EA017587B1 - Способ и аппарат для мониторинга пространственного образования фибринового сгустка - Google Patents
Способ и аппарат для мониторинга пространственного образования фибринового сгустка Download PDFInfo
- Publication number
- EA017587B1 EA017587B1 EA201000734A EA201000734A EA017587B1 EA 017587 B1 EA017587 B1 EA 017587B1 EA 201000734 A EA201000734 A EA 201000734A EA 201000734 A EA201000734 A EA 201000734A EA 017587 B1 EA017587 B1 EA 017587B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cuvette
- activator
- insert
- cuvette assembly
- plasma
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 title claims abstract description 27
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 27
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 title claims abstract description 27
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 230000035602 clotting Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 63
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 claims description 31
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 claims description 31
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 25
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 23
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 claims description 13
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims description 11
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims description 11
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 7
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 7
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 7
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 7
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims description 5
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 claims description 3
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 claims description 3
- 238000005375 photometry Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012780 transparent material Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 31
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 4
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 2
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 2
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000003805 procoagulant Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 241000212977 Andira Species 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010054265 Factor VIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000635804 Homo sapiens Tissue factor Proteins 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000009852 coagulant defect Effects 0.000 description 1
- 208000014763 coagulation protein disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011664 congenital factor XI deficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000002091 elastography Methods 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 201000007219 factor XI deficiency Diseases 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000020964 regulation of blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
- G01N33/4905—Determining clotting time of blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Optical Measuring Cells (AREA)
Abstract
Данное изобретение относится к способу, специально сконструированной кювете (1) и аппарату для мониторинга пространственного образования или растворения фибринового сгустка в многочисленных образцах.
Description
Изобретение относится к способу и прибору для мониторинга пространственного образования фибринового сгустка в многочисленных образцах.
Предшествующий уровень техники
Проблема моделирования коагуляции крови ίη νίίτο для диагностических целей и фундаментальных исследований существует давно. Предложен ряд способов и устройств для измерения параметров свертывания плазмы; однако значительное большинство этих способов (например, тест активированного частичного тромбопластинового времени, тромобоэластографии, анализ образования тромбина) контролируют время свертывания или другие однородные параметры. Другими словами, в тех анализах, где образец крови (плазмы) равномерно смешивают с активатором, контролируют коагуляцию образца в целом. Это наиболее простой подход, но он не является физиологическим, поскольку коагуляция крови ίη νίνο является пространственно неоднородным феноменом. Диффузия реагентов играет критически важную роль в этих процессах.
Существует несколько способов, учитывающих роль пространственной гетерогенности и диффузии. Среди наиболее важных способов, учитывающих эти параметры, находится тест коагуляции на клеточной основе (Мопгое е! а1., Вг 1 Наеша1о1. 1994; 88(2): 364-371 с последующей серией исследований). Данный способ основан на применении обычного спектрофлуориметра. Он включает мониторинг образования тромбина при взятии части пробы с помощью флуорогенного субстрата в воспроизведенной системе белков плазмы и тромбоцитов, где коагуляцию активируют с помощью монослоя клеток, экспрессирующих тканевой фактор (моноцитов). Хотя он является чувствительным способом, его главным недостатком является то, что он не является истинно пространственным: хотя реагенты распределяются гетерогенно, наблюдаемый сигнал является интегральной характеристикой процесса коагуляции. Смешивание посредством пипетки при отборе образца также делает пространственную гетерогенность менее выраженной. Способ является весьма трудоемким и долгим. Он применяется только для фундаментальных и фармакологических исследований. В существующей форме его невозможно применять для диагностики, поскольку способ не может применяться для свертывания плазмы без модификаций, так как формирование фибринового сгустка предотвращает возможность отбора пробы. Вторым подходом является способ пространственного свертывания (АйшПаккнюу е! а1. ВюсЫш Вюркук Ас1а. 1998; 1425(3): 453-468; Зшашпбге е! а1. ВюсЫт Вюркук Ас1а. 1998; 1425(3): 607-616; Оνаηеκον е! а1. ВюсЫт Вюркук Ас!а. 2002; 1572(1): 45-57; Оνаηеκον е! а1. ТйготЬ Наетοκ!. 2003; 89(2): 235-242; Оνаηеκον е! а1. 1 ТйготЬ Наетοκ!. 2005; 3(2): 321-331; Ρаη!е1ееν е! а1. Вюркук 1. 2006; 90(5): 1489-1500. Цитируемые публикации способа пространственного свертывания включены здесь посредством ссылки). Данный способ позволяет изучать пространственное формирование сгустка посредством видео-микроскопического мониторинга образования тромба в рекальцифицированной плазме, индуцированного путем приведения плазмы в контакт с активатором, стеклом или монослоем фибробластов. Хорошо доказано, что данный способ является чувствительным и воспроизводимым подходом. Он активно применяется для исследований регуляции коагуляции крови. В дополнение к фундаментальным исследованиям, были изучены пространственные нарушения коагуляции в различных аномальных состояниях (гемофилии А, В и С; дефицит факторов коагуляции X, VII, II и фибриногена; сепсис и тяжелая травма; разбавление плазмы при трансфузионной терапии, и т.д.), и были исследованы механизмы действия терапевтических агентов (концентратов фактора VIII, рекомбинантного активированного фактора VII (Νονο^ΐΌη®. Νονο №гбкс, Дания), концентратов антитромбина III, и т.д.). Несмотря на преимущества, способ и прибор для пространственного свертывания, используемые ранее, неадекватны для практического применения. Способ не позволяет проводить одновременное измерение более одного образца, что неудобно для фундаментальных исследований, и полностью исключает широкое клиническое применение. Необходимое минимальное количество плазмы составляет 300 мкл, что в несколько раз превышает количество, применяемое в стандартных тестах свертывания (100 мкл). Активацию проводят либо с помощью монослоя фибробластов, либо с помощью стекла; первый способ является плохо воспроизводимым, дорогостоящим, долгим, трудоёмким и материалоёмким (необходимо оборудование для культивирования клеток), последний способ не является физиологическим (активация с помощью стекла проходит по внутреннему пути, что не происходит ίη νίνο). Чтобы хранить образец при 37°С, кювету термостабилизируют путем хранения на водяной бане с перемешивающим устройством; однако, это приводит к образованию пузырьков, нарушающих качество сигнала.
