SU555664A1 - Способ получени поливалентной вакцины против лептоспироза животных - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к ветеринарии , в частности к способам получени  вакцин, примен емых дл  профилактики лептоспироза животных.

Известен способ изготовлени  поливалентной феноловой вакцины дл  профилактики лептоспироза сельскохоз йственных животных и пушных зверей , включающий выращивание лептоспир 6 серотипов на вывороточной среде в баллонах, смешивание выращенных культур, консервирование фенолом , расфасовку, проверку стерильности , безвредности, активности.

Известный способ, однако, не позвол ет получить в вакцине достатоную концентрацию специфических антитгенов , что вынуждает,.вводить животным большие дозы вакцины: крупному рогатому скоту - до 25 мл, свинь м до 17 мл. Продолжительность создаваемого иммунитета у крупного рогатого скота незначительна и составл ет 1-2 мес. при однократном и 3-8 мес. при двухкратном введении вакцины.

. Цель изобретени  - получение вакцины , вызывающей длительный иммунитет -высокой напр женности.

Это достигаетс  тем, что в качестве исходных штаммов берут штаммы

лептоспир: ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-б, а осаждение и инактивацию лептоспир провод т одновременно добавлением в питательную среду после выращивани  лептоспир трихлоруксусной кислоты в количестве 3,0-3,3% с последуквдей нейтрализацией этой кислоты в образовавшемс  осадке из лептоспироз0 ных антигенов и сывороточного бедка питательной среды и добавлением к нему адьюванта, например, гидроокиси алюмини  в количестве 32-35%.

В процессе изготовлени  вакци5 ны не происходит снижени  иммуногенной и антигенной активности лептоспир благодар  использованию трихлоруксусной кислоты, вз той в оптимальных дл  воздействи  на леп0 тоспиры и лептоспирозные антигены количествах - 3,0-3,3%.

Исследовани ми установлено, что применение трихлоруксусной кислоты в других концентраци х приводила к

5 ;снижению иммуногенной активности .

Не менее важным фактором дл  получени  вакцины, вызывающей у животных длительный иммунитет высокой

0 напр женности и продолжительности ( до 6 мес. у молодн ка и 12 мес. . у взрослых животных),  вл етс  введение адьюванта, состо щего из 3235% гидроокиси алюмини , и наличи  6-8% осажденного сывороточного белка питательной среды в составе вак цины. Способ изготовлени  концентрированной поливалентной вакцины против лептоспироза заключаетс  в следующем , Берут штаммы лептоспир, выделенные от сельскохоз йственных животных , селекционированные по признаку максимальной иммуногенной. и антиген ной активности и относ щиес  к шеети серологическим группам: 1.Leptospira grippotyphosa ВГНКИ-1 2.L.iсterohaemorrhagiae ВГНКИ3 .L. la ВГНКИ-3 4.L.tarassovi ВГНКИ-4 5.L.hebdomad is ВГНКИ-5 6.L.pomona ВГНКИ-6. Штаммы вырс1щивс1ют на сывороточной среде в реакторах или баллонах смешивают, осаждают и инактивируют трихлоруксусной кислотой в количестве 3,0-3,3%, отдел ют осадок от надосадочной жидкости, кислоту нейтрализуют водным раствором аммиака добавл ют гидроокись алюмини  до 35%-ной концентрации, консервируют мертиол том, расфасовывают, контрол руют на стерильность, безвредность активность,. Штаммы лептоспир выделены от сельскохоз йственных животных и селек ционированы по признаку максимальной иммуногенной и антигенной актив ности. Штаммы  вл ютс  вакцинными и по широте иммуногенного спектра обе печивают изготовление препарата, профилактирующего заболевание сель скохоз йственных и промлсловых живо ных в любой точке Советского Союза и в большинстве регионов мира. Штаммл депонированы во Всесоюзном государственном научно-контрол ном институте ветпрепаратов МСХ ССС и сохран ютс  на сывороточной среде при -190°С, При осуществлении способа изгот лени  концентрированной поливалент ной вакцины против лептоспироза животных штаммы ВГНКИ-1, ВГНКИ:-2, ВГНКИ-3, ВГНКИ-4, ВГНКИ5, ВГНКИ-6 выращивают в отдельных реакторах (объем 200-250 л) или бутыл х (объ ем 20 л ) на сывороточной среде в т чение 5-10 сут. при 27-28°С до мак симального накоплени  бактериальной массы. Культуры провер ют на чистоту и интенсивность роста, определ ют ко личество микробных тел в 1 мл среды путем подсчета под микроскопом при увеличении в 400 раз. Культуры, содержащие 50 млн лептоспир и более в 1 мл среды, смешивают с таким расчетом , чтобы в реакторе-смесителе содержалось по 20% лептоспир серологических групп pomona, tarassovi, grippotiphosa , hebdomadis и no 10% лептоспир canicola, iсterohaemorrhag I ae . К смеси культур приливают при посто нном перемешивании насыщенный раствор трихлоруксусной кислоты до создани  ее концентрации в среде 3,03 ,3%. Обработанную кислотой культуру отстаивают 1 ч, надосадочную жидкость деконтируют, оставшийс  осадок центрифигируют на центрифуге с угловым или горизонтальным ротором при 3000 об/мин в течение 5 мин, а на центрифуге сепараторного типа - при скорости вращени  ротора 1015 тыс. об/мин (производительность 50 л/ч). Центрифугат, представл ющий собой плотную мазеобразную массу, собирают и обрабатывают 10%-ным водным раствором аммиака, нейтрализуюПШМ трихлоруксусную кислоту. Аммиак приливают при посто нном перемешивании до установлени  рН 7,4-7,6. Добавл ют дистиллированную воду из такого расчета, чтобы осгщок был сгущен в 25-30 раз по сравнению с исходной культурой. К полученной массе добавл ют гидроксал до 33-35%-ной концентрации и мертиол т 1:10000, смесь тщательно перемешивают и выдерживают 5 сут при 18-22°С. Вакцину расфасовывают в 50- - .i 100-миллитровые флаконы. Вакцину провер ют на стерильность и безвредность общеприн тыми метоАнтигенные свойства вакцины контролируют на п ти кроликах весом 2,0-2,5 кг, которым ввод т внутримышечно однократно по 0,3 мл вакцины . Через 25 дней у привитых кроликов берут кровь и исследуют по реакции микроагглютинации и лизиса с лептоспирами, вход щими в состав вакцины. Вакцину считают активной по антигенным свойствам, если титр антител составл ет 1:800 и выше к летоспирам серологических групп pomona , tarassovi, grippotiphosa, hebdomadis и не менее чем 1:200 по отношению к лептоспирам icterohaemoгrhagiае и canicola. Иммуногенные свойства вакцин провер ют на 30 золотистых хом ках 1,5-2-мес чного возраста, 15 из которых ввод т вакцину однократно

внутримышечно по 0,05 мл. Через 25 дней заражают контрольных и привитых хом ков оттитрованной смертельной дозой лептоспир трех серологических групп.

Вакцину считают активной при выживании не менее 12 опытных и гибели 9 контрольных хом ков.

Вакцину ввод т однократно внутриьшшечно в дозе от 0,3 до 2 14л вместо 17-25 мл прин тых дл  существующей вакцины. Она вырабатывает иммунитет- ВЫСОКОЙ напр женности продолжительностью до 6 мес. у молон ка и до 12 мес. у взрослых животных .

Срок годности вакцины 12 мес. со дн  изготовлени .

Claims (2)

1. Способ получени  поливалентной вакцины против лептоспироза

животных, включающий подбор штаммов лептсспир, выращ1{вание их на жидкой питательной сывороточной среде, осаждение, инактивацию и консервирование их, отличак)щийс  тем, что, с целью создани  вакцины, вызывающей длительный иммунитет высокой напр женности, в качестве исходных штаммов берут штамки лептоспир ВГНКИ-1, ВГНКИ-2, ВГНКИ-3,

0 ВГНКИ-4, ВГНКИ-5, ВГНКИ-6, а осаждение и инактивацию лептоспир провод т одновременно добавлением в питательную среду после выращивани  лептоспир трихлоруксусной кислоты в коS личестве 3,0-3,3% с последующей

нейтрализацией этой кислоты в образовавшемс  осадке из лептоспирозных анантигенов и сывороточного белка питательной среды и добавлением к

0 нему адьюванта, например, гидроокиси ёшюмини  в количестве 32-35%.

2. Способ по п. 1, отличающий с   тем, что нейтрализацию трихлоруксусной кислоты в осадке

5 из лептоспирозных антигенов и сывороточного белка питательной средл провод т, например, водным раствором аммиака.