EA015508B1 - Фармацевтическая композиция, стимулирующая биосинтез s-аденозилметионина, и пероральное лекарственное средство - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к фармацевтике и медицине, касается фармацевтической композиции, стимулирующей биосинтез S-аденозилметионина, а также касается перорального лекарственного средства, которое обладает гепатопротекторным действием и может быть использовано при лечении заболеваний, сопровождающихся поражением печени. Задачей настоящего изобретения является создание на основе новой нетоксичной фармацевтической композиции стабильного перорального лекарственного средства, обладающего гепатопротекторным действием за счет стимуляции биосинтеза S-аденозилметионина в клетках печени. Поставленная задача решается созданием фармацевтической композиции, стимулирующей биосинтез S-аденозилметионина, которая характеризуется тем, что она содержит смесь метионина, янтарной кислоты, инозина и таурина в эффективных количествах, а также созданием на ее основе перорального лекарственного средства в виде таблетки, которое обладает гепатопротекторным действием. Новое лекарственное средство, созданное на основе фармацевтической композиции, стимулирующей биосинтез S-аденозилметионина, является высокоэффективным и безопасным, обладает стабильностью лекарственной формы и может применяться при длительных курсах лечения различных заболеваний.

Description

Изобретение относится к фармацевтике и медицине, касается фармацевтической композиции, стимулирующей биосинтез 8-аденозилметионина, а также касается перорального лекарственного средства, которое обладает гепатопротекторным действием и может быть использовано при лечении заболеваний, сопровождающихся поражением печени.

Предшествующий уровень техники

В настоящее время создание новых высокоэффективных и безопасных лекарственных средств гепатопротекторного действия, которые могут применяться при длительных курсах лечения различных заболеваний, является актуальной задачей.

Следует отметить, что печень часто страдает при патологии других органов - болезнях сердца, почек, органов пищеварения и кроветворения, инфекционных, кожных, ревматических и других заболеваниях. С другой стороны, возникновение либо обострение различных заболеваний, особенно обменных, кожных, аллергических, аутоиммунных, может возникать именно из-за нарушения нормального функционирования печени.

Гепатопротекторное действие ряда известных лекарственных средств обусловлено их влиянием на синтез 8-аденозилметионина в клетках печени 8-аденозилметионин (8-аденозил-Ь-метионин, 8ΆΜ) биологическое вещество, входящее в состав всех тканей и жидких сред организма, он синтезируется из незаменимой аминокислоты метионина путем каскада направленных биохимических реакций.

Известные препараты, содержащие в своем составе 8-аденозилметионин, восполняют его дефицит и стимулируют выработку эндогенного 8-аденозилметионина. Однако, при экзогенном введении 8-аденозилметионина его высокая активность как донора метильной группы может привести к неселективному метилированию белков, полисахаридов, аминокислот с образованием токсичных метаболитов и возникновением побочных эффектов (Ь1£е 8с1. 2008. Уо1. 83 (25-26), р. 821-827).

С другой стороны, основной проблемой снижения фармакологической активности экзогенного 8-аденозилметионина в лекарственных препаратах является рацемизация - переход из активной (8,8)-(+) 8-аденозил-Ь-метионин формы в неактивную (В,8)-(+) 8-аденозил-Ь-метионин, катализируемый температурой и влажностью.

Кроме того, 8-аденозилметионин химически нестабилен и легко подвергается гидролизу с образованием аденина, аденозина, метилтиоаденозина и ряда других серосодержащих органических соединений.

С целью стабилизации 8-аденозилметионина в различных лекарственных формах используются его суспензии в безводных спиртах (1Р 2008013509; 1Р 2008011803 или различные добавки, например аскорбиновая кислота или ее соли (И8 2010168048) или полисахарид трехалоза (ВюсЫш. Вюрйук. Ас1а, 2002. Уо1. 1573(2), р. 105-108), а также декстрины (1Р 2010018596).

Достаточно часто используются различные более стабильные производные 8-аденозил-Ьметионина - органические и неорганические соли 8АМ (Ιηΐ. 1оит. Рйагт. 2000. Уо1. 194(1), р. 61-68; ВИ 3490997; 8И 676169; И8 2003/0032796), в том числе двойные соли (и8 4057686; И8 3954726; И8 4465672).

В качестве лекарственного средства или пищевых добавок 8АМ может быть использован в парентеральной и пероральной лекарственных формах.

При парентеральном введении экзогенного 8АМ он обнаруживается главным образом в клетках печени, но через гематоэнцефалический барьер практически не проникает (1оит. №ито1. Иеигокигд РкусЫайу. 1990. Уо1. 53 (12): 1096-1098).

Необходимо отметить, что лечение хронических заболеваний печени с синдромом цитолиза (вирусные гепатиты, циррозы, жировая болезнь печени) требует длительных многомесячных курсов применения 8АМ, что не позволяет эффективно использовать его парентеральную лекарственную форму для внутривенного введения, а при пероральном введении биодоступность 8АМ существенно ниже по сравнению с парентеральным, что обусловлено плохим транспортом 8АМ через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта и мембраны клеток печени и митохондрий (Ο1ίη. Тйег. 2009. Уо1. 31(2): 311320).

Таким образом, повышение синтеза 8АМ при пероральном применении может быть реализовано либо увеличением кратности его приема и дозировки активного вещества - 8-аденозилметионина (что экономически нецелесообразно и представляет угрозу риска возникновения побочных эффектов), либо путем создания альтернативных препаратов, обеспечивающих стимуляцию синтеза эндогенного 8АМ.