Третий подход включает получение изображения коагуляции плазмы крови и её распространения от поверхностей (см. Еахак е! а1. 1 Вютеб Ма!ег Век А. 2007; в печати, данные предстоящей публикации. ИОТ 10.1002/_]Ьт.а.3152). Данных подход по существу подобен способу пространственной коагуляции, приведенному выше, и основан на улавливании замедленного изображения светорассеяния от фибриновой сети, образующейся в кювете. Активация осуществляется только с помощью стекла. Главным отличием является применение стандартных спектрофотометрических кювет вместо специальных кювет, используемых в способе пространственного свертывания. Можно контролировать несколько кювет одновременно, но с низким разрешением и без автоматизации. Хотя данный способ обеспечивает применение стандартных спектрофотометрических кювет и способность контролировать несколько образцов одно
- 1 017587 временно, его главным недостатком является то, что способ требует очень большого количества плазмы (1500 мкл). Далее, он обеспечивает низкое пространственное разрешение для экспериментов с несколькими образцами (100 мкм вместо 10 мкм в Способе пространственного свертывания), и выполняется посредством нефизиологической активации (только с помощью стекла). Нет автоматизации, и способ является долгим и трудоёмким. Способ был разработан только для анализа материалов, а его пригодность для диагностических целей, фундаментальных и фармакологических исследований ограничена.
Четвертый подход состоит в пространственно-временном свертывании на образцовых (модельных), закрепленных на подложке в форме пятен фосфолипидных бислоях, помеченных восстановленным человеческим тканевым фактором (КавБир е! а1. Ргос №111 Асаб 8с1 И8Л. 2006; 103(43): 15747-17752). В данном способе применяют микрожидкостную камеру, содержащую свежую рекальцифицированную плазму над образцовой липидной поверхностью. Микроскопию светлого поля применяют для обнаружения формирования фибрина. В данном способе оптическая ось перпендикулярна поверхности активатора, что не позволяет контролировать пространственное распространение сгустка в данном направлении. Можно наблюдать только формирование сгустка и его распространение вдоль активатора. Принципиальным преимуществом данного способа является его способность наблюдать свертывание на помеченной активированной поверхности и изучать механизмы инициации свертывания. Однако это является узкой и специфической проблемой. Пригодность способа для других типов фундаментальных исследований, для диагностических целей и фармакологических исследований ограничена.
Таким образом, в данной области техники имеется потребность в усовершенствованном способе и в частности, в приборе, преодолевающем один или более из вышеупомянутых недостатков.
Краткое изложение сущности изобретения
Таким образом, основной задачей изобретения является обеспечение способа с высоким разрешением, и в частности, прибора, обеспечивающего чувствительное, воспроизводимое моделирование ίη νίΐτο коагуляции крови (в особенности, процессов образования и/или растворения фибринового сгустка), учитывающего роль пространственной гетерогенности и диффузии, и пригодного для одновременного мониторинга многочисленных образцов, что особенно важно для клинического мониторинга.
Настоящее изобретение раскрывает, среди прочего, кюветную сборку 26, держатель кюветы 13, прибор 14, включающий держатель кюветы и оптическое устройство регистрации, а также способ, представляющий дополнительную разработку способа пространственного свертывания, более простой для производства и применения, обеспечивающий больше информации, позволяющий проводить автоматизацию, и пригодный для применения в клинических условиях.
В первом аспекте настоящее изобретение обеспечивает кюветную сборку 26 для фотометрического анализа, включающий кювету, вставку и активатор коагуляции, в котором кювета 1 сегментирована на множество ячеек 2 с помощью сегментирующих стенок 4; вставка 5 включает множество выступов 6, выдающихся от области 7, выполненных приспособленными для введения в ячейки 2 указанной кюветы 1; а активатор выбран из класса физиологических и нефизиологических активаторов коагуляции, и в котором указанный активатор нанесен на выступы вставки 6, предпочтительно на нижней грани 24 выступов 6.
Предпочтительно ячейки 2 кюветы 1 имеют плоскопараллельную и/или прямоугольную форму в поперечном сечении.
Более предпочтительно ячейки 2 кюветы 1 расположены на одной линии и имеют равный объем.
В предпочтительном воплощении кювета 1 выполнена из пластического светопроницаемого материала, предпочтительно из полистирола. Однако могут применяться другие биологически инертные материалы, такие как поливинилхлорид и полиметилметакрилат.
В другом предпочтительном воплощении число выступов 6 вставки 5 соответствует числу ячеек 2 в кювете 1.
В другом предпочтительном воплощении вставка 5, установленная в кювету 1 снижает эффективное расстояние между поверхностью вставки 5 и внутренней поверхностью кюветы 1 до 0,1 мм или меньше, предпочтительно до 0,05 мм.
В ещё одном предпочтительном воплощении на каждом выступе 6 вставки 5 нанесен один и тот же или отличающийся активатор, или часть выступов 6 свободна от активатора.
В ещё одном предпочтительном воплощении выступы 6 вставки 5 заменяются так, чтобы могла быть получена необходимая комбинация активаторов для специфического эксперимента путем установки выступа 6 в необходимой композиции во вставке 5. Таким образом, изобретение также относится к кюветной сборке, в которой выступы 6 вставки 5 отделяемо или неотделяемо соединены с областью 7.
В предпочтительном воплощении вставка 5 выполнена из пластика, предпочтительно из полистирола, поливинилхлорида или полиметилметакрилата. Изобретение также охватывает применение других материалов для вставки 5, таких как другие биологически инертные материалы.
