертанол, флуквинконазол, ипконазол, метконазол, прохлораз, протиоконазол, тебуконазол, триадименол, тритиконазол, карпропамид, толилфлуанид, флуопиколид, изотианил, №{2-[1,1'-би(циклопропил)-2-ил]фенил}-3-(дифторметил)-, 1метил-1Н-пиразол-4-карбоксамид, пропамокарб-фосетилат, триазоксид, №(3',4'-дихлор-5-фторбифенил2-ил)-3-(дифторметил)-1-метил-1Н-пиразо-4-карбоксамид и №{2-[3-хлор-5-(трифторметил)пиридин-2ил]этил}-2-(трифторметил)бензамид, и массовое соотношение (а)/(Ь/с) составляет от 1/1/1 до 1/10¹⁴/10¹⁴.

8. Композиция по любому одному из пп.1-7, отличающаяся тем, что дополнительно содержит сельскохозяйственно приемлемые подложку, носитель, наполнитель и/или поверхностно-активное вещество.

9. Способ повышения урожая сельскохозяйственных культур путем стимуляции роста растения с одновременной борьбой с фитопатогенными грибами, отличающийся тем, что эффективным и нефитотоксичным количеством композиции по любому одному из пп.1-8 обрабатывают семена, листья, стебли растения или промачивают/поливают (вносят с поливной водой) семена, растения и/или плоды растения, почву и/или инертный субстрат, пемзу, пирокластический материал/туф, синтетический органический субстрат, органический и/или жидкий субстрат, в котором растение произрастает или в котором его предполагается выращивать.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что композицию вносят в борозду на почве.

11. Способ по п.9 или 10, где культура представляет собой бобовое или небобовое растение.

12. Применение композиции по любому одному из пп.1-8 для повышения образования клубней у растения с одновременным уничтожением или профилактическим контролем фитопатогенных грибов.

13. Применение по п.12, отличающееся тем, что указанным растением является бобовое растение.

14. Применение композиции по любому одному из пп.1-8 для повышения урожая культур с одновременным уничтожением или профилактическим контролем фитопатогенных грибов.

15. Применение композиции по любому одному из пп.1-8 в качестве стимулятора роста растений с одновременным уничтожением или профилактическим контролем фитопатогенных грибов.

16. Применение по п.14 или 15, отличающееся тем, что указанное растение представляет собой бобовое растение или небобовое растение.