EA015458B1 - Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ её получения - Google Patents
Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ её получения Download PDFInfo
- Publication number
- EA015458B1 EA015458B1 EA201001684A EA201001684A EA015458B1 EA 015458 B1 EA015458 B1 EA 015458B1 EA 201001684 A EA201001684 A EA 201001684A EA 201001684 A EA201001684 A EA 201001684A EA 015458 B1 EA015458 B1 EA 015458B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- vaccine
- rabies
- strain
- virus
- rabies virus
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, а именно к вакцине против бешенства и способу ее получения. Для повышении эффективности за счет увеличения антигенной и иммуногенной активности и безвредности предложенная вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, включающую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU/см, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер - тетрациклин, при определенном соотношении компонентов. В качестве авирулентного штамма вируса бешенства вакцина содержит штамм вируса бешенства PB-97 или ERA G333. В качестве неочищенного зерна хлебных злаков вакцина содержит зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса. В способе получения вакцины вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка BHK-21/13-02 или почки сайги; полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 lg FFU/см,замораживают при -(20-40)°C в контейнерах, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 мин при температуре 55-60°C, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°C, в каждую ячейку формы помещают замороженную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре -(20-40)°C. В качестве контейнера для культуральной жидкости используют пакеты
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, может быть использовано при разработке средств специфической профилактики и, в частности, для получения вакцины против бешенства животных.
Одним из наиболее важных факторов борьбы с бешенством является оральная вакцинация диких плотоядных, являющихся природным резервуаром болезни.
Известен способ получения антирабической вакцины, согласно которому репродуцированный в роллерном монослое культуры перевиваемых клеток ВНК-21 вирус бешенства подвергают термической обработке до сохранения им в обрабатываемой популяции 0,001-0,0001% интрацеребральных мышиных ЛД50, затем термообработанный вирус вновь размножают в названной клеточной системе и полученную вируссодержащую культуральную жидкость используют в качестве производственного посевного материала для заражения производственной роллерной расплодки клеток ВНК-21. Инфицированные клетки производственной расплодки вновь высевают примерно на учетверенное количество бутылей, где они культивируются в течение 5-6 суток, с проведением трех сборов вируссодержащей культуральной жидкости, пригодной для изготовления сухих и жидких антирабических вакцин с иммуногенностью 2,3-2,5 МЕ/мл. Этот способ исключает возможность включения в состав конечного продукта мозговой ткани овец и, следовательно, возбудителя скрейпи. Этим он выгодно отличается от предыдущего аналога (патент РФ 2191600, зарегистрирован 27 октября 2002 г.).
Недостатком аналога является сложность процесса получения целевого продукта, поскольку промышленная реализация сопровождается очень трудоемкими и многочисленными операциями, связанными с раздельным получением вирусного и клеточного производственного посевного материала в роллерных бутылях, а также с мойкой и подготовкой большого количества сосудов культивирования и индивидуальной боксовой работы с каждым из них. Многократное манипулирование с бутылями, содержащими незараженные клетки и клетки, инфицированные вирусом бешенства, увеличивает вероятность бактериального загрязнения вакцинного сырья и обусловливает необходимость тщательного контроля каждого сбора вируса из каждого сосуда культивирования. Все это приводит к удорожанию конечного продукта и затрудняет производство препарата на должном качественном уровне в необходимых для ветеринарной практики количествах.
Известен также способ получения антирабической вакцины для животных, включающий приготовление посевного материала из штамма вируса бешенства, инфицирование посевным материалом культуры перевиваемых клеток, культивирование вируса бешенства, сбор вируссодержащей жидкости с последующим приготовлением целевого продукта в жидкой форме (патент РФ № 2287343, Способ получения антирабической вакцины, Бюл. № 26, 31.05.2005, МКИ А61К 39/205).
Наиболее близким техническим решением является вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты (патент РФ 2311924, МКИ А61К 39/205, Бюл. № 16, 2007.12.10), в частности содержит лиофилизированный вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства с защитными компонентами, молоко сухое обезжиренное, лактозу, порошок яичный, мел тонкодисперсный Т-60, мел тонкодисперсный Т-90 и стеарат кальция при определенном соотношении компонентов.