В другом предпочтительном воплощении активатор является физиологическим активатором коагуляции, например, тканевым фактором, тромбином, слоем клеток, экспрессирующих тканевой фактор, образцами ткани, и т.д. Для экспериментов, включающих мониторинг не только образования сгустка, но также растворения сгустка, может применяться активатор фибринолиза (тканевой активатор плазмино
- 2 017587 гена (ΐΡΑ), урокиназный активатор плазминогена (иРА), и т.д.). Для исследований совместимости биоматериалов могут применяться нефизиологические активаторы, например, стекло, образцы имплантируемых устройств/материалов и искусственных органов/материалов, и т.д. Активаторы, предпочтительно белки, иммобилизуют на поверхности с помощью известных химических процедур, например, химического связывания.
Кюветную сборку 26, раскрываемую здесь, предпочтительно применяют для мониторинга пространственного образования фибринового сгустка ίη νίίτο.
Во втором аспекте изобретение раскрывает держатель кюветы. Используемый здесь, термин держатель кюветы относится к устройству, фиксирующему кювету так, что химические или биохимические реакции, происходящие внутри кюветы, могут контролироваться подходящим оборудованием.
Держатель кюветы, описанный здесь, включает термостат 10 для термостабилизации кюветы 1 и средства для удерживания кюветы 1 внутри термостата 10 и вдоль оптического пути. Используемый здесь, термин термостат относится к камере с текучей средой 28 с контролируемой температурой. Термостат 10 заполнен средой 28; подходящей средой 28 могут быть газы, такие как Ν2 и воздух; жидкости, такие как вода, спирты и полиолы, наиболее предпочтительно вода. Более того, термостат 10, включающий среду 28, является по меньшей мере, частично светопроницаемым, так что химические или биохимические реакции внутри кюветной сборки 26 могут регистрироваться оптическим устройством. Среда 28 также находится в пределах оптического пути. Предпочтительно держатель кюветы 13 является термостабилизированным и термоизолированным.
В предпочтительном воплощении держатель кюветы приспособлен к тому, чтобы кювета 1 была расположена перпендикулярно оптическому пути, и была наклонена по отношению к вертикали, предпочтительно на 10-40°. Однако, плоскость кюветы должна быть строго перпендикулярна оптическому пути.
В предпочтительном воплощении держатель кюветы специально приспособлен для кюветы, описанной выше.
В другом аспекте изобретение обеспечивает прибор 14 для мониторинга пространственного образования и/или растворения фибринового сгустка ίη νίίτο, включающий держатель кюветы, описанный здесь, и оптическое устройство регистрации.
В другом аспекте изобретение раскрывает прибор, в частности, раскрытый выше прибор, включающий держатель кюветы 13 и оптическое устройство регистрации, в котором держатель кюветы 13 располагает кювету 1 перпендикулярно оптическому пути и наклонно по отношению к вертикали, предпочтительно на 10-40°. Держатель кюветы предпочтительно является держателем кюветы 13, раскрытым здесь. Типично, плоскость кюветы строго перпендикулярна оптическому пути.
В другом аспекте изобретение описывает способ мониторинга ίη νίίτο пространственного образования и/или растворения фибринового сгустка, включающий этапы:
Α) в случае образования сгустка (a) подготовки кюветы, содержащей один или более образцов плазмы крови;
(b) Обеспечения приведения в контакт плазмы с физиологическим активатором коагуляции; и (c) Регистрации роста фибринового сгустка как функции времени и расстояния.
В) в случае растворения сгустка (a) подготовки кюветы, содержащей один или более образцов плазмы крови, включающих один или более фибриновых сгустков;
(b) Обеспечения приведения в контакт плазмы с активатором фибринолиза; и (c) Регистрации растворения фибринового сгустка как функции времени и расстояния.
Способ предпочтительно осуществляют при контролируемой температуре, предпочтительно при физиологической температуре, т.е. при 37°С или около того.
Кюветы на этапе (а) предпочтительно являются вышеописанными кюветами 1. Распределение образцов в кювете 1 может осуществляться посредством микропипетки, что позволяет автоматизировать способ.
Более предпочтительно, кювету 1 помещают в держатель кюветы 13, раскрытый здесь. Наиболее предпочтительно, способ осуществляют внутри прибора 14, раскрытого здесь.
В предпочтительном воплощении этап (Ь) проводят путем размещения вышеописанной вставки 5 в кювету 1. На грань (24) выступов (6) гребнеподобной вставки 5 наносят активатор. Когда активатор, присутствующий на грани 24 выступов 6, приходит в контакт с плазмой, фибриновый сгусток начинает формироваться на поверхности активатора и распространяется в объем плазмы.
Предпочтительно активатор является тканевым фактором; однако могут применяться другие активаторы, такие как тромбин, клетки, экспрессирующие тканевой фактор, или образцы тканей. Альтернативно, активатор может быть нефизиологическим, например, стеклом или пластиком, который тестируют на биосовместимость. Для экспериментов по растворению сгустка крови могут применяться активаторы фибринолиза (такие, как тканевой активатор плазминогена).
Термин плазма как применяется здесь, охватывает плазму крови, обогащенную тромбоцитами плазму крови, рекальцифицированную плазму крови и фракции плазмы. Для специфических направле
- 3 017587 ний исследований плазму можно смешивать с различными реагентами (дополнительными активаторами, ингибиторами, фармацевтическими средствами и т.д.). Для мониторинга фибринолиза плазму можно смешивать с раствором активатора фибринолиза (например, урокиназным активатором плазминогена или стрептокиназой). Кроме того, для исследовательских целей вместо плазмы могут применяться специфические смеси реагентов из белков коагуляции, калибровочные растворы и т.д. Таким образом, термин плазма необходимо понимать в широком смысле, также включающем эти типы модифицированной плазмы.
Рост фибринового сгустка освещается, например, светоизлучающими диодами. Светорассеяние от растущего фибринового сгустка можно регистрировать оптическим устройством регистрации 15, например, с помощью ПЗС камеры. Регистрируемые данные, например, уловленные замедленные изображения растущего тромба, затем анализируются, предпочтительно, в цифровой форме компьютером. Например, главными параметрами, которые можно определить с помощью способов, раскрытых здесь, являются скорость роста сгустка, лаг-период и время коагуляции.