Среди препаратов для перорального применения, влияющих на синтез 8-аденозилметионина, известен сам метионин как прекурсор 8АМ (Ме1аЬо118ш. 1970. Уо1. 19(5), р. 381-391).

Известны математические модели, описывающие синтез 8АМ и его метаболитов метионином в печени (ВюсЫш. Вюрйук. Ас1а. 2010. Уо1. 1804(1), р. 89-96). При пероральном введении метионина крысам в дозировках от 0,6 до 4 г/кг концентрация метионина в печени растет не значительно и колеблется на уровне 400 нмоль/г, при этом концентрация 8АМ в печени возрастает от 150 до 180 цМ/г. Дальнейшее увеличение дозы метионина свыше 4 г/кг приводит к метаболическому прыжку - резкому увеличению

- 1 015508 концентрации δΑΜ в 4-10 раз и достигает уровня 1000 μΜ/г (1. Тйеог. ΒίοΙ. 2000, 204: 521-532). Однако введение животным метионина в дозе даже 4 г/кг при пересчете соответствует разовой дозе у человека до 40 г метионина в сутки (Еагтако1. Токыко1. 1981. Уо1. 44(4), р. 389-395), что превышает рекомендуемую физиологическую и лечебную дозу метионина в несколько раз и представляет опасность токсического эффекта (1оиг. Ыи1г. 2006. Уо1. 136, р. 1722-1725).

Таким образом, очевидно, что достижение приемлемых концентраций δ-аденозилметионина в печени с использованием чистого метионина невозможно из-за токсических эффектов последнего.

Имеются данные, что ряд витаминов: В₆ (пиридоксин), бетаин и В₁₂ повышают уровень эндогенного δ-аденозилметионина (1оиг. ΝιιΙγ. δοί. Уйатшо1. (Токуо). 2001. Уо1. 47(3), р. 188-194).

Также известно, что биосинтез δ-аденозилметионина может быть увеличен путем последовательного введения метионина и через 4-6 ч - производных аденина - 2-диокспропиладенина (δυ 1552073). Однако необходимость раздельного введения указанных активных веществ не позволяет создать удобную в применении пероральную лекарственную форму.

Как активный компонент δΑΜ предлагается в различных пероральных лекарственных формах. Например, известны таблетки из гранулята, полученные методом распылительной сушки (И8 2003/0050274), таблетки с пролонгированным высвобождением (υδ 2009/088404), желатиновые капсулы, покрытые кишечно-растворимой оболочкой (υδ 6759395), гранулы (υδ 2008/0274997), шипучие таблетки и гранулы (ЕР 2189154), таблетки для рассасывания (ЕР 2193787).

Также описана пероральная лекарственная форма δ-аденозилметионина, устойчивая к гидролизу и температуре (υδ 2009/0110729). Данная композиция имеет существенные недостатки - масса одной таблетки с содержанием δΑΜ 400 мг достигает 1300 мг, что неудобно для приема пациентами вследствие больших геометрических размеров таблеток, кроме того, технология таблеток сложна для промышленного производства.

В качестве наиболее близкого аналога заявляемого изобретения может быть выбрана лечебная композиция для орального применения, которая описана в патенте ЕР 0136464. Композиция может быть выполнена в виде таблетки, покрытой кишечно-растворимой оболочкой, следующего состава:

		МГ		%
Активный компонент
БАМе сульфат пара-толуол сульфонат,		384		72,0
(эквивалентно 200 мг 8-аденозилметионина)
Пелевыело£>авки		60		Н,4
Двуокись кремния		77		14,6
Крахмал		30		5,7
МКЦ безводная		10		1,9
Магния стеарат
масса ядра:	507		96,0
Кишечнорастворимое покрытие:
Полиакрилат		15		2,85
Полиэтиленгликоль		1		0,19
Тальк		2,5		0,5
Магия стеарат		2,5		0,5
масса покрытия:	21		4,0
Масса таблетки:		528		100,0

Указанное лекарственное средство широко используется в медицинской практике и может применяться для лечения заболеваний печени.

Однако данная таблетка обладает невысокой биодоступностью δΑΜ (около 5%) вследствие низкого уровня транспорта δΑΜ через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта (С1ш. Тйег. 2009. Уо1. 31(2), р. 311-320). Кроме того, после всасывания из кишечника в кровеносное русло происходит быстрое разрушение δΑΜ, и в гепатоциты проникает незначительное количество всосавшегося δΑΜ, что требует повторных дозировок препарата каждые 6-8 ч для поддержания минимального терапевтического уровня δΑΜ в плазме крови (Эгидх. 1990. Уо1. 40. δирр1. 3, р. 124-128).

При хранении такого препарата наблюдается уменьшение содержания активной формы δΑΜ за счет процесса его рацемизации, при котором образуется фармакологически неактивный изомер (Κ,δ)-(+) δ-аденозил-Ь-метионина.

Перечисленные недостатки снижают терапевтическую эффективность лекарственных средств, содержащих экзогенный δΑΜ, и подтверждают необходимость разработки альтернативного лекарственного средства.

- 2 015508

Краткое описание изобретения

Задачей настоящего изобретения является создание на основе новой нетоксичной фармацевтической композиции стабильного перорального лекарственного средства, обладающего гепатопротекторным действием за счет стимуляции биосинтеза 8-аденозилметионина в клетках печени.

Поставленная задача решается созданием фармацевтической композиции, стимулирующей биосинтез 8-аденозилметионина, которая согласно изобретению характеризуется тем, что содержит смесь метионина, янтарной кислоты, инозина и таурина в эффективных количествах.