Недостатки этого технического решения состоят в том, что полученная вакцина имеет низкое качество целевого продукта, выявляемое при оральном введении животным, обладает низкой иммуногенностью, обусловливающей невысокую защиту организма диких животных. Она не является гомогенной, брикеты нестандартизованы, неустойчивы к воздействию влаги и могут крошиться при хранении.
Технический результат от использования изобретения заключается в повышении эффективности за счет увеличения антигенной и иммуногенной активности и безвредности вакцины.
- 1 015458
Поставленная задача достигается тем, что вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличается тем, что содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 1д ТЕЩУсм3, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер - тетрациклин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0- 8,5 1§ ГРи50/см3
Тетрациклин
Парафин или пищевой полимер
Неочищенное зерно хлебных злаков
Рыбная мука
Говяжий жир
1,0-4,0
0,3-1,2
5,0-10,0
5,0-15,0
30,0-40,0 остальное
Поставленная задача достигается также тем, что вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1 отличается тем, что в качестве авирулентного штамма вируса бешенства содержит авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 или ЕВА 0333.
Поставленная задача достигается также тем, что в вакцине против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве неочищенного зерна хлебных злаков содержится зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса.
Поставленная задача достигается также тем, что вакцина против бешенства для оральной иммуни зации диких плотоядных животных в качестве пищевого полимера содержит коллаген, или крахмал, или целлюлозу.
Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающей вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги, полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 1д ЕЕи50/см3, замораживают при -(20-40)°С, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 мин при температуре 55-60°С, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С, в каждую ячейку формы помещают культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре -(20-40)°С.
Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, помещают в контейнеры.
Поставленная задача достигается также тем, что в способе получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных в качестве контейнера для культуральной жидкости, содержащего авирулентный штамм вируса бешенства, используют пакеты из полиэтилена или блистеры из желатина.
Тетрациклин (химическое название [48-(4а,4аа,5аа,6в,12аа)]-4-(диметиламино)1,4,4а,5,5а,6,11,12а-октагидро-3,6,10,12,12а-пентагидрокси-6-метил-1,11-диоксо-2-нафтаценкарбоксамид (и в виде гидрохлорида или тригидрата) [брутто-формула С22Н24Ы2О8] - антибактериальное вещество широкого спектра, бактериостатическое. Нарушает образование комплекса между транспортной РНК и рибосомой, что приводит к нарушению синтеза белка. Активен в отношении грамотрицательных бактерий. Используется в предложении в качестве маркера (при заглатывании вакцины тетрациклин накапливается в зубах животных и по его количеству определяют, какое количество вакцины потребляло животное).
Известно использование перевиваемой монослойно-суспензионной сублинии клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 для изготовления противовирусных вакцин против ящура и бешенства (патент РФ № 2300562, МКИ С12Ы 5/06, Бюл. № 16, 2007.06.10).
Известно использование клеток почки сайги для культивирования вируса ящура (патент РФ № 2311924, МКИ А61К 39/205, Бюл. № 16, 2007.12.10), однако нет сведений о возможности культивирования на них вируса бешенства РВ-97 или ЕВА 0333.
Использование неочищенного зерна хлебных злаков позволяет нарушать целостность слизистой ротовой полости животных, что увеличивает эффект их вакцинирования.
- 2 015458
В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию новизна.
Предложение осуществимо в лабораторных и промышленных условиях, направлено на решение реальной технической задачи, т.е. предложение промышленно применимо.
Изобретение иллюстрируется на следующих примерах.
Пример 1.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм РВ-97 с титром, например, 6,0 1д РРИ5о/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х 109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-120 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 1д РРИ50/см3, которую замораживают при температуре -20°С по 1 г. Далее смешивают 0,3 г тетрациклина, 5 г парафина, 5 г неочищенного овса, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 1д РРи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный1,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-1§РРи50/см3
Тетрациклин0,3
Парафин5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков5,0 .
Рыбная мука30,0
Говяжий жир остальное
Пример 2.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 1д РРи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х 109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х 1010.