В другом аспекте изобретение раскрывает активатор коагуляции крови или фибринолиза, иммобилизованный, например, химически связанный, на поверхности. Это полезно для ίη νίίτο мониторинга пространственного формирования или растворения фибринового сгустка, соответственно. Активатор коагуляции крови может быть белком, таким как тканевой фактор или тромбин, или клетками или тканями, экспрессирующими тканевой фактор. Примеры активаторов фибринолиза включают 1РЛ и иРА.
Главным преимуществом раскрытых здесь способа и прибора 14 для мониторинга пространственного формирования фибринового сгустка перед предшествующим уровнем техники является то, что требуется только малый объем плазмы. Всего лишь с 20 мкл (вместо 300 или 1500 мкл, т.е. в 75 раз меньше, чем у других подобных систем, описанных ранее, и в 5 раз меньше минимального количества плазмы, необходимого для стандартного теста свертывания) можно получить надежные результаты с высоким разрешением.
Далее, кювета 1, раскрытая в настоящем изобретении легко применяется и требует только минимального набора операций, не требующих каких-либо специальных навыков. Напротив, для работы на устройствах предшествующего уровня техники необходим профессиональный биохимик с мануальными навыками выше среднего уровня.
Прибор 14 является простым в работе и может использоваться вспомогательным персоналом, в отличие от устройств предшествующего уровня техники, для которых необходимы один или два опытных биохимика. Применение обычной одноразовой кюветы 1 и вставки 5 сводит к минимуму необходимый набор операций (вставить кювету 1, внести плазму, внести активатор, присутствующий на вставке 5).
Способ и прибор можно применять для мониторинга не только формирования сгустка, но также процесса лизиса фибринового сгустка (растворения или фибринолиза).
Далее, анализируемые образцы быстро загружаются в кювету 1, описанную здесь. Загрузка образцов требует мало времени, не более 1-2 мин. Обычное время эксперимента составляет 25-30 мин; изображения получаются каждые 10 с. Нормальный вид образования тромба включает лаг-период 2-5 мин (в течение этого времени после активации ничего не наблюдается; лаг-период строго зависит от типа активатора), затем фибриновый сгусток распространяется в объем плазмы со скоростью 30-40 мкм/мин. При патологических состояниях лаг-период может быть увеличен или укорочен; скорость роста сгустка может быть повышена или снижена. Кроме того, зависимое от активатора свертывание может наблюдаться в кювете 1 в случае изменений прокоагулянтов в плазме.
Наиболее важно, что можно одновременно контролировать несколько образцов с применением различных активаторов автоматизированным образом: применение кюветы 1, раскрытой здесь, позволяет одновременно загружать, плазму во все ячейки, например, путем распределения образца обычными многоканальными пипетками, а применение вставляемого активатора позволяет одновременно активировать коагуляцию одним движением. В воплощении со специально сконструированной одноразовой кюветой 1 с четырьмя ячейками и соответствующей вставкой 5 пространственное формирование сгустка можно контролировать в четырех различных образцах, используя вплоть до четырех различных активаторов одновременно. Образцы можно загружать одновременно (например, с помощью многоканальной пипетки), и одновременно активировать гребнеподобной вставкой.
Главным преимуществом данного способа и прибора 14 является способность выявлять нарушения свертывания, которые плохо обнаруживаются или не обнаруживаются обычными тестами коагуляции, такими как тест активированного частичного тромбопластинового времени, тест протромбинового времени, тромбоэластография или анализ образования тромбина; например, прокоагулянтных изменений в плазме. Хотя это преимущество может быть частично разделено с пространственно-временными способами предшествующего уровня техники, описанными выше, предложенный способ и прибор являются единственными, которые пригодны для практического применения в клинике.
Изобретение может применяться для диагностики, тестирования биоматериалов, фундаментальных и фармакологических исследований тромбоза и гемостаза.
- 4 017587
Краткое описание чертежей
Изобретение будет более понятным, и задачи, иные чем те, что установлены выше, станут явными с учетом приведенного в следующем подробном описании. Эти описания дают ссылку на приложенные чертежи, на которых:
фиг. 1а демонстрирует вид спереди кюветы 1, а фиг. 1Ь является видом поперечного сечения внутреннего пространства кюветы 1;
фиг. 2а демонстрирует вид спереди гребнеподобной вставки 5 для кюветы 1, фиг. 2Ь демонстрирует вид сбоку вставки 5, а фиг. 2с является перспективным видом вставки 5, фиг. 26 демонстрирует вид поперечного сечения кюветной сборки 26, фиг. 2е демонстрирует вид сбоку фиг. 26.
фиг. 3 демонстрирует держатель кюветы 13, в который помещена кювета 1. Держатель включает термостат 10, с доступом через водонепроницаемую дверцу 11;
фиг. 4 демонстрирует вид в перспективе основных элементов прибора 14;
фиг. 5а и 5Ь показывают схематическое размещение наклонного положения кюветы 1 в оптическом пути;
Способы осуществления изобретения
Фиг. 1а демонстрирует вид спереди экспериментальной кюветы 1. Кювета 1 имеет, по существу, форму прямоугольного параллелепипеда.
Как можно видеть на поперечном сечении фиг. 1Ь, внутреннее пространство кюветы 1 разделено сегментирующими стенками 4 на четыре ячейки 2 равного размера.
Каждая ячейка 2 имеет прямоугольное сечение 3x1 мм2. Однако изобретение не ограничивается указанными размерами; например, возможно больше ячеек 2 с меньшими прямоугольными сечениями. В предпочтительном воплощении общая конструкция кюветы 1 и ячеек 2 разработана так, что для надежного результата необходим только маленький объем образца. В воплощении, показанном на фиг. 1а и Ь, для достижения надежного результата необходим объем образца только 20 мкл.
Предпочтительно сегментирующие стенки 4 разделяют кювету 1 на ряд параллельно и серийно выровненных ячеек 2 (см. фиг. 1Ь). Ширина камер или ячеек 2 предпочтительно является равной.