Поставленная задача также решается созданием перорального лекарственного средства в виде таблетки, содержащей активный и вспомогательные компоненты, которая согласно изобретению в качестве активного компонента содержит вышеописанную фармацевтическую композицию.

Кроме того, поставленная задача решается тем, что вышеописанное пероральное лекарственное средство согласно изобретению обладает гепатопротекторным действием.

Авторами настоящего изобретения впервые установлено, что композиция, включающая активные компоненты: метионин, янтарную кислоту, инозин и таурин, направленно стимулирует биосинтез 8-аденозилметионина в клетках печени.

Известные составы метионина с метаболитами, например с янтарной кислотой, пектином, аминокислотами и глюкозой (КИ 2105502) или метионина с янтарной кислотой, аминокислотами и витаминами (КИ 2222996), оказывают общее нормализующее действие на обменные процессы в организме и используются в качестве пищевых добавок. Кроме того, известная комбинация метионина с инозином, янтарной кислотой, меглюмином и солями натрия, калия и магния проявляет детоксицирующую активность и используется в виде инфузионного раствора (КИ 2240116).

Кроме того, неожиданным явился тот факт, что наибольшее влияние на стимуляцию биосинтеза 8-аденозилметионина оказывает не отдельное применение метионина, а его комбинации с веществами, которые напрямую не участвуют в биосинтезе 8-аденозилметионина.

Авторы также показали, что повышенный синтез 8-аденозилметионина в тканях печени достигается при использовании активных компонентов в эффективных количествах за счет положительного синергизма их взаимодействия. При этом согласно изобретению эффективными являются общепринятые минимальные терапевтические количества активных компонентов.

В связи с тем что повышение биосинтеза 8-аденозилметионина наблюдается при значительном снижении дозировки метионина в композиции по сравнению с его отдельным применением, стало возможным исключить его токсическое действие на организм и уменьшить риск возникновения побочных явлений при длительном применении данной фармацевтической композиции.

На основе заявляемой композиции может быть создано пероральное лекарственное средство в виде таблетки, которая содержит целевые добавки и кишечно-растворимое покрытие.

В качестве целевых добавок могут быть использованы лактоза, сахароза, сорбит, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, пектин, крахмал, альгинаты, кросповидоны, кальция или магния стеараты, стеариновая кислота, полиэтиленгликоли различной молекулярной массы, коллоидный оксид кремния, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полисорбат 80 и другие общепринятые в фармацевтической технологии ингредиенты.

В качестве кишечно-растворимого покрытия могут быть использованы сополимеры метилакриловой кислоты, ацетилфталилцеллюлоза, шеллак и другие полимеры устойчивые к желудочному соку в сочетании с тальком, двуокисью титана, оксидами железа и различными пластификаторами, такими как пропиленгликоль, триэтилцитрат и другие общепринятые в фармацевтической технологии ингредиенты.

Целевые добавки и кишечно-растворимое покрытие обеспечивают фармацевтическую стабильность лекарственной формы, ее полную распадаемость и растворение в кишечнике, защиту от желудочного сока, благодаря чему активные компоненты высвобождаются в двенадцатиперстной кишке, где происходит их наиболее быстрое и полное всасывание.

Гепатопротекторное действие указанного перорального лекарственного средства обусловлено направленным влиянием его активного компонента, представляющего собой смесь метионина, янтарной кислоты, инозина и таурина в эффективных количествах, на стимуляцию синтеза 8-аденозилметионина в печени, что приводит к улучшению показателей регенерации и пролиферации гепатоцитов и позволяет использовать его при лечении различных заболеваний, сопровождающихся поражением печени.

Таким образом, заявляемое изобретение в качестве лечебного средства является эффективной альтернативой экзогенному введению 8-аденозилметионина и исключает такие присущие ему недостатки, как низкая биодоступность активного компонента, гидролитическая, термическая нестабильность и склонность к рацемизации 8АМ.

- 3 015508

Подробное описание изобретения

Количественный и качественный состав заявляемой композиции был подобран эмпирическим путем в ходе изучения влияния на синтез 8-аденозилметионина различных доз метионина и ряда веществ, взятых в минимальных разовых общепринятых терапевтических количествах.

В результате исследования с использованием культуры клеток гепатомы человека НерС2 из коллекции клеточных культур АТТС (США) был отобран ряд активных веществ, которые вызывали достоверное повышение синтеза 8-аденозилметионина в следующих диапазонах концентраций, мг/кг:

Метионин5-50

Инозин20-75

Янтарная кислота 75-125 Таурин10-50

Полученные данные были использованы в следующих опытах.

Опыт 1.

Для выбора состава композиции и предпочтительного способа ее введения определяли содержание 8-аденозилметионина в гомогенатах печени экспериментальных животных после введения различных комбинаций ранее отобранных активных компонентов.

Эксперименты выполнены на 400 белых крысах породы Вистар согласно требованиям этического комитета и Правилами лабораторной практики в Российской Федерации при использовании средних значений дозировок метионина, инозина, янтарной кислоты и таурина из ранее полученных диапазонов их концентраций, которые составили 20, 40, 100 и 20 мг/кг соответственно.

Содержание 8-аденозилметионина в печени определяли при внутрижелудочном и интрадуоденальном введении композиций в виде суспензий, приготовленных в 10%-ном крахмальном клейстере с использованием атравматического зонда.

Экспериментальных животных разделили на 20 групп по 20 животных в каждой. Группам 1-10 вводили исследуемые композиции внутрижелудочно, а группам 11-20 - интрадуоденально. Исследования были проведены с учетом коэффициента переноса доз с человека на грызунов. Через 2, 4, 6 и 8 ч после введения препаратов в каждой группе забивали по 5 животных и извлекали печень для проведения анализа на содержание 8АМ.

Группы 1и 11 (контрольные) получали 10%-ную крахмальную суспензию без препаратов.

Группы 2 и 12 получали метионин в дозе 20 мг/кг.

Группы 2 и 13 получали смесь метионин 20 мг/кг + инозин 40 мг/кг. Группы 4 и 14 получали смесь метионин 20 мг/кг + янтарная кислота 100 мг/кг.

Группы 5 и 15 получали смесь метионин 20 мг/кг + таурин 20 мг/кг. Группы 6 и 16 получали смесь метионин 20 мг/кг + инозин 40 мг/кг + таурин 20 мг/кг.

Группы 7 и 17 получали смесь метионин 20 мг/кг + инозин 40 мг/кг + янтарная кислота 100 мг/кг.

Группы 8 и 18 получали смесь метионин 20 мг/кг + таурин 20 мг/кг + янтарная кислота 100 мг/кг.

Группы 9 и 19 получали смесь метионин 20 мг/кг + инозин 40 мг/кг + янтарная кислота 100 мг/кг + таурин 20 мг/кг.

Группы 10 и 20 получали субстанцию 8АМ в дозе 160 мг/кг.

Количественное содержание 8АМ в печени определяли с использованием жидкостного хроматографа 81ιίιη;·ιάζι.ι ЬС-20 Ргошшепсе. Для каждой пробы получали по 3 воспроизводимые хроматограммы. Статистическую обработку проводили с помощью пакетов программ Ехсе1, Огарй Раб РгЬт. МеЬШа! на ПЭВМ РС Репйиш II. Различия между выборками оценивали с помощью критерия Стьюдента (I).

Композицию считали эффективной при достоверном увеличении синтеза 8-аденозилметионина в гомогенате печени крыс в сравнении с группами животных, получавшими только метионин или 8АМ.

Представленные в табл. 1 и 2 данные свидетельствуют о существенном увеличении синтеза эндогенного 8-аденозилметионина при введении различных комбинаций с метионином по сравнению с его отдельным применением в нетоксичных терапевтических дозах.

- 4 015508

Таблица 1

Содержание ЗАМ в гомогенатах печени крыс при внутрижелудочном введении компонентов

№ группы	Экспериментальные группы животных (п=20)	Содержание ЗАМ в печени цг/г (М+т)
2 ч	4 ч. .	6 ч	8 41
1	Контрольная группа	8,2+0,2	8,4+0,2	8,3+0,2	8,4+0,2
2	Метионин	10,4+0,2	12,4+0,3	11,1+0,2	9,3+0,3
3	Метионин+инозин	12,5+0,3	19,9+0,2	20,1+0,2
4	Метионин+ЯК	13,1+0,2	18,1 ±0,3	20,2+0,3	14,5+0,3
5	Метионин+таурин	12,2+0,2	17,8+0,4	16,5+0,3	11,2+0,2
6	Метионин+инозин+таурин	15,4+0,3	21,6+0,5	17,8+0,2	11,9+0,2
7	Метионин+инозин+ЯК	16,2+0,3	24,4+0,4	22,0+0,3	16,4+0,3
8	Метионин+таурин+ЯК	14,9+0,2	19,2+0,3	17,0+0,2	12,2+0,2
9	Метионин+инозин+ЯК+таурин	15,7+0,2	28,1+0,4	27,0+0,4	18,0+0,3
10	ЗАМ доза 32 мг/кг	8,6+0,2	11,4+0,3	12,1+0,2	11,2+0,3

Таблица 2

Содержание ЗАМ в гомогенатах печени крыс при интрадуоденальном введении компонентов

№ группы	Экспериментальные группы животных (п=20)	Содержание ЗАМ в печени рг/г (М±т)
2ч	4 ч.	6ч	8ч
11	Контрольная группа	8,4+0,2	8,5+0,2	8,1+0,3	8,3+0,2
12	Метионин	12,5+0,2	16,1+0,2	13,5+0,2	8,9+0,3
13	Метионин+инозин	15,2+0,2	21,4+,03	22,9+0,4	14,6+0,3
14	Метионин+ЯК	12,8+0,3	21,9+0,4	16,3+0,3	9,2+0,3
15	Метионин+таурин	16,3+0,2	17,8+03	16,4+0,3	11,7+0,2
16	Метионин+инозин+таурин	17,5+0,4	24,6+0,2	26,2+0,3	13,1+0,2
17	Метионин+инозин+ЯК	17,9+0,3	27,9+0,3	24,0+0,3	15,2+0,3
18	Метионин+таурин+ЯК	16,5+0,2	25,4+0,4	17,3+0,4	12,0+0,2
19	Метионин+инозин+ЯК+таурин	20,1+0,4	35,1+0,5	32,6+0,5	16,4+0,3
20	ЗАМ доза 32 мг/кг	12,3+0,2	15,7+0,4	14,4+0,2	11,2+0,2

Таким образом, установлено, что композиция, представляющая собой смесь метионина, инозина, янтарной кислоты и таурина, при интрадуоденальном введении обеспечивает максимально высокий уровень содержания ЗАМ в печени в наибольший интервал времени и обусловливает использование кишечно-растворимого покрытия для пероральной формы. При этом стимуляция биосинтеза ЗАМ в печени при введении заявляемой композиции обеспечивается за счет проявления сверхсуммарного эффекта взаимодействия активных компонентов.

Предпочтительные эффективные количества активных компонентов в композиции составляют, мас.%:

Метионин 4,5-16,7

Инозин 18,2-25,0

Янтарная кислота 41,7-68,2

Таурин 9,1-16,7

Заявляемая композиция, содержащая смесь метионина, инозина, янтарной кислоты и таурина в эффективных количествах, может быть реализована путем приготовления перорального лекарственного средства, например в виде таблетки.

- 5 015508

Опыт 2.

Для изготовления таблетки получают ядро, которое покрывают кишечно-растворимым покрытием.

Для получения ядер таблеток, смешивают: 50 г метионина, 100 г инозина, 250 г янтарной кислоты, 50 г таурина - активные компоненты и целевые добавки - крахмал, лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, коллоидный оксид кремния и/или другие фармакологически неактивные вспомогательные вещества, используемые в приготовлении таблетированных лекарственных форм. Полученную смесь гранулируют в сушилке-грануляторе раствором по крайней мере одного гранулирующего агента из ряда: метилцеллюлоза, повидон, гидроксипропилметилцеллюлоза, крахмал и др. Гранулят просеивают, опудривают стеаратом кальция или магния, стеариновой кислотой или другим лубрикантом. Из полученного гранулята получают около 600 г таблеток со средней массой 634 мг.

На полученные таблетки-ядра в установке кипящего слоя или барабанного типа наносят пленочное кишечно-растворимое покрытие до средней массы одной таблетки около 694 мг, обеспечивающее защиту от низкого рН желудочного сока и состоящее из сополимера метакриловой кислоты и этилакрилата, или ацетилфталилцеллюлозы, или шеллака, или другого резистентного к желудочному соку полимера, а также талька, диоксида титана, оксидов железа, пропиленгликоля, триэтилцитрата или других общепринятых в фармацевтической технологии наполнителей и пластификаторов, необходимых для образования качественного пленочного покрытия.

При этом одна таблетка, покрытая оболочкой, содержит:

	мг	мао. %
Янтарная кислота	250	35,97
Инозин	100	14,39
Таурин	50	7,19
Метионин	50	7,19
Целевые: добавки	184	26,48
Кишечно-растворимое покрытие	61	8,78
Итого:	695	100,00

Опыт 3.

Исследование токсичности заявляемой композиции проводили на комбинации, содержащей активные компоненты в максимальных эффективных количествах.

Исследование острой токсичности, проводимое по стандартной методике на 100 крысах породы Вистар при пероральном введении растертых таблеток, имеющих состав в соответствии с опытом 2, показало, что внутрижелудочное введение препаратов в дозах до 10000 мг/кг по готовой лекарственной форме крысам не вызывает изменений поведения и общего состояния животных, массовых коэффициентов органов относительно контрольных животных, макроскопических изменений головного мозга, внутренних и эндокринных органов опытных животных и не сопровождается раздражением или некрозом в месте основного введения препарата - слизистой оболочке желудка и кишечника.

При изучении хронической токсичности показано, что ежедневное в течение 120 дней пероральное введение препарата в дозах 152 и 1520 мг/кг крысам и в дозах 25,7 и 257 мг/кг кроликам обоего пола (по композиции активных начал) не приводит к развитию патологических сдвигов со стороны общего состояния и поведения животных, не оказывает токсического воздействия на сердечно-сосудистую деятельность, морфологический состав периферической крови и костного мозга, на функциональное состояние печени и почек, белковый, углеводный, жировой и электролитный виды обмена веществ, не вызывает дистрофических, деструктивных, очаговых склеротических изменений в паренхиматозных клетках и строме внутренних органов, а также не сопровождается местно раздражающим действием.

Таким образом, заявляемая композиция обладает низким уровнем общетоксического действия и в соответствии с общепринятым коэффициентом пересчета (Гуськова Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения. //Химико-фармацевтический журнал. - 1990. - № 7. С. 10-15) может быть использована для человека в дозе до 1800 мг смеси активных компонентов в сутки.

Опыт 4.

Изучение фармацевтической стабильности заявляемого перорального лекарственного средства в виде таблеток в сравнении с прототипом.

Изучение стабильности заявляемого перорального лекарственного средства в виде таблеток, полученных в соответствии с опытом 2, и таблеток прототипа, описанных в примере Е с пленочным покрытием Ό, проводили в стрессовых условиях (1СН О1Л. Ц1С: НапбЬоок о£ 8!аЫ1йу ТеШид ίη РЬагтасеибса1 □еуекртепЕ 2008).

Таблетки были упакованы в А1и/А1и блистеры. Стрессовому воздействию препарат подвергали в климатической камере Вшбег КВЕ-240 при Т=40°С и относительной влажности 75% в течение 6 месяцев. Результаты исследования представлены в табл. 3.

- 6 015508

Таблица 3

Характеристика таблеток заявляемой композиции и прототипа при стрессовом воздействии

Препарат, показатели качества	Характеристика таблеток при хранении в стрессовых условиях
0 мес.	1 мес.	3 мес.	6 мес.
Прототип
Содержание влаги, %	0,35+0,05	0,37+0,06	0,40+0,06	0,42+0,05
Количественное содержание
иона ЗАМ, мг	407,2+4,2	401,4+5,1	401,5+4,2	396,0+4,7
(8,3)-(+) 8-аденозил-Ь-метионин, %	82,6+3,9	79,8+3,4	74,2+3,5	72,1+2,1
Примеси:
Аденозин, %	0,25+0,01	0,36+0,02	0,46+0,02	0,55+0,03
Метилтиоаденозин,%	0,33+0,06	0,45+0,03	0,62+0,06	0,77+0,02
Заявляемая
Содержание влаги, %	0,77+0,03	0,82+0,05	0,82+0,06	0,80+0,05
Метионин	51,5+0,3	52,0+0,3	52,20+0,3	51,3+0,3
Янтарная кислота	249,0+4,6	252,4+4,8	248,4+4,2	252,9+5,3
Инозин	102,7+0,5	101,9+0,4	102,1+0,4	102,3+0,5
Таурин	50,3+0,8	49,8+0,7	49,8+0,7	50,0+0,8
Примеси:
Гипоксантин, %	0,15+0,01	0,14+0,02	0, 16+0,01	0,15+0,01
Гуанозин, %	0,10+0,02	0,13+0,03	0,12+0,02	0,13+0,04
Неидентифицированные примеси	0,45+0,05	0,43+0,02	0,55+0,04	0,50+0,02

Представленные данные показывают, что при хранении количественное содержание 8АМ в прототипе снижается, а количество примесей растет. Кроме того, наблюдается рацемизация 8АМ с образованием неактивного оптического изомера (Я,8)-(+) 8-аденозил-Ь-метионина и падением активного (8,8)-(+) 8-аденозил-Ь-метионина.

Пероральное лекарственное средство на основе заявляемой композиции проявляет более высокую стабильность - количество активных компонентов не уменьшается, и существенного прироста примесей не наблюдается. Это свидетельствует о преимуществе предлагаемого препарата с точки зрения сохранения дозировки активных компонентов и снижения риска побочных эффектов в результате образования примесей.

Опыт 5.

Изучение биодоступности активных компонентов и эффективности пероральной лекарственной формы на основе заявляемой композиции в сравнении с прототипом путем исследования 8АМстимулирующей активности было проведено на 36 кроликах породы шиншилла.

Все животные получали стандартный гранулированный корм и содержались в виварии в соответствии с принятыми международными нормами обращения с лабораторными животными. Животные были разделены на 3 группы по 12 особей.

Животным первой экспериментальной группы вводили по одной таблетке, полученной в опыте 2.

Животным второй экспериментальной группы вводили по 2 таблетки с суммарным содержанием 8АМ 400 мг согласно прототипу (пример Е с пленочным покрытием И).

Животным третьей экспериментальной (контрольной) группы вводили плацебо - таблетки, приготовленные из фармакологически неактивных ингредиентов: 400 мг лактозы, 400 мг микрокристаллической целлюлозы, оксипропилметилцеллюлозу, полисорбат 80, кальция стеарат и покрытые сополимером метакриловой кислоты и этилакрилата.

В каждой группе животных через 2, 4, 6 и 8 ч после перорального введения препаратов забивали по 3 особи и извлекали печень для количественного определения 8АМ. Концентрацию 8АМ в гомогенатах печени определяли методом ВЭЖХ.

Полученные данные, представленные в табл. 4, показали, что заявляемая композиция в виде таблеток, покрытых кишечно-растворимой оболочкой обладает высокой биодоступностью активных компонентов, поскольку обеспечивает в 1,7-2,5 раза более высокий уровень концентрации 8АМ в печени кроликов по сравнению с прототипом.

Таблица 4

Концентрация 8АМ в гомогенатах печени кроликов при пероральном введении

Препарат	Концентрация БАМ в гомогенатах печени цг/г (М±ш)
2 ч	4 ч	6 ч	8ч
Заявляемая композиция	19,1+0,3	41,0+0,5	54,4+0,5	31,6+0,5
Прототип	10,3+0,3	18,7+0,4	21,3+0,4	18,4+0,2
Контроль (плацебо)	7,0+0,2	7,4+0,2	6,5+0,2	7,2+0,2

- 7 015508

Опыт 6.

Исследование гепатопротекторного действия заявляемого перорального лекарственного средства на модели полиорганного алкогольного поражения.

Опыт был поставлен на основе стандартной модели алкогольного полиорганного поражения. В эксперименте использовано 80 особей крыс-самцов породы Вистар стандартной массы (160-170 г). Для моделирования токсического гепатоза у 60 крыс использовали этанол, который вводили 3 раза в день внутрижелудочно через металлический атравматичный зонд в дозе 4 г/кг (половина от ЬИ5₀) на протяжении 5 дней (этанол разводили в дистиллированной воде до 40% концентрации). Через 6 дней у части экспериментальных животных, по морфологической картине печени, подтверждалось наличие токсического жирового гепатоза.

Интоксикация этанолом нарушала функциональную активность печени: белково-синтетическую, детоксицирующую, липосинтезирующую. Это сопровождалось биохимическими признаками цитолиза. В крови повышалась активность трансаминаз, фосфатаз, снижалось содержание в сыворотке крови общего белка, липидов, резерва сульфгидрильных групп, повышались уровни билирубина и церулоплазмина. В печени уменьшались запасы гликогена, восстановленного глутатиона, уровни детоксицирующих цитохромов. Поражения печени сопровождалось снижением ее функциональной активности: значительно возрастала длительность гексеналового сна, замедлялась экскреция бромсульфалеина.

Всего было сформировано 4 экспериментальные группы по 20 животных, которым после формирования токсического алкогольного гепатоза на протяжении 10 дней с лечебной целью вводили с помощью атравматичного зонда 1 раз в сутки препараты:

1) группа интактных животных без алкогольной интоксикации (контроль модели алкогольной интоксикации);

2) группа животных с алкогольной интоксикацией без лечения - вводили 10%-ную крахмальную суспензию;

3) группа животных с алкогольной интоксикацией и лечением заявляемой композицией, которую вводили в виде растертых таблеток, полученных в соответствии с опытом 2, в дозе 180 мг/кг по сумме активных компонентов в составе 10%-ной крахмальной суспензии;

4) группа животных с алкогольной интоксикацией и лечением прототипом (пример Е с пленочным покрытием И) в виде растертых таблеток в составе 10%-ной крахмальной суспензии в дозе, эквивалентной 8АМ 160 мг/кг.

Гепатопротекторную активность заявляемого средства в сравнении с прототипом оценивали по нескольким группам показателей: биохимическим, морфометрическим, функциональным. О гепатопротекторной эффективности судили по клинической картине, динамике массы тела, относительной массе печени, содержанию билирубина, трансаминаз, фосфатаз, церулоплазмина, общего белка, липидов сыворотки крови, содержанию гликогена, глутатиона, 8Н-групп, глютамилтрансферазы, цитохромов в печени, нагрузочным пробам (гексеналовый тест, бромсульфоалеиновая проба) и гистологической картине печени. Статистическую обработку результатов экспериментов проводили по Стьюденту -Фишеру.

Клиническая картина во второй группе крыс, получавших этанол без лечения, характеризовалась гиподинамией, заторможенностью, взъерошенностью шерсти и неопрятностью животных. Они хуже набирали вес, чем остальные крысы. В этой группе к 17-му дню исследования погибло 60% животных.

В третьей группе животных, получавших заявленное лекарственное средство, процент гибели составил 20%, резко уменьшилось проявление интоксикации у крыс, вызванное введением этанола - животные были подвижны, опрятны, обладали хорошим аппетитом.

В четвертой группе, получавшей прототип, наблюдалась гибель у 40%животных, наблюдалось улучшение поведенческих реакций, однако они были менее выражены по сравнению с животными третьей группы.

Интоксикация этанолом сопровождается снижением массы тела и увеличением относительной массы печени. Лечение заявленным средством способствует нормализации этих показателей в большей степени по сравнению с прототипом (табл. 5): масса печени крыс третьей группы была на 25,7% меньше массы печени крыс, получавших лечение прототипом, и практически не отличалась от относительной массы интактных животных.

Смертность животных в группе прототипа на модели алкогольного поражения печени была в 1,5 раза выше, при этом биохимические показатели выживших животных в группах различались незначительно; достоверная разница в сравниваемых группах была получена по данным динамики АлАТ, щелочной фосфатазы и тимоловой пробы. Полученные данные коррелировали с результатами биохимических анализов (табл. 5, 6).

- 8 015508

Таблица 5

Масса тела крыс и относительная масса печени

Изучаемые показатели (М±т)	Экспериментальные группы
Интактные животные	Без лечения	Лечение заявляемой композицией	Лечение прототипом
Масса тела, г	181,5 ±4,8	161,5 ±8,9	180,2 ±8,4	172,0 ±6,1
Относительная масса печени, мг/100 г	46,2 ± 2,3	71,1 ±4,4	50,2 ± 3,4	63,1 ±3,8

Таблица 6

Биохимические и функциональные показатели состояния печени

Изучаемые показатели (М±т)	Экспериментальные группы
Интактные	Без лечения	Заявляемая КОМПОЗИЦИЯ	Прототип
Общий белок, г/л	64*1	31 ±2*	63 ±4	58 ±5
Общие липида, г/л	3,4 ± 0,3	2,4 ± 0,2*	3.6 ±0,1	з,з*оэ
АлАТ сьге-ка, мкмоль/с.л	0,30±0,01	2,49±0,09*	0,32±0,08й	0,57±0,09*
АсАТ сыв-ка, мкмоль/(с.л)	0,19±0,02	0,38±0,02*	0,22±0,04	0,34±0,11
КФ, мккат/л	0,73±0,10	2,28±0,18*	0,71±0,11	1,03±0,11*
Щелочная фосфатаза, ккат/л	0,68±0,08	2,53±0,22*	0,69±0,10й	0,9б±0,14
ЛДГ, ммоль/ч/л	4,82±0,30	8,39±0,35*	4,68±0,30	5,45±0,36
Тимоловая проба, ед.помутнения	1,40±0,01	5,88±0,35*	1,39±0,1СР	2,91±0,48*
8Н-группы, сыворотка, мг%	1532 ± 64	258 ±39*	1568 ±39	1619 ±73*
Восстановленный глутатион, печень, мг%	167 ±5	59 ± 10*	172 ± 12	165 ±8
Р4м, печень, ммоль/мг белка хЮ4	1,15 ±0,03	0,55±0,08*	1,19 ±0,03	0,95±0,03
В5, печень, ммоль/мг белка хЮ^*	0,85 ± 0,04	0,57±0,05*	0,81 ± 0,01	0,71±0,03
Гликоген, печень, мг%	2466±100	722±77*	2413±105	2180±144
Гексеналовый сон, сек	24,8±5,9	99,2±9,4	24,1±5,6	29,9±4,7
Концентрация бромсульфалеина на 10-й минуте после введения, сыворотка, экстинция	13,5±0,8	40,3±4,2*	13,7±0,5	13,3±0,7
Церулоплазмин, сыворотка, мг/л	408 ±20	980 ±79*	441 ±21	484 ±25
Холестерин, сыворотка, ммоль/л	1,83 ± 0,22	1,29±0,20	1,78 ±0,34	1,64±0,20
Билирубин общий, сыворотка, ммоль/л	3,1±0,3	7,2±0,2*	3,2±0,1	3,7±0,4

Примечания: *-Р<0.05 по сравнению с интактными животными; ^Δ -Р<0,05по сравнению с прототипом

Таким образом, на модели полиорганного алкогольного поражения установлено, что заявляемое лекарственное средство обладает гепатопротекторным действием и превосходит прототип по показателям смертности животных, динамике нормализации морфологических и биохимических показателей поражения печени.

Опыт 7.

Терапевтическую эффективность перорального лекарственного средства на основе заявляемой композиции изучали при цитолитическом синдроме у больных туберкулезом легких на фоне химиотерапии.

Эффективность лекарственного средства оценивали у 65 больных туберкулезом легких в сочетании с гепатитами В и С в сравнении с прототипом - таблетками с содержанием активного компонента БАМ 400 мг на фоне активной противотуберкулезной терапии. Характеристика больных при включении в исследование представлена в табл. 7.

- 9 015508

Таблица 7

Клиническая характеристика больных до начала лечения

Характеристика пациентов	Заявляемая композиция	Прототип
Общее количество пациентов	33	32
Количество мужчин	21	17
Количество женщин	11	15
Средний срок химиотерапии туберкулеза, мес	1,4	1,5
Количество пациентов с хроническим гепатитом В	6	8
Количество пациентов с хроническим гепатитом С	25	20
Количество пациентов с хроническим сочетанным гепатитом В и С	2	3

В исследуемые группы путем рандомизации методом конвертов включались пациенты, получающие активную противотуберкулезную терапию в интенсивной фазе в соответствии с рекомендациями ВОЗ со сроком лечения более 1 месяца. Больные включались в исследование при уровне АлАТ, превышающим норму в 1,5 раза, что по рекомендациям ВОЗ требует отмены химиотерапии или перевод на негепатотоксичный режим (с назначением трех препаратов: стрептомицин, этамбутол и фторхинолоны), способствующий росту лекарственной устойчивости МБТ.

Курс лечения в исследуемой группе пациентов (п=33) составил 2 таблетки 2 раза в день в течение 25 суток. В группе сравнения (п=32) аналогичные пациенты получали прототип по 2 таблетки 2 раза в сутки. Объем этиотропной терапии - 4-6 противотуберкулезных химиопрепаратов, при этом количество больных с МЛУ МБТ, получавших терапию по IV режиму, достоверно не отличалось в исследуемых группах (36,4 и 34,4% соответственно). Эффективность лечения оценивали на 26-28 сутки от начала лечения. Противотуберкулезная терапия сохранялась в полном объеме. Критериями эффективности лекарственного средства на основе заявляемой композиции в сравнении с прототипом служили следующие параметры.

1. Число пациентов, у которых уровень цитолиза снизился до 1-1,5 норм после окончания курса (полная биохимическая ремиссия) без потребности перевода на внутривенную гепатопротекторную терапию.

2. Число пациентов, у которых уровень цитолиза оставался выше 1,5 норм после окончания курса (частичная биохимическая ремиссия), которым требуется перевод на внутривенную гепатопротекторную терапию.

3. Число пациентов, не ответивших на терапию, а также пациенты с нарастанием уровня цитолиза (отсутствие биохимической ремиссии).

4. Количество побочных эффектов заявляемого препарата в сравнении с прототипом в течение курса лечения.

В обеих группах у пациентов наблюдались схожие побочные явления - боли в эпигастральной области и головные боли, не требующие отмены препаратов.

Полученные данные (табл. 8, 9) свидетельствуют о том, что лекарственное средство на основе заявляемой композиции в виде таблеток, покрытых кишечно-растворимой оболочкой (опыт 2), обладает более высокой терапевтической эффективностью в отношении цитолитического и холестатического синдромов по сравнению с прототипом.

Таблица 8

Динамика биохимических показателей цитолиза и холестаза у больных туберкулезом легких на фоне химиотерапии в сравнении с прототипом

Параметр	Заявляемая композиция (п=33)	Прототип (п=32)
До лечения	После лечения	До лечения	После лечения
Активность АЛТ, МЕ/л	192,8±18,3	62,4±4,4	187,6±15,3	121,9±10,2*
Гаммаглугамилтранспептидаза	120,6±10,7	62Д±5,9	122,7±11,2	92,4±8,6*

*- различия в сравниваемых показателях достоверны в разных группах, р<0,05

- 10 015508

Таблица 9

Эффективность заявляемой композиции при цитолитическом синдроме у больных туберкулезом легких на фоне химиотерапии в сравнении с прототипом

Параметр	Заявляемая композиция (п=33)	Прототип (п=32)
Число пациентов с полной биохимической ремиссией, чел (%)	26 (79)	8(25)
Число пациентов с частичной биохимической ремиссией, чел (%)	5(15)	15 (47)
Число пациентов, не ответивших на терапию (отсутствие биохимической ремиссии), чел (%)	2(6)	9(28)
Чисто пациентов, у которых наблюдались побочные эффекты, чел (%)	2(6)	2(6)

Таким образом, пероральное лекарственное средство, созданное на основе заявляемой фармацевтической композиции, стимулирующей биосинтез 8-аденозилметионина, обладает высокой эффективностью гепатопротекторного действия и стабильностью лекарственной формы при отсутствии побочных явлений, и может быть использовано при лечении заболеваний, сопровождающихся поражениями печени.

Claims (3)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Фармацевтическая композиция, стимулирующая биосинтез 8-аденозилметионина, характеризующаяся тем, что она содержит смесь метионина, янтарной кислоты, инозина и таурина в эффективных количествах.
2. 2. Пероральное лекарственное средство в виде таблетки, содержащей активный и вспомогательные компоненты, отличающееся тем, что в качестве активного компонента таблетка содержит фармацевтическую композицию по п.1.
3. 3. Пероральное лекарственное средство по п.2, обладающее гепатопротекторным действием.