- 3 015458
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 1д РРИ50/см3, которую замораживают при температуре -40°С по 4 г. Далее смешивают 1,2 г тетрациклина, 10 г парафина, 15 г неочищенного овса, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 1д РРи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный 4,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности
8,5 Ц РРи50/см3
| Тетрациклин Парафин Неочищенное зерно хлебных злаков | 1,2 10 15,0 |
| Рыбная мука | 40,0 |
| Говяжий жир | остальное |
Пример 3.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕВА 0333 с титром, например, 6,3 1д ЕЕи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбу мина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 40-120 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 0333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, которую замораживают при температуре -20°С по 1 г. Далее смешивают 0,3 г тетрациклина, 5 г парафина, 5 г неочищенного зерна пшеницы, 30 г рыбной муки и
58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 0333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, и шпателем разравнива
- 4 015458 ют поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Культуральная жидкость, содержащая авирулентный | 1,0 |
| штамм вируса бешенства с титром инфекционности | |
| 6,0 18 РРи5О/см3 | |
| Тетрациклин | 0,3 |
| Парафин | 5,0 |
| Неочищенное зерно хлебных злаков | 5,0 |
| Рыбная мука | 30,0 |
| Говяжий жир | остальное |
Пример 4.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕВА 6333 с титром, например, 7,0 1д ЕГи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 30-100 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 6333 с титром инфекционности 8,5 1д ЕЕи50/см3 , которую замораживают при температуре -40°С по 4 г. Далее смешивают 1,2 г тетрациклина, 10 г парафина, 15 г неочищенного зерна пшеницы, 40 г рыбной муки и
29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 6333 с титром инфекционности 8,5 1д ЕЕи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Культуральная жидкость, содержащая авирулентный | 4,0 |
| штамм вируса бешенства с титром инфекционности | |
| 8,5 1ё гги50/ом3 | |
| Тетрациклин | 1,2 |
| Парафин | 10 |
| Неочищенное зерно хлебных злаков | 15,0 |
| Рыбная мука | 40,0 |
| Говяжий жир | остальное |
- 5 015458
Пример 5.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм РВ-97 с титром, например, 6,3 1д РРи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х 109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 1д РРи50/см3, которую замораживают при температуре -20°С по 1 г. Далее смешивают 0,3 г тетрациклина, 5 г коллагена, 5 г неочищенного зерна ржи, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 1д РРИ50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный1,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности
6,0 1е. РРи5О/см3
Тетрациклин0,3
Пищевой полимер5,0
Неочищенное зерно хлебных злаков5,0
Рыбная мука30,0
Говяжий жир остальное
Пример 6.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 1д РРи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х 109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
- 6 015458
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 1д РРИ50/см3, которую замораживают при температуре -40°С по 4 г. Далее смешивают 1,2 г тетрациклина, 10 г коллагена, 15 г неочищенного зерна ржи, 40 г рыбной муки и 29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 1д РРи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный 4,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности
8,5 РРи50/см3
| Тетрациклин Пищевой полимер Неочищенное зерно хлебных злаков Рыбная мука Говяжий жир | 1,2 10 15,0 40,0 остальное |
Пример 7.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕВА С333 с титром, например, 6,3 1д ЕЕи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбу мина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА С333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, которую замораживают при температуре -20°С по 1 г. Далее смешивают 0,3 г тетрациклина, 5 г крахмала, 5 г неочищенного зерна ячменя, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА С333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, и шпателем разравнивают по- 7 015458 верхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Культуральная жидкость, содержащая авирулентный | 1,0 |
| штамм вируса бешенства с титром инфекционности | |
| 6,0 1§ гги50/см3 | |
| Тетрациклин | 0,3 |
| Пищевой полимер | 5,0 |
| Неочищенное зерно хлебных злаков | 5,0 |
| Рыбная мука | 30,0 |
| Говяжий жир | остальное |
Пример 8.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕКА 6333 с титром, например, 7,0 1д ЕЕИ50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х101С1.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ЕКА 6333 с титром инфекционности 8,5 1д ЕЕи50/см3, которую замораживают при температуре -40°С по 4 г. Далее смешивают 1,2 г тетрациклина, 10 г крахмала, 15 г неочищенного зерна ячменя, 40 г рыбной муки и
29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ЕКА 6333 с титром инфекционности 8,5 1д ЕЕи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении комронентов, мас.%:
| Культуральная жидкость, содержащая авирулентный | 4,0 |
| штамм вируса бешенства с тигром инфекционности | |
| 8,5 1§ гги5о/см3 | |
| Тетрациклин | 1,2 |
| Парафин | 10 |
| Неочищенное зерно хлебных злаков | 15,0 |
| Рыбная мука | 40,0 |
| Говяжий жир | остальное |
- 8 015458
Пример 9.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕВА 6333 с титром, например, 6,3 1д ЕЕи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2 . На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 6333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, которую замораживают при температуре -20°С по 1 г. Далее смешивают 0,3 г тетрациклина, 5 г целлюлозы, 5 г неочищенного зерна ячменя, 30 г рыбной муки и 58,7 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 1 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 6333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Культуральная жидкость, содержащая авирулентный | 1,0 |
| штамм вируса бешенства с титром инфекционности | |
| 6,0 1£ гги5(/см3 | |
| Тетрациклин | 0,3 |
| Пищевой полимер | 5,0 |
| Неочищенное зерно хлебных злаков | 5,0 |
| Рыбная мука | 30,0 |
| Говяжий жиц | остальное |
Пример 10.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕВА 6333 с титром, например, 7,0 1д ЕЕи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
- 9 015458
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 0333 с титром инфекционности 8,5 1д РРИ50/см3, которую замораживают при температуре -40°С по 4 г. Далее смешивают 1,2 г тетрациклина, 10 г целлюлозы, 15 г неочищенного зерна ячменя, 40 г рыбной муки и
29,8 г говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С, помещают в пластиковую форму и распределяют ее шпателем по всей площади формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45,0°С в течение всего времени розлива. В форму (пластиковые формы для изготовления вакцины имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно, а вес готовой вакцины, помещаемой в пластиковые формы, составляет 100 г) помещают 4 г замороженной культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства ЕВА 0333 с титром инфекционности 8,5 1д РРи50/см3, и шпателем разравнивают поверхность формы. Заполненную форму помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| Культуральная жидкость, содержащая авирулентный | 4,0 |
| штамм вируса бешенства с титром инфекционности | |
| 8,5 ГРИзо/см3 | |
| Тетрациклин | 1,2 |
| Парафин | 10 |
| Неочищенное зерно хлебных злаков | 15,0 |
| Рыбная мука | 40,0 |
| Говяжий жир | остальное |
Пример 11.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм РВ-97 с титром, например, 6,3 1д РРи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х 109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин, с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины - 3,2х 1010.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 6,0 1д РРИ50/см3, который разливают в контейнеры - полиэтиленовые пакетики по 1 г и замораживают при температуре -20°С. Далее смешивают 0,3 кг тетрациклина, 5 кг парафина, 5 кг неочищенного овса, 30 кг рыбной муки и 58,7 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 99 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно) помещают контейнер (полиэтиленовый пакетик) с замороженным вируссодержащим материалом массой 1 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следую- 10 015458
1,0
0,3
5,0
5,0
30,0 остальное щем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности
6,01§ гги5О/см3
Тетрациклин
Парафин
Неочищенное зерно хлебных злаков
Рыбная мука
Говяжий жир
Пример 12.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства штамм РВ-97 с титром, например, 7,0 1д РРЩ/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х 109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбумина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства РВ-97 с титром инфекционности 8,5 1д РРи50/см3, который разливают в контейнеры - полиэтиленовые пакетики по 4 г и замораживают при температуре -40°С. Далее смешивают
1,2 кг тетрациклина, 10 кг парафина, 15 кг неочищенного овса, 40 кг рыбной муки и 29,8 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива полученной смесью по 96 г в каждую ячейку формы и распределяют ее шпателем по всей площади формы так, чтобы все ячейки формы были заполнены массой. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно) помещают контейнер (полиэтиленовый пакетик) с замороженным вируссодержащим материалом массой 4 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно) помещают контейнер с замороженным вируссодержащим материалом и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты массой для приманок. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный 4,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности
8,5 1^ РРи50/см3
Тетрациклин
Парафин
Неочищенное зерно хлебных злаков
Рыбная мука
Говяжий жир
1,2
15,0
40,0 остальное
- 11 015458
Пример 13.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕВА 6333 с титром, например, 6,3 1д ЕЕи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбу мина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100-120 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства ЕВА 6333 с титром инфекционности 6,0 1д ЕЕи50/см3, который разливают в контейнеры - желатиновые блистеры по 1 г и замораживают при температуре -20°С. Далее смешивают 0,3 кг тетрациклина, 5 кг парафина, 5 кг неочищенного овса, 30 кг рыбной муки и 58,7 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 25 мин при температуре 55°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 99 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 40°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,5:3,5 соответственно) помещают контейнер (желатиновый блистер) с замороженным вируссодержащим материалом массой 1 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -20°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный 1,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности б,о ΐβ гги5О/см3
| Тетрациклин Парафин Неочищенное зерно хлебных злаков Рыбная мука Говяжий жир | 0,3 5,0 5,0 30,0 остальное |
- 12 015458
Пример 14.
Для приготовления вакцины используют сухой культуральный матровый вирус бешенства, штамм ЕКА 6333 с титром, например, 7,0 1д ЕЕи50/см3 и перевиваемые клетки ВНК-21, выращенные, например, в 10-роллерных бутылях. К снятым со стекла 6,0х109 клеткам добавляют 10 мл вируса. После этого клетки, инфицированные вирусом в дозе 0,003 МЛД 50/клетку, вносят в 100-литровый реактор, содержащий 20 л питательной среды, приготовленной, например, на основе сред: Игла, 199, гидролизата лактальбу мина и сыворотки крови крупного рогатого скота.
Инфицированные клетки выращивают при постоянном вращении мешалки со скоростью 100 об/мин с подачей в жидкую фазу стерильного воздуха. В данном конкретном примере через 45 ч культивирования общее количество клеток в реакторе достигло величины 3,2х1010. После их осаждения и удаления отработанной питательной среды в реактор вносят 60 л свежей питательной среды и микроносители, например Цитодекс-2, с общей полезной поверхностью около 150000 см2. На каждый 1 см2 носителя пришлось 2,1 х 105 клеток и 0,4 мл питательной среды.
Дальнейшее культивирование инфицированных клеток проводят при постоянном вращении мешалки со скоростью 50-70 об/мин с проведением сборов вируссодержащей жидкости через каждые 24 ч, с одновременной заменой питательной среды. При этом в состав питательной среды вначале вносят сыворотки в конечной концентрации 1%, а затем на 2-, 3-, 4-е сутки культивирования доводят до концентрации сыворотки в питательной среде 2, 3, 7% соответственно.
Объем каждого сбора составляет 55-56 л. Всего получено из одного сосуда культивирования (100-литрового реактора) 6 сборов вируссодержащего материала общим объемом около 330 л.
Получена культуральная жидкость - вируссодержащий материал с содержанием авирулентного штамма вируса бешенства ЕКЛ 6333 с титром инфекционности 8,5 1д ЕЕи50/см3, который разливают в контейнеры - желатиновые блистеры по 4 г и замораживают при температуре -40°С. Далее смешивают
1,2 кг тетрациклина, 10 кг парафина, 15 кг неочищенного овса, 40 кг рыбной муки и 29,8 кг говяжьего жира. Смесь тщательно перемешивают в реакторе в течение 30 мин при температуре 60°С. На металлические столы помещают формы пластиковые для розлива массы и наполняют их по 96 г в каждую ячейку формы. Во время розлива готовой массы поддерживают ее температуру в пределах 45°С в течение всего времени розлива. В каждую ячейку формы (пластиковые формы имеют соотношение размера ширины, высоты и длины, равное 1:1,0:2,0 соответственно) помещают контейнер (желатиновый блистер) с замороженным вируссодержащим материалом массой 4 г и шпателем разравнивают поверхность формы таким образом, чтобы все пакетики были покрыты пищевой массой. Заполненную форму по транспортерной ленте помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре -40°С, получая при этом вакцину против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Культуральная жидкость, содержащая авирулентный4,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности
8,5 1£ ГЕид/см5
Тетрациклин1,2
Парафин10
Неочищенное зерно хлебных злаков15,0
Рыбная мука40,0
Говяжий жир остальное.
Готовые вакцины, полученные по примерам 1-14, испытывают на прочность (при свободном падении с высоты 10 м вакцина оставалась целой), влагоустойчивость в деминерализованной воде (при экспозиции в течение 24 ч при 20°С вакцина сохраняла форму), контаминацию грибной и бактериальной микрофлорой (количество микробных тел в 1 см3 приманки не превышает 500), стабильность вируссодержащего материала (инфекционная активность вакцинного вируса, помещенного в приманки, не изменялась в течение 15 дней при температуре 4°С и в течение 10 дней при 20°С), безвредность (пятикратные дозы, скормленные 6-месячным щенкам лис, не вызывали видимых клинических изменений в течение 60 суток, интрацеребральное введение 6,0 1д ЕЕи50/см3 5 лисам и 5 песцам не вызывало клинических признаков бешенства и все животные оставались клинически здоровыми в течение 90 дней). Через 60 суток после иммунизации 7 из 11 лис, иммунизированных 1 дозой вакцины, имели титры вируснейтрализующих антител выше минимально допустимого предела в 0,5 МЕ и 10 из 11 лис (91%) выжили после контрольного заражения вирулентным вирусом бешенства.
Вакцина для орального применения сохраняла свои иммунобиологические характеристики в течение 6 месяцев при - 20°С.
- 13 015458
Представленные данные показывают, что предлагаемая технология изготовления предлагаемой вакцины позволяет получить безвредную и стабильную вакцину против бешенства с высокой иммунологической эффективностью при оральной иммунизации плотоядных животных и обладает привлекательностью для диких плотоядных животных и высокой поедаемостью.
Claims (6)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающая вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличающаяся тем, что содержит в качестве вакцинного штамма культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 1д ЕЕи50/см3, в качестве пищевых и формообразующих компонентов содержит рыбную муку, говяжий жир, парафин или пищевой полимер и неочищенное зерно хлебных злаков, дополнительно содержит маркер - тетрациклин при следующем соотношении компонентов, мас.%:Культуральная жидкость, содержащая авирулентный 1,0-4,0 штамм вируса бешенства с титром инфекционности6,0-8,51е РРи50/см3
Тетрациклин 0,3-1,2 Парафин или пищевой полимер Неочищенное зерно хлебных злаков Рыбная мука Г овяжий жир 5,0-10,0 5,0-15,0 30,0-40,0 остальное - 2. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве авирулентного штамма вируса бешенства содержит авирулентный штамм вируса бешенства РВ-97 или ЕВА 0333.
- 3. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве неочищенного зерна хлебных злаков содержит зерно пшеницы, ржи, ячменя, овса.
- 4. Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.1, отличающаяся тем, что в качестве пищевого полимера содержит коллаген, или крахмал, или целлюлозу.
- 5. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных, включающей вакцинный штамм вируса бешенства, выращенный в перевиваемой культуре клеток, и пищевые и формообразующие компоненты, отличающийся тем, что вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемых монослойно-суспензионных сублиниях клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/13-02 или почки сайги, полученную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства с титром инфекционности 6,0-8,5 1д РРИ50/см3, замораживают при -(20-40)°С в контейнерах, далее тетрациклин, парафин, неочищенное зерно хлебных злаков, рыбную муку, говяжий жир перемешивают в течение 25-30 мин при температуре 55-60°С, полученную массу разливают в пластиковые формы при температуре 40-45°С, в каждую ячейку формы помещают замороженную культуральную жидкость, содержащую авирулентный штамм вируса бешенства, и замораживают при температуре -(20-40)°С.
- 6. Способ получения вакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных по п.5, отличающийся тем, что в качестве контейнера для культуральной жидкости, содержащей авирулентный штамм вируса бешенства, используют пакеты из полиэтилена или блистеры из желатина.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010144856/15A RU2440139C1 (ru) | 2010-11-03 | 2010-11-03 | Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201001684A1 EA201001684A1 (ru) | 2011-08-30 |
| EA015458B1 true EA015458B1 (ru) | 2011-08-30 |
Family
ID=44544190
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201001684A EA015458B1 (ru) | 2010-11-03 | 2010-11-22 | Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ её получения |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA015458B1 (ru) |
| RU (1) | RU2440139C1 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103083654A (zh) * | 2012-08-27 | 2013-05-08 | 万里明 | Celligen310生物反应器制备人二倍体细胞狂犬病疫苗工艺 |
| RU2563542C1 (ru) * | 2014-10-30 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" | Антирабическая вакцина для пероральной иммунизации диких и бродячих плотоядных животных и способ получения ее |
| RU2704970C1 (ru) * | 2019-02-18 | 2019-11-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности | Приманка для оральной иммунизации диких плотоядных животных против бешенства |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4014991A (en) * | 1976-01-23 | 1977-03-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare | Oral rabies immunization of carnivores |
| EP0100752A2 (de) * | 1982-08-04 | 1984-02-15 | Veterinär-Bakteriologisches Institut der Universität Bern | Verfahren zur Herstellung eines neuen Tollwut-Impfstoffs, Behälter und Mittel zu dessen Verabreichung und Verfahren zur oralen Immunisierung |
| RU2250781C2 (ru) * | 2003-07-10 | 2005-04-27 | ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Способ изготовления вирусвакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных |
| RU2311924C2 (ru) * | 2005-12-09 | 2007-12-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Вирус-вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее изготовления |
| CN101757619A (zh) * | 2009-11-11 | 2010-06-30 | 郑州后羿制药有限公司 | 兽用狂犬病灭活疫苗及其制备方法 |
-
2010
- 2010-11-03 RU RU2010144856/15A patent/RU2440139C1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-11-22 EA EA201001684A patent/EA015458B1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4014991A (en) * | 1976-01-23 | 1977-03-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health, Education And Welfare | Oral rabies immunization of carnivores |
| EP0100752A2 (de) * | 1982-08-04 | 1984-02-15 | Veterinär-Bakteriologisches Institut der Universität Bern | Verfahren zur Herstellung eines neuen Tollwut-Impfstoffs, Behälter und Mittel zu dessen Verabreichung und Verfahren zur oralen Immunisierung |
| RU2250781C2 (ru) * | 2003-07-10 | 2005-04-27 | ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Способ изготовления вирусвакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных |
| RU2311924C2 (ru) * | 2005-12-09 | 2007-12-10 | ГНУ ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии | Вирус-вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее изготовления |
| CN101757619A (zh) * | 2009-11-11 | 2010-06-30 | 郑州后羿制药有限公司 | 兽用狂犬病灭活疫苗及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201001684A1 (ru) | 2011-08-30 |
| RU2440139C1 (ru) | 2012-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2769223C (en) | Sticky soft gel for treating poultry | |
| RU2420063C2 (ru) | Способ инкубации и выведения яиц | |
| CN107549456A (zh) | 一种改善鹅肠道功能的复合益生菌剂及其制备方法 | |
| RU2440139C1 (ru) | Вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее получения | |
| SK282945B6 (sk) | Perorálny prípravok na prevenciu a liečbu infekčných gastroenteritíd prasiat | |
| US20090181122A1 (en) | Method of producing bacterial polysaccharides in rumen fluid | |
| CN108421037A (zh) | 一种猪伪狂犬病/猪细小病毒病二联灭活疫苗及其悬浮培养制备方法 | |
| CN103060356A (zh) | 鸭瘟病毒缺失gE基因转移载体及其构建方法 | |
| CN111377546A (zh) | 一种用于维持水产养殖水质稳定的生物活化剂 | |
| CN109526818A (zh) | 黄鳍鲷种苗标粗养殖技术 | |
| EP1711619A2 (en) | Integrated viral complexes, methods of production thereof, vaccines containing same and methods of use thereof | |
| CN110178789A (zh) | 一种线鸡生态养殖方法 | |
| CN107821062A (zh) | 一种菱角套养甲鱼、黄鳝的生态养殖方法 | |
| RU2250781C2 (ru) | Способ изготовления вирусвакцины против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных | |
| CN107593545A (zh) | 一种螃蟹用生态养殖方法 | |
| RU2704970C1 (ru) | Приманка для оральной иммунизации диких плотоядных животных против бешенства | |
| RU2311924C2 (ru) | Вирус-вакцина против бешенства для оральной иммунизации диких плотоядных животных и способ ее изготовления | |
| EP0100752A2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines neuen Tollwut-Impfstoffs, Behälter und Mittel zu dessen Verabreichung und Verfahren zur oralen Immunisierung | |
| KR20030028535A (ko) | 버섯 함량이 증강되는 버섯재배 방법 | |
| SU555664A1 (ru) | Способ получени поливалентной вакцины против лептоспироза животных | |
| RU2280982C2 (ru) | Способ повышения иммунитета птицы | |
| KR20240066798A (ko) | 돼지 경구투여용 백신 고형제제 | |
| SU690072A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани инфузорий | |
| SE181858C1 (ru) | ||
| RU2080125C1 (ru) | Способ получения вакцины против бешенства и чумы плотоядных |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM MD TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AZ KG TJ |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY KZ RU |