В данном воплощении сегментирующие стенки 4 являются не такими высокими, как вся кювета 1. Однако сегментирующие стенки 4 могут иметь различную высоту, например, иметь такую же высоту, как верх кюветы.
В головной части 18 кюветы 1 имеются средства удержания 19, которые позволяют фиксировать вставку 5 в кювете 1. Здесь средства удержания 19 выполнены в виде выпуклости; однако, возможны также другие воплощения.
Головная часть 18 является, по существу, квадратной спереди с наклонной гранью. Однако головная часть 18 может иметь также разную форму. Область наклонной грани 8 дает ориентацию кювете 1, так что пользователь может точно расположить его образцы и/или вставку 5 в кювете 1. В другом воплощении кювета 1 может иметь другие средства ориентировки 8 для ориентации кюветы 1, такие как цветная метка, знак или выступающая область.
Грани 27 на внешней поверхности кюветы 1 на фиг. 1а также служат для правильного расположения и являются факультативными. В то время как грань 8 помогает правильно ориентировать вставку 5 внутри кюветы 1, эти средства ориентировки являются проводниками, предотвращающими неправильную ориентировку.
В другом предпочтительном воплощении кюветы являются большими по ширине, чем по глубине, предпочтительно, ширина составляет только 1,1 мм или примерно 1,1 мм.
Кювета 1 выполнена из полистирола. Однако другие проницаемые для света пластики также охватываются настоящим изобретением, например, такие как полиметил-метакрилат или полистирол.
Сегментирующие стенки 4 выполнены из того же самого материала, что и кювета 1; однако в альтернативном воплощении указанные сегментирующие стенки 4 могут быть выполнены из другого материала. Как показано на фиг. 1Ь, кювета имеет четыре ячейки 2. Однако любое другое число ячеек 2, технически осуществимое и пригодное, охватывается настоящим изобретением.
Далее, в альтернативном воплощении кювета 1 может иметь средства на наружной поверхности 3 для устойчивого и обратимого размещения в держателе кюветы, как описано далее.
Фиг. 2а демонстрирует вид спереди гребнеподобной вставки 5 для кюветы 1. Вставка 5 имеет четыре выступа 6, проходящих параллельно от опоры 7. Вставка 5 изобретения не ограничивается четырьмя выступами, любое другое число выступов 6, технически осуществимое и пригодное, охватывается настоящим изобретением. Наиболее предпочтительно, число выступов б соответствует числу ячеек 2 в кювете 1.
Далее, выступы 6 могут быть заменяемыми, чтобы обеспечить легкое составление на месте необходимой комбинации активаторов для специфического экспериментального дизайна.
Область 7 (опора) является, по существу, прямоугольной, с наклоной гранью 8 на верхнем левом крае, позволяющим ориентировать вставку 5 для размещения в кювете 1. За счет удержания области 7 вставку 5 можно захватить и манипулировать ей. В другом предпочтительном воплощении область 7 содержит, вместо наклонной грани или в дополнение к ней, другие средства ориентировки 8, например,
- 5 017587 физическую отметку, такую, как цветная отметка, знак или выступающую область. Таким образом, пользователь может легко ориентировать вставку 5 в ячейках 2 кюветы 1, определяя каждый из выступов 6 в конкретную ячейку 2. В одном воплощении средства ориентировки 8 могут быть сформированы в виде направляющей области, выступающей от области 7, которая при размещении направляет вставку 5 вдоль головной части 18 кюветы 1.
Типично выступы 6 вставки 5 являются более узкими, чем ширина ячейки 2 кюветы 1, так что вставку 5 можно размещать в кювете 1, также чтобы обеспечить выход воздуха. Когда вставку 5 помещают в кювету 1, оставшееся пространство между поверхностью вставки 5 и внутренней поверхностью кюветы 1 предпочтительно составляет 0,05 мм, что позволяет выходить возможным частицам воздуха.
При помещении в кювету 1, загруженную образцами, выступы 6 приходят в непосредственный контакт с образцами. Однако длина выступов 6 должна быть такой, чтобы они не достигали дна 9 ячеек 2. Образующийся фибриновый сгусток будет расти от нижней грани 24 выступов 6 по направлению к дну кюветы 1, т.е. в оставшемся пространстве, образовавшемся между выступами 6 и дном 9 ячеек 2.
Круглое отверстие, присутствующее в области 7, служит как средство фиксации 20, позволяющее соединять вставку 5 со средствами удержания 19 на внутренней поверхности кюветы 1. Средства фиксации 20 могут иметь различную конструкцию. Однако средства удержания 19 и средства фиксации 20 предпочтительно соответствуют друг другу.
Как можно видеть на фиг. 2Ь и фиг. 2с, вставка 5 является скорее узкой, чем широкой.
Вставка 5 выполнена из полистирола; однако другие материалы, предпочтительно пластики, например такие, как полиметил-метакрилат, также охватываются настоящим изобретением.
Вставка 5 несет на своей поверхности, предпочтительно на нижней грани 24 выступов 6, активатор коагуляции или фибринолиза. В качестве активатора могут применяться различные типы активирующих коагуляцию поверхностей, но предпочтительно применяется физиологический активатор, например, иммобилизованный тканевой фактор, обеспечивающий воспроизводимую физиологическую инициацию свертывания. Альтернативно, вставка 5 выполнена из стекла, и присутствие физиологического активатора не является необходимым. На каждый выступ 6 вставки 5 может быть нанесен один и тот же активатор в одной и той же или различной концентрации, или на каждый выступ 6 может быть нанесен различный активатор. При применении воплощений, как показано на фиг. 1Ь и фиг. 2а-с, пространственное образование сгустка может, таким образом, контролироваться в четырех различных образцах с четырьмя различными активаторами одновременно.
В изображении поперечного сечения фиг. 26 показана вставка 5, помещенная в кювету 1. Положение вставки 5 внутри кюветы 1 фиксировано, так как вставка 5 установлена с ее средствами фиксации 20 на средствах удержания 19 кюветы 1. Оставлено маленькое пространство между выступами 6 и сегментирующими стенками 4, позволяющее выходить потенциально захваченному воздуху. Средства ориентировки 8 вставки 5, а также кюветы 1, являются выровненными. Как можно видеть, нижние грани 24 выступов 6 не достигают дна ячеек 2. Фиг. 2е демонстрирует вид сбоку вставки 5, помещенной в кювету 1.
Фиг. 3 демонстрирует воплощение демонтированного держателя кюветы 13, в котором кюветная сборка 26 помещена в термостат 10.
Термостат 10 обеспечивает термостабилизацию и термоизоляцию для сведения к минимуму конвекции внутри различных образцов, расположенных в кювете. Среда 28, присутствующая в термостате 10, предпочтительно рециркулирует и фильтруется и/или включает антибактериальный агент, чтобы гарантировать хорошую видимость. Однако возможны другие воплощения, в которых не осуществляется термостабилизации и/или термоизоляции.
Может обеспечиваться доступ к термостату 10 через водонепроницаемую дверцу 11 для технического обслуживания. Дверца 11 и термостат 10 соединены через соединительные средства 22, такие как винты, как показано на фиг. 3.
Термостат 10 имеет прозрачную часть 21, обеспечивающую получение изображения и мониторинг образования сгустка. Термостат 10 может иметь одну или более прозрачных частей 21, или быть полностью прозрачным.
Фиг. 3 далее демонстрирует корпус 12 с отверстием 23 для размещения кюветы 1, при этом термостат 10 с дверцей 11 вставляются в корпус 12. Указанный корпус предпочтительно имеет, по меньшей мере, одно средство соединения 25, такое как резьба, позволяющее соединять держатель кюветы 13 с другим предметом, таким как панель 17.
Фиг. 4 демонстрирует вид в перспективе одного воплощения демонтированного прибора 14, включающего регистрирующее приспособление 15, ПЗС камеру с объективом 16, переднюю панель 17 и экспериментальный держатель кюветы 13 с кюветой 1.
Регистрирующие приспособления 15 являются оптическим устройством регистрации, таким как ПЗС камера, видеокамера, фотографическая пленка, или современное оборудование, такое как лазерные сканирующие устройства, микроскопы, или другой оптический детектор.
Наличие передней панели 17 является факультативным. Прикрепление держателя кюветы 13 внутри прибора 14 может быть осуществлено другим способом. В случае применения передней панели 17 держатель кюветы 13 может прикрепляться через средства соединения 25, такие как резьба 25.
- 6 017587
Типично держатель кюветы 13 располагается так, например, присоединяясь к передней панели 17, что кювета 1 помещается не в вертикальное положение, чтобы предотвратить захват воздуха, когда вставку 5 вставляют в кювету 1. Предпочтительно наклон составляет 10-40° по отношению к вертикали (см. фиг. 4 и 5).
Необязательно (не показано) прибор 14 может быть защищен корпусом.
На фиг. 5а схематически показано, что кювета 1 или кюветная сборка 26 расположены в держателе кюветы 13. Держатель кюветы и оптическое устройство регистрации выровнены вдоль оптического пути в направлении оси х. Перпендикулярные к оптическому пути плоскости образованы в направлении оси у- и ζ. Как можно видеть, кювета 1 или кюветная сборка 26 расположены перпендикулярно к оптическому пути. Фиг. 5Ь является схематическим видом спереди фиг. 5а и показывает, что кювета 1 или кюветная сборка 26 не только перпендикулярны оптическому пути, но также наклонены по отношению к вертикали.
Понятно, что различные воплощения, предпочтения и диапазоны могут комбинироваться как угодно. Далее, в зависимости от конкретного воплощения, избранные обозначения, воплощения или диапазоны могут не применяться.
В то время как показаны и описаны предпочтительные в настоящее время воплощения изобретения, необходимо чётко понять, что изобретение не ограничивается ими, но может быть иначе воплощено и осуществлено в пределах объема следующей формулы изобретения.
Claims (22)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Кюветная сборка для фотометрического анализа, содержащая кювету, вставку и активатор, в которой указанная кювета (1) сегментирована на множество ячеек (2) сегментирующими стенками (4);указанная вставка (5) приспособлена для введения в ячейки (2) кюветы (1) и содержит множество выступов (6), отходящих от основания (7); и указанный активатор выбран из класса физиологических активаторов свертывания, нефизиологических активаторов свертывания, физиологических активаторов фибринолиза или нефизиологических активаторов фибринолиза и в которой указанный активатор нанесен на выступы (6) вставки.
- 2. Кюветная сборка п.1, в которой ячейки (2) имеют форму прямоугольника в поперечном сечении.
- 3. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой ячейки (2) кюветы (1) имеют равные объемы.
- 4. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой кювета (1) выполнена из пластического светопроницаемого материала, предпочтительно из полистирола.
- 5. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой выступы (6) съемно соединены с основанием (7) вставки (5).
- 6. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой число выступов (6) вставки (5) соответствует числу ячеек (2) в кювете (1).
- 7. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой вставка (5) установлена в кювету (1) с зазором между поверхностью вставки (5) и внутренней поверхностью кюветы (1) до 0,1 мм или меньше, предпочтительно 0,05 мм.
- 8. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой на каждом выступе (6) вставки (5) нанесен один и тот же или разные активаторы, или в которой часть выступов (6) свободна от активатора.
- 9. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой вставка (5) выполнена из пластика, предпочтительно из полистирола.
- 10. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой активатор является физиологическим активатором, например тканевым активатором плазминогена или нефизиологическим активатором, например стеклом.
- 11. Кюветная сборка по любому из предыдущих пунктов, в которой активатор нанесен на нижние грани (24) выступов (6).
- 12. Держатель кюветной сборки по любому из пп.1-11, включающий термостат (10) для термостабилизации указанной кюветной сборки и средства для удерживания указанной кюветной сборки внутри термостата (10) и вдоль оптического пути, в котором термостат (10) заполнен средой (28); и в котором термостат (10), заполненный средой (28), является, по меньшей мере, частично светопроницаемым; и в котором среда (28) также находится в пределах оптического пути.
- 13. Держатель по п.12, который выполнен с возможностью размещения указанной кюветной сборки перпендикулярно оптическому пути и с наклоном по отношению к вертикали, предпочтительно на 1040°.
- 14. Способ мониторинга пространственного образования и/или растворения фибринового сгустка ίη- 7 017587 νΐίΓΟ с использованием кюветной сборки по любому из пп.1-11, включающий этапы:A) в случае образования сгустка (a) подготовки упомянутой кюветной сборки, содержащей один и более образцов плазмы крови;(b) обеспечения приведения в контакт плазмы с физиологическим активатором коагуляции и (c) регистрации роста фибринового сгустка как функции времени и расстояния;B) в случае растворения сгусткаа) подготовки упомянутой кюветной сборки, содержащей по меньшей мере один образец плазмы крови, включающий по меньшей мере один фибриновый сгусток;(b) обеспечения приведения в контакт плазмы с активатором фибринолиза и (c) регистрации растворения фибринового сгустка как функции времени и расстояния.
- 15. Способ по п.14, в котором способ осуществляют при контролируемой температуре, предпочтительно при 37°С.
- 16. Способ по любому из пп.14-15, в котором этап (Ъ) осуществляют путем размещения вставки (5) в кювету (1).
- 17. Способ по любому из пп.14-16, в котором активатор, приходящий в контакт с плазмой при размещении вставки (5) в кювете (1), наносят на грань (24) выступов (6) вставки (5).
- 18. Способ по любому из пп.14-17, в котором активатор является тканевым активатором плазминогена.
- 19. Способ по любому из пп.14-18, в котором используют иммобилизованный активатор коагуляции или фибринолиза, в частности тканевый фактор.
- 20. Применение кюветной сборки по любому из пп.1-11 для мониторинга пространственного образования и/или растворения фибринового сгустка ΐη νΐίΓΟ.
- 21. Прибор для мониторинга пространственного образования и/или растворения фибринового сгустка ΐη νΐίΓΟ согласно способу по любому из пп.14-19, включающий держатель (13) кюветной сборки по любому из пп.12-13 и оптическое устройство регистрации.
- 22. Прибор по п.21, в котором держатель (13) кюветной сборки выполнен с возможностью удержания кюветы (1) перпендикулярно оптическому пути и наклонно по отношению к вертикали предпочтительно на 10-40°.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CH2007/000543 WO2009055940A1 (en) | 2007-11-02 | 2007-11-02 | Method and apparatus for monitoring spatial fibrin clot formation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201000734A1 EA201000734A1 (ru) | 2010-12-30 |
| EA017587B1 true EA017587B1 (ru) | 2013-01-30 |
Family
ID=39731774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201000734A EA017587B1 (ru) | 2007-11-02 | 2007-11-02 | Способ и аппарат для мониторинга пространственного образования фибринового сгустка |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20100261211A1 (ru) |
| EP (1) | EP2215470B1 (ru) |
| JP (1) | JP5145426B2 (ru) |
| CN (1) | CN101903772B (ru) |
| BR (1) | BRPI0722175B8 (ru) |
| CA (1) | CA2704287C (ru) |
| EA (1) | EA017587B1 (ru) |
| MX (1) | MX2010004630A (ru) |
| WO (1) | WO2009055940A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU221040U1 (ru) * | 2023-07-06 | 2023-10-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии Российской академии наук (ЦТП ФХФ РАН) | Приспособление для одновременной пространственно локализованной активации и ингибирования тромбообразования и тромболизиса |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8791428B2 (en) | 2009-10-14 | 2014-07-29 | Honeywell International Inc. | Authentication systems for discriminating value documents based on variable luminescence and magnetic properties |
| RU2518247C2 (ru) * | 2011-07-26 | 2014-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ГемаКор Лабс" (ООО "ГемаКор Лабс") | Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе |
| JP2013257154A (ja) * | 2012-06-11 | 2013-12-26 | Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> | 測定チップ |
| EA021562B1 (ru) * | 2012-08-15 | 2015-07-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Гематологическая Корпорация" | Устройство мониторинга пространственного свертывания крови и ее компонентов |
| RU2556116C2 (ru) | 2013-11-28 | 2015-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Гематологическая Корпорация" (ООО "ГемаКор") | Высокоселективный ингибитор контактной активации на основе инфестина 4 |
| JP6526717B2 (ja) * | 2014-05-05 | 2019-06-05 | ヘモネティクス・コーポレーションＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | 線維素溶解及び線溶亢進を検出するための方法及び試薬 |
| CA2967811A1 (en) | 2014-11-13 | 2016-05-19 | Marquette University | Adapter for a cell holder of a spectrofluorometer |
| CN108369179B (zh) | 2015-09-22 | 2021-12-24 | 波士顿大学董事会 | 纳米囊泡的多重表型分析 |
| CA3012212A1 (en) | 2016-02-05 | 2017-08-10 | Nanoview Diagnostics Inc. | Detection of exosomes having surface markers |
| US11237178B2 (en) * | 2016-11-30 | 2022-02-01 | Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostyu <<Hemacore Labs>> | Device for monitoring the spatial and temporal dynamics of thrombin |
| SE542103C2 (en) * | 2017-11-09 | 2020-02-25 | Hemocue Ab | A microcuvette holder, an analysis apparatus comprising the holder and method for analysing a blood sample using the analysis apparatus |
| US20230296633A1 (en) * | 2019-03-01 | 2023-09-21 | Unchained Labs | Methods and systems for detection of fibrin formation or removal at the nano-scale |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0637744A1 (en) * | 1993-06-11 | 1995-02-08 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Method and system for classifying agglutination reactions |
| US5504011A (en) * | 1994-10-21 | 1996-04-02 | International Technidyne Corporation | Portable test apparatus and associated method of performing a blood coagulation test |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4554839A (en) * | 1983-10-14 | 1985-11-26 | Cetus Corporation | Multiple trough vessel for automated liquid handling apparatus |
| US5140161A (en) * | 1985-08-05 | 1992-08-18 | Biotrack | Capillary flow device |
| CN2030718U (zh) * | 1988-05-09 | 1989-01-11 | 程兵 | 分光光度计恒温装置 |
| TW221493B (ru) * | 1990-07-10 | 1994-03-01 | Cardiovascular Diagnostics Inc | |
| US5788407A (en) * | 1995-05-01 | 1998-08-04 | Hwang; Ik Hyun | Paving method of water-permeable concrete |
| US5925319A (en) * | 1996-04-30 | 1999-07-20 | Medtronic, Inc. | Test cartridge for evaluating blood platelet functionality |
| JP4469990B2 (ja) * | 2007-04-19 | 2010-06-02 | ベックマン・コールター・インコーポレーテッド | 粒子凝集判定用容器 |
-
2007
- 2007-11-02 WO PCT/CH2007/000543 patent/WO2009055940A1/en active Application Filing
- 2007-11-02 CA CA2704287A patent/CA2704287C/en active Active
- 2007-11-02 MX MX2010004630A patent/MX2010004630A/es active IP Right Grant
- 2007-11-02 BR BRPI0722175A patent/BRPI0722175B8/pt active IP Right Grant
- 2007-11-02 EP EP07816226.0A patent/EP2215470B1/en active Active
- 2007-11-02 EA EA201000734A patent/EA017587B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-11-02 US US12/739,823 patent/US20100261211A1/en not_active Abandoned
- 2007-11-02 CN CN200780101862.1A patent/CN101903772B/zh active Active
- 2007-11-02 JP JP2010532396A patent/JP5145426B2/ja active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0637744A1 (en) * | 1993-06-11 | 1995-02-08 | Ortho Diagnostic Systems, Inc. | Method and system for classifying agglutination reactions |
| US5504011A (en) * | 1994-10-21 | 1996-04-02 | International Technidyne Corporation | Portable test apparatus and associated method of performing a blood coagulation test |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| FAXÄLV LARS ET AL.: "Imaging of blood plasma coagulation and its propagation at surfaces." JOURNAL OF BIOMEDICAL MATERIALS RESEARCH. PART A 15 JUN 2008, vol. 85, no. 4, 28 September 2007 (2007-09-28), pages 1129-1134, XP007905639 ISSN: 1552-4965 cited in the application figures 1-3 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU221040U1 (ru) * | 2023-07-06 | 2023-10-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии Российской академии наук (ЦТП ФХФ РАН) | Приспособление для одновременной пространственно локализованной активации и ингибирования тромбообразования и тромболизиса |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BRPI0722175A8 (pt) | 2017-03-21 |
| BRPI0722175B1 (pt) | 2018-02-14 |
| EA201000734A1 (ru) | 2010-12-30 |
| US20100261211A1 (en) | 2010-10-14 |
| CA2704287A1 (en) | 2009-05-07 |
| MX2010004630A (es) | 2010-08-02 |
| WO2009055940A1 (en) | 2009-05-07 |
| EP2215470A1 (en) | 2010-08-11 |
| EP2215470B1 (en) | 2014-04-30 |
| CA2704287C (en) | 2013-09-03 |
| CN101903772B (zh) | 2014-04-16 |
| JP5145426B2 (ja) | 2013-02-20 |
| BRPI0722175B8 (pt) | 2021-07-27 |
| JP2011502268A (ja) | 2011-01-20 |
| CN101903772A (zh) | 2010-12-01 |
| BRPI0722175A2 (pt) | 2014-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA017587B1 (ru) | Способ и аппарат для мониторинга пространственного образования фибринового сгустка | |
| US20220137075A1 (en) | Low-volume coagulation assay | |
| EP0418235B1 (en) | Coagulation assay systems which utilize paramagnetic particles | |
| US10302626B2 (en) | Method for evaluating coagulation ability of blood specimen, and reagent, reagent kit and device to be used therein | |
| CN102834722B (zh) | 用于测定测试液体的凝固特性的组合物 | |
| US20080293091A1 (en) | Apparatus and methods for automated diffusion filtration, culturing and photometric detection and enumeration of microbiological parameters in fluid samples | |
| EP2270573B1 (en) | Cover for a counting, viability assessment, analysis and manipulation chamber | |
| JPH06500463A (ja) | 磁性粒子を含有する乾式化学試薬を使用するフィブリノーゲン分析（すなわち、試料中の凝固し得るフィブリノーゲンの濃度測定）を正確に、迅速にかつ簡単に行うためのフィブリノーゲン分析方法 | |
| JP2007089590A (ja) | マルチウェルフィルタプレートに供給するためのアクセスホール | |
| JP2002507278A (ja) | 電極自動位置決め装置 | |
| JP2004004074A (ja) | 試料の一部を自動的に貯蔵するプレート | |
| EP2887064B1 (en) | Device for monitoring spatial coagulation of blood and of components thereof | |
| JP2007506970A (ja) | 膜拡散を測定するシステム、キットおよび方法 | |
| RU2518247C2 (ru) | Способ определения пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе, устройство для реализации указанного способа и способ диагностики нарушений системы гемостаза по изменению пространственно-временного распределения активности протеолитического фермента в гетерогенной системе | |
| KR102127765B1 (ko) | 고형화된 유체의 이탈을 방지할 수 있는 신속한 세포배양검사 장치 | |
| RU123166U1 (ru) | Устройство мониторинга постранственного свертывания крови и ее компонентов | |
| WO1996000395A1 (en) | Evaluation of blood coagulation activity | |
| EA037013B1 (ru) | Устройство мониторинга пространственно-временной динамики тромбина | |
| JP2717402B2 (ja) | 細胞内カルシウム測定装置 | |
| Stirling | Value and application of automation in laboratory diagnosis of haemostatic disorders | |
| IL92191A (en) | Coagulation assay using dry chemical reagents and paramagnetic particles |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM KG MD TJ |
|
| PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AZ TM |
|
| PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